FITOPATOLOGIA

Autor: GOSALVEZ BERNAL BLANCA.
Año: 2003.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: CENTRO EDAFOLOGIA Y BIOLOGIA APLICADA DEL SEGURA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: El objetivo global de esta memoria es el estudio de la distribución de los principales virus de clavel (CVMV, CLV y CERV) en el meristemo apical de plantas de clavel (Dianthus caryophyllus L.), así como del Virus de las manchas necróticas del melón (MNSV) en los meristemos apical y radical de plantas de melón (Cucumis melo L.). . El clavel (Dianthus caryophyllus L.), es uno de los cultivos más importantes dentro del sector ornamental. Dicho cultivo se ve particularmente afectado por una serie de enfermedades de origen viral que limitan de manera muy significativa su comercialización. Entre los virus más importantes cabe destacar el Virus del moteado de las venas del clavel (CVMV), el Virus latente del clavel (CLV) y el Virus del anillo grabado del clavel (CERV). La propagación vegetativa y el mercado internacional hacen de los cultivos florales uno de los vehículos más importantes para la proliferación y dispersión de enfermedades virales de plantas. De hecho, la industria floral es considerada una de las principales vías de introducción de virus en nuevos cultivos y países. En este sentido, los productores de clavel emplean para su saneamiento la técnica del cultivo de meristemos. Por otro lado, uno de los cultivos hortícolas mas importantes, tanto a nivel mundial como nacional entre las Cucurbitáceas, es el melón (Cucumis melo L.). Estos cultivos se ven afectados por el Virus de las manchas necróticas del melón (MNSV) que es un Carmovirus que se transmite a través del hongo Olpidium bornovanus. Para el estudio de la distribución viral en los tejidos de la planta se han utilizado tres técnicas complementarias: la hibridación molecular no radioactiva de tipo "dot-blot" y 'tissue-printing' (TP) o impresiones de tejido, así como la hibridación in situ (HIS) al microscopio óptico. Los estudios de hibridación in situ del brote apical en plantas de clavel infectadas con los virus CVMV, CLV y CERV pusieron claramente de manifiesto que en todos los casos analizados, el meristemo apical y los laterales son excluidos de la infección y por tanto los virus son incapaces de invadirlos. En el caso de la infección mixta por CarMV y CERV la infección tampoco alcanza a los meristemos apical, ni los laterales, y tal y como ocurre en hoja, encontramos un patrón de separación espacial excluyente ya que no se observa infección por los dos virus en las mismas áreas. Debido a la gran importancia del cultivo del melón en España y la especial incidencia del MNSV en cultivo protegido hemos realizado también, la puesta a punto de métodos de detección molecular del MNSV en plantas jóvenes, en estadios previos a la salida de las mismas al campo, así como de detección en muestras de agua que se usan como fuente de riego de las plantas. Para ello se tomaron muestras tanto de agua utilizada para el riego procedente de agua embalsada, como de la solución nutritiva recirculante del cultivo hidropónico, estas muestras se concentraron por ultra-centrifugación o por precipitación con PEG y se analizaron mediante RT-PCR. Ambos métodos de concentración fueron muy adecuados, permitiendo la detección por primera vez del MNSV en muestras de agua. Estas técnicas facilitan en gran medida la erradicación de esta importante infección viral en los cultivos de melón. Los estudios de hibridación in situ realizados en los brotes apicales de las plantas de melón infectadas por el MNSV pusieron de manifiesto que en todos los casos analizados, el meristemo apical caulinar es excluido de la infección. Así mismo, en las hibridaciones in situ realizadas en las raíces se observó una fuerte señal del genoma viral, en estadios tempranos de la infección, en todos los tejidos de la raíz exceptuando los tejidos meristemáticos de la misma. Por tanto, el MNSV es incapaz de invadir los meristemos apicales caulinares y radicales. El estudio de la distribución espacio-temporal del MNSV en plantas de melón inoculadas mecánicamente, en distintos estadios de la infección, nos permitió identificar las células y tejidos infectados, así como el posible patrón de movimiento viral. Así, hemos observado que una vez que el virus sale del cotiledón inoculado entra en el sistema vascular del tallo a través de su floema externo y se dirige hacia la raíz donde se acumula antes de invadir vía floema interno del tallo las hojas jóvenes superiores.

Autor: RUIZ DEL PINO MARGARITA .
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTADES DE FARMACIA/BIOLOGÍA.

Resumen: Con objeto de profundizar en el conocimiento de la proteína 3a del virus del mosaico del pepino (CMV) y explorar la posibilidad de utilizarla como un sistema de control de las virosis, el presente trabajo se ha centrado en la caracterización funcional de una serie de mutantes de delección de p3a, así como en el análisis de su capacidad para conferir resistencia a plantas de tabaco cuando son expresadas constitutivamente. El análisis funcional de los mutantes mostró que algunos de ellos mantienen su actividad, restaurando los movimientos a corta y larga distancia de un virus defectivo para esta funicón (mutantes M2 y M8) o tan sólo a corta distancia (mutante M9), indicando que los dominios aminoácidicos 134-143; 193-203 y 204-213 de la proteína son dispensables para el transporte viral. Por el contrario, los dominios ubicados entre los aminoácidos 144-153 (mutante M3); y 164-183 (mutantes M5 y M6) son requeridos para su actividad. Por otro lado, el estudio del efecto de su expresión constitutiva en plantas de tabaco sobre la infección del virus homólogo mostró que la expresión de las dos proteínas funcionales para ambos movimientos incrementan la susceptibilidad de la planta a la infección. Así, detectamos un aumento transitorio de la carga viral y a veces, de la intensidad de los síntomas. Por el contrario, la expresión de los otros transgenes protege a la planta frente a la infección, manifestándose en una caída de la acumulación viral en las hojas inoculadas, que puede ir acompañada de una inhibición de la invasión sistémica. La eficacia de la protección depende del transgén. Finalmente, la expresión del transgén M10, que codificaría para un péptido de 46 aa correspondiente a la región N terminal de la proteína, bloquea la dispersión sistémica del virus homólogo.

Autor: GARCÍA CHAPA MERITXELL.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Se ha realizado una prospección en parcelas de cultivo de peral, para evaluar la extensión de la enfermedad del Decaimiento del peral (PD) en el Nordeste de España. Un 7% de las parcelas observadas presentaron síntomas de la enfermedad. La presencia del fitoplasma fue confirmada mediante nested-PCR. Finalmente, la caracterización del fitoplasma, indició que la enfermedad estaba causada por un único fitoplasma, el fitoplasma de PD. Se ha evaluado la expresión de síntomas de la enfermedad de PD y la detección por PCR a lo largo del año, en tres variedades distintas. Cada variedad presentó unos síntomas asociados característicos, hecho que puede ser de utilidad en nuevas prospecciones. En los tres casos, la máxima detección del fitoplasma fue alcanzada en Diciembre. Se obtuvo la detección más fiable en tallo. Los resultados también demostraron que fitoplasma puede permanecer en estado funcional en la parte aérea del árbol durante la fase de hibernación. Se ha estudiado el papel de Cacopsylla pyri (Homoptera: psyllidae) en la transmisión del fitoplasma del Decaimiento del peral (PD) en el Nordeste de España. Los resultados obtenidos demostraron que C.pyri es, como en otros países del área mediterránea, vector de la enfermedad en España. Los porcentajes de psilas infectadas fueron similares entre sexos, sin embargo las hembras transmitieron el fitoplasma en mayor porcentaje que los machos. Por último, se ha puesto a punto una técnica para serparar el ADN del genoma de los fitoplasmas, del de las plantas que los hospedan. Los resultados muestran que un 90% de los clones recombinantes contenían ADN de fitoplasma. Por secuenciación y comparación con el banco de datos de NCI fue confirmado el origen bacteriano de las secuencias, Finalmente mediante el diseño de cebadores para algunas de esstas secuencias y posterior análisis por PCR se corroboró que los fragmentos de ADN clonados era fitoplasmáticos. Finalmente se escogieron 2 fragmentos obtenidos a partir de la técnica anterior y fueron empleados como sondas, para hibridar con extractos de ADN de perale sy psilas infectados con este microorganismo. El fitoplasma de PD se detectó en ambos extractos. Se han realizado también ensayos para evaluar la sensibilidad de estas sondas en la detección del fitoplasma de PD: se propone la hibridación ADN/ADN como una alterantiva a la PCR. Por último, el ADN de diferentes fitoplasmas, se ha utilizado para determinar si los cebadores diseñados para estos dos fragmentos eran específicos para el fitoplasma de PD, o amplificaban secuencias de otros fitoplasmas. Al obtenerse una banda específica con ADN del fitoplasma de la Proliferación del manzano (AP) y con el del PD, se confirma la relación filogenética existente entre ambos.

Autor: SABADELL GONZÁLEZ SONIA.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: El "Falso Mal de Panamá" (FMP), fue descrito por primera vez en Sudáfrica por Deacon et al. (1985), como "Fals Panama Disease" por su similitud con el "Mal de Panamá", cuyo agente causal es Fusarium oxysporum f.sp.cubense (FOC). Estos autores encontraron especies de Fusarium asociadas a las plantas con FMP, pero las pruebas de patogenicidad fueron negativas y no pudieron establecer la etiología del FMP. Concluyeron que posiblemente la causa fuera de origen abiótico -suelos pesados con tendencia a la compactación y al mal drenaje-, aunque no se descartó la implicación de algún agente biótico. En la bibliografía aparecen bajo distintos nombres, descripciones de sintomatologías similares al FMP. Así, Stover (1972) y posteriormente Lahav et al. (1999) realizaron una revisión sobre las primeras descripciones del "Yellow mat" y "Colorado diseases" de los que tampoco se conoce la causa. La incidencia del FMP en Canarias, se ha visto incrementada en los últimos 5 años, coincidiendo con el registro de temperaturas por debajo de la media normal en los meses de invierno. La máxima incidencia de síntomas, conicidió con la proliferación de nuevas plantaciones, utilizando en muchos casos emplazamientos no idóneos para el cultivo de la platanera y sorribas con suelos ricos en arcillas. Las referencias de la literatura y estas evidencias de campo sugerían que posiblemente nos encontrábamos ante una situación de estrés de la planta provocada por factores abióticos, los cuales potenciarían la acción de determinados microorganismos que puedieran tener un papel en la expresión de los síntomas. Por todo ello, la hipótesis de trabajo para la explicación de los síntomas del "Falso mal de Panamá" es que posiblemente existiera una interacción entre factores abióticos y bióticos. Para desarrollar esta hipótesis se procesaron muestras en el laboratorio para la obtenicón de una colección de aislados bacterianos y fúngicos asociados a plantas de platanera con FMP de cultivos afectados en la isla de Tenerife. Una vez los aislados fueron identificados, se han desarrollado pruebas de patogenicidad in vitro y en invernadero sobre plantas sanas, sin haber sido reproducir los síntomas de FMP. Por otro lado, se ha realizado ensayos en invernadero para determinar el efecto que las características físicas-químicas del suelo pudieran tener sobre la expresión de síntomas, en los que se obtuvieron resultados que indican que el tipo de suelo por sí mismo no es el responsable del conjunto de síntomas de FMP. Estos resultados, originaron el planteamiento de distintos ensayos de la combinación de los factores abióticos de estrés más comunes en las plantaciones afectadas, con una selección de los microorganismos encontrados en asociación a los síntomas, bajo condiciones de invernadero. En este caso, se han podido observar puntos necróticos en los rizomas amarilleos foliares en las plataneras sometidas a estrés por encharcamiento, compactación y frío ambiental cultivadas en suelos procedentes de plantaciones afectadas o bajo inoculación de especies fúngicas pertenecientes al género Fusarium, aunque en ningún caso se consiguió reproducir los síntomas típicos del FMP. En este punto del trabajo se planteó un ensayo en condiciones de campo con dosis de riego superiores a la recomendada y con compactación artificial del suelo, en el que se consiguió reproducir los síntomas internos de rizoma y oscurecimiento vascular típicos del FMP, aunque los síntomas aéreos no fueron tan claros. Complementariamente, se han realizado estudios histoquímicos con el fin de establecer un criterio de diagnóstico diferencial con el MP, a partir de lo descrito por Reinking, (1926) para el "Yellow Mat", quien asociaba los síntomas vasculares a una desorganización del floema, que también se ha podido observar en el caso de las muestras estudiadas de FMP, con la aportación de que además el xilema podía encontrarse colapsado por sustancias de diversa naturaleza. Todos estos resultados sugieren que el FMP es un desorden en cuya causa podrían jugar un papel importante algunos factores del suelo como la compactación, el encharcamiento y la hipoxia con los desequilibrios nutricionales concomitantes, aunque no se puede descartar la interacción de alguna especie fúnfica o bacteriana en combinación con otros factores abióticos.

Autor: PÉREZ MADRID MARTA.
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El género Fusarium comprende un gran número de especies de suelo de distribución cosmopolita conocidas desde hace muchos como importantes patógenos de plantas (Moss y Smith, 1984). Más recientemente, se ha descrito también a Fusarium como un patógeno humano en pacientes inmunodeprimidos (Vartivarian et al., 1993). La especie más común, F.oxysporum, causa enfermedad por marchitez vascular en una gran variedad de cultivos económicamente importantes (Beckman, 1987). En este trabajo, se ha llevado a cabo un escrutinio de genes implicados en la infección del huésped mediante mutagénesis por inserción. Se han introducido cambios en el genóma de F.oxysporum por transformación mediada por DNA y se han seleccionado los transformados con defectos en su virulencia. Esta estrategia ha sido utilizada previamente para identificar nuevos genes implicados en la patogénesis fúngica (Lu et al., 1994; Dufresne et al., 2000). Se describe la caracterización de un mutante insercional de F.oxysporum f.sp.lycopersici con una reducción drástica en su virulencia. El gen afectado, chsV, determina una proteína homóloga a la sintasas de quitina de clase V con un dominio característico motor de miosina. La quitina, un polisacárido de N-acetilglucosamina unida por enlaces beta-1,4, es un componente estructural principal de las paredes celulares fúngicas. Los hongos tienen múltiples clases de sintasas de quitina que catalizan la polimerización de la N-acetilglucosamina. El mutante por inserción y un mutante por anulación dirigida de F.oxysporum presentan anormalidades morfológicas, como zonas infladas en las hifas, que indican alteraciones en la estabilidad de la parede celular y que pueden restaurarse parcialmente mediante un estabilizador osmótico. Los mutantes carentes de chsV no son capaces de infectar y colonizar las plantas de tomante ni de crecer invasivamente en tejido fresco de tomate y son hipersensibles a compuestos de defensa del tomate tales como la fitoanticipina alfa-tomatina o H2O2. La reintroducción de una copia funcional de chsV en el mutante restauró el fenotipo de crecimiento de la estirpe silvestre. Estos resultados proporcionan la primera prueba de que la sintasa de quitina de clase V tiene una función esencial en la patogenicidad de los hongos hacia las plantas, probablemente formando parte de un mecanismo de protección contra compuestos antimicrobianos producidos por el huésped. También se han aislado otros tres genes responsables de sintasas de quitina de F.oxysporum f.sp.lycopersici. Todos pertenecen a la familia 1 de estas enzimas. La caracterización de dichos genes ayudará a dilucidar la función de la síntesis de quitina en la patogenicidad de F.oxysporum.

Autor: VILA UJALDÓN LAURA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Este trabajo se engloba en un proyecto más amplio destinado a la obtención de plantas transgénicas de arroz con una mejora de la resistencia al ataque de insectos y fitopatógenos. Una parte del trabajo se ha centrado en la mejora de la resistencia del arroz frente al lepidóptero Chilo suppressalis, la plaga más importante de los arrozales. La estrategia es la expresión del gen mpi (Maize Proteinase Inhibitor, que codifica por un inhibidor de proteasas) en arroz, mediante los métodos de transformación por biolística y Agrobacterium. La expresión de este gen, y acumulación de la proteína MPI, se mantiene estable en generaciones sucesivas de líneas transgénicas de arroz. Podemos concluir que la expresión constitutiva del gen mpi en plantas de arroz confiere protección frente a la infestación de larvas de Chilo suppressalis. Bioensayos realizados con plantas transgénicas de arroz que expresan constitutivamente el gen mpi, infestadas con larvas de Chilo, nos permiten demostrar que la ingesta del inhibidor MPI comporta una significativa pérdida de peso de estas larvas respecto las larvas control (hasta el 60%). Asimismo se observa un importante retraso en el desarrollo de las larvas alimentadas en las plantas MPI, evitando alcanzar estadios superiores a estadio larvario L4. El promotor del gen mpi es funcional en arroz y confiere inducibilidad en respuesta a herdia al gen informador gus. El fragmento 2K del promotor del gen mpi confiere una respuesta más rápida y una inducción por herida más fuerte que el fragmento más corto C1. Asimismo, el fragmento 2K del promotor del gen mpi no confiere expresión del gen informador gus en el endospermo de la semilla de arroz. Por otro lado, el gen mpi de maíz se expresa correctamente en plantas de arroz bajo control de sus propias regiones reguladoras. Los niveles de expresión que se observan permiten obtener efectos similares a los observados con las plantas que expresan este gen constitutivamente en larvas de Chilo. Paralelamente, se ha determinado que el pH óptimo de las actividades proteo líticas digestivas de Chilo suppressalis y Cacyreus marshalli (plaga del geranio) es alcalino (pH 10,5 y 10, respectivamente). En el sistema digestivo de Chilo participan serinaproteasas del tipo tripsina y quimiotripsina, y también se hallan actividades carboxipeptidasa y aspartilproteasa. Se observa un efecto de adaptación del sistema digestivo de las larvas de Chilo alimentadas en plantas transgénicas de arroz, con un aumento de la actividad proteo lítica total del 40% respecto las larvas control; aunque, este aumento no es efectivo para contrarrestar el efecto inhibidor del MPI. Estudios encaminados a evaluar las propiedades antifúngicas de distintos péptidos y moléculas nos permite afirmar que la cecropina A inhibe el crecimiento fúngico de Fusarium verticillioides y Magnaporthe grisea in vitro, presentando actividad antifúngica a concentraciones en el rango de uM. La actividad antifúngica de la cecropina A frente Fusarium no se ve afectada por la presencia de fluidos intercelulares de arroz. Esta actividad antifúngica frente F. Verticillioides se conserva en los péptidos sintéticos derivados de la cecropina A, Pep3 y el Trímero-Pep3. El péptido Pep3, pero no el trímero, presenta también actividad antifúngica frente Magnaporthe grisea. Estudios realizados con la proteína AFP (Antifungal Protein) permiten concluir que ésta presenta una elevada actividad antifúngica frente F.vertillioides y M.grisea a concentraciones en el rango de nM, in vitro. Asimismo, presenta actividad contra el oomiceto Phytophthora infestans a concentraciones en el rango bajo uM. La presencia de la proteína AFP conduce a importantes anomalías morfológicas en estos fitopatógenos. No se aprecian efectos tóxicos de la proteína AFP sobre protoplastos de arroz para concentraciones elevadas de AFP. Además, la aplicación directa de proteína AFP en plantas de arroz confiere protección frente Magnaporthe grisea.

Autor: BENITEZ ALFONSO YOSELIN.
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.

Resumen: La interacción molecular establecida entre el árbol del olivo y el hongo parásito Spilocaea oleagina ha sido estudiada mediante la metodología de Expresión Diferencial ("Differential Display", DDRT-PCR) y RT-PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR). Un total de 160 ESTs (incluidos 82 fragmentos correspondientes a genes sobreexpresados en hojas infectadas) fueron aislados tras el estrutinio (mediante DDRT-PCR) de un 40% de la población de ARNm expresada en hojas infectadas de la variedad "Lechín de Sevilla", resistente a la infección fúngica. La expresión diferencial de los genes fue confirmada mediante Northern inverso. Los fragmentos positivos fueron secuenciados y en algunos casos la secuencia obtenida mostró una alta similitud con la secuencia de genes de plantas diferencialmente expresados en otras interacciones planta-patógeno. Los genes aislados fueron estudiados mediante Southern-blot para determinar si pertenecían al genoma del hongo o de la planta. Un estudio de la expresión de estos genes a lo largo del tiempo de infección con el patógeno fúngico fue llevado a cabo mediante QRT-PCR. Los resultados sugieren una regulación clara al alza de algunos de los genes de la planta y del hongo implicados en esta interacción. Además, algunos de los genes estudiados mostraron un patrón de expresión basal diferente en las variedades tolerantes con respecto a las variedades susceptibles de los cultivares de olivo. También se determinó los niveles de expresión de estos genes tras el tratamiento de hojas de olivo con los elicitores salicilato d esodio, benzotiadiazol, jasmonato de metilo, una mezcla de salicilato de sodio y jasmonato de metilo, etefón y cloruro de cobre. Los niveles de expresión de cuatro genes, elegidos según su patrón de expresión, fueron estudiados tras el tratamiento de hojas de olivo con algunos compuestos comerciales fungicidas e inductores de la respuesta de defensa en plantas. Finalmente, se secunció el ADNc completo de los genes olest23 y Olest28 y se realizaron estudios de hibridazción "in situ" en hojas infectadas con el hongo.

Autor: FONT SAN AMBROSIO M. ISABEL.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: La enfermedad del rizado amarillo del tomate (TYLC) esta causada por un complejo de especies virales y es considerada como una de las enfermedades virales más devastadoras para el cultivo del tomate (Lycopersicon esculentum) en regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo, donde puede llegar a causar pérdidas del 100%. En España (península e Islas Baleares y Canarias) están presentes dos especies de este complejo viral, Tomato yellow leaf curl Sardinia virus (TYLCSV) y Tomato Yellow leaf curl virus (TYLCV), que fueron detectadas por primera vez en España en 1992 y 1997 respectivamente. Estas especies virales se transmiten en la naturaleza por la mosca blanca Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae). En esta memoria de Tesis Doctoral se estudia la obtención de cebadores y antisueros que nos permiten la detección de la partícula viral mediante la aplicación de técnicas moleculares y serológicas. Se analiza la incidencia, distribución, estructura de la población y variación genética de las especies TYLCSV y TYLCV en los cultivos españoles de tomate. Así como se estudia el rango de huéspedes naturales del virus y el comportamiento de distintas variedades de tomate frente a las dos especies virales presentes en España. Actualmente la enfermedad de TYLC se encuentra extendida por todo el litoral mediterráneo español, Islas Baleares y Canarias. Desde 1998 se viene observando, en regiones del sureste español un progresivo desplazamiento de la especie TYLCSV por TYLCV. Los estudios de variabilidad mostraron que la estructura poblacional de cada región geográfica estaba compuesta por varios haplotipos siendo uno de ellos predominante. Las poblaciones de las regiones del noreste peninsular presentaron pequeñas fluctuaciones, lo que indicó la posible migración desde el sur hacia estas zonas. Las poblaciones del virus del rizado amarillo del tomate en España dentro de cada especie viral presentaron una baja diversidad genética. El aislamiento geográfico de las Islas Canarias ha hecho que el grado de migración entre ellas fuera muy bajo, pudiendo considerar cada una de las islas analizadas como una población diferente. PALABRAS CLAVE: TYLCSV, TYLCV, PCR, RFLP, haplotipo.

Autor: FADDA GHALEB NIMER ZIAD.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS .
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENEIROS AGRÓNOMOS.

Resumen: La caracterización molecular del Viroide latente de la berenjena (ELVd) ha demostrado que está constituido de una poblacion heterogéna de variantes de secuencia sin homología con ninguno de los virodies descritos. Se ha determinado la presencia de motivos de secuencia capaces de formar estructuras de "cabeza de martillo" con actividad ribozimática en las cadenas de ambas polaridades. Se propone le ELVd como la especie tipo de un nuevo género "Elaviroid" dentro de la familia Avsunviroidae. Se ha identificado en berenjena uan molécula con gran homología con el CEVd la cual ha sido caracterizada como un viroide que contiene una duplicación de 96 nucleótidos de la región terminal derecha de la molécula del CEVd. Se ha identificado y caracterizado un dsRNA asociado a la "enfermedad de las hojas quebradizas" de las palmeras datilera. Dicho dsRNA tiene homología congenes del cloroplastoy constituye un buen marcador de la enfermedad.

Autor: NEHOUACHI JALEL.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS U.P.V..

Resumen: En este trabajo se estudió la relación entre los niveles endógenos de hormonas y la disponibilidad de carbohidratos, sobre el crecimiento y la abscisión de los frutos cítricos. Se estudiaron las respuestas de los cítricos al estrés hídrico y a la rehidratación, al rayado de ramas, al estrés nutricional inducido por la defoliación y a la presencia, distribución y edad de la hojas en la inflorescencia. En relación con las respuestas al estrés hídrico y a la rehidratación se estudió, por un lado, la evolución de los contenidos endógenso de ácido bascísico ABA y de giberelinas Gas en los frutos en desarrollo y, por otro lado, las alteraciones en el crecimiento y abscisión de frutos. Los niveles endógenos de ABA y Gas se determinaron mediante cromatografía de gases en combinación con espectrometría de masas (GC-MS). En relación con el rayado de ramas, se estudió el efecto de estas técnicas sobre la evolución de los niveles endógenso de Gas y de carohidratos y sobre las alteraciones en el crecimiento y abscisión de frutos. Los niveles de carbohidratos se determinaron mediante cromatografia líquida de alta resolución HPLC. En relación con el estrés nutricional inducido por defoliación, se estudió, por un lado, el efecto de los distintos grados de defolición sobre los niveles de carbohidratos en los frutos en desarrollo y en las ramas y raíces, y por otro lado, su efecto sobre las alteraciones en el crecimiento y abscisión de frutos. En relación con la presencia, distribución y edad de las hojas en la inflorescencia, se estudió su efecto sobre la evolución de los niveles endógenos de Gas y de carbohidratos y sobre las alteraciones en el crecimiento y abscisión de frutos. Los resultados muestran que las variedades Clementina de Nules (citrus clmentina) y Satsuma Okitsu (Citrus unshiu (Mak) Marc) presentan un comportamiento diferencial en sus respuestas al estrés hídrico y posterior rehidratación. En la primera variedad, los peridodos de carencia de agua reducen el desarrollo del fruto al inicio de la fase de elongación celular. Este efecto no se contrarresta por la rehidratación posterior. Sin embargo, la rehidración en la variedad Okitsu permite cierta recuperación del desarrollo del fruto. Esta recuperación puede minimizar la merma de la cosecha. Los periodos de carencia de agua durante el crecimiento inicial de los frutos incrementan la abscisión de los mismos en las dos variedades. La redhidratación posterior desencadena una nueva oleada de abscisión en la variedad Clemenules, pero no así en la variedad Okitsu. En ambas variedades, los incrementos de ABA en el fruto se relacionan con periodos sin lluvias, aún en plantas regadas, mientras que los descensos de ABA, se relacionan, o bien con las lluvias, o bien con la rehdiratación. La GA20 parece ser el miembro de la ruta de síntesis de la 13-hidroxialción que responde a las condiciones alternantes de humedad baja y alta, que los cambios en sus niveles antagonizan aquellos que muestra el ABA. El rayado de ramas incrementa la disponibilidad de Gas y de fotoasimilados en los frutos en desarrollo de la variedad Okitsu. En junio, los efectos del rayado sobre el balance hormonal y nutriconal parecen estimular el desarrollo del fruto y reducir la abscisión, mejorando la fructificación. Sin embargo, los tratamientos de desfilación reducen la disponibilidad de carbohidratos y producen las abscisión de sso frutos en desarrollo. El aporte de sacarosa parecer ser crucial para el cuajado y desarrollo del fruto durante la transición de la fase de división a la fase de elongación celular. Tanto los experimentos de defoliación como los análisis de las inflorescencias con y sin hojas indican que la abscisión inicial está asociada con una reducción de la raza sacarosa/hexosa durante la fase inicial de división celular. Sin embargo, la segunda oleada de abscisión, al contrario, correlaciona con una razón sacarosa/hexona elevada.

Autor: AGUADO CORTIJO PEDRO LUIS.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En este trabajo se analizó la composición química del tallo de alcornoque durante los 6 primeros años de vida de la planta y mediante la utilización del carbono 14 (14C) como trazador, se estudió la distribución del carbono fotoasimilado por las hojas entre los diferentes grupos de compuestos orgánicos que constituyen el tallo de estas plantas. Para ello se utilizaron técnicas de extracción secuencial de compuestos orgánicos con diferentes disolventes (diclorometano, etanol y agua) e hidrólisis realizadas con diversos agentes hidrolíticos (metilato sódico, ácido sulfúrico en diversas concentraciones y ácido nítrico). Como variables se tuvieron en cuenta la edad de las plantas, la época del año, y el estado hídrico del suelo. Respecto a la composición química del tallo de alcornoque se observó que es semejante durante al menos los 6 primeros años de vida, acumulándose mayoritariamente el carbono fotoasimilado en la fracción lignocelulósica (82%) y el resto compartido entre los extractos alcohólicos (2%), los acuosos (13%), la fracción de suberina (1,8%) y las ceras (1%), sin que dicha distribución varíe significativamente en las distintas variables consideradas. La mayor parte de la suberina se sintetiza tras 6 semanas desde la asimilación del carbono, mientras que los compuestos de la fracción lignocelulósica se forma principalmente en las cuatro primeras semanas. A finales de la primavera la síntesis de la suberina alcanza la mayor intensidad, al igual que ocurre con los compuestos lignocelulósicos. Durante todo el invierno la síntesis de suberina se ralentiza y también la de celulosa cristalina y lignina. Pese a que la suberina representa tan solo el 1,8% de la composición del tallo como valor medio, en su síntesis se emplea cerca del 10% del carbono fotoasimilado; esta aparente discordancia se explica por la continua pérdida de las capas más externas del tallo, que contienen suberina como se ha observado mediante técnicas microautorradiográficas. Mediante técnicas macroautorradiográficas se ha observado que el carbono fotoasimilado se dirige principalmente a los centros de crecimiento más activos (ápice y brotes ramas laterales) independientemente del lugar que se ocupen en la planta tanto la hoja (fuente del carbono marcado) como el centro de crecimiento. Cuando existe estrés hídrico, la distribución del carbono se realiza de forma más homogénea entre todos los centros activos de crecimiento, sin apreciarse un predominio claro de ninguno de ellos. Mediante técnicas de microautorradiografía se pudo establecer la velocidad de formación de las células de las sucesivas capas del xilema, obteniéndose un tiempo medio de división de 9,1 días, con un mínimo de 2,25 días en el período de máximo crecimiento (junio-julio). También se pudo observar que la velocidad de división se reducía a más de la mitad en condiciones de estrés. Mediante las técnicas de marcado con 14C utilizadas en este trabajo, se han podido estudiar algunos aspectos de la cinética y el metabolismo del carbono fotoasimilado y metabolizado por las plantas jóvenes de alcoronoque y la influencia que tiene sobre ellos la situación de estrés hídrico por la pérdida de humedad del suelo, situación muy frecuente en el clima mediterráneo. También sirvieron para cuantificar, a nivel celular el crecimiento en grosor de estas plantas.

Autor: CARIDE VILLAAMIL ELENA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El riesgo de adquisición de determinadas enfermedades, como aquellas transmitidas por garrapatas, ha aumentado en los últimos años, debido al mayor contacto del hombre con la naturaleza y los animales domésticos y silvestres. Una de estas enfermedades, la borreliosis de Lyme, ha sufrido un considerable incremento en el número de casos diagnosticados en España. En este trabajo hemos estudiado el posible riesgo de contacto del agente de la enfermedad de Lyme (Borrelia burgdorferi sensu lato) con la población humana y animal que frecuenta la Sierra de Guadarrama, hábitat en el que coexisten los vectores y reservorios potenciales de esta espiroqueta. Para ello, realizamos un estudio serológico utilizando distintas técnicas, validando la más específica. Asimismo, quisimos conocer la prevalencia de los vectores potenciales y comprobar la importancia de los micromamíferos como reservorios de la bacteria. La seroprevalencia encontrada en la población estudiada fue muy superior con técnica de uso rutinario como son la IFI y el ELISA que la hallada al utilizar métodos más específicos como el inmunoblot, por lo que se concluyó que fueron debidas a reacciones cruzadas, siendo la técnica de elección esta última. El ciclo estacional de Ixodes ricinus dura dos años, siendo el único periodo de riesgo para el hombre el de la actividad de las ninfas, que sería la primavera o, según la humedad, el verano. Con respecto a los roedores, se vio que, tras la infección experimental, la respuesta humoral es muy intensa, pero en la naturaleza no se encuentra infección en ellos, debido al bajo de infestación que presentan, gracias a la abundancia de largartijas en la zona, que alimentan gran cantidad de estadios inmaduros del vector. Por lo tanto, podemos concluir que, aunque en la Sierra de Guadarrama concurren todos los elementos para que se mantenga el ciclo enzoótico del agente de la enfermedad de Lyme, la intensidad de transmisión durante el periodo de estudio es los suficientemente bajo para que no constituya un riesgo en la población que visita la zona.

Autor: JIMENEZ GASCO M. MAR.
Año: 2001.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: INSTITUTO AGRICULTURA SOSTENIBLE.

Resumen: F.oxysporum f.sp.ciceris (Padwick) Matuo & K. Sato (F.o.ciceris) es el agente causal de la Fusariosis Vascular del garbanzo. Los componentes de las poblaciones de este hongo se diferencian en patotipos (Amarillez y Marchitez), y en razas patogénicas (0, 1A, 1B/C, 2-6). Esta diversidad patogénica tiene relevancia respecto del uso eficiente de cultivares de garbanzo resistentes a la enfermedad, la estrategia de control de la Fusariosis Vascular del garbanzo más práctica y económicamente eficiente. Esta Tesis Doctoral se ha centrado en dos temas principales: 1,- La identificación molecular específica de F.o.ciceris y de sus razas patogénicas. 2,- El estudio de su variabilidad genética, así como de la posible relación evolutiva entre dichas razas. Para ello, hemos utilizado herramientas experimentales basadas en técnicas de biología molecular disponible, que nos han permitido desarrollar una metodología eficiente para identificar de forma rápida, precisa y consistente a los aislados de F.o.ciceris y de las razas patogénicas prevalentes en la Cuenca Mediterránea. Se han diseñado iniciadores para PCR específica, basados en las secuencias de marcadores RAPD asociados a las razas de F.o.ciceris identificados, que permiten distinguir inequívocamente a aislados de F.o.ciceris de aislados de F.oxysporum no patogénicos de garbanzo; de aislados pertenecientes a otras formae speciales de F.oxysproum; y de otras especies de Fusarium. Asimismo, se han diseñado iniciadores para PCR específica que diferencian entre sí a aislados de las razas 0, 1A, 5 y 6 de F.o.ciceris, así como a éstos de aislados pertenecientes a otras razas del patógeno. A pesar de la diversidad de este patógeno en su distribución geográfica, los tipos de sintomatología que induce en la planta susceptible, y la patogenicidad cultivar-específica, los aislados de F.o.ciceris poseen idénticas secuencias de los intrones de cinco genes altamente conservados en genomas fúngicos: EF1alfa, beta-tub, H3, Act y Cal. El análisis de máxima parsimonia de las secuencias del gen EF1alfa de 17 aislados del patógeno y de otras 24 secuencias respectivamente de 11 forma speciales de F.oxysporum, agrupó a los aislados de F.ociceris de forma distintiva respecto del resto de los aislados, lo que demuestra el origen monofilético de esta forma specialis. La interpretación lógica de la monofilia de F.o.ciceris sugiere que éste deriva de una población inicial fundadora pequeña (posiblemente un único individuo) que adquirió patogenicidad sobre Cicer spp., y cuya subsiguiente diversificación en patotipos y razas patogénicas ha podido resultar de la acumulación de cambios genéticos posteriores. El análisis de "fingerprints" de ADN genómico generados mediante hibridación con sondas de ADN repetitivo, ha puesto de manifiesto que los aislados de F.o.ciceris presentan perfiles de hibridación altamente correlacionados tanto con su capacidad de inducir un síndrome determinado en la planta huésped (i.e., razas patogénicas). Hemos desarrollado un método de análisis de ADN genómico de F.o.ciceris, basado en la amplificación entre copias de un elemento repetitivo identificado en el genoma del patógeno (rep-PCR). La información generada por "fingerprints" de ADN obtenidos con este método es equivalente a la obtenida mediante hibridaciones con el elemento repetitivo, lo cual supone un método alternativo, pero más simple, para investigar la diversidad en las poblaciones de F.o.ciceris basado en el estudio de un elevado número de aislados del patógeno. F.o.ciceris es un grupo clonal de aislados patogénicos con una fuerte estructura racial, en el cual la correlación entre los marcadores genéticos neutrales, tales como RAPDs y "fingerprints" de ADN, y la patogenicidad, puede ser utilizada para inferir conclusiones sobre la relación genética entre razas. Nuestras hipótesis evolutiva es que, en F.o.ciceris, unas razas patogénicas se han originado a partir de otras, y que el avance evolutivo de dichas razas patogénicas va unido a un incremento de virulencia de éstas. Así, la raza 0 es la menos virulenta de todas las razas, y la más antigua de ellas en razón de su mayor diversidad genética. Por el contrario, la raza 5 es la más virulenta de las identificadas hasta en la Cuenca Mediterránea, la que mnor diversidad genética posee, y a la que por tanto correspondería un origen evolutivo más reciente.

Autor: PALOMO GÓMEZ JOSE LUIS .
Año: 2001.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.

Resumen: Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus es la bacteria causante de la podredumbre anular de la patata, enfermedad de cuarentena en la Unión Europea. Los objetivos de este trabajo han sido detectar la enfermedad en España, principalmente en Castilla y León; comparar la sensibilidad de distintas técnicas de diagnóstico; realizar una caracterización fisiológica, bioquímica y molecular de cepas de distintos orígenes geográficos; y evaluar la supervivencia de dicha bacteria en las condiciones ambientales de Castilla y León. Se analizaron 3574 muestras de patata mediante inmunofluorescencia indirecta, aislamiento en medio de cultivo, inoculación en berenjena y pruebas de identificación. Se confirmó la presencia de la bacteria en 32 casos, 28 de ellos con origen en Castilla y León. Se determinó la sensibilidad de distintas técnicas de diagnóstico, comprobándose que la inoculación en berenjena era la más sensible, seguida de PCR, inmunofluorescencia y aislamiento en medio de cultivo, estableciéndose unas recomendaciones para mejorar la metodología oficial de análisis. En la caracterización fisiológica, bioquímica y molecular, se estudió la utilización de fuentes de carbono, la producción de enzimas, los perfiles electroforéticos de LMW-RNA y el ADN localizado entre secuencias repetidas del genoma (BOX-PCR). Con todas ellas se ha comprobado que existe una gran homogeneidad intraespecífica y que estas técnicas podrían utilizarse para una identificación rápida de la bacteria. Se detectó actividad celulásica y alfa-amilásica in vivo, y celulásica in vitro. El análisis del perfil isoenzimático de celulasas, reveló la existencia de cuatro isoenzimas diferentes. La bacteria ha sido capaz de sobrevivir en el suelo al menos durante una campaña, manteniendo su capacidad infectiva. Los rebrotes de un cultivo de patata infectado han actuado como reservorio de la enfermedad, no así la remolacha azucarera ni la vegetación espontánea de la zona.

Autor: PALOU VALL LLUIS.
Año: 2001.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE LLEIDA.

Resumen: Las pérdidas económicas ocasionadas por las enfermedades de post-cosecha representan actualmente uno de los principales problemas de la citricultura mundial. En nuestras condiciones mediterráneas destaca la incidencia de enfermedades causadas por patógenos de herida, especialmente, la podredumbre verde, causada por Penicillium digitatum (pers.: Fr.) Sacc., y la podredumbre azul, causada por P.italicum Wehmer. Tradicionalmente y también hoy en día, el control de estas enfermedades se realiza mediante tratamientos en post-cosecha con fungicidas de síntesis. La aplicación masiva y continuada de estos productos ha generado problemas graves como son la proliferación de cepas de los patógenos resistentes a los fungicidas, la excesiva presencia de residuos en los frutos, con el consecuente incremento de los riesgos para la salud humana y el medio ambiente, y la aparición de enfermedades latrogénicas. Ante esta situación, una de las prioridades máximas del sector citrícola es encontrar y desarrollar sistemas de control alternativos. Este es el objetivo básico del presente trabajo de tesis doctoral. Se han evaluado distintos métodos físicos, químicos y biológicos y también combinaciones de los mismos para el control en post-cosecha de las podredumbres verde y azul de los cítricos. Concretamente, se han estudiado en profundidad los tratamientos con agua caliente, carbono sódico y bicarbonato sódico, se han evaluado un buen número de otros aditivos alimentarios y sustancias de baja toxicidad, y se ha determinado el efecto de la conservación frigorífica en atmósferas ozonizadas. Finalmente, se han aislado, identificado y caracterizado microorganismos antagónicos efectivos en el control biológico de las podredumbres verde y azul y se ha ensayado su combinación con otros tratamientos alternativos. Entre las principales conclusiones que se han obtenido, destaca que el género Penicillium se encuentra presente en los campos de mandarino "Clemenules" durante todo el periodo de recolección y que la fruta llegada del campo es la principal fuente de contaminación fúngica de las centrales citrícolas de la zona, en las cuales existen cepas tanto de P.digitatum como de P.italicum resistentes a los fungicidas tiabendazol e imazalil. Baños de corta duración en soluciones de carbonato o bicarbonato sódicos al 2 ó 3% son más efectivos que el agua caliente sola para el control de las podredumbres verde y azul en naranjas y mandarinas clementinas. Se trata de tratamientos sinérgicos (45ºC) en atmósferas ozonizadas (0,3 ó 1,0 ppm de ozono) no reduce la incidencia de las podredumbres verde y azul en naranjas y limones, pero sí retrasa su desarrollo e inhibe la esporulación de los patógenos. La cepa CPA-2 de la bacteria Pantoea agglomerans es un antagonista efectivo en el control biológico de las podredumbres verde y azul en naranjas y clementinas. Su acción se complementa satisfactoriamente con un tratamiento previo de bicarbonato sódico al 2%.

Autor: CARBONELL CARBONELL ANTONIA M..
Año: 2000.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En suelos agrícolas y forestales de l aprovincia de Alicante, con Galleria mellonella como cebo, los antagonistas de insectos más frecuentes fueron los hongos entomopatógenos, seguidos de los nematodos y bacterias. Beauveria bassiana fue mayoritario en suelos forestales, mientras que Metarhizium anisopliae lo fue en suelos agrícolas. Se ha utilizado mesocarpo de almendra y hojas o semillas de plamáceas, para producir y formular hongos entomopatóneos y micopatógenos. Por producción de conidios, su viabilidad y patogenicidad, el mesocarpo de almendra,resultó óptimo para la producción de Verticillium lecanii y el único sustrato adecuado para M. Anisopliae. Las hojas de Camaerops humilis resultaron adecuadas para producir V.lecanii y B. Bassiana y los micopatógenos Trichoderma harzianum y Gliocladium virens. Todos los sustratos resultaron adecuados para G. Virens. Las semillas de Phoenix dactylifera fueron el sustrato más adecuado para la producción de Paecilomyces farinosus y el resto de antagonistas. La Microscopía Electrónica de Barrido detectó apresorios de antagonsitas en las hojas de palmáceassimilares a los que producen para colonizar sus huéspedes. Los hongos micoparásitos fueron más rápidos y mejores colonizadores de subproductos vegetales que los entomopatógenos. Las semillas de P. Dactylifera, incubadas con antagonistas y secas al aire resultaron (bajo distintas condiciones de almacenamiento) un formulado adecuado para la mayoría de hongos antagonistas P. Farinosus, produce varias serín proteasas con isoenzimas básicas. El tratamiento de larvas de G. Mellonella con dichas proteasas provocó daños importanes en la cutícula del insecto, lo que sugiere su papel en la patogénesis del hongo.

Autor: FERNÁNDEZ DE ANA-MAGÁN FRANCISCO J..
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: GEOGRAFÍA E HISTORIA.

Resumen: El objetivo final de esta tésis es demostrar que los agentes patógenos incidieron e inciden en la modificación del pasiaje forestal gallego. En la primera parte de la tesis se presentan diversos ejemplos de la influencia de diferentes agentes patógenos en el paisaje foresta de diferentes regiones del mundo y, a continuación, se analiza la evolución del paisaje foresta en la provincia de Pontevedra en los últimos cien años tomando como base informes originales -e inéditos- de los ingenieros del Distrito Forestal de Pontevedra pertenecientes a los años 1884-1886. Este análisis nos acerca al pensamiento de sus autores principales, Antonio Fenech y Jenaro Mira. Para el estudio del período posterior, que alcanza hasta 1950, se analizan documentos que permiten constatar tanto el estado de los montes como su utilización por los vecinos, o la actuación de los organismos y las personas que lideran estas actividades en cada momento político (Rafel Areses, Daniel de la Sota, Servicio Foresta de la Diputación, Vivero de Areas, Patrimonio Forestal del Esado, Centro Regional de Enseñanzas e Investigaciones Forestales de Lourizán, etc…) Finalmente se analiza la situación actual de los montes mediante visitas a veinte de ellos representativos, recogiendo información sobre su estado legal, sus usos, su vegetación, etc... En la segunda parte del trabajo se describen los agentes patógenos que han actuado sobre los árboles de Galicia, centrándose en los que afectaron o afectan a los castaños, a los reobles y a los pinos y eucaliptos, prestando especial atención aquellas de las que se tiene más información histórica, como es el caso del castaño, por ejemplo. Finalmente, dada la imposibilidad de cuantificar el conjunto de los cambios del paisaje foretal por falta de información numérica en todos los montes en cada momento, se ha escogido uno de ellos en la que sí existía y, a modo de ejemplo, se muestra su evolución desde el plano de 1886 hasta la situación actual que refleja la fotografía aérea. Como conclusión se demuestra el gran cambio que se produjo a lo largo de este siglo en el paisaje de estas áreas de la provincia de Pontevedra, comprobándose la incidencia de algunos agentes patógenos en su evolución a través de ejemplos actuales como el del eucalipto, el roble o el castaño, o incluso el pino de Monterrey.

Autor: DIAZ MORAL DAVID.
Año: 2000.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO INVEST. AGRARIA DE ALBALADEJITO, CUENCA.

Resumen: En la revisión bibliografica previa, se encontraron mas de 150 referencias a enfermedades causadas por hongos en 38 paises. Las referencias a virosis del cultivo fueron 28, repartidas en 23 paises, y los nematodos se citan en 10 de los trabajos revisados, en 6 paises. En los analisis de semillas de la region, ralizados en PDA y medio Komada, se aislaron mayoritariamente hongos comunes en semillas, Penicillium, Cladosporium, Alternaria y Mucorales. Entre los hongos potencialmente patogenos, destaco la presencia de Aschochyta fabae f.sp. Lentis, hongo que ademas se encontro asociado con manchas en semillas y vainas de la comarca de Los Oteros(Leon). Durante tres campañas de cultivo, en las provincias de Cuenca y Albacete, se realizo el seguimiento de varios campos, en los cuales se recogieron muestras de plantas sanas y con sintomas de enfermedad(podredumbre de raiz, clorosis, enanismo…). Además se analizaron plantas en todas las parcelas donde se observaron sintomas. Estas plantas se analizaron en medio general (PDA) y en medios selectivos para Fusarium y Pitiaceas(Komada y Ponchet), sin desinfeccion superficial. Tanto en las plantas con algun signo de enfermedad como en las que no los presentaban, los hongos más frecuentes fueron del genero Fusarium, F.roseum y F.oxysporum, seguidos de Penicillium y Pythium. En ninguna de las parcelas estudiadas de forma sistematica se alcanzaron niveles significativos de enfermedad. En dos de ellas, los daños fueron importantes: en un caso la enfermedad observada fue la marchitez vascular (F.oxysporum), y en el otro, los sintomas presentes y los hongos aislados se correspondian basicamente con marchitez vascular y ascoquitosis. La incidencia de las micosis aereas, se valoro durante dos campañas consecutivas en que estas enfermedades se manifestaron. La ascoquitosis y la roya fueron las mas frecuentes, presentes ambas en mas de la mitad de los campos observados. Los aislamientos realizados en los analisis de semillas y de plantas, se emplearon como inoculo con el objetivo de confirmar su capacidad de inducir enfermedad en las plantas de lenteja. La inoculación con aislamientos de Pythium provoco podredumbres en el cuello y sistema radicular. Los sintomas ocasionados por Fusarium oxysporum fueron multiples, desde muerte en pre-emergencia, hasta podredumbres en raices y cuello, o poco desarrollo, pero no provocaron en ningun caso marchitez vascular. Las podredumbre ocasionados por F.solani fueron mas evidentes en la zona del cuello, y en el caso de f.roseum, el principal sintoma observado fue la no germinacion de las semillas inoculadas. Los aislamientos de F.moniliforme no fueron patogenos. Los aislamientos de Ascochyta fabae f.s.p. Lentis realizados en muestras de Castilla-La Mancha, junto con otros de Castilla y Leon y de Canada, se caracterizaron morfologicamente, no apreciandose diferencias entre las distintas procedencias. La inoculacion en camara de cultivo de semillas de lentejas con estos aislamientos, permitio reproducir los sintomas tipicos de la ascoquitosis en el 3% de las plantas germinadas. Los intentos de reproducir la enfermedad en el campo fueron infructuosos, siendo inefectivas tanto la inoculacion por fijacion del hongo a la semilla, como la pulverizacion del mismo sobre las parcelas. La presencia del hongo en las semillas, incluso en ausencia de sintomas de infeccion, puede indicar una infeccion sistemica asintomatica.

Autor: MURGUÍA REYES CESAR AUGUSTO.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRÓNOMOS.

Resumen: Phytophthora parasitica, Tylenchulus semipenetrans y el virus de la tristeza de los cítricos (citrus tristeza virus, CTV) son los patógenos más comunes e importantes que afectan a los cítricos en España, Perú y otras áreas productoras del mundo. En esta tesis se presentan los resultados de varios estudios realizados para determinar la presencia de los tres patógenos en una misma área y evaluar su dinámica e interacción; caracterizar los biotipos de dos poblaciones de T. Semipenetrans así como la respuesta de diverso amterial genético frente a estas poblaciones y aplicar la técnica RAPD para carcterizar la variabilidad genética entre 10 poblaciones de T. Semipenetrans procedentes de distintas regiones geográficas. Se muestra que P. Parasitica y T. Semipenetrans están comúnmente asociados con la rizosfera de los cítricos, y los árboles con el CTV presetan los menores niveles de propágulos del hongo. En el heuro I (mandarino Marisol/citrange Carrizo) las poblaciones de T. Semipenetrans en los árboles con CTV superaron a las poblaciones de los árboles no infectados con el virus, y en el huerto II (mandarino Owari/naranjo amargo) los árboles presentan una respuesta totalmente inversa. Los niveles máximos de propágulos de P. Parasitica aparecen durante verano y otoño aunque altos niveles también se observan en la primavera. Las fluctuaciones de poblaciones de t. Semipenetrans se caracterizan por no tener un patrón estacional definido. Los propágulos de P.parasitica en el suelo, aumentaron en directa proporción con la reducción de las densidades de poblaciones de T, semipenetrans. Se han caracterizado a las poblaciones Rafelguaraf (Valencia) y Piura (Perú) de t, semipenetrans como similares al biotipo Poncirus y Citrus, respectivamente. Todos los híbridos experimentales y comerciales presentaron una reacción susceptible frene albiotipo Poncirus, y, diferentes niveles de resitencia frente al Citrus. El análisis RAPD de las 10 poblaciones de T. Semipenetrans indican que todas ellas tienen un alto nivel de semejanza genética y que los agrupamientos estarían más relalcionados con los biotipos que con las distintas regiones geográficas. Marcadores específicos se observan en algunas poblaciones.

Autor: JULCA OTINIANO ALBERTO MARCIAL.
Año: 2000.
Universidad: ALMERIA.
Centro de lectura: ESCUELA POLITECNICA SUPERIOR.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALMERIA.

Resumen: Se realizaron tres ensaos para evaluar el efecto del Biomor(R)sobre el tomate cultivado bajo plastico en la provincia de Almeria (S.E. De España), se le comparo con tres nematicidas quimicos. El primero de ellos se realizo en la localidad de Nijar, en un campo comercial de tomate var. Atletico, se uso un diseño de bloques Completos al Azar,con cuatro repeticiones y 11 tratamientos [T1=Testigo, T2=2,5 l/ha Biomor, T3=5,0 l/ha biomor, T4=5+5 l/ha Biomor, T5=10 l/ha Biomor, T6=2,5 l/ha Biomor+2 l/ha Fenzimin, T7=5,0 l/ha Biomor+2 l/ha Fenzimin, T8=5+5 l/ha Biomor+2 l/ha Fenzimin, T9=10 l/ha Biomor +2 l/ha Fenzimin, T10=20 l/ha Nemacur 40 LE(Fenamifos), T11=40 l/ha Rugbi 10ME(Caduzafos)]. El segundo ensayo se realizo en la localidad de Roquetas de Mar, en un campo comercial de tomate var. Abigail, se uso un diseño de Bloques completos al Azar, con 4 tratamientos [T1=testigo, T2=Biomor (5+5 l/ha), T3= Biomor (0+10 l/ha) y T4=200 l/ha DD-90 EC(1,3 dicloropropeno)], cada uno con cuatro repeticiones. El tercer experimento se hizo en la Cañada, con tomate var. Atletico y en condiciones de maceta. Se uso un diseño Completamente al Azar con 11 tratamientos [T1:Testigo, T2:Biomor(R)= (0,125+0,125) ml/pl,T3:Biomor(R)=0,250 ml/pl, T4:Biomor(R)=(0,250+0,250) ml/pl; T5:Biomor(R)=0,500 mlpl, T6:Fenzimin(R)=0,100 ml/pl, T7:Nemacur(R)=1,00 ml/pl, T8 Rugbi(R)=2,00 ml/pl y T9: DD-90 EC(R)=10,00 ml/pl], cada uno con 12 repeticiones. En los dos primeros ensayos se evaluo la poblacion de fitonematodos, nematodos de vida libre, bacterias,hongos y actinomicetos de la rizosfera de planta. Tambien las caracteristicas quimicas del suelo, el nivel de nutrientes en hojas, el peso y los grados brix del fruto. En el tercer experimento, se evaluo el crecimiento y la capacidad productiva de la planta de tomate. Adicionalmente y tambien en la Cañada, se realizo un cuarto experimento para determinar el efecto de Meloidogyne spp. Sobre tomate var. Atletico bajo condiciones de maceta en invernadero, se uso un diseño completo al Azar, con 3 tratamientos [0,128000 y 25600(huevos+J2 de Meloidognyne spp.) /planta] y 12 repeticiones cada uno, se evaluo el crecimiento y la capacidad productiva de la planta. Los resultados mostraron en primer lugar que el ataque de meloidogyne spp. Sobre la planta, ocasiono un menor crecimiento y un descenso en la produccion de tomate. El Biomor(R) disminuyo de manera significativa la poblacion de Meloidogyne y Pratylenchus semejante al causado por Nemacur(R), aunque inferior al producido por el Rugbi(R). Pero destaco el mayor efecto negativo del DD-90 EC(R) sobre Meloidogyne. Sin embargo, ninguno de los productos tuvo un efecto significativo sobre la poblacion de nematodos de vida libre. La poblacion de actinomicetos disminuyo por efecto del biomor (R), Nemacur(R) y Rugbi(R), en cambio el DD-90 EC(R) provoco su aumento. El numero de hongos aumento cuando se usaron Biomor (R) y DD-90EC(R), pero no vario con los otros dos productos estudiados. La poblacion de bacterias no se vio afectada por ninguno de los productos estudiados. El crecimiento y la capacidad productiva de la planta de tomate se estimulo en presencia del Biomor(R), mientras que el DD-90(R), Nemacur(R) y Rugbi(R) tuvieron un efecto negativo. El biomor (R) tambien tuvo un mejor efecto sobre la mayor parte de caracteristicas quimicas del suelo y mejoro la absorcion de la mayoria de elementos necesarios para la planta. El Fenzimin(R) no mejoro de forma importante la accion del Biomor(R). De manera general se concluyo que la adicion del biomor(R) al substrato donde crece la planta de tomate, produjo una respuesta positiva. Lo contrario ocurrio con los productos quimicos estudiados.