BACTERIAS

Autor: LÓPEZ PÉREZ RUTH.
Año: 2002.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIERÍAS AGRARIAS.

Resumen: Castilla y León es la primera región productora de judía-grano (Phaseolus vugaris L.) en España. Las variedades cultivadas son, en su mayoría locales muy apreciadas por el consumidor, debido, fundamentalmente, a su gran calidad. Sin embargo, el rendimiento de este cultivo se ve limitado de forma importante por la incidencia de dos patógenos bacterianos: Pseudomonas syringae pv.phaseolicola (Pph), responsable de la enfermedad conocida como "grasa" y Santhomonas capestris pv.phaseoli (Xcp) y su variante fuscans (Xcpf), causantes de la "tabaquera". El control es difícil y se basa fundamentalmente en la utilización de políticas de semilla limpia y en el uso de variedades resistentes. Para un programa de mejora genética, cuyo objetivo es la obtención de variedades resistentes a una determinada enfermedad, es fundamental conocer la variabilidad de los agentes patógenos implicados, así como buscar genes de resistencia a las variantes locales de dichos patógenos entre el germoplasma autóctono. Así mismo, los métodos de inoculación artificial constituyen una heramienta fundamental, imprescindible, para identificar de forma eficaz el nivel de resistencia paresente en el material vegetal a seleccionar. Los objetivos planteados en este trabajo fueron: 1,- Definir el método de inoculación artificial para Xcp más efectivo, así como el ambiente más adecuado para llevar a cabo dichas inoculaciones (cámara climatizada, invernadero o campo). 2,- Identificar y caracterizar la variabilidad presente en una colección de aislados de Pph y Xcp procedentes de Castilla y León. 3,- Caracterizar diversas fuentes de germosplasma de P.vulgaris por su resistencia a bacteriosis. Los resultados obtenidos señalan la importancia de conocer y valorar todos los factores que participan en la evaluación de germoplasma de judía-grano por su resistencia a Xcp, teniendo muy en cuenta el efecto de los genotipos o variedades y sus posibles interacciones con otros factores, como pueden ser el método y el ambiente de inoculación (Capítulo 1). Se ha conseguido tener una primera aproximación de la variabilidad patogénica y de la estructura genotípica presente en una representación de aislados de XcplXcpf de Castilla y León. Así, a excepción de dos aislados, el conjunto de aislados de Xcp analizados en este trabajo presentó una baja homología genética (20%) respecto a su variante fuscans. Individualmente, cada uno de estos dos conjuntos de aislados se caracterizó por presentar una importante homogeneidad genotípica. Así mismo, para una misma variedad se encontraron diferencias significativas de agresividad entre aislados, tanto en Xcp, como en su variante fuscans, así como una interacción aislado*variedad significativamente distinta (Capítulo 2). Respecto a la variabilidad presente en los aislados de Pph analizados, puede concluir que la población original o endémica de Pph en Castilla y León, estaría formada por aislados no productores de faseolotoxina (Tox), pertenecientes al grupo de razas I (razas, 1,5,7 y 9). Un porcentaje importante de los aislados de Pph analziados (19%), no pudo ser asignado a ninguna de las razas definidas en este patógeno, por lo que podrían corresponderse con nuevas razas, hasta la fecha no descritas (Capítulo 3). Por último, se identificaron 12 accesiones con nivele sintermedios de resistencia a bacteriosis; sin embargo, las tres entradas con un mayor potencial como donantes de resistencia, se correspondieron con tipos varietales muy minoritairos, que no reunían los parámetros de calidad comercial buscados (tipo varietal riñón). Estos resultados estarían señalando la dificultad para encontrar germoplasma de judía-grano que combine niveles adecuados de resistencia a bacteriosis con determinadas características morfológicas, como son semillas grandes de color blanco y hábito de crecimiento determinado (Capítulo 4).

Autor: AIZPÚN NIETO M. TERESA.
Año: 2000.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S. INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: Uno de los principales factores de virulencia en Pseudomonas syringae (P. Syringae) pv. Tomato PT23 es la fitotoxina coronatina, que da lugar a la producción de halos cloróticos en hojas de tomate, a la vez que participa en la producción de necrosis y que permite un incremento en las poblaciones del patógeno in planta. Recientemente, se ha identificado un nuevo factor de virulencia en PT23, que también participa en la producicón de necrosis y en la proliferación del patógeno implanta y cuyos determinantes se localizan en el plásmido nativo pPT23B. El primer objetivo de este trabajo es la identificación y caracterización este nuevo determinante de virulencia y de los genes responsables de su producción. Se ha identificado un cósmido, p4E10, que contiene un insecto de aproximadamente 32 kb que incluye todos los determinantes necesarios apra conferir el fenotipo de virulencia. La mutagénesis por saturación de p4E10 con el minitransposón mTn5SsgusA40 nos permitió identificar dos regiones que contenían determinantes esenciales para este fenotipo. La región I comprende las ORF3, ORF4 y ORF5 del operón avrD, que podrían dar lugar a enzimas en base a la similitud de su secuencia deducida por una sulfotranferasa (ORF4) y una aminotransferasa (ORF5). La región II contiene una ORF que muestran un 97% de homología con el gen avrPphD de P. Syringae pv. Phaseolicola, y que se ha denominado avrProD. Elgen avrPtoD se comporta como un gen de avirulencia en el cultivar Red Mexican de judía. El incremento de virulencia mediado por las regiones I y II es dependiente de los genes de síntesis de Cfa, pero no de los de Cma, por lo que el factor de virulencia de pPT23b podrían actuar modificando el CFA u otros derivados corona facoílicos, para dar lugar a un compuesto tóxico. Sin embargo, los análisis por HPLC de extractos orgánicos de sobrenadante aislados de cultivos bacterianos no han revelado ningún compuesto asociado específicamente a la actividad de p4E10, aunque no podemos descartar que las propiedades físico-químicas del putativo compuesto tóxico no permitan su detección en las condiciones optimizadas para la coronatina. El segundo objetivo de esta Tesis es la caracterización del gen de la enzima formadora de etileno (efe) de P. Syringae pv. Glycinea PG4180 y el estudio de la implicación en virulencia de esta hormona. La secuencia del gen efe de PG4180 (1053 pb) se diferenció en un nucleótido a la gen efe de dos cepas del patovar cannabina, y de una cepa del patovar sesami, se diferenció en tres nucleótidos con el de dos cepas del patovar phasolicola y mostró una identidad del 92% con el efe de la cepa GSPB 1206 del patovar pisi. Experimentos de hibridación mostraron que en PG4180 se encuentra localizado en un plásmido de 90 kb que comigra con el plásmido de coronatina. El gen efe se interrumpió con un gen de resistencia a gentamicina en PG4180.139, variante no productora de coronatina, y se analizó su virulencia en hojas de soja. La cepa COR EFE dio lugar a la producción de necrosis a los 3 dpi, acompañada de la desaparición de la población del patógeno a los 9 dpi, lo que sugiere que se indujo una respuesta de hipersensibilidad. La síntesis de etileno y coronatina, por tanto, podría contribuir a la supresión de respuestas de defensa de la planta.

Autor: SESMA GALARRAGA ANE.
Año: 1999.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS.