CULTIVO DE TEJIDOS

Autor: AUSO MONREAL EVA.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: Las hormonas tiroideas son esenciales para el normal desarrollo del sistema nervioso central. En la corteza auditiva de animales hipotiroideos se ha visto una anormal migración celular, una anormal diferenciación y una alterada conectividad. En ratas gestantes se indujo un estado de hipotiroidismo crónico e hipotiroxinemia materna leve mediante administración de Metimazol y un estado de hipotiroxinemia materna crónica alimentando a los animales con una dieta baja en yodo. El estudio de la corteza somatosensorial primaria (S1) y del hipocampo de las crías de estos animales ha revelado un retraso en la maduración cortical (lectinas), una actividad enzimática citocromo oxidasa menor, una mayor permanencia de serotonina en corteza, alteraciones en la organización de las aferencias tálamo-corticales y alteraciones en la migración radial de neuronas glutamatérgicas, encontrando un porcentaje significativo de neuronas en la sustancia blanca subcortical. Los animales sometidos a una hipotiroxinemia materna leve también presentan un menor umbral a presentar crisis audiogénicas. Todos estos daños solo se pueden evitar si se previene la hipotiroxinemia materna tras infusión de tiroxina antes de que se haya producido el daño. Una vez producido el daño, ni la infusión de tiroxina ni las hormonas tiroideas fetales, pueden subsanar tales alteraciones.

Autor: CUEVAS ROMERO ESTELA.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: La hipotiroxinemia materna leve y transitoria afecta la distribución radial de neuronas glutamatérgicas en la neocorteza de las crías e induce un menor umbral a presentar crisis audiogénicas. Se desconoce si la migración radial y tangencial de las células GABAérgicas pudiese también ser afectada. En ratas y ratonas gestantes se indujo un estado de hipotiroxinemia materna mediante administración de Metimazol. El análisis de la distribución radial de células GABAérgicas en la neocorteza de las crías, usando marcadores inmunohistoquímicos (palvalbúmina, calbindina, calretinina y óxido nítrico sintetasa), mostró que la distribución radial de los diferentes subtipos de neuronas GABAérgicas en la neocorteza es similar entre las crías de madres normales y de madres hipotiroxinémicas. En cambio, el análisis de la migración tangencial de células de la eminencia ganglionar medial (EGM) en la neocorteza, usando co-cultivos organotípicos, mostró que las neuronas provenientes tanto de explantes de EGM de embriones de madres normales como de madres hipotiroxinémicas migran preferentemente hacia la región medial versus lateral de la neocorteza, mientras que, las neuronas tanto de explantes de EGM de embriones de madres normales como de madres hipotiroxinémicas pierden la preferencia por la región medial. Estos resultados sugieren que la hipotiroxinemia materna no parece afectar la migración radial de las células GABAérgicas en la neocorteza, pero sí afecta su migración tangencial. En esta última, la hipotiroxinemia materna pudiese alterar las señales atrayentes o respulsivas del sustrato (neocorteza), causando la desorientación de las neuronas de la EGM.

Autor: MELLADO GIL JOSÉ MANUEL.
Año: 2003.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CÁDIZ.

Resumen: INTRODUCCIÓN La apoptosis participa en el proceso de destrucción de la célula beta que acontece en la diabetes. Un mejor conocimiento de este fenómeno es esencial para el desarrollo de estrategias terapéuticas dirigidas a la prevención de la pérdida de la célula beta y de la diabetes. OBJETIVOS 1,- Evaluar el efecto de la alta concentración de glucosa sobre la apoptosis de las células de islotes pancreáticos inducida por estrptozotocina y citoquinas proinflamatorias. 2,- Valorar las modificaciones en la expresión de Fas y las proteínas antiapoptóticas bcl-2 y bcl-xl en presencia de alta concentración de glucosa y agentes inductores de apoptosis MÉTODOS Islotes procedentes de ratas Wistar se cultivaron en RPMI con 5.5 ó 24.4 mM de glucosa y se trataron con interleuquina-beta, sola o combinada con factor de necrosis tumoral-alfa e interferón-gamma, y cone streptozotocina. La detección y cuantificación de apoptosis se realizó por el método TUNEL y la expresión de proteínas se valoró mediante western-blot al final de los tratamientos. RESULTADOS Los islotes tratados con una combinación de citoquinas (interleuquina-1beta, factor de necrosis tumoral-alfa e interferón-gamma) mostraron un aumento significativo de la apoptosis cuando fueron incubados con una alta concentración de glucosa (24.4 mM comparado con los no tratados en la misma concentración de glucosa (p menor 0,01) o islotes incubados en 5.5 mM de glucosa y citoquinas (p menor 0,05). IL-1beta sola no indujo un aumento significativo en la apoptosis de los islotes cultivados con concentraciones normales o altas de glucosa. La estreptozotocina aumentó significativamente la apoptosis en los islotes cultivados con 24.4 mM de glucosa comparada con los no tratados con la misma concentración de glucosa (p menor 0,05). La alta concentración de glucosa indujo un aumento en la expresión de Fas en las células del islote (p menor 0,05) que se mantuvo después del tratamiento con citoquinas o con estreptozotocina. La expresión de moléculas anti-apoptoticas bcl-2 y bcl-xL no mostró cambio significativo. CONCLUSIONES 1,- En células de islotes pacreáticos de roedores. 1.1,- Una alta concentración de glucosa en el medio incrementa la apoptosis inducida por citoquinas proinflamatorias y estreptozotocina, indicando así que el efecto de determinados agentes inductores de apoptosis está relacionado con el estado funcional de estas células. 1.2,- Una alta concentración de glucosa en el medio incrementa la expresión de Fas, indicando así que el estado hiperfuncional conllevaría una mayor susceptibilidad a la muerte celular programada. 1.3,- La expresión de los genes bcl-xl y bcl-2 no está relacionada con los efectos de la glucosa sobre la apoptosis inducida por citoquinas y estreptozotocina. 2,- Puesto que la diabetes mellitus se debe a una pérdida de la masa de células beta, fundamentalmente por apoptosis, las intervenciones orientadas a la prevención de la enfermedad deberían incluir la consecución de un estricto control glucémico para evitar estado hiperfuncional de la célula beta que la hace más susceptible al proceso de daño y muerte.

Autor: TUDELA MORENO CONSUELO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Debido a la frecuente aparición de fisura palatina congénita, el estudio de los mecanismos por lo que se produce la fusión del paladar reviste un interés extraordinario. En los mamíferos el paladar se forma mediante la unión del paladar primario con el paladar secundario, resultado del crecimiento de dos protuberancias bilaterales procedentes de la cara medial de los procesos palatinos del primer arco branquial. Estas protuberancias reciben el nombre de procesos palatinos y son apreciables en el embrión de ratón a los 12 días de gestación (DG). Los procesos palatinos y son apreciables en el embrión de raón a los 12 días de gestación (DG). Los procesos palatinos crecen en principio verticalmente hacia abajo y, posteriormente, durante el día 14 de gestación rotan y aproximan sus extremos entres sí. A los 14,5 DG, los epitelios que cubren los extremos de los procesos palatinos, denominados epitelios del borde medial (EBM), contactan en la línea media y se forma una costura epitelial medial (CEM). La CEM está formada en principio por varias capas celulares, pero a medida que el paladar crece en sentido oral y nasal se va adelgazando, pasando a ser bicapa y luego monocapa, a la vez que en cada extremo se observa una acumulación de células epiteliales que reciben el nombre de Triángulos epiteliales. Finalmente, la costura epitelial se disgrega en pequeños islotes epiteliales separados unos de otros por células mesenquimatosas. En el día 15 de gestación, la fusión se ha completado y no se observa ya rastro de células epiteliales en la línea media. Al inicio de este trabajo, sabíamos que la desaparicón de las células del EBM durante la fusión de los procesos palatinos jugaba un papel muy importante durante la palatogénesis, pues resultaba alterada en algunas fisuras palatinas congénitas, en las que fracasaba la formación del paladar secundario, aunque los procesos palatinos creciesen, rotasen y se aproximasen de manera normal. Tal es el caso de las fisuras palatinas producidas en ausencia del factor de crecimiento transformador beta3 (TGFbeta3). A pesar de que se ha dedicado mucho esfuerzo a investigar los mecanismos celulares por los que desaparece el Epitelio del Borde Medial durante la fusión del paladar, los diferentes autores no han llegado a conclusiones similares, incluso con métodos iguales o parecidos. Por otro lado, aunque el papel que desempeña TGFbeta3 durante la palatogénesis está siendo poco a poco dilucidado, aún queda incógnitas por resolver. Por este motivo se pensó que era necesario aclarar las dudas plateadas al respecto por lo que los objetivos fundamentales de este trabajo fueron: * Conocer los mecanismos implicados en la desaparición del EBM a nivel celular y conocer qué papel juega en ello TGFbeta3. Esto se dividio en varios apartados: En primer lugar, se quiso investigar si el mecanismo de muerte celular, programa, sugerido en distintos estudios, podía explicar la desaparición del EBM durante la fusión palatina. Por otro lado, nos propusimos investigar si las células del EBM sufren Transformación epitelio mesenquimatosa (TEM) durante la fusión del paladar, utilizando marcadores alternativos alos marcadores fluorescentes que, con su uso, habían generado resultados contradictorios en lo que respecta al destino del EBM. Nosotros empleamos un vector retroviral no replicativo y portador del gen LacZ de Echerichia coli como gen marcador: el vector retroviral CXL. El siguiente objetivo del trabajo fue averiguar si era posible que ocurriese un mecanismo de intercalación celular que explicase el adelgazamiento y elongación observadas en la CEM durante la fusión del paladar. Este mecanismo explica determinados movimientos durante la embriogéneis pero nunca nadie, hasta el momento, había estudiado su existencia durante el desarrollo del paladar. Por último, quisimos conocer qué papel juega TGFbeta3 sobre los mecanismos celulares que, en el transcurso de este trabajo habían sido estudiados y relacionados con la desaparición del EBM. Sabíamos que el bloqueo de TGFbeta3 in vitro impide la fusión del paladar, la cual se recupera si se añade TGFbeta3 al medio de cultivo y que ratones TGFbeta3 mutantes presentan paladar hendido como única malformación craneofacial, por lo que se había propuesto que TGFbeta3 jugaría un papel muy importante durante la fusión del paladar. Nuestros resultados demuestran que, durante la fusión del paladar secundario, la CEM sufre intercalación medio-lateral de sus células, responsable de la elongación y adelgazamiento observado en la misma y que explica el crecimiento dorso-ventral del paladar. También, hemos demostrado la presencia de muerte celular programada inmediatamente antes y durante la fusión del paladar secundario pero, además, las células del EBM pueden desaparecer por TEM. Por útlimo, hemos comprobado que TGFbeta3 es imprescindible para que ocurra la fusión del paladar, actuando sobre los mecanismos de intercalación celular, muerte celular programada y TEM de las células de la CEM. En ausencia de este factor de crecimiento, el EBM se desarrollaa hacia un epitelio poliestratificado que recuerda la diferenciación sufrida por el epitelio oral del paladar.

Autor: VICENTE JORDANA ROMAN DE.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El presente trabajo corresponde a la tercera parte del cuerpo de doctrina que desde 1948 (primeros resultados Diciembre, 1949; Noviembre 1950 y Octubre 1952), se viene desarrollando bajo el concepto de Citoarjésis e Hipótesis de los citoarjés. La primera parte, teórico-práctica, se publicó en 1955-1957, en Anales de Edafología y Fisiología Vegetal. La segunda, en 1986 (Real Academia de Farmacia), estableció la idea del oikos citoarjico y la posible existencia de un nuevo tipo de invertebrados microscópicos que serían parásitos de animales y plantas, recogidos en la propuesta de un nuevo Filium: Microoncozoos, y que no se ha visto que hayan sido descritos hasta ahora. Esta tercera parte demuestra con la correspondiente discusión, conclusiones, 48 láminas (que recogen más de 200 microfotografías) y 15 figuras, la existencia del grupo txonómico microoncozoos, que incluye morfotipos de anélidos (2), nematomorfos (16) y nematodos estrongilinos (7). Es de destacar la identidad taxonómica de los nematodos estrongilinos aislados de cultivos bacterianos de atribuida oncogenia en plantas con los de la misma familia encontrados en material oncógeno humano (detritus de un paciente de la enfermedad de Hodqkin, 2º grado). Dos ideogramas dan el sentido del oikos citoárjico latente y excitado, y su relación con una morfé genérica RNA-P, motor de arranque de la actividad bajo parámetros de temperatura, pH y potenciales de oxidorreducción. Condiciones específicas para el desarrollo de las supuestas formas parásitas que se presentan. Quedan por revisar los métodos y comprobación de los valores citoárjicos (T, pH, rH), según especie, cuya conclusión constituirá la cuarta parte de este desarrollo experimental de la función citoarjé.

Autor: GOMEZ LLAMES SARA M..
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: CENTRO COMUNITARIO DE SANGRE Y TEJIDOS DEL PRINCIPADO DE ASTURIAS.

Resumen: La piel ha sido el primer órgano en ser sintetizado mediante técnicas de ingeniería tisular. En 1975 Rheinwald y Green describieron el cultivo in vitro de queratinocitos, esta técnica hizo posible multiplicar queratinocitos hasta un número relevante y utilizarlos así con fines terapéuticos. Con el uso Clínico de las láminas cultivadas de queratinocitos, se pusieron de manifiesto sus limitaciones, siendo la principal de todas ellas, la ausencia de un componente dérmico. En este trabajo se decribe el desarrollo experimental de un modelo de dermis artificial basada en plasma humano, sobre la cual el cultivo clásico de queratinocitos ha logrado una alta expansión. Tras comprobar que el modelo de piel artificial descrito era efectivo para la epitelización definitiva de heridas en un modelo de trasplante experimental, el prototipo de piel artificial ha sido utilizado en clínica. Con esta piel cultivada se han tratado pacientes grandes quemadas, extirpaciones de nevus gigantes congénitos, extirapaciones de lesiones neurofibromatosas y úlceras cutáneas, logrando con él, el cierre definitivo de las lesiones, sin complicaciones posteriores.

Autor: VEGA PAREDES SUSANA DE .
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTADDE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: El principal objetivo del presente trabajo de Tesis Doctoral ha sido la identificación y caracterización de genes durante el desarrollo embrionario. Nos hemos centrado en el estudio del diente como órgano representativo del desarrollo, ya que la formación de los gérmenes dentales muestra muchas similitudes morfológicas, tisulares, celulares y moleculares con el desarrollo de otros órganos tales comoel riñón, pulmón, extremidades, pelo, etc. Desde hace tiempo se sabe que los mismos genes son expresados en diferentes órganos durante su desarrollo y que las mutaciones en algunos de estos genes suelen provocar malformaciones en más de un órgano. En este sentido, se ha podido comprobar que muchos genes implicados en la morfogénesis del diente también tiene funciones reguladoras en otros órganos. En este trabajo, hemos aislado genes procedentes de una biblioteca de cDNA de molares E19.5 de ratón. Mediante selección manual y tecnología de microarray hemos podido seleccinar varios genes importantes para el desarrollo embrionario. Entre ellos, hemos identificado y caracterizado el gen Epiprofina/Sp6, que pertenece a la familia de ffactores de transcripción Sp/KLF. Hemos estudiado su expresión durante el desarrollo embrionario y sus posibles funciones, mediante cultivos organotípicos, durante la organogénesis de tejidos ectodérmicos. A la vista de nuestros resultados y del fenotipo del ratón mutante homocigótico para el gen Epiprofina/Sp6, nosotros pensamos que la ausencia o alteración de este gen podría ser la causa de alteraciones relacionadas con ciertas enfermedades ectodérmicas.

Autor: VILLAR SUÁREZ M. VEGA.
Año: 2002.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: La pérdida o el fallo funcional de un órgano o tejido es uno de los problemas más frecuentes y costosos en medicina. El transplante es una solución imperfecta porque requiere un donante, el material biológico disponible es siempre escaso y se puede producir un rechazo. Como posible alternativa al transplante, la investigación biomédica acutal ha abierto, durante la última década, un nuevo campo denominado ingeniería de tejidos. Se trata de utilizar como implantes células o tejidos reconstrudios en el laboratorio que limitarían la necesidad de donantes, aumentarían la disponibilidad de laboratorio biológico y, si las células proceden del propio paciente, evitarían el rechazo. El propósito de la mayoría de las investigaciones en este campo, de gran actualidad, es conseguir una sustitución eficaz del tejido dañado por un implante producido en el laboratorio que sea similar morfológica y funcionalmente. En este trabajo analizamos los tres métodos de cultivo posibles: cultivo de explantes, cultivo en monocapa y cultivo en agregación para diseñar nuevas técnicas de cultivo interesantes en ingeniería de tejidos. El objetivo concreto fue identificar posibles componentes activos de la matriz extracelular de los condroctios, su aislamiento parcial y su adición exógena a los cultivos celulares para conseguir buenos niveles de proliferación (en un primer paso) y de rediferenciación (en el segundo), todo ello dirigido a la producción de implantes por ingeniería de tejidos, con el objeto de provocar la desdiferenciación y proliferación de los condrocitos.

Autor: CABALLERO CHACÓN SARA CARMEN .
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: SEVERO OCHOA.

Resumen: CULTIVOS CELULARES Se indujo un fenotipo parecido a células de Schwann a partir de neuroesferas del cuerpo estriado de embrión de rata y de bulbo olfatorio de rata adulta. El crecimiento de las neuroesferas se sustentó con dos tipos de medios definidos: A,- Medio definido para células madre adicionado de EGF + FGF. B,- Medio neurobasal + suplemento B27 + Glu + Gln + EGF + FGF. Las células precursoras fueron expuestas a varios medios de cultivo definidos. Se diferenciaron en células similares a las células de Schwann inmunoreactivas para los antígenos p75, O4 y GFAP. Este fenotipo se expresó a partir de las 48 horas en cultivo, tiempo en el que otros tipos celulares iniciaron su diferenciación o oligodendroglia (A2B5+) y a precursores neuronales positivos a beta3 tubulina. Estos marcadores así como RIP y O1 se expresaron mejor a los 10 días en cultivo. El medio más efectivo para la diferenciación a fenotipo similar a glía de Schwann fue el medio condicionado por glía envolvente de bulbo olfatorio (MCGE), lo que indica que la diferenciación celular pudiera estar guiada por factores autocrinos de la glía envolvente. Las células p75 positivas provenientes de neuroesferas de bulbo olfatorio de rata adulta, son capaces de interaccionar con neuronas de ganlio de la raíz dorsal embrionarias. Se observaron varias formas de interacción entre glía y neuronas: envolvieron el soma neuronal o axones. Las células similares a la glía radial se disponían en paralelo a las neuronas con sus pliegues membranosos. La glía bipolar parecía servir de guía a la neuritas en crecimiento. LESIONES MEDULARES Fueron caracterizados los siguientes modelos de lesión medular en la rta: contusión moderada/severa, hemisección y transección. Posteriormente ensayamos diferentes tratamientos destinados a la reparación de las lesiones. Los tratamientos consistieron, para los animales lesionados por contusión y hemisección, en el transplante de glía envolvente o la administración del factor de crecimiento hepático (LGF). En el caso de transección medular se creó un puente de unión entre los segmentos medulares con una matriz biocompatible. La glía envolvente transplantada marcada con PKH26, solo pudo ser detectada en animales sin lesión hasta los 11 días postransplante. En los animales lesionados la identificación de las células marcadas con PKH26 se dificultó porque estos restos celulares fluorescentes eran fagocitados por los macrófagos, parece que gran parte de las células transplantadas no eran viables en el ambiente inflamatorio predominante en la lesión. Se observó que las células transplantadas mostraron gran afinidad por los vasos sanguíneos cercanos al área de transplante. También se observaron células marcadas en áreas no dañadas en la sustancia blanca. Se encontraron células inmunoreactivas para la proteína de mielinización periférica (P0) que colocalizaban con GFAP en área de los funículos laterales y lateroventrales. En los animales con hemisección las células transplantadas formaron puentes de unión entre las paredes de los muñones rostral y caudal, en el vértice de la lesión. Estos puentes contenían células inmunoreactivas para P0 y neurofilamento. En los animales tratados con LGF, las cavidades quístics formadas tras la contusión, aparentemente eran de menor tamaño y estaban repletas de macrófagos a los 30 días postocontusión. Sin embargo, no se observaron diferencias estadísticas significativas en la amplitud y longitud de las cavidades quísticas. En los animales con contusión + LGF, se observó que entre la masa de macrófagos había células positivas para GFAP, P0, neurofilamento y nestina. La proteína P0 estba expresada en células que migraban desde las raíces dorsales y que migraban sobre la matriz positiva a fibronectina cercana a la lesión, acompañando a fibras positivas a neurofilamento. La expresión de P07 y GFAP parecían mutuamente excluyentes. En los animales tratados con LGF se encontraron, en sitios adyacentes a la lesión células de tipo multipolar con procesos muy largos y una alta inmunoreactividad para nestina y GFAP. No se observó regeneración del tracto corticoespinal, ni hubo diferencias significativas entre las distancias de retracción axonal, número de vasos sanguíneos adyacentes a la lesión, tampoco se observaron diferencias en la conducta locomotora de animales tratados y no tratados. El implante del puente de fibrina en los animales lesionados por transección medular condujo a una reducción del espacio intersegmental con respecto a los animales no tratados. En zona de contacto entre la matriz de fibrina y los muñones espinales se observaron numerosas fibras positivas a neurofilamento acompañadas de células inmunoreactivas para la proteína de mielinización periférica P0. La matriz de Tissucol propició el crecimiento, en su interior, de fibras mielinizadas y no mielinizadas hasta por 1,5 mm, algunas lo hacían orientadas longitudinalmente.

Autor: GARCÍA VÁZQUEZ M. DOLORES.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA (UPV/EHU).

Resumen: El melanoma es un tipo de cáncer de piel que se produce por una multiplicación anormal de los melanocitos. Estas células sintetizan melanina, responsable del color de la piel y de la protección de las radiaciones ultravioleta. De todos los tipos de cáncer de piel, el melanoma es el menos frecuente, sin embargo, es en el que se registra la mayor mortalidad. Clásicamente se ha descrito el melanoma como un tumor muy inmunogénico, sin embargo, en muchos casos la respuesta inmune generada tras la exposición antigénica no es eficiente y permite la evolución metastática del tumor. En este sentido, y con el objeto de incrementar la respuesta inmune antitumoral, se están ensayando diferentes protocolos terapéuticos utilizando inmunomodulares como la IL-2 y el INFalfa. La IL-2, es el factor esencial en el desarrollo de la respuesta inmune, ya que es el principal factor de crecimiento y diferenciación para los linfocitos T. Para ejercer su función, se une a receptores específicos (RIL-2), que están formados por al menos tres subunidades (alfa,beta, y gamma). En este trabajo hemos estudiado el sistema IL-2/RIL-2 desde dos aspectos, por un lado, hemos analizado el receptor soluble de la IL-2 en el suero de pacientes con melanoma. Por otro lado, hemos estudiado en las células procedentes de melanomas primarios y metastáticos, la expresión de este sistema y su implicación en la capacidad metastática. Los resultados obtenidos demuestran que los niveles séricos de RIL-2s están elevados en pacientes con melanoma. Además, estos valores pueden ser considerados como un indicador pronósticos de la evolución maligna de la enfermedad. Por otro lado, las líneas celulares de melanoma humano estudiadas expresan el complejo del receptor funcional de la IL-2 y producen IL-2. A través de mecanismos paracrinos ya autocrinos, la IL-2 aumenta la proliferación de las células de melanoma. También, el tratamiento in vitro con IL-2. Aumenta la capacidad clonogénica y puede modular la capacidad de migración e invasión celular. Por todo ello, parece probable que el sistema de la IL-2 participe activamente en la progresión maligna del melanoma humano.

Autor: BARAGE MOUSSA.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: IBMCP - ETSI AGRÓNOMOS.

Resumen: La escasez de agua y la presencia o acumulaciones de sales en el suelo a causa de empleo de agua con una excesiva concentración salina, han sido problemas recurrentes en la historia de la agricultura. De mismo modo, los efectos de los ciclos periódicos de sequía han tenido graves y a veces dramáticas consecuencias en extensas regiones del planeta, llegando a ocasionar el abandono de tierras anteriormente apta para el cultivo y la emigración subsiguiente a otras zonas con el fin de garantizar las necesidades mínimas de la poblacion. Por desgracia, los problemas ocasionados por la falta de agua y/o la acumulación de sales en el suelo, principalmente en zonas donde se practica la agricultura de regadío, van agravándose con el tiempo. Los programas de mejora clásica y las medidas de tipo agrotecnológico, como los lavados de suelos con altas concentraciones de sales, sustitución de suelos por sustratos alternativos, transplantes en vez de siembras directas, adición del calcio en forma de yeso o nitrato cálcico, el uso adecuado del agua del riego (fuentes de agua de mejor calidad o tratadas con desalinizadores, a pesar de su elevado costo), el acondicionamiento de las plántulas, el tratamiento de las semillas utilizados hasta el momento han dado poco frutos (Jesus Cuartero et. Al., 1999). Urge, por tanto, encontrar otras soluciones. Una de ellas es la manipulación de poblaciones genéticamente variables en especies de interés económico, con el fin de identificar, seleccionar, y propagar aquellos genotipos o con mayor grado de tolerancia al estrés salino y/o hídrico. La otra pasa por el empleo de métodos de mejora que conduzcan a un aumento del nivel de tolerancia. En este contexto, la biotecnología ofrece nuevas alternativas para la obtención de variedades mejoradas.

Autor: BERMÚDEZ SILVA FRANCISCO JAVIER.
Año: 2001.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE MÁLAGA.

Resumen: El epéndimo es el epitelio que recubre el sistema ventricular. En la mayoría de regiones consta de una monocapa de células cúbicas o cilíndricas multiciliadas. No obstante, en determinadas regiones constituye estructuras especializadas, con células morfológica y funcionalmente diferentes. El órgano subcomisural (OSC) es una de estas estructuras, de naturaleza glandular, secretando al líquido cefalorraquídeo glucoproteínas que plimerizan formando la fibra de Reissner. En la presente tesis se han producido dos anticuerpos monoclonales contra las células ependimarias bovinas de regiones no especializadas, denominadas 3C12 y 5B10. El 3C12 es una Ig G1 que reconoce con mayor afinidad la membrana apical de las células y el 5B10 una Ig M que reconoce con mayor afinidad la membrana basolateral. Ambos epítopos están expuesto extracelularmente y son capaces de ser reconocidos en el tejido bovino cultivado in vitro. Los epítopos son específicos de especie y sólo permanecen reconocibles cuando el tejido es fijado con metanol o formalina. En el presente trabajo también se ha puesto a punto un protocolo para obtener un cultivo primario puro de OSC. La actividad secretora del OSC in vitro fue analizada en explantes y cultivos primarios de OSC con ayuda de un ELISA tipo sándwich. Los resultados muestran que los explantes de hasta un mes in vitro y los cultivos primarios recién obtenidos son modelos adecuados para investigar el proceso secretor en estas células, así como para analizar el papel de posibles moléculares reguladoras en la actividad secretora. Se hay visto también mediante monitorización de los niveles de calcio intracelular con Indo-1 y Fluo-3 que las células del OSC tienen oscilaciones espontáneas y sincrónicas de calcio intracelular, movilizándose éste desde depósitos internos y no dirigidas por el potencial de membrana. El carbacol, agonista colinérigoco, y el ATP, pero no la serotonina, alteran el patrón oscilatorio. La eliminación in vitro de las oscilaciones disminuye en un 60% la actividad secretora, acumulando intracelularmente las vesículas. Esto sugiere que dichas oscilaciones participan en la liberación de secreción. En cultivos primarios de QSC, el ATP es capaz de incrementar en un 20% la liberación de secreción, lo que sugiere que esta molécula podría ser uno de los factores que in vivo regulen la actividad secretora en el OSC, quizás actuando como un factor autocrino/paracrino,puesto que no se ha descrito inervación pirinérgica en el OSC. El carbacol no modifica la liberación de secreción in vitro, quizás porque el número de células que responden a carbacol incrementando el calcio es pequeña, necesitándose posiblemente el acoplamiento celular para hacer llegar la señal a todas las células. La serotonina disminuye la liberación de secreción al medio de cultivo, lo cual sugiere que ejerce un efecto inhibitorio por un mecanismo independiente del calcio intracelular.

Autor: CONTRERAS MUÑOZ HÉCTOR.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El sindecano-2, miembro de la familia de los proteoglicanos de heparán sulfato, participa en numerosos procesos celulares tales como, cambio de forma celular, movilidad celular y procesos de transeducción de señal. En el presente trabajo el sindecano-2 es transfectado en células HT-29 M6, epiteliales y tumorales de cancer de colon, generandose clones de expresión estable para el sindecano-2. Diferentes propiedades morfológicas y funcionales fueron evaluadas. Cambios en la forma celular fueron encontrados en estudios de microscopía de contraste de fases y en MEB. También, cambios en la forma del crecimiento, encontrándose que los clones de expresión estable del sindecano-2, crecen en forma aislada y su morfología cambia desde epitelial a tipo mesenquimal. Disminución en la concentración de cadherina-e total concomitantemente con la expresión del sindecano-2. El sindecano-2 también induce un incremento en la adhesión celular en matrices como colágeno y vitronectina. La movilidad celular se incrementa en presencia del sindecano-2, así como la capacidad de transmigración. In vivo, las células son expresión de sindecano generan tumores en ratones atímicos de menor tamaño respecto de los generados por las líneas celulares parentales. Similares cambios, tanto morfológicos como funcionales fueron encontrados cuando se realizó la expresión estable del sindecano-2 sobre células epitelilaes de rión, MDCK. Transfecciones con la deleción completa del dominio citoplasmático del sindecano-2, sugieren que este dominio es relevante para los cambios morfológicos encontrados. Utilizando el método de transfección transitoria del sindecano-2, diferentes construcciones del dominio citoplasmático fueron utilizadas con el propósito de evaluar la región específica de este dominio que pudiera participar y ser responsable de los cambios de forma descritos. Sólo las construcciones en las cuales la deleción completa del dominio intracelular resultó ser significativa en cuanto a la incapcidad de la célula de emitir microespina y filopodios. Utilizando la microinyección celular de péptidos diseñados específicamente contra diferentes regiones del dominio intracelular, se encuentra que sólo una secuencia (-DEGSYDL) es determinante para los cambios de forma experimentados por la células. Las conclusiones del presente trabajo son: 1,- La expresión del sindecano-2 en forma estable genar cambios morfológicos detectables tanto en células tumorales de cáncer de colón, HT-29 M6, como en células MDCK.2. La expresión estable del sindecano-2 en células epiteliales es capaz de inducir y generar estructuras morfológicas tipo microespinas y filopodios.3. La expresión del sindecano-2 incrementa la capacidad de adhesión de las células HT-29 M6 y MDCK, sobre matrices como colágeno y vitronectina.4. La expresión estable y transitoria del sindecano-2 completo, así como de la construcción con la delección del segmento citoplasmático, sugieren que este dominio es importante para lograr los cambios de forma celular. En este punto la secuencia -DEGSYDL resulta determinante.5. En células epiteliales de cáncer de colon, HT-29 M6, la expresión del sindecano-2 revierte el fenotipo tumoral, modificando la morfología y el tipo de crecimiento. El sindecano-2 expresado en células tumorales no parece tener influencia en la capacidad invasiva de las células tumorales.

Autor: ROCA FERRER JORDI.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA DE LA UNIVERS. DE BARCELONA.

Resumen: Las células epiteliales obtenidas de mucosa nasal expresan ARNm de IL-8 y GM-CSF. Una vez en cultivo, sintetizan y secretan IL-1beta, IL-6, IL-8, TNF-alfa y GM-CSF. La dexanetasona a 10 uM inhibe la secreción de GM-CSF, IL-6, IL-8 y TNF-alfa por las células epiteliales. La supervivencia de los eosinógilos es estimulada por el sobrenadante de los cultivos de células epiteliales nasales, siendo bloqueada por la adición de anticuerpos contra GM-CSF, TNF-alfa y IL-8. Los corticoides, incubados con las células epiteliales, inhiben el efecto estimulante de la supervivencia de los eosinófilos que tienen las secreciones epiteliales, inhiben el efecto estimulante de la supervivencia de los eosinófilos que tienen las secreciones epiteliales. Además, la incubación de los eosinófilos con corticoides inhiben de forma dosis dependiente la supervivencia inducida por secreciones epiteliales. La secreción glandular de lactoferrina en mucosa nasal es estimulada por metacolina, ECP y las citocinas TNF-alfa, IL-1beta y GM-CSF. La secreción glandular en la mucosa bronquial también es estimulada por metacolina. Los corticoides budesonida y beclometasona disminuye la secrección glandular espontanea de lactoferrina tanto en mucosa nasal como bronquial. La budesonida tiene un efecto inhibidor dosis dependiente sobre la secreción de lactoferrina inducida por metacolina en la mucosa bronquial y nasal, inhibiendo también en forma dosis dependiente la secreción estimulada por las citocinas IL-1beta y TNF-alfa en mucosa nasal. Por lo tanto, las células epiteliales parecen tener un papel importante en la inducción y mantenimiento de la inflamación en la mucosa respiratoria, modulando tanto la presencia de eosinófilos como la secreción glandular. La eficacia de los corticoides en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias de la mucosa respiratoria se debe a un efecto múltiple, actuando tanto sobre las células epiteliales, como sobre los eosinófilos y la secreción glandular.

Autor: PEREZ MARTIN MARGARITA.
Año: 2000.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El epitelio que tapiza la superficie ventricular en el sistema nervioso central(SNC) de mamiferos adultos, es un epitelio ependimari ciliado cuboidal. El papel de esta epitelio ha sido poco estudiado y muchas de las funciones que se le han asignado son especulativas. Principalmente, se le ha relacionado con el control del intercambio de sustancias entre el líquido cefalorraquídeo(LCR) y el parénquima nervioso y la circulación del LCR a través de las cavidades ventriculares. Sin embargo, este epitelio debe de particular en otras funciones. Existen diversas patologías cerebrales donde la capa ependimaria se encuentra alterada. Además, recientemente, este tipo celular ha sido propuesto como una fuente de nuevas neuronas en el SNC de mamímeros adultos. Esta Tesis Doctoral plantea dos objetivos de trabajo, cuyos resultados contribuyen a conocer el papel del epitelio ependimario en el SNC de mamiferos. Objetivo 1: Estudiar el efecto que provoca la ausencia de epitelio ependimario en el sistema ventricular. Para ello, se eliminó la capa ependimaria de ratas adultas mediante la inyección intracerebroventricular de una sialidasa específica: la neuraminidasa de Clostridium perfringens. Tras la inyección de neuraminidasa se produjo la destrucción de la capa ependimaria. La eliminación del epéndimo en la región del acueducto cerebral provocó su estenosis y como consecuencia, el desarrollo de una hidrocefalia de tipo obstructivo, compatible con la vida del animal. Estos resultados llevan a la conclusión de que la integridad del epitelio ependimario es esencial para la estabilidad del sistema ventricular. Objetivo 2: Analizar el comportamiento del epitelio ependimario aislado del parénquima nervioso y su participación en el proceso de la neurogénesis. Para ello se eligió como modelo de estudio el cultimo de explantes de epéndimo procedentes de los ventrículos laterales de vacas. Se realizó una caracterización histológica e inmunocitoquímica del ependimario de los ventrículos laterales de vaca en el adulto y durante el desarrollo embrionario. Esta información se uso para evaluar el comportamiento del epéndimo en cultivo, el cual adquirió un fenotivo fetal. Al mismo tiempo, en los explantes de epéndimo tuvo lugar una frenética actividad proliferativa, generándose células de tipo neuronal. Mediante el empleo de marcadores de proliferación (BrdU),se observó que la producción celular ocurría a distintos tiempo de cultivo. El estudio realizado en torno al factor de crecimiento IGF-1,informó de la producción de IGF-1,en cultivo, principalmente por células de tipo neuronal. Este factor de crecimiento no parece ser esencial para la proliferación y diferenciación neuronal, ya que ambos fenómenos tienen lugar tras inhibir el efecto de IGF-1, mediante el bloqueo de su receptor. Los cambios morfológicos e inmunocitoquímicos que experimenta el epéndimo en cultivo, recuerdan a las características del epéndimo durante el desarrollo embrionario, cuando tiene lugar la neurogénesis. Dichos cambios podrían estar directamente relacionados con la neurogénesis observada in vitro.

Autor: MARTIN APARICIO AMAYA.
Año: 1998.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: En el presente trabajo hemos profundizado en el papel que juegan algunos factores de crecimiento fibroblásticos, en particular FGFa y FGFb en los procesos de morfogénesis y citodiferenciación del diente. Para ello, en primer lugar analizamos los patrones de expresión y localización de estas proteínas y de sus receptores de alta afinidad en las distintas fases de la odontogénesis. Los resultados obtenidos en relación a la expresión de FGFb y su colocalización junto con el receptor FGFR1 en la unión epitelio-mesenquimal indican que este factor y su receptor participan en las interacciones epitelio-mesénquima mediadas por la membrana basal en los estadíos tempranos de morfogénesis dental. Además, la localización del FGFa y de sus receptores FGFR1 y FGFR2 durante las fases de secreción y mineralización de predentina, sugirió la implicación de estas moléculas en el proceso de citodiferenciación de odontoblastos y/o ameloblastos. En segundo lugar, con objeto de conocer el modo de actuación de los FGF, su modulación a través de cofactores como los proteoglicanos heparán-sulfato/heparina y el efecto de otros factores de crecimiento que también se unen a la heparina como el TGFbeta1, establecimos un modelo de cultivo organotípico dentario que consistió en la extracción de primordios molares de embriones de ratón de 14 días de desarrollo (los cuales se encontraban en fases tempranas de morfogénesis dental) y posterior tratamiento con factores de crecimiento exógenos y con heparina. Mediante técnicas histológicas, inmunohistoquímicas y citométricas, hemos determinado que i) la heparina exógena retrasa la morfogénesis y la citodiferenciación dental in vitro de manera dosis-dependiente, ii) que los FGFa y FGFb exógenos tienden a mantener las células dentales en un estado de prediferenciación, al inducir la proliferación celular en el órgano del esmalte e inhibir la actividad fosfatasa alcalina, indicativa de procesos de calcificación en el diente y iii) que el TGFbeta1 por el contrario, favorece la citodiferenciación dental, induciendo la secreción de colágeno IV y la actividad fosfatasa alcalina en los primordios molares en cultivo. Por último, con el fin de determinar si los FGFa y FGFb exógenos son capaces de mimetizar los efectos inductores del epitelio dental e inducir la diferenciación funcional de los preodontoblastos in vitro, realizamos tratamientos de mesénquima dental de embriones de 17 días de desarrollo con diferentes combinaciones de factores de crecimiento. El análisis histológico y ultraestructural de las papilas dentales cultivadas y la utilización de marcadores de diferenciación odontoblástica como el colágeno I y la actividad fosfatasa alcalina, nos ha permitido concluir que la interacción sinérgica entre el FGFa y el TGFbeta1 es capaz de inducir simultáneamente la polarización de los odontoblastos y la secreción de una matriz extracelular similar a la predentina (diferenciación funcional), mientras que la acción combinada del FGFb y el TGFbeta1 promueve la polarización celular y la formación de largos procesos odontoblásticos (diferenciación morfológica).

Autor: SALA CAMARENA ELISA.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONÓMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRONOMOS.

Resumen: La especie Codiaeum variagatum incluye una serie de cultivares cuya comercialización proporciona importantes beneficios en el sector ornomental. La atractiva pigmentación de sus hojas (con colores que incluyen el rojo, verde y amarillo) hace que estas plantas sean muy aprecidas por el comprador. A pesar de eso, desde el punto de vista del productor, la multiplicación a gran escala de las variedades tradicionales presenta una serie de problemas. En primer lugar, aunque la propagación vegetativa por métodos convencionales es factible no resulta nada fácil. Ante la dificultad de conseguir tasas de multiplicación adecuadas, nuestros viveristas recurren a la compra de esquejes parcialmente enraizados, lo cual encarece los coste de producción y condiciona un precio relativamente elevado en el mercado que, a veces, desanima al potencial comprador. Por otro lado, desde el punto de vista del comprador estas plantas adolecen de un porte foliar excesivamente disperso y la caída de las hojas viejas de la base de la planta resta una buena parte de su atractivo. Seria deseable, por tanto, emprender un programa de mejora dirigido a la selección de genotipos que, manteniendo la atractiva coloración de sus hojas, exhibieran un porte de crecimiento más compacto. Vista la problemática del género Codiaeum el objetivo final del presente proyecto ha sido el desarrollo de métodos eficientes y reproducibles que posibiliten la regeneración de plantas de Codiaeum variegatum mediante las técnicas de cultivo in vitro. Estos métodos deberían servir de base para la multiplicación a gran escala de esta importante especie ornamental o, alternativamente, para emprender programas de mejora basados en el aprovechamiento de la variación somaclonal.

Autor: SILVA SOUZA ANTONIO DA.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS E.T.S.I. AGRÓNOMOS.

Resumen: Desarrolla dentro de los objetivos generales del proyecto AGF 94-0533, esta Tesis ha sido planteada con la finalidad de alcanzar dos objetivos principales. El primero consistia en evaluar la respuesta cultural y morfogenética de diversos cultivares de melón, a fin de seleccionar factores como fenotipo, fuente a edad de explantes y composición del medio de cultivo, que permitiesen una mayor frecuencia de regeneración in vitro. Esta evaluación se ha realizado a partir de explantes de cotiledones y hojas provenientes de cinco cultivares de melón, "Cantaloup Charentais", "Melón de Onteniente", "Eldorado 300", "Amarelo" y "Shipper", cultivados en medios con y sin la presencia de cobre. El segundo objetivo consistió en usar la fusión de protoplastos para superar barreras sexuales pre y postzigóticas que limitan el flujo de genes entre melón y sandía. Para el aislamiento de protoplastos de melón se han empleado cotiledones de plántulas del cv. "Cantaloup Charentais (Clause Ibérica) procedentes de semillas germinadas en condiciones axénicas. Los protoplastos de sandía se obtuvieron a partir de cotiledones de plántulas de una línea transgénica del cv. "Dulce Maravilla" en la que se había introducidos el gen marcador nptII, que confiere resistencia a Kanamicina. Los métodos empleados para el aislamiento y fusión de protoplastos, asi como los protocolos de cultivo y regeneración de plantas han sido similares a los protocolos desarrollados anteriormente en nuestro laboratorio.

Autor: CARRASCO PEREZ ANA ROSA.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL Y ECOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA VEGETAL Y ECOLOGIA.

Resumen: La patata (Solanum tuberosum L.) al ser una especie tetraploide, presenta un patrón de herencia que dificulta enormemente la selección en los programas de mejora clásica. Así, y mediante la utilización de genotipos diploides, se simplificaría en gran medida el seguimiento de los caracteres de interés, ya que la mejora a este nivel permite beneficiarse de la herencia disómica, posibilitando la introducción de germoplasma de especies afines silvestres, que son en su mayoría diploides, y de este modo incrementar la variabilidad genética existente en el cultivo. Sin embargo, y debido a que el nivel ideal de ploidía es el tetraploide, el retorno a este nivel se hace necesario. El objetivo principal de la presente Tesis Doctoral es la obtención y caracterización molecular, fisiológica y morfológica de híbridos somáticos mediante fusión de protoplastos, salvando así los problemas de incompatibilidad sexual entre las especies y consiguiendo al mismo tiempo el retorno al nivel tetraploide. El material vegetal utilizado consistió en genotipos diploides de alto rendimiento de Solanum tuberosum y tres especies silvestres, S. verrucosum, S. brevidens y S. chacoense con caracteres de interés. Además, se analizó la variación somaclonal obtenida mediante cultivo de protoplastos. La metodología empleada en la obtención de híbridos somáticos, se basa en la electrofusión de protoplastos del material vegetal seleccionado y en la regeneración de las plantas mediante técnicas de cultivo in vitro.

Autor: CERVERA OCAÑA MAGDALENA.
Año: 1997.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: El desarrollo de nuevas biotecnologías de mejora de plantas, como la transformación genética, ha abierto grandes perspectivas a la mejora de especies leñosas frutales. La presente tesis se halla centrada en el establecimiento de sistemas eficaces de transformación genética de un patrón de cítricos, el citrange Carrizo, actualmente el patrón más utilizado en España en el cultivo de cítricos, y de una variedad de naranjo dulce, Pineapple. Esta especie representa aproximadamente el 70% de la producción global de cítricos en nuestro país. Mediante un estudio detallado de los factores implicados en las etapas de transformación y de selección/regeneración se ha conseguido, por una parte, aumentar considerablemente la frecuencia de transformación y, por otra, reducir el número de escapes de forma norable respecto a los procedimiento de transformación de citrange Carrizo que se hallaban descritos en la bibliografía. El análisis y seguimiento periódico de las plantas transgénicas de citrange obtenidas ha demostrado la integración y expresión estable de los transgenes durante un periodo de tiempo de 1-4 años y bajo con condiciones ambientales naturales. Asimismo, la obtención de plantas transgénicas de citrange Carrizo con el gen de halotolerancia HAL2 ha confirmado la validez del método para su utilización como herramienta de mejora genética de dicho genotipo. Por otra parte, se ha conseguido transformar y regenerar plantas adultas de naranjo dulce Pineapple, mediante el desarrollo de un procedimiento eficaz de transformación de tejido juvenil de esta variedad y la aplicación del mismo tejido adulto revigorizado, que presenta un mayor potencial organogénico. Con ello se reduce enormemente el periodo de tiempo necesario para la evaluación del fruto y la progenie en la transformación de especies leñosas, como el naranjo dulce.