CITOLOGIA

Autor: PÉREZ COSTAS EMMA.
Año: 2002.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Hemos estudiado la expresión de reelina (una proteína que parece desempeñar importantes papeles en el desarrollo de estructuras corticales del cerebro de vertebrados) en un vertebrado anamniota que carece de estructuras corticales desarrolladas, la lamprea de mar. En el presente trabajo nos planteamos como objetivos: * Analizar la posible expresión de reelina en el sistema nervioso central de la lamprea de mar con el fin de conocer si esta proteína está presente en un vertebrado que carece de estructuras corticales desarrolladas. * Estudiar la distribución de reelina en el sistema nervioso central de la lamprea de mar durante el desarrollo y en la etapa adulta, con el fin de obtener datos que puedan a ayudar a dilucidar otras posibles funciones de esta proteínano relacionadas con el desarrollo de estructuras corticales. * Realizar un análisis comparado de la expresión de reelina en distintos grupos de vertebrados desde el punto de vista de la posible conservación de esta molécula a lo largo de la evolución. Para la consecución de los objetivos anteriormente expuestos hemos utilizado dos anticuerpos monoclonales denominados G10 y 142, dirigidos contra dos epitopos diferentes del extremo amino terminal de la proteina reelina y que han sido donados por el profesor André M. Goffinet de la Universidad de Namur (Bélgica). Hemos utilizado técnicas de western blot sobre extractos proteicos de cerebros de ejemplares adultos de lamprea de mar y de otros vertebrados (peces y mamíferos). Por otro lado, hemos estudiado mediante técnicas inmunohistoquímicas la distribución de reelina en secciones de cerebros de larvas y ejemplares adultos de lamprea, y cerebros adultos de peces y mamíferos. Nuestros datos de western blot muestran que en extractos proteicos de cerebro de todas las especies estudiadas, los anticuerpos específicos anti-reelina reconocen una banda de aproximadamente 380 kDa, que se corresponden con el peso molecular de la forma completa de la reelina. Además, en todas las especies estudiadas los anticuerpos anti-reelina ponen de manifiesto una banda de aproximadamente 180 kDa de peso molecular que se corresponden con uno de los productos de corte de la proteína reelina. Una tercera forma de reelina de aproximadamente 300 kDa sólo es detectada en el caso del cerebro de mamíferos y de peces, pero no en extractos proteicos de cerebro de lamprea. En conjunto nuestros datos sugieren que la forma completa de la reelina y el producto de corte de 180 kDa, podrían estar presentes en toda la escala de los vertebrados. Sim embargo, el producto de 300 kDa podría haber aparecido posteriormente a la divergencia entre agnatos y gnatostomos. El estudio inmunohistoquímico de la distribución de reelina en la lamprea de mar muestra que esta proteína se expresa durante el desarrollo larvario, presentando los niveles más elevados de inmunorreactividad en las etapas previas a la metamorfosis (una etapa en la que se producen un elevado número de cambios morfológicos y fisiológicos en un periodo de tiempo relativamente corto). La inmunorreactividad a reelina en larvas de lamprea aparece estrechamente relacionada con estructuras en desarrollo, mayoritariamente relacionadas con el sistema olfatorio y con el sistema visual. En ejemplares adultos de lamprea de mar la reelina sigue expresándose en algunas regiones del encéfalo, pero en niveles sensiblemente inferiores a los observados durante las etapas larvarias. En el cerebro adulto de peces (pintarroja, esturión y trucha) y roedores (rata) la reelina sigue expresándose en distintas regiones de encéfalo. Nuestros datos sugieren que la reelina podría estar implicada en el funcionamiento correcto de algunas estructuras o sistemas del cerebro adulto de vertebrados.

Autor: BARALLOBRE FILGUEIRA M. JOSÉ.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En el sistema nervioso central (SNC), la información está codificada en redes de neuronales funcionalmente concectadas por sinápsis. La morfogénesis del sistema nervioso (SN) requiere la migración dirigida de neuronas postmitóticas a posiciones determinadas y la guía de sus axones hacia sus dianas sinápticas específicas. Ambas formas de navegación dependen de moléculas de guía, receptores de superficie y vías de transucción de señal comunes que acoplan la activación del receptor a la reorganización del citoesqueleto. El hipocampo constituye un modelo excelente para el estudio de esta cuestión. El desarrollo de sus proyecciones ha sido meticulosamente estudiado; se establecen de una forma estereotipadas y organizadas en un patrón laminar en el que cada proyección invade su lámina diana desde el inicio. Este hecho sugiere la participación de diversas moléculas de guía finamente reguladas que permitan el elevado refinamiento del sistema. Otra ventaja de este modelo es la cantidad métodos de cultivo disponibles y la existencia de multitud de estudios sobre el desarrollo neurítico del hipocampo in vitro (Cáceres et al., 1986; Lumsden y Davies, 1986; Frotscher y Heimrich, 1993; Craig y Banker, 1994; Chedotal et al., 1998). La Netrina-1 es una molécula de guía y DCC (Deleted in Colorectal Cancer) uno de sus receptores. Este sistema de señalización está implicado en la guía de axones y células en migración de distintas regiones del SN (Livesey, 1999). En esta Tesis se analiza la función del sistema Netrina-1/DCC en el desarrollo de las principales conexiones del hipocampo y la posible implicación de la proteína asociada a microtúbulos, MAP1B (Bloom et al., 1985), en los eventos disparados tras la activación del receptor que tienen como consecuencia la remodelación del citoesqueleto de la célula. Inicialmente DCC fue caracterizado como un supresor tumoral, relacionado con las fases finales de la tumorogénesis (Cho y Fearon, 1995). Este hecho y la expresión de Netrina-1 y DCC en el giro dentado adulto, región donde continúa la proliferación de progenitores durante toda la vida del individuo (Altman y Bayer, 1990), nos lleva a estudiar el posible papel de este sistema de señalización en la regulación de la neurogénesis en el giro dentado adulto.

Autor: CASTRO HERRANZ M. SONSOLES.
Año: 2002.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se han utilizado pineales de vaca de edades comprendidas entre 1 y 8 años. Las técnicas citoquímicas (hematoxolina, azul de toluidina, azul alcián PAS) e inmunocitoquímicas empleadas, han permitido estudiar a microscopía óptica la estructura, distribución de las calcificaciones pineales, así como la presencia en las mismas de inmunorreactividad frente a la calbindina, calmodulina, serotonina, vasopresina y somatostatina. En el caso de las dos primeras sustancias, la reacción apareció en pequeñas microcalcificaciones situadas en las proximidades de los vasos, entre estos y los pinealocitos. En ocasiones también se observó material reactivo tipo calbindina en el nucleo central de los acervuli. La respuesta en estas formaciones al kit TdT FagEL para la detección de restos de fragmentación nuclear fue negativa. Los antisueros frente a vimentina, GFAP y S-100, muestran la singular distribución de los elementos gliales en la parénquima pineal y las estrechas relaciones que mantienen tanto con las calcificaciones, rodeándolas y formando en torno a ellas una doble corona glial, como con los pinealocitos. Las diferencias cuantitativas que presenta la red glial en relación con la edad de los animales induce a pensar en el posible papel modulador que estas células pudieran ejercer sobre la actividad funcional de los pinealocitos. La utilización de un antisuero anti-melatonina, evidenció, tanto a microscopía óptica como electrónica, la existencia de inmunorreactividad en estructuras citoplasmáticas y nucleares de los pinealocitos.

Autor: MELENDEZ FERRO MIGUEL.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: En este trabajo hemos estudiado la distribución del ácido gamma-aminobutírico (GABA), el principal neurotransmisor inhibidor presente en el sistema nervioso central de los vertebrados, durante el desarrollo del sistema nervioso central de la lamprea del mar, y tambien en la etapa adulta. La inmunorreactividad a GABA(GABAir) aparece primero en el diencéfalo, y posteriormente en el telencéfalo y el mesencéfalo. En el telencéfalo, una banda de células fluido cerebroespinal contactantes (CSF-c) (septo) se extiende basalmente. Esta banda está separada de la principal banda CABAir telencefálica, localizada en el primordio del estriado-bulbos olfatorios, y que parece dar lugar a la mayoria de las neuronas del bulbo olfatorio y hemisferios telencefalicos. La primera señal de inmunorreactividad en el diencéfalo se observa en embriones, aunque el patron se establece en prolarvas, donde se observan seis grupos de neuronas GABAir: celulas CSF-c en la región hipotalámica (comisura postoptica-region tuberal, y un grupo de celulas GABAir en el tálamo ventral (rostral). En la región caudal se distinguen cuatro grupos de células no CSF-c: talamo dorsal (caudal), núcleo de la comisura posterior, tegmento pretectal dorsal,y nucleo del fasciculo longitudinal medial (NFLM). En el tegmento del pretecho y del mesencéfalo se distinguen celulas GABAir en el NFLM y asociadas al nucleo del nervio oculomotor y la tercera célula de Muller, respectivamente. El torus semicircularis y el núcleo retinópeto mesencefálico tambien presentan células GABAir. En el robemcéfalo las primeras celulas GABAir aparecen en embriones tardios en la placa basal del istmo, rombencéfalo caudal y medula espinal rostral. En prolarvas las celulas GABAir el rombencéfalo parecen estar distribuidas en dominios celulares restringidos espacialmente, que al final del periodo larvario forman cuatro columnas longitudinales GABAir (alar dorsal, alar ventral, tegmental dorsal y tegmental ventral). En la médula espinal solo se observan tres columnas longitudinales de células GABAir(dorsal, intermedia y ventral). En larvas de 30 mm de longitud se establece el patron de poblaciones GABAir, que posteriormente se observarán en adultos. Durante el desarrollo de la retina no se observan células GABAir , sino que las unicas estructuras inmunorreactivas son fibras pertenecientes al sistema centrifugo. Las primeras células ganglionares GABAir de la pineal se observan en larvas de 15-17 mm, mientras que fibras aferentes son las unicas estructuras GABAir presentes en el ganglio parapineal. En el estadio adulto, hemos observado células GABAir en los bulbos olfatorios (celulas periglomerulares en la capa glomerular, dos tipos de celulas GABAir en la capa celular interna, celulas CSF-c en la region ependimaria de los ventrículos olfatorios, y celulas bipolares entre las fibras del nervio olfatorio). En el telencéfalo propio, las células GABAir están presentes en el palio medial y lateral, septo, estriado y nucleo preoptico. En el diencéfalo, se observan células GABAir en el epitalamo, talamo dorsal y ventral, e hipotalamo. En el segmento pretectal, las neuronas GABAir se observan en el nucleo de la comisura posterior y en el NFLM. En el mesencéfalo, las neuronas GABAir se localizan en el trecho optico, torus semicirculares, y tegmento motor (nucleo retinopeto M5 de Schober,nucleo reticular mesencefalico, interneuronas del nucleo del nervio oculomotor y nucleo interpenducular). En el istmo rombencefalico, la inmunorreactividad a GABA se concentra en interneuronas asociadas al nucleo del nervio troclear y en celulas de la sustancia gris central. En la placa alar rombencefalica, las neuronas GABAir se encuentran en el área octavolateral (nucleos octavolaterales y octavomotores), raiz descendente del trigemino y en el lobulo del vago(nucleo del tracto solitario). En la placa basal rombencefalica, la inmunorreactividad a GABA se observa en interneuronas asociadas a los diferentes núcleos motores de los nervios craneales, interneuronas asociadas al nucleo del nervio abducente, y en pequeñas neuronas pertenecientes a la formación reticular. En la placa basal tambien se observan algunas celulas GABAir CSF-c. Por su parte, en la médula espinal se observan tres tipos de células GABAir, algunas de las cuales son de tipo CSF-c. Todos estos datos indican la amplia distribucion que este neurotransmisor presenta en el sistema nervioso central de un vertebrado primitivo, como es la lamprea de mar. La comparación de estos resultados con los observados en otros vertebrados sugiere que estos sistemas han aparecido muy temprano en la evolución, y que además han permanecido bien conservados entre los diferentes grupos de vertebrados.

Autor: PLAZA PÉREZ M. LUZ .
Año: 2001.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD .

Resumen: La Tesis Doctoral "Células de microglía NDPasa y lectina positivas durante la ontogenia del reptil Gallotia galloti. Comparación de la corteza telencefálico y el techo óptico", caracteriza morfológica y ultraestructuralmente los distintos tipos de células microgliales de la corteza telencefálica y del techo óptico del cerebro del lagarto Gallotia galloti durante el periodo embrionario (E31-40), perinatal y en ejemplares adultos (2 años). La población microglial se ha marcado histoquímicamente con la lectina del tomate (Lycopersicum sculentum) y con la NDPasa (nucleótido difosfatasa). Se ha estudiado la citoarquitectonia de la corteza telencefálica durante la ontogenia mediante la tinción de la Hematoxilina-eosina y se ha realizado el estudio cuantitativo de la población microglial y de células picnóticas. Los tipos de células microgliales detectadas en ambas zonas de estudio se catalogan como microglía ameboide, pseudopódica, dendrítica, primitiva ramificada y ramificada. La colonización del parénquima nervioso por las células microgliales en Gallotia galloti se observa en estadios embrionarios desde diferentes vías hechos que sugieren un origen mesodérmico. Las células de microglía se relacionan con vasos sanguíneos, meninges y células ependimales. En el techo óptico se observa una concomitancia cronológica y topográfica entre la aparición de células microgliales inmaduras y la presencia de núcleos picnóticos. La densidad celular microglial es mayor en la corteza telencefálica que en techo óptico durante todo el desarrollo. En cuanto a su distribución, la microglía adulta presenta un patrón de distribución específico en las zonas estudiadas. En síntesis, en este trabajo se caracterizan morfológica y ultraestructuralmente las células de la estirpe microglial con los marcadores, NDPasa y lectina del tomate en el telencéfalo y techo óptico del reptil Gallotia galloti. Los tipos de células microgliales que se describen son similares a los observados en otras especies aunque conserva aún células inmaduras en estadios de desarrollo avanzados y en ejemplares adultos. En relación a todo lo descrito anteriormente, este trabajo es fundamental y básico para los estudios de regeneración del SNC de vertebrados.

Autor: CASTRO CASTRO ANTONIO MANUEL.
Año: 2000.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En la presente tesis doctoral se ha estudiado la distribución de dos neuropéptidos, neuropéptido-tirosina (NPY) y tetrapéptido cardioexcitatorio de moluscos (FMRFamida), en el sistema nervioso de la trucha común (Salmonidae, Teleostei), no solo durante la etapa adulta sino también durante las distintas fases distinguibles dentro del cilo vital de ésta (fases embrionaria, larvaria, y postlarvaria). En este sentido se trata de un trabajo pionero al respecto en salmónidos, y de vertebrados en general, dada la escasa bibliografía existente, incidiendo en la presencia y evolución de dos sistemas peptidérgicos de amplia distribución en el sistema nervioso. Ambos péptidos parecen estar implicados en funciones cerebrales esenciales, ejerciendo tanto de neuromoduladores como de neurotransmisores en las señales químicas. El estudio del desarrollo de los sistemas NPY y FMRFamida en base a la inmunorreactividad presentada ha revelado la pronta aparición de ambos péptidos en el sistema nervioso de la trucha común. Los resultados obtendios demuestran que, salvo en el cerebelo, el NPY tiene una amplia distribución en el cerebro de la trucha común. Desde la etapa embrionaria, las distintas agrupaciones neuronales inmunorreactivas al NPY (NPY-ir) van haciendo su aparición en el cerebro de la trucha común en diferentes momentos de su desarrollo. Los primeros núcleos en aparecer son aquéllos localizados en la región telencefálica ventrolateral, hipotálamo rostral, tegmento mesencefálico dorsal (núcleo laminar) locus coeruleus, y rgiónvagal, y surgen claramente en los embriones de 10-12 mm de longitud. Asimismo se observan células NPY-ir en el saco vasculoso de embriones de 12 mm. Posteriormente se observan células NPY-ir en el techo óptico y habénula de embriones de 13-14 mm de longitud. Entrada la fase de alevín se pueden apreciar células NPY-ir en el ganglio del nervio terminal, retina, núcleo supracomisural del área ventral telencefálica y núcleo lateral del túber. Durante la fase adulta se observan neuronas NPY-ir en todas las poblaciones citadas, apreciándose no obstante un incremento en el número de células inmunorreactivas en algunas de éstas. La intervación por figras NPY-ir es especialmente notoria en el telencéfalo dorsal, hipotálamo, regiónistmal y complejo del núcleo del tracto solitario/área postrema. Las primeras neuronas inmunorreactivas ala FMRFamida (FMRF-ir) fueron observadas en la placoda olfativa de embriones de 8-9 mm de longitud, consituyendo el germen del ganglio del nervio terminal. Posteriormente surgen nuevas poblaciones FMRF-ir en el hipotálamo rostral, primordio del lóbulo hipotalámico, tegmento mesencefálico dorsal (núcleo lamianr) y locus coeruleus durante la fase embrionaria, y en la capa nuclear interna de la retina, núcleo lateral del área ventral telencefálica, y núcleo anterior del túber durante la etapa larvaria. Dada la distribución de ambos péptidos es posible que éstos se localicen en las poblaciones del ganglio del nervio terminal, células amacrinas de la capa nuclear interna de la retina, núcleo lateral del área ventral telencefálica, núcleos anterior y posterior del hipotálamo periventricular, núcleo laminar y locus coeruleus.

Autor: ORBEA DEL REY AMAIA.
Año: 2000.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se han caracterizado mediante técnicas citoquímicas, inmunocitoquímicas y morfométricas los peroxisonmas del teleósteo Mugil cephalus enfunción de diversas variables fisiológicas y ambientales. Por otra parte, se ha determinado la localización celular y subcelular de las enzimas antioxidantes catalasa, Cu, Zn-superóxido dismutasa, Mn-superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa en la glándula digestiva o hepatopáncreas de dos moluscos bivalvos (Mytilus galloprovincialis y Crassostrea sp) y un crustáceo (Carcinus maenas) y en el hígado de un teleósteo (Mugil Cephalus), poniendo especial énfasis en su posible localización en los peroxisomas. En un experimento realizado en el laboratorio se han expuesto mejillones por un máximo de tres semanas a diferenes tóxicos orgánicos (un hidrocarburo aromático policíclico y un éster del flalato), a un metal pesado así como a una mezcla de hidrocarburo y del metal y se estudiaron los efectos de estos tóciso sobre la estructura de los peroxisomas así como sobre la actividad y la expresión de las enzimas antioxidantes, obteniéndose resultados relevantes sobre la especificidad de los biomarcadores estudiados. En un estudio de campo en el estuario de la reserva de la Biosfera de Urdaibai, se muestrearon moluscos, crutáceos y peces en verano e invierno en varias estaciones del estuario. Adicionalmente se muestrearon peces en el estuario de Plentzia. En estos animales se estudió la estructura de los peroxisomas y la actividad y expresion de las enzimas antioxidantes en relación con factores estacionales y con la carga de contaminación orgánica que se midió mediante análisis químico. Por último, en base a los datos obtenidos en el capítulo anterior, se realizó un experimento de transplante de mejillones entre una estación del estuario de Urdaibai y otros tres estuarios cercanos que presentna diferentes niveles de polución. Los resultados de este estudio nos muestran el efecto que provoca un cambio en los niveles de biodisponibilidad de contaminantes orgánicos sobre los procesos de toma y depuración de xenobióticos y sobre la estructura de peroxisomas, y la actividad y expresión de las enzimas antioxidante en condicones de campo.

Autor: FUENTES SANTAMARÍA VERÓNICA.
Año: 2000.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La línea de hámsters GPG/Vall empleada en el desarrollo de este trabajo presenta crisis convulsivas audiógenas de origen genético. Esta crisis se desencadena con estímulos de 1-20 KHz de frecuencia y 60-80 dB de intensidad. Al ser un sonido el desencadenante de la crisi, la susceptibilidad a padecer estos episodios puede ser el resultado de una serie de alteraciones en el sistema auditivo de estos animales. Realizamos un análisis de los núcleos auditivos del hámster GPG/Vall y del hámster control para encontrar diferencias que pudieran explicar la génesis de esta crisis. Empleamos técnicas histoquímicas para visualizar los núcleos y tipos neuronales y técnicas inmunocitoquímicas para detectar la presencia de las proteínas ligadoras de calcio. Encontramos una alteración en las proteínas ligadoras de calcio observándose una pérdida de neuronas inmunopositivas que podrían explicar la desregulación del calcio intrecelular producida durante la crisis. Con el objetivo de estudiar la distribución de los neurotransmisores inhibidores GABA y glicina en el cerebro auditivo del hámster GPG/Vall realizamos inmunocitoquímica para estos neurotransmisores. No encontramos diferencias en la distribución cualitativa de GABA y glicina pero sí un menor neuropilo inmunopositivo en el hámster GPG/Vall y una disminución de neuronas GABA érgicas sobre todo en el CI. Para conocer que aminoácidos se encuentran alterados en el hámster GPG/Vall aplicamos la técnicas de cromatografía líquida de alta afinidad a muestras de cerebelo, tronco y colículos inferior y superior. Observamos una disminución de los aminoácidos excitadores Asp, Glu y Thr, pero principalmente del neurotransmisor inhibidor GABA. Esta mensor inhibición resultante podría contribuir al estado dehiperexcitación inherente al desencadenamiento de las crisis convulsiones. Numerosos estudios de lesión, farmacológicos y electrofisiológicos apuntan al colículo inferior como el núcleo auditivo en el que se desencadenan las crisis convulsivas audiogénicas. El análisis exhaustivo de este núcleo en el hámster GPG/Vall muestra una menor de neuronas inmunopositivas para calbindina y GABA, y una mayor densidad para parvalbúmina respecto al hámster control. Todas estas alteraciones podrían estar contribuyendo al desencadenamiento de las crisis convulsivas audiogénica del hámster GPG/Vall.

Autor: CARRERA AGUDO M.PILAR.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: U.A.M. FAC. CIENCIAS DPTO. BIOLOGIA.

Resumen: Durante años se han empleado diversas tecnicas citogeneticas para valorar el daño en el DNA producido por los agentes quimicos y fisicos. Una de las tecnicas más novedosas es la denominada Ensayo Cometa o Electroforesis de nucleos aislados en microgeles de agarosa. Esta metodologia fue descrita por primera vez por Singh en 1988 y consiste en estudiar el daño genomico en nucleos interfasicos. En esta Tesis se ha valorado la radiación ionizante (rayos y) y los agentes alquilantes (Etil-Metan-Sulfonato-EMS) como fuentes de daño de origen fisico y quimico, respectivamente, en condiciones in vivo, comparando material animal (Mus musculus) y vegetal (Allium cepa), y utilizando tejido sólido en ambos casos. Los objetivos propuestos en el desarrollo de esta Tesis han sido, por una parte, la puesta a punto de la tecnica para tejido solido procedente de ambos organismos. En segundo lugar, el estudio in vivo en material animal del efecto de la radiacion y en dos tipos celulares procedentes de distinto tejido (tejido hepatico y sangre circulante) y por ultimo la valoracion en material vegetal del efecto de la radiacion ionizante y los agentes alquilantes, y valorando el efecto del post-tratamiento con cafeina como agente antirreparador. Los resultados indican que los hepatocitos son más sensibles al daño por radiación y que los leucocitos. Paralelamente, en material vegetal, los núcleos manifiestan mas daño con radiación y que con EMS. Por otra parte, el post-tratamiento con cafeina confirma la acción antirreparadora que tiene, especialmente con el EMS, y la caracteristica de poner de manifiesto un daño que aparentemente no existe. Desde el punto de vista práctico, el Ensayo Cometa está siendo aplicado en numerosos campos de la biología, ensayos clinicos y genotoxicidad,en general, lo que la convierte en una tecnica muy valiosa.

Autor: LERIA MOSQUERA FRANCISCA.
Año: 1999.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS(C.S.I.C).

Resumen: Se abrodan métodos de fijación basados en la tecnologia de las microondas. Se ha utilizado un horno de microondas especialmente modificado conel que se han conseguido fijaciones en las que la preservación estructural es equivalente a las obtenidas en las fijaciones convencionales irradiando las muestras durante 10 min a 900W, en pulsos de 37 sg separados por pausas de 7 sg(automático a 750 W). Se han empleado otros dispositivos de irradiación, los bancos de microondas, con potencias de 5 W, en los que las ondas son guiadas para atravesar la muestra obteniéndose resultados satisfactorios utilizando PFA al 4% o al 1% durante 20 min. Para la preservación de muestras biológicas se ha utilizado la tecnología del subenfriamiento con la que se consigue mantenerlas muestras por debajo de 0º C sin congelación gracias a su emulsión en una fase oleosa, transformándose en pequeñas gotitas que evitan la nucleacion del hielo. Esta técnica ha sido utilizada sobre muestras fijadas (nucleos aprotoplastos) que permanecieron solo enfriados de 1 a 6 semanas manteniendo sus características estructurales y antigénicas. Las experiencias llevadas a cabo sobre núcleos sin fijar demuestran que estos mantienen sus características estructurales, ultraestructurales, antigénicas y funcionales después del subenfriamiento.

Autor: CARRANCO GALAN RAUL .
Año: 1999.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: I.R.N.A.S(CSIC).

Resumen: El gen Ha hsp17.6 G1 es el único gen shsp vegetal de clase I conocido que no se transcribe en respuesta a choque térmico pero sí lo hace durante la fase de desecación de la embriogénesis. El gen Ha hsp17.6 G1 posee un HSE, muy imperfecto y distal, que es necesario, aunque no suficiente, para su expresión durante la fase de deseación del embrión. Los HSFs implicados en la regulación de este gen deben tener una especificidad de secuencia distinta de los HSFs responsables de la respuesta a choque termico o unirse a este promotor de un modo específico de embriones. En la activación del gen Ha hsp17.6 G1 es necesaria la acción sinérgica de los HSFs con otros factores transcripcionales, algunos de los cuales se unen a elementos en cis ubicados entre las posiciones -533 y -126 de su promotor. La región del promotor del gen Ha hsp17.6 G1 situada entre las posiciones -1486 y -533 contiene elementos reguladores negativos específicos de embriones.

Autor: DELMANI FATIMA-AZZAHRA.
Año: 1999.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: En el presente trabajo, hemos utilizado un completo de rutenio, el RAP, del que se conoce su capacidad para unirse al DNA y provoca cambios en su conformación. Se ha establecido una concentracion de trabajo, no , que ha interferido con dos procesos de crecimiento y proliferacion de celulas tumorales en cultivo. Establecida dicha concentracion hemos realizado estudios sobre las posibles modificaciones inducidas por el RAP sobre la replicacion, asi como la valoracion del posible diseño en el DNA inducido por el complejo, luego, nos propusimos a investigar las posibles alteraciones sobre la localizacion de protenias especificos del nucleo particularmente, el LIBF que incrementa su localizacion extracelular como consecuencia de las modificaciones inducidas en el DNA unido a RAP.

Autor: PEREZ ALVAREZ SYLVIA EVA.
Año: 1998.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En este trabajo hemos analizado la distribución de la colina acetiltransferasa (ChAT) y la acetilcolinesterasa (AChE) en el encéfalo de trucha adulta y en desarrollo. Para ello hemos utilizado dos especies de trucha, la común (Salmo trutta fario) y la arco iris (Oncorhynchus mykiss). De la trucha común hemos empleado ejemplares en diferentes estadíos de desarrollo, desde embriones de 5 mm hasta adultos cuyas longitudes oscilaban entre 20 y 30 cm, mientras que de la trucha arco iris sólo hemos utilizado individuos adultos. El patrón de distribución de la inmunorreactividad a la colina acetiltransferasa (ChAT-ir) que hemos observado en la trucha adulta es básicamente similar a la descrita en otros peces teleósteos, sin embargo hemos detectado la presencia de ChAT en una serie de agrupaciones localizadas en el área preóptica, habénulas, hipotálamo y gris central que no han sido descritas en otros teleósteos. En la mayoría de estas agrupaciones también hemos detectado una intensa actividad a la AChE, por lo que han sido consideradas colinérgicas estrictas, ya que presentan los dos enzimas que intervienen en el metabolismo de la acetilcolina. Sin embargo, existe un gran número de agrupaciones en las que sólo hemos detectado actividad acetilcolinesterasa. stas no han sido consideradas como colinérgicas, pues no hemos detectado la presencia de la colina acetiltransferasa, condición necesaria para la síntesis de la acetilcolina. Durante el desarrollo las primeras células ChAT y AChE positivas fueron detectadas en embriones de 7 mm y se localizan en el bulbo raquídeo y en la médula espinal. Los grupos más tempranos en los que hemos detectado positividad a la ChAT se corresponden con los núcleos motores, y los más tardíos se localizan en el sistema istmotectal, poblaciones parvicelulares del área preóptica, sistema habénulo interpeduncular, telencéfalo, tálamo y, sobre todo en los sistemas neurosecretores hipotalámicos. En alevines la distribución de células ChAT-ir es muy similar a la de la etapa adulta, mientras que el número de agrupaciones AChE positivas representa la mitad de las observadas en el adulto. En los juveniles hemos detectado por primera vez células ChAT-ir en el núcleo anterior del túber, núcleo preóptico magnocelular y en el núcleo accesorio del órgano paraventricular, en los cuales no ha sido detectada actividad AChE en este estadío, pero sí en otras agrupaciones del diencéfalo, mesencéfalo y bulbo raquídeo. En general, sólo en la etapa embrionaria hemos observado una buena correspondencia entre el patrón de distribución de las células positivas a la AChE y a la ChAT, pero no en estadíos posteriores.

Autor: LEIS GONZALEZ OLGA.
Año: 1998.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Las células de Paneth se encuentran en el fondo de las glándulas de Lieberkuhn del intestino de mamíferos. Su función no es bien conocida, aunque se ha descrito que las células de Paneth poseen un contenido heterogéneo que apunta hacia funciones muy distintas: desde la secreción de agentes antibacterianos, hasta el posible control de procesos de división en las criptas intestinales. A esto habría que añadir su posible relación con las células caliciformes. Por esto planteamos los siguientes puntos de trabajo: 1) Caracterizar y localizar ultraestructuralmente la composición oligosacarídica de las células de Paneth utilizando lectinas combinadas con técnicas químicas y enzimáticas de deglicosilación. 2) Caracterizar y localizar ultraestructuralmente los "cores" proteicos de las glicoproteínas, mediante la utilización de anticuerpos anti-mucinas. 3) Caracterizar y localizar ultraestructuralmente diferentes factores de crecimiento y sus receptores en las células de Paneth. Para ello se utilizó anticuerpos anti-TGF-alfa, anti-EGF y anti-EGFR. 4) Caracterización del proceso de desarrollo post-natal de las células de Paneth, referido a la aparición de las moléculas identificadas previamente en adultos. Tras analizar los resultados obtenidos se obtienen las siguientes conclusiones: 1) Las células de Paneth secretan glicoproteínas con cadenas oligosacarídicas de tipo N y de tipo O. La presencia de cadenas oligosacarídicas unidas por enlace O-glicosídico, típico de células caliciformes, es un dato que permite hipotetizar sobre el origen cómun de ambas células. 2) En las glándulas intestinales se encuentran "células intermedias" con gránulos de secreción semejantes a las células caliciformes, pero con una pequeña región electrodensa que recuerda a las células de Paneth. En esta región se localiza la lisozima, componente característico de las células de Paneth. Este hecho permite relacionar las células de Paneth con las "células intermedias", y por extensión con las células caliciformes. 3) Las células de Paneth secretan factores de crecimiento como TGF-alfa y EGF, así como su receptor. De este modo, estas células podrían estar implicadas en el control de la proliferación celular. 4) Los gránulos de secreción de las células de Paneth presentan una estructura bifásica, no sólo diferente en cuanto a sus características morfológicas sino también en cuanto a su composición. En la región electrolúcida se encuentran oligosacáridos y proteínas no presentes en la zona electrodensa, y viceversa. 5) Durante el desarrollo ontogenético de la rata, las células de Paneth alcanzan una composición similar a la del adulto alrededor de los 12 días de edad. Cuando se produce el cambio alimentario en la etapa de destete, no se observa modificación en la composición de las células de Paneth.

Autor: VAZQUEZ MARTINEZ RAFAEL J..
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se han utilizado varias aproximaciones experimentales con el fin de profundizar en el conocimiento de la heterogeneidad celulas de las células melanotropas del lóbulo intermedio de la hipófisis de Rana ridibunda. Mediante dichas aproximaciones, se ha demostrado que la heterogeneidad funcional de las subpoblaciones de células melanotropas no es un fenómeno estático, sino que se trata de un proceso dinámico. En este sentido, las subpoblaciones constituyen estados de actividad distintos e interconvertibles de un mismo tipo celular, la célula melanotropa. Además, se ha propuesto que la forma que toma dicho proceso de interconversión es la de un ciclo secretor mediante el cual las células melanotropas adquieren diferente estados de actividad celular que van acompañados de una serie de atributos morfofuncionales distintivos y que se corresponden con las subpoblaciones. Además, se ha sugerido que el hipotálamo, mediante la secreción de factores estimuladores e inhibidores, regula la heterogeneidad morfofuncional de las células melanotropas de tal manera que dicha regulación dicta la dinámica del ciclo secrtor en función de los requerimientos hormonales impuestos por las condiciones del entorno.

Autor: MENENDEZ GARCIA M. PILAR .
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se plantea el análisis sistemático de la expresión de los Organizadores Nucelolares, domostrada por reacción argirófila (AgNORs) en diferentes tejidos de rata (estómago, intestino, parótida, hígado, lengua, testículo, conducto deferente, vesícula seminal, glándula suprarrenal, músculo estriado de la pared abdominal y cartílago), aplicando criterios cualitativos y cuantitativos, estudiando simultáneamente la actividad proliferativa, demostrada por la incorporación de BrdU, a fin de esclarecer la posible relación entre las variaciones en la expresión de los organizadores nucleolares y la actividad proliferativa o la presumiblemente diferente actividad metabólica, incluyendo a tal efecto un grupo experimental en el se sometió a los animales a un periodo de privación alimentaria aguda (3 días). Se concluye que la expresión de los AgNORs es particular y específica para cada tejido, no existiendo un criterio universal de cuantificación e interpretación de resultados que pueda ser aplicado a todos los tejidos orgánicos. Las variaciones en la expresión de los AgNORs pueden reflejar tanto modificaciones de la actividad proliferativa como variaciones de la actividad funcional. Sobre la base de los resultados obtenidos no se puede demostrar relación entre la expresión de los AgNORs y el origen embrionario de los diferentes tejidos, al menos cuando se analizan parámetros globalizadores como son el área media de AgNORs por núcleo o el tamaño medio de partícula. Las diferencias en la expresión de los AgNORs entre los diferentes tejidos se mantienen incluso cuando hay grandes variaciones en el entorno funcional como puede ser la privación alimentaria aguda. En algunas ocasiones la aparentemente alta expresión de AgNORs puede reflejar la dispersión del material reactivo como consecuencia de la desorganización nucleolar. Tras el periodo de privación alimentaria y analizando los mismos tejidos, no se han observado modificaciones cuantitativas de relevancia en la expresión de los AgNORs, posiblemente porque la respuesta a la privación alimentaria a corto plazo es escasa..

Autor: NAVARRO ROLDÁN FRANCISCO JUAN.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La membrana plasmática posee un sistema redox en el que desempeñan un importante papel las ubiquinonas, estrechamente relacionadas con las funciones antioxidantes. En el trabajo se ha comprobado que estas ubiquinonas intervienen en el transporte transmembrana de la membrana plasmática, donde debe existir un componente enzimático encargado de reducir a dichas ubiquinonas, ya que su forma predominante es el estado reducido. Así abordamos la purificación de dicho componente enzimático, obteniendo una proteína de 34 kDa, que resultó ser una citocromo b5 reductasa. Esta enzima se caracterizó bioquímicamente, y se obtuvieron anticuerpos policlonales contra ella. La enzima (p34) resultó ser capaz de reducir al CoQ en un sistema reconstituido de liposomas, a partir del NADH. De esta forma aparece como responsable de mantener la capacidad antioxidante en el interior de la membrana. Para comprobar si realmente ejerce dicho papel "in vivo" decidimos emplear sistemas carentes de antioxidantes exógenos que pudiesen enmascarar el verdadero efecto de la p34. Estos sistemas consistieron en eliminar la vitamina E y el selenio de la dieta de un grupo de ratas, al que se comparó posteriormente con otro grupo control (alimentado con vitamina E y selenio). Así comprobamos que en las membranas plasmáticas de las ratas deficitarias en vit. E y si se producia un incremento muy importante en los niveles de CoQ, como respuesta adaptativa ante el sometimiento del estrés oxidativo inducido por la falta de vitamina E y Se. Mediante el uso de anticuerpos antes citados se comprobó que también se incrementaban los niveles de la citocromo b5 reductasa en estas membranas deficitaris. Ambos hechos contribuyeron a aportar una protección antioxidante a las membranas deficitarias, mediada por el NADH y el NADPH. Sin embargo la p34 no puede usar al NADPH como aceptor del sistema, luego deducimos que otra enzima debiera estar implicada en la reducción del CoQ en estas membranas. Así se comprobó que la única CoQ reductasa presente en dichas membranas fue la DT-diaforasa, que se expresó como respuesta al estrés oxidativo, uniendose a las membranas deficitarias, en las que reduce al CoQ. Ante todos estos resultados, llegamos a la conclusión de que el mecanismo de reducción del CoQ en la membrana plasmática, en el que forman parte esencial la p34, y la DT-diaforasa, es un mecanismo inducible ante situaciones de estrés oxidativo, necesario para mantener el poder antioxidante en la membrana, ya que en ausencia de antioxidantes exógenos, el CoQ asume el papel de principal agente antioxidante.

Autor: RAMÍREZ GUTIERREZ JOSE LUIS.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral, se ha caracterizado la estimulación de la secreción de la hormona del crecimiento (GH) ejercida por la somatostatina (SRIF) sobre dos subpoblaciones de células somatotropas porcinas, aisladas por centrifugación en un gradiente de densidad de Percoll. Con dicho estudio se ha demostrado que el SRIF ejerce un efecto específico y directo sobre las somatotropas de cerdo, actuando como un verdadero estimulador sw la secreción de GH. Este efecto, observado inicialmente en las somatotropas de alta densidad, fue asimismo demostrado en toda la población de somatotropas a dosis muy bajas del péptido, surgiriendo que este factor puede ejercer funciones a través de distintos subtipos de receptores y/o proteínas G acopladas a los mismos. Por otra parte, se han caracterizado las rutas de segundos mensajeros intracelulares implicadas en la estimulación de la secreción de GH porcina ejercida por la somatostatina y el GRF. Se ha confirmado que el GRF incrementa la secreción de GH principalmente a través de la ruta denilato ciclasa-AMPc-calcio extracelular en ambas subpoblaciones, con la participación de la ruta de la PLC-fosfátidos de inositol-calcio intracelular en las somatotropas de baja densidad. Por su parte, la estimulación de la secreción de GH ejercida por la somatostatina en ambas subpoblaciones se realiza a través de mecanismos dependientes de AMPc y, aparentemente, independientes de otros segundos mensajeros.

Autor: ANTONIO GONZALEZ CARMEN.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA .

Resumen: EN ESTE ESTUDIO SE HAN ANALIZADO DATOS REFERENTES A LA ESTRUCTURA COMPOSICION Y EVOLUCION DE UNA SERIE DE ESTRUCTURAS CROMOSOMICAS COMO SON LOS CINETOCOROS, EJES CROMATIDICOS, TELOCOROS Y BANDA DE CONEXION A LO LARGO DE LA MEIOSIS. PARA ELLO SE HAN UTILIZADO TECNICAS CONVENCIONALES, CITOQUIMICAS E INMUNOCITOQUIMICAS TANTO EN MICROSCOPIA OPTICA COMO ELECTRONICA. LOS RESULTADOS OBTENIDOS ACERCA DE LA COMPOSICION DE ESTAS ESTRUCTURAS MUESTRAN LA PRESENCIA DE FOSFOEPITOPOS EN EL CINETOCORO ASI COMO EN POSICIONES SIMILARES A LAS OCUPADAS POR LOS EJES CROMATIDICOS AUNQUE NO ESTAN PRESENTES EN ELLOS. EN FUNCION A LOS DATOS ESTRUCTURALES SE PROPONE UN MODELO DE DISPOSICION DE LOS EJES CROMATIDICOS EN EL INTERIOR DEL BIVALENTE Y DE SU EVOLUCION DURANTE LA SEGREGACION DE LOS CROMOSOMAS HOMOLOGOS, ADEMAS DE OTRO MODELO EXPLICATIVO DE LA ORGANIZACION DE LA REGION TELOMERICA. POR ULTIMO SE PROPONE LA IMPLICACION DE FOSFOEPITOPOS EN EL MANTENIMIENTO Y ELIMINACION DE LA COHESIVIDAD BRAQUIAL ASI COMO DE ESTOS Y LA BANDA DE CONEXION EN LA COHESIVIDAD CENTROMERICA.

Autor: ARLUCEA JAUREGUIZAR JON.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CONCEPTOS Y METODOS DE BIOLOGIA CELULAR CON IMPLICACIONES MEDICAS.

Resumen: EN ESTE PROYECTO DE TESIS DOCTORAL HEMOS INTENTADO CONOCER MEJOR LA ESTRUCTURA DE LA ENVOLTURA NUCLEAR Y DE LOS COMPLEJOS DE PORO NUCLEARES Y SU RELACION CON LOS DEMAS COMPONENTES CELULARES Y NUCLEARES A LA VISTA DE LA GRAN CANTIDAD DE INFORMACION MOLECULAR QUE SE HA OBTENIDO RECIENTEMENTE Y DE LA INEXISTENCIA DE UNA UBICACION DE ESTAS MOLECULAS EN UN MODELO DEL COMPLEJO DE PORO AMPLIAMENTE ACEPTADO. DECIDIMOS PARA ELLO UTILIZAR DISTINTAS TECNICAS DE PREPARACION DE MUESTRAS EN MICROSCOPIA ELECTRONICA PARA COMPARAR SUS RESULTADOS CON EL FIN DE DETERMINAR LAS CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES MAS REPRODUCIBLES; EVITANDO, EN LA MEDIDA DE LO POSIBLE, LA INTRODUCCION DE NUEVOS ARTEFACTOS QUE SON INHERENTES A LAS PROPIAS TECNICAS MICROSCOPICAS. ADEMAS, LLEVAMOS A CABO ENSAYOS INMUNOCITOQUIMICOS PARA INTENTAR DETERMINAR LA RELACION DEL COMPLEJO DE PORO CON LAS REGIONES VECINAS Y SU POSIBLE IMPLICACION EN LA ORGANIZACION FUNCIONAL DE LA CROMATINA.