DESARROLLO VEGETAL

Autor: ORTIZ ZAPATER ELENA.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: En células animales, la endocitosis es un proceso celular básico. Permite la incorporación de moléculas extracelulares, la internalización y el reciclado de una serie de receptores de membrana de gran importancia fisiológica, la presentación de antígenos o el recambio de membrana plasmática. Si bien existen en la actualidad suficientes evidencias de que la endocitosis es un proceso celular que también ocurre en células vegetales, su significado fisiológico se desconoce. Se ha propuesto la existencia de una endocitosis mediada por receptores (EMR) que podría permitir la captación de nutrientes o la regulación negativa de señales inducidas por hormonas, factores de crecimiento, toxinas o elicitores. El objetivo general de esta Tesis fue establecer claramente la existencia de EMR en células vegetales y analizar el tráfico intracelular de ligandos presumiblemente incorporados por EMR, para tratar de establecer el significado fisiológico de este proceso en células vegetales. Para ello, se utilizaron suspensiones celulares y protoplastos de arroz (Oryza sativa), así como protoplastos de tabaco (Nicotiana tabacum BY2) y Arabidopsis thaliana como sistemas experimentales, y proteínas biotiniladas, biotina libre y biotina unida a fluoresceína como marcadores de endocitosis. Se pudo comprobar que estos cuatro sistemas experimentales incorporan proteínas biotiniladas con una eficiencia muy superior a la de las correspondientes proteínas sin biotinilar, y también biotina libre o unida a fluoresceína. El proceso depende de la temperatura, se satura con el tiempo y la concentración de marcador y se compite con biotina libre, sugiriendo que la internalización de proteínas biotiniladas ocurre por EMR. Además, el marcador internalizado aparece mayoritariamente en la fracción de membranas y se ha comprobado que el destino final del mismo es la vacuola, estación final de la ruta endocítica. En este sentido, se ha purificado y caracterizado una proteína de 75 kDa que podría estar implicada en la captación de marcadores biotinilados. Esta proteína, que posee las características esperadas para un receptor implicado en endocitosis, podría permitir la captación de biotina con fines anabólicos o estar implicada en un proceso de transducción de señales. También se ha demostrado la implicación del citoesqueleto en la entrada de marcadores biotinilados, como cabría esperar para un proceso endocítico. Por otro lado, el tráfico de muchas proteínas de membrana requiere de señales de clasificación orientadas hacia la cara citoplasmática. En el caso de la EMR, estás señales deben ser reconocidas por el complejo adaptador AP2, necesario para la formación de vesículas recubiertas de clatrina. Se ha comprobado que la entrada de marcadores biotinilados se inhibe drásticamente en presencia de la tirfostina A23, un análogo de tirosina con capacidad de interferir con la interacción entre el complejo adaptador AP2 y señales de clasificación basadas en tirosina presentes en receptores de membrana plasmática que participan en la endocitosis. Ello sugiere que la entrada de marcadores biotinilados ocurre a través de un proceso de EMR, y que el supuesto receptor poseee motivos de tirosina que permiten el reclutado del complejo AP2. El receptor de transferrina humano (hTfR) es un excelente marcador de EMR en células de mamífero, y contiene una señal de clasificación basada en residuos de tirosina que le permite su entrada en la célula. Se ha expresado el receptor de transferrina humano en protoplastos de Arabidopsis thaliana, donde es capaz de mediar la incorporación de transferrina-rodamina, ligando natural de dicho receptor. En protoplastos transfectados, la internalización de transferrina-rodamina se inhibe en presencia de A23, sugiriendo que la señal de endocitosis de éste receptor es plenamente funcional en células vegetales y que éstas poseen presumiblemente toda la maquinaria necesaria para la EMR. Además, se ha caracterizado una señal de clasificación (MEQFP) basada en un residuo de fenilalanina, originalmente caracterizada en la cola citoplasmática del receptor de manosa 6 - fosfato en células animales, y que también está presente en varias proteínas de membrana plasmática en células vegetales. En ensayos in vitro se ha demostrado la capacidad de esta señal de clasificación para reclutar a las adaptinas del complejo AP2 a partir de extractos citosólicos de Arabidopsis thaliana, sugiriendo que las proteínas que poseen esta señal podrían participar en el proceso de EMR.

Autor: BENLLOCH ORTIZ MARÍA DE LOS REYES.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: Universidad Politécnica de Valencia.
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: Medicago truncatula (Gaernt.) como especie modelo para el análisis genético molecular del desarrollo floral en leguminosas El estudio de las bases genéticas del desarrollo en especies leguminosas es importante en tanto que entre estas especies se encuentran algunos de los cultivos de mayor importancia agronómica a nivel mundial. M. truncatula surge como la leguminosa modelo para el análisis genético molecular de diversos aspectos de la biología de estas especies. En los últimos años se ha alcanzado un notable conocimiento de los procesos de iniciación y desarrollo floral en especies leguminosas. El desarrollo de flores e inflorescencias en estas especies presenta una gran diversidad e importantes diferencias con respecto a lo descrito en especies modelo como Arabidopsis o Antirrhinum. El estudio de las bases genéticas de dichas diferencias podría ayudarnos a entender los mecanismos que han dado lugar a la amplia gama de morfologías que observamos hoy día en la naturaleza. La presente Tesis Doctoral aborda la caracterización de las bases genéticas del desarrollo floral en M. truncatula. Para ello se realizó un análisis morfológico detallado del desarrollo de la inflorescencia y la flor en esta especie haciendo comparándolo con otras leguminosas como el guisante (P. sativum) y especies modelo como A. thaliana y A. majus. Así se ha comprobado que existen importantes diferencias en este proceso que reflejan la diferente morfología de la inflorescencia de cada una de estas especies. Con el objetivo de desvelar las bases genéticas de estas diferencias se llevó a cabo una mutagénesis de semillas de M. truncatula con etilmetanosulfonato (EMS). Se han iniciado los rastreos en busca de mutantes afectados en la arquitectura de la inflorescencia y/o flor. Hasta el momento se han identificado ocho mutantes florales, cinco de ellos con defectos en la especificación de la identidad de los órganos florales (alteraciones homeóticas). Asimismo, se han aislado y caracterizado dos genes MADS clves en el desarrollo floral: MtAPETALA1 (MtAP1) y MtPISTILLATA (MtPI). El estudio de MtAP1 se desarrolló a raíz del aislamiento del mutante Mtapelata mediante una aproximación de genética reversa. Se realizó un rastreo mediante PCR de una población de mutantes de M. truncatula etiquetados por el retrotransposón Tnt1 de tabaco. MtAP1 ha resultado ser el homólogo a AP1 de Arabidopsis y tener un papel clave en la especificación de la identidad de meristemo floral. El aislamiento de Mtap1 confirma la aplicabilidad de esta herramienta de genética reversa en las grandes poblaciones de mutantes por inserción que están siendo actualmente generadas. La caracterización del gen MtPI mediante otra estrategia de genética reversa, el RNA de interferencia, ha permitido comprobar que se trata del homólogo de PI en Arabidopsis. Este gen desempeña un papel importante en la especificación de la identidad de pétalos y estambres, como ha sido descrito para sus homólogos en otras especies. Sin embargo, no desempeña ningun papel en el desarrollo de los primordios comunes (meristemos efímeros que en M. truncatula dan lugar a los primordios de pétalos y estambres) ni en el desarrollo de la hoja, como se había sugerido en base a estudios previos en guisante. El ensayo de dos herramientas en genética reversa en M.truncatula, como son el rastreo por PCR de mutantes por inserción y el RNA de interferencia, constituyen una novedad y confirman que esta especie reúne las condiciones necesarias para su uso como especie modelo en el estudio de la biología de las leguminosas.

Autor: CERDÁN SALA M. MAR.
Año: 2003.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En la actualidad, uno de los principales problemas nutricionales limitantes de la producción agrícola mundial es la clorosis férrica. De entre los diferentes métodos que se pueden emplear para su corrección y prevención, la aplicación de los quelatos FeEDDHA y FeEDDHMA es el que ha proporcionado mejores resultados. Estos quelatos están constituidos por dos isómeros geométricos al 50%, el d,1-racémico y el meso, los cuales tienen distinta estabilidad. En relación a la eficacia que estos quelatos tienen como fuente de Fe para las plantas, destacar que depende de su estabilidad en el medio, de la capacidad de las plantas para tomar el Fe aportado por dichos quelatos y de su reactividad frente a los distintos componentes del suelo. En este trabajo de investigación se ha estudiado: 1,- El efecto que sobre estabilidad de los isómeros de FeEDDHA y FeEDDHMA tiene la presencia, en el medio, de distintos iones competidores. Tras la realización de este estudio se observó que: A,- La estabilidad de los isómeros de FeEDDHA y FeEDDHA depende del valor de pH, de la relación entre las concentraciones de ión competidor y quelato (NQ), y de la fuerza iónica de la disolución nutritiva. B,- El isómero que sufre mayores pérdidas es siempre el menos estable, el meso para FeEDDHA y el d,1-racémico para FeEDDHMA. C,- Los agentes quelantes y el Fe no (o-EDDHA/MA) de los quelatos comerciales reducen los efectos negativos que los iones competidores producen sobre la estabilidad de los quelatos FeEDDHA y FeEDDHMA. 2,- Si existe preferencia en la toma del Fe procedente de los isómeros de FeEDDHA por parte de plantas de estrategias I y II ante situaciones de déficit de este nutriente. Los resultados obtenidas muestran que: las plantas de estrategia I consumen preferentemente el Fe que está en forma del isómero meso, es decir, del menos estable, mientras que las plantas de estrategia II toman al Fe independientemente del isómero que esté presente en la disolución. 3,- El efecto que las sustancias húmicas pueden tener en la mejora de la disponibilidad del hierro procedente de los quelatos férricos en suelos calizos. A partir de los datos experimentales se establece: A,- Las mezclas quelato-sustancia húmica no incrementan el tiempo que el Fe permanece disponible para la planta en la disolución del suelo, aunque sí puede afectar a la velocidad a la que tiene lugar el proceso de pérdida de este nutriente. B,- El Fe no (o-EDDHA) que contienen los quelatos FeEDDHA comerciales presenta una elevada reactividad frente a los diferentes materiales edáficos y suelos, precipitando o quedadno adsorbido sobre la superficie del sustrato durante las primeras horas de interacción. C,- En las mezclas quelato-sustancia húmicas se observa una competencia entre el quelato y la sustancias húmicas de forma que sólo uno de estos compuestos controla el proceso de solubilización de nutrientes que se produce tras el ensayo de agitación con los diferentes materiales edáficos.

Autor: BARANDALLA URTIAGA LEIRE.
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DEL PAÍS VASCO.

Resumen: La mejora genética de patata (Solanum tuberosum. L) a nivel diploide constituye otro método complementario al sistema clásico de mejora. Se compone de tres fases prinpales: la obtención de clones dihaploides a partir de variedades tetraploides, la formación de poblaciones diploides mejoradas, y el retorno al nivel tetraploide. En la presente tesis se han estudiado los aspectos básicos de cada fase. Se han conseguido dihaploides realizando cruzamientos entre cultivares tetraploides y S. Phureja. Posteriormente se evaluaron dihaploides en cmapo y a virus Y con el fín de formar poblaciones mejoradas y se realizaron cruzamientos entre los mejores dihaploides y especies silvestres de interés consiguiendo familias con buenas características. Por último, se retornaron al nivel tetraploide de buenas carcterísticas mediante los métodos de duplicación meiótica, utilizando diplogametos no reducidos, y mediante duplicación mitótica. La duplicación mitótica se realizó empleando los agentes mitóticos colchicina y oryzalina, apareciendo la oryzalina como más eficaz en la obtención de tetraploides. Mediante los dos métodos de retorno al nivel tetraploide se han conseguido clones tetraploides de buenas características. Estos clones serán incluidos en futuros programas de cruzamientos.

Autor: PÉREZ GÓMEZ JOSE.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: Las giberelinas son sustancias reguladoras del crecimiento en plantas, y están implicadas en el control de la mayoría de las etapas del desarrollo de las mismas. La manipulación genética de la biosíntesis de giberelinas en plantas es una herramienta muy útil para la comprensión del papel de estas fitohormonas en el desarrollo vegetal, así como para la obtención de mejoras en plantas cultivadas. En este trabajo, se ha estudiado el efecto de la manipulación genética de la ruta de biosíntesis de GAs en Arabidopsis thaliana, a nivel de los genes AtCPS, que codifica una ent-copalil difosfato sintasa, y cuatro genes distintos que codifican GA 20-oxidasas. Para ello se han empleado ribozimas de cabeza de martillo, pequeños RNAs con actividad catalítica capaces de unirse a un RNA sustrato y cortarlo. En el caso del gen AtCPS también se ha empleado RNA antisentido a modo de control. Se ha obtenido una planta transgénica que expresa un fragmento del gen AtCPS en forma antisentido con niveles reducidos de expresión del gen AtCPS, lo que causa una disminución del contenido en giberelinas activas de la planta, y un fenotipo semienano. En cambio, la expresión en plantas transgénicas de ribozimas de cabeza de martillo diseñados para cortar al gen AtCPS no provocaron una reducción en los niveles de expresión de AtCPS. En plantas transgénicas que expresan ribozimas diseñados frente a genes que codifican GA 20-oxidasas tampoco se observó una reducción de los niveles de transcritos de dichos genes, ni una alteración de los caracteres fenotípicos controlados por GAs. Así pues, la técnica de RNA antisentido ha sido más eficaz que la de ribozimas de cabeza de martillo. En este trabajo también se ha obtenido clones de cDNA de los genes AtGA20ox4 y 5, que codifican GA 20-oxidasas. Se ha demostrado la actividad GA 20-oxidasa de su productos de expresión in vitro, y se ha visto que estos genes se expresan mayoritariamente en flores y raíz. Durante el proceso de obtención de plantas transgénicas de Arabidopsis se han obtenido dos mutantes por inserción de T-DNA. Uno corresponde al gen AtGA3ox1, que codifica un enzima de biosíntesis de GAs, y es alélico al mutante ga4 descrito en el ecotipo Landsberg erecta. Otro corresponde al gen AtHKT1, un transportador de sodio con homología de secuencia a los transportadores de potasio de la familia HKT. Se ha caracterizado este mutante, y se ha comprobado que el transportador AtHKT1 está implicado en el transporte de sodio desde la parte aérea de la planta hacia la raíz.

Autor: PERAN QUESADA ROSA.
Año: 2001.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE MÁLAGA.

Resumen: Las podredumbres de raíz causadas por Phytophthora cinnamoni y Rosellinia mecatrix son un serio problema que afecta a las plantaciones de aguacate. El uso de alternativas biotecnológicas como la transformación genética, puede ser de gran interés en programas de mejora ya que permitiría introducir cambios específicos en el genoma de la célula (genes de toleracia a P. Cinnamoni y/o R. Necatrix), sin perturbar su constitución genética. La transformación genética de cualquier especie vegetal implica la puesta a punto de un sistema de regeneración eficiente. El aguacate muestra gran capacidad de regeneración mediante embiogénesis somática por lo que el trabajo se centro en optimizar este proceso, necesario para la aplicación de técnicas de transformación genética. Sin embargo, tal y como ocurre en otras especies,la conversión de los embriones a semillas viables es difícil y problemática, radicando el principal problema en el proceso de maduración. Con el fin de optimizar la maduración de embriones somáticos, se llevó a cabo un estudio del proceso embriogéncio en embriones zigóticos así como de los requerimientos nutricionales y hormonales de su cultivo para de esta forma aplicar la información obtendia en el cultivo de embriones somáticos.Así, en un primer apartado, el trabajo se centró en optimizar los requerimientos de cultivo in vitro de embriones zigóticos inmaduros; posteriormente se realizó un estudio histoquímico y bioquímico de embriones zigóticos en distintos estadios de desarrollo, con objeto de establecer las distintas fases del proceso de embirogénesis en esta especie; por último se abarcó la optimizacion del proceso de embiogénesis somática a partir de explantos juveniles (embriones zigóticos inmaduros).

Autor: SAMPEDRO JIMÉNEZ JAVIER.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTADE DE BIOLOXÍA.

Resumen: Las paredes celulares de una planta forma una estructura continua que mantiene la forma de los distintos órganos. Todas las células de una planta provienen de tejidos meristemáticos formados por células de pequeño tamaño. Durante la diferenciación estas células aumentan de volumen por lo que sus paredes deben extenderse. Se cree que la red de celulosa y xiloglucano es el componente de la pared que regula la extensión. El metabolismo del xiloglucano libera oligosacáridos a la pared y para la degradación de estos oligosacáridos es necesaria una actividad alfa-xilosidasa. El objetivo principal de este trabajo sera la identificación del gen o genes de Arabidopsis que codifican la proteína responsable de la actividad alfa-xilosidasa. Para ello, como primer paso, se purificó una alfa-xilosidasa a partir de hojas de repollo. (Brassica oleracea var. Capitata). Esta enxima tenía un pH óptimo de 4,5 un pI de 8,3 y una actividad específica de 27,7 nkat/mg. A partir de una banda de electroforesis de la proteína purificada se obtuvieron dos fragmentos de la secuencia de aminoácidos de la alfa-xilosidasa de repollo. Con esta información se identificaron dos dones parciales de cDNA de Arabidopsis que codificaban para una misma proteína que presentaba un 89% de identidad con los fragmentos secuenciados de la alfa-xilosidasa de repollo. Esta proteína (AtXYL1) se identificó como una alfa-xilosidasa de Arabidopsis. El gen que la codifica (AtXYL1) fue localizado en un BAC del cromosoma I y se secuenció completamente. El gen contiene dos intrones y la proteína que codifica tienen 915 aminoácidos. Esta proteína presenta un péptido señal y probablemente pierda durante su maduración un propéptido de 11 kD. AtXYL1 fue utilizado para transformar Saccharomyces cervisiae, observándose un incremento de más de 3 veces en la actividad alfa-xilosidasa detectable. La actividad alfa-xilosidasa es mayor en las hojas en rápido crecimiento que en las que han completado su desarrollo y lo mismo ocurre con la expresión de AtXYL1. En otra línea de trabajo se procedió a la búsqueda en la coleccdión de mtua

Autor: TORRE NOYA FRANCISCO LUIS DE LA.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTADE DE BIOLOXIA.

Resumen: Este trabajo se situa en el contexto de las paredes celulares de plantas superiores. Las paredes celulares estan conformadas por redes polimericas que interactuan para formar un entramado complejo y dinamico. Dentro de estas redes polimericas, la que mas importancia presente desde el punto de vista del crecimiento de las celulas es la red xiloglucano-celulosa. Existen diversas actividades enzimaticas descritas hasta la fecha que son capaces de modificar la estructura de la red xiloglucano-celulosa, como las endoglucanasas, las expansinas o las xiloglucano-endotransglicosidasas. La actuacion de las endoglucanasas sobre el xiloglucano provoca la aparicion de los denominados oligosacaridos del xiloglucano. Estos oligosacaridos tienen tambien implicaciones en el crecimiento, ya que se ha demostrado que pueden tener efecto estimulatorio o inhibitorio del crecimiento en funcion de la estructura y concentracion. Ademas de las enzimas mencionadas anteriormente, existen actividades exoglucosidasas que pueden modificar los oligosacaridos del siloglucano y por tanto repecutir en la habilidad de estos para actuar en diferentes procesos claves para el crecimiento. La a-fucosidasa es una de estas enzimas, cuya actuacion sobre los oligosacaridos fucosilados y tambien sobre el propio xiloglucano polimerico puede suponer un punto de control el procesos relacionados con el crecimiento. A lo largo de este trabajo se exponen los resultados obtenidos en la caracterizacion inicial del enzima en Brassica oleracea, material que escogimos dada su disponibilidad y su pertenencia a la familia Brassicaceae donde tambien se encuadra la planta modelo actual Arabidopsis thaliana. En estos estudios iniciales se determinaron caracteristicas importantes en una actividad enzimatica como el pI, la actividad frente a diversos sustratos comerciales, influencia de diversos cationes y la fuerza ionica en el medio de incubacion. Tambien se analizo en este punto como se distribuia la actividad fucosidasa en funcion del estado de desarrollo de hojas de Brassica oleracea. Posteriormente se abordo la purificacion del enzima empleando para ello diversas tecnicas: cromatografias de filtracion en gel, intercambio cationico, afinidad, isoelectroenfoque preparativo y geles de poliacrilamida. Una vez purificado el polipeptido, se realizo una secuenciacion de aminoacidos en la que se comprobo que el extremo N-terminal de la proteina se encontraba bloqueado. Por tanto, se realizo una digestion con tripsina para secuenciar posteriormente dos secuencias internas. Para identificar el gen/es responsable de esta actividad en Arabidopsis thaliana partimos de dos estrategias: por una parte, nos basamos en la homologia con las secuencias obtenidas en Brassica. Paralelamente, decidimos emprender una busqueda de posibles homologos en el genoma de Arabidopsis con fucosidasas conocidas de otros organismos. Localizamos el gen que luego denominamos AtFXG1 que contenia las secuencias encontradas en Brassica, y el gen AtFUC1 que presentaba una homologia significativa con fucosidasas de otras especies. Ambos parecian buenos candidatos para codificar fucosidasas en Arabidopsis, y por tanto nos decidimos a realizar un experimento de expresion heterologa en la levadura Pichia pastoris. Mediante este experimento demostramos que ambos genes codifican fucosidasas, aunque solo AtFXG1 parece implicada en el metabolismo del xiloglucano. Se analizaron los niveles de expresion de este gen mediante el empleo de PC competitiva, observando que el mayor numero de copias aparecia asociada a las hojas mas jovenes y con crecimiento mas activo. Por ultimo, se realizo un estudio sobre la actuacion del enzima en relacion con los posibles sustratos in vivo, determinando actividad frente al oligosacarido fucosilado XXFG, y a xiloglucano tanto soluble como asociado a celulosa. Los resultados indican actividad frente al polimero, lo que podria tener importantes implicaciones en el crecimiento. En conjunto, los resultados obtenidos muestran como la fucosidad podria controlar en cierta medida los procesos relacionados con el crecimiento en las planta superiores.

Autor: CORONADO ALBI M. JOSE .
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Los procesos de desarrollo en plantas implican la interacción y regulación coordinada de numerosos factores y rutas fisiológicas en las que intervienen diferentes células y tejidos. Nuestra comprensión de los mecanismos que controlan estos procesos aún es escasa, aunque los datos hasta ahora han revelado que las rutas de transducción y señalización frente a señales extra e intracelulares que dirigen la célula hacia proliferación o diferenciación cumplen un papel fundamental. En esta tesis se ha estudiado, desde el punto de vista celular, el posible papel de algunas de estas proteínas implicadas en la transducción de señales, concretamente de la familia de las MAPA quinasa, en el inicio y progresión de dos programas de desarrollo del grano de polen que conducen a procesos de diferenciación y proliferación completamente diferentes. Como etapas previas al estudio se han desarrollado los cultivos in vitro de microsporas aisladas para reproducir ambos procesos de desarrollo y embriogeénesis del polen, y se ha realizado una caracterización celular y ultraestructural. Se han estudiado dos MAP quinasas aisladas recientemente en tabaco de cuya funcionalidad y actividad se sabe muy poco; la Ntf4 y la Ntf6; y las homólogas de Erk1 y Erk2 en plantas, así como las MAP quinasas en estado activo en general. Los resultados sobre su expresión y localización in situ han revelado que la Ntf4 está implicada en etapas finales de la maduración del grano de polen, posiblemente con un papel en la preparación a la germinación del tubo polínico. Teniendo una localización inicialmente citoplasmática, su entrada al núcleo celular se realiza en una etapa concreta del proceso y está asociada a su activación. Los resultados obtenidos con la Ntf6 indican que esta MAP quinasa tiene una expresión más amplia en células vegetales en proliferación, además del grano de polen en desarrollo. Su localización en elementos subcelulares de la ruta secretora y su colocalización con marcadores establecidos de Goli y vesículas asociadas, además de su redistribución en células tratadas con bloqueantes del transporte al Golgi como la Brefeldina A, indican su papel en la secreción a la pared. Por último, se ha estudiado la expresión y localización de MAP quinasas homólogas a Erk1/Erk2 y MAP quinasas en estado activo durante los procesos de desarrollo estudiados. Los resultados indican que están operando módulos de MAP quinasa en ambos procesos, aunque la regulación de estas proteínas varían según la actividad proliferativa o de diferenciación en que esté la célula.

Autor: LLISO BERNET IGNACIO.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: INSTITUTO VALENCIANO DE INVESTIGACIONES AGRARIAS.

Resumen: El mecanismo por el que los patrones enanizantes de diversos frutales reducen el tamaño de la variedad injertada sobre ellos parece no ser único. En esta Tesis se estudian 3 patrones híbridos de cítricos procedentes de cruces de citrange x mandarino. Dos de ellos, el 418 y ekl 23, son enanizantes y el tercero, el 24, es de tipo estándar. En primer lugar se desarrollo vegetativo anual en árboles adultos de la variedad Navelina en cada uno de los 3 tipos. Las diferencias de tamamño se relacionan con las diferencias en las intensidades de brotacion vegetativa de verano y otoño. El desarrollo del fruto en los árboles enanos pareció determinar su menor crecimiento vegetativo de verano-otoño respecto a los árboles estándar. La capacidad sumidero de los frutos fue superior en aquellos árboles y apreció restringier la disponiblidad de materia seca para el crecimiento vegetativo. Éste no se vio limitado por deficiencias en el contenido endógeno de giberelinas. Aplicaciones hormonales efectuadas para estimular la brotación no pudieron contrarrestar las limitaciones de materia seca para la brotación vegetativa de verano. Se hizo un estudio anatómico de precios en plantas sin injertar de 1 año para relacionar alguna característica antómica con el vigor potencial del patrón. Aquellas que se relacionaron con el enanismo fueron diferentes en los 2 patrones enanizantes estudiados sugiriendo que el mecanismo subyacente en ambos casos fue distinto.

Autor: DÍAZ FERNÁNDEZ PEDRO MANUEL.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: ETSI MONTES, UPM.

Resumen: La fenología de Quercus suber L ha sido un clásico tema de discusi ón desde mediados del siglo pasado, cuando el botánico suizo J. Gay describió en las Landas francesas la existencia de una nueva especie caracterizada por el ciclo bienal de maduración de sus frutos, a quien denominó Quercus occidentalis. El carácter de la maduración bienal fue rechazado por los autores españoles y portu gueses quienes explicaron la presencia de varias cosechas de bell tas por la capacidad del árbol de florecer varias veces en un mismo ciclo vegetativo desde la primavera hasta el otoño. Por otra parte el forestal italiano Roberto Corti estudio la reproducción de Quercus suber en los años cincuenta y encontro ciclos anuales y bianuales de maduración criticando a los autores ibéricos. En nuestro trabajo se relaciona las cosechas de la especie con la floración que las origina mediante el seguimiento de diez árboles en El Pardo. Pudo comprobarse que a partir de la floracio primaveral se originan frutos que pueden tener ciclos anuales o bianuales, característica común con otras especies del grupo Cerris. La cosecha tempara procede de flores que maduran siguiendo el ciclo bianual y las cosechas mediana y tardia a partir de frutos que maduran en un ciclo anual. Los ciclos bianuales son más frecuentes en poblaciones septentrionales con periodos vegetativos cortos y en el sur aparecen cuando la sequía estival es más dura.

Autor: RIO FERNANDEZ ADOLFO.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR EN BARCELONA.

Resumen: El gen PRPK1(Putative Receptor Protein Kinase 1) codifica para una proteina con caracteristicas de receptor quinasa. La estructura del polipéptido deducido presente un posible dominio extracelular con repeticiones ricas en leucina (LRR), una zona hidrofóbica que podria corresponder a una region transmembrana y un dominio C-terminal que posee una elevada similitud con dominios quinasa de proteinas quinasas pero que presenta sustituciones aminoacidicas de especial relevancia. Para confirmar la capacidad de autofosforilacion de la proteina se llevaron a cabo experimentos de fosforilación in vitro que indican que la proteina es incapaz de autofosforilarse. Ensayos de inmunodeteccion demuestran la presencia de PRPK1, asi como de otra proteína de 37 kD, en embriones y endospermo de maiz a lo largo de toda la embriogénesis. PRPK1 es una proteina transmembrana e inmunodetecciones de 2D muestran la presencia de varias formas de PRPK1 y de la proteina transmembrana e inmunodetecciones de 2D muestran la presencia de varias formas de PRPK1 y de la proteina de 37 kD que podrian corresponder a distintos estados de fosforilacion. Inmunolocalizaciones realizadas sobre embrionies y meristemos indican que la acumulacion de PRPK1 se encuentra asociada a zonas de activa proliferación. Utilizando el sistema T.U.S.C(Trait Utility System for Corn) se han obtenido individuos con una inserción del transposón Mu en la región promotora de PRPK1 y individuos con una inserción en un intrón de la región codificante. En ningún caso se pudo correlacionar la presencia de la inserción con un posible fenotipo prpk1. La inserción en la region promotora no afecta al nivel de expresión del gen y la inserción en el intrón podria tener un procesamiento normal. Se discuten los posibles mecanismos de acción de PRPK1 asi como los procesos que podria estar regulando.

Autor: CUENCA VALERA BEATRIZ.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La regeneración de plantas completas de haya es posible empleando la vía de la caulogénesis a partir de segmentos internodales de cultivos stock in vitro de esta especie, mediante elongación de las yemas y posterior multiplicación y enraizamiento de los brotes adventicios obtenidos. La mayor respuesta caulogénica se consigue empleando segmentos apicales o subapicales de entrenudo, cultivados en medio WPM adicionado con 0,1 mg.L-1 de TDZ y 0,5 mg.L-1 de AIA y con glucosa como fuente hidrocarbonada durante 3 semanas. La glucosa es también un azúcar más adecuado que la sacarosa en la multiplicación de brotes axilares y en algunos casos en el enraizamiento. En secciones foliares de Fagus orientalis, el desarrollo de yemas adventicias tiene lugar fundamentalmente en la zona del peciolo donde los meristemoides se desarrollan indirectamente a partir de células de la subepidermis, que se dividen periclinalmente formando un cambium difuso que evoluciona posteriormente hacia felógeno. La división celular organizada de los meristemoides da lugar a la formación de los primordios caulinares en los que la diferenciación estructural progresiva conduce a la formación de yemas a partir de los 28 días de iniciado el cultivo. El proceso de formación de yemas adventicias en Fagus orientalis se comparó con el de Populus tremula x tremuloides, especie considerada como modelo por su alta capacidad regenerativa, y donde tiene lugar una regeneración directa a partir de las capas más superficiales pero mediante el desarrollo previo de una estructura foliar o pseudohoja, dotada de glándulas adventicias semejantes a las glándulas tipo hidatodo características de esta especie, y a cuyo amparo se desarrollan los meristemoides que darán lugar a las yemas adventicias. Se ha desarrollado asimismo, un sistema de embriogénesis somática para Quercus robur empleando hojas y entrenudos de plántulas de 2-3 semanas que fueron cultivados en medio MS adicionado con 4 mg.L-1 de ANA en combinación con BA. El porcentaje de inducción de caulogénesis osciló entre el 4 y el 16%. El potencial embriogénico se mantiene mediante embriogénesis secundaria y la germinación de los embriones somáticos es promovida por su cultivo en medio de maduración adicionado con sacarosa 8% y 2,64 mg.L-1 de ABA, y posterior almacenamiento en frío durante 8 semanas antes de ser transferidos a medio de germinación, obteniéndose en estas condiciones un 33% de germinación y un 9,4% de conversión en plántula.

Autor: LOPEZ CLARAMUNT BERNAT.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIV. BARCELONA .

Resumen: En la Serra de Prades se instalaron 24 minirizotrones para estudiar la dinámica de las raíces finas. 12 minirizotrones se instalaron en parcelas control i 12 en parcelas en las que se había realizado un resalveo (se extrajo un 80% del área basal). El muestreo se llevó a cabo durante un periodo de casi tres años (abril de 1994-febrero de 1997), yendo al campo con una periodicidad de unas tres semanas. Los resultados mostraron que la biomasa de las raíces finas en el encinar de Prades es de 80 g/m2, que representa solo un 0,34% de la biomasa total. La produccion de raíces finas, con 263 g/m2/año, representa un 11% de la producción total, valor muy parecido a la producción de hojas en el mismo encinar. La longevidad de las raíces finas es de 117 días. La evolución temporal del crecimiento de raíces finas mostrón un patrón temporal caracterizado por crecimientos en biomasa durante los meses de primavera, invierno y otoño, y grandes disminuciones en veran. El patrón de distribución temporal del crecimiento de raíces finas mostrón un patrón temporal caracterizado por crecimientos en biomasa durante los meses de primavera, invierno y otoño, y grandes disminuciones en verano. El patrón de distribución temporal mostró una tendencia a disminuir a medida que aumentaba la profundidad (hata 60 cm). El resalveo tuvo efectos positivos sobre las raíces finas, aumentando su biomasa y producción durante todo el año en intervalos de profundidad. No observamos una clara correlación entre la humedad y la tempertura del suelo y el crecimiento de las raices finas.

Autor: BENGOA MARTINEZ DE MANDOJANA JOSE LEANDRO .
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.

Resumen: La tesis plantea y resuelve un problema derivado del uso de las curvas de crecimiento en altura de las masas forestales. Se desarrollan primero las técnicas adecuadas para la modelización del crecimiento en altura. En segundo lugar se desarrollan herramientas de análisis estadísticos que permiten determinar objetivamente si las curvas modelizadas responden a la realidad y estimar los intervalos de confianza de las inferencias derivadas del uso de las curvas. Para ello se aplican las técnicas propuestas a masas forestales de Quercus Pyrenaica en la Rioja.

Autor: SERNA HIDALGO LAURA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En esta tesis se confirma el origen monoclonal del complejo estomatal mediante el uso de plantas trangénicas 35SGUS::AC; y se analiza la distancia celular entre estomas; encontrando que el linaje asociado al desarrollo del complejo estomatal explica esta distancia: dos células. Considerando que la maduración de la GMC -El precursor estomatal- requiere señales positivas originadas en células subsidiarias, este linaje actúa en armonía con un cierto mecanismo de conumicación celular determinando la distribución de estomas en el tejido epidérmico. Esta precisa distribución está bajo el control de la fitohormona etileno, un regulador que incrementa el índice estomatal.

Autor: MOREIRA DIAS JOSÉ M..
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE ING. AGRÓNOMOS.

Resumen: Se estudia el proceso de regeneración de brotes en segmentos de epicótilo de citrange Troyer, determinando la naturaleza del mismo y caracterizando la influencia de la posición de que se toma el explante, de su colocación en el medio de cultivo y de la composición hormonal del medio y la iluminación en el mismo. En contacto con el medio de cultivo, la regeneración en los dos extremos del segmento tiene lugar por un proceso de organogénesis indirecta con tres etapas: formación de callo, diferenciación de yemas y brotación. La formación de callo es mayor a la oscuridad y depende críticamente de la adición de una citoquinina al medio de incubación. Sin embargo la diferenciación de yemas, y su brotación, es marcadamente mayor a la luz, siendo inhibidos ambos procesos casi por completo en explantes cultivados a la oscuridad en presencia de una auxina. Cuando no está en contaco con el medio de cultivo el extremo basal de los explantes no regeneran, mientras la regeneración en el extremo apical tiene lugar por un proceso de organogénesis directa sin formación de callo. La diferencia de yemas no precisa de la adición de hormonas al medio y no depende de la luz. La brotación es estimulada marcadamente por la adición de una citoquinina. Finalmente, se han establecido los protocolos óptimos para la multiplicación "in vitro" de citrange Troyer por ambas vías organogenéticas, directa e indirecta.

Autor: GARRIDO PORTILLO GERMAN.
Año: 1997.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL (FISIOLOGIA VEGETAL) PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA VEGETAL.

Resumen: En la presente memoria se han estudiado diversos aspectos del proceso de enraizamiento de esquejes de clavel. El estudio morfológico realizado indica que los primeros cambios se producen en células situadas entre el xilema y el floema, formándose un callo que prolifera por el exterior de la médula y a lo largo de todo el perímetro de la base del esqueje. En distintas localizaciones del callo, grupos de células se diferencian para formar esbozos y primordios de raíz. Del estudio de la evolución del proceso de enraizamiento se deduce que la precocidad, definida como el porcentaje de esquejes enraizados a los 11 días, y el período óptimo de enraizamiento (POE), definido como el tiempo necesario para que el 95% de los esquejes enraizados presenten calidad comercial, son los parámetros adecuados para evaluar el efecto de diferentes factores (variedad, período de almacenamiento en cámara fría, tratamiento auxínico etc...) sobre la velocidad y calidad del enraizamiento. En ausencia de tratamiento auxínico, un aumento del período de almacenamiento puede favorecer o no el enraizamiento dependiendo de la variedad de clavel, lo que sugiere que durante el almacenamiento de los esquejes pueden producirse cambios en la concentración endógena de auxina y/o en la sensibilidad a la respuesta auxínica. El tratamiento auxínico favorece el enraizamiento y el efecto producido depende de la variedad pero, en general, es independiente del período de almacenamiento en cámara fría. Las diferentes fases del proceso de enraizamiento (es decir la formación y el crecimiento de las raíces) son influenciadas de modo diferente tanto por el almacenamiento en frío como por el tratamiento auxínico. El crecimiento de la raíz presenta una mayor sensibilidad a la auxína que el crecimiento de las raíces, y la sensibilidad de cada fase puede ser dependiente de la variedad. La auxina necesaria para el proceso de enraizamiento procede de las hojas adultas, ya que sólo enraizan los esquejes que las conservan, aunque carezcan de yema apical. La presencia de AIA endógeno en las hojas adultas apoya esta interpretación. El transporte basípeto del ácido indolacético radioactivo (3H-AIA) aplicado a secciones de esquejes, sufre alteraciones durante el almacenamiento en cámara fría: los esquejes almacenados menos de tres semanas, exhiben transporte polar basípeto sensible a la inhibición por ácido 2,3,5-triiodobenzóico, ácido naftilftalámico y quercetina, y está asociado a tejidos exteriores a la médula, probablemente el floema; en los esquejes almacenados durante cuatro semanas la polaridad es escasa, el transporte no es sensible a los inhibidores y no está asociado a ningún tejido concreto. El AIA se metaboliza durante su transporte, y como regla general, la cantidad metabolizada aumenta cuando disminuye el transporte. Durante el almacenamiento en cámara fría varía la intensidad del transporte de AIA. Dicha variación depende de la variedad de clavel y, en general, está relacionada de forma positiva con los parámetros de enraizamiento. De lo anterior se deduce que el transporte, más que el metabolismo de la hormona, parece jugar un papel decisivo en la acumulación del AIA necesario para estimular la formación de raíces en la zona de enraizamiento del esqueje.

Autor: GOICOECHEA PEREZ MONICA.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA VEGETAL.

Resumen: La pared celular es uno de los rasgos más característicos de las células vegetales. En general está formada por una fase microfibrilar, la celulosa, y una matriz, compuesta principalmente por polisacáridos, glicoproteinas y fenoles. Entre otras funciones, la pared controla estrechamente el crecimiento de las células vegetales y, para que ello pueda ocurrir, los distintos tipos de polisacáridos que la componen tienen que sufrir una serie de transformaciones bioquímicas que permitan la relajación de la matriz, la separación de las microfibrillas de celulosa y la inserción de nuevos componentes. Dentro de la matriz se encuentran las pectinas que son un grupo muy complejo de polisacáridos ácidos cuyas características estructurales los dotan de una gran potencialidad a la hora de interaccionar con el resto de los componentes de la pared. Por ello, decidimos estudiar el papel de estos polisacáridos pécticos durante el crecimiento de hipocótilos de pino. Durante el crecimiento celular de pino nos hemos encontrado con una disminución en la extensibilidad de la pared celular debida principalmente a cambios en el componente plástico. Segun Jarvis (1984) las pectinas parecen estar implicadas en los cambios en el componente plástico de la pared. Así, éstas sufren cambios cuantitativos y cualitativos a medida que la pared celular de pino pierde su capacidad de crecimiento. La presencia de poligalacturonasas sugiere que parte de estos cambios pueden estar provocados por su actividad. La degradación encontrada en la ramificaciones neutras durante el desarrollo de los tejidos permitirá un mayor acercamiento entre estos polímeros, permitiendo que se formen nuevos tipos de enlaces que fijarán más fuertemente estas pectinas a la pared. Al establecimiento de estos enlaces ayudará la desmetiliesterificación que sufren los grupos carboxilo de los ácidos urónicos a medida que la pared pierde su capacidad de crecimiento. Una pectinmetilesterasa unida iónicamente a la pared celular parece ser la principal responsable de dicha disminución. Así, a medida que la pared celular de pino "envejece", hay un aumento de la síntesis de poliurónidos que se van asociando en la pared celular a través de un nuevo tipo de enlace no lábil al tratamiento con carbonato sódico. Como refleja los análisis por FTIR, uno de estos posibles enlaces son los puentes difenil. Otro de los posibles candidatos son los puentes de calcio que se establecen entre los grupos -COO- de los ácidos urónicos, sin embargo, en la pared celular de pino nos hemos encontrado que si bien estos puentes pueden participar en el proceso de rigidez de esta pared, no son el factor limitante. La presencia de cantidades importantes de boro en la pared de pino abre nuevas vías de estudio del papel de estos polisacáridos pécticos dentro de la pared celular de pino.

Autor: MARTIN REMESAL CLEMENTE.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA VEGETAL PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA DEL DESARROLLO EN PLANTAS SUPERIORES.

Resumen: En este trabajo se realiza una purificación parcial de la enzima 1-aminociclopropano-1-carboxílico-N-malonil (MACC) transferasa en ejes embrionarios de semillas de Cicer arietinum L. Se ha caracterizado dicho enzima desde un punto de vista bioquímico, siendo sus características: pH óptimo entre 7.5-8.0; estabilidad máxima en tampón fosfato potásico; linealidad de la reacción hasta los 90 minutos y temperatura óptima de 40 grados C. Las Km para ACC y MalCoA son de 0,4 mM y 0,9 mM respectivamente. Se detectó actividad MACC transferasa tanto durante el período embriogénico como durante la germinación de la semilla. Para el proceso germinativo la actividad comienza a decaer tras la emergencia de la radícula. Las temperaturas supraóptimas, que inhiben en Cicer tanto la síntesis de etileno como la germinación, no parecen tener un efecto importante en la actividad MACC-transferasa durante el proceso germinativo.