GENETICA HUMANA, 4

Autor: PALOMA APARICI EVA.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Las distrofias reinianas son patologías de la retina cuya causa reside en defectos en las células foto-receptoras y el epitelio pigmentario de dicha retina, algunas de ellas afectan la región central inicialmente (distrofias de afectación macular) y otras afectan la región más periférica de la retina (distrófias de afectación inicialmente periférica de la retina). El gen ABCA4 codifica para una proteína llamada ABCR, responsable del transporte de derivados del ácido retineico del interior de las membranas discales del fotoreceptor, al exterior del disco con gasto de ATP. Este gen se ha encontrado mutado en distintas patologías de la retina como retinosis pigmentaria, distrofia de conos y bastones, enfermedad de STAR-GARDT, Fundus Flavimaculatus y puede ser un factor genético de riesgo para la degeneración macular asociada a la EDAT. Hemos postulado un modelo de correlación genotipo-fenotipo para este gen, donde la severidad del fenotipo se correlaciona con la actividad residual del ABCR además de demostrar heterogenetidad genética descrita para la retinosis pigmentaria donde nuevos genes descritos pueden ser responsables de la enfermedad.

Autor: SÁNCHEZ FERNÁNDEZ M. CARMEN.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD BIOLOGÍA - UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Detección de la frecuencia de las mutaciones C282Y y H63D del gen HFE en 107 pacientes con Hemocromatosis Hereditaria y en controles de la población española. Se describe que el genotipo C282Y/H63D es más frecuente en pacientes con Hemocromatosis Hereditaria que en controles y que la mayoría de los pacientes con Hemocromatosis Hereditaria (91,6%) presentan los genotipos C282Y/C282Y o C282Y/H63D del gen HFE. Cribado de 5370 donantes de sangre para las mutaciones C282Y y H63D del gen HFE, en el que se detectan 8 individuos C282Y/C282Y y 74 individuos C282Y/H63D. Se describe la penetrancia de los genotipos C282Y/C282Y y C282Y/H63D. Detección de parámetros bioquímicos de saturación de transferrina, hierro sérico y ferritina sérica en grupos de individuos con genotipos concretos, detectándose diferencias significativas entre el genotipo C282Y/C282Y y los otros genotipos. Búsqueda de nuevas mutaciones en 9 pacientes con Hemocromatosis Hereditaria sin los genotipos C282Y/C282Y ni C282Y/H63D en los genes HFE, TFR2 y FPN1. Se describe la existencia de diversos polimorfismos. Secuenciación de la región promotora del gen HFE en 25 pacientes Italianos de Hemocromatosis Hereditaria sin las mutaciones C282Y ni H63D. Se detecta el cambio -48 C/G en el 5'UTR del gen HFE en un paciente italiano de Hemocromatosis Hereditaria sin las mutaciones C282Y ni H63D. Estudio comparativo de la zona promotora del gen HFE en humanos, rata y ratón, detectándose elementos reguladores conservados mediante técnicas de comparación computacionales. Identificación de 1398 pb correspondientes a la región promotora del gen HFE de rata y detección de regiones reguladoras del promotor de rata mediante experimentos de retardación en gel. Se estudia el promotor humano del gen HFE mediante experimentos de "Reporter gene" con luciferasa. Detección de 5 formas de "splicing" en el gen HFE humano mediante experimentos de RT-PCR en la línea celular HepG2. Se alarga la región 3' UTR del gen HFE humano (exón 7) en 1512 pares de bases y la región 3' UTR del gen HFE de ratón (exón 6) en 1990 pares de bases mediante experimentos de RT-PCR, 3' RACE y Northern Blot. Detección de 2 nuevas formas de terminación del gen HFE humano en el exón 6 mediante experimentos de 3' RACE.

Autor: RODRÍGUEZ DE ALBA FREIRÍA MARTA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLÓGICAS U.C.M..

Resumen: El campo del DP comenzó a desarrollarse en 1966, cuando Steele y Breg demostraron que la constitución cromosómica del feto podía ser determinada analizando las células de líquido amniótico, previamente cultivadas. Dado que ya se tenía conocimiento de la asociación entre la edad materna elevada y el riesgo de un feto Síndrome de Down, su propuesta era el desarrollo del diagnóstico prenatal como un servicio médico. Actualmente, gracias al gran desarrollo sufrido por las técnicas citogenético-moleculares y moleculares, se pueden diagnosticar prenatalmente de forma rutinaria la gran mayoría de las anomalías cromosómicas, enfermedades metabólicas y enfermedades monogénicas como de expansión. Las indicaciones para la realización de un diagnóstico prental invasivo, son las siguientes: hijo anterior con una anomalía cromosómica, hijo anterior malformado, padres portadores de una anomalía cromosómica estructural, historia familiar de una enfermedad de herencia mendeliana o ligada al cromosoma X, riesgo de defecto de cierre del tubo neural, presencia de malformaciones fetales en un reconocimiento ecográfico de la gestión, niveles alterados de alfafetoproteína (AFP) y/o gonadotropina coriónica humana (beta-hCG) en suero materno (test sérico alterado) y edad materna elevada. Tanto la aminocentesis, biopsia corial y cordocentesis, son métodos invasivos de diagnóstico prenatal que conllevan un riesgo de pérdida fetal, por lo que solo se recomienda a aquellas gestantes que cumplen los criterios de riesgo anteriormente mencionados. En los últimos años se está tratando de desarrollar nuevas técnicas diagnósticas no invasivas diversos estudios demostraron la presencia de células fetales en la circulación de gestantes sanas. Dichos descubrimientos hicieron que se empezara a plantear la posible utilidad de estas células para un análisis cromosómico del feto. El propósito global del presente trabajo es realizar la detección de aneuploidías, mediante técnica de FISH , en los eritroblastos fetales que se encuentran circulando en el torrente materno. Para ello, se desarrollaron los siguientes objetivos: 1,- Selección de la técnica que a priori era más adecuada para llevar a cabo el aislamiento de los eritroblastos fetales, dentro de la rutina de un laboratorio de DP. 2,- Puesta a punto de la técnica elegida en muestras ricas en eritroblastos. 3,- Realilzación de la técnica en muestras de sangre de gestantes. 4,- Identificación de los eritroblastos aislados. 5,- Confirmación de la presencia de eritroblastos fetales. 6,- Optimización de la técnica. 7,- Realización de un estudio poblacional. 8,- Valoración de la sensibilidad de la técnica. 9,- Valoración del periodo idóneo para realizar el estudio cromosómico de las células fetales.

Autor: CLIMENT BOLTA M. CONSUELO.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: El deficit de ornitina transcarbamilasa esta ligado al cromosoma X y es el más frecuente de los deficits del ciclo de la urea. En esta Tesis se identifican 32 mutaciones distintas en el gen de la ornitina transcarbamilasa,22 de nuevo descripción, en 35 familias de un total de 49 analizadas en la que uno de sus miembros habia sido diagnósticado clinicamente de deficit de OTC. Esencialmente cada familia presentó su propia mutación lo que subraya el carácter "privado" de las mutaciones en éste déficit. Del estudio del impacto de las mutaciones de sigue que la mayoría producen una disminución de la cantidad de proteína enzimática. En los casos en los que no se identificó la mutación mediante procedimientos estandar se realizaron analisis adicionales que incluyeron la herencia de los polimorfismos intrasgénicos, de los que se describe uno informativo nuevo y se establecen 4 haplotipos; el analisis por PCR largo de todo el gen de la OTC y la herencia de microsatélites, con el que se identificó una deleción de todo el gen. El estudio del valor del diagnostico mutacional comparado con criterios clínicos y bioquímicos subraya la alta sensibilidad del estudio genético. De las mutaciones un es una deleción del gen, dos son microdeleciones, tres introducen codones de parada, cuatro causan errores de "splicing", una elimina el codón de inicio y otra el de término y 21 son de cambio de aminoácido. De algunas de estas mutaciones se han realizado estudios estructura-función que demostraron la no interferencia de dos mutaciones con el procesamiento mitocondrial de la proteina y demostraron mediante expresión en E coli con estudio de la solubilidad y análisis de la actividad enzimática y parámetros cinéticos que una de las mutaciones es un polimorfismo sin consecuencias clínicas y las cinco restantes analizadas son mutaciones patogénicas que en su caso impiden la expresión, y en el resto disminuyen la solubilidad de la proteína encontrándose según la mutación no afectación de la actividad enzimática, su perdida o su disminución sin cambios sustanciales en los parámetros cinéticos.

Autor: CLUSELLAS CASALS NURIA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT Y DE FORMACION CONTINUADA.

Resumen: En este trabajo se recoge y analiza la informacion sobre el diagnostico prenatal(DP) de cromosomopatias en Cataluña realizado en diferentes laboratorios durante 10 años, 1986-1995. En total sehan recogido 46469 DP, de los cuales 7171 fueron realizados en muestras de vellosidades coriales y 39298 en muestras de liquido amniotico. Durante este periodo se analizan las variaciones en la practica del DP, teniendo en cuenta: la tasa anual de utilizacion global y según edad materna, indicaciones para el estudio citogenetico, tipo de muestra utilizada, referencia de las gestantes y tasa anual de anomalias. En total se han diagnosticado 1043 anomalias, analizando su frecuencia según diferentes parametros: tipo de muestra, indicacion para el estudio, semanas de gestacion y edad materna. A partir de los resultados obtenidos, se ha aplicado un modelo estadistico de regresion logistica que ha permitido relacionar todos los factores disponibles que pueden influir en la deteccion de anomalias cromosomicas y establecer un modelo predictivo. La anomalias cromosomicas diagnosticadas se analizan según: el tipo de anomalia, frecuencia, indicacion principal y razon sexual. Las anomalias mas frecuentes son: la trisomia 21(34,13%) y anomalias estructurales equilibradas(23,78%). Las anomalias estructurales familiares se analizan valorando el riesgo de segregación desequilibrada según el tipo de anomalia, sexo del progenitor portador, motivo de diagnostico de la reorganización y tamaño del segmento implicado en el desequilibrio. Se ha realizado el seguimiento del 38% de los casos con anomalias cromosómicas hasta el momento del nacimiento, la interrupcion del embarazo o perdida espontanea, incidiendo en el seguimiento de los casos con anomalias estructurales equilibradas y cromosomas marcadores de novo, para poder establecer el riesgo de anomalia congenita.

Autor: VERGARA EZCURRA ALFREDO.
Año: 2000.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: En este trabajo se describe el clonado y caracterización de la región 5' del gen del receptor de retinoides humano hRXRb. El análisis del extremo 5' del gen ha revelado que este se encuentra en una región del genoma rica en G y C que contiene posibles sitios de unión para factores de transcripción como Sp1, AP-1, NFkB, SF-1, c-Ets o CREBP, así como posibles elementos de respuesta a la hormona tiroidea, el ácido retinoico y la vitamina D, pero no contiene cajas TAT ni CAAT. La actividad transcripcional del extremo 5' del gen se ha analizado mediante experimentos de expresión transitoria en células HeLa y CV-1. Con este fin se han construido 10 plásmidos quiméricos, denominados pPRXRVLuc1 a pPRXRBLuc13, en los que fragmentos de diferente longitud de la posible región promotora del hRXRb se han insertado en posición 5' con respecto al gen de la luciferasa. La transfección de estos plásmidos en las líneas celulares indicadas ha mostrado que esta región tiene actividad promotora y que los elementos cis-reguladores localizados en la región -302 a + 51 del gen son necesarios y suficientes para el desarrollo de esta actividad. Este fragmento rico en G y C, contiene dos cajas GC que interaccionan específicamente con el factor de transcripción Sp1 in vitro y se requieren para alcanzar valores de expresión elevados. El TNF-a disminuye en células HeLa entre 50-60% la actividad transcripcional de todas las construcciones pPRXRBLuc analizadas excepto pPRXRBLuc12. Esta acción, que debe realizarse a través de un elemento cis-regulador localizado en la región -302 a -71 del gen, está mediada por la p38 MAPK. El ácido 9-cis-retinoico incrementa la actividad transcripcional de las quimeras pPRXRBLuc en la línea celular CV1. Este aumento es máximo en la construcción pPRXRBLuc12, que contiene únicamente la secuencia -71 a +51 del gen HRXRV y no contiene ningún posible RARE. Sin embargo, la hormona tiroidea, a pesar de incrementar el nivel de transcripción del receptor en hígado de rata, no modifica la actividad transcripcional de las quimeras, lo que indica que estas construcciones no contienen TRE funcionales. La vitamina D, la forskolina y los esteres del forbol tampoco modifican la actividad transcripcional de los plásmidos pPRXRBLuc en células HeLa.

Autor: PENAS LADO MANUEL.
Año: 2000.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL CLÍNICO SANTIAGO DE COMPOSTELA.

Autor: MAYO CABRERO DAVID.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DPTO GENETICA (FJD).

Resumen: INTRODUCCION: Las ataxias hereditarias son un grupo de enfermedades neurodegenerativas de clinica muy heterogenea. Algunas ataxias tienen una base genética y hasta el momento se han clonado los genes responsables de las formas SCA 1;SCA 2,SCA3,SCA 6, SCA 7,SCA 8,DRPLA y Ataxia de Friedreich. OBJETIVOS: Determinación de los rangos normal y patológicos de los tripletes en las distintas formas y la distribución de las mismas en población española. Establecer una correlación fenotipo-genotipo. PACIENTES: Se cuenta con 210 familias con al menos un miembro con ataxia de la marcha (33 casos con herencia autosómica dominante, 66 con herencia recesiva, siendo el resto aparentemente esporádicos. METODOS: Estudio genético de la expansión de tripletes en los genes SCA 1,SCA 2,SCA 3,SCA 6, SCA 7,SCA 8, DRPLA y Ataxia de Friedreich mediante PCR. RESULTADOS: Los rangos normal y patológicos de los tripletes de las distintas formas en población espapola entran dentro de los descritos en la literatura para otras poblaciones. SCA 3 es la forma de ataxia dominante más frecuente en nuestra población (24.2%) seguida de SCA 2 y SCA 7 (12.1% respectivamente) SCA 6 (9.1%) y SCA 8(3%). El 39.5 % de los casos con herencia dominante no presentaron expansión en los genes estudiados. En los casos con herencia recesiva, el 52.7% presentó expansión en el gen de la ataxia de Friedreich, el 1.8% presentó mutación en el gen alfa-tocoferol y el resto no presentó mutación en ninguno de los genes estudiados. Solo el 3% de los casos aparentemente esporádicos presentaron mutación en alguno de los genes estudiados. No existe una correlación fenotipo-genotipo que permita la distinción clinica salvo en SCA 7 por la presencia de degeneración reteniana.

Autor: SANZ ROJO RAUL.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FUNDACION JIMENEZ DIAZ.

Resumen: La región centromérica de los cromosomas humanos han sido estudiada durante los últimos veinte años profundizándose en el estudio de la composición y organización de sus secuencias y de las proteinas especificas de esta region. La principal aplicación de estas investigaciones sería la creación de cromosomas artificiales humanos que incorporaran genes terapéuticos. La presencia de neocentrómeros se ha descrito en fragmentos cromosómicos que no representan la región centromérica caracteristica del cromosoma del que derivan. Se han caracterizado diferentes proteínas centroméridas (CENPs) aunque no se ha podido determinar cuáles son las proteínas imprescindibles para conferir la actividad centromérica. El planteamiento general de este trabajo ha sido profundizar en los estudios de la region centromérica con el fin de aportar nuevos datos sobre la localización, funcion y secuencias minimas requeridas que aseguren una segregacion cromosómica correcta, identificando las secuencias centroméricas presentes en distintos cromosomas reordenados, identificando las secuencias de ADN satelite alfa presentes en centrómeros con una gran reducción de este tipo de ADN satélite y analizando la función de las diferentes secuencias de ADN satélite alfa identificadas. Finalmente, se han obtenido como principales conclusiones: 1. Todos los cromosomas dicéntricos presentaban un centrómero activo, coincidendo con la constricción primaria. Todos tenian cantidades similares de ADN satelite alfa en ambos centrómeros. 2. Las translocaciones Robertsonianas presentaban el punto de rotura en regiones del ADN satélite clasico II-III, excepto en un caso en el que estaba en la región del NOR o en una región más distal. 3. La translocación Robertsoniana observada con mayor frecuencia ha sido la der(13;14). Los microcromosomas analizados derivaban mayoritariamente del cromosoma 15. 4. En las translocaciones Robertsonianas se produce la inactivación de uno de los centrómeros, quedando activo el centrómero del cromosoma 14 sobre los demás, seguido del centrómero del 13. 5. Los microcromosomas derivados de acrocéntricos se han formado por un mecanismo de recombinación entre regiones de ADN satélite o entre regiones de ADN satelite y eucromatina. 6. Una de las subfamilias de ADN satelite alfa del cromosoma 15 (pTRA-20) esta sobre la constricción primaria y presenta mayoritariamente dominios de unión para la CENP-B. La otra subfamilia (pTRA-25) está en el brazo corto y apenas presenta dominios de unión para la CENP-B. 7. Se han observado polimorfismos, consistentes en pequeñas variaciones en la cantidad de ADN satelite alfa, sobre los centrómeros de algunos cromosomas 13,21 y 15. Solamente un cromosoma 15 presentaba una gran reducción en la cantidad de ADN satélite alfa con respecto a su homólogo. 8. No se ha detectado ningún centrómero sin ADN satelite alfa. Aunque un cromosoma 15 presentaba una gran reducción de la subfamilia de ADN satelite alfa pTRA-25 mantenía la otra subfamilia (pTRA-20). Este cromosoma un poco ADN satelite alfa tenia un centrómero completamente funcional con presencia de las proteínas CENP-A y CENP-C y era mitóticamente estable.

Autor: LAFFON LAGE BLANCA.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El estireno es un compuesto de elevada importancia comercial que se utiliza en la producción de gran variedad de polímeros y copolímeros. En este trabajo se ha evaluado el potencial riesgo genotóxico que la exposición a estireno puede implicar mediante la realización de un estuido in vitro utilizando estireno-7,8-óxido (SO) que es su principal metabolito nocivo, y de un estudio in vio en una población de trabajadores de fábricas de plásticos reforzados con fibra de vidrio, ya que es en estas industrias donde se producen las mayores exposiciones humanas a esta sustancia. Los resutlados del estudio in vitro muestran que la exposición de leucocitos periféricos humanos a SO induce daño citogenético, evaluado mediante los tests de intercambios entre cromátidas hermanas y micronúcleos, y daño en el ADN, evaluado mediante la prueba del cometa, en concentraciones superiores a 50 uM, estando ambos tipos de daño fuertemente relacionados. El estudio de los cambios en la expresión de los genes p53, p21, bcl-2 y bax muestra que la exposición de linfocitos humanos a niveles elevados de SO induce retraso en el ciclo celular de los linfocitos, probablemente encaminado a permitir la actuación de los sistemas de reparación sobre el daño causado, más que a dirigir a las células hacia una muerte celular programada o apoptosis. En el estudio poblacional se han obtenido incrementos significativos en el daño citogenético y sobre el ADN en un grupo de individuos expuestos a estireno a niveles cercanos al Valor Límite Ambiental, fijado en 20 ppm por el Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo, respecto a una población control. Estos resultados, junto con las elevadas correlaciones descritas entre los parámetros citogenéticos y la longitud de la cola del cometa, justifican la utilización de los ensayos realizados en la biomonitorización de poblaciones humanas expuestas a estireno. Como complemento del estudio poblacional, se ha puesto a punto uan metodología cromatográfica de líqudios de alta resolución para la determinación de los dos metabolitos mayoritarios del estireno en la orina de individuos expuestos, a fin de poder utilizarlos como biomarcadores de exposición. El método desarrollado es sencillo,sensible y espcífico, permite la realización del análisis en menos de 15 minutos sin necesidad de emplear procedimientos de preparación de las muestras complejos, largos y costoso, y ha demostrado ser apropiado para realizar una estimación indirecta de los niveles de exposición a estireno. Admeás, la facilidad de obtención de las muestras y la simplicidad, rapidez y bajo coste de la metodología la constituyen en una herramienta adecuada para la realización de análisis frecuentes entre los trabajadores.

Autor: MONTIEL DUARTE RAFAEL.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Se analizarón 52 individuos procedentes de la necrópolis de la Plaça Vella de Terrassa, Barcelona (S. XV-XVI). Se obtuvo DNA mitocondrial (mtDNA) de 24 de ellos. Se analizó también el DNA mitocondrial de 90 individuos contemporáneos de población residente de las ciudades de Terrassa y Barcelona y estudiantes de la Universidad Autónoma de Barcelona. Se llevó a cabo un análisis filogenético incluyendo información previamente publicada de diversas poblaciones principalmente europeas. El análisis mostró una cercana relación entre las poblaciones antigua y actual de Cataluña y evidenció también la cercanía entre estas poblaciones y otras poblaciones mediterráneas en cuanto a su mtDNA. En cambio, la relación de la población Catalana con otras poblaciones ibéricas (Galicia y País Vasco) no resultó tan estrecha. En el plano metodológico, se discute sobre los criterios que deben seguirse para la autentificación del DNA obtenido de restos antiguos y se analizan los factores que pueden influir en su preservación y recuperación. Se describe también un método sencillo que disminye los efectos negativos que presentan los extractos de DNA antiguo durante procesos enzimáticos como la Relación en Cadena de la Polimersas (PCR).

Autor: NADAL SÁNCHEZ MARGARITA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Los casos de síndrome de Down debido a trisomía parcial del cromosoma 21, se dan con una frecuencia muy baja. No por su rareza sino por su partiularidad citogenética, estos casos aportan una información muy valiosa para el establecimiento de correlaciones entre el genotipo y el fenotipo. Estudiando el alcance citogenético de cada trisomía parcial y las características clínicas de la persona, se puede determinar qué regiones del cormosoma 21, cuando se encuentran en trisomía, son responsables de una determinada cracterística clínica. Mediante el estudio detallado de estos casos y estableciendo comparaciones entre ellos, se ha llegado a la construción de un mapa fenotípico que asigna a las diferentes regiones del cromosoma 21, los diferentes rasgos clínicos del Síndrome de Down. El mapa fenotípico definitivo se completará cuando se conozcan todos los genes del cromosoma 21 y sus respectivas funciones, de tal forma que se pueda asociar la triple dosis de cada gen con cada una de las cracterísticas clínicas que se encuentran en el síndrome. En este trabajo se recoge el estudio citogenético-molecular (mediante la técnica de hibridación in situ de fluorescencia o FISH) y clínico de seis casos de síndrome de Down debidos a trosomía parcial del cromosoma 21 para contribuir a la construcción del mapa fenotípico y han permitido, además, ofrecer consejo genético a las familias. Este estudio ha conllevado la preparación de un contiguo de sondas de tipo YAC del brazo largo del cromosoma 21. Éstas se han estudiado para su quimerismo y en caso de ser positivas, se han descartado para el estudio. La FISH se ha aplicado también para el mapeo de genes aislados en el laboratorio del cromosoma 21 así como para el mapeo de la insercción de transfenes de dicho cromosoma en dos modelos murinos. Finalmente, se describe la aplicación de la FISH en improntas de tejido para genotipar los ratones trisómicos parciales Ts65Dn, que son un modelo murnio para el estudio del síndrome de Down.

Autor: DIEGO BOGUÑÁ CARLES DE.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD BIOLOGIA.

Resumen: Las distrofias de cinturas recesivas (LGMD2) son enfermedades genéticas que afectan a la musculatura proximal de la cintura pélvica y de la cintura escapular. Actualmente, existen 9 formas diferentes de LGMD2 de las que en esta tesis se han estudiado 5: LGMD2A, 2C 2D, 2E y 2F. De 113 familias iniciales se han identificado las mutaciones responsables en 57 de ellas, de las que 17 familias pertenecían al tipo 2A, 24 familias al tipo 2C, 11 familias al tipo 2D, 4 familias al tipo 2E y una al tipo 2F. Se han identificado 25 mutaciones y 15 polimorfismos diferentes a lo largo de los 5 genes estudiados. La mutación C283Y en el exón 8 del gen Gamma-SG es exclusiva de la etnia gitana. La mutación 521delT en el exón 6 del gen Gamma-SG presenta un efecto fundador en el área geográfica del mediterráneo. La mutación 236AG->TCATCT en el gen CAPN3 presenta un efecto fundador en el País Vasco. Las familias en las que se han identificado estas mutaciones presentan un fenotipo bastante homogéneo, mientras que en el resto de familias el fenotipo era muy variable

Autor: ARZA MACIA BEGOÑA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA, UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: En esta tesis hemos caracterizado la interacción del plasminógeno con la alfa-enolasa, la proteína inflamatoria de macrófagos (MIP)-2alfa y la (pro)estromalisina-1((pro)MMP-3). La alfa-enolasa es una enzima glicolítico citoplasmático ubículo, que funciona como un receptor del plasminógeno en la superficie celular. Hemos generado el mAB 9C12 contra la alfa-enolasa. Este mAB reaccionó en ELISA con la alfa-enolasa humana, incluso tras eliminar su lisina C-terminal, que media su unión al plasminógeno. El mAB 9C12 destectó alfa-enolasa en la membrana citoplasmática de neutrófilos y células monocitoides U937. El mAB 9C12 no bloquó la unión del plasminógeno a las células. Por phage display hemos identificado la secuencias DLDFKSPDDPSRYISP, que abarca los residuos 257-272 de la alfa-enolasa humana y que se localiza en la superficie de la molécula, como el epítopo reconocido por el mAB 9C12. Por phage display hemos identificado la quimoquina (MIP)-2alfa como una proteína que se une específicamente al plasminógeno. Esta interacción está mediada por los kringles 1-3 del plasminógeno y por la región C-terminal rica en lisinas del MIP-2alfa. La activación catalizada por tcu-PA del plasminógeno unido al MIP-2alfa asociado a una superficie es unas 2,5 veces más eficaz que en solución. La asociación del MIP-2alfa con una superficie sólida expone su región de unión al plasminógeno, pudiendo dar lugar a un aumento en la generación local de plasmina. La (pro)MMP-3 se une específicamente al t-PA sin hidrolizarlo. La activación de Glu-plasminógeno por t-PA en presencia de proMMP-3 sigue una cinética de Michaelis-Menten; a una concentración saturante de proMMP-3, la eficacia catalítica del tct-PA aumenta 20 veces, debido principalmente a una mayor afinidad del t-PA por el plasminógeno. El plasminógeno y el t-PA se unen a diferentes sitios de la pro-MMP-3. Estos datos son compatibles con la formación de un complejo ternario cíclico entre el t-PA, el plasminógeno y la proMMP-3, en el que el t-PA tiene una mayor afinidad por el plasminógeno, que probablemente adopta una conformación tipo Lys-plasminógeno. Para que haya una unión y una estimulación máximas, se requieren los dominios finger y factor de crecimiento epidérmico del t-PA y los dominios kringle del plasminógeno. La sustitución del Glu 202 en la MMP-3 por una Ala, o una Lys, resulta en la inactivación de la molécula y la sustitución por un Asp da lugar a una disminución de 5 a 10 veces de su actividad enzimática. La sustitución del Glu 202 en la (pro)MMP-3 por Ala, Lys o Asp no afecta a su afinidad de unión al plasminógeno o a la u-PA, pero afecta dramáticamente a su mecanismo de activación por APMA.

Autor: GARCIA PEREZ M. JOSE.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DPTO ANATOMIA PATOLOGICA FUNDACION JIMENEZ DIAZ.

Resumen: La tesis forma parte de un proyecto más amplio que acomete desde diversas disciplinas el estudio de Linfoma Anaplásico de celula grande (LACG). Se han abordado en este trabajo, dentro del campo de la biologia molecular, aspectos relacionados con la estirpe y patogenia de estos linfomas. Se analiza el reordenamiento de los genes de los receptores antigenicos y se compara el comportamiento de los LACG con el de otros linfomas no Hodkin (LNH) para determinar si presentan algunas caracteristicas distintivas. También se estudia la presencia de la t(2,5) (p23.q35) y la expresión de la proteina ALK, asi como la metilacion de los genes supresores de tumores p16 y p15 para precisar la especificidad e implicacion de estas alteraciones en la patogenia de los LACG. Para poder valorar los resultados se incluyen, ademas, otras entidades que tambien expresan el marcador de activacion CD30, como son el linfoma de Hodgkin (LH), los LACG-LH relacionados y los linfomas no Hodkin T CD30+.

Autor: ZÁRATE ROMERO RUHT NOEMI.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DPTO. BIOLÓGICAS, UNIDAD GENÉTICA.

Resumen: En la presente tesis se ha realizado el estudio tanto citogenético como molecular, de una serie de pacientes con cáncer colorrectal esporádico, evluando la significación tanto pronóstica como diagnóstica de las alteraciones encontradas. Por otra parte, se realizó el estudio de una familia con cáncer colorrectal hereditario (CCHNP) -no polipósico- a través del análisis de ligamiento del CCHNP a uno de los dos genes (hMSH2 y hMLH1) frecuentemente alterado en este tipo de neoplasia. Al mismo tiempo se evaluó la implicación del fenotipo MSI-H como factor predictivo en el desarrollo de cánceres tanto metacrónicos como sincrónicos en los miembros de esta familia.

Autor: GARCÍA OTÍN ANGEL-LUIS.
Año: 2000.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA.

Resumen: La arteriosclerosis es la principal causa de mortalidad y de enfermedad invalidante en las sociedades desarrolladas. Las situaciones de dislipemia son un reconocido factor de riesgo para el desarrollo de arteriosclerosis, y entre éstas, las dislipemias mixtas (caracterizadas por una elevación conjunta de colesterol y triglicéridos plasmáticos producida por la alteración del metabolismo de partículas ricas en triglicéridos) tienen una gran prevalencia. Entre ellas, la hiperlipemia familiar combinada (HLFC) y la disbetaliproteinemia tienen un carácter hereditario. Mientras el defecto genético para la disbetalipoproteinemia se encuentra en el gen de apoE, para la HLFC se desconoce el principal locus implicado y se proponen diferentes loci modificadores del fenotipo mostrado. En este trabajo se analizan polimorfismos y mutaciones comunes en los genes de apoE, LPL y apoCIII, considerados por su influencia en el metabolismo lipoproteico, en un grupo de sujetos con dislipemia mixta primaria (en los que se distinguió entre fenotipos Iib y III). Se estudia la influencia de dichos polimorfismos y mutaciones sobre las concentraciones lipídicas y de apoE, así como el posible efecto en la respuesta a fármacos hipolipemiantes. Asimismo, se han detectado en sujetos con disbetaliproteinemia mutaciones en el gen de apoE que corresponden a variantes de apoE causantes del fenotipo observado (E1(G127D), E2(R136S), E2(R136C)), y una mutación silenciosa en el gen de LPL (c484G>A) en sujetos con fenotipo IIb. También se han estudiado algunos sujetos con hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia aisladas, y se han detectado una variante de apoE que se asocia al fenotipo de hipercolesterolemia (E3*L149), y dos mutaciones en el gen de LPL no descritas en un sujeto con hiperquilomicronemia (G273V y R306H). Se ha iniciado la caracterización del efecto de dichas mutaciones a través de distintas aproximaciones.

Autor: BOISO IRENE.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La presente tesis analiza el efecto de un protocolo de frecuente aplicación clínica (de congelación lenta y descongelación rápida, utilizando 1,2 propanediol y sacarosa como crioprotectores) sobre la supervivencia, la capacidad de maduración in vitro y la estructura del huso meiótico de ovocitos humanos, congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II. Para llevarlo a cabo se plantearon los siguientes objetivos parciales: A,-Desarrollar y validar un modelo de estudio a partir de ovocitos maduros in vitro. Este estudio ha permitido demostrar mediante análisis citogénetico y de FISH que la maduración in vitro de ovocitos no induce per se un incremento de la tasa de aneuploidías, por tanto que los ovocitos madurados in vitro constituyen un modelo válido de estudio. B,- Determinar la capacidad de maduración in vitro de los ovocitos de cada uno de los grupos experimentales. El cultivo in vitro de ovocitos se realizó en líquido folicular proveniente de folículos estimulados. En este estudio no se observaron diferencias en la tasa de maduración ni diferencias en el tiempo de cultivo requerido para alcanzar el estadío de metafase II en los ovocitos asignados a los distintos grupos experimentales. C,- Determinar la tasa de supervivencia de ovocitos humanos congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II al proceso de congelación-descongelación. Este estudio ha demostrado que los ovocitos congelados en estadío de vesícula germinal son desde el punto de vista morfológico más resistentes al daño croinducido que lo ovocitos criopreservados en metafase II. En ambos casos se observan tasas de supervivencia elevadas, comparables a las publicadas en la bibliografía anteriormente. También se ha demostrado que el proceso de criopreservación en estadío de vesícula germinal no afecta la capacidad de los ovocitos para reiniciar la progresión meiótica hasta metafase II, ya que no se han detectado diferencias significativas en el tiempo requerido para la extrusión del primer corpúsculo polar antes y después de la congelación, ni en las respectivas tasas de maduración. D,- Determinar la estructura del huso meiótico en ovocitos humanos congelados en estadío de vesícula germinal y de metafase II comparándola con la de ovocitos no criopreservados, para lo que se desarrolló una técnica de tinción inmunocitoquímica del huso meiótico. Este estudio ha permitido determinar que la mayoría de los ovocitos en metafase II madurados in vitro (no sometidos a ningún tratamiento experimental) y analizados mediante microscopía confocal, presenta un huso de morfología normal. En contra de la hipótesis inicial en este estudio se ha determinado que la criopreservación de ovocitos en vesícula germinal no representa una ventaja respecto a la criopreservación de ovocitos en metafase II en lo que se refiere a la preservación de la integridad estructural del huso meiótico. La congelación tiene un efecto deletéreo sobre la estructura del huso meiótico de los ovocitos congelados en vesícula germinal, siendo la tasa de ovocitos con aberraciones estructurales del huso relativamente baja mientras que en un elevado porcentaje de ovocitos no se detectan microtúbulos de tubulina polimerizada. El efecto deletéreo de la congelación en los ovocitos no se detectan microtúbulos de tubulina polimerizada. El efecto deletéreo de la congelación en los ovocitos criopreservados en este estadío afecta también a las características morfológicas de los cromosomas y su distribución en la placa metafásica. La congelación tiene un efecto deletéreo sobre la estructura del huso meiótico de los ovocitos congelados en metafase II. Las anomalías incluyen un elevado porcentaje de ovocitos en los que no se detectan microtúbulos de tubulina polimerizada, y una tasa de ovocitos con aberraciones estructurales del huso relativamente baja. En los casos en que se observa ausencia del huso, los cromosomas forman un grupo no siempre ordenado y no se observan cromosomas aislados en el citoplasma.

Autor: OSORIO CABRERO ANA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FUNDACION JIMENEZ DIAZ.

Resumen: En el presente estudio se realizó un análisis molecular de los genes BRCA1 y BRCA2 en un amplio grupo de familias españolas seleccionadas en base a su historia familiar de cáncer de mama o cáncer de mama y ovario, para tratar de caracterizarlas genéticamente. Los objetivos del estudio fueron los siguientes: 1. Identificación de posibles mutaciones recurrentes características de nuestra población. 2. Determinación del porcentaje de familias de alto riesgo atribuíbles a mutaciones en uno u otro gen. 3. Caracterización de las mutaciones encontradas. 4. Establecimiento de una correlación genotipo-fenotipo. 5. Establecimiento de un protocolo de trabajo en base a los resultados obtenidos. Para cumplir estos objetivos se realizó un análisis de las mutaciones recurrentes descritas en los genes BRCA1 y BRCA2 en 136 familias y un estudio molecular completo de los dos genes, en 32 familias de alto riesgo. Este estudio presenta los primeros datos sobre la proporción de familias con cáncer de mama/ovario atribuíbles a los genes BRCA en población española. Todos los objetivos propuestos fueron realizados y los resultados obtenidos concuerdan con lo que se ha descrito en otras poblaciones.

Autor: SÁNCHEZ TAPIA EVA M..
Año: 1999.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El gen Ikaros codifica una familia de factores de transcripción que desempeñan un papel fundamental durante la linfopoyesis. En nuestro trabajo caracterizamos la organización genómica del gen Ikaros humano, revelado que cosnta de , al menos, 9 exones, dos más de los propuestos incialmente, que se desitribuyen en 80 Kb del cormosoma 7. Hemos caracterizado las secuencias dadoras y aceptoras de procesamietno de los exones del gen que siguen la secuencia consenso de procesamiento GT-AG. El análisis detalaldo de las mismas, ha revelado que existen diferencias en las secuencias de procesameitno de los exones del gen Ikaros: mientras que los exones 1,2,4 y 7 están flanqueados por secuencias de procesamiento muy conservada, las que flanquean los exones 3,5 y 6 diferencian los suficiente como para justiticar su procesamiento alternativo. Además, se ha realizado un estudio de la organización del gen en distintos tipos de leucemias, describiendo en leucémias linfoblásticas agudas de precursores B una deleción de 30 nucleótidos en el exón 6 que no se detecta en linfocitos normales y genera una proteína nómala. Describimos también la primera alteración molecular de este gen en un caso de leucemia mieloblástica aguda localizada en el extremo 3' del gen Ikaros. En este trabajo mostramos por primera vez que el gen Ikarros humano empela el mecanismo de edición del RNA para generar nuevas isoformas proteicas. Uno de los casos de edición supone el cambio de un nucleótido T po C y el otro caso supone un nuevo mecanismo, que implica la delección de un dinucleótido AG, provocando un cambio en la fase de lectura y generando una proteína carente del exón 7. Esta neua isoforma es específica de estirpe celular, apareciendo en linfocitos B y monocitos.