GENETICA HUMANA, 2

Autor: MATA BALAGUER TRINIDAD.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DPTO. GENÉTICA, FACULTAD DE CIENCIAS UNIV. DE GRANADA.

Resumen: El infarto agudo de miocardio (IAM) es la primera causa de mortalidad en países desarrollados en contraposición a lo que ocurre en países en vías de desarrollo. No obstante, España presenta una baja mortalidad por infarto, en comparación con otros países de nuestro entorno. A este fenómeno se le ha llamado la "paradoja mediterránea" estando implicados tanto factores ambientales como genéticos. En este último apartado, se ha hablado de aproximadamente 50 genes candidatos que puede influir en el desarrollo del IAM. Dentro de estos genes destacamos a los genes que forman parte del sistema renina-angiotensina. En esta memoria, nosotros nos hemos centrado en el gen de la enzima convertidora de angiotensina (ACE), ya que en dicho gen existe un polimorfismo debido a la presencia (alelo I) o a la ausencia (alelo D) de una secuencia Alu en el intrón 16 de dicho gen. Las secuencias Alu son unas secuencias repetidas dispersas por el genoma (SINEs), que están muy relacionadas con la evolución de los genomas donde están presentes causando en la mayoría de los casos enfermedades (sobre todo las que aparecen de novo). La Alu polimórfica del gen de la ACE se ha relacionado con un efecto protector frente al riesgo de padecer IAM, ya que su presencia disminuye los niveles de angiotensina II, siendo esta molécula un potente vasoconstrictor. Pero actualmente existen muchas dudas sobre esta asociación y sobre el mecanismo molecular de dicha protección. En este trabajo hemos puesto de manifiesto en una población española de bajo riesgo que existe una asociación entre el alelo I (en el que está presente la Alu polimórfica) y una protección frente al IAM. Tras esta observación, en primer lugar, hemos caracterizado la Alu polimórfica del gen de la ACE, y hemos encontrado que pertence a una de la subfamilias Alu de reciente inserción en el genoma humano (subfamilia Ya5), mientras que otras presentes en este gen, y que están fijadas, pertenecen a familias más antiguas. Por otro lado, en la Alu polimórfica del gen de la ACE no hemos encontrado características que puedan indicar la posibilidad de que ocurran procesos que conduzcan a la exonización de la Alu, ni a la pérdida del exón contiguo a ésta. Tampoco hemos encontrado evidencia de que esta Alu pueda dirigir la síntesis de un ARN mensajero antisentido capaz de autorregular la expresión del gen de la ACE. Así, las Citosinas de los dinucleótidos CpG de las secuencias promotoras de esta Alu están metiladas. Asimismo, hemos analizado a nivel molecular el fen de la ACE, y hemos visto que existe relación entre los niveles de ARNm y el genotipo que presenta el individuo para el polimorfimos I/D, siendo esta relación inversa a lo que ocurre en proteínas. Esto es debido a que en que los individuos que lleva la Alu, ya sea en estado homocigótico o heterocigótico, además del transcrito normal del gen presenta un transcrito más pequeño que previsiblemente no da lugar a una proteína ACE funcional. Este transcrito parece ser producto de alguna alteración de la maduración del transcrito primario del gen, y está ligado a una reducción del ARNm "normal" del gen y de los niveles de ACE. Por otro lado, hemos realizado un análisis de la longitud de los telómeros en células sanguíneas de pacientes y controles para el IAM. Existen enfermedades cardiovasculares que tienen efectos similares al envejecimiento celular. Es por ello por lo que en este trabajo hemos analizado la longuitud del telómero comparando pacientes para el IAM con controles. Al igual que encuentran otros autores, en nuestra población encontramos un acortamiento de telómero mayor en pacientes que en controles. Dado el tipo de células estudiadas por nosotros (células sanguíneas), bien podíamos pensar que los que nosotros estamos observando sería la consecuencia de la masiva proliferación de estas células relacionada con el infarto. Así, pensamos que este acortamiento del telómero es una consecuencia del infarto.

Autor: CONTRERAS RÍOS JUAN JOSE .
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Tras analizar 65 pacientes poliquistosos, 34 controles emparentados y 144 controles no emparentados, al inicio del estudio y tras 36 meses con tensión arterial controlada, las conclusiones son las siguientes: 1,- Se observa una mayor tendencia a padecer la ERPQAD en los genotipos DD, MM y AA, dato que no llegan a ser significativo; situación que sí ocurre cuando diferenciamos por sexos, observando que los genotipos homocigotos DD y MM podrían ser considerados factor de riesgo para padecer la ERPQAD en mujeres. 2,- No encontramos diferencias significativas entre la distribución de los genotipos en los pacientes con ERPQAD con / sin HTA, incluso cuando diferenciamos por sexos. 3,- Se aprecian diferencias significativas en cuanto a la distribución de los genotipos en pacientes con ERPQAD con o sin IRC, de donde se podría deducir que los alelos D, M y A podrían estar relacionados con el fracaso renal, al contrario que los alelos I, T y C que estarían más vinculados a la protección de la función renal. Esta diferencia se hace más notable cuando los separamos por sexos, llegando a la conclusión que el genotipo DD podría determinar fracaso renal en mujeres y el MM en hombres; por el contrario, el genotipo II actuaría como renoprotector en mujeres y el TT en hombres. 4,- Tras el seguimiento de 36 meses con TA controlada, se aprecia un deterioro más rápido de la función renal en los alelos D, M y A; lo que confirma estos alelos como marcadores de fracaso renal, en contraposición al carácter renoprotector de los alelos I, T y C. En relación con lo expresado anteriormente, se confirma que el genotipo DD evoluciona peor en las mujeres y el MM en hombres, al mismo tiempo que el genotipo II es más protector en mujeres y el TT en hombres. 5,- No aparece ningún paciente con proteinuria en los genotipos II, TT y CC lo que ratifica la renoprotección ejercida por estos genotipos. En cambio, sí encontramos pacientes con proteinuria en los alelos D, M y A; esta proteinuria aún siendo más frecuente y mayor en las mujeres, evoluciona peor en los hombres tras el tratamiento durante el periodo del estudio. 6,- La mayoría de los pacientes respondieron bien al tratamiento con bloqueantes del SRA. Apreciamos un mayor uso de antagonistas del Ca, diuréticos, alfa y beta-bloqueantes en los pacientes ID. Por último, resalta que los pacientes TT no precisaron diuréticos ni beta-bloqueantes y que ninguno de los 3 pacientes CC precisó otro hipotensor distinto de IECA.

Autor: SOLER BOTIJA COROLINA .
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: HOSPITAL DE SANT PAU.

Resumen: La atrofia muscular espinal (AME) es una enfermedad autosómica recesiva que conlleva a una degeneración y pérdida de las neuronas motoras del asta anterior de la medula espinal. Su incidencia es de 1 cada 6000/10000 nacimientos y la frecuencia de portadores en la población es de aproximadamente 1 en 50. Cursa con debilidad muscular progresiva a causa de la denervación y atrofia de las fibras musculares. La mitad de los casos son formas graves (tipo I) que mueren antes de los dos años de edad. La AME está causada por la ausencia del gen SMN1 (Survival Motor Neuron) que codifica una proteína completa y funcional. En cambio, todos los afectados tienen una forma homóloga de este gen, SMN2 que codifica una proteína incompleta que no puede evitar las manifestaciones de la enfermedad. Los objetivos de esta tesis han sido el estudio de la enfermedad durante el desarrollo fetal y el período neonatal en los dos tejidos principalmente afectados (médula espinal y músculo esquelético) a fin de caracterizar los mecanismos que llevan a la pérdida de las neuronas motoras y a la afectación muscular. En primer lugar, se pudo detectar un incremento de la muerte neuronal por apoptosis en el asta anterior de la médula espinal en fetos AME tipo I respecto a los controles. Las neuronas motoras remanentes no presentaron cambios morfológicos apreciables. Paradójicamente, en el período postnatal se detectaron signos de degeneración neuronal pero no de apoptosis, indicando la existencia de dos mecanismos; uno prenatal, con aumento de la vulnerabilidad del DNA y otro posterior que lleva a la degeneración de las neuronas motoras. En las neuronas motoras de los fetos AME se observó también una regulación alterada del patrón de expresión de las proteínas anti-apotóticas Bcl-2 y Bcl-X L que podría hacerlas más susceptibles a la muerte celular programada que se observa durante el desarrollo. En el músculo esquelético de fetos AME se detectaron cambios tanto en el tamaño de los miotubos como en su distribución al compararlos con los controles, aunque no se detectó un aumento en el número de células con el DNA fragmentado ni una alteración en la expresión de Bcl-2 y Bcl-X L. La función colinérgica de las neuronas motoras fetales se analizó por medio de la enzima colina acetiltransferasa (ChAT), cuya expresión aparece a medida que se establecen las sinapsis y el contacto con el músculo. Se observó una reducción de su expresión en los fetos AME respecto a los controles aunque la proporción de neuronas ChAT negativas fue similar en ambos grupos. La disminución global de ChAT en la AME podría ser debida al menor número de neuronas y las neuronas remanentes tendrían uan función colinérgica similar a la de los controles. Finalmente, se caracterizó la expresión del gen SMN2 en fetos AME comparándolos con los controles (que representan SMN1 y SMN2). La proteína SMN2 tiene un patrón de expresión temporal y espacial similar al de SMN1 en médula y músculo aunque los niveles son inferiores en los fetos AME. En cambio, en tejidos no afectados por la enfermedad como riñón, pulmón o intestino, la expresión es casi idéntica en los dos grupos. Aquí, SMN2 debe compensar la ausencia de SMN1, mientras que la médula espinal y el músculo tendrían una regulación más específica de SMN2 que comportaría la aparición de la enfermedad.

Autor: ROSA DE LA CRUZ ARACELI.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAT DE BIOLOGIA.

Resumen: El objetivo general de la presente tesis fue estudiar marcadores de sufrimiento prenatal y genes candidatos como factores biológicos de riesgo en la esquizofrenia y en trastornos del espectro esquizofreniforme (TEE). La mayor frecuencia de anomalías dermatoglíficas y de pliegues de flexión palmar anómalos en pacientes con esquizofrenia y TEE parece confirmar la existencia de sufrimiento intrauterino en una proporción de estos individuos y por tanto en la etiopatogenia de estos trastornos. De manera específica, los estudios dermatoglíficos llevados a cabo en muestras de gemelos y de hermanos discordantes para la enfermedad, investigadas en esta tesis han corrobando la importancia del sufrimiento intrauterino en el riesgo posterior para sufrir estos trastornos. Con respecto al análisis de genes candidatos el presente trabajo ha puesto de manifiesto la utilidad de las dimensiones psicopatológicas para la identificación de un posible gen candidato en el área 1q21-q22, que se relacionaría, en hipótesis, con la expresión de síntomas positivos presentes en las psicosis. Asimismo, la variación genética en la zona promotora del gen de la IL-beta se relacionaría con la manifestación de la dimensión depresiva dentro del fenotipo de la esquizofrenia y TEE. Por último se ha podido relacionar, de una manera clara, la existencia de una asociación dosis-efecto, en individuos sanos, entre los genotipos del gen de la COMT que participa en la degradación de las catecolaminas y la función ejecutiva medida con el Wisconsin Card Sorting Test. Esta asociación no fue encontrada en el grupo de pacientes. En conclusión, debemos pensar qu ene la esquizofrenia y en los trastornos del espectro esquizofreniforme existe una alteración en las etapas precoces del desarrollo cerebral en la que el ambiente intrauterino parece jugar un papel a tener en cuenta, manteniéndose abierta la hipótesis de un neurodesarrollo precozmente alterado en, al menos, un subgrupo de estos pacientes. De la misma manera los trabajos aquí desarrollados parecen indicar la utilidad de las dimensiones psicopatológicas en la identificación de genes de efecto menor dentro del complejo fenotipo de las psicosis.

Autor: ORIOLA AMBROS JOSE.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: INTRODUCCIÓN El cáncer de tiroides, al igual que otras neoplasias, se forma a partir de células transformadas que han ganado en capacidad de división a causa de alteraciones genéticas. Cuando se empezó este trabajo, se sabia que mutaciones en el proto-oncogén RET era las responsables del cáncer medular de tiroides (CMT) de tipo familiar (MEN 2), aunque las relaciones genotipo-fenotipo era poco conocidas. También se sabia que mutaciones en los proto-oncogenes RAS estaban presentes en fases muy iniciales en el carcinoma papilar (CPT) i en el adenoma folicular de tiroides (AFT), y también que un 20-40% de los CPT presentan reordenamientos de los proto-oncogenes RET o NTRK1. OBJETIVOS 1,- Detección de mutaciones en el proto-oncogén RET en familias españolas afectas de MEN2. Mejorar el conocimiento de la relación genotipo-fenotipo. 2,- Buscar nuevas alteraciones genéticas en el CPT y el AFT, que nos permitan conocer otras causas de ambas neoplasias. MATERIAL Y MÉTODOS ESTUDIO DEL PROTO-ONCOGEN RET La población estudiada se ha dividido en dos grupos: 28 casos aparentemente familiares y 108 casos aparentemente esporádicos (96 CMT y 12 feocromocitomas). Se ha amplificado por PCR y secuenciado los exones, 10, 11, 13, 14, 15 y 16. Cuando hemos encontrado la mutación, el resto de familiares se ha analizado utilizando alguno de los siguientes métodos: enzimas de restricción, polimorfismo de diferente conformación de cadena sencilla (SSCP) y creación de diana de restricción mediante amplificación (ACRS-PCR). ESTUDIO DE ALTERACIONES GENÉTICAS EN AFT Y CPT Muestras estudiadas: 21 AFT y 15 CPT (tejidos normal y tumoral). Mediante microsatélites, hemos estudiado diferentes puntos del genoma para poder detectar pérdidas alélicas (LOH), características de los tumores en los cuales los genes supresores de tumor (GST) están implicados. Hemos estudiado 20 microsatélites situados en 10 áreas que corresponden a 6 brazos cromosómicos. Las áreas estudiadas han sido: 3p22, 3p25, 7q21, 7q31, 10q23, 10a25-26, 11q13, 11q23, 13q13 y 17p13.3-13.2. RESULTADOS PROTO-ONCOGEN RET de los 28 casos aparentemente familiares, 27 presentaban mutaciones germinales y el 28º se trataba de un falso familiar. De los 108 casos aparentemente esporádicos, 6 (5,5%) presentaban mutaciones germinales. De las 33 familias estudiadas, hemos detectado 15 mutaciones diferentes, de las cuales hay 6 que presentaban recurrencia. Las más frecuentes son: Cys634Tyr (11/33) y Cys634Arg(5/33). La presencia de miembros con feocromocitomas en una familia es más fecuente si la mutación se halla en el exón 11 (47,5%) que si está en exón 10 (15,6%). Miembros de una de las familias, presentaban la mutación V804M en homocigosis, sin desarrollar CMT y otra familia presentaba dos mutaciones (V778l + V804M) en el mismo alelo, con características fenotípicas diferentes de la familia anterior. PÉRDIDAS ALÉLICAS Hemos encontrado pérdidas en 7q31.1(62%), 11q23(45%) y 3p25(36%) en AFT y solo en 13q13(29%) en CPT. CONCLUSIONES Los resultados del estudio del RET nos indican que la prevalencia de feocromocitomas en mayor (3,3 veces) cuando la mutación está en el codón 634 (exón 11) que cuando la mutación está en el exón 10. Que personas portadoras de la mutación V804M presentan un fenotipo benigno y que la presencia de una segunda mutación el RET puede hacer variar la forma de presentación así como la gravedad de la enfermedad. Los resultados del estudio de pérdidas alélicas nos indica que en las áreas 7q31, 11q23 y 3p25 puede haber GST (o el propio gen LOH11CR2A en 11q23) implicados en el desarrollo del AFT y que este mecanismo de desarrollo tumoral es mucho mas frecuente en AFT que en el CPT, mostrando profundas diferencias en la formación en ambas neoplasias.

Autor: LAURET BRAÑA M. EUGENIO.
Año: 2002.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FAC. DE MEDICINA DE OVIEDO.

Resumen: La hemocromatosis hereditaria (HH) es la enfermedad metabólica hepática más frecuente en la raza blanca, caracterizada por un incremento de los depósitos corporales de hierro con afectación multiorgánica. La sobrecarga de este metal también se ha implicado en la patogenia de otras enfermedades hepáticas, fundamentalmente aquellas de etiología alcohólica o vírica. La evolución natural de estos trastornos conduce al desarrollo de cirrosis y a la eventual aparición del carcinoma hepatocelular (CHC). Recientemente, se ha descrito un gen denominado HFE cuyas mutaciones (C282Y, H63D) se consideran responsables de la HH. El objetivo de este estudio fue investigar el papel de estas mutaciones en pacientes con HH y en cirróticos de etiología alcohólica o vírica con o sin CHC. Para ello, se denominaron los índices séricos de hierro y las mutaciones del gen HFE en 37 pacientes con el diagnóstico previo de HH de acuerdo a los criterios clásicos y en 323 pacientes cirróticos (209 de etiología alcohólica; 114 con cirrosis por virus de la hepatitis B y/o virus de la hepatitis C). Cuarenta y cinco pacientes con cirrosis alcohólica y 42 con cirrosis tenían un CHC asociado. La sobrecarga histológica de hierro fue valorada en 33 pacientes con HH y 76 pacientes con cirrosis, mediante la determinación de los índices bioquímico (IBH) e histológico de hierro hepático (IHH). Adicionalmente, fueron estudiados 65 familiares de primer grado de los pacientes con HH. El grupo control lo constituyeron 159 donantes sanos de médula ósea. En 31 pacientes con HH (84%) se encontró la mutación C282Y con carácter homocigoto. Por el contrario, no hubo ningún sujeto con este genotipo en el grupo control, mientras que un 7% fueron heterocigotos para esta mutación. Aunque la frecuencia de la mutación H63D fue más alta en el grupo control, esta tendencia no se confirmó cuando se consideraron los cromosomas en riesgo de llevar esta mutación. No hubo diferencias en los valores de los índices séricos de hierro ni de depósito hepático entre los pacientes con HH homocigotos para la mutación C282Y y aquellos con otros genotipos. En esta enfermedad se obtuvo una correlación aceptable entre el IBH y el IHH (r=0,61, p=0,0001). La realización del estudio genético en los familiares el primer grado de los pacientes con HH, permitió la identificación de siete sujetos asintomáticos homocigotos para la mutación C282Y, de los cuales sólo cuatro tenían expresión bioquímica de la enfermedad. No hubo diferencias en los valores de los índices séricos de hierro entre los familiares de los pacientes con HH según el genotipo C282Y. Sin embargo, los homocigotos para esta mutación presentaron cifras de estos parámetros inferiores a los pacientes con HH con igual genotipo. Las frecuencias de las mutaciones del gen HFE en los pacientes con cirrosis fueron similares a las del grupo control. Sin embargo, 9(20%) de 45 pacientes con cirrosis alcohólica y CHC fueron heterocigotos para la mutación C282Y frente a 6(3.6%) de 164 pacientes sin CHC (p=0,001). Por el contrario, no hubo diferencia en la frecuencia de esta mutación entre los pacientes con cirrosis vírica on o sin tumor, ni para la mutación H63D. En el subgrupo de cirróticos alcohólicos, el valor del índice de saturación de la transferrina fue el único parámetro que presentó un valor significativamente más elevado entre los pacientes con heterocigosis C282Y respecto a aquellos sin esta mutación. Estos resultados demuestran la utilidad del análisis de las mutaciones del gen HFE como prueba inicial de diagnóstico en aquellos sujetos con valores elevados de los índices séricos de hierro. Asimismo, la aplicación del estudio genético en el despistaje familiar de la HH permite la detección precoz de sujetos en riesgo de padecer la enfermedad y la identificación de nuevos casos en fase presintomática. La alta frecuencia de la mutación C282Y en los sujetos con cirrosis alcohólica y CHC, sugiere que los portadores de esta mutación tienen un mayor riesgo de desarrollar esta complicación.

Autor: GÓMEZ GONZÁLEZ OLGA.
Año: 2002.
Universidad: SALAMANCA .
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Durante el proceso de aislamiento y caracterización del agente infeccioso cusante de la hepatitis no-A, no-B se aisló, en un chimpancé infectado por el suero de un paciente que padecía esta enfermedad, un cDNA que se denominó GOR47-1, que codificaba un péptido que presentaba reacción cruzada con anticuerpos dirigidos frente al virus de la hepatitis C. Esto era debido a la homología entre sus epítopos antigénicos. Aunque inicialmente se pensó que la detección de anticuerpos circulantes frente a este péptido podría ser de utilidad en el diagnóstico de hepatitis C, el desarrollo de nuevos ensayos diagnósticos han hecho innecesaria la detección de anticuerpos anti-GOR. Por otro lado, la relación de hepatitis autoinmune asociada con infección por virus de la hepatitis C tampoco ha sido aclarada definitivamente. Por esto, nos hemos propuesto caracterizar la organización genómica del gen GOR humano, así como el transcrito que origina y la proteína deducida de la secuencia codificante del gen. Para ello hemos utilizado las técnicas habitualmente empleadas en Biología Molecular. En este trabajo mostramos, por primera vez, que el genoma humano contiene, al menos, ocho copias similares del gen GOR en el brazo largo del cromosoma 8. Además, el gen GOR presenta una secuencia altamente variable, que podría ser debido al proceso de hipermutación somática. Demostramos que el gen GOR contiene secuencias repetitivas en la región 3', que son transcritas con la secuencia codificante, y una de estas secuencias presenta homología con un transposón mariner, que podría estar implicado en el proceso de duplicación génica. Hemos determinado que el gen GOR codifica una proteína que contiene un dominio EXOIII, típico de exonucleasas, por lo que podría estar implicado en la reparación del DNA. En nuestro trabajo demostramos que el gen GOR que codifica el epítopo GIR47-1 sólo aparece en chimpancé, lo que sugiere que se trata de una adquisición evolutiva posterior a la separación de la especie humana.

Autor: GAMEZ CARBONELL JOSE.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: INTRODUCCIÓN La enfermedad de McArdle (Glucogenosis tipo V) es una miopatía metabólica producida por una deficiencia de miofosforilasa, enzima que inicia la degradación del glucógeno con liberación de glucosa-1-fosfato. Los pacientes presentan típicamente intolerancia al ejercicio, mialgias y contracturas. Aproximadamente la mitad de los pacientes presentan mioglobinuria. Se han descrito otras formas de presentación clínica diferentes del fenotipo clásico. Los estudios genéticos moleculares han identificado 32 mutaciones distintas. El defecto molecular más frecuente es la mutación nonsense R49X en el exón 1. Se están describiendo, cada vez con más frecuencia, mutaciones privadas para ciertos grupos étnicos. OBJETIVOS 1,- Identificar el defecto molecular es una serie de 21 familias con individuos afectos de enfermedad de McArdle. 2,- Establecer la patogenicidad de esas mutaciones y estudiar la prevalencia de R49X, así como de otras mutaciones. 3,- Describir los hallazgos clínicos de los afectos. 4,- Establecer si existe una correlación genotipo-fenotipo. PACIENTES Y METODOS Estudiamos 35 pacientes afectos, pertenecientes a 21 familias no relacionadas. Se evaluó los pacientes mediante entrevista, examen físico, análisis bioquímico, estudio neurofisiológico, prueba del ejercicio isquémico del antebrazo, biopsia muscular (en el caso índice de cada una de las familias) y estudios genéticos, incluyendo la secuenciación del gen de la miofosforilasa. Se realizó análisis estadístico de los resultados obtenidos. RESULTADOS La edad media de los pacientes fue de 42.7 años. La edad media de inicio clínico fue 13.3 años. La edad media del diagnóstico clínico fue 36.2 años. El 43% de los pacientes habían presentado mioglobinuria, nueve habían sufrido más de 5 episodios. La duración media del second wind fue 5.9 minutos. La resistencia durante la preuba del ejercicio isquémico fue 41.6 segundos. La enfermedad fue incapacitante para el trabajo en el 14.2% de los pacientes. El valor medio de CK en reposo fue 1914 UI/L. Nueve pacientes mostraron uricemias superiores a 7.0 mg/dl. La curva de lactato fue plana en todos los pacientes. El fenotipo clásico fue el más frecuente (74.3%). Se observó consanguinidad en 4 familias. Seis familias tenían un patrón pseudodominante. Identificamos 10 mutaciones diferentes. Tres habían sido descritas con anterioridad (R49X, G204S y W797R). Identificamos siete nuevas mutaciones - 5 missense (R93W, L115P, R489W, A669V, y N684Y), una monsense (Y573X) y una splice-junction (K608K). El defecto molecular fue identificado en 62 alelos. Detectamos R49X en 30 alelos (42.85%), W797R en 14, G204S en 17. L115P, R489W, Y573X y K608K en 2 cada uno. N684Y, A669V y R93W en 1 cada uno. Queda aún por identificar el defecto molecular en 8 alelos. Sin embargo, no es ni R49X, ni G204S ni W797R. No encontramos una clara correlación clínica genotipo-fenotipo en la serie. CONCLUSIONES El test del ejercicio isquémico del antebrazo es la prueba de primera elección al investigar pacientes con probable enfermedad de McArdle. La prevalencia de R49X fue 42.85%, similar a las series francesa y alemana, y ligeramente inferior a la del Reino Unido y Estados Unidos. El concepto de gradiente Norte-Sur propuesto por otros autores deben ser analizado con cautela. Identificamos siete nuevas mutaciones. Estos resultados confirman la heterogeneidad alélica de esta enfermedad en España. La biopsia muscular es una prueba diagnóstica esencial, debido a la alta probabilidad de mutaciones privadas en España. Encontramos una alta prevalencia de heterocigotos sintomáticos en nuestra serie. No observamos una clara correlación genotipo-fenotipo. La mayoría de pacientes con formas de inicio tardío son en realidad bormas benignas que empiezan en la infancia y que con la edad se hacen clínicamente más manifiestas. El retraso en el diagnóstico de estos individuos, frecuentemente etiquetados como afectos de alteraciones psicógenas, sugiere la necesidad de programas de divulgación de esta enfermedad entre los profesionales, especialmente aquellos de atención primaria.

Autor: BELLIDO CASADO M. MAR.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Los síndromes linfoproliferativos B son neoplasias que resultan de la alteración genética de linfocitos B en diferentes estadios de diferenciación. Los linfocitos B neoplásicos presentan rasgos comunes con los linfocitos B normales y esta similitud hace que existan pocos marcadores específicos de malignidad. Además, el estudio citogenético es complejo en los síndromes linfoproliferativos B y el estudio de PCR puede dar falsos negativos por la alteración en la secuencia de los genes de las inmunoglobulinas debido a las mutaciones hipersomáticas y al cambio isotípico de inmunoglobulinas. En esta tesis se presentan modificaciones de la técnica convencional de citometría de flujo y de PCR convencionales para la detección de nuevos marcadores en los síndromes linfoproliferativos B. Se han utilizado cócteles de anticuerpos monoclonales y nuevos fluorocromos así como PCRs de larga distancia y circulares para la detección de marcadores que pueden ser aplicados para el estudio diagnóstico y de efermedad mínima residual. La aplicación de cinco fluorocromos en un mismo tubo (CD8-CD19/FITC, CD3-CD56/PE y CD4-PE/Cy5) junto al estudio de clonalidad B mediante citometría de flujo demostró que es una técnica útil y eficaz para el diagnóstico diferencial de linfocitosis reactivas y malignas y el estudio de las alteraciones de los linfocitos T en los síndromes linfoproliferativos B. Los linfomas del centro germinal se caracterizan por la expresión de CD10 detectada mediante inmunohistoquímica. En citometría de flujo, la expresión de CD10-FITC, sin embargo, es débil en linfomas que provienen del centro germinal. Se demostró la utilidad y sensibilidad del fluorocromo Pe/Cy5 en la detección del CD10 en estos linfomas, así como la correlación con la presencia de la t(14;18)(q21;q32) y el diagnóstico diferencial entre los linfomas difusos de célula grande y linfomas de Burkitt "de novo" y transformados. La detección de sublconas en enfermedades que resultan de la alateración de los genes de las inmunoglobulinas no puede realizarse mediante técnicas de PCR, porque esta técnica exige la elaboración de unos cebadores "consenso" que, por definición, no pueden aplicarse para la amplificación de diferentes secuencias. Se demostró la utilidad de la citometría de flujo para la detección de subclonas en linfomas agresivos que provienen de centro germinal. Se demostró un perfil inmunofenotípico específico en los linfomas difusos de célula grande de Burkitt "de novo" y la detección de la subclona crónica y transformada con diferencias en la expresión de CD10, CD23 e inmunoglobulina de superficie en los casos transformados. La PCR convencional exige el conocimiento de los dos genes implicados en una translocación para el diseño de los cebadores. Se demostró que haciendo una circularización del ADN a estudiar, se puede realizar una PCR circular que exige el conocimiento de un solo gen implicado en la translocación. Se demostró su utilidad en una LLA-B con la translocación t(6;14) y se detectó una sobreexpresión del gen ID4 como potencial candidato en la patogenia del caso presentado.

Autor: VENDRELL SALA JOSE M..
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La hipótesis de trabajo a verificar es la existencia de subpoblaciones espermáticas de riesgo cromosómico meiótico -identificables en el estudio andrológico basal previo a su posible inclusión en un programa de microinyección espermática intracitoplasmática (ICSI)- que comportan una menor capacidad embriogénica temprana. La población estudiada consiste en una serie consecutiva de 103 pacientes varones que consultaron por esterilidad presuntamente idiopática por oligoastenozoospermia secretora severa (concentración espermática mótil

Autor: OLIVER BONET MARIA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Las anomalías cromosómicas numéricas y estructurales son, a menudo, causa de infertilidad. Se sabe también que los hombres portadores de translocacines recíprocas equilibradas presentan un incremento en la incidencia de pérdidas embrionarias y de descendencia afectada. La característica principal de la espermatogénesis de estos pacientes es la presencia de un tetravalente que permite el apareamiento, en paquiteno, de los cromosomas reorganizados con sus homólogos. La configuración de tetravalente determina su comportamiento y, consecuentemente, la producción de proporciones diferentes de gametos equilibrados y desequilibrados. Su estructura está concluida por fenómenos de recombinación. Diferentes factores pueden alterar la frecuencia de recombinaciones en el tetravalente, como por ejemplo la morfología de los cromosomas implicados y la longitud de los segmentos intersticiales y translocados. Los cromosomas translocados pueden segregar según cuatro patrones diferentes: alternante, adyacente I, adyacente II y 3:1. El fenotipo alternante es el más frecuente , y también el único que da lugar a descendencia normal. Resaltar que, en el caso que ocurra una recombinación intersicial, el fenotipo alternante también puede producirse a partir de la segregación adyacente I. En este estudio, hemos analizado muestras de esperma y/o biopsias testiculares en cinco pacientes protdores de las siguientes translocaciones: t(4;8)(q28;p23),t(1;13)(q41;q22), t(3;19)(p21;p13.3)t(11;17)(q13.1;p11.2) y t(10:14)(q24;q32). El uso de técnicas de hibridación in situ fluorescente (FISH) ha permitido establecer los porcentajes de gametos equilibrados y desequilibrados para cada uno de los pacientes. Los resultados obtenidos oscilan entre 30.5% y 44.3% para las formas equilibradas, y entre 55.7 y 69.5% para las desequilibradas. Las segregación meiótica del portador de la t(4;8)(q28;p23) se determinó a partir de dos metodologías diferentes, el sistema hámster-humano y la técnica de núcleos de espermatozoide descondensados. La comparación de los resultados obtenidos no mostró diferencias significativas entre el total de gemetos equilibrados y desquilibrados. No obstante, las frecuencias de la segregación 3:1 obtenidas en los dos análisis fueron significativamente diferentes (p

Autor: GONZÁLEZ GONZÁLEZ CRISTINA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPTO. GENÉTICA, FUNDACIÓN JIMÉNEZ DÍAZ.

Resumen: En la actualidad, para realizar un diagnóstico prenatal se realizan una serie de técnicas obstétricas que conllevan un riesgo de muerte fetal de entre 0,5 y 2%. Las técnicas no invasivas de las que disponemos son el ecógrafo y el triple screening, sin embargo, éstas técnicas al no analizar directamente ningún tipo de tejido fetal no presentan una fiabilidad cercana a la que ofrece el diagnóstico prenatal invasivo. En los últimos años se ha intentado desarrollar un nuevo tipo de diagnóstico prenatal basado en la existencia de células fetales en el torrente sanguíneo. El análisis de éstas células fetales presenta una tasa de detección de anomalías cromosómicas cercana al 40% con un 11% de falsos positivos. Esta técnica presenta el inconveniente de ser excesivamente laboriosa y de alto coste, además la presencia en mayoría de células maternas impide el diagnóstico de fetos hembras. La aproximación más reciente a un nuevo tipo de diagnóstico prenatal no invasivo ha estado basada en el descubrimiento de la presencia de ADN fetal en el suero y plasma de gestante. Los primeros descubrimientos sobre ADN extracelular en la circulación sanguínea fueron descritos por Mandel y Métais en 1948 y ya a finales de los años noventa el grupo de Lo y cols (1997, 1998) empezaron sus investigaciones aplicadas a la detección de secuencias de origen paterno en el suero y plasma de gestantes. El análisis de ADN fetal en suero y plasma de gestante ha permitido la detección de secuencias de origen paterno como son las secuencias del cromosoma Y para el diagnóstico de sexo fetal. Otros datos aportados por la bibliografía es que el ADN fetal constituye entre un 3,4 y un 6,2 del total del AND presente en plasma y que su concentración se ve aumentada en casos de preeclampsia y trisomía 21. Los objetivos de esta tesis han sido la optimización de las técnicas de extracción y amplificación de ADN fetal en suero y plasma de gestante, la determinación de la fracción sanguínea idónea para realizar la técnica, determinación de la técnica más sensible así como determinación de la especificidad y sensibilidad de dicha técnica. Como Objetivo final y más importante es la aplicación clínica de las técnicas para la realización de diagnóstico prenatal no invasivo. Los resultados obtenidos se resumen en las siguientes conclusiones: * La detección de ADN fetal en suero y plasma en sangre periférica de gestante es posible a partir de la semana 10 de gestación con una sensibilidad y fiabilidad cercana al 90%. * La fracción sanguínea donde se muestran los mejores resultados en detección de ADN fetal es el plasma. * El método de extracción de ADN así como las precauciones anticontaminantes juegan un papel esencial en el éxito de las técnicas de detección y análisis de ADN fetal. * El estudio comparativo de las técnicas de detección de ADN fetal ha demostrado que la técnica más sensible es la QF-PCR en las muestras de plasma materno. Esta técnica ha resultado óptima para el análisis de ADN fetal en el diagnóstico de sexo fetal y de enfermedades monogénicas. * La PCR a tiempo real ha demostrado ser una técnica rápida, sencilla, altamente sensible y por tanto, óptima para el análisis del factor RhD fetal. * El análisis de ADN fetal en el plasma de gestante ha permitido el diagnóstico de sexo fetal, factor RhD y de enfermedades como corea de Huntington y fibrosís quística.

Autor: BELTRÁN VALERO DE BERNABÉ DANIEL.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La alcaptonuria (AKU; OMIM:203500) es una metabolopatía hereditaria causada por la fatla de actividad enzimática homogentisato dioxigenasa (HGO). En esta tesis se describe, en primer lugar, la caracterización del gen HGO humano. Se ha secuenciado en su totalidad la región genómica HGO que posee un tamaño de 54363 pb, y se ha descrito 19 marcadores genéticos en su interior. A su vez, se ha determinado el inicio la transcripción hepática de HGO, y cómo la región genómica situada en 5' al codón de inicio de la traducción HGO muestra actividad promotora de la transcripción hepática. Hemos desarrollado un sistema de detección de mutaciones en HGO, apoyado en la técnica del SSCP, en base al cual hemos analizado 52 familias AKU provenientes de 14 países. Hemos identificado mutaciones en el 93% de los cromosomas AKU analizados. La alcaptonuria muestra una elevada heterogeneidad alélica HGO, ya que la mayoría de las 40 mutaciones AKU identificadas se han encontrado en una sola familia cada una. No hay ninguna mutación prevalente. La mutación más frecuente en Europa, M368V, representa sólo el 16% de los cromosomas AKU analizados. Se han identificado sitios hipermutables en el gen HGO, asociados a un nuevo elemento de secuencia, el triplete CCC. El 35.7% de las mutaciones AKU hasta ahora identificadas alteran estos elementos de secuencia. La República Eslovaca representa la localización geográfica con mayor frecuencia de alcaptonuria en Europa. Hemos realizado un estudio sobre 44 cromosomas AKU eslovacos y hemos identificado mutación en todos ellos. El 84% de los cromosomas AKU eslovacos muestran mutaciones de origen eslovaco. El origen de las mutaciones AKU eslovacas se conentran en el interior de un mismo valle situado al norte del país, alrededor de la ciudad de Cadca. Nosotros hipotetizamos que el aumento de la frecuencia de AKU en Eslovaquia no está causada por un efecto fundador múltiple, sino por el funcionamiento de sitios hipermutables en esta población. Cinco de la seis mutaciones eslovacas identificadas involucran estos sitios hipermutables. El enzima HGO está formada por un dímero de homodímeros. Basándonos en su distribución en la estructura terciaria y cuaternaria de HGO, hemos agrupado las mutaciones AKU cambio de sentido en cuatro categorías: las que alteran el centro activo de la subunidad HGO; las que causan la desestructuralización de la subunidad; las que alteran la interacción entre las subunidades para formar el trímero HGO; y las que impiden la asociación entre los trímeros. Por último, hemos realizado un estudio poblacional de los marcadores genéticos asociados al gen HGO. Los resultados indican que la población española-madrileña, española-vasca, y la población francesa-marsella, se encuentran más cercanas genéticamente a la población argelina que a otras poblaciones, como la finlandesa y la italiana.

Autor: LUCAS ARIAS SUSANA DE.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FUNDACIÓN ESTUDIO HEPATITIS VIRALES.

Resumen: Los pacientes con enfermedades hepáticas avanzadas presentan problemas en la coagulació, ya que la mayoría de los factores de coagulación se sintetizan en el hígado. Dentro de los factores de coagulación, los niveles del Factor VII, que es el encargado de iniciar las cascada extrínseca de coagulación, son los primeros a disminuir. Esta caída se ha asociado a la pérdida neta de masa hepática que se produce durante la progresión de la enfermedad. Sin embargo, existen pacientes con cirrosis hepática que presentan unos niveles de Factor VII inferiores a lo que se esperaría basándose en su grado de funcionalidad hepática. Este hecho sugiere que podría existir algún factor o factores asociados a la progresión de la lesión hepática que afectan directamente a la expresión de dicho gen. Por este motivo, se analizaron mediante hibridación in situ las biopsias hepáticas de pacientes con distinto grado de fibrosis, observándose que se produce una inhibición progresiva de la expresión del gen del Factor VII a medida que progresa la fibrosis. Teniendo en cuenta que durante la inflamación hepática crónica se producen altos niveles de TFG-beta1 y se induce la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible, con el consiguiente aumento de la producción de NO, se dicidió estudiar el papel que tenían estos dos agentes en la inhibición progresiva del gen del FVII. Así, el tratamiento de la línea celular de hepatoblastoma humano HepG2 bien con TGF-beta1, o bien con el donante de NO S-nitroso-n-acetil-penicilamina (SNAP) mostró que ambas moléculas eran capaces de disminuir los niveles de ARNm del Factor VII. Mediante transfecciones transitorias con un plásmido que contenía un fragmento del promotor del gen del Factor VII capaz de dirigir la expresión de un gen heterólogo a niveles similares a los del promotor completo (ya que contenía los sitios de unión para dos factores de transcripción, Sp1 y HNF-4alfa esenciales para la correcta expresión del gen) se comprobó que esta inhibición se producía a nivel transcripcional. Los ensayos de cambio de la movilidad electroforética determinaron que, en el caso del TGF-beta1, se inhibía la unión de HNF-4alfa al ADN, y que, en última instancia, se debia a la degradación de la proteína NHF-4alfa en la proteasoma. En cambio, el NO inhibía la unión al ADN tanto de Sp1 como de HNF-4alfa, comprobándose que, en el caso de HNF-4alfa, se debía a la nitrosilación de residuos de cisteína, probablemente en el dominio de unión al ADN.

Autor: LÓPEZ GRANADOS EDUARDO.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La agammaglobulinemia primaria es una inmunodeficiencia humoral caracterizada por un defecto en la maduración del linfocito B que conlleva una disminución muy importante o ausencia de inmunoglobulinas y condicina una gran susceptibilidad a las infecciones fundamentalmente bacterianas. La gran mayoría de estos pacientes son varones que presentan mutaciones en el gen BTK (tirosina quinasa de Bruton) responsable de la agammaglobulinemia ligada al cromosoma Z (ALX). Se han descrito también defectos en otros cuatro genes, responsables de variantes de la enfermedad, de igual fenotipo clínico y analítico pero con herencia autosómica recesiva. En este estudio hemos analizado una serie de 65 de pacientes de agammaglobulinemia primaria. El diagnóstico de la mayoría de ellos fue establecido en la Unidad de Inmunología del Hospital Universitario La Paz mediante la realización de una historia clínica y un estudio inmunológico que incluía el análisis del componente humoral y celular. Se incluyeron además, pacientes con el mismo diagnóstico procedentes de otros centros sanitarios en los que se solicitaron datos clínicos y analíticos mediante un protocolo de recogida de datos. Éste fue también rellenado a partir de las historias clínicas de los pacientes de nuestra Unidad, lo que permitió disponer d euna base de datos uniforme. Para la identificación del defecto genético responsable de la enfermedad se obtuvo, a partir de sangre periférica, ADN y ARN utilizando técnicas convencionales. También se aislaron células mononucleadas para realizar estudios de expresión de proteínas. Para el análisis genético se emplearon las técnicas de análisis de ligamiento y SSCP como método de cribaje y la secuenciación automática para la caracterización de las mutaciones. En algunos pacientes se emplearon técnicas adicionales como la RT-PCR o el Southern blot. El estudio de la expresión de las proteínas fue realizado mediante Western blot y detección intracelular por citometría de flujo. Hemos identificado 38 mutaciones distintas en el gen BTK en 52 pacientes de 38 familias no relacionadas y otros dos pacientes más han sido diagnosticados de ALX al carecer de expresión de proteína pero el defecto molecular responsable no ha sido identificado. En dos pacientes hemos encontrado dos mutaciones distintas en el gen de la cadena pesada u de la IgM, responsable de una de las variantes autosómicas recesivas. En los nueve pacientes restantes han sido descartados por secuenciación los defectos en BTK y en los genes de las variantes recisivas por SSCP, permaneciendo el defecto genético responsable sin identificar. Finalmente, hemos analizado si en esta serie de pacientes existía alguna correlación entre el defecto genético y las características clínicas y analíticas de la misma. La primera relación se llevó a cabo entre los pacientes que presentaban la variante más frecuente (ALX) y los casos de herencia autosómica. La segunda fue realizada entre mutaciones en BTK consideradas graves en función de su tipo, localización y repercusión en la expresión y estructura de la proteína. Se ha puesto de manifiesto la asociación entre determinadas alteraciones genéticas y la aparición de un fenotipo menos grave.

Autor: MARTIN SANTO DOMINGO YOLANDA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las atrofias musculares espinales (AME) comprenden un grupo de trastornos hereditario caracterizados por la degeneración de las motoneuronas del asta anterior de la médula espinal. La mayoría de los casos cursan con herencia autosómica recesiva, aunque también se han descrito formas con herencia autosómica dominante (menos del 10%). Las AME infantiles tienen una incidencia de 1 en 10.000 nacidos y una frecuencia de portador de 1 en 40. El fenotipo es extremadamente variable, y los pacientes se han clasificado en tres tipos (AME I-III) según la edad de aparición y la gravedad de los síntomas. Los tres tipos de AME son causados por mutaciones en el gen SMN1. Existen dos genes SMN, SMN1 y SMN2, prácticamente idénticos, en la región 5q13. La mayoría de los pacientes, -90%, presetan deleción en homocigosis del gen SMN1. La identificación de mutaciones intragénicas en algunos pacientes demostró que el gen SMN1 era uno de los genes determinantes de la AME. El número de copias de SMN2 modula el fenotipo. Hemos estudiado la población española AME, detectando deleción en homocigosis del gen SMN1 en el 84,8% de los pacientes AME que cumplen todos los criterios diagnósticos. En cuatro pacientes, que retenían una única copia del gen SMN1, hemos identificado cuatro mutaciones intragénicas, incluyendo dos nuevas mutaciones: 773 insC y c867+2T-G; y dos previamente descritas: 430del4 y 800ins11. Tres de estas mutaciones sólo han sido descritas en la población AME. En una paciente que retenía una sola copia de SMN1 hemos demostrado que éste no era funcional, la paciente no mostraba mensajero de SMN1. El análisis de la región promotora de los genes SMN reveló varias diferencias nucleotídicas, en particular un cambio en la longitud de un tramo de poliadeninas que eliminaba un posible sitio de unión del factor YY1. Hemos investigado la contribución del gen SMN2 en la modulación del fenotipo. Hemos determinado que, en pacientes portadores de las mismas mutaciones en SMN1 pero que presentan distinto fenotipo, en general, los pacientes tipo I presentan una o dos copias del gen SMN2, mientras que los pacientes tipo II y III presentan tres o cuatro copias. El estudio genético de hermanos haploidénticos que presentan distinto fenotipo demostró que existen otros factores además de SMN2 que modulan la enfermedad. Finalmente, identificamos un grupo familiar que presentaba AME con herencia autosómica dominante (AME-AD). Estudiamos la región cromosómica 5q13, excluyendo ligamiento a dicha región. Hemos realizado un mapeo por exclusión para localizar el locus responsable de esta forma de AME-AD.

Autor: VILAXA OLCAY ARNALDO VICTOR.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Durante la odontogénesis intervienen una serie de factores de crecimiento relacionados con la proliferación y diferenciación celular, fenómenos de apoptosis, etc. Que desencadenan una cascada de señales que conlleva a la formación de la estructura dental. En este trabajo se han estudiado las fases de iniciación, morfogénesis y diferenciación dental en embriones de ratón in vivo, primeros arcos branquiales y primeros molares cultivados in vitro durante 1 y 4 días con adición exógena de heparina ácido retinoico. Su 5402 (FGFRI) y anti Shh (5E1). Los resultados muestran que el gen Fgf8 secretado por el epitelio dental regula positivamente la expresión de los genes Pitx1, Msx1 y Msx2 y que el ácido retinoico exógeno inhibe la expresión de los genes Msx1 y Pitx1 pero no de los Fgf8 y Shh. Por otro lado, el fenómeno de apoptosis condiciona la morfogénesis dental a través de los nudos del esmalte. Finalmente, el gen Shh delimita la distancia enter los nudos del esmalte secundarios para formar las crestas dentales.

Autor: CUESTA PEREDO ANA M..
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La enfermedad de Charcot-Marie-Tooth (CMT) representa un grupo de entidades clínica y genéticamente heterogéneas de neuropatías sensitivas y motoras del sistema nervioso periférico. La neuropatía CMT y trastornos relacionados exhiben distintas formas de herencia mendeliana (autómica dominante, autosómica recesiva y ligada al X). Las formas autosómicas recesivas, que son el objeto de estudio en esta tesis, se designan como CMT4. Aunque más raras que las dominantes, hay gran heterogeneidad tanto para las mielinopatías como para las axonopatías. Hasta el momento se han identificado varios loci desmielinizantes (CMT4A, CMT4B, CMTC, CMT4F y NSMH-Lom) y también algunos loci asociados a formas axonales (CMT4E, CMT4C2). Como objetivo de esta tesis nos marcamos el análisis genealógico y genético de una serie de 320 familias con enfermedad de Charcot-Marie-Tooth seleccionando 13 que presentaban un patrón de herencia autosómica recesiva (CMTAR).De estas 13 familias, 10 de ellas eran desmielinizantes y tres de ellas axonales (LF20, LF249 y LF38). Estas tres últimas familias tenían un fenotipo muy homogéneo, caracterizado por la presencia de una neuropatía axonal con disfonía y parálisis de cuerdas vocales (CMTAR-PCV). Esto nos llevó a plantearnos realizar el cartografiado genético con fin de localizar un locus asociado a ese fenotipo en particular y, a partir de ahí aislar y caracterizar el gen mutante causante del mismo. Para ello se procedió a un análisis de exclusión de los loci CMT ya descritos. Obtuvimos valores de Lod Score positivos para marcadores ligados al locus CMT4A. La familia LF 38 era altamente consanguinea y contábamos con nueve enfermos pertenecientes a tres generaciones distintas lo que nos iba a permitir realizar un refinamiento genético de la región en cuestión mediante el cartografiado por homozigosidad. Para ello pasamos a saturaría con marcadores polimórficos ligados a esa región llegando a reducir la región a un tamaño de 2cM, flanqueada por el marcador centromérico D8S551 y por el telomérico, D8S541. La región candidata presentaba ya un tamaño adecuado para construir un mapa físico detallado, pero en esos momentos se hizo publico el borrador del Proyecto Genoma Humano, por que decidimos realizar una búsqueda electrónica de las secuencias genómicas de los marcadores flanqueantes D8S551 y D8S541. Con los datos que obtuvimos pudimos determinar la distancia física exacta en la cual estábamos trabajando, que era de 1.939.172 pb (1.94 Mb). En esta región se encontraban cartografiados 4 genes o transcritos: el gen que codifica la proteína 1 asociada a la diferenciación inducida por gangliósidos, GDAP1, R3HDM; LOC83690 y el gen HNF-4G, un factor de transcripción. Tras considerar tanto la posible función como la expresión tisular de los cuatro genes seleccionamos como primer candidato el GDAP1. En gen GDAP1 tiene una expresión muy fuerte en cerebro de ratón, detectándose un transcrito de 4.1 Kb en los experimentos de Northern-Blot y su expresión se encuentra regulada durante el desarrollo alcanzando su máxima expresión en el estado adulto. (liu et al; 1999). El gen GDAP1 se extiende a lo largo de una secuencia de DNA genómico de 13.8 Kb en el cromosomoa 8q21.1 y consta de 6 exones estando el exón 6 parcialmente traducido. La secuencia del GDAP1 contiene una ORF de 1077 nucleótidos y codifica para una proteína de 358 aminoácidos. El cDNA del GDAP1 que se encontraba en el Genbank estaba incompleto, ya que carecía tanto de inicio coom de final de la transcripción. Nosotros localizamos un EST de 2505 pb, AL110252, 344 pb después del codón de parada del gen que contenía varios sitios de poliadenilación pero sin ninguna ORF. Partiendo de una genoteca de cDNA de cerebro fetal humano amplificamos un fragmento de unión entre ambos, lo que sugería que ese EST forma parte del exón 6 no traducido del gen. Estos datos concuerdan con nuestros experimentos de Northern-Blot donde detectamos dos transcritos de 3.9 Kb y 2.9 Kb sugiriendo la utilización de las dos señales de poliadenilación en la transcripción fisiológica del gen. En cuanto a la expresión en los distintos tejidos, observamos que aunque aparecía una expresión basal en todos ellos, era mucho más intensa y evidente en cerebro total y médula espinal. El análisis de RT-PCR mostró también que aunque GDAP1 tiene una expresión ubicua es mucho más marcada en tejido nervioso tanto humano como murino. En las tres familias diagnosticadas con CMTAR-PCV hemos encontrado 6 alelos mutantes y 3 mutaciones distintas. La primera de ellas es una transición c.487C>T que provoca una mutación sin sentido, Q163Z, en el exón 4, dando como resultado una proteína truncada. Esta mutación la encontramos en homozigosis en la familia LF38 y en heterozigosis en las familias LF20 y LF249. La segundo mutación que hemos encontrado es una trasnversión, c.581 en el exón5, S194X, que da origen a una proteína truncada. Esta mutación, la hemos encontrado en heterozigosis en la familia LF249. La tercer mutación es una inserción de una adenina, c.863-864insA, que da lugar a una alteración de la pauta de lectura, terminando la proteína en el codón 290, T288fsX290. Esta mutación la hemos encontrado en heterozigosis en la familia LF20.

Autor: VÁZQUEZ MANRIQUE RAFAEL PASCUAL.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS - UNIVERSITAT DE VALÈNCIA.

Resumen: En el presente trabajo se ha caracterizado la biología celular del gen frh-1 de Caenorhabditis elegans, ortólogo al gen FRDA humano, que codifica para la frataxina del nematodo. El objetivo perseguido en el establecimiento de un modelo animal para en el establecimiento de un modelo para la investigación de la ataxia de Friedrich. Primero se caracterizó el gen y su mensajero. Posteriormente se estudió el entorno genómico del gen que resulto estar enmarcado en un operón típico de C.elegans, junto a otros siete genes más. Se ha analizado la expresión del gen frh-1 por tejidos, para tratar de establecer los paralelismos entre el gen humano y el gen de C.elegans. Se ha corroborado que la frataxina del gusano se expresa en tejido que podrían considerarse análogos a los humanos, tales como faringe (corazón), intestino (intestino humano y/o hígado), músculo de la pared (músculo esquelético), etc. Además de esto se ha confirmado que esta proteína se expresa siguiendo un patrón de expresión subcelular que es consistente con una expresión mitocondrial. Se procedió, asi mismo, a la mutagénesis del gen, mediante RNA interferencia (RNAi), con el objetivo de obtener información sobre la posible función del a frataxina. Se obtuvo un fenotipo característico, que siempre se repitió en diferentes e independientes experimentos, lo que da una idea de que es consistente y repetitivo. Este fenotipo consiste en que los gusanos son más pequeños y delgados que los gusanos controles (fenotipo estarved). Además tienen problemas con la puesta de huevos (fenotipo Egl). Estos fenotipos podrían estar relacionados con la incapacidad de coordinar el bombeo fraíngeo, cuya frecuencia se haya disminuida y a su vez resulta arrítmico. Este bombeo es imprescindible para la ingesta de alimento y al estar interferida se podría estar produciendo el resto de síntomas. Por último se testaron diversas sustancias antioxidantes sobre los gusanos mutantes por RNAi, con el objetivo de comprobar si se podía rescatar el fenotipo salvaje.

Autor: LÓPEZ SOTO MANUEL.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: INSTITUTO NACIONAL DE TOXICOLOGÍA. DPTO. SEVILLA.

Resumen: Se ha realizado un estudio de la variabilidad del ADN mitocondrial en 419 individuos no relacionados de la población andaluza autóctona. Estos individuos estaban repartidos en un total de 28 pueblos de toda la comunidad andaluza que se seleccionaron atendiendo a los siguientes críterios: 1,- Tener una antigüedad superior a los 200 años. 2,- No haber sufrido movimientos poblacionales, es decir, cierto grado de aislamiento. 3,- Tener un tamaño poblacional estabale entre 4000-8000 habitantes. Los principales objetivos de esta tesis fueron: A,- Conocer la estructura genético-poblacional del sur de la Península Ibérica. B,- Comprobar si el sustrato mitocondrial de la población andaluza autóctona encaja en la variabilidad mitocondrial europea. C,- Valorar la presencia de linajes mitocondriales procedentes del norte de África y subsaharianos. D,- Determinar posibles diferencias en el origen evolutivo entre los distintos pueblos analizados desde el punto de vista de ADN mitocondrial. E,- Obtener las secuencias de ADN mitocondrial con el fin de establecer una base de datos con fines forenses. De los resultados obtenidos de este trabajo se puede concluir que la población andaluza autóctona no presenta diferencias significativas con el resto de las poblaciones europeas en la distribución de los haplogrupos del ADN mitoconcrial. Asimismo, al igual que ocurre con la población europea en los linajes mitocondriales andaluces existe un importante componente paleolítico, siendo escaso neolítico. Los aportes de linajes procedentes delnorte de África fueron pequeños a pesar de la prolongada presencia musulmana en el sur de Peninsular y también se encontró una frecuencia de linajes de origen subsaharianos. En Andalucí se ha observado que la variabilidad mitocondrial es cualitativa y cuantitativamente semejante en las distintas provincias andaluzas. Por tanto, la población andaluza autóctona se comporta como un conjunto muy homogéneo que evidencia que todas las provincias se originaron a partir de un mismo sustrato poblacional.