MORFOLOGIA CELULAR

Autor: Chaves Pozo Elena.
Año: 2004.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Biología.
Centro de realización: Universidad de Murcia.

Resumen: Durante el desarrollo de la presente Tesis Doctoral se han estudiado las interacciones entre los sistemas inmunitario y reproductor en el testículo de dorada (Sparus aurata L.). Para ello, se han abordado dos aspectos científicos: (i) la caracterización morfofuncional del testículo y de distintos parámetros séricos a lo largo del ciclo reproductor de los machos de dorada; (ii) el papel de los granulocitos acidófilos en el sistema inmunitario y en el seno del testículo. En una primera etapa se obtuvieron anticuerpos monoclonales específicos de tres poblaciones celulares de la gónada de dorada, células de la túnica albugínea, del epitelio ovárico y una subpoblación de células de Sertoli. A continuación, se abordó el estudio del ciclo reproductor de los machos de dorada desarrollándose un modelo en el que se han incluido todos los cambios observados. Así, se puso de manifiesto que el tamaño y el peso del testículo, los tipos celulares que lo constituyen, la tasa de proliferación y apoptosis celular, la expresión de algunos genes relacionados con la regulación hormonal, los niveles séricos de hormonas y de metabolitos varían a lo largo del ciclo reproductor de los machos de dorada y que dichos cambios están relacionados entre sí. Cabe destacar la infiltración masiva de granulocitos acidófilos y macrófagos observada durante la etapa de post-puesta, que junto con un aumento en la proliferación y la apoptosis celular y la fagocitosis de las células involutivas y los espermatozoides remanentes del ciclo anterior, favorecen la reorganización del tejido testicular. En una segunda etapa se estableció un método de disociación testicular que permitiera obtener suspensiones celulares testiculares viables. Estas suspensiones fueron utilizadas para cuantificar y estudiar las funciones de los granulocitos acidófilos testiculares. Así, se determinó que el 80% de las células con gránulos citoplasmícos presentes en el testículo, las cuales aumentan considerablemente en la etapa de post-puesta, corresponde a granulocitos acidófilos. Con el fin de comparar las actividades de los granulocitos acidófilos testiculares y las de los de otros tejidos inmunitarios, se estudió la respuesta de este tipo celular (movilización, actividad fagocítica, producción de intermediarios reactivos de oxígeno y de interleuquina-1b) tras una infección experimental con V. anguillarum y en el seno del testículo. Los datos obtenidos contribuyen a la demostración que dicho tipo celular es el equivalente funcional de los neutrófilos humanos y muestran que los granulocitos acidófilos testiculares tienen menor capacidad de respuesta frente a diversos estímulos inmunológicos que los granulocitos acidófilos presentes en el riñón cefálico. La observación de que los granulocitos acidófilos no proliferan en el testículo unida, además, a que los factores solubles testiculares, las células testiculares y las hormonas esteroideas regulan y modulan las actividades de los granulocitos acidófilos del riñón cefálico sugieren que los granulocitos acidófilos testiculares se originan en el riñón cefálico, se infiltran en el testículo y funcionalmente son modificados por el microambiente de este órgano.

Autor: ÁLVAREZ VIEJO MARÍA.
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La existencia de células fotosensitivas extrarretinales y extrapineales, ha sido establecida en la mayoría de los vertebrados no mamíferos. Se ha demostrado que estas células llamadas fotorreceptores encefálicos son esenciales para la regulación de los ritmos circadianos y la detección de los cambios estacionales del fotoperiodo. Utilizando como modelo de estudio dos anfibios (Xenopus Laevis y Bufo bufo) y dos peces teleósteos (Phoxinus phoxinus, Danio rerio) y anticuerpos contra proteínas propias de la fototransducción, hemos localizado células positivas en el encéfalo de tres de estas especies. En D. Rerio y X. Laevis con un marcador contra opsina de conos y en P. Phoxinus con un anticuerpo contra alfa-transducina. El marcaje de los somas neuronales, en las tres especies, se encuentra en el Núcleo Preóptico Magnocelular del hipotálamo y las proyecciones axonales se dirigen hacia la neurohipófisis. En este núcleo se localizan neuronas neurosecretoras clásicas que se caracterizan por se vasotocinérgicas o mesotocinérgicas en el caso de anfibios y en peces vasotocinérgicas o isotocinergicas. En X. Laevis analizando secciones consecutivas y realizando dobles marcajes hemos podido comprobar que las neuronas opsina-positivas co-expresan mesotocina, no habiéndose observado en ningún caso co-expresión con vasotocina. La proximidad entre las fibras LHRH y las fibras mesotocina/opsina positivas en algunas regiones de encéfalo, tales como la eminencia media, sugieren que podría existir alguna interacción entre esos dos sistemas. Proponemos que las neuronas mesotocinérgicas, que están conectadas con el sistema GnRH en otras especies, estarían directamente involucradas en la fotorrecepción encefálica de Xenopus Leavis e inflluirían sobre el sistema Gn-RH-hipófisis-gónadas. Estos hallazgos representan una notable contribución a la compresión de cómo la luz influye en ciclos estacionales reproductivos en vertebrados inferiores. Por otro lado, hemos intentado localizar células melanopsina-positivas en la retina y el encéfalo de las cuatro especies estudiadas. Sin embargo los marcadores empleados no funcionaron óptimamente y los resultados no son los suficientemente claros. Teniendo en cuenta la reciente confirmación de que células de la retina interna de mamíferos son fotosensibles y además expresan medanopsina nuestros esfuerzos futuros serán dirigidos a completar estos resultados.

Autor: RUVALCABA MARQUEZ CLAUDIA AMIN.
Año: 2003.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.

Resumen: El carcinoma papilar de tiroides ha sido relacionado con la exposición a radicaciones. En la provincia de Salamanca, existen yacimientos mineros de uranio considerados fuente de radiación, es por ello que se ha pretendido caracterizar a un grupo de alteraciones moleculares (p53ñ, Mib-1, TTF-1, H-ras, K-ras, Grb-2, Raf-1, Ref, TPO, galectina-3, tiroglobulina, Bcl-2, Ck19, CD31, E-cadherina, EGFR y HER-2), relacionadas con las carcinomas papilares, evaluándolas tanto en los focos tumores como en las afectaciones ganglionares de 58 pacientes con carcinomas papilares de tiroides diagnosticados en el Hospital Clínico de Salamanca durante el periodo 1994-2002. Se empelaron técnicas de inmunohistoquímica, CISH y Western Blot. Así como la utilización de matrices de tejido, supliendo el método convencional de corte histológico completo, obteniendo una concordancia del 95,2% entre ambos métodos. Encontrando por tanto, que las proteínas que mejor permiten identificar el papilar de tiroides son citoquerafina 19 y gelatina-3. La proteína funcional, TPO (peroxidasa toridea), es la que sufre mayor alteración en las células tumorales que integran el carcinoma papilar de tiroides. El fenotip proteico observado en las células fumorales, es más heterogéneo en los focos tumores, que en los glanglios, manteniéndose el patrón morfológico. Las células tumorales presentes en el glanglio linfático presentan alto índice de proliferación, alteración en CD31, P53 y sobreexpresión de C-erbB-2. En la vía de RAS, Sos1/2 puede ser activada por Grb-2 o por el receptor de membrana EGFR, nivel al cual se podría actuar famacológicamente. En los tumores únicos, se observa reordenamiento del oncogen RET/PTC y ambas isotormas de RAS. Si además hay afectación ganglionar, se altera CD31 y EGFR. Los tumores con múltiples focos, acumulan una nueva alteración, que es la pérdida de E-cadherina. Y en los que además de multifocalidad presentan metástasis ganglionares, las células tumorales muestran además alteración en p53.

Autor: ALBA TERCEDOR M. CARMEN.
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se ha realizado un estudio ultraestructural cuantitativo de los capilares del NGLd de rata para valorar las alteraciones que sufren durante el proceso de envejecimiento, para ello hemos utilizado 15 ratas macho de raza Wistar de 3, 24 y 28 meses, los animales los hemos dividido en 3 grupos de 5 animales cada uno. Se han observado las siguientes alteraciones: Las células endoteliales muestran escasas alteraciones ultraestructurales entre 24 y 28 meses, destacando la presencia de cuerpos densos y vacuolas de contenido granular. El estudio cuantitativo muestra una disminución significativa del grosor del a célula endotelial a los 28 meses del 11,11%. Un aumento de tamaño de las mitocondrias del 42,85% a los 24 meses y aumento significativo de las vesículas de pinocitosis del 35,31% a los 28 meses. La lámina basal muestra alteraciones ultraestructurales caracterísitcas: engrosamientos homogéneos o localizados distribuidos irregularmente, proyecciones hacia las células gliales adyacentes desdoblamientos ocupados por inclusiones de aspecto laminar denso. El estudio cuantitativo de esta lámina basal muestra un aumento de grosor del 49% a los 24 meses y del 56,66% a los 28 meses. Los procesos pericitarios contienen numerosos cuerpos densos de probable naturaleza lisosómica y un material osmiófilo degenerativo similar al observado en los desdoblamientos de la lámina basal. Como resumen de los resultados obtenidos en el estudio de los capilares del NGLd destacamos que, las alteraciones producidas por el envejecimiento, no son tan intensas como las observadas en otras zonas del SNC. Entre las alteraciones que aparecen más precozmente, y que consideramos más importanes, detacamos el engrosamiento de la lámina basal. Las restantes aleraciones, de aparición posterior, tales como el adelgazamiento del endotelio, aumento del tamaño de las mitocondrias y aumento del número de vesículas de pinocitosis podrían representar un mecanismos compensatorio de la célula endotelial frente al obstáculo constituido por la lámina basal alterada para las funciones de transporte.

Autor: ALONSO MACHO RAUL .
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DEL PAIS VASCO.

Resumen: La envoltura nuclear rodea al material genético en eucariotas y les permite unos niveles de regulación de la expresión génica inexistentes en procariotas. Por ejemplo, algunas rutas de transmisión de señales tienen una última fase de amplificación que depende de la translocación al núcleo de factores de transcripción o de quinasas que los modulan. En este sentido, la activación linfocitaria en respuesta a un estímulo externo genera cambios en el patrón de expresión génica que conllevan importantes modificaciones estructurales y funcionales a nivel nuclear. Para que tengan lugar todos estos cambios, es necesaria la participación de la maquinaria de transporte nucleocitoplásmico a través de la envoltura nuclear. La presente tesis doctoral se centra en el estudio de las modificaciones bioquímicas, estructurales y funcionales de la envoltura nuclear y del transporte nucleocitoplásmico durante el proceso de activación linfocitaria. Paralelamente, el uso de sueros procedentes de pacientes con enfermedades autoinmunes que reconocen componentes de la envoltura nuclear nos sirve no sólo como herramienta de análisis útil para confirmar el diagnóstico clínico, sino para profundizar en el propio conocimiento de estos antígenos nucleares. En este sentido, hemos podido observar que la mayoría de los sueros de pacientes con cirrosis biliar primaria que reaccionan contra la glicoproteína de la envoltura nuclear gp210 reconocen su extremo carboxilo citoplásmico. Por otra parte, y en relación con los cambios de la envoltura nuclear durante la activación linfocitaria, hemos detectado una respuesta diferente en la expresión tanto de componentes estructurales como de la maquinaria soluble de transporte nucleocitoplásmico. Así, hemos observado que los niveles de las laminas nucleares A y C y la importina alfa (Rch1), una proteína que reconoce secuencias de localización nuclear presentes en proteínas cariofílicas, aumentan de manera drástica tras 48 h de tratamiento con fitohemaglutinina en comparación con el resto de factores analizados. Mediante inmunomicroscopia electrónica, hemos localizado este factor del transporte en la membrana plasmática y en rutas lineales desde el citoplasma hasta el interior nuclear. Además, la activación metabólica conlleva una redistribución de Rch1, duplicándose su presencia en la membrana plasmática y en el interior nuclear. Estos resultados sugieren que, durante la activación linfocitaria, esta importina podría participar en una ruta de transducción de señales desde la membrana plasmática al núcleo. Su aparición durante la activación metabólica podría transportar al núcleo factores de transcripción clave, lo que generaría cambios en la expresión génica modulados en parte por la presencia de adaptadores específicos del transporte nucleocitoplásmico. En nuestra opinión, uno de los mayores retos de la Biología Celular en un futuro próximo será elucidar cuales son los mecanismos que conectan las distintas rutas de transducción de señales intracelulares con el transporte nucleocitoplásmico y su integración con el control de la expresión génica.

Autor: BENNEWART KIRSTEN.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA DEL DESARROLLO.

Resumen: Las células horizontales (CH) representan la principal interneurona de la capa plexiforme externa de la retina de los vertebrados. Los conocimientos que se tenían de estas neuronas comenzaron con los estudios de Ramón y Cajal (1892). En 1965, Svaetchin et al., cuestionaron la naturaleza de estas células al mostrar algunas de ellas características estructurales y funcionales típicas de células gliales. La demostración con microscopia electrónica (Stell, 1967) de los contactos sinápticos determinó su naturaleza neuronal. Los registros electrofisiológicos de las CH y su terminal parecen indicar propiedades independientes en la región somatodendrítica y en la región del terminal axónico, de modo que la CH actuaría como "dos células en una " (Picolino, 1986). En primer lugar, con la técnica del Golgi se establecieron los criterios morfológicos que permitieron distinguir una CH del resto de células de la retina durante las fases iniciales del desarrollo. A continuación, se realizó la caracterización morfológica de los distintos tipos de CH de la retina de pollo y el estudio del desarrollo del axón. Con técnicas de inmunohistoquímica se determinó la expresión de marcadores neuronales y gliales en las distintas regiones de la CH. Se observó que, a partir de E-7 pueden ser reconocidas morfológicamente las primeras CH, estás pasan por una primera fase de "diferenciación indiferenciada" común para todas ellas. A partir de E-14 y hasta E-18, ocurre una segunda fase en la que aparecen los tres tipos de CH que permanecerán en el adulto: CH en broca, CH aplanada y CH en candelabro. Sólo el primer tipo posee axón. El crecimiento del axón en las CH en brocha puede ser observado en montaje de retinas "in toto" a partir de E-13. A medida que crece, emite pequeñas prolongaciones o espículas de carácter transitorio que desaparecerán en los días sucesivos. La expansión terminal axónica surge de un botón citoplásmico que se convierte en un ramillete extensamente ramificado cuya área de expansión es mayor que la formada por el campo dendrítico. Entre E-8 y E-11, periodo de emigración celular y crecimiento indiferenciado de expansiones citoplásmicas, el GABA se localiza en todas las CH. A partir de E-12 y hasta E-18, a medida que se diferencian los tres tipos morfológicos, muchas CH dejan de expresar GABA. Las secciones semifinas tangenciales de retina adulta nos permiten afirmar que el GABA también se expresa en los terminales axónicos de las CH en brocha. La presencia de marcadores gliales como 3CB2 y MOSP en el terminal de axón de las CH, y la ausencia de un marcador típico de los astrocitos como es la GS, sugieren que esta parte de la célula desarrolla propiedades especiales de naturaleza glial muy posiblemente relacionadas con el papel funcional de los oligodendrocitos.

Autor: SÁNCHEZ DE MIGUEL M. JOSÉ.
Año: 2001.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: La mayor parte de los péptidos reguladores del tracto gastrointestinal (TGI) son sintetizados en forma de precursores inactivos que necesitan ser procesados para adquirir su conformación activa. En el caso de los mamíferos, uno de los últimos pasos del procesamiento consiste en la amidación, actividad enzimática que ocurre al menos en la mitad de los péptidos conocidos. El objetivo principal de este trabajo es el estudio inmunocitoquímico de la presencia de la enzima amidante en células endocrinas del TGI del ratón tanto en el adulto como a lo largo del desarrollo embrionario y postnatal. Dado que el proceso de amidación es importante para la adquisición de la actividad biológica de muchos factores reguladores amidados con un papel relevante en el desarrollo embrionario, el siguiente objetivo fue estudiar la aparición y evolución de los péptidos amidados a lo largo del desarrollo del TGI. Concretamente nos centramos en el estudio de dos péptidos reguladores amidados bien conocidos, la gastrina y el PYY, y de otros péptidos recientemente identificados como son la adrenomedulina (AM), el péptido de 20 aminoácidos N-terminal derivado de la proadrenomedulina (PAMP) y la orexina A (OXA). En el ratón adulto, tanto la actividad amidante como los péptidos reguladores en estudio presentaban un patrón de distribución característico que sugiere la importancia que estas sustancias pueden tener dentro de la compleja red de señales endocrinas y paracrinas reguladoras de la ingesta procedentes del propio TGI. Durante el desarrollo embrionario, la actividad amidante PHM y la OXA son las primeras en aparecer, el día 14 del desarrollo. La gastrina, el PYY y el PAMP aparecen un día después, el día 15 y, por último, la AM el día 18 del desarrollo. El número de células inmunorreactivas para todos los péptidos reguladores estudiados, excepto la AM, aumenta conforme avanza el desarrollo embrionario. Dado que las funciones propuestas para estos péptidos en el adulto pueden no tener todavía significado en el embrión, su temprana aparición sugiere su posible implicación en los procesos de organogénesis. Hemos comprobado la colocalización de la enzima amidante PHM y los péptidos reguladores en estudio al menos en una parte de estas poblaciones célulares. Además, la AM, el PAMP y la OXA son producidos en su mayor parte por tipos celulares ya conocidos del TGI. La AM se localizan en las células G del antro. El PAMP y la OXA coexisten en las células EC, productoras de serotonina, y en las células productoras de PYY. La coexistencia de varios péptidos en gran parte de las células endocrinas del TGI del ratón apoya la naturaleza multihormonal de esta población celular.

Autor: PAJARES VILLANDIEGO M. JOSEFA.
Año: 2001.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Los resultados obtenidos en el presente trabajo son: 1,- El método de cuantificación mediante análisis de imagen de la apoptosis detectada por la técnica de TUNEL y la proliferación celular detectada por inmunocitoquímica para PCNA, presenta grandes ventajas respecto al sistema tradicional de cuantificación visual. 2,- La inmunorreactividad hepática para la enzima GST-p parece ser un buen marcador de preneoplasia en el modelo de hepatocarcinogénesis inducido por DENa. La inmunorreactividad para dicha enzima se correlaciona con valores de apoptosis y de proliferación celular propios de las lesiones preneoplásicas. Los tipos morfológicos clásicos de preneoplasila hepatocitaria -focos de células eosinófilas, vacuoladas y basófilas- muestran unos valores de apoptosis y de proliferación celular superiores a los del hígado normal. Existe un tipo de foco hepatocitario inmunorreactivo frente a la enzima GST-p en el modelo de hepatocarcinogénesis inducido por DENA de morfología similar al hígado normal, pero que muestra un comportamiento respecto a la apoptosis y a la proliferación celular semejante al de los focos preneoplásicos. 3,- En los hepatocarcinomas inducidos con DENA, tanto la apoptosis como la proliferación celular aumentan conforme lo hace la desdiferenciación tumoral. 4,- En el modelo de hepatocarcinogénesis inducido por DENA se observa una marcada inmunorreactividad para Bax y Bcl-2 en todos los focos prenoplásicos estudiados así como en hepatocarcinomas, pero no en el hígado normal. 5,- En zonas preneoplásicas y en hepatocarcinomas bien diferenciados se observó un marcado aumento de apoptosis provocado por el tratamiento de terapia génica. 6,- La ausencia de regresión tumoral de los hepatocarcinomas moderada o pobremente diferenciados, que se refleja en la ausencia de elevación de la apoptosis respecto a tumores similares no tratados, pudiera ser debida a la capilarización de los sinusoides hepáticos, lo que podría justificar la inadecuada difusión del virusportador de la proteína HSV-tk. 7,- La proteína HSV-tk presenta diferente tiempo de permanencia en el citoplasma de células normales y de células preneoplásicas y tumorales, siendo menor en las primeras.

Autor: SALANUEVAS OSÉS IÑIGO JAVIER.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (CSIC).

Resumen: En el trabajo contenido en la presente memoria hemos identificado etapas nuevas en la morfogénesis de coronavirus y bunyavirus. Ambas clases de virus experimentan una morfogénesis compleja, cuya etapa más interesante es la transformación estructural entre las partículas virales inmaduras y maduras en el aparato de Golgi. Hemos demostrado que dicha transformación está íntimamente asociada a la existencia de un aparato de Golgi funcional, aunque no necesariamente organizado. En ambos casos, la zona trans del aparato de Golgi es el subcompartimento celular que reúne las funciones necesarias para sustentar el proceso de maduración. El presente trabajo representa el punto de partida en el estudio de las bases moleculares de estos procesos de maduración viral, y de los factores celulares implicados. La caracterización bioquímica y estructural de las partículas virales inmaduras de coronavirus y bunyavirus será fundamental para la comprensión de este proceso. El proceso de maduración viral descrito en esta memoria podría ser común a otros virus que se ensamblan en compartimentos pre-Golgi, como los hepadnavirus o los flavivirus, o en el aparato de Golgi, como el virus de la rubéola, y podría proporcionar una valiosa información acerca de la posibilidad de interferir en el desarrollo de la infección asociada a estos virus.

Autor: MARTINS SILVA CABRITA ELSA ALEXANDRA.
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El desarrollo de técnicas de cripreservación seminal específicas es un objetivo de indudable interés en acuicultura. No obstante, a pesar de los esfuerzos realizados, aún no se ha conseguido desarrollar métodos de congelación que permitan obtener tasas de fecundidad lo suficientemente elevadas como para permitir su empleo a escala comercial. Con estos objetivos, se han desarrollado tres series de experimentos. En la primera serie se trató de evaluar diferentes características de la membrana plasmática antes y después de la congelación/descongelación. Las características analizadas fueron: la resistencia de la membrana al estrés osmótico, la composición lipídica de la membrana del espermatozoide y la capacidad fusogénica de los espermatozoides. Para el análisis de la respuesta al estrés osmótico se analizó mediante citometría de flujo, la permeabilidad al ioduro de propidio de espermatozoides expuestos a medios de distinta osmolaridad. Los resultados mostraron que la congelación provoca una importante disminución de la resistencia de los espermatozoides al estrés osmótico. En el segundo experimento, se pretendió determinar los efectos sobre la componente lipídica de la membrana plasmática, colesterol y fosfolípidos. Se analizó la proporción Cho/PL en semen fresco, diluido y criopreservado. La capacidad fusogénica de la membrana plasmática se analizó evaluando la fusión de los espermatozoides, frescos, diluidos y criopreservados con liposomas marcados con fluorescencia. Ninguno de los métodos ensayados consiguió una activación significativa de la capacidad fusogénica del espermatozoide, demostrando que los mecanismos de reconocimiento y fusión con el ovocito son, en trucha, diferentes a los descritos en mamíferos. La dilución en el medio de congelación y, especialmente la cripreservación, inducen una pérdida del control de la capacidad fusogénica de los espermatozoides, ya que un elevado porcentaje de los mismos se fusiona con los liposomas, de forma inespecífica, tras sufrir estos procesos. Con el fin de minimizar los daños detectados en la membrana se diseñaron mezclas crioprotectoras que incluían en su composición yema de huevo, BSA y un complejo proteico de soja (DanPro®), por separado o en combinación. El análisis conjunto de todos los parámetros anteriormente descritos, nos permitió observar que varias mezclas criprotectoras aumetnaron la calidad seminal tras la congelación. Se consideró el diluyente que incorporaba los tres estabilizadores como el más idóneo para la cripreservación de semen de esta especie. Para la tercera y última serie de experimentos, se selecionaron las condiciones de congelación/descongelación y se procedió a la congelación del semen en los tres tipos de envase. La movilidad, viabilidad celular resistencia al choque osmótico y fertilidad tras la descongelación, fueron semejantes entre los dos envases de gran volumen (5 ml y 1,8 ml) y ligeramente más bajos que los registrados para 0,5 ml. Las ventajas que proprociona el manejo de grandes volumenes compensan la pequeña pérdida de calidad seminal observada en semen criopreservado en estos envases. Sin embargo, los porcentajes de prelarvas obtenidos (73%) son mucho más elevados que los referidos por la bibliografía para el semen congelado en grandes volumenes y muestran la viabilidad de transferir la técnica de criopreservación para su empleo en la acuicultura o para la gestión de poblaciones naturales.

Autor: TORRE AGUILAR M. JOSE DE LA.
Año: 2001.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La GH es secretada por las células somatotropas de la adenohipófisis. Su secreción está regulada por GHRH y SRIH. Un tercer sistema, el de GHS parece que también esta implicado en su regulación. En esta tesis hemos estudiado las repercusiones de la administración crónica (21 días) del GHS Ipamorelin sobre el peso de los animales y la ultraestructura de las células somatotropas de rata y la liberación global e individual de GH in vitro. También hemos estudiado la proporción de células somatotropas y sus subtipos en cada uno de los distintos grupos experimentales. Hemos utilizado ratas Wistar hembra de 60 días de vida y se han dividido en: un grupo Ipamorelin (al que se administra 100 mg/kg/día sc), un grupo GHRH (al que se administra 10mg/kg/día sc) y un grupo salino que recibe el mismo volumen de suero salino. Al finalizar el tratamiento se realizan estudios morfológicos y funcionales, in vitro. In vivo, hemos pesado diariamente a los animales y estudiado las células somatotropas mediante técnicas de microscopía óptica, y electrónica y métodos estereológicos. Los resultados obtenidos indican que la administración de Ipamorelin durante 21 días produce un incremento de peso y un aumento de la densidad de volumen de los gránulos de secreción. Asimismo, hemos cultivado las células hipofisarias de sendos grupos de animales tras realizar la dispersión de las adenohipófisis en monocapa y sobre membranas de IMMOBILON para estudiar los apsectos funcionales (de secreción global e individual de GH) y morfológicos (inmunotiñendo las células somatotropas al finalizar el cultivo) de estas células. En el grupo Ipamorelin observamos que los estímulos con Ipamorelin, GHRP6, GHRH, SRIH y SRIH+Ipamorelin aumentan el porcentaje de células somatotropas, sin modificar la proporción de células claras y oscuras. Los estímulos positivos incrementan la liberación de GH, mientras que SRIH es capaz de inhibir la liberación provocada por Ipamorelin y GHRH, no inhibiendo la respuesta de GH estimulada por GHRP6. Nuestros datos sugieren que, Ipamorelin ejerce un control dinámico sobre la población de célullas somatotropas y no conduce a una desensibilización de las células somatotropas.

Autor: SERRANO QUEROL MAITE.
Año: 2001.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UDL (FACULTAT DE MEDICINA).

Autor: CERUTTI BURKE PABLO ADOLFO.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA. LUGO.

Resumen: El presente trabajo está realizado en ganglios hemales(GH) de bovino, con el objeto de estudiar en profundidad la estructura histológica de estos órganos y también con el objeto de abordar algunos aspectos de su funcionalidad, sobre los que existe controversia, tales como la participación de estos órganos en la formación de células sangúineas y su participación en la respuesta inmune del organismo. Para ello hemos utilizado diversas técnicas histológicas, como son técnicas inmunohistoquímicas con o sin fluorescencia, entre otras, trabjando sobre cortes gruesos, semifinos y finos de los ganglios hemales y correlacionando, en lo posible, los resultados obtenidos. La participación del colágeno IV(Col IV) en la constitución de la membrana basal de la pared de los senos y la presencia de soluciones de continuidad en la distribución, ha confirmado la posibilidad de un mecanismo de apertura-cierre en las paredes sinusales que establecería canales temporales para el paso de elementos celulares. La detección de células progenitoras ratificó la función eritropoyética en estos órganos. La positividad de elementos celulares en los glangios hemales de bovino para interleuquina 4(IL-4) implicaba a estos órganos en la respuesta inmune. La ausencia de aferencias y eferencias linfáticas y la presencia de vías sanguíneas en los órganos objeto de este estudio, reafirma la postura defendida por otros autores acerca de la denominación "hemales" para estos órganos.

Autor: VILLAPLANA CEREZO MARIANO.
Año: 2000.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: La presente Tesis Doctoral tiene por objeto el estudio del desarrollo ontogenético de la hipofisis de dorada, Sparus aurata L. Se han utilizado ejemplares de larvas, juveniles y adultos obtenidos del Centro oceanografico de Murcia, donde han sido mantenidos hasta su muestreo. Se ha estudiado en primer lugar el desarrollo general de la glándula y la relación existente entre la neurohipofisis y la adenohipofisis. Para la identificación y caracterización de los distintos tipos celulares endocrinos se han realizado tecnicas inmunocitoquimicas de microscopia optica y electronica, utilizando anticuerpos obtenidos contra diferentes antigenos de mamiferos y de peces, y microscopia electronica convencional. Asi, se han descrito desde la eclosión con microscopía optica, celulas con somatolactina (SL) (inmunorreactivas a anti-SL), celulas mamosomatrotopas(MS) (inmunorreactivas a anti-GH y anti PRL), celulas adrenocorticotropas(ACTH) (inmunorreactivas a anti-ACTH), celulas melanotropas(MSH) (inmunorreactivas a anti-MSH y anti-ACTH), celulas tirotropas (TSH) (inmunorreactivas a anti-TSH y anti-GTH I). Se describen celulas con hormona del crecimiento (GH) (imnunorreactivas a anti-GH) y celulas de prolactina (PRL) (inmunorreactivas a anti-GTH I) a partir de los 2 dias de edad, celulas gonadotropas I (GTH I)(inmunorreactivas a anti-GTH I) a partir de los 22 dias de edad y en juveniles se describen las celulas gonadotropas II(GTH II) (inmunorreactivas a anti-GTH II y anti-GTH I). Cuando las celulas endocrinas aparecen por primera vez tienen una localizacion restringida en la glandula aunque posteriormente casi todas ellas aparecen en las tres regiones de esta (pars distalis proximal, pars distalis rostral y pars intermedia), siendo especialmente abundantes en la/s zona/s en que se describieron por primera vez. Durante el desarrollo, cada uno de estos tipos celulares endocrinos, a un ritmo determinado, adquiere la localización definitiva en la glandula y las caracteristicas ultraestructurales propias de cada uno de ellos en los ejemplares adultos. Cada uno de los tipos celulares endocrinos se caracteriza por tener unos granulos de secreción de tamaño, forma, numero y morfologia determinadas que aparecen inmunomarcados con los diferentes anticuerpos. Estas celulas suelen a traves de una lamina basal con los axones de la neurohipófisis o con vasos sanguineos. Ademas, en la adenohipófisis hay celulas estrelladas que mantienen una estrecha relación con las celulas endocrinas. Las celulas involutivas de cada uno de los tipos celulares endocrinos y estrelladas solo aparecen en los ejemplares adultos.

Autor: PIROTTO INVERNIZZI ANNA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El objetivo general de esta tesis es la caracterización funcional del CD148 con el fin de acercarnos mas el conocimiento de su función debido a la importancia de esta molécula en la regulacion de la proliferación celular y a su implicancia reciente en la trasducción de señales. En primer lugar se pasó a estudiar la distribución fenotípica de esta molécula en las diferentes subpoblaciones de células hematopoyeticas, tanto en situación basal como tras diferentes condiciones de estimulación. De estos estudios podemos concluir que el CD148 presenta una amplia distribución tisular. Se expresa en la membrana de todas las células hematopoyeticas así coo en órganos linfoides tales como. Amígdalas, nódulos linfáticos, timo, bazo, salvo en las células del cetnro germinal de los folículos linfoides y en los timocitos corticales. El CD148 es un marcador de activación leucocitaria ya que aumenta tras activar los leucocitos in vitro con Cona, PMA, LPS o fMLP. Además se expresa en la mayoría de los tejidos no linfoides estudiados a excepción de epitelio escamoso, neuroas y macrogía. A pesar de su posible relación con el control de la proliferación celular se ha detectado la expresión del CD148 en todos los carcinomas testados. No obstante, en tumores de alto grado de malignidad se ha observado una disminución en el nivel de expresión de CD148. Datos anteriores de nuestro laboratorio han desmostrado la participaciónd el CD148 en los mecanismos de transducción de señales en linfocitos. Debido a la alta expresión de esta moléculas en eosinófilos se procedió a analizar la expresión del CD148 en eosinófilos y su participación en los procesos de activación y en alguna vía de transducción de señales en los mismos. Al entrecruzar el CD148 en eosinófilos humanos se produce su activación tal como se determina midiendo la liberación de O2, ECP y EPX que corresponden a la inducción de la cadena respiratoria y degranulación de los eosinófilos respectivamente. La activación de los esoinófilos que se produce por el entrecruzamiento del CD148 es inhiba por la genisteína y el pervanadato, lo que indica que la cascada de señalizacion que se genera implica la activación de tirosín cinasas. Existe una cinasa,asociada a CD148, capaz de fosforilar varios substratos. El mayoritario, una proteina de 150 kDa, se encuentra fosforilada en serinas y treoninas. Al realizar el estudio de la interacción del CD148 con proteínas capaces de interaccionar con su dominio intracitoplásmico. Nuestros resultados han demostrado que la zona citoplasmática del CD148 interacciona con la Valosin Containing Protein (VCP). Esta proteina se encuentra fosforilada principalmente en las tirosinas Y805 y Y796, el CD 148 defosforila especificamente la tirosina Y805 que corresponde al 90% de la fosforilacióno de la proteina.

Autor: PONS PONS MONICA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las annexinas se caracterizan por su propiedad de unir fosfolípidos dependientemente de Ca2+. Mediante tecnicas de inmunofluorescencia indirecta demostramos que en las célulaas NRK la anx6 se encontraba en la región perinuclear en los prelissomas i lisosomas. Dextrano-FITC llegaba al comportamiento anx6 sólo al cabo de 45 min demostrando su localización al final de la via endocítica. En las células polarizadas WIF-B solamente un 50% de la anx6 se encontraba en los prelisosomas mientras que el otro 50% se localizó en el Golgi. Mediante ensayos in vitro se demostró que la anx6 i la espectrina (citoesqueleto) debian interaccionar para que la calpaina I degradara la espectrina con la subsiguiente internacionalizacion de la vesicula de clatrina. En las celulas NRK la espectrina colonizaba con la anx6 en la región perinuclear y interaccionaba con GST-Anx6. Celulas microinyectadas con un mutante de la anx6, el LDL-DiI se quedaba acumulado en unas vesículas hinchadas perinucleares. Tambien se transfectaron células CHO con el mutante de la anx6 mostrando una disminución en la degradación del LDL. Esto nos sugiere que la anx6 tiene un papel importante en la salida de ligandos de los pre-lisosomas para su posterior degradación en los lisosomas. En el estudio del papel de la anx6 en la transducción de señal se utilizaron celulas CHO i una linia de CHO transfectadas establemente con anx6(CHOanx6). Mediante ensayos de Pull down con GST-Anx6 demostramos que Raf-1 interaccionaba con anx6 independiente del estado d´estimulacion de las celulas. La actividad Raf se encontraba inhibida en las celulas CHOanx6 y tambien presentaban niveles de Ras-GTP mas bajos que las celulas CHO, pero curiosamente los niveles de MAPK fosforilada eran similares en los tipos celulares, sugiriendonos que en las celulas CHOanx6 MAPK se activa por una via totalmente independiente de Ras/Raf-1. A pesar de todo, parece ser que la anx6 no es imprescindible ya que las celulas A431 que no expresan anx6 y ratones konckout para la anx6 son totalmente viables.

Autor: PALACIOS LIDÓN SILVIA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.

Resumen: Las células eucariotas poseen una compleja maquinaria molecular que garantiza la precisa localización de las distintas proteínas dentro de la célula. La base de su funcionamiento es, sin embargo, relativamente simple ya que consiste en la lectura de las señales de transporte contenidas en las propias proteínas, lectura que frecuentemente es múltiple y secuencial. A pesar de haber sido ampliamente estudiados, tanto la naturaleza de los orgánulos celulares involucrados en el almacenamiento y transporte de GLUT4 como los mecanismos moleculares que regulan su distribución celular, no son todavía bien conocidos. Por ello, los objetivos principales de la tesis se han centrado en: 1,- Caracterizar los compartimentos intracelulares donde GLUT4 es almacenado. 2,- Determinar el papel de las señales Phe5GlnIle8 y Leu789Leu490 en la internalización y transporte de las moléculas de GLUT4 expuesto en la superficie celular es decir, en los pasos de que consta su reciclamiento desde aquélla a los compartimentos donde GLUT4 es intracelularmente almacenado. Las conclusiones obtenidas fueron: 1,- GLUT4 es retenido y almacenado en un compartimento perinuclear y universal. Llamamos a este compartimento CPAG. 2,- El CAPG es un compartimento adyacente al aparato de Golgi y distinto del compartimento de reciclamiento endosomal. 3,- El CPAG se organiza en una estructura reticular, normalmente localizada en uno de los polos nucleaes, siendo su ultraestructura la de un sáculo con paredes fenestradas, ultraestructura semejante a la mostrada por las cisternas del aparato de Golgi. 4,- GLUT4 es reciclado desde la superficie celular al CPAG mediante un proceso que consiste, al menos, de dos pasos. I,- La endocitosis mediada por la señal basada en el motivo LEU489 LEU490, contenida en su dominio carboxilo-citoplásmico. II,- El transporte desde la red endosomal al CPAG, proceso mediado por la señal Phe5GlnGlnIle8 contenida en su dominio amino-citoplásmico.

Autor: RAMIREZ CASTILLEJO M. CARMEN.
Año: 1999.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.

Resumen: En este trabajo se estudia la histogéneris y regeneración del córtex medial ("facial dentada") de Podarcis hispanica tras la lesión específica con el neurotóxico 3AP. El estudio histólogico de la histogénesis y regeneración del córtex medial revela que ambos fenómenos comparten procesos similares de producción(neurogénesis) migración, incorparación y maduración de nuevas neuronas, tanto en el cortéx medial embrionario como en el córtex medial regenerante. En este estudio se ha puesto a punto técnicas de síntesis y detección de marcadores génicos específicos de tejido nervioso de lagartija que ayudan a entender ambos procesos. El microscopio electrónico revela que la maduración ultraestructural de las capas plexiformes externas del córtex medial es más temprana que la de capas internas cercanas al neuroepitelio. Este patrón de maduración también ha sido confirmado con marcadores de migración celular como la proteina NCAM en su estado polisialiazado(PSA-NCAM). Las aferencias corticales contralaterales se forman en los primeros estadios del desarrollo cortical de Podarcis hispanica previamente incluso a la maduración de los distintos estratos plexiformes, en el estado E36. En cuanto a la expresión de PSA-NCAM en el córtex medial adulto, este estudio aporta datos a favor de la hipótesis de que dicha expresión esté ligada a procesos de plasticidad neuronal y ramificación dentrífica, más que a procesos migratorios de neuronas de receinte generación. En el cortex medial de Pordarcis hispanica, tanto durante el desarrollo como durante los procesos de regeneración, la expresión de PSA-NCAM sufre un aumento temporal que sucede al aumento de neurogénesis embrionaria o reactiva, y que se prolonga en el tiempo más allá de la formación del estrato de somas del córtex medial, posiblemente debido a un papel de dicha proteína en el proceso de restablecimiento de nuevas conexiones. Los procesos de regeneración podrían estar modulados por la actividad de interneuronas de la capa plexiforme interna somatostatina positivas(como se ha indicado para los procesos de histogénesis), que son resistentes a la lesión con el neurotóxico 3AP. La población de interneuronas somatostatina sufre un descenso en el momento de máxima proliferación celular en el sulcus septomediales. Por último, se ha conseguido obtener y clonar tres sondas específicas de tejido nervioso de lagartija, a priori interesantes en el estudio de los procesos de histogénesis y regeneración. Una sonda frente lal mRNA de somatostina con la que se ha podido observar una desigual expresión en cuanto al número de células somatostina que presentan la proteína y su ARN mensajero, aunque ambos marcadores se localizan en las mismas áreas telencefálicas. Una contra la familia de mensajeros de receptores de neurotrofinas cuya expresión en el telencéfalo de Podarcis hispanica ha resultado ser casi constructiva y solamente algunas pocas células en los estratos plexiformes no expresan dichos receptores. Y una sonda contra el mensajero de la proteína de matriz extracelular Reelina, que se expresa en neuronas pioneras en el neocórtex y arquicórtex de mamiferos y se ha constatado su presencia en células de la capa plexiforma externa cortical de ejemplares adultos.

Autor: GARCIA DEL CAÑO GONTZAL .
Año: 1999.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DEL PAIS VASCO.

Resumen: La capacidad que posee el sistema nervioso central(SNC) para la reorganización de sus conexiones en respuesta a lesiones disminuye a lo largo del desarrollo postnatal. Un modelo adecuado en el que estudiar los factores que influyen en la pérdida de dicha capacidad lo constituye el colículo superior(CS). En este trabajo se estudiaron los cambios que se producen en la organización de los campos terminales corticocoliculares visuales tras la desaferenciación retiniana practicada en el conejo y la rata neonatos y tras la misma lesión practicada en la rata adulta. En los animales adultos control, los campos terminales corticocoliculares visuales estaban restringidos a una pequeña porción de la superficie colicular. La enucleación neonatal daba lugar a una importante ampliación de los campos terminales, indicativo de un proceso de crecimiento axonal. En los animales enucleados en edad adulta, sin embargo, no se producía tal ampliación aunque se observó un aumento en la densidad de botones terminales en las porciones mas dorsales del CS,probablemente debido a un proceso de sinaptogénesis reactiva y/o formación de ramas colaterales cortas en dichas porciones. La inhibición de la actividad de la sintasa del óxido nitrico(NOS) tras la enucleación en el anmal adulto, permitió la restauración de la capacidad de expansión poslesional de los campos corticocoliculares visuales lo que apunta al óxido nitrico(NO) como factor crucial en la perdida de plasticidad durante el desarrollo postnatal. La via retrospleniocolicular y sus modificaciones tras la enucleación neonatal fueron tambien objet de estudio. En los animales adultos control, los campos terminales retrospleniocoliculares se originaban de todas las áreas retrospleniales y abarcaban gran parte de la extensión colicular. Estos datos sugieren que la conexión retrosplenioculicular ejerce una fuerte influencia sobre la actividad del CS que podría ser relevante para la modulación de las respuestas motoras y viscerales mediadas por el CS. La enucleación neonatal dio lugar al aumento en la densidad de fibras y botones terminales en los estratos superficiales del CS. Estos datos sugieren que la información de la corteza retrosplenial, y,por tanto, del sistema límbico puede llegar a las neuronas eferentes de los estratos superficiales del CS. Dado que el NO parece estar implicado en la pérdida de la capacidad plástica de los aferentes a los estratos superficiales del CS durante el desarrollo, se estudiaron los cambios de la actividad NOS que se producen tras la enucleación neonatal o en edad adulta. En ambos casos, la morfología de las neuronas diaforasa positivas de los estratos superficiales del CS variaba tras las lesiones. En los animales adultos enucleados nenonatalmente, se observó una importante disminución en el número de neuronas diaforasa positivas.La enucleación en el animal adulto dio lugar, tras 7 días de supervivencia, a un incremento en el número de neurones diaforasa positivas en el SGS y tras 15 dias ya no era apreciable. El aumento de la actividad NOS podría ser responsable de la disminución de la capacidad de ampliación de la via corticocolicular tras la enucleación en el animal adulto.

Autor: DESFILIS BARCELO ESTER.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: Hemos estudiado el comportamiento depredador de la lagartija ibérica. Podarcis hispanica, centrándonos en los estimulos y sistemas neurales implicados en la captura de la presa. En una primera fase elaboramos un etograma parcial del comportamiento depredador de las lagartijas y estudiamos su variación en relación al tipo de presa y a la experiencia previa de la lagartija. También investigamos la importancia relativa de los estímulos químicos y visuales de la presa en el control del comportamiento depredador. En una segunda fase estudiamos, mediante técnicas de trazado de conexiones, las aferencias sensoriales a áreas telencefálicas que pudieran estar implicadas en el procesado e integración de aquellos estímulos relevantes en el contexto del comportamiento depredador. Por último, evaluamos por medio de lesiones restringidas la posible participación de estas áreas cerebrales en el control del comportamiento depredador de las lagartijas. Nuestros resultados indican que el comportamiento depredador de las lagartijas varía en función de las características de las presas y de la experiencia previa del animal con cada tipo concreto de presa. Las lagartijas son capaces de reconocer y atacar a sus presas habituales basándose exclusivamente en estímulos de tipo visual, mientras que los estimulos quimicos parecen tener un papel secundario. La información visual alcanza una zona rostro-lateral del telencéfalo a través de relevos en núcleos visuales del tálamo dorsal. Los resultados de lesiones del área visual del telencéfalo sugieren que ésta podria procesar información relevante para el reconocimiento del tipo de presa.