BIOLOGIA CELULAR, 2

Autor: BIEL LOSCOS CARMEN.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA .

Resumen: La calidad de una planta producida en vivero se pude definir como el conjunto de características que le conferirán una mejor aptitud para sobrevivir, crecer y desarrollar su ciclo en las condiciones de su emplazamiento definitivo. En este contexto, se incluyeron en este estudio tres experimentos en los cuales se ensayaron distintos factores de cultivo con el objetivo común de caracterizar y optimizar la calidad del romero (Rosmarinus officinalis L.) producido en vivero para ser utilizado en revegetaciones como plata autóctona mediterránea. Se ensayaron dosis de agua, temperatura, enriquecimiento atmosférico en dióxido de carbono (ECO2) y la inoculación del sistema radical con un hongo endomicorrícico (Glomus intrarradices Schenk & Smith), estudiando la respuesta en el crecimiento, relaciones hídricas y otros parámetros fisiológicos de la planta. La dosis de agua y la temperatura fueron factores de cultivo que permitieron obtener plantas de romero de características más adecuadas para ser utilizadas en revegetaciones de la zona mediterránea, mientras el ECO2 no tuvo efecto sobre los parámetros considerados como indicadores de endurecimiento. Sin embargo, se observó una importante respuesta productiva del romero al ECO2, que se vio estimulada en las plantas inoculadas con G.intradices (M). La micorrización también facilitó el transporte de agua en las raíces a partir de 14-15ºC, mientras que a bajas temperaturas se observó una mayor resistencia hidráulica radical. La respiración de las raíces M fue inferior a las NM independientemente de la temperatura ensayada. Por otra parte, se realizaron otros tres ensayos de simulación en invernadero cuyo objetivo común fue estudiar la respuesta del romero distintas situaciones que pueden tener lugar al efectuar su introducción en un espacio degradado que se pretende rehabilitar o restaurar. Se simularon las condiciones de estrés hídrico que pueden darse en el trasplante, se ensayaron dosis de agua distribuidas a modo de régimen pluviométrico, se utilizaron como substrato suelos pobres ensayando distintas profundidades, se testó la respuesta de plantas inoculadas con G. Intraradices en la fase de vivero y se estudió también la interacción entre romero y otras especies autóctonas mediterráneas (lavandula dentata L. Y Buxus sempervirens L.). Se observó un mejor balance hídrico en las plantas micorrizadas durante un ciclo corto de sequía de fuerte intensidad, condiciones que pueden darse en el trasplante. Sin embargo, la micorrización produjo efectos negativos durante la fase de recuperación, disminuyendo la actividad metabólica del hongo. Superado el trasplante, el régimen pluviométrico tuvo mayor influencia que la micorrización en las relaciones hídricas y el crecimiento del romero en un ensayo de revegetación simulada. No obstante, la micorrización tuvo también un efecto favorable, que se manifiesta mayoritariamente en el régimen pluviométrico de mayor aporte hídrico, aumentando la supervivencia, la biofertilidad y el recubrimiento del suelo, lo que permitiría reducir sus pérdidas por erosión. En la interacción con otras especies autóctonas, se observó una fuerte auto competencia del romero en las combinaciones romero-boj, mientras que el boj mostró una alta tolerancia por sus vecinos. En las combinaciones romero-lavanda, el crecimiento del romero se vio fuertemente suprimido, mostrándose la lavanda mucho más competitiva debido a su capacidad para agotar el agua del suelo, su crecimiento postrado y la plasticidad observada en su patrón de crecimiento en función de los cambios de la densidad de plantas. Se observaron diferencias de estrategia de resistencia a la sequía entre especies y también en el romero según su competidor.

Autor: ACEVEDO ROJAS RICARDO.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS, CISC.

Resumen: Se caracterizaron cuatro cultivares de caña de azucar: Cristalina(Saccharum officinarum L.), My5514, B42231 y C236-54 (hibridos comerciales). Para cada uno de ellos se determinó el contenido 2C de ADN por citometría de flujo, además el número de cromosomas, tipo de secuencia teleméricas, número y localización de locus de los genes ribosómicos mayores y 5S mediante "FISH". En base a estos datos se estimó la aneuploidia de los híbridos y la posible remodelación experimentada por su genoma. Se analizó el desarrollo de los primordios durmientes hasta el equilibrio dinámico de proliferación mediante citometría de flujo, cálculo de índices mitóticos y microscopía confocal y electrínica, demostrándose que existe variaciones en los puntos de chequeo de los híbridos dependiendo de su contenido cromosómico. Se analizaron las variaciones ultraestructurales de los nucleos de las células meristemáticas en el proceso de proliferación, estableciendose una correlación entre actividad y organización para los principales dominios nucleares. Se caracterizaron por primera vez en esta especie los cuerpos espiralizados asociados el núcleo y los nucleo-plasmicos, demostrándose que ambos tienen características semejantes.

Autor: PIEDRA PEREDA M. ELISA.
Año: 2000.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA/UNIVERSIDAD DE CANTABRIA.

Resumen: La presente Tesis Doctoral analiza el papel del gen Pitx2 en el establecimiento de la asimetría corporal izquierda-derecha, Se inicia con un estudio descriptivo del patrón de expresión de Pitx2 durante el desarrollo embrionario en pollo y ratón. Pitx2 presenta un patrón pleiotrópico de expresión que está muy conservado en ambos modelos embrionarios. Pitx2 se expresa de manera asimétrica en el mesoderno lateral. Esta expresión asimétrica permance durante el desarrollo posterior y se continúa en los derivados del mesodermo lateral. Se analiza asimismo, el patrón de expresiónPitx2 durante el desarrollo cardíaco. El estudio funcional comienza con el análisis de los mutantes murinos iv/iv que cursan con alteraciones de la lateralidad. Se demuestra que las alteraciones de la expresión de Pitx2 en estos mutantes se correlacionan con las alteraciones de la lateralidad. Se realizan experimentos de expresión ectópica de elementos que interviene en la cascada génica que controla la lateralidad, con la aplicación ectópica de activina, Sonic hedgehog y nodal. Los resultados demuestran que: 1- Pitx2 está regulado por estos factores 2- Pitx2 pertnece a la vía de señalización izquierda-derecha 3- Pitx2 interviene enla fase más tardía de dicha señaización, subrogado a nodal. Finalmente, se analiza mediante experimentos de hibridación insitu y de RT-PCR la posible expresión diferencial de las distintas isoformas de Pitx2; se concluye que la expresión asimérica izquierda es debida exclusivamente a la isoforma c. El trabajo demuestra que Pitx2 participa enla fase taradía de la vía de señalización que controla la asimetría corporal izquierda-derecha.

Autor: RIVERO SIERRA FRANCISCO DE BORJA DEL.
Año: 2000.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA/UNIVERSIDAD DE CANTABRIA..

Resumen: Esta tesis analiza los mecanismos de foramción de patrón y control génico utilizando el modelo de extremidades recobinantes. Se realizan dos tipos de extremidades recombinantes según contenga o no la zona de actividad polarizadora. Para cada tipo de extremidad se realiza un estudio morfológico del patrónesquelético así como una caracterización molecular del restablecimiento de patrón en cada uno de los tres ejes de la extremidad. Se analizan los resultados y se discuten en relación con la literatura actual. Se demuestra que la cresta extodérmica aplical es capaz de organizar sin la colaboriación de la zona de activida polarizadora el crecimiento en el eje próximo-distal. También se demuestra que los diferentes compartimentos de expresión géncia en el ectodermo son autónomos y estables en la situación de recombianción y que dirigen la foramción de una nueva zona de progreso en la cual el desarrollo se restablece normalmente. La zona de actividad polarizadora es necesaria para restablecer el eje antero-posterior seguramente mediante el control fino de la expresiónde los genes de la familia Bmp.

Autor: GARCIA CASTRO JAVIER.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CIEMAT.

Resumen: La hematopoyesis se ve desrregulada en pacientes de leucemia, en los cuales un precursor hematopoyético se divide de forma descontrolada originando una perdida de función hematopoyética que origina los sintomas clinicos comunes a las leucemias agudas. Sin tratamiento, las leucemias agudas son mortales y los pacientes mueren pocos meses despues del diagnostico. Los trasplantes autólogo de medula osea (TAMO) son una buena oportunidad de cura aunque presenta el inconveniente de una probable contaminacion de celulas leucemicas en el inóculo hematopoyetico a trasplantar. Asi, se desmostro clinicamente que las celulas de leucemia presentes en los inóculos hematopoyéticos utilizados para el TAMO contribuian a la recidiva postrasplante. Otros estudios clinicos indican que la incubación con dosis altas de drogas de las medula oseas (purgado) utilizadas para TAMO disminuyen la probabilidad de recaida leucemica. Sin embargo, los farmacos usados actualmente para purgar son altamente inespecificos y afectan tambien a las celulas hematopoyéticas normales del inóculo. Por lo tanto, es evidente que se han de desarrollar metodos de purga más específicos. En la memoria presentamos el desarrollado de un modelo murino de leucemia post-trasplante utilizando células leucémicas marcadas genéticamente así como la aplicación de métodos de terapia génica usando vectores virales como nuevo sistema de purga. De los vectores virales probados, los adenoviurs recombinantes se han mostrado muy eficaces en la transducción selectiva de celulas leucemicas. La incubación de las medulas oseas con vectores adenovirales que codifican genes suicidas. Y su posterior tratamiento con su prodroga, ha demostrado su utilidad en la prevención de las recidivas leucémicas post-trasplante originadas como consecuencia de la utilización de inóculos hematopoyéticos contaminados con leucemia.

Autor: GARCÍA HARO FRANCISCA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: En tes trabajo se han analizado las características cariotípicas de diferentes especies de primates Simiiformes, a dos niveles: A,- Homologías y reorganizaciones cromosómicas B,- Análisis cualitativo de la heterocromatina constitutiva. A,- Mediante la comparación de su patrón de bandas G, se han determinado las homologáis cromosómicas de los especies del género Cebus (C. Apella y C. Capucinus) y de diferentes subespecies del género Ateles (a. Belzebuth hybridus, A. B. Marginatus, A. Paniscus paniscus y A. P. Chameck). Esta comparción ha permitido determinar las reorganizaciones cromosómicas que explicarían las homologías detectadas: 3 inversiones pericéntricas en el caso de las especies del género Cebus y 4 inversiones pericéntricas, una paracéntrica y una fusión en el caso de Atles. La aplicación de la técnica de ZOO-FISH utilizando las sondas de todos los cromosomas humanos completos, ha permitido determinar las homologías de la especie humana HSA, Cebus apella CAP y Atles belzebuth hybridus ABH. La comparación de los cromosomas o segmentos cromosómicos homólogos de las especies comparadas, ha permitido determinar las reorganizaciones cromosómicas que explicarían las homologías detectadas, y las bandas implicadas en dichas reorganizaciones. Las reorganizaciones cromosómicas detectadas han sido: A,- 11 fisiones, 10 fusiones, 12 inversiones pericéntricas, 9 activaciones/inactivaciones centroméricas y 3 inversiones paracéntricas al comparar HSA y CAP. B,- 19 fusiones, 11 fisiones, 18 activaciones/inactivaciones centroméricas y 6 inversiones pericéntricas al comparar HSA yABH. C,- 17 fusiones, 11 activaciones/inactivaciones centroméricas, 5 inversiones pericéntricas, 3 fisiones y 3 inversiones paracéntricas al comparar CAP yABH. Se ha analizado la relación existente entre las bandas implicadas en reorganizaciones cromosómicas evolutivas de la especie humana y de CAP con la localización de lugares frágiles y bandas sensibles al efecto de las radiaciones ionizantes en ambos craiotipos. Aplicando el test de la Ji cuadrado, se ha podido concluir que las coincidencias observadas no son estadísticamente signficativas.Se ha determinado también el cariotipo ancestral de los Platyrrhini, así como las homologías de los cromosomas ancestrales con los del cariotipo humano. B,- Se ha realizado el análisis cualitatiavo de la heterocromatina constitutiva de 15 especies de primates simiiformes: Homo spaiens, Pan troglodytes, Gorilla gorilla, Hylobates syndactylus, Macaca fascicularis, M. Tibetana, Papio leucophaeus, P. Sphinx, Cercopithecus aethiops, C. Sabaeus, C. Albogularis, Cebus apella, Ateles belzebuth hybridus, Aotus azarae y A. Nancymai. Las técnicas utilizadas para realizar este análisis han sido: A,- La digestiónin situ con los enzimas de restrición Alul, HaeIII, Rsal y Sau3A. B,- La tinición con el par DA/DAPI en cromosomas sin bandeo previo, en cromosomas con bandeo C previo, y en cromosomas con bandeo G/C previo. La homogeneidad en la heterocromatina intersticial y terminal HIT, y la heterogeneidad en la heterocromatina de localización centromérica HC observadas en la mayor parte de las especies analizadas, parece indicar un origen evolutivo relativamente reciente de la HIT e independiente del de la HC, que tendrían un origen más antiguo.

Autor: RUIZ GRASES MONICA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: El objetivo general de esta tesis ha sido profundizar en la función de las moléculas que hacen posible la migración neuronal, permitiendo así un correcto desarrollo del sistema nervioso central. Con este fin, nos hemos centrado en las moléculas de guía Reelina y Netrina-1, la proteína adaptadora Dab1 y la hormona tiroidea, los mutantes de las cuales presentan graves alteraciones en el cerebro debidas a migraciones neuronales aberrantes en las primeras etapas del desarrollo. Concretamente hemos analizado el patrón de expresión que presentan los tránscritos de reelina en el cerebro anterior del ratón, desde estadíos embrionarios tempranos hasta el adulto. Los análisis se han basado en la técnica de hibridación in situ de elevada resolución mediante una ribosonda contra reelina marcada con diogexigenina. Además, mediante las técnicas de inmunomarcaje con anticuerpos contra distintos marcadores neuroquímicos y la hibridación in situ doble para detectar los tránscritos del enzima biosintético del GABA, hemos intentado caracterizar el tipo de neuronas que expresan reelina en ratón. En lo que se refiere a la expresión del gen reelina y dada la importancia de la hormona tiroidea en el desarrollo del cerebro, hemos investigado si esta hormona podría estar regulando la expressión de reelina. Disponemos de un modelo experimental en rata que reproduce los efectos de hipotiroidismo y hemos analizado un estudio comparativo entre ratas hipotiroideas y control en las cuales hemos analizado los patrones de expressión de los tránscritos de reelina y de la proteína Reelina. Además, dado que la acción intracelular de Reelina está mediatizada por la proteína se ven alterados en los animales hiporitorideos. Finalmente, y con la finalidad de estudiar directamente si la hormona tiroidea es capaz de reestablecer el patrón normal de expressión de reelina en los animales hipotiroiedeos, hemos realizado experimentos in vitro y in vivo tratando tanto los animales hiporitroideos como los cultivos extraídos de estos con hormona tiroidea. También hemos estudiado los efectos de la Netrina-1 in vitro sobre explantes extraídos del labio rómbico de E12-E14, y de su derivado postnatal, la EGL, con la intención de inferir la función que podría estar desempeñando esta molécula de guía en las migraciones neuronales que se dan en el cerebro posterior y que permiten la formación del cerebelo y de los nucleos precerebelosos relacionados. Dado que existen varios receptores para la Netrina-1, hemos analizado sus respectivos patrones de expresión para correlacionarlos con el papel atribuído a la Netrina-1.

Autor: IRUN IRUN M. PILAR.
Año: 2000.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Para que una proteína sea biológicamente activa, su cadena polipeptídica debe plegarse para dar lugar a su estructrua tridimensional característica. Muchas proteínas se pliegan espontáneamente, pero se desconocen los detalles del mecanismo del proceso. Para la resolución del problema del plegamiento es necesario conocer la estructura y energética de todos los estados implicados: desplegados, intermedios, de transición y plegado. En este trabajo se han realizado distintas mutaciones sobre el gen de la flavodoxina de Anabaena PCC 7119, con el propósito de estudiar la importancia de las interacciones por puentes de hidrógeno y de su naturaleza de la estabilidad de la proteína y en las interacciones por puentes de hidrógeno y de su naturaleza en la estabilidad de la proteína y en la estructura de las conformaciones no nativas. Los resultados muestran que la neutralización de puentes de nidrógeno aumenta consistentemente la estabilidad conformacional a 25ºC y la termoestabilidad la proteína mientras que, por el contrario, la simple eliminación de cargas negativas de la proteína no vinculada con formación de tales enlaces no tiene efecto alguno en la estabilidad. La mayor estabilidad de los puentes de hidrógeno neutros, que contrasta con la asunción generalizada de que los puentes cargados son más estabilizadores, podría deberse al mayor coste energético de desolvatar aa cargados para formar puentes hidrógeno en la estructua nativa. Además, aunque no es posible determinar con precisión la contribución de los puentes de hidrógeno a la estabilidad mediante el cálculo de la diferencia de estabilidad entre la proteína silvestre y los mutantes, debido a la existencia de términos de solvatación y de interacción de la cadena lateral eliminada con otras partes de la proteína, tras una serie de suposiciones cuya validez deberá ser comprobada por análisis cristalográfico, se ha encontrado que la contribución es pequeña, desde aproximadamente -0,5 hastas + 0,5 kcal/mol y puente de hidrógeno. La apoflavodoxina se desnaturaliza de manera reversible al aumentar la temperatura siguiendo un modelo de tres estados. Las temperaturas de semidesnaturalización de los dos equilibrios están bien separadas (316.5 y 329.6 K) y la máxima acumulación del intermedio (64%) sucede a 323 K. El intermediario posee topología nativa, con la mayoría de los elementos de estructura secundaria adecuadamente orientados y, a juzgar por la presencia de puentes de hidrógeno nativos en la superficie, posee una gran proporción de interacciones terciarias formadas, lo que concuerda con que tenga una apreciable entalpía de estabilización con respecto al estado desplegado. Además, los elementos de estructura secundaria adecuadamente orientados parecen coincidir con regiones de la proteína de alta estabilidad conformacional local (estudio de intercambio lento de hidrógenos amídicos). El último objetivo ha sido el estudio del estado de transición de la reacción de desplegamiento. Se ha encontrado que de los tres contactos analizados entre distintos elementos de estructura secundaria, dos están rotos en el estado de transición y no podría estar formado parcialmente. Además, otros dos puentes de hidrógeno intrahelicoidales estudiados están rotos. De ello podemos decir que, a diferencia de los encontrado por el intermediario térmico, el estado de transición parece estar más desestructurado.

Autor: CUESTA RUBIO NATALIA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.

Resumen: En esta Tesis se ha demostrado la validez de la paloma (Columna livia) como modelo para el estudio del efecto de las sustancias contaminantes en el sistema del surfactante pulmonar. Por un lado, se ha realizado un estudio comparativo entre aves procedentes de habitats urbanos y rurales y tambien se ha desarrollado un modelo experimental para el estudio de los efectos del ozono: las camaras de techo abierto OTC, que reproducen con fidelidad las condiciones ambientales que caracterizan a un episodio de contaminación. En este trabajo se concluye que la exposición durante largos periodos de tiempo a concentraciones mixtas de contaminantes da lugar a efectos cronicos en el sistema respiratorio, que se reflejan en la aparición de alteraciones estructurales como el aumento del numero de macrofagos, modificaciones en el tamaño de los septos de las cavidades atriales y variaciones en la altura del epitelio de mesobronquio y bronquios secundarios. Además, la exposición prolongada a la atmosfera contaminada de una ciudad como Madrid provoca la aparición de cambios morfológicos en los pneumocitos tipo II, entre ellos la vacuolilzación del citoplasma, la formación de cuerpos lamelares aberrantes y la disminución del núemro de microvellosidades. Estos cambios se deben en su mayor parte a alteraciones en el metabolismo del surfactante pulmonar. Los pneumocitos tipo II de las palomas de ambientes contaminantes presentan menor pigmentacion que los controles, lo que parece estar en relación con las alteraciones producidas en el sistema del surfactante pulmonar. Estas celulas sintetizan adrenomedulina, hecho que no se ha descrito en el pulmón de otros vertebrados. La localización subcelular de la inmunorreactividad indica que esta proteina puede secretarse en la paloma junto con los cuerpos lamelares y en las vacuolas del sistema multivesicular. Las sustancias contaminantes de la atmosfera influyen en los niveles de determinadas proteinas reguladoras, entre ellas, la adrenomedulina y tambien el factor H. Los niveles de estos peptidos se ven incrementos como respuesta al daño producido por efecto de la contaminacion. El patrón de distribución de la proteina del sufactante A en los penumocitos tipo II se altera tras la exposición a los contaminantes atmosfericos, muy probablemente por sufrir cambios en su estructura y metabolismo, lo que indica una importante implicacion de esta proteina en la respuesta al daño pulmonar causado por la polucion. Los contaminantes atmosfericos provocan ademas un aumento en la proliferacion de las celulas del sistema respiratorio. Sin embargo, no se activa la apoptosis ni se observan cambios en los niveles de bcl-2 en los pneumocitos tipo II, aunque en las celulas del mesobronquio se activen los mecanismos de apoptosis en las palomas urbanas.

Autor: CONTRERAS FERNANDEZ JOSE IGNACIO.
Año: 1999.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: En el presente trabajo se obtuvieron diversas líneas de hibridoma mediante fusión celular. De éstas se seleccionaron 17, en función de sus patrones de reconocimiento antigénico en los espermatozoides. Los lugares de reconocimiento antigénico de estos 17 anticuerpos monoclonales(AcM) fueron caracterizados mediante inmunofluorescencia indirecta(IFI) y medante citoquímica con oro coloidal. Las principales regiones reconocidas son: región acrosomal, región postacrosomal, segmento intermendio y segmento principal de la cola. Los lugares de unión de 9 de estos AcM se localizan en la membrana plasmática, y en el resto de los casos en las estructuras intracelulares, como el acromosoma o el citoesqueleto de la cola. Se determinó asimismo la especificidad tisular y de especie de los AcM obtenidos,encontrándose que 4 de ellos reconocen los espermatozoides de modo específico y 2 de éstos muestran especificidad de especie. En cuanto al origen orgánico de los antígenos 12 de ellos se originan en el testículo, 3 en el epidídimo y 2 en las glándulas sexuales accesorias. Los efectos de los distintos protocolos de preparación de las extensiones espermáticas sobre los patrones de reconocimiento antigénico en la IFI fueron también estudiados, encontrándose que la preparación de la muestra es una importante fuente de variación sobre el patrón de fluorescencia obtenido. Los resultados obtenidos fueron discutidos teniendo en cuenta la localización de los diferentes lugares de unión. Las posibles aplicaciones del los AcM estudiados fueron discutidas en función de los resultados obtenidos en las distintas pruebas citoquímicas realizadas. Los AcM que resultaron más interesantes por su especificidad topográfica fueron 10-3F2 y 10-5F1, que marcan la membrana acrosomal externa y la membrana plasmática de la cabeza espermática, respectivamente.

Autor: DIAZ RODRIGUEZ M ELENA.
Año: 1999.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE MICROBIOLOGIA BIOQUIMICA.

Resumen: El receptor TrkA subre procesamiento proteolítico de su ectodominio. Este proceso tiene lugar en la membrana plasmática y da como resultado la generación de fragmentos activados a la célula y fosforilados en tirosina. Estos fragmentos tienen capacidad de unirese a moléculas de señalización e iniciar una respuesta biológica en células PC12. Se general por la acción de un sistema de al menos dos metaloprotesas que actúan sobre el receptor en dos puntos muy proximos. Es un proceso altamente regulado por vías de segundos mensajeros intracelulares como la vía de la PKC o la vía de calcio. Además de estas vías clásicamente implicadas en el procesamiento de proteínas de membrana, agentes inhibidores de la calmodulina son también capaces de estimular el procesamiento de TrkA. Lo hacen mediante una vía nueva e independiente de las anteriormente descritas como inductoras del procesamiento, si bien los efectores finales parecen ser los mismos. En el caso de TrkA no parece haber interacción directa de la calmodulina con su cola citosólica, como se ha descrito en el caso de la L-selectina. Además esta cola es dispensable para el procesamiento. La vía de los inhibidores de calmodulina es capaz de estimular el procesamiento de otras muchas proteínas de membrana como proTGFa,BAPPo ErbB4. Otro sistema proteolítico totalmente distinto afecta al también receptor tirosina quinasa ErbB2. La aparición de su ectodominio soluble en células procedentes de tumores de mama no es producida por el sistema proteolítico antes descrito. En paralelo encontramos que este receptor sufre procesamiento en su extremo N-terminal generándose dos formas truncadas de 150 y 165 kDa. Esta truncación se produce tras la activación de la vía de la PKC, aunque con una cinética lenta(la máxima generación ocurre a las 3-6 horas de tratamiento). Ocurre de forma independiente a las vías clásicas de biosíntesis y degradación proteica y es llevada a cabo por proteasas serínicas. Este procesamiento también da lugar a formas del receptor truncadas y activas, capaces de asociarse a las moléculas de señalización Shc o Grb2.

Autor: GIMENO LONGAS M. JOSE.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA , UNIVERSIDAD DE ALCALA.

Resumen: El endotelio vascular asegura el mantenimiento de la homeostasis vascular. Las celulas endoteliales estan expuestas a componentes celulares y solubles, que pueden interaccionar con estas celulas e inducir una respuesta. El mecanismo de accion entre celulas inmunes y celulas endoteliales ha sido estudiado, sin embargo, es necesario profundizar en la modulacion que puedan ejercer mediadores solubles como las citocinas sobre el endotelio. El objetivo de este trabajo es profundizar en los efectos inducidos sobre el endotelio por la citocina IL10, cuyo papel sobre el mismo ha sido poco estudiado y sin embargo, pudiera constituir un mediador relevante en procesos fisiologicos y/o patologicos. Y, si esta citocina regula los efectos inducidos por otras citocinas de tipo Th2 (IL-4) y/o Th1(IFNy), intentando realizar asi una aproximacion al estado que se induce en algunas patologias. Para desarrollar este estudio, se han utilizado celulas endoteliales procedentes de vena umbilical humana, como modelo que nos permita estudair, si las citocinas son capaces de modificar algunas de las propiedades de estas celulas en cultivo. La presencia de IL10, indujo muerte celular y adhesion plaquetar, de forma dosis-dependiente. No obstante, tambien el IFNy indujo muerte celular, mientras que el efecto de la IL4 fue una induccion a tiempos cortos, de la formacion de estructuras semejantes a neovasos. Por otro lado,observamos que la IL10 es capaz de bloquear el efecto inhibitorio inducido por el IFNy sobre la IL4. Los analisis de TUNEL mostraron que, tanto la IL10 como el IFNy, inducen muerte celular o apoptosis, con inmunofluorescecia observamos, una disminucion de los niveles de la molecula de PECAM-1 cuando la IL4 se administra de forma continuada, o el IFNy estaba presente a tiempos cortos. La utilizacion de tecnicas de citometria de flujo no permitio analizar la cinetica de expresion de la molecula PECA-1, de moleculas de histocompatibilidad de clase I y II. Pudimos ratificar que las citocinas, IL4 e IFNy inducen una disminucion de la expresion de la molecula PECAM-1 y, de moleculas de histocompatibilidad de clase I y I. Pudimos ratificar que las citocinas, IL4 e IFNy inducen una disminucion de la expreson de la molecula de PECAM-1 y, que esta modificacion depende del tiempo de actuacion de la citocina. Ademas, observamos la induccion de las moleculas de histocompatibilidad en presencia de IL4 e IFNy, que la IL10 inhibe esta expresion cuando se combina con las otras dos citocinas. El analisis zimografico nos permitio determinar la capacidad gelatinolitica de la celula endotelial en presencia de las citocinas ensayadas. No observamos modificaciones cuando las citocinas se ensayaban de forma individual sin embargo, la presencia de IL10 en combinacion con IL4 o IFNy,indujo un aumento de la expresion de MMP-2 y, por tanto, un aumento de la capacidad degradativa del cultivo. Si la IL10 puede ser un potente inhibidor de la proliferacion endotelial y sus efectos son reversibles si la citocina desaparece, ademas de actuar como modulador de la accion de IL4 e IFNy, podriamos pensar que la IL10 pueda ser considerada como un potencial agente terapeutico en el conrol de la actividad endotelial, siendo necesario en el futuro, profundizar en los mecanismos que subyacen en procesos tan importantes como la agiogenesis vascular.

Autor: ROVIRA DE MIGUEL JUAN MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El adecuado funcionamiento del organismo, requiere de un estricto control de los niveles de glucosa en sangre, este control se lleva a cabo en la páncreas en unas estructuras denominadas islotes de Langerhans. Estos islotes son agregados multicelulares de tejido endocrino y están constituidos por varios tipos celulares.El elevado grado de organización estructural y funcional del islote,incluye una profusa invervación y vascularización que facilitan su función endocrina. Del 70 al 90% de la población total del islote esta constituida por células beta. Estas células son las principales responsables del control de la glucemia, ya que son capaces de responder a los auemtnos de glucosa con la secreción de la hormona insulina, única hormona capaz de diminuir los niveles de glucosa en sangre. El potencial de membrana en reposo de las células beta se mantiene gracias a las aperturas del canal K-ATP, este canal se cierra al aumentar las concentraciones itnracelulares de ATP y es el principal responsable en el acoplamiento estímulo-secreción. El descubrimiento de este canal permitió describir el modelo clásico del acoplamiento estímulo-secreción. Según este modelo la glucosa entra en el interior de la célula se metaboliza, aumentando la concentración de ATP intracelular, cerrando los canales K-ATP y despolarizando la célula.Esta despolarizaicón abre los canales de calcio dependientes de votlaje, disparando la secreción de insulina. En la presente Memoria de Tesis se describe que los dinucleótidos Ap4A y Ap3A, y la hormona 17 beta estradiol, modulan la actividad de canal Katp presente en la membrana de la célula beta, lo que les capacita para actuar como reguladores en el acoplamiento estímulo-secreción de este tipo celular. El Ap4A, aplicado intracelularmente en parches de membrana de célula beta, produce uan inhibición de la actividad del canal Katp con una eficacia equivalente a la del ATP, considerado como el princial regulador fisiológico del canal. Las concentraciones intracelulares de diadenosonpolifosfatos generadas a consecuencia del metabolismo de los nutrientes se encuentran en el rango de concentraciones de dinucleótidos que permite una regulación efectiva del canal. El efecto inhibidor del Ap4A sobre el canal Katp es debido exclusivamente a una disminución de la probabilidad de apertura del canal en presencia de Ap4A, no afectando al valor de la corriente unitaria.El Ap4A y el ATP presentan diferencias en el mecanismo de interacicón con el canal: a) el Ap4A, a diferencia del ATP, no revierte el fenómeno de lavado del canal Katp en parches escindidos; b) contrariamente a lo observado en el caso del ATP el bloqueo del canal Katp por el Ap4A intracelular se favorece en presencia de Mg2+. El Ap4A inhibe la actividad del canal Katp aumentando la duración de los tiempos de cierre largos del canal. Este mecanismo se puede reproducir mediante un modelo cinético del canal que incorpora un nuevo estado de ciere largo dependiente de la concentración de Ap4A. El Ap4A extracelular provoca una disminución de los niveles de la concentración de calcio intracelular, eliminando el patrón oscilatorio de la señal de calcio inducido por glucosa. El efecto es debido a uan alteración del potencial de membrana, que, a su vez, disminuye la entrada de calcio a través de los canales de calcio dependientes de voltaje. En la célula intacta, el Ap4A extracelular induce la aparición de aperturas de canal Katp eliminando las corrientes de acción inducidas por glucosa. El efecto del Ap4A extracelular no se observa en parches aislados de membrana, lo que indica que es necesaria la presencia de un factor citosólico para que el efecto se produzca. La presencia de PPADS, un antagonista de receptores purinérgicos P2, inhibe la respuesta al Ap4A extracelular, sugierendo la implicación de este tipo de receptores en los efectos descritos anteriormente.El 17 beta estradiol, a concentraciones fisiológicas, induce una disminución rápida y reversible de la actividad del canal Katp. Este efecto inhibidor del 17 beta estradiol no se observa en parches de membrana aislados, lo que indica la participación de un factor citoplásmico en el mecanismo de acción. Los efectos del 17 beta estradiol son de carácter no genómico y están mediados por un receptor a estrógenos asociado a la membrana plasmática de la célula beta, distinto del receptor clásico intracelular.

Autor: BERROSPE MARTINEZ MARIA.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: La asociación de un evento trombótico a la lesión aterosclerótica debido a su ruptura es una de las principales causas de su sintomatologia (angina de pecho, infarto de miocardio y muerte subita). Por lo tanto el estudio de los factores que influyen tanto en la estabilidad de la placa como en su trombogenicidad es sumamente importante para la disminución de la mortalidad y morbilidad causadas por la enfermedad. El objetivo de este estudio ha sido establecer la relacion entre la presencia de los factores de coagulacion -como marcadores de la trombogenicidad de la lesion- y el equilibrio proliferacion/apoptosis -por su influencia en la estabilidad de la lesion- en las lesiones ateroscleroticas de coronarias humanas en relacion con la composicion y el grado de severidad de la lesion. 60 coronarias humanas extraidas de 20 corazones en el momento del trasplante cardiaco se procesaron para histologia convencional (tricromico de Mason, tincion de ORO), inmunohistoquimica, hibridacion "in situ" de RNA y tecnica TUNEL. Se determinó su composición celular (celulas musculares lisas. Monocitos/macrofagos, linfocitos, neutrófilos y fibroblastos), la presencia de marcadores de apoptosis(TUNEL,CPP32 y p53) y de proliferacion (Ki67) y la presencia de factores de coagulacion: factor tisular, protombina/trombina y fibrinogeno; ademas de la formacion de fibrina. A medida que aumenta el grado de severidad de la lesion, aumenta la presencia en celulas apoptoticas en correlacion significativa positiva con el contenido en lipido y celulas inflamatorias y el marcador de proliferacion, aunque la relacion proliferacion/apoposis sufre una evolucion descendente hasta la lesión tipo V. En la lesión tipo VI(la que presenta la complicación trombótica) puede observarse una explosion proliferativa que compensa el desequilibrio observado. Estas celulas en proliferacion se relacionan con el trombo formado sobre el nucleo graso y las zonas de neovasos, zonas ricas tambien en celulas apoptoticas y factores de coagulacion, asi como formacion de fibrina. En conclusion, la apoptosis en poblacion celular de la lesión aterosclerótica esta intimamente relacionado con la presencia de lipido, celulas inflamatorias y presencia de factores de coagulacion, mientras que la proliferacion solo sufre una aumento significativo cuando se produce un evento trolbótico y formación de fibrina.

Autor: MAGRANE FONTS JORDI.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: El receptor de las lipoproteinas de muy baja densidad (VLDLR) es un miembro de la familia genica del receptor de las LDL. Los receptores de esta familia comparten caracteristicas estructurales y funcionales, e interactuan con diferentes ligandos que transportan hasta los lissomas para ser degradados. Todos ellos unen a la apolipoproteina E, por lo que se ha determinado que pueden desempeñar diferentes funciones relacionadas con el metabolismo de las lipoproteinas. Se han descrito algunas variantes del VLDLR debidas a un procesamiento diferencial (splicing) de su mRNA. Entre ellas se encuentran las producidas por la eliminación del exon 16, que codifica el dominio de O-glucosilacion en la proteina. Este dominio se encuentra proximo a la membrana plasmatica. En esta tesis Doctoral se demuestra que las celulas endoteliales de aorta bovina expresan unicamente la variante del VLDLR que no presenta el dominio de O-glucosilacion. Cuando se analizan diferentes tejidos bovinos y diferentes lineas celulares se observa que la expresión de las variantes del VLDLR es especifica de tejido y de tipo celular, lo cual sugiere una funcion y una regulacion diferencial. Para estudiar el procesamiento celular de las dos variante del VLDLR bovino clonadas, se han usado tres lineas celulares diferentes: una de ellas las sobreexpresa de forma estable, y otra contiene una deficiencia reversible en la O-glucosilacion. En esta tesis doctoral se demuestra que la presencia del dominio de O-glucosilacion en el VLDLR determina la estabilidad de la proteina en la superficie celular, mientras que el VLDLR sin el dominio de O-glucosilacion es proteolizado y liberado al medio de cultivo. Se genera, pues, una forma soluble del receptor con el dominio de union a los ligandos intacto que, en caso de econtrarse en los fluidos extracelulares del organismo, podria actuar como agonista o antagonista de los diversos ligandos descritos para el VLDLR.

Autor: OSMA CORDOBA M. MAR.
Año: 1999.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: Esta Tesis Doctoral aborda aspectos de interés clínicos y biológicos respecto al trasplante de progenitores hematopoyéticos de sangre periférica. La actualidad del tema queda patente en la consolidación de esta modalidad de trasplante como terapia habitual en el tratamiento de diversas hemopatías y tumores sólidos como el cáncer de mama. En el presente trabajo, mediante el empleo de la citometría de flujo, se ha realizado un análisis de los progenitores hematopoyéticos en médula ósea y en sangre periférica, antes y después del trasplante, con la finalidad de buscar parámetros que puedan ser predictivos tanto de la capacidad de movilización, como de la consecución de un injerto precoz, así como de la obtención a largo plazo de una hematopoyesis estable. Para alcanzar tales objetivos, el estudio se ha llevado a cabo en un grupo homogéneo de pacientes con cáncer de mama, en las que se ha empleado G-CSF como tratamiento de movilización. Los resultados obtenidos respecto a la movilización de los progenitores hematopoyéticos: a) La cantidad de células CD34+/CD71- en médula ósea basal, se correlaciona significativamente con los progenitores movilizados a sangre periférica tras la administración de G-CSF, y con los obtenidos en las aféresis; b) El G-CSF es un agente movilizador eficaz en pacientes con cáncer de mama. La utilizaciónde dosis bioequivalentes de Filgrastim o Lenograstim no mostró diferencias significativas entre ambos preparados; c) La cuantificación de las células CD34+ depende del fluorocromo empleado, siendocon ficoeritrina significativamente superior que con fluoresceína; d) La concentración de células CD34+ inmediatamente antes de las aféresis puede ser utilizada como guía para realización de las mismas, al predecir tanto el total de células CD34+ recolectadas como el número de procedimientos necesarios para obtener un determinado umbral de células CD34+/Kg; e) La dosis de quimio-radioterapia recibida antes del G-CSF es un factor con impacto negativo en la movilización. En lo referente al implante hematopoyético: a) La rapidez del injerto se correlaciona significativamente con el número de células CD34+, CD34+/CD38+ y CD34+/HLA-DR+ infundidas; b) La infusión de 2 x106 células CD34+/Kg asegura una hematopoyesis precoz y a largo plazo adecuada en pacientes con cáncer de mama sometidas a trasplante autogénico con el esquema STAMP-V; C) La administración de G-CSF a partir del 6o día postrasplante acelera la recuperación granulocítica pero puede retrasar el injerto plaquetario si no se infunden más de 2 x 106 células CD34+/Kg; d) La quimio-radioterapia previa tiene un impacto adverso en el injerto plaquetario precoz, particularmente en las pacientes con enfermedad metastásica; e) La hematopoyesis a largo plazo está significativamente disminuída con respecto a la basal; f) Los progenitores medulares pretrasplante se correlacionan con los encontrados en médula ósea el día +300; g) El diagnóstico de carcinoma de mama metastásico, la administración de radioterapia antes de la movilización y el empleo de G-CSF postrasplante se relacionan a largo plazo con un menor nivel de progenitores CD34+ en médula ósea.

Autor: ORTUÑO SANCHEZ JESUS.
Año: 1999.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La presente Tesis Doctoral tiene por objeto estudiar el posible uso de las vitaminas antioxidantes C y E, administradas a través de la dieta, como estrategia para el estrés producido al clasificar ejemplares de dorada (Sparus aurata L.) según su talla. Nuestro trabajo se desarrolló en tres etapas. En la primera, estudiamos el efecto inmunoestimulante de las vitaminas suministradas en dieta. Para ello, se suplementó pienso comercial con diferentes concentraciones de una o de ambas vitaminas, para alimentar a los peces durante un período de tiempo comprendido entre 0 y 10 semanas. Los ejemplares fueron muestreados cada dos semanas, estudiándose los principales parámetros del sistema inmunitario inespecífico. En la segunda etapa, se estudió el efecto del estrés sobre dichos parámetros del sistema inmunitario. En concreto, los peces fueron sometidos a diferentes situaciones estresantes que se engloban en el proceso de clasificación: natación activa, hacinamiento, anestesia e hipoxia. Otros ejemplares fueron sometidos secuencialmente a estas situaciones estresantes, con el fin de provocar en ellos un estrés múltiple. Estos peces fueron muestreados los días 0, 1, 2, 3 y 4 después de aplicado el tratamiento estresante, analizándose los parámetros inmunológicos anteriormente citados. Finalmente, en la tercera etapa, estudiamos la capacidad protectora de los suplementos vitamínicos óptimos frente al estrés múltiple provocado. Las dosis vitamínicas de 3'1 g de vitamina C y de 1'3 g de vitamina E / Kg de pienso producen estimulación de la respuesta inmunitaria inespecífica de dorada, a las 2 y a las 4 semanas de tratamiento respectivamente. El estrés producido al clasificar doradas por tamaño, provoca efectos inmunodepresores en la dorada durante los dos primeros días posteriores a su aplicación, desapareciendo a los tres días. El estrés múltiple también provocó inmunodepresión, aunque no se observan efectos aditivos entre los diferentes factores. Las dosis óptimas de vitaminas C y/o E amortiguaron el aumento de la concentración de glucosa sanguínea que se produce tras la aplicación de un estrés múltiple. Además, suprimieron el efecto negativo de dicho estrés sobre la explosión respiratoria de los leucocitos de riñón cefálico de dorada, causando una inmunoreversión de dicha actividad celular.

Autor: ANDRADE POCINO RICARDO.
Año: 1998.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: La comunicación entre el núcleo y el citoplasma es un proceso de gran importancia para la célula, ya que en el interior del núcleo reside la información genética, mientras que en el citoplasma se encuentra la maquinaria de síntesis proteica. Estas dos actividades, la nuclear y la citoplásmica, se encuentran separadas físicamente por la envoltura nuclear, y para integrarlas es necesario que exista un mecanismo de transporte a través de la envoltura nuclear. El presente trabajo de investigación profundiza en el conocimiento de las características que rigen el transporte nucleocitoplásmico de proteínas cariofílicas. Para ello hemos realizado dos ensayos de transporte in vitro. El primero de ellos se basa en el estudio del transporte de la RNA polimerasa del bacteriófago T7, una proteína no cariofílica, a la cual se le ha añadido una secuencia de localización nuclear que hace que se comporte como una proteína cariofílica en un ensayo de transporte nucleocitoplásmico en células NRK permeabilizadas con digitonina. En nuestro ensayo, el transporte de esta proteína recombinante cumple las siguientes características: es dependiente de la secuencia de localización nuclear añadida, es necesaria la acción de factores solubles, y el transporte es dependiente de energía. Además, el hecho de que el anticuerpo monoclonal QE5, que reconoce las nucleoporinas NUP214, NUP153 y p62 bloquee el transporte de esta proteína, y no lo inhibian anticuerpos frente a la NUP214 ni anticuerpos frente a la NUP153 es un indicativo de que, en nuestras condiciones, la p62 está implicada en la importanción de esta proteína cariofílica. De forma paralela, hemos desarrollado un nuevo ensayo de transporte in vitro cuyo resultado se detecta al microscopio electrónico. Este método consiste en colocar un núcleo aislado de oocito de Xenopus laevis en presencia de un extracto de huevos de Xenopus en el interior de un pocillo de una placa Terasaki. A continuación se añade una proteína cariofílica conjugada con oro coloidal. En nuestro caso hemos utilizado Nucleoplasmina, una proteína cariofílica purificada a partir de huevos de Xenopus. Tras un tiempo de incubación, cada núcleo se procesa independientemente para microscopia electrónica. El resultado muestra que la acumulación nuclear es dependiente de la naturaleza cariofílica de la proteína, ya que la albúmina sérica bovina (BSA) permanece fuera del núcleo. La principal ventaja de este método es que permite detectar la localización intranuclear de la proteína cariofílica, lo que puede ser una técnica de gran utilidad para determinar cuales son las funciones nucleares que desarrollan las diferentes proteínas cariofílicas. En este sentido, hemos observado que la Nucleoplasmina transportada se asocia uniformemente con la cromatina y, además, existe una acumulación muy marcada en unas regiones concretas de la corteza de los nucléolos. Finalmente, y desde un punto de vista teórico, el trabajo procura dar una visión global de la estrecha relación existente entre el núcleo celular y su entorno inmediato, el citoplasma. Esta comunicación está sometida a un estrecho mecanismo de regulación, basado fundamentalmente en el transporte nucleocitoplásmico y en las características estructurales y funcionales del núcleo y de la barrera que separa ambos compartimentos, la envoltura nuclear.

Autor: VERDUGA VELEZ M. ROSARIO.
Año: 1998.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Siguiendo la hipótesis de autocanibalismo de Wurtman, que plantea que la degradación de los componentes fosfolipídicos de la membrana es la causa determinante de la disminución de la fluidez de membrana, se plantea la administración crónica de la CDP-colina en el ratón CFW, para observar su posible influencia en el proceso de envejecimiento. Realizándose el estudio desde una doble perspectiva, conductual y morfológica, dada la afectación frecuente durante el envejecimiento de los procesos de aprendizaje y memoria y la consideración del hipocampo como su sustrato morfológico. El análisis conductual realiza un estudio longitudinal desde los doce meses en el grupo control, y experimental de la coordinación sensoriomotriz mediante el Test de Miquel y Blasco, una caracterización etográmica del comportamiento motor de ambos grupos, centrándose en el análisis de la actividad exploratoria, y el estudio de la memoria espacial mediante el test del laberinto radial. EL análisis morfológico centra en el estudio ultraestructural de las células granulares del giro dentrado, un estudio de las áreas de distribución de las fibras musgosas, análisis de la población que expresa B- NADPH diaforasa en el giro dentado, como enzima que colocaliza con la ONS en el G.D. Asimismo, se realiza un análisis de la población glial de estirpe astrocitaria que expresa PFGA en el giro dentado. Los principales resultados obtenidos son que la administración crónica de CDP colina en esta cepa produce en el envejecimiento un incremento de la actividad motora y exploratoria, mejor coordinación sensriomotriz y mejoría en la memoria de referencia pero no en la de trabajo. Con respecto al estudio morfológico, se obtiene en el grupo experimental un incremento en el área del soma, y del nucleo lo de las células granulares, no disminuye la expresión de pigmentos ceroides en el envejecimiento, un mantenimiento de la población B-NADPH diaforasa positivo a este nivel y una menor expresión de la PFAG en los niveles analizados del giro dentado. Los resultados se discuten a la luz de los conocimientos actuales.

Autor: TAULES MARIN MARTA.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se ha estudiado el papel de la calmodulina (CaM) sobre la regulación de la actividad de la cdk4, cdk2, expresión y localización intracelular de las proteinas que intervienen en la progresión a través de la etapa H1 del ciclo celular. La adición de drogas anti-CaM a un cultivo de células NRK ("normal rat kidney") durante el principio del G1 provoca la inhición de la actividad cdk4 y cdk2 y también se encuentra la proteina del retinoblastoma hipofosforilada. Los niveles totales de cdk4, ciclina D1, ciclina D2, cicE, p21 y p27 no están afectados por el tratamiento, pero sí que se observó una disminución en la cantidad de cicA y cdc2. La disminución en la actividad de la cdk4 no se debe a un cambio en las proteínas que se le asocian, ni a un cambio en la cantidad de proteinas inhibidoras unidas al complejo ckd4/cicD1. La inhibición de la CaM provoca una translocación del nucleo al citoplasma para la cdk4/cicD1, evitando de este modo que pRb se fosforile bajo el efecto de la droga anti-CaM. Mediante técnicas de inmunoprecipitación, columnas de afinidad y "pull down" se ha demostrado que la cdk4 y la cicD1 se asocian tanto in vivo como in vitro a través de una proteina aceptora de CaM. EL hecho de que la Hsp90 interactua con la cdk4 in vivo, y que dicha interacción pueda facilitar la translocación de la cdk4 y la cicD1 al nucleo, hace de la Hsp90 una buena candidata para desempeñar el papel de CaMBP en la transcolocación de la cdk4/ckcD1 al nucleo. Por otro lado se encontró que la p21 coinmunoprecipitaba con la CaM y también en sentido contrario, esta interacción se comprobó que era directa utilizando "pull down". Además se comprobó que la CaM era esencial para acumulación de la p21 en el nucleo. Esta especificidad en la unión de la p21 a la CaM y su papel regulador en el transporte rompe el mito sobre la función inhibidora de la p21, presentándose en este trabajo como un elemento regulador en el transporte nuclear de proteinas que carecen de señal de localización nuclear (NLS). Asi pues podría estar facilitando por "piggy back" la entrada al nucleo de la cdk4/cicD1.