CULTIVO CELULAR, 2

Autor: TINTO GARCIA-MORENO ALBERT.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNVIERSITAT AUTONOMA DE BARCELONA.

Resumen: En este trabajo se aborda el problema de la optimización de cultivos in vitro de células animales desde dos perspectivas diferentes. De un lado se intenta aplicar una estrategia de cultivo en perfusión, en la que las celulas están retenidas en el interior de el reactor mediante un sistema de inmovilización y se cultivan con un aporte constante de medio, de manera que se garantiza la presencia de los diferentes nutrientes esenciales a unas concentraciones adecuadas para la célula y se consigue eliminar los diferentes subproductos celulares que pueden resultar tóxicos,consiguiendo así unas condiciones lo más parecidas posible a las que tendría la celula in vivo. Para llevar a cabo esta labor se ha seleccionado inicialmente un sistema de inmovilización con unas caracteristicas fisicas adecuadas y que no fuera tóxico para las células, las microcápsulas de alginato cálcico, y seguidamente se ha implementado un sistema de cultivo en perfusión en un reactor de lecho fluidizado. A partir de los resultados obtenidos se ha podido constatar que esta estrategia de cultivo permite obtener elevadas concentraciones celulares durante periodos de tiempo superiores a un mes. De todas maneras se ha podido observar que una vez se alcanza una determinada concentración celular en el interior de las microcápsulas, las células empiezan a morir por la presencia de concentraciones excesivamente bajas de alguno de los nutrientes del medio, concretamente de alguna proteína de elevado peso molecular presente en el suplemento de suero fetal bovino, que difunde demasiado lentamente a través de la pared de la microcápsula. Este hecho planteó la necesidad de iniciar una segunda parte del trabajo donde se intentaba conocer los mecanismos que llevan a las célula a entrar en la fase de muerte celular. En esta segunda parte del trabajo se ha podido determinar que las células mueren por apoptosis(muerte celular programada) en condiciones de limitación de alguno de los nutrientes esenciales del medio de cultivo: glucosa, glutamina o suero. También se ha podido conocer, a grandes trechos, de que manera estos factores inductores interactúan con los diferentes mecanismos intracelulares apoptóticos y cuales son los principales genes que intervienen en la muerte por apoptosis en el hibridoma KB26.5. Concretamente se ha podido determinar la importancia de la mitocondria y de la vía de las caspasas, especialmente la caspasa 9, en el proceso de ejecución de la apoptosis en la línea celular estudiada. Estos resultados han permitido sugerir cuales pueden ser las mejores dianas intracelulares que deberían ser modificadas genéticamente para conseguir inhibir o al menos retardar la aparición de apopotosis en los cultimos del hibridoma KB26.5. La aplicación de este tipo de medidas puede ser de enorme interés en un futuro, ya que contribuye, a retardar la muerte por apoptosis de los cultivos, aumentando así la productividad del proceso.

Autor: PENG DACHENG.
Año: 1998.
Universidad: NAVARRA .
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Los adenovirus asociados (AAV) son vectores atractivos para la terapia génica. En este trabajo hemos investigado la eficiencia de los AAV para transducir in vivo e in vitro células de carcinoma hepatocelular (HCC) y el uso de diferentes estrategias para aumentar la transducción de HCC. El pre-tratamiento de HCC con irradiación gamma, con el inhibidor de la topoisomerasa denominado Etopósido o la infección con adenovirus mejoró significativamente la transducción de células in vitro. Esta mejora se debió a la conversión de la cadena simple del ADN del AAV a cadena doble en las células infectadas. En ratones inmunodeprimidos con tumores subcutáneos de HCC se observó la incapacidad de AAV para transducir las células tumorales. Sin embargo, la administración conjunta de AAV junto con adenovirus resultó en una eficiente transducción en los lugares de la inyección. La radiación de los tumores subcutáneos con 1800 rad aumentó hasta un 30% la transducción mediada por AAV. La infusión continuada de Etopósido a ratas Buffalo con HCC dio lugar a la eficiente transducción de tumores más pequeños de 2 mm de diámetro. El tratamiento con Etopósido también aumentó la expresión del transgen en el hígado no tumoral. La determinación de las concentraciones de Etopósido en tejido hepático reveló una alta concentración del fármaco en el hígado no tumoral y un casi indetectable nivel en tumores grandes. Nuestros resultados indican que la radioterapia no sólo incrementa la transferencia génica mediada por AAV en las células tumorales sino también aumenta la distribución del vector en el interior del tumor. El Etopósido mejora la transducción de células de HCC in vitro y sólo es eficaz in vivo en tumores muy pequeños. Una barrera física y/o bioquímica podría dificultar la entrada de agentes quimioterápicos en el tumor y por lo tanto podría ser la causa de la ineficacia del Etopósido en neoplasias hepáticas.

Autor: CALLE PATINO YOLANDA.
Año: 1998.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se ha demostrado en estudios realizados independientemente que la inhibición de la síntesis de N-glicoproteínas o bien el desequilibrio en el mantenimiento de los niveles de GSH intracelular producen en las células tumorales una disminución en la capacidad de adhesión a diferentes soportes, una inhibición de la proliferación celular y de la síntesis de DNA, así como la inducción del proceso de muerte celular por apoptosis. En el presente trabajo, hemos estudiado las diferencias en el perfil de glicosilación entre las líneas de rabdomiosarcoma de rata S4MH. con elevada capacidad metastática, y la variante celular menos metastática F21. Las células S4MH presentan en su superficie un número mayor de ramificaciones betra 1-6, de residuos de fucosa y un mayor grado de sialización y/o expresión de oligosacáridos de quitobiosa, unidos por enlace N-glicosídico a las glicoproteínas de membrana implicadas en la regulación de la proliferación celular y la capacidad de adhesión de las células tumorales al endotelio vascular y a la matriz extracelular. De esta forma, confieren a las células S4MH una tasa proliferativa mayor y una capacidad de adhesión al endotelio vascular superior a la de las células F21. Esto explica la disminución de la capacidad tumorigénica y metastática de las células tumorales al inhibir el procesado de N-glicanos por medio del tratamiento con tunicamicina. Se han estudiado, además, las causas que inducen la disminución en la capacidad de adhesión de las células tumorales S4MH a las celulas endomeliales y a la matriz extracelular, así como en su capacidad proliferativa debido al tratamiento con tunicamicina. Según nuestros resultados la disminución en la capacidad de adhesión de las células tumorales S4MH sobre el endotelio vascular inducida tras la inhibición de la síntesis de N-glicanos es causada por a) la reduccion en la presentación de carbohidratos de membrana reconocidos por las adresinas endoteliales, entre los que se encuentran las ramificaciones beta1-6. los residuos de fucosa y NeuAc y/o los oligosacáridos de quitobiosa: b) la depleción de los niveles de GSH intracelular, lo cual provoca una redistribución en la membrana plasmática de las glicoproteínas implicadas en la adhesión de las células tumorales S4MH reconocidas por las lectinas WGA y PHA-L, impidiendo su focalización para la formación de puntos de anclaje. Por otro lado, en las células S4MH se produce de forma paralela a la pérdida de N-glicanos en la superficie celular, la depleción de los niveles de GSH y un incremento en el porcentaje de células apoptóticas en los cultivos. La depleción de los niveles de GSH por sí sola causada por el tratamiento con betaSO (inhibidor especifico de la síntesis de GSH) induce la muerte celular por apoptosis en los cultivos tratados. Según estos resultados, una de las consecuencias de la depleción de los niveles de GSH causadas por la inhibición de la síntesis de N-glicanos por medio del tratamiento de las células S4MH con tunicamicina es la inducción de la muerte celular por apoptosis.

Autor: BARROSO RODRIGUEZ M. PUERTO.
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Las células en cultivo requieren los factores de crecimiento proporcionados por le suero para su supervivencia. La retirada del suero del medio de cultivo induce estrés oxidativo provocando peroxidación de los lípidos de las membranas y la activación de la apoptosis. El sistema antioxidante de la membrana plasmática constituido por el coenzima Q10, el alfa-tocoferol y elascorbato, previene la apoptosis inducida por estrés oxidativo e impide los daños de peroxidación lipídica en las membranas biológicas. Dicho sistema actua independientemente de Bcl-2 representando la primera barrera defensiva de la célula. Solo cuando este sistema se agota es necesaria la intervención de Bcl-2. El CoQ10 es la molécula reguladora del sistema que mantiene en óoptimos niveles al alfa-tocoferol y al ascorbato y bloquea la acumulación de ceramidas impidiendo la transducción de las señales de muerte vía ceramidas. La correlación entre los contenidos de CoQ10 y Bcl-2 sugiere la implicación de la proteína Bc1-2 en el transporte de CoQ10 hasta la membrana plasmática en condiciones de estrés oxidativo, renovando la concentración de CoQ10 en dicha membrana.

Autor: CAPO MARTI MIGUEL.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Se realiza un estudio de bioindicadores y biomonitores, y una puesta a punto de los cultivos celulares, tanto neuronales como astrocitarios. Se hace uso de tres modelos de tóxicos; Metilmercurio (Me-Hg), Tolueno y , 1 - iminodipropionitrilo (IDPN) que actúan sobre dichos cultivos, valorándose el daño celular mediante el uso de biomarcadores celulares, neuronas, Acetilcolinesterasa positivas (AChE+) y astrocitos Proteína Gliofibrilar cida positivos (GDAP+). Por la acción de los tóxicos se detecta un efecto de colinomimesis, producida tanto por el Me-Hg como por el IDPN, igualmente se observa un efecto de gliosis producido por el Tolueno. En los cálculos de la Dosis inhibitoria 50 (DI50) se observa una actividad parecida del Me-Hg y del IDPN sobre neuronas, y por cálculo del efecto del Tolueno y del IDPN sobre astrocitos, éstos son más resistentes que las neuronas.#

Autor: AYMERICH SOLER M. SOLEDAD.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: Hemos estudiado la expresión de la sintasa inducible de óxido nítrico en los monocitos humanos de pacientes con distintas enfermedades autoinmunes. Se detectó una gran inducción de esta enzima en monocitos de pacientes con esclerosis múltiple y la enfermedad de Graves. Mediante análisis inmunofenotípico de leucocitos de sangre periférica de pacientes con esclerosis múltiple, se observó que los monocitos presentaban un estado de activación y diferenciación mayor al encontrado en los donantes sanos. Precisamente la iNOS se encontró en estas subpoblaciones de monocitos maduros y activados. El óxido nítrico producido los monocitos parece tener un efecto regulador sobre la expresión de HLA-DR y la producción de TNFa. Estos resultados sugieren que la iNOS de los monocitos desempeña un papel en la patogénesis de la esclerosis múltiple y posiblemente en otras enfermedades autoinmunes. Por otro lado, hemos podido inducir la expresión de la iNOS con b-endorfina, un neuropéptido liberado en situaciones de estrés. La importancia de esta observación reside en que se puede conectar el estrés con la autoinmunidad a través de la iNOS.

Autor: FLORES SANABRIA M. JOSE.
Año: 1997.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR .

Resumen: Tanto los organismos procarióticos como los eucarióticos son capaces de regular sus mecanismos de defensa, de manera que existen sistemas inducibles de reparación que se activan en situaciones de estrés. Esta protección puede ser modulada, hasta cierto punto, exógenamente, bien activando de algún modo la propia maquinaria de reparación celular (Respuesta Adaptativa) o bien proporcionando a la célula determinadas enzimas implicadas en dicha reparación (ligasas, por ejemplo). Los objetivos del presente trabajo han sido comprobar la existencia de la respuesta adaptativa a la radiación ionizante en linfocitos humanos en GO, así como en linfocitos bovinos y de conejo estimulados, y por otro lado, comprobar si la ligasa del fago T4 es capaz de jugar un papel en la reparación del daño producido por la bleomicina, tanto en fibroblastos de hámster como en linfocitos humanos en GO (no estimulados). Los resultados obtenidos no muestran que la respuesta adaptativa se puede inducir en los linfocitos en cultivo de los diferentes mamíferos estudiados, y que la ligasa de T4 puede cooperar con la maquinaria de reparación en células tanto proliferativas como en estado de quiescencia, para reparar, al menos en parte, el daño residual normalmente no reparable por la propia maquinaria celular.

Autor: GARCIA RODRIGUEZ ARMANDO.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA FUNCIONAL.

Resumen: Las neuronas granulares de cerebelo de rata fueron utilizadas en este trabajo para evaluar el contenido de toxinas paralíticas, amnésicas y diarreicas en bivalvos marinos comestibles. La concentración de toxina en extractos de moluscos se calculó a partir de las curvas de toxicidad, que expresan la relación entre el contenido de toxina en el medio de cultivo y la supervivencia neuronal. Los resultados se compararon con datos obtenidos por bioensayo en ratón y HPLC, observándose una alta correlación en la mayoría de los casos. El uso de antagonistas específicos de los receptores sobre los que actúan algunas de las toxinas, demostró ser útil en la identificación de los grupos individuales de toxinas y confirmó la conveniencia del método para la detección de compuestos tóxicos marinos con diferentes mecanismos de acción. En este trabajo se demuestra además que la neurotoxicidad inducida por el ácido okadaico (OKA) en las neuronas cerebelares de rata implica la fragmentación del ADN características de la apoptosis y depende tanto de la síntesis de proteínas, como de la inhibición de proteín fosfatasas, fundamentalmente de la 2A. Se estudió el papel protector de diferentes agentes neurotróficos, de la fosforilación de proteínas por proteín quinasa C (PKC), así como de la concentración de calcio intracelular y extracelular ante la toxicidad por OKA. Dicha toxicidad fue retrasada inhibiendo la PKC o aumentando la concentración de calcio intracelular y totalmente prevenida con el factor de crecimiento IGF-1. Las neurotrofinas NT-3 y BDNF no presentaron ningún efecto protector ante la neurotoxicidad apoptótica inducida por OKA, que fue además potenciada por la reducción de la concentración de calcio extracelular. La inyección intraperitoneal de extractos de mejillón contaminados con OKA provocó un daño selectivo en algunos de los tejidos cercanos al sitio de la inyección, mientras que no se observaron daños en el cerebelo.

Autor: JARDI RIPOLL MERCE.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: Se ha revisado el papel regulador de los receptores de la fibrinolisis sobre la activación proteolítica pericelular. Se ha optimizado un método para obtener anticuerpos monoclonales contra distintas proteinas del sistema fibrinolítico. Se ha establecido el patrón de expresión del receptor de la urokinasa (uPAR) en células de sangre periférica, en líneas celulares leucémicas y varias leucosis agudas. La importancia funcional de los receptores de la fibrinolisis, junto al factor tisular (TF) (receptor que pone en marcha el proceso coagulativo) han sido explorados en procesos agudos y correlacionados con las complicaciones trombohemorrágicas. Se ha comprobado que la unión del plasminógeno (Plg.) y el activador tisular del Plg (tPA) a la superficie celular promueve la generación de plasmina pericelular, se han caracterizado las regiones de las moléculas de Plg y del tPA responsables de este efecto catalítico celular, y se ha constatado que la generación de plasmina pericelular es regulada fundamentalmente mediante la modulación de la expresión del receptor del Plg.

Autor: MULERO MENDEZ VICTORIANO.
Año: 1997.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR DE PECES TELEOSTEOS.

Resumen: Se estudia el efecto inmunomodulador de dos sustancias naturales (vitaminas C y E), una sustancia sintética (levamisol) y una sustancia endógena (citocina) sobre la respuesta inmunitaria del teleósteo marino dorada (Sparus aurata L.). Los resultados obtenidos indican que las vitaminas C y E son capaces de modular las principales funciones de los fagocitos de dorada (granulocitos acidófilos y monocito/macrófagos), y que existe una interacción sinérgica entre ambas. En cuanto al levamisol, los resultados ponen de manifiesto que esta sustancia estimula tanto "in vitro" como "in vivo" la respuesta inmunitaria celular y humoral de la dorada, y el crecimiento de los ejemplares tratados. Finalmente, se demuestra que las principales funciones de los fagocitos de dorada están moduladas por una(s) citocinas. Entre estas respuestas se incluyen la migración, la fagocitosis, la explosión respiratoria la producción de monóxido de nitrógeno y la actividad bactericida. Los resultados obtenidos son de gran interés tanto desde el punto de vista de la investigación básica como por su posible aplicación industrial a la piscicultura.

Autor: SAINZ MENENDEZ ROSA M..
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MORFOLOGIA Y BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR. BIENIO 93-95.

Resumen: El desarrollo del timo y el cultivo de timocitos en presencia de diferentes agentes son dos modelos clásicos del estudio de muerte celular programada. El efecto antioxidante, oncostático e inmunopotenciador de la melatonina permitieron postular la posibilidad de que esta hormona influyese decisivamente en estos procesos de muerte celular. Mediante técnicas morfológicas y bioquímicas evaluamos el efecto de la inyección crónica de esta hormona sobre la tasa de muerte celular que sucede en el timo de ratas jóvenes. Asimismo tratamos de aislar su posible mecanismo de acción cultivando los timocitos en presencia de glucocorticoides, agentes que dañan el DNA (etopósido) y agentes que generan estrés oxidativo (H2O2 y t-BOOH). Una vez observado que la melatonina sólo fue capaz de inhibir la muerte que sucede en la corteza del timo con la edad y la inducida por glucocorticoides en timocitos aislados estudiamos el papel de esta hormona sobre la expresión de genes implicados en el proceso de muerte celular en el timo. Observamos que la melatonina no tiene ningún efecto sobre el bcl-2, ni el p53, pero disminuye considerablemente los niveles de mRNA del receptor de glucocorticoides tanto en el timo como en los timocitos cultivados con dexametasona. Asímismo pudimos comprobar que la melatonina juega un papel fundamental en los niveles de proliferación celular en el timo siendo en este caso como en otros ejemplos descritos por otros autores un agente antiproliferativo en el timo de ratas.

Autor: BIDAURRAZAGA VAN DIERDONCK JOSEBA .
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CONCEPTOS Y METODOS DE BIOLOGIA CELULAR CON IMPLICACIONES MEDICAS.

Resumen: LOS RESULTADOS DEL PRESENTE ESTUDIO DEMUESTRAN QUE LA EXPRESION DE LOS LUGARES DE UNION PARA LA VAA SURGEN EN EL TEJIDO ENDOTELIAL DESDE LA EPOCA FETAL MAS PRECOZ Y SE MANTIENEN COMO MARCADOR DE DIFERENCIACION ESPECIFICO EN EL ENDOTELIO MADURO DE TODOS LOS ORGANOS.DICHO MARCAJE SE MANTIENE EN EL ENDOTELIO NEOANGIOGENICO DE LAS METASTASIS EXPERIMENTALES DE UN MELANOMA MURINO EN EL HIGADO, LO CUAL INDICA SU PERMANENCIA EN UNA CONDICION PATOLOGICA ADAPTATIVA DE ESTE TEJIDO.EN EL HIGADO, LA UNION DE LA VAA AL TEJIDO ENDOTELIAL FUE SUMAMENTE INTENSA EN TODOS SUS SEGMENTOS MICROVASCULARES. LA UTILIZACION DEL ENDOTELIO SINUSOIDAL HEPATICO AISLADO, COMO MODELO PARA ESTUDIAR LA RELACION ENTRE UNION DE LECTINA Y RESPUESTA FUNCIONAL DE LA CELULA, DEMOSTRO QUE LA VAA, AL IGUAL QUE FUE OBSERVADO EN EL SISTEMA LEUCOCITARIO (HAJTO Y COLS., 1990), TIENE EFECTOS FUNCIONALES SOBRE EL ENDOTELIO AL QUE SE FIJA. LOS INCREMENTOS DE PRODUCCION DE IL-1 Y DE METABOLITOS REACTIVOS DEL OXIGENO EN DICHO MODELO TRAS LA UNION DE LA VVA AL ENDOTELIO INDICAN LAS IMPLICACIONES FUNCIONALES DE LA UNION DE LA VAA AL ENDOTELIO SINUSOIDAL HEPATICO, CON RESPECTO A SU CAPACIDAD INMUNOMODULADORA Y PRO-INFLAMATORIA. TAL POSIBILIDAD JUNTO CON LA EVIDENCIA HISTOLOGICA DE LA UNION DE LA VAA AL ENDOTELIO NEOANGIOGENICO DE LAS METASTASIS HEPATICAS DEL MELANOMA B16 SIRVIERON COMO BASE PARA ESTUDIAR SUS POSIBLES ACCIONES ANTINEOPLASICAS DURANTE EL DESARROLLO MEATASTASICO DE DICHO TUMOR. EN ESTE SENTIDO LAS DETERMINACIONES DE PARAMETROS DE CRECIMIENTO METASTASICOS Y DE SUPERVIVENCIA DE ANIMALES INOCULADOS CON CELULAS DEL MELANOMA B16 Y TRATADOS CON VAA DEMOSTRARON SU PODEROSO EFECTO COMO AGENTE ANTIMETASTATICO QUE PROLONGA LA SUPERVIVENCIA MEDIA DE LOS ANIMALES. ESTOS RESULTADOS PODRIAN EXPLICAR, EN PARTE, LA BUENA RESPUESTA A LA VAA DE LOS PACIENTES TERMINALES CON NEOPLASIAS MALIGNAS.

Autor: DALMAU GABAS MIREIA .
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: ODONTOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS FISIOLOGICAS HUMANAS Y DE LA NUTRICION PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOPATOLOGIA Y PATOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL OXIDO NITRICO (NO) ES UN GAS SINTETIZADO POR LAS CELULAS DE MAMIFERO PARA ACTUAR COMO MENSAJERO FISIOLOGICO, PERO, A ALTAS CONCENTRACIONES, PARTICIPA TAMBIEN EN DIVERSOS PROCESOS PATOLOGICOS. EN EL HIGADO, ES SINTETIZADO EN SITUACIONES DE SHOCK SEPTICO, HEPATITIS O REGENERACION POST-HEPATECTOMIA. ESTA TESIS DEMUESTRA QUE EL NO INDUCE LA ADP-RIBOSILACION DE PROTEINAS EN CULTIVO PRIMARIO DE HEPATOCITOS DE RATA. LOS SUSTRATOS MAYORITARIOS DE ESTA MODIFICACION SON EL ENZIMA NUCLEAR POLI(ADP-RIBOSIL)POLIMERASA (PARP) Y UNA PROTEINA NO IDENTIFICADA DE 130-135 KDA. DOS DONADORES QUIMICOS DE NO, EL SNP (NITROPRUSIATO SODICO) Y EL SIN-1 (3-MORFOLINOSIDNONIMIDE) INHIBEN LA SINTESIS DE DNA INDUCIDA POR EL FACTOR DE CRECIMIENTO HEPATICO (HGF) E INDUCEN LA MUERTE CELULAR DE MANERA DOSIS-DEPENDIENTE. EL SIN-1, UN DONADOR QUE GENERA NO EN SU ESTADO DE RADICAL LIBRE (NO+), INDUCE LA MUERTE POR APOPTOSIS, COMO LO DEMUESTRAN LA CUANTIFICACION DE LA FRAGMENTACION DE NUCLEOS POR CITOMETRIA DE FLUJO, LA FRAGMENTACION OLIGONUCLEOSOMAL DEL DNA Y LA ACTIVACION DE LAS CASPASAS. LA ACTIVACION DE PARP PARTICIPA EN LA CITOSTASIS Y LA CITOTOXICIDAD INDUCIDAS POR SIN-1. EL SNP, UN DONADOR CON CARACTER NO+, INDUCE UNA FUERTE CONDENSACION DE LA CROMATINA Y LA DEGRADACION DE DIVERSAS PROTEINAS NUCLEARES. SUS EFECTOS RESPONDEN A LA ACTIVACION SIMULTANEA DE MULTIPLES VIAS, Y LA MUERTE CELULAR NO COINCIDE CON EL PATRON TIPICO DE APOPTOSIS.

Autor: GOMBAU SUAREZ LOURDES.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CEL. LULAR ANIMAL I VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CEL. LULAR .

Resumen: Información reciente sugiere que la deposición localizada de los inhibidores de proteasas es uno de los mecanismos que regulan la proteolisis pericelular durante la invasión del tejido, motivo por el cual se estudió la distribución del inhibidor del activador del plasminógeno de tipo 1 (PAI-1) asociado con la línea celular invasiva de glioma humano U-251. El PAI-1 antigeno fue detectado inmunológicamente en el interior de los gránulos citoplasmáticos situados en los extremos de las prolongaciones citoplasmáticas de las células U-251, siendo liberado rápidamente en presencia de un estímulo. El análisis funcional del PAI-1 almacenado en gránulos citoplasmáticos situados en los extremos de las prolongaciones citoplasmáticas de las células U-251, siendo liberado rápidamente en presencia de un estímulo. El análisis funcional del PAI-1 almacenado en gránulos reveló la presencia de su conformación activa. Los resultados arriba indicados sugieren que la capacidad del PAI-1 para ser almacenado y liberado de forma rápida puede proporcionar un mecanismo alternativo por el que estos tumores podrían regular la actividad proteolítica de forma localizada. PAI-1 se detectó inicialmente en los gránulos de las plaquetas, aunque prácticamente se desconoce su origen, es decir si es endocitado o bién sintetizado por los megacariocitos y posteriormente almacenado en gránulos. Para valorar la aplicabilidad de un sistema modelo celular que nos permita estudiar el mecanismo que determina el almacenamiento de PAI-1 en plaquetas y en células de glioma humano (U-251), expresamos exógenamente PAI-1 humano en células AtT-20, una línea celular de pituitaria de ratón conocida por su capacidad de almacenar proteinas de forma regulada. En este estudio se puso de manifiesto la capacidad de las células AtT-20 de almacenar PAI-1 en gránulos de secreción y de liberarlo en función de un estímulo. También se detectó la forma activa del PAI-1 en estos gránulos además de observar que su actividad se prolongaba en gránulos intactos (t1/2, 5h) en comparación a la proteina soluble (t1/2, 1h). Estos estudios demostraron la presencia en la molécula de PAI-1 de un dominio funcional capaz de dirigir el inhibidor a la vía de secreción regulada. A fin de investigar la existencia de una secuencia de clasificación en la molécula de PAI-1, expresamos diversas construcciones quiméricas formadas por el dominio extracelular del factor tisular (tTF), una proteina de secreción constitutiva utilizada como marcador inmunológico, unida a diversas secuencias de la región codificante del PAI-1. Datos morfológicos y bioquímicos indicaron que la secuencia comprendida entre los aminOácidos 87 y 182 contenía la secuencia de aminoácidos capaz de dirigir el almacenamiento de PAI-1 en las células AtT-20. La exocitosis ha sido ampliamente estudiada para las vesículas sinápticas. Así las proteinas SNARE, vSNARE para proteinas de la membrana de la vesícula y tSNARE para proteinas de la membrana plasmática, se encuentran directamente implicadas. Para determinar si SNAP-25, una vSNARE de las vesículas sinápticas también participa en la secreción regulada de los gránulos de secreción, expresamos la cadena ligera de la neurotoxina botulínica de tipo A(L-BoNT/A), que hidroliza específicamente SNAP-25, en las células AtT-20, nuestro sistema modelo. Los resultados mostraron que las células que expresan L-BoNT/A no fueron inducidas a secretar ACTH, la hormona endógena almacenada en los gránulos de secreción de las células AtT-20, sugiriendo un importante papel de SNAP-25 en el proceso de exocitosis de los gránulos de secreción en estas células.

Autor: GONZALEZ PADILLA ISABEL M..
Año: 1996.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA EVOLUTIVA.

Resumen: EL CHIRIMOYO ES UNA ESPECIE FRUTAL SUBTROPICAL MUY IMPORTANTE EN ESPAÑA, QUE ES EL PRIMER PRODUCTOR MUNDIAL DE CHIRIMOYA.LA PROPAGACION DE ESTA ESPECIE SE CONSIGUE POR INJERTO DE VARIEDADES COMERCIALES (CV. FINO DE JETE) SOBRE PATRONES DE SEMILLA, LO QUE PROVOCA UNA GRAN VARIABILIDAD EN EL RENDIMIENTO DE LAS PLANTACIONES. LA UTILIZACION DE PATRONES SELECCIONADOS POR SUS CARACTERISTICAS AGRONOMICAS COMO PORTAINJERTOS MEJORARIA ENORMEMENTE LAS PLANTACIONES, PERO EXISTE UNA CASI TOTAL IMPOSIBILIDAD DE PROPAGAR VEGETATIVAMENTE ESTA ESPECIE. POR ELLO SE HA RECURRIDO A LA MICROPROPAGACION CLONAL IN VITRO DE MATERIAL ADULTO SELECTO DE CHIRIMOYO. UN PATRON SELECTO DEL CV. FINO DE JETE DEL BANCO DE GERMOPLASMA DE LA MAYORA, FUE INTRODUCIDO EN CULTIVO. UNA VEZ OBTENIDOS CULTIVOS ASEPTICOS DE MATERIAL ADULTO, SE PROCEDIO A SU MULTIPLICACION E ENRAIZAMIENTO IN VITRO, COMBINANDO DISTINTOS MEDIOS DE CULTIVO Y REGULADORES DE CRECIMIENTO. ASIMISMO SE ESTUDIO EL CONTENIDO DE MACRO Y MICRONUTRIENTES EN LAS MICROESTAQUILLAS, COMPARANDO MATERIAL JUVENIL Y ADULTO (PARA ELLO SE PUSO A PUNTO LA METODOLOGIA PARA LA GERMINACION DE SEMILLAS IN VITRO, LO QUE SE PRESENTA EN EL APENDICE). UNA VEZ OBTENIDAS LAS MICROPLANTULAS SE PROCEDIO A SU ACLIMATACION EN INVERNADERO EN CONDICIONES CONTROLADAS DE HUMEDAD, TEMPERATURA Y LUZ. PARA MEJORAR LA RESPUESTA DE LAS PLANTULAS, ESTAS FUERON INOCULADAS CON HONGOS SIMBIONTES FORMADORES DE MICORRIZAS, ESTUDIANDOSE TAMBIEN LAS RESPUESTAS COMPARADAS PARA MATERIAL JUVENIL Y ADULTO. SE VERIFICO ADEMAS EL EFECTO ESPECIFICO DE LAS MICORRIZAS SOBRE LAS PLANTULAS (ESTUDIOS DE NUTRICION, ARQUITECTURA RADICULAR, FOTOSINTESIS, ...). LA METODOLOGIA ESTABLECIDA PERMITE LA CLONACION DE MATERIAL SELECCIONADO DE CHIRIMOYO ADULTO DEL CV. FINO DE JETE.

Autor: LOZANO PEREZ ENCARNACION.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: EN ESTE ESTUDIO SE HAN CARACTERIZADO LOS COMPLEJOS ADHERENTES DE VARIAS LINEAS CELULARES DE QUERATINOCITOS MURINOS, REPRESENTATIVAS DE DIFERENTES ESTADIOS DE PROGRESION TUMORAL DE LA CARCINOGENESIS DE PIEL DEL RATON. LOS COMPLEJOS CADHERINA E/CATENINAS SE HAN CARACTERIZADO CON DETALLE EN LA LINEA CELULAR PDV DEBILMENTE TUMOROGENICA. LAS CELULAS PDV CONTIENEN AL MENOS DOS TIPOS DE COMPLEJOS CADHERINA E/CATENINAS INDEPENDIENTES DONDE B-CATENINA Y PLAKOGLOBINA SON COMPONENTES PRACTICAMENTE EXCLUYENTES. POR OTRO LADO, CELULAS INDIFERENCIADAS DERIVADAS DE UN CARCINOMA FUSIFORME NO EXPRESAN PLAKOGLOBINA. LA SOBREEXPRESION DE PLAKOGLOBINA EN PRESENCIA DE CADHERINA E RECONSTITUYO COMPLEJOS CADHERINA E/CATENINAS FUNCIONALES LOCALIZADOS EN LAS MEMBRANAS DE CELULAS EN CONTACTO. LA EXPRESION DE CADHERINA E INDUJO LA ESTABILIZACION DE LA PLAKOGLOBINA EXOGENA EXPRESADA EN LOS DOBLES TRANSFECTANTES. ESTA COEXPRESION NO INDUJO LA REVERSION DE LA MORFOLOGIA EPITELIAL PERO PROVOCO UN RETRASO MODERADO EN LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE LOS TUMORES INDUCIDOS EN RATONES ATIMICOS CON RESPECTO A LAS LINEAS PARENTALES.

Autor: SANCHEZ GONGORA ESTRELLA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA (FACULTAD DE MEDICINA. UAM).

Resumen: LOS CAMBIOS QUE SE ORIGINAN EN EL METABOLISMO DE LA METIONINA SON, EN MUCHOS CASOS, DEBIDOS A DEFICIENCIAS EN LA METIONINA ADENOSILTRANSFERASA (MAT), ENZIMA QUE CATALIZA LA SINTESIS DE S-ADENOSILMETIONINA A PARTIR DE ATP Y METIONINA. PARA ESTUDIAR LA REPERCUSION DE UN INCREMENTO DE LA ACTIVIDAD MAT EN EL CICLODE LA METIONINA, SE TRANSFECTARON ESTABLEMENTE CELULAS CHINESE HAMSTER OVARY (CHO) CON EL CDNA DE LA MAT DE HIGADO DE RATA. SE OBTUVIERON CLONES CELULARES CON UN AUMENTO CONSIDERABLE DE LA ACTIVIDAD MAT, ACOMPAÑADO DE UNA ELEVACION DE LOS NIVELES CITOSOLICOS DE SAM Y UNA REDUCCION EN LOS DE ATP Y NAD. SE INCREMENTO TAMBIEN LA RELACION SAM/SAH Y SE POTENCIARON LAS REACCIONES DE METILACION Y TRANSAMINOPROPILACION. POR EL CONTRARIO, NI LAS CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS NI EL CRECIMIENTO CELULAR, SE VIERON MODIFICADOS. LAS CELULAS CHO QUE SOBREEXPRESAN LA MAT; FUERON SOMETIDAS A DISTINTAS AGRESIONES DE TIPO FISICO Y QUIMICO, COMPROBANDOSE QUE SE INCREMENTABA SU SENSIBILIDAD FRENTE A AGENTES COMO LA RADIACION ULTRAVIOLETA (UV C) Y OXIDANTES COMO EL PEROXIDO DE HIDROGENO. POR OTRA PARTE, SE OBSERVO QUE LA INTERACCION DE RADICALES LIBRES, HIDROXILO, CON LA CYS-121 (CISTEINA-121) DE LA MAT HEPATICA PARECE SER DETERMINANTE PARA LA REDUCCION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. SE PROPONE QUE LA MAT HEPATICA PODRIA ACTUAR COMO UN SENSOR DEL ESTRES OXIDATIVO, CUYA ACTIVIDAD SE ENCUENTRA MODULADA POR EL ESTADO REDOX CELULAR.

Autor: SANFELIU SABATER ANNA .
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA, UNITAT D'ENGINYERIA QUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Autor: FORTES ALONSO PURIFICACION.
Año: 1994.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: A LO LARGO DE LA TESIS SE DEMUESTRA QUE LA PROTEINA NS1 ES CAPAZ DE AFECTAR A LA EXPRESION GENICA A TRES NIVELES: 1.- INHIBE EL PROCESAMIENTO DE LOS MENSAJEROS, SOBRE TODO SI ESTE UTILIZA SITIOS DONADORES ALTERNATIVOS 5' PROXIMALES AL 3'. QUIZA ESTA INHIBICION ESTE RELACIONADA CON UNA ALTERACION EN LA LOCALIZACION SUBNUCLEAR DE FACTORES DE PROCESAMIENTO. 2.- INHIBE EL TRANSPORTE DE MENSAJEROS POLIADENILADOS AL CITOPLASMA. 3.- ACTIVA LA TRADUCCION DE MENSAJEROS CON EXTREMOS VIRALES A NIVEL, AL MENOS, DE INICIACION.

Autor: GARRIDO RUIZ TERESA.
Año: 1994.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA INTERNA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: SE HA DESARROLLADO UN NUEVO ENSAYO DE ANGIOGENESIS IN VITRO QUE PERMITE ESTUDIAR CONJUNTAMENTE TRES ETAPAS DEL PROCESO ANGIOGENICO: LA DEGRADACION DE LA MEMBRANA BASAL, LA MIGRACION DE LAS CELULAS ENDOTELIALES HACIA EL ESTIMULO ANGIOGENICO, Y LA DIFERENCIACION DE DICHAS CELULAS EN UN ENTORNO SIMILAR A LA MATRIZ EXTRACELULAR. ESTE ENSAYO PERMITE ESTUDIAR LA ANGIOGENESIS INDUCIDA POR TUMORES, UTILIZANDO MEDIOS CONDICIONADOS TUMORALES COMO FUENTE DE FACTORES ANGIOGENICOS TUMORALES, Y TAMBIEN POR FACTORES ANGIOGENICOS PURIFICADOS (BFGF, VEGF). ADEMAS, PERMITE DETECTAR LA ACTIVIDAD DE INHIBIDORES DE LA ANGIOGENESIS, POR LO QUE PODRIA SER UTILIZADO EN LA BUSQUEDA DE NUEVOS INHIBIDORES DEL PROCESO ANGIOGENICO. POR OTRA PARTE, SE HA DEMOSTRADO QUE LOS MEDIOS CONDICIONADOS POR DISTINTOS TIPOS DE CELULAS TUMORALES MODIFICAN LA EXPRESION DE INTEGRINAS EN CELULAS ENDOTELIALES; LAS MODIFICACIONES SE CENTRAN EN LAS SUBUNIDADES X2, XV, B1 Y B3. ANTICUERPOS QUE RECONOCEN DICHAS SUBUNIDADES, POTENCIAN LA INVASION DE LAS CELULAS ENDOTELIALES, Y AUMENTAN LA PRODUCCION DE METALOPROTEASAS EN LAS MISMAS CELULAS, LO QUE INDICA QUE LAS INTEGRINAS MENCIONADAS DESEMPEÑAN FUNCIONES IMPORTANTES EN LA ANGIOGENESIS. LOS PROPIOS MEDIOS CONDICIONADOS TUMORALES, TAMBIEN ESTIMULARON LA PRODUCCION DE METALOPROTEASAS, LO QUE SUGIERE QUE UN AUMENTO DE LA PROTEOLISIS EXTRACELULAR, PUEDE SER UN FACTOR CRITICO EN LA ANGIOGENESIS INDUCIDA POR TUMORES.