GENETICA HUMANA

Autor: RUBIO LLUESA CARMEN.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: En una primera parte se incluyen cuatro trabajos en los que se presenta la aplicación del diagnóstico gen ético preimplantacional en parejas con abortos de, repetición de causa desconocida. En una segunda parte se presentan dos trabajos en los que se valoran las anomalías cromosómicas en espermatozoides.Los objetivos de la primera parte de esta tesis doctoral fueron estudiar si existía un incremento de anomalías cromosómicas embrionarias en fases previas a la implantación, valorar su efecto en el desarrollo embrionario y evaluar el posible beneficio clínico en estas parejas mediante la transferencia de embriones euploides. Por otro lado se estudió la incidencia de anomalías cromosómicas en muestras de espermatozoides también en casos de aborto de repetición de causa desconocida. En base a los resultados obtenidos, pudimos concluir que efectivamente existe un aumento de embriones cromosómicamente anormales, comparado con nuestra población control y que estas anomalías influyen negativamente en el desarrollo embrionario hasta blastocisto. Con la transferencia de embriones normales se consiguió reducir la tasa de aborto hasta los valores normales en parejas sin esta patología. Los objetivos de la segunda parte se centraron en evaluar la incidencia de anomalías cromosómicas en los espermatozoides de parejas con esta patología y valorar también la relación de los parámetros seminales con el incremento de anomalías cromosómicas. Encontramos un aumento de anomalías cromosómicas en algunas de estas parejas, fundamentalmente para los cromosomas sexuales. Las anomalías presentaron una mayor relación con la concentración de espermatozoides , siendo mayor su incidencia con concentraciones menores de 5 millones de espermatozoides/ml.

Autor: ENJUANES GUARDIOLA ANA .
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UB.

Resumen: La osteoporosis postmenopáusica se relaciona claramente con el déficit estrogénico que se produce con la pérdida de la función ovárica en la mujer tras la menopausia. Además, en los últimos años, se ha observado que la biosíntesis extragonadal de estrógenos ejerce una importante función sobre el metabolismo óseo, tanto en mujeres postmenopaúsicas como en varones. Así, la expresión de aromatasa por parte de las células óseas podrían determinar la concentración local de estrógenos en el tejido óseo, y por lo tanto, jugar un papel muy importante tanto en la osteoporosis postmenopáusica como en la osteoporosis masculina. Por este motivo, se ha estudiado la capacidad de síntesis de estrógenos por parte del tejido óseo y su regulación por distintas hormonas y citocinas. Se ha observado que los osteoblastos humanos normales in vitro expresan el gen CYP19 en condiciones no estimulantes. La dexametasona incrementa la expresión del gen CYP19 en osteoblastos humanos normales in vitro y la presencia de suero tiene un efecto sinérgico sobre este efecto estimulador. En la línea celular de osteosarcoma MG-63 la dexametasona sólo incrementa la expresión del gen CYP19 en presencia de suero. La vitamina D incrementa la expresión del gen CYP19 en osteoblastos humanos normales in vitro y en las cuales MG-63. Esta estimulación es inhibida por la presencia de FCS. La testosterona y el 17beta-estradiol incrementan la expresión del gen CYP19 en osteoblastos humanos normales in vitro, siendo de mayor magnitud el efecto de la testosterona. Esta estimulación es inhibida por el FCS. En cambio, estos dos tratamientos no afectan la expresión del gen en la lína celular MG-63. La IL-1beta no afecta la expresión del gen CYP19 en osteoblastos humanos normales in vitro ni en la línea celular MG-63. El TNFalfa inhibe la expresión del gen CYP19 en osteoblastos humanos normales in vitro, tanto en ausencia como en presencia de FCS. En cambio, no afecta la expresión del gen en la línea celular MG-63. Los osteoblastos humanos normales in vitro expresan los dos receptores de la leptina, el OB-Rs y el OB-Rl. La leptina no afecta la expresión del gen CYP19 en estos osteoblastos ni en la línea celular MG-63. Los promotores I.4, I.2, I.3 y pII del gen CYP19 son los que median la expresión de este gen en osteoblastos humanos in vitro. El promotor I.4 se utiliza en los osteoblastos cultivados en condiciones basales y bajo los tratamientos con dexametasona, vitamina D, testosterona, 17beta-estradiol, IL-1beta o TNFalfa. El promotor I.3 se utiliza en los osteoblastos cultivados en condiciones basales, con dexametasona y/o con vitamina D. El promotor I.2 se utiliza en los osteoblastos tratados con dexametasona o testosterona. El promotor pII se utiliza principalmente en los osteoblastos tratados con FCS o con IL-1beta. Los promotores I.1 y I.6 del gen CYP19 no son utilizados en osteoblastos humanos in vitro bajo ninguno de los tratamientos con FCS, dexametasona, vitamina D, testosterona, 17beta-estradiol, IL-1beta o TNFalfa. La región promotora I.4 más el exón I.4 median la estimulación por dexametasona en osteoblastos humanos, siendo el exón I.4 relevante para esta estimulación. La región promotora I.3 más el exón I.3 median la estimulación por vitamina D y la presencia del exón I.3 es importante para que esta estimulación se produzca. El promotor pII puede tener una gran actividad transcripcional en osteoblastos humanos, aunque es inhibida o reprimida por la secuencia situada a 5' y comprendida entre las posiciones -221 y -867. El promotor I.6 muestran una actividad transcripcional muy baja en osteoblastos humanos y no responde a ninguno de los tratamientos con FCS, dexametasona, vitamina D, testosterona, 17beta-estradiol, IL-1beta o TNFalfa. Finalmente, se han identificado dos nuevos polimorfismos en la región promotora del gen CYP19 (-790 G/A y -909 A/C), que se han denominado Aro1 y Aro2. El polimorfismo Aro1 está asociado con la densidad mineral ósea de columna de mujeres postmenopaúsica de una población del entorno de Barcelona. Las mujeres con genotipo GG o GA del polimorfismo Aro1 (-913 G/A) tienen una menor DMO lumbar que aquellas con genotipo AA.

Autor: MONTFORT ROCA M. MAGDALENA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: DEPARTAMENT DE GENÈTICA. FACULTAT DE BIOLOGIA. UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Autor: VIVES BAUZÁ CRISTÒFOL.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA - UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Autor: RIFE SOLER MARIA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL CLINIC DE BARCELONA.

Resumen: Ésta tesis es una contribución al conocimiento del Síndrome del cromosoma X frágil. Por un lado se exponen las posibilidades de introducicón de cribajes poblacionales para el síndrome mediante metodologías diferentes. También se aportan nuevos datos de expresión de la proteína FMRP durante el desarrollo embrionario que muestran su importancia durante éste periodo y reflejan la variabilidad fenotípica del síndrome.

Autor: ARMSTRONG MORÓN JUDITH SILVIA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL SANT JOAN DE DÉU.

Resumen: El síndrome de Rett (RTT), es una enfermedad del desarrollo neurológico, de inicio precoz y que afecta casi exlusivamente a las niñas. Tiene una incidencia de 1:12000, y constituye la segunda causa de retraso mental profundo más frecuente en mujeres después del síndrome de Down. La enfermedad tiene dos presentaciones clínicas, la forma clásica y distintas formas atípicas (forman congénita, variante con epilepsia precoz, variante con lenguaje conservado, forma fruste y variante con regresión tardía). El diagnóstico del RTT se realiza mediante criterios clínicos, que incluyen criterios necesarios, criterios de apoyo y criteiros de exclusión. El objetivo principal de esta tesis en el año 1999 era la identificación del gen responsable de la enfermedad, pero el gen fue descrito en octubre de 1999 por Amir et al., con lo que se modificaron los objetivos iniciales. Actualmente sabemos que el RTT es una enfermedad dominante ligada al cromosoma X, causada en un porcentaje muy elevado por mutaciones de novo en la región codificante del gen MECP2. MECP2 codifica para la proteína methyl-CpG-binding protein 2 (MeCP2). La proteína contiene dos dominios funcionales: el dominio de unión a DNA (MBD) y el dominio catalítico (TRD). La MeCP2 se une selectivamente a dinucleótidos CpG metilados y forma un complejo inhibidor mediante su unión a diferentes correspresores, el cual modifica la estructura de la cromatina y reprime la expresión de otros genes. MECP2 es, por lo tanto, un gen que reprime la trascripción génica. Hemos identificado mutaciones en la región codificante de MECP2 en el 70% de pacientes con RTT, y hemos observado que el porcentaje de detección de mutaciones varía según la forma clínica de la enfermedad. Las mutaciones se producen de novo en más del 99% de los casos. A pesar de esto y debido al riesgo de mosaicismo germinal, el diagnóstico prental está indicado en el RTT, independientemente del sexo del feto, siempre que se conozca la mutación de la hermana afectada. En la presente tesis, se ha puesto de manifiesto que varones con cariotipo normal pueden presentar RTT clásico debido a mosaicismo somático para una mutación en el gen MECP2, y que delecciones en pauta en la región C-terminal de la proteína MeCP2 pueden ser variantes polimórficas sin relación con la enfermedad. El Servicio de neurología del Hospital Sant Joan de Dèu de Barcelona, elaboró un checklist con la finalidad de establecer unos baremos para puntuar las distintas variables clínicas características del RTT, y poder definir el grado de afectación de las pacientes. Para realizar las correlaciones genotipo-fenotipo, las pacientes se clasificaron en dos grupos, según el tipo de mutación (portadoras de mutaciones de cambio de aminoácido y portadores de mutaciones que producen proteína truncada) y según la localización de las mutaciones (mutaciones localizadas dentro de MBD o TRD). Hasta el momento, el análisis de mutaciones llegado a cabo por todos los grupos que trabajamos en el RTT se ha restringido a la región codificante del gen MECP2 (exones 2, 3 y 4), q ue da lugar a la proteína. En esta tesis hemos estudiado la región promotora del gen MECP2, y se ha detectado un cambio en una paciente con RTT clásico que podría tener un efecto patogénico y ser el causante de la enfermedad en la paciente: el cambio -5134 del C encontrado en el exón 1 del gen MECP2 afecta la diana de un factor de trascripción específico del sistema nervioso y provoca una disminución en su afinidad de unión. Se ha detectado también, la existencia de un splicing alternativo en la región 5' de MECP2 que no es específico de tejido, y que podría dar lugar a dos isoformas de MeCP2 divergentes en N-terminal. Desconocemos todavía si el RTT presenta homogeneidad o heterogeneidad genética.

Autor: BRAVO ROMERO M. JOSÉ.
Año: 2003.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DPTO. BIOQUÍMICA, B.MOLECULAR, QCA. ORGÁNICA E INMUNOLOGÍA. FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La brucelosis humana es una antropozoonosis que constituye un gran problema de salud pública por el número de casos que surgen cada año y por su tendencia a la cronicidad, así como a la aparición de un porcentaje significativo de fracasos terapéuticos, recidivas y complicaciones. La brucelosis está considerada como enfermedad endémica en los Países de la Cuenca Mediterránea, incluyendo a España Dentro de la Península, la incidencia de esta enfermedad en la Comunidad Andaluza y sobre todo en Málaga, supera la media del resto de las provincias andaluzas. El hecho de que en un brote familiar no todos los miembros expuestos desarrollen la enfermedad o que las complicaciones sean tan diferentes en unos individuos y enotros nos sugiere pensar en una susceptibilidad genética individual. En el presente trabajo se ha estudiado por primera vez la asociación de diferentes variantes genéticas de genes que codifican moléculas que participan en la respuesta inmune y la susceptibilidad o protección frente a la brucelois humana y sus complicaciones. Se consideraron candidatos los siguientes genes polimórficos:-genes que codifican para las moléculas de presentación antigénica de la vía exógena, HLA clase II (DRB1, DQB1 y DQA1):genes que codifican para las citocinas TNF-a, IFN- y e IL-10; genes que codifican para moléculas implicadas en el procesamiento, transporte y presentación de la vía endógena (LMP, TAP y HLA clase I). Los resultados de los análisis comparativos de las distribuciones de frecuencias de los genes candidatos nos mostraron que las variantes de los genes HLA clase II, LMP y TAP no influyen en la susceptibilidad o protección para la brucelosis humana en la serie estudiada. En resumen y como conclusión encontramos: -Variantes genotípicas asociadas a susceptibilidad, como son el genotipo TNFA-308.1/2 y el genotipo IFNG+874, ambos genotipos con frecuencia elevada en pacientes respecto a controles sanos. -Variantes genotípicas asociadas a protección como el alelo HLA-A*30,alelo con frecuencia aumentada de forma significativa en pacientes cuando se comparó con controles. -Variantes genotípicas asociadas a pronóstico como es el alelo HLA-B*39, con frecuencia elevada en pacientes con complicaciones osteoarticulares de la enfermedad. Creemos que la asociación genética descrita en este trabajo, hace que la brucelosis humana pueda ser considerada como un modelo para profundizar en el aspecto inmunogenético de la enfermedad, ya que además de conocer el factor etiológico, parecen existir variantes genéticas predisponentes, protectoras y determinantes del curso de la misma.

Autor: VIRGOS MATILLA CARMEN.
Año: 2003.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA I CIENCIES DE LA SALUT.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.

Resumen: El tema central d'aquesta tesi ha estat l'anàlisi de les variants en el gen receptor domini discoidina 1 (DDR1) en l'esquizofrènia i de les eines necessàries per l'estudi d'aquesta variabilitat. Dins del marc de la hipòtesi del neurodesenvolupament per l'esquizofrènia, el raonament que ens va empènyer a suggerir DDR1 com a gen candidat per aquesta malaltia va raure en la seva localització cromosòmica a 6p21.3, el seu patró d'expressió diferencial durant el neurodesenvolupament i el fet que es tractés d'un receptor tirosina quinasa de resposta a col.lagen, lligand de DDR1, el qual s'havia demostrat que modula la diferenciació i proliferació de cèl.lules neuroepitel.lials glials. En un primer estudi es va realitzar una anàlisi mutacional de les regions exòniques i exó-intró de DDR1 en un total de 100 malalts d'esquizofrènia. La tècnica emprada va ser la seqüènciació de pools de mostres de DNA. Es van identificar 17 variants: 16 SNPs i una deleció de 2 pb. En un segon estudi es va valorar si polimorfismes en el DDR1 estaven associats a l'esquizofrènia en una mostra de població espanyola (297 casos, 298 controls). Es van detectar diferències significatives en la distribució d'haplotips entre els dos grups d'estudi (p=0.002, 500 permutacions, Phase), però no en la distribució al.lèlica o genotípica de les variants individuals. A més, el LD detectat entre la variant N502S i la resta d'SNPs va ser baix en el grup dels casos però proper a 1 en el grup de controls. Per descartar que l'associació observada es pogués explicar per una estratificació genètica de la mostra d'estudi, es va aplicar el mètode descrit per Pritchard i col.laboradors. Els resultats no van evidenciar la presència de subpoblacions en la mostra estudiada. Malgrat no es va trobar una correlació directa entre cap dels al.lels o haplotips de la regió DDR1 i l'esquizofrènia, els resultats apunten que d'altres variants en DDR1 o regions flanquejants podrien tenir un paper en l'etiologia l'esquizofrènia. En el tercer estudi es va explorar la possibilitat de combinar els fluorocroms eTag™ amb la tècnica Invader® per l'anàlisi d'SNPs. Es va desenvolupar i optimitzar el protocol per l'anàlisi simultània de 10 SNPs. Es van genotipar un total de 480 mostres i els resultats es van comparar amb els obtinguts mitjançant el mètode PCR-RFLP. No es van observar discrepàncies en els resultats. Aquest és el primer treball on es demostra que el mètode anomenat eTag Multiplex Invader SNP Assay és una aproximació vàlida pel genotipatge d'SNPs. A part de les implicacions científiques i metodològiques, aquest treball de recerca posa de manifest la importància de l'epidemiologia genètica i dels estudis de casos i controls en malalties complexes, com l'esquizofrènia.

Autor: LOMAS HUERTAS JESÚS.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO LA PAZ.

Resumen: Los estudios citogenéticos y mutacionales realizados hasta el momento no han conseguido explicar la génesis de una parte de los meningiomas, a través del mecanismo clásico de mutación más deleción del gen NF2. También y aunque se ha asociado la pérdida de heterocigosidad en otros cromosomas con la progresión tumoral hacia formas de grado II y III, hasta ahora no se han identificado con claridad, de entre los posibles genes candidatos ubicados en esos cromosomas, aquellos responsables de dicha progresión. Por todo esto se ha planteado llevar a cabo, en una serie de 105 meningiomas esporádicos: un análisis mutacional (en genes localizados en 1p y 22q) utilizando las técnicas de PCR-SSCP y un análisis epigenético, en las islas CpG de una serie de genes relacionados con el fenómeno turmoal, utilizando la metodología MSP. Todo ello con vistas a despejar las incógnitas planteadas, proponer mecanismos alternativos de pérdida de expresión en el gen NF-2 y definir un patrón de metilación específico de meningiomas. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que: 1,- La mutación del gen NF2 junto con la metilación aberrante del promotor de este gen tiene un papel decisivo en la génesis de meningiomas esporádicos. 2,- La hipermetilación, en la mayor parte de los genes estudiados, jugaría un importante papel en la patogénesis y progresión de meningiomas. 3,- El papel que juega TP73 en la progresión de meningiomas estaría relacionado más con la pérdida de expresión mediada por hipermetilación. Este mecanismo de inactivación podría caracterizar a un subgrupo de miningiomas de grado I que evolucionarían hacia formas atípicas (grado II). 4,- Los genes DAPK, MGMT, NF2, THBS1, TUMP3 y TP73 podrían ser incluidos en un patrón de metilación propio de miningiomas.

Autor: FERNÁNDEZ LÓPEZ LAURA.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE POSTGRADO.

Resumen: La expansión de repeticiones de trinucleótidos es la base molecular de algunas enfermedades genéticas hereditarias, como la distrofía miotónica tipo 1 (DM1) y el síndrome del X frágil (FXS). Los alelos expandidos asociados a enfermedades son inestables tanto en la línea somática como en la germinal, con una clara tendencia hacia las expansiones. La tasa de expansiones está directamente relacionada con el tamaño del alelo expandido y con la edad del individuo. Muchos factores genéticos pueden afectar a la inestabilidad de repeticiones de trinucleótidos, pero también factores ambientales podrían estar inestabilidad. Para investigar el efecto de factores ambientales en la inestabilidad de repeticiones de trinucleótidos, estudiamos: * El efecto de la MMC en la inestabilidad de las secuencias (CTG)n y (CGG)n endógenas, asociadas a la DM1 y al FXS, respectivamente, en líneas celulares deficientes y no deficientes en el sistema de reparación de falsos apareamientos (MMR), con un número normal de repeticiones. * El efecto de la MMC en la inestabilidad de las repeticiones (CTG)n en alelos normales y patogénicos en líneas celulares linfobastoides derivadas de pacientes DM1 a lo largo del tiempo. Vimos que las MMC induce inestabilidad en secuencias cortas de repeticiones de trinucleótidos en la línea celular SW480, por un mecanismo en trans independiente de MMR, y en la línea HCT116, en menor grado , por un mecanismo dependiente de la deficiencia en hMLH1. También vimos que la MMC promueve la inestabilidad en secuencias cortas de líneas celulares linfoblastoides derivadas de pacientes, y que acelera el proceso de expansión de las repeticiones CTG en alelos patogénicos. Esta tesis es la primera demostración de inducción por mutángenos de inestabilidad de repeticiones de trinucleótidos asociadas a enfermedades genéticas humanas.

Autor: GARCÍA LIÉVANA JOB.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR "SEVERO OCHOA".

Resumen: En esta Tesis, la técnica de Representación Diferencial de RNA menajeros o Differential Display RT-PCR (DD RT-PCR) se llevó a cabo para identificar genes específicamente expresados entre líneas celulares derivadas de cariocarinomas humanas (JEG-3, JAR and BeWo) y células de placenta normal a término. Pocas diferencias fueron detectadas entre los perfiles de expresión de las tres líneas de coriocarcinomas y la mayor parte de los genes expresados diferencialmente, fueron detectados en placenta normal a término. Un total de 36 fragmentos de cDNA fueron aislados y analizados mediante comparación con las bases de datos de secuencias disponibles. De estos fragmentos, 19 secuencias correspondieron a regiones en el genoma humano que codifican para genes potencialmente nuevos. La expresión diferencial de 3 nuevos genes humanos seleccionados, en las regiones cromosómicas 16q12,9q32 y 6q22, fue confirmada mediante RT-PCR. Las otras 17 secuencias mostraron una alta similitud con genes humanos ya identificados (como PSG3, FN1, PAI-2). Interesantes, las funciones de cinco genes y sus productos (genes IK, TRA-1, HERPUD1, UBA2 y TRAP240) no han sido caracterizados en tejidos placentario. Además, nuevas isoformas de RNAs mensajeros cortados y empalmados de manera alternativa fueron detectados para los genes IK, TRAP240 y PLAC3. La expresión diferencial del gen PAI-2, un inhibidor de proteasas de serina, entre las líneas de cariocarcinoma fue también confirmada. Un mayor análisis experimental de uno de los posibles genes nuevos, permitió la identificación de un nuevo cDNA en la cadena antisentido en la región cormosómica 9q32. Reacciones de 5' y 3' RACE se llevaron a cabo y una secuencia parcial de 1.2 kb se estableció para este nuevo RNA mensajero. Este nuevo gene no contiene intrones en su secuencia. La secuencia de la proteína (103 aminoácidos) generada a partir del marco de lectura abierto no mostró similitud con ninguna proteína conocida o con dominios conservados en otras secuencias proteína conocida o con dominios conservados en otras secuencias proteicas. Mostró alrededor de un 21% de similitud con la proteínas RAG-1 del pez cebra (Zebra fish). Este nuevo gene fue designado como RLPLAC (de RAG1-like gene isolate from placenta). En reacciones de RT-PCR utlizando RNA de mútliples tejidos humanos y oligonucleótidos específicos diseñados, la expresión ubicua de este nuevo transcrito fue determinada. Una proteína de fusión con la proteína en el retículo endoplasmático. La función de este nuevo gene en la placenta y otros tejidos permanece por ser determinada. En general, los genes identificados en este trabajo por DD RT-PCR serán de interés para una mejor comprensión de la biología del trofoblasto y de la formación de tumores placentarios (coriocarcinomas).

Autor: PEÑAGARIKANO AHEDO OLGA.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIA Y TECNOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA.

Resumen: El síndrome X frágil es la forma más común de retraso mental hereditario. Está principalmente causado por la expansión de una repetición trinucleotídica (CGG) en la región 5'UTR del gen FMR1, localizando en el cromosoma X. Se han identificado diversos factores que influyen en la expansión de la repetición, tales como la longitud de la misma, su pureza y su asociación con determinados marcadores flanqueantes. Por tanto, la prevalencia de determinados alelos potencialmente inestables en una población puede afectar la incidencia de la enfermedad. El presente estudio muestra el análisis de los factores, conocidos hasta la fecha, que influyen en la expansión de la consecuencia repetitiva en una muestra de población vasca. Además, se han analizado muestras de diferente origne étnico con el objetivo de aportar una visión evolutiva de los factores moleculares que influyen en la generación de alelos inestables.

Autor: GARCÍA PLANELLS JAVIER.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOMEDICINA Y VALENCIA - CSIC.

Resumen: Las mutaciones dinámicas son un amplio grupo de enfermedades hereditarias humanas. Dentro de este grupo, las enfermedades producidas por la expansión del triplete CAG son las más numerosas y suelen tratarse de enfermedades neurodegenerativas, como son el caso de las ataxias espinocerebelosas (SCA) y la enfermedad de Huntington (HD). En este trabajo se han estudiado, a través de una amplia serie de enfermos de SCA y HD, diversos factores genéticos y espedimiológicos de este tipo particular de enfermedades. Se han estudiado las mutaciones responsables de ellas y su variabilidad, tanto en la población normal como en las poblaciones de afectados. Se ha procedido al cartografiado genético de una ataxia espinocerebelosa (SCA) presente en una amplia familia, así como la descripción de diversos aspectos de la mutación responsable de esta forma de SCA, SCA6. Finalmente se ha estudiado la dinámica poblacional de las mutaicones SCA8 y HD en nuestra serie, aportándose distintas hipótesis que explicarían la dinámica de esas mutaciones en la Comunidad Valenciana.

Autor: TEJEDOR HERNÁNDEZ DIEGO.
Año: 2003.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS/UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA.

Autor: MARTÍNEZ QUINTANA EFRÉN.
Año: 2003.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: CIENCIAS MEDICAS Y DE LA SALUD.
Centro de realización: CENTRO DE CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: Introducción: La cardiopatía isquémica es una enfermedad de alta prevalencia en nuestra sociedad. En este trabajo se ha pretendido desentrañar el papel que juegan diversos polimorfismos genéticos en la evolución clínica de los pacientes con infarto de miocardio, y su relación con los clásicos factores de riesgo cardiovascular. Metodología: 356 pacientes diagnosticados de infarto de miocardio fueron seguidos durante 5 años para analizar la influencia de cuatro polimorfismos genéticos (ECA, AT1R, PAI-1 y GPIIIa) sobre su evolución clínica. El endpoint fue presentar un segundo evento coronario (infarto de miocardio, angina, insuficiencia cardiaca o arritmia de origen isquémico). Resultados: Durante los 5 años de seguimiento, 106 pacientes presentaron algún tipo de evento coronario, siendo el más frecuente la angina inestable. Ninguno de los polimorfismos analizados mostró asociación con los factores clásicos de riesgo cardiovascular. En el análisis univariante de supervivencia (Kaplan-Meier) realizado en la serie completa, resultaron significativos la edad al infartar, los antecedentes familiares, la diabetes mellitus y la terapia fibrinolítica en el momento del primer infarto. El polimorfismo de la ECA y la hipertensión sólo alcanzaron significación marginal. En el análisis multivariante de supervivencia (Cox), y tras el ajuste por las variables que dieron significación en el análisis univariante, pudo demostrarse que los individuos con el genotipo DD de la ECA tuvieron un riesgo 1.5 veces superior a los No-DD de presentar una evolución desfavorable, y que en los individuos D con los genotipos No-AA del ATIR, No-A1A1 de la GPIIIa, o con ambos (25% de la serie) este riesgo fue el doble. Conclusiones: Los polimorfismos de la ECA, AT1R y de la GPIIIa juegan un papel clave en la evolución de los pacientes, y permiten detectar un grupo de pacientes (25% del total) que están más expuestos a una evolución clínica desfavorable.

Autor: LAHORTIGA AYERRA IDOYA.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS. DEPARTAMENTO DE GENÉTICA. UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Las leucemias mieloblásticas agudas (LMA) son un grupo de enfermedades heterogéneas que surgen como consecuencia de mutaciones somáticas adquiridas en células progenitoras hematopoiéticas. A pesar de los avances realizados en el conocimiento de los mecanismos de transformación leucémica en LMA y del desarrollo de nuevas terapias, el porcentaje de pacientes que recaen es elevado. El análisis citogenéticos es el factor pronóstico independiente más importante, y permite definir tres grupos pronósticos: favorable, intermedio y desfavorable. Un 65% de los pacientes con LMA presenta alteraciones citogenéticas asociadas a los grupos intermedio y desfavorable. Nuestro objetivo ha sido la caracterización de reordenaciones cromosómicas incluidas en esos grupos pronósticos. En concreto, estudiar las regiones 1p36, 3q21, 11p15, 12q13 y 16p13 mediante hibridación in situ con fluorescencia (FISH), y utilizar otras técnicas moleculares para caracterizar los genes implicados en algunas reordenaciones de interés. El análisis de la región 1p36 ha permitido definir una región de 2,5 Mb, donde se agrupan los puntos de rot--- de 78% de los pacientes, que presenta una elevada frecuencia de ciertas repeticiones genómicas que pueden explicar tendencia a la agrupación. Se ha demostrado que hay heterogeneidad en los pacientes con t(1;3)(p36;q21) y que expresión ectópica de MEL1 (1p36) no es el mecanismo molecular implicado, al contrario de los sugerido previamente. El estudio de la región 3q21 ha demostrado que hay una gran heterogeneidad entre los pacientes con síndrome 3q21q26, tanto en la localización de los puntos de rotura como en la expresión de los genes cercanos a estos puntos rotura. La expresión ectópica del gen EVI1 (3q26) no es común a todos los casos, lo que sugiere un mecanismo más complejo, en el cual GATa-2 podría estar implicado, ya que este gen se sobreexpresaba en 83% delos casos analizados. Además, el análisis de la región 11p15 ha permitido describir un nuevo gen reordenado con NUP98 en t(10;11)(q25Mp15), el gen ADD3.

Autor: CALVO FERRER M. ALICIA.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Dadas las alteraciones descritas para el cluster de impronta del gen IGF2 en el hepatocarcinoma (HCC), se planteó la hipótesis de que las alteraciones de la impronta genómica supusieran un mecanismo general en la patogénesis de la cirrosis y el HCC. Para comprobarlo se han investigado en hígados sanos, cirróticos y en HCC las posibles alteraciones de la expresión y de la impronta de tres genes improntados alterados en otros procesos tumorales: ARHI/NOEY2, p73 y PEG1/MEST, mediante RT-PCR convencional, RT-PCR en tiempo real y RFLP. ARHI/NOEY - Estudio de la Expresión génica: Los resultados obtenidos sugieren que el gen ARHI se expresa de forma constitutiva en el hígado y que su expresión no se altera en el desarrollo del daño hepático. - Estudio de la Impronta genómica: Los resultados parecen indicar que la expresión constitutiva de ARHI en el hígado es monoalélica y que este estado no se altera enla enfermedad hepática. P73 - Estudio de la Expresión génica: Se ha observado que el promotor activo en el hígado es TA-p73 y que la isoforma TA-p73, con función supresora de tumor, se expresa de forma constitutiva. En la cirrosis y en el hepatocarcinoma se produce una exresión de novo de la isoforma oncogénica p73-*ex2, lo que podría deberse a una alteración de los factores de corte y empalme alternativos necesarios para su procesamiento. La expresión de p73-*ex2 en un hígado sano podría constituir un factor de predisposición para el desarrollo de un HCC, ya que su expresión seh ha visto inducida en los hígados sanos que albergan un HCC. - Estudio de la Impronta genómica: La expresión de p73 en el hígado es bialélica por lo que la impronta no está implicada en las alteraciones de expresión observadas. PEG1/MEST - Estudio de la Expresión génica: Se ha observado en el hígado sano se expresan de forma constitutiva tanto la isoforma 1 como la isoforma 2 de PEG1. En la cirrosis se produce un aumento de la isoforma 1, mientras que la isoforma 2 está disminuida en la cirrosis y en el HCC. - Estudio de la Impronta genómica: La isoforma 1 de PEG1 presenta una expresión improntada que no se altera en la enfermedad hepática mientras que la impronta de la isoforma 2 es polimórfica en el hígado y podría constituir un factor de susciptibilidad al desarrollo de la cirrosis: los individuos con impronta materna de la isoforma 2 (14% de los controles y 0% de los pacientes) estarían protegidos mientras que los individuos con impronta materna de la isoforma 2 (14% de los controles y 0% de los pacientes) estarían protegidos mientras que los individuos con impronta paterna de la isoforma 2 (14% de los controles y 44% de los pacientes) serían más susceptibles. Además, el estado de la impronta de la isoforma 2 se relaciona con los niveles de expresión de la isoforma 1 de PEG1.

Autor: SANDE LANDEIRA ESTHER.
Año: 2002.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTADE DE BIOLOGÍA.

Resumen: El estudio de la distribución de las asociaciones no al azar entre alelos de diferentes loci (desequilibrio gamético, DG) a lo largo de los cromosomas, es fundamental para conocer su arquitectura multiloci, así como para diseñar e interpretar una experiencia de localización de genes implicados en enfermedades. En el presente estudio se ha llevado a cabo el análisis del DG entre 11 loci microsatélites (DXS1211, DXS1192, DXS1232, DXS1205, DXS1227, DXS8043, DXS998, DXS1193, DXS8091, DXS8069, DXS8061) Distribuidos a lo largo de una extensa región cromosómica que comprende aproximadamente 21,5 cM (19 Mb) de la región Xq25-28 del cromosoma X humano. La caracterización de la distribución de las asociaciones no al azar se realizó a partir de una elevada muestra (N=300) de varones residentes en Galicia. Además, se procedió al análisis de la estructura genética de la población mediante el estudio de los mismos marcadores en una muestra de genotipos (N=100) de mujeres pertenecientes a la misma población. El desequilibrio para cada par de loci microsatélites se analizó teniendo en cuenta el signo de las asociaciónes interalélicas, procedimiento que confiere a los tests estadísticos de significación una mayor potencia y permite una estimación más precisa de su intensidad. Los resultados del análisis sugieren que el desequilibrio entre pares de loci microsatéliles se encuentra ampliamente distribuido, de manera basante herogénea, a lo largo de la región analizada. El 51% de los pares de loci se encuentran en desequilibrio significativo, con un valor de intensidad promedio de 0,10 +- 0,01, en términos de D'(+). El porcentaje de desequilibrios interalélicos también fue elevado, un 20%, con un valor de intensidad promedio en términos de D'ij(+), de 0,40 +- 0,02. La frecuencia del DG detectada es sustancialmente superior a la descrita previamente en la literatura para marcadores microsatélites del cromosoma X en otras poblaciones europeas que han experimentado un proceso de expansión. Probablemente, esta discrepancia es más una consecuencia de los distintos métodos analíticos utilizados que de las diferencias de los niveles de desequilibrio entre poblaciones. El análisis de la estructura genética de la población no detecta desviaciones de las proporciones Hardy-Weinberg, lo cual permite excluir ciertos factores como apareamientos cansanguíneos, la mezcla de poblaciones y migración como causante de los desequilibrios detectados. La elevada tasa de mutación de los microsatélites, así como su compleja dinámica mutacional, parecen ser los agentes fundamentales en el origen de los DG detectados. Esta idea se ve apoyada por la existencia de ciertos patrones de las asociaciones interalélicas dependientes de la frecuencia y tamaño de los alelos. De hecho, un 82% de las asociaciones interloci y un 71% de las interalélicas están provocadas por alelos cuya frecuencia es inferior al 3%. La inestabilidad de los microsatélites también parece ser la causa de que no se haya detectado ningún tipo de correlación entre la intensidad del desequilibrio y la distancia, si bien no se pueden descartar factores tales como la diferente edad de los desequilibrios o agentes evolutivos como la selección natural con efectos no uniformes a lo largo del cromosoma. Por este motivo, la distribución del DG de background a lo largo de regiones extensas de cromosomas humanos es compleja y no sigue reglas que dependen simplemente de la frecuencia de recombinación.

Autor: RODRÍGUEZ MARTÍNEZ LAURA M. .
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: GENÉTICA, FACULTAD DE BIOLOGÍA, UNIV. COMPLUTENSE.

Resumen: Desde el inicio de la Citogenética, en 1956, hasta la actualidad, han sido muchos los avances en el estudio de los cromosomas. Tales que hoy en día se trabaja con cromosomas cada vez menos condensados (prometafásicos) (850 bandas), es decir con mayor número de bandas, por lo que las posibilidades de identificación de alteraciones estructurales cada vez más pequeñas, ha sido espectacular. Actualmente se trabaja con cromosomas de alrededor de 850 bandas, lo que permite detectar alteraciones cromosómicas de alrededor de 5 megabases, que hoy son visibles al microscopio y hace unos años pasaban totalmente desapercibidas. Del mismo modo las técnicas de Biología Molecular también han evolucionado y concretamente la Hibridación in situ con fluorescenica (FISH) nos ha permitido aumentar la capacidad para identificar puntos de rotura y anomalías estructurales incluso en cromosomas de 850 bandas. Así estas técnicas han revolucionado el funcionamiento habitual de todos los laboratorios de citogenéticas. Por ello, hoy se defiende el uso conjunto de técnicas citogenéticas de cromosomas de alta resolución (850 bandas) y moleculares para la mejor interpretación de los resultados en pacientes con anomalías cromosómicas, marcadores o con reordenamientos cromosómicos complejos (Kuznetzova T. 1995). El laboratorio se citogenética del ECEMC esta funcionando desde enero de 1981 (Martínez-Frías y Salvador, (1987). Desde aquel año, este laboratorio viene recibiendo muestras de diferentes tejidos para el análisis citogenético, procedentes de más de 40 hospitales colaboradores, recibiendo como término medio al año unas 500 muestras de recién nacidos que presentaron defectos congénitos, a todas ellas se les realiza un cariotipo de alta resolución y se les aplican las técnicas de FISH que requieran. Para la realización del presente proyecto se han recopilado datos procedentes de 149 casos cuyo estudio citogenético reveló un exceso de material cromosómico (excluyendo trisomías 13, 18 y 21). Una vez seleccionados los casos, se han separado en distintos Grupos en función del material extra del que eran portadores. Se han estudiado distintas variables en cada uno de los grupos, así como en un grupo control de niños malformados con cariotipo normal, y en otro grupo control de niños sanos. Y se han estudiado las distintas manifestaciones clínicas presentes en cada uno de los grupos. De este modo hemos observado que sobre un total de 3.426 cariotipos realizados a RN, 149 (4,35%) presentaban un exceso de material y que todos los grupos estudiados presentaban alteraciones clínicas que afectaban a cualquier estructura corporal aunque con diferentes frecuencias. Además hemos constatado que las frecuencias con las que se presentan estos excesos de material cromosómico, son diferentes en los distintos cromosomas y eso nos hace hipotetizar que algunas de las reorganizaciones observadas en nuestros casos podrían ser consecuencia de la existencia de cicatrices o "LF", que se manifiestan bajo ciertas condiciones aún desconocidas (Dutrillaux y cols. 1980). Es posible que las diferencias en cuanto a la frecuencia con la que se observan alteraciones cromosómicas estructurales en niños recién nacidos, se relacione con la presencia y número de los considerados lugares frágiles en cada uno de los cromosomas. No obstante y dado que disponemos de la posibilidad de acumular casos de niños con alteraciones estructurales de todo tipo, seguiremos indagando la relación de esas alteraciones con los cromosomas que se han mantenido inalterables a lo largo de la evolución para ir avanzando en la comprensión de las bases biológicas de las alteraciones estructurales de los cromosomas humanos.

Autor: CRUZ BENAYAS M. ADORACIÓN DE.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La hipertensión arterial constituye un problema sanitario de gran importancia por su alta prevalencia, complejidad y afectación multiorgánica. Esta potología presenta una herencia multifactorial, en la que diferentes alelos de varios genes interaccionan entre sí y con varios factores ambientales. Los objetivos planteados en este trabajo fueron: * Analizar en una muestra de pacientes hipertensos los aspectos epidemiológicos generales y las manifestaciones clínicas de su enfermedad. * Estudiar si en esa influencia se podría encontrar (subyacente) el efecto de la impronta genética. * Detectar la posible influencia de los factores genéticos implicados en la enfermedad y en los distintos rasgos de su manifestación clínica. Para llevar a cabo este estudio, se analizó una muestra de 528 pacientes hipertensos, distribuidos en diferentes grupos según sus antecedentes familiares, aplicándose diversos tests estadísticos. De esta forma, se llegó a las siguientes conclusiones: 1,- En el estudio unidimensional de la muestra es mayor el número de mujeres: la edad media de aparición de la hipertensión es más temprana en varones; existe un mayor número de pacientes con hipertensión arterial leve; los órganos afectados con mayor frecuencia son el corazón y el órgano de la visión; y las enfermedades que se asocian con mayor probabilidad a la hipertensión son la obesidad seguida de la hiperlipemia. 2,- La mayor parte de los familiares de los pacientes analizados están libres de la enfermedad, salvo un número elevado de padres que sí están afectados. 3,- Distintos rasgos de la hipertensión presentan un componente hereditario en los pacientes de la muestra. Cuando los progenitores son hipertensos es más grave el cuadro, la afectación visceral es mayor, la respuesta al tratamiento es peor, se detectan mayor número de enfermedades asociadas y la edad de aparición de dicho cuadro es más temprana. 4,- La transmisión de los factores genéticos que determinan el momento de la aparición de la HTA viene mediada por la impronta, de modo que la edad en que se manifiestan los síntomas es más temprana cuando la transmisión es vía paterna. 5,- A su vez, la transmisión del gen o los genes que determinan la manifestación de la enfermedad parece tener una preferencia vía femenina en nuestra muestra, lo que nos permitiría hablar de impronta materna implicada en dicho fenómeno. Improtas contrapuestas son compatibles si una afecta al gen o los genes que influyen sobre la propensión a desarrollar la HTA y la otra al gen o los genes que determinan la edad de aparición de la enfermedad en los individuos propensos.