VIRUS DE LAS PLANTAS, 3

Autor: CELIX LOMAS ANA M..
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: El análisis de una colección de 60 aislados naturales de TBSV ha permitido la detección de dos RNAs satélites (RNAs sat B1 y B10) aunque no se han detectado RNAs defectivos interferentes. El RNAsat B10 reduce drásticamente la acumulación de RNA viral al inhibir su replicación y atenúa los síntomas inducidos por TBSV. El RNAsat B1 causa una reducción mucho más ligera del nivel de RNA viral y no modifica los síntomas inducidos por el virus. Ambos RNAs sat son mantenidos eficazmente por virus heterólogos (CymRSV y CIRV) excepto CIRV que parece ser un virus ayudante poco eficaz para mantener el RNAsat B1. Se ha identificado un determinante en el RNA viral implicado en la acumulación del RNAsat B1 sugiriéndose la posible implicación de la proteína p33, codificada por la ORF1 del genoma de tombusvirus, en la especificidad de la replicación del RNA sat.

Autor: SOLER ALEIXANDRE SALVADOR.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONÓMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRÓNOMOS.

Resumen: En la presente Tesís se trata de caracterizar las distintas reacciones de defensa desarrolladas por las plantas resistentes para impedir la infección por el patógeno en entradas en C. Chinense, Lycopersicon peruvianum y L. Hirsutum descritas como resistentes al virus del bronceado (TSWV). Para ello se ha realizado un seguimiento de la enfermedad a distintos niveles mediante la realización de diferentes ensayos: Inoculación y seguimiento de la infección en planta entera. Inoculación y cuantificación de la acumulaicón viral en los distintos tejidos de la planta. Inoculación y seguimiento de la ingección en la hoja inoculada. Seguimiento de la infección en los puntos iniciales de desarrollo de la enfermedad. Para la realización de estos ensayos se han puesto a punto métodos de inoculación mecánica de TSWV y de diagnóstico (DAS-ELISA, DTB-ELISA). Se ha determinado el mecanismo de resistencia por hipersensibilidad en entradas de C. Chinense. Se ha identificado, asociado a esta respuesta hipersensible, una restricción del movimiento célula a célula del virus en los tejidos infectados. En ensayos posteriores se determinó la dependencia de ese mecanismo respecto a de la temperatura y edad de la planta. La resistencia de L. Peruvianum ha sido caracterizada después de su introgresión en el fondo genético de L. Esculentum. Se han observado la aparición de reacciones de hipersensibilidad que dan lugar a una localización del virus en los tejidos inoculados impidiendo la infección sistémica de las plantas. En L. Hirsutun se ha observado una respuesta defensiva frente a la infección del virus consistente en una recuperación de las plantas tras haber sufrido infección sistémica. Las plantas llegan a mostrar los síntomas típicos de la enfermedad, tras lo cual se produce una recuperción del ápice y desarrollo de brotes neuvos libres de síntomas, en los que no es posible detectar la presencia del virus.

Autor: PICO SIRVENT M. BELEN.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRÓNOMOS.

Resumen: El virus del rizado amarillo del tomate, Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), causa graves pérdidas económicas en nuestro pais desde 1992. La lucha física o química contra el vector y la adopción de prácticas culturales no son una solución efectiva en condiciones de infección severa al aire libre. El desarrollo de cultivarse de tomate resistentes o tolerantes al TYLCV es la solución más prometedora par ael control de esta virosis a medio y largo plazo. Un paso previo imprescindible para iniciar un programa de mejora para resistencia a virosis es el establecimiento de técnicas de inoculación, y de diagnóstico adcuadas que permitan una selección eficaz del material. Por una parte, se ha llevado a cabo la puesta a punto de las técnicas de inoculación empleando el vector transmisor, la mosca blanca del tabaco Bemnisia tabaci. Así mismo se han empleado estrategias de Agranoculación, inoculación con cepas transformadas de Agrobactenum Tumefaciens, que permite un control más preciso del nivel de inóculo en cada ensayo facilitando el proceso de selección. Así mismo, se ha determinado la utilidad de distintas técnicas de diagnóstico ELISA,PCR e hibridación molecular en el proceso de selección. Empleando la estategia de selección más adecuada en cada caso se ha llevado a cabo la caracterización frente a islados españoles, pertenecientes a la especie TYLCV-Sar (primeramente aislado en Cerdeña), de los materiales comerciales con resitencia parcial para determiar su utilidad en nuestras condiciones epidemiológicas. Además, se ha realizado el cribado de nuevas fuentes de resitencia entre especies silvestres del género Lycopersicon y la caracterización empleando aislados españoles de las fuentes de resistencia descritas en otros paises. A partir de las nuevas fuentes de resitencia identificadas se ha estudiado el modo de herencia de la resistencia iniciandose un programa de mejora que ha llevado el desarrollo de cultivarse de tomate altamente resistentes al TYLCV-Sar y con características agronómicas adecuadas para el sistema de cultivo y mercado de tomate para consumo fresco en España. Algunos de estos materiales presentan también altos niveles de resistencia al TYLCV-Isr lo que los hace adecuados para la nueva problemática surgida en nuestros campos con la llegada de este nuevo aislado.

Autor: ABAD MARTIN JESUS.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: Se ha llevado a cabo una búsqueda y caracterización de la resistencia al virus del mosaico del pepino en las especies del género Lycopersicon. Se han identificado entradas resistentes a aislados de CMV del levante español dentro de las especies L. hirsutum (2 entradas), L. chmielewskii (1 entrada), L. pimpinellifolium (1 entrada) y L. esculentum (3 entradas). Entre estas entradas sólo la resistencia de la entrada de L. chmielewskii CHM-47 resultó efectiva frente a 10 aislados de CMV, seguida por HIR-25. El resto de las entradas mostraron interacciones específicas con los distintos aislados de CMV destacando así las entradas de L. esculentum, que eran resistentes sólo frente a los aislados de baja infectividad. En un ensayo de inoculación de diez aislados de CMV por ocho entradas de Lycopersicon se observaron diferencias en la agresividad de los subgrupos de CMV, siendo los aislados del subgrupo II menos agresivos que los del subgrupo I. Por el contrario no se observaron diferencias en la infectividad de los subgrupos de CMV. Se estudió también el efecto de la temperatura en las relaciones entrada de Lycopersicon- aislado de CMV, observándose que el aislado del subgrupo II LS era menos infectivo a elevadas temperaturas, mientras que la infectividad de los aislados del subgrupo I, CAM y Fny no resultaba afectada. Por otro lado la resistencia de las entradas CHM-47 y HIR-25 era independiente de la temperatura, no así la resistencia de la entrada CER-68. Mediante el estudio del progreso de la infección viral se observó que en las entradas CHM-47 y HIR-25 el -virus no se acumula en la hoja inoculada-. Se observó también, mediante inoculación por injerto que la infección sistemica no está limitada. Se sugiere un mecanismo que actúe en el establecimiento inicial del virus. Para la entrada CHM-47, en la que la expresión fenotipica es incompleta se sugiere un mecanismo de tendencia al escape, que estaría gobernado por un gen simple dominante. Para la entrada HIR-25 la expresión fenotípica es completa.

Autor: BLANCO URGOITI BEGOÑA.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL.

Resumen: Se ha desarrollado un método para calcular distancias genéticas entre aislados del potyvirus Y de la patata (PVY), basado en inmunocaptura del virus a partir de un extracto vegetal seguida de transcripción inversa y PCR del gen de la proteína de la cápsida. El fragmento amplificado se somete a digestión con cinco enzimas de restricción y los patrones obtenidos se transforman en matrices de ceros y unos con las que se calculan distancias genéticas. Se ha probado que éstas distancias genéticas son proporcionales a las obtenidas directamente de las secuencias y que, por tanto las distancias genéticas derivadas de patrones de restricción pueden ser utilizadas para agrupar aislados de PVY en cepas genéticas. Utilizando este método se han caracterizado aislados de PVY procedentes de distintos huéspedes y se ha llegado a la conclusión que existen cinco cepas o razas genéticas dentro de este virus: PVYo, PVYn, PVYnp, PVYc2 y PVYluel. Esta clasificación es independiente del huésped del que procede el aislado viral. Se ha probado la aplicación práctica de este método para estudios de variabilidad y epidemiología en muestras de campo de patata de siembra de álava. Se ha puesto a punto un método de amplificación del genoma de PVY en dos mitades solapantes a partir de virus inmunocapturado en placa con el que se pueden estudiar parecidos genéticos en zonas mayores del genoma viral.

Autor: CRUZ MARTINEZ ALBERTO DE LA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA III PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: Los Tobamovirus son los principales agentes responsables de las virosis que afectan a los cultivos del género capsicum en todo el mundo, originando graves pérdidas economicas. Desde un punto de vista Fitopatológico, las denominadas "cepas pimiento" son aquellos Tobamovirus que infectan plantas de pimiento que posean resistencia incorporada a los virus THV y TcHV. La enfermedad producida por estos virus no es aparente en la parte negativa y sólo se muestra en los frutos. Ademas, se transmiten por semillas y mecanicamente lo que hace muy dificil su control en la naturaleza. En el presente trabajo hemos abordado la caracterización biológica y molecular del aislado holandes P11, capaz de sortear la resistencia del gen L1, pero localizado por el gen L2. Como resultado de nuestros estudios, el virus ha quedado definido y por el LCTV como nuevo miembro de los Tabamovirus bajo el nombre de virus del moteado suave de la paprika (PaMMV). En segundo lugar se ha establecido que la proteina de la cáprida viral es la responsable de la localización viral mediada por el gen de resistencia L1.

Autor: JUAREZ GOMEZ MIGUEL.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PRODUCCION VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: PRODUCCION VEGETAL.

Resumen: El agente causal del "amarilleamiento del melón" es el desencadenante de una nueva enfermedad de etiología viral que apareció alrededor de 1982 en España, afectando a cultivo de melón bajo invernadero. Para poder abordar el control de esta epidemia es necesario conocer la naturaleza del agente causal y poner a punto las técnicas de diagnóstico. En la presente Tesis se han estudiado diferentes aspectos del agente causal del "amarilleamiento del melón". 1.- Detección, caracterización y puesta a punto de diferentes métodos para la purificación, de la partícula viral. 2.- Obtención de antisueros policlonales para la diagnosis de la enfermedad mediante técnica ELISA. 3.- Localización de la partícula viral en el interior de los tejidos de la planta. 4.- Estudio del rango de huéspedes del agente causal. 5.- Evaluación de entradas de material vegetal como posibles fuentes de resistencia a la enfermedad.

Autor: NAVARRO RAMIREZ BEATRIZ .
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: 030A TITULO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se ha identificado y caracterizado molecularmente el agente causal de la enfermedad del moteado clorótico del crisantemo (CChMVd). Se trata de un viroide de 399 nt cuyas hebras de ambas polaridades se autocortan in vitro y probablemente in vivo a través de estructuras ribozimáticas de cabeza de martillo. La estructura secundaria de mínima energía libre propuesta para el CChMVd es una conformación ramificada similar a la predicha para el PLMVd y claramente diferente a la de tipo varilla o cuasi varilla propuesta para el resto de los viroides. Este plegamiento inusual del CChMVd y del PLMVd podria explicar su insolubilidad en LiCl 2 M en contraste con el ASBVd y el resto de los viroides sin capacidad autocatalítica que son solubles en las mismas condiciones. Se ha identificado y caracterizado molecularmente un aislado no sintomático de la enfermedad (CChMVd-NS) que produce un efecto de protección cruzada frente a la inoculación con un aislado agresivo. CChMVd-NS es un RNA de tamaño y secuencia similar al CChMVd. Se ha obtenido un árbol filogenético que sitúa al CChMVd junto con los otros dos viroides con propiedades autocatalíticas en un mismo grupo monofilético. Dentro de este grupo PLMVd y CChMVd formarían un nuevo subgrupo diferente al del ASBVd.

Autor: ORTEGA GEA ANA M..
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PRODUCCION VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: PRODUCCION VEGETAL .

Resumen: Ante la problemática que vienen sufriendo en los últimos años las plantaciones españolas de alcachofa (como la "degeneración" y la disminución de las producciones), se aborda en esta Tesis el estudio de la posible implicación de afecciones de etiología viral y su control mediante el uso de plantas saneadas mediante "cultivo in vitro". Se han detectado varios agentes virales presentes en las zonas productoras de este cultivo en España. El más extendido es el Artichoke latent virus, que se ha hallado en todas las plantas analizadas procedentes de cultivo tradicional. También han aparecido otros virus tales como el Tomato spotted wilt tospovirus, el Cucumber mosaic cuscumovirus y el Artichoke french latent fabavirus. Además, se han observado mediante Microscopía Electrónica de transmisión partículas virales diferentes. Se discute la implicación de todos ellos en la problemática descrita en el cultivo de la alcachofa. Se ha estudiado el comportamiento agronómico de material vegetal de alcachofa Blanca de Tudela saneado mediante cultivo "in vitro". Las plantas se reinfectan progresivamente por el ALV, alcanzado el 100% de reinfección antes de finalizar el primer año de cultivo. Las plantas de cultivo "in vitro" son en general más productivas y con la producción más agrupada que las procedentes de propagación tradicional, aunque son menos precoces. Se han evaluado técnicas de prebrotación y de aplicación de hormonas para paliar este inconveniente.

Autor: ORTIZ BARREDO AMAYA M..
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL Y ECOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA VEGETAL Y ECOLOGIA.

Resumen: El amarilleo vírico de la remolacha está ocasionado por dos virus distintos: BMYV (Beet Mild Yellowing Luteovirus) y BYV (Beet Yellows Closterovirus). Según las prospecciones realizadas entre 1989 y 1994, estos dos virus están presentes en todas las zonas remolacheras españolas. La incidencia media registrada fue del 10% en las zonas Norte y Centro y de un 2% en la zona Sur. Esta enfermedad se presentó en rodales, con una diseminación predominante en la dirección de la línea de siembra. En la zona Norte, las especies de pulgones Myzus persicae, Aphis fabae y, esporádicamente Macrosiphon euphorbiae, se encontraron colonizando las remolachas durante la época de cultivo. M. persicae fue capaz de transmitir BMYV y BYV con una eficacia del 80%, mientras que A. fabae sólo transmitió BYV, con un 20% de eficacia. Sin embargo la presión infectiva de A. fabae fue mayor, ya que en campos sin protección insecticida, tanto el número de remolachas infestadas, como el número de pulgones por planta fue mayor para A. fabae que para M. persicae. Un 16% de las especies de malas hierbas más abundantes recogidas en los bordes de campos de cultivo, resultaron potenciales fuentes de inóculo. Caben destacar cuatro especies: Stellaria media, Picris echioides, Senecio vulgaris y Capsella bursa-pastoris, que constituyen el principal reservorio de esta enfermedad. Fue posible establecer una única curva de vuelo de pulgones en todos los campos de la zona Norte remolachera, con una época de máxima población. En función de la dinámica de vuelo, fue posible establecer una estrategia de control eficaz utilizando insecticidas. Los tratamientos aplicados periódicamente, a fin de mantener las remolachas protegidas con insecticida en el periodo que abarcó desde que se observaron los primeros pulgones ápteros en el cultivo, hasta las fechas de máxima población de estos, fueron eficaces para reducir significativamente la incidencia de la enfermedad.

Autor: SANCHEZ NAVARRO JESUS ANGEL.
Año: 1997.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR.

Resumen: La caracterización molecular del PNRSV puso de manifiesto que presentaba componentes estructurales y mecanismos de expresión similares al de los virus con genoma tripartito. La determinación de la estructura primaria de los RNAs virales 3 y 4 ha puesto de manifiesto la presencia de dos pautas de lectura abierta que codifican para las proteínas de movimiento (MP) y cubierta (CP) respectivamente, las cuales, presentan dominios/motivos, altamente conservados dentro del género Ilarvirus, que podrían justificar un movimiento célula a célula del tipo 'tobamo' en el caso de la MP y la interacción con el RNA viral en el caso de la CP. El extremo 3' terminal presentó una estructura secundaria típica en forma de tallos flanqueados por el tetranucleótido 'AUGC' implicada, mediante su interacción con la CP, en el proceso de activación genómica. En función de los resultados obtenidos se ha propuesto un modelo de inicio de la replicación viral en el que está implicada la CP junto con la estructura típica del extremo 3' terminal. El intercambio de los genes correspondientes a las proteínas MP y CP entre PNRSV y el virus del mosaico del alfalfa (AMV) puso de manifiesto que ambas proteínas son intercambiables para diferentes etapas del ciclo infectivo viral. El estudio comparado de las diferentes técnicas de diagnosis viral ha puesto de manifiesto que los métodos basados en el componente genómico del virus son más sensibles que los basados en el componente proteico presentándose la hibridación molecular no radioactiva de ácidos nucleicos como una técnica muy apropiada para la detección rutinaria del PNRSV y de las diferentes virosis del clavel estudiadas (CarMV, CERV, CLV y CVMV).

Autor: ALONSO PRADOS JOSE LUIS.
Año: 1996.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: LOS VIRUS QUE AFECTAN AL CULTIVO DEL MELON AL AIRE LIBRE EN ESPAÑA SON EL CUCUMOVIRUS DEL MOSAICO DEL PEPINO Y LOS POTYVIRUS DEL MOSAICO DE LA SANDIA 2, DE LOS ANILLOS DE LA PAPAYA Y DEL MOSAICO AMARILLO DEL CALABACIN. LOS DOS PRIMEROS SON LOS QUE ALCANZAN UNA MAYOR INCIDENCIA. DEL ANALISIS DE LA EVOLUCION TEMPORAL, DISTRIBUCION ESPACIAL Y EVOLUCION ESPACIO TEMPORAL SE DESPRENDEN DOS TIPOS DE EPIDEMIAS, UNO CARACTERIZADO POR UN APORTE DE INOCULO Y POSTERIOR DISPERSION SECUNDARIA Y OTRO CARACTERIZADO POR APORTES DE INOCULO EXTERNO EN MAS DE UNA FECHA. EL ANALISIS COMPARATIVO DE LAS CURVAS DE PROGRESO DE LA ENFERMEDAD MUESTRA LA INFLUENCIA DE FACTORES ASOCIADOS A LOCALIDAD. EL MOMENTO DE INICIO DE LAS EPIDEMIAS DE CMV ESTA INFLUIDO POR CONDICIONES CLIMATOLOGICAS DE INVIERNO Y EL DE LAS DE WMV-2 NO, LO QUE SUGIERE QUE AMBOS VIRUS SON TRANSMITIDOS POR ESPECIES DE PULGONES CON COMPORTAMIENTO DISTINTO. LA PRODUCCION DE MELON SE VE AFECTADA PRINCIPALMENTE SI LA INFECCION VIRAL SE PRODUCE ANTES DE LA FLORACION Y MAS AUN CUANDO ES PRODUCIDA POR EL VIRUS DEL MOSAICO DEL PEPINO. NO EXISTE UN EFECTO SINERGICO NI ADITIVO ENTRE EL VIRUS DEL MOSAICO DEL PEPINO Y EL VIRUS DEL MOSAICO DE LA SANDIA 2. LA CREACION DE PROGRAMAS ADITIVOS Y DE CONTROL ES NECESARIA PARA RETRASAR EL INICIO DE LAS EPIDEMIAS.

Autor: LOPEZ SESE ANA ISABEL.
Año: 1996.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA EVOLUTIVA.

Resumen: SE HAN ESTUDIADO CARACTERISTICAS BIOLOGICAS DEL VIRUS CAUSANTE DEL AMARILLEO EN LOS CULTIVOS BAJO INVERNADERO DE MELON, CUCUMIS MELO L., EN EL SUDESTE PENINSULAR. ESTE VIRUS SE TRANSMITE POR LA MOSCA BLANCA BEMISIA TABACI GENNADIUS DE FORMA SEMIPERSISTENTE, NO POR INOCULACION MECANICA NI MEDIANTE SEMILLA, PERO SI POR INJERTO, Y AFECTA A ESPECIES DE LA FAMILIA DE LAS CUCURBITACEAS, TRATANDOSE DEL VIRUS DEL ENANISMO AMARILLO DE CUCURBITACEAS (CYSDV). SE HA DESARROLLADO UNA TECNICA DE INOCULACION ARTIFICIAL DEL VIRUS QUE PERMITIESE LA EVALUACION DE GENOTIPOS PARA LA BUSQUEDA DE FUENTES DE RESITENCIA. ESTA TECNICA CONSISTE EN LA UTILIZACION DE 60 O MAS INDIVIDUOS DE B. TABACI POR PLANTA, QUE SE ALIMENTARIAN EN LA FUENTE DE INOCULO POR UN PERIODO MINIMO DE 24 HORAS Y POSTERIORMENTE EN LAS PLANTAS A EVALUAR DURANTE 48 HORAS. LA EVALUACION DE UNA AMPLIA DIVERSIDAD DE ENTRADAS DE C. MELO Y ESPECIES AFINES, PERMITIO SELECCIONAR UNA ENTRADA CON RESISTENCIA AL VIRUS, C. MELO TGR-1551. SE DETERMINO ENTONCES QUE ESTA RESISTENCIA ES DE CARACTER MONOGENICO DOMINANTE. DEBIDO A LAS CARACTERISTICAS DE LOS FRUTOS DE LOS HIBRIDOS OBTENIDOS, ESTA ENTRADA NO PUEDE SER UTILIZADA DIRECTAMENTE PARA LA OBTENCION DE HIBRIDOS RESISTENTES. SU UTILIZACION COMO DONANTE DE RESISTENCIA IMPLICA EL DESARROLLO DE LINEAS OBTENIDAS MEDIANTE RETROCRUCES, REUNIENDO ASI CARACTERISTICAS DE FRUTO SIMILARES A LAS REQUERIDAS Y RESISTENCIA A LA ENFERMEDAD. ESTA ENTRADA TAMBIEN PRESENTA MECANISMOS DE RESISTENCIA A B. TABACI.

Autor: MAS MARTINEZ PALOMA.
Año: 1996.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTE TRABAJO SE HAN REALIZADO ESTUDIOS SOBRE EL MOVIMIENTO A LARGA DISTANCIA DEL CLRV EN PLANTAS DE TABACO, LA LOCALIZACION SUBCELULAR, LA APLICACION DE SONDAS NO RADIACTIVAS EN EL DIAGNOSTICO DEL VIRUS Y EN LA HIBRIDACION TISSUE-PRINTING Y FINALMENTE LA INDUCCION Y DISTRIBUCION ESPACIAL DE LAS QUITINASAS ACIDICAS Y DE SUS MRNAS. DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS SE HA CONCLUIDO QUE LA HIBRIDACION MOLECULAR NO RADIACTIVA ES UNA TECNICA FIABLE Y SENSIBLE PARA EL DIAGNOSTICO DEL CLRV TANTO EN HUESPEDES HERBACEOS (TABACO) COMO LEÑOSOS (NOGAL). LAS DIFERENTES APROXIMACIONES UTILIZADAS PARA ESTUDIAR LA LOCALIZACION SUBCELULAR DEL CLRV HAN PUESTO DE MANIFIESTO UNA LOCALIZACION FUNDAMENTALMENTE CITOPLASMATICA DEL VIRUS. ASIMISMO, LOS ESTUDIOS DE LOCALIZACION DEL RNA VIRAL SUGIEREN QUE LA REPLICACION DEL CLRV ESTE ASOCIADA A LAS VESICULAS MEMBRANOSAS. LOS RESULTADOS OBTENIDOS TAMBIEN DEMUESTRAN QUE LA HIBRIDACION TISSUE-PRINTING ES UNA TECNICA MUY APROPIADA PARA ESTUDIAR EL MOVIMIENTO VIRAL A LARGA DISTANCIA Y HA PERMITIDO UN SEGUIMIENTO DE LA LOCALIZACION Y DISTRIBUCION FINAL DEL VIRUS EN LOS DIFERENTES TEJIDOS. ANALISIS COMPARADOS MEDIANTE LA TECNICA INMUNOTISSUE-PRINTING Y LA HIBRIDACION TISSUE-PRINTING NO RADIACTIVA MOSTRARON EL MISMO PATRON DE DISTRIBUCION PARA EL RNA Y LA CP VIRAL POR LO QUE SE SUGIERE UN POSIBLE REQUERIMIENTO DE LA CP EN EL MOVIMIENTO A LARGA DISTANCIA. LA DISTRIBUCION FINAL DEL VIRUS ESTA ADEMAS INFLUENCIADA POR LA DISPOSICION FILOTACTICA DE LAS HOJAS EN LA PLANTA Y POR EL ESTADO DE DESARROLLO DE LAS MISMAS. LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LOS ESTUDIOS ACERCA DE LA INDUCCION Y DISTRIBUCION DE LAS QUITINASAS ACIDICAS Y SUS MRNAS HAN PUESTO DE MANIFIESTO QUE LA INDUCCION DE LAS PROTEINAS PR ACIDICAS NO ES UN FENOMENO EXCLUSIVO DE LA REACCION DE TIPO HIPERSENSIBLE, OBSERVANDOSE UNA EVIDENTE ACUMULACION DE ESTAS PROTEINAS Y DE SUS MRNAS QUE SE ENCUENTRAN ESENCIALMENTE ASOCIADOS A LAS ZONAS SINTOMATICAS, Y SE INDUCEN CON UN CIERTO RETRASO CON RESPECTO A LA ACUMULACION DEL RNA VIRAL.

Autor: MESTRE ARTIGUES PEDRO F..
Año: 1996.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA MOLECULAR Y EVOLUTIVA..

Resumen: SE HA ESTUDIADO DESDE UN PUNTO DE VISTA GENETICO LA RESISTENCIA AL VIRUS DE LA TRISTEZA DE LOS CITRICOS (CTV) PRESENTE EN PONCIRUS TRIFOLIATA CV FLYING ARAGON. LOS RESULTADOS INDICAN QUE AL MENOS DOS GENES DOMINANTES ESTARIAN IMPLICADOS EN LA RESISTENCIA. SE HAN OBTENIDO MARCADORES MOLECULARES ASOCIADOS A AMBOS GENES DE RESISTENCIA, DE UTILIDAD EN SELECCION ASISTIDA. POR OTRO LADO, A PARTIR DE LA INFORMACION SOBRE VARIABILIDAD Y RELACIONES GENETICAS DE LAS ESPECIES DE LA SUBFAMILIA AURANTIOIDEA, SE HAN IDENTIFICADO COMO RESISTENTES AL CTV DOS NUEVAS ESPECIES: ATALANTIA CEYLANICA Y FORTUNELLA CRASSIFOLIA. LA RESISTENCIA PRESENTE EN ESTA ULTIMA ABRE NUEVAS POSIBILIDADES PARA LA MEJORA DE LOS CITRICOS POR HIBRIDACION SEXUAL.

Autor: MILITAO NETO VICENTE.
Año: 1996.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL .

Resumen: SE HA CARACTERIZADO LA INTERACCION ENTRE 6 CEPAS DEL CUCUMOVIRUS DEL ENANISMO DEL CACAHUETE (PSV) Y UNA CEPA DEL CUCUMOVIRUS DE LA ROBINIA(ROMV) CON DOS VARIANTES DEL RNASATELITE DE PSV, LAS CEPAS VIRALES SE HAN COMPARADO POR SEROLOGIA Y HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS. AMBOS TIPOS DE ANALISIS CLASIFICAN A LAS CEPAS EN DOS GRUPOS DENOMINADOS E(F-352,1339,1507) Y W(W,SU,B). ROMV PRESENTA PATRON DE HIBRIDACION CON AMBOS GRUPOS. LOS RNASAT UTILIZADOS EN LA TESIS DENOMINADOS P4 Y P6 TIENEN 393 NT Y SE DIFERENCIAN EN TRES NUCLEOTIDOS DE LA SECUENCIA, SE HA ESTUDIADO EL MANTENIMIENTO DE ESTOS RNASAT EN NICOTIANA TABACUM Y VIGNA UNGUICULATA POR LA COLECCION DE CEPAS. PSV-W Y ROMV NO SON CAPACES DE MANTENER LOS RNASATS. EL RESTO DE CEPAS MANTIENEN AMBOS RNASAT, AUNQUE EXISTE DIFERENCIAS EN CUANTO A LA EFICACIA DE MANTENIMIENTO. LOS RNASAT P4 Y P6 NO MODIFICAN LOS SINTOMAS INDUCIDOS POR PSV CUANDO SE INOCULAN CON CEPAS DEL GRUPO E Y LOS AGRAVAN CUANDO SE INOCULAN CON CEPAS DEL GRUPO W. P4 Y P6 PRESENTAN NOTABLES DIFERENCIAS CUANDO SE INOCULAN CON LA CEPA PSV-B.

Autor: MORAL DE LA VEGA JOSE DEL.
Año: 1996.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA Y PRODUCCION DE LOS VEGETALES.

Resumen: EL TRABAJO RECOGE LA IDENTIFICACION DEL NEMATODO XIPHINEMA INDEX EN LA CUENCA DEL GUADIANA EN EXTREMADURA ASI COMO EL VIRUS GFLV, PRODUCTOR DE LA ENFERMEDAD DE LA VID CONOCIDA COMO DEGENERACION INFECCIOSA. SE DESCRIBE LA METODOLOGIA PARA LA IDENTIFICACION Y ESTUDIO DE AMBOS MICROORGANISMOS Y SE PRECISA LA UBICACION GEOGRAFICA DE AMBOS EN EL AREA ESTUDIADA. LA RELACION DE DICHOS PARASITOS ES ESTUDIADA EN LAS AREAS DONDE APARECE LA ENFERMEDAD DE LA VID, ESTABLECIENDO LA EXTENSION DE AMBOS, SU CAPACIDAD DE COLONIZACION Y LA COHERENCIA DE LOS MISMOS CON LOS SINTOMAS DE LAS CEPAS ENFERMAS; SE HACE UNA VALORACION ECONOMICA DE LAS PERDIDAS QUE DICHA ENFERMEDAD PRODUCE EN LA CUENCA DEL GUADIANA EXTREMEÑO Y POR ULTIMO SE DAN UNA SERIE DE PAUTAS PARA LA ELABORACION DE UN PROGRAMA DE SANIDAD QUE CONTROLE LA ENFERMEDAD.

Autor: MORENO ECHANOVE IGNACIO.
Año: 1996.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL.

Resumen: LAS CEPAS TAV-1 Y TAV-V, PERTENECIENTES AL GENERO CUCUMOVIRUS DIFIEREN EN LA INDUCCION DE SINTOMAS EN TABACO. LA CEPA TAV-V MUESTRA UN FENOTIPO ATENUADO EN COMPARACION CON TAV-1. EL ANALISIS GENETICO DE ESTAS DIFERENCIAS MEDIANTE EL USO DE CLONES COMPLETOS QUE DAN LUGAR A TRANSCRITOS INFECTIVOS MUESTRA QUE LA MAYOR PARTE DE ELLAS MAPEAN EN EL GEN DE LA PROTEINA DE MOVIMIENTO (MP), QUE EN TAV-V ESTA INTERRUMPIDO POR UN CODON DE PARADA. MEDIANTE ANALISIS DE INMUNODETECCION DE LA MP EN PLANTAS INFECTADAS CON AMBAS CEPAS SE HA OBSERVADO QUE LA PRESENCIA DEL CODON DE PARADA DETERMINA UN BAJO NIVEL DE SINTESIS DE LA MP EN PLANTAS INFECTADAS POR TAV-V, EN COMPARACION CON TAV-1, QUE DETERMINA UNA MENOR CAPACIDAD PARA POTENCIAR EL MOVIMIENTO CELULA A CELULA DE LA CEPA ATENUADA Y RESULTA EN UN MENOR GRADO DE COLONIZACION DE LA PLANTA POR EL VIRUS. ADEMAS EL ANALISIS DE LA EXPRESION DE LA MP SUGIRIO LA EXISTENCIA DE HETEROGENEIDAD DE SECUENCIA EN EL GEN DE LA MP DE TAV-V. SE HA DETECTADO LA EXISTENCIA, EN EL RNA DE TAV-V DE DOS VARIANTES QUE SE DIFERENCIAN EN UN SOLO NUCLEOTIDO QUE DETERMINA LA PRESENCIA O AUSENCIA DEL CODON DE PARADA EN EL GEN DE LA MP. SE HAN ANALIZADO LOS FACTORES QUE DETERMINAN LA ACUMULACION RELATIVA DE AMBAS VARIANTES EN RELACION CON LA EVOLUCION Y LA PATOGENESIS DE TAV-V.

Autor: PORCUNA COTO JOSE LUIS.
Año: 1996.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PRODUCCION VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: PRODUCCION VEGETAL.

Resumen: LAS EVIDENCIAS DE LA PRESENCIA DE CONCENTRACIONES FITOTOXICAS DE FOTOOXIDANTES EN EL LITORAL MEDITERRANEO PENINSULAR SE HA DOCUMENTADO SUFICIENTEMENTE DURANTE LOS ULTIMOS AÑOS, TANTO CON MEDIDAS DIRECTAS DE LAS CONCENTRACIONES DE OZONO, ASI COMO MEDIANTE LA OBSERVACION DE DAÑOS EN CULTIVOS Y PLANTAS BIOINDICADORAS.POR OTRA PARTE, EL DESARROLLO EPIDEMILOGICO DE LAS VIROSIS, ESPECIALMENTE EN CULTIVOS HORTICOLAS, PRESENTA UNAS CARACTERISTICAS DE GENERALIZACION EN EL PRIMER PISO BIOCLIMATICO DEL SUDESTE PENINSULAR QUE PODRIA ESTAR RELACIONADO CON LA PRESENCIA DE CONCENTRACIONES DE OZONO QUE REBASAN LOS LIMITES DE FITOTOXICIDAD MARCADOS POR LA UNION EUROPEA.PARA ESTUDIAR ESTA RELACION, SE HAN REALIZADO TRECE EXPERIMENTOS DURANTE DOS AÑOS, UTILIZANDO CAMARAS DESCUBIERTAS (OTC) DONDE SE EXPUSIERON DOS VARIEDADES DE TOMATE: TINY TIM Y CLAUDIA, A DIFERENTES NIVELES DE OZONO (AIRE FILTRADO, CON NIVELES DE OZONO PROXIMOS A O; AIRE NO FILTRADO, CON NIVELES AMBIENTALES DE OZONO Y AIRE FUMIGADO, CON 40 PPB DE OZONO POR ENCIMA DE LOS NIVELES AMBIENTALES). LAS PLANTAS SE MANTUVIERON EN DICHAS CAMARAS HASTA EL ESTADO DE 4 HOJAS Y DE FLORACION PARA, POSTERIORMENTE, SER INOCULADAS CON LOS VIRUS TOMATO MOSAIX VIRUS (TOMV) Y TOMATO SPOTTED WILT VIRUS (TSWV), MIENTRAS QUE UN TERCER GRUPO DE PLANTAS NO FUE INOCULADO. EL DESARROLLO POST-INOCULACION SE REALIZO UTILIZANDO DISTINTOS AMBIENTES: EN TUNELES DE DOBLE PARED PLASTICA CON AIRE FILTRADO Y NO FILTRADO, EN INVERNADERO CLIMATIZADO, AL AIRE LIBRE Y EN LAS PROPIAS CAMARAS OTC. A LOS 15 Y 30 DIAS SE EVALUABAN LA PRESENCIA DE SINTOMAS DE VIROSIS, UTILIZANDOSE EL TEST ELISA EN EL CASO DE PLANTAS DUDOSAS. SE OBTUVIERON RESULTADOS QUE HACIAN CONCLUIR QUE: - EL AMBIENTE POST-INOCULACION INDUCE PREDISPOSICION O PROTECCION FRENTE AL DESARROLLO DE VIROSIS, DEPENDIENDO DE LA PRESENCIA DE OTROS STRESS. - EL AMBIENTE PRE-INOCULACION CON OZONO PREDISPONE A LAS PLANTAS A DESARROLLAR MAS VIROSIS RESPECTO A LAS QUE HAN DESARROLLADO EN AMBIENTES CON BAJAS CONCENTRACIONES DE OZONO.

Autor: SANZ MOLINERO ANA ISABEL .
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL VIRUS DEL MOSAICO DEL PEPINO (CMV), MIEMBRO TIPO DEL GENERO DE LOS CUCUMOVIRUS, POSEE UN GENOMA CONSTITUIDO POR TRES MOLECULAS DE ACIDO RIBONUCLEICO DE SENTIDO MENSAJERO, DENOMINADAS RNA 1, 2 Y 3 EN ORDEN DECRECIENTE DE TAMAÑO. EL RNA 3, AUNQUE DISPENSABLE PARA LA REPLICACION DE LOS RNAS 1 Y 2 EN PROTOPLASTOS ES NECESARIO PARA EL ESTABLECIMIENTO DE UNA INFECCION SISTEMICA EN LA PLANTA HUESPED. EL RNA 3 CODIFICA DOS PROTEINAS, LA PROTEINA P3A EN SU EXTREMO 5'-TERMINAL Y LA PROTEINA DE LA CAPSIDA VIRAL EN SU EXTREMO 3'-TERMINAL. CON EL FIN DE ESTUDIAR LA FUNCIONALIDAD DE LA PROTEINA P3A Y DE DESARROLLAR UN SISTEMA QUE PERMITA ANALIZAR LOS DOMINIOS FUNCIONALES DE DICHA PROTEINA, HEMOS ANALIZADO LA CAPACIDAD DE LA PROTEINA P3A DE CMV-24 EXPRESADA EN PLANTAS TRANSGENICAS PARA COMPLEMENTAR EL MOVIMIENTO DEFECTIVO DE OTRA CEPA DE CMV. ESTA CAPACIDAD ES DEPENDIENTE DE LA CANTIDAD DE LA PROTEINA P3A ACUMULADA EN LAS PLANTAS TRANSGENICAS. ADEMAS, EL MOVIMIENTO DEL VIRUS DEFECTIVO EN LA HOJA INOCULADA SUFRE UN RETRASO RESPECTO AL DEL VIRUS SILVESTRE, Y SU MOVIMIENTO SISTEMICO SE ENCUENTRA ALTERADO RESULTANDO EN UN PATRON ATIPICO DE INVASION DEL VIRUS EN LA PLANTA TRANSGENICA Y UNA ATENUACION DE LOS SINTOMAS. ESTOS RESULTADOS INDICAN QUE LOS PROCESOS INICIALES DE LA INFECCION VIRAL SON DETERMINANTES PARA LA SINTOMATOLOGIA Y LA INVASION SISTEMICA DE LAS PLANTAS. ADEMAS HEMOS ABORDADO LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESISTENCIA A LA INFECCION POR CMV MEDIANTE LA EXPRESION EN PLANTAS TRANSGENICAS DE SECUENCIAS DERIVADAS DEL GEN 3A. PARA ELLO, SE HAN CONSTRUIDO DIEZ MUTACIONES POR DELECION EN LA REGION CENTRAL DEL GEN 3A DE CMV-24, Y SE HA ANALIZADO LA SUSCEPTIBILIDAD A LA INFECCION POR EL MISMO VIRUS EN LAS PLANTAS QUE EXPRESAN ESAS DELECIONES. NINGUNA DE LAS LINEAS DE PLANTAS TRANSGENICAS MOSTRO UNA INHIBICION DE LA ACUMULACION VIRAL, SI BIEN LAS LINEAS DE LAS PLANTAS TRANSGENICAS QUE EXPRESABAN DOS MUTACIONES DIFERENTES MOSTRARON UNA DISMINUCION SIGNIFICATIVA EN LA ACUMULACION VIRAL. ADICIONALMENTE, LAS PLANTAS TRANSGENICAS QUE EXPRESABAN OTRAS DOS MUTACIONES ACUMULABAN MAYOR CANTIDAD DE VIRUS QUE LAS PLANTAS CONTROL. POR OTRA PARTE HEMOS ANALIZADO LA PROTECCION FRENTE A LA INFECCION VIRAL MEDIADA POR UN RNA COMPLEMENTARIO A LA SECUENCIA DE GEN 3A Y REGIONES ADYACENTES (89 NT DE LA REGION 5' LIDER Y 86 NT DE LA REGION INTERGENICA) DE CMV-24 CUANDO SE EXPRESA EN PLANTAS TRANSGENICAS. EN LAS DOS LINEAS DE PLANTAS TRANSGENICAS SELECCIONADAS, L50 Y L64, SE DETECTO UNA INTERFERENCIA CON LA INFECCION VIRAL QUE SE CARACTERIZA POR UN RETRASO EN LA APARICION DE LOS SINTOMAS Y UNA MENOR ACUMULACION DE VIRUS EN LAS PLANTAS, SIENDO ESTE EFECTO MAS NOTORIO EN LA LINEA QUE ACUMULABA MAYORES NIVELES DEL TRANSGEN. LA PROTECCION SE MANIFESTABA TAMBIEN CUANDO EL INOCULO ERA EN FORMA DE RNA Y ERA DEPENDIENTE DE LA DOSIS DE INOCULO, SIENDO SUPERADA CUANDO LAS PLANTAS SE INOCULABAN CON ALTAS CONCENTRACIONES DE VIRUS O RNA. EL ESTUDIO DE LA CINETICA DE ACUMULACION DE LOS RNAS VIRALES Y DE LAS PROTEINAS P3A Y CP EN LAS PLANTAS DE LA LINEA L50, NOS PERMITIO DETECTAR UN RETRASO EN SU APARICION Y UNA DISMINUCION DE LA CANTIDAD ACUMULADA A LO LARGO DE TODOS LOS DIAS ANALIZADOS, EN LOS RNAS Y EN LAS PROTEINAS, RESPECTO A LAS PLANTAS INFECTADAS CONTROL, TANTO EN LAS HOJAS INOCULADAS COMO EN LAS HOJAS SUPERIORES A ESTAS. ASIMISMO, POR IMPRESION DE LAS HOJAS EN MEMBRANAS E INMUNODETECCION DE LA CP SOBRE ELLAS, SE HA DETECTADO UNA INTERFERENCIA CON EL MOVIMIENTO DEL VIRUS EN LA HOJA INOCULADA, CON ESPECIAL INCIDENCIA ENTRE LOS 3-4 D.P.I. EN SU CONJUNTO ESTOS DATOS PRUEBAN QUE LA PROTEINA P3A DE CMV ES LA PROTEINA DE MOVIMIENTO DE CMV Y QUE ES POSIBLE OBTENER RESISTENCIA FRENTE A LA INFECCION DE ESTE VIRUS EN PLANTAS TRANSGENICAS QUE EXPRESAN UN MRNA EN SENTIDO ANTIMENSAJERO FRENTE AL GEN 3A. LOS TRANSCRITOS DE ESTE RNA EN LAS PLANTAS PARECEN INTERFERIR CON EL PROCESO DE LA INFECCION VIRAL A DISTINTOS NIVELES INCLUYENDO LA REPLICACION VIRAL, LA TRADUCCION DE LOS PRODUCTOS CODIFICADOS EN EL RNA 3 Y EL MOVIMIENTO DEL VIRUS A CORTA DISTANCIA.