GENETICA VEGETAL

Autor: Moragues Canela Marcos.
Año: 2004.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agraria.
Centro de realización: Escola Tècnica Superior D'enginyeria Agrària.

Resumen: Recientemente, se ha resaltado la importancia de la conservación de los recursos fitogenéticos debido a que la reducida base genética de las variedades modernas puede conllevar la pérdida de genes de valor adaptativo y de calidad. EL trigo duro (Triticum turgidum L. var. durum) es un cultivo estratégico en la Cuenca Mediterránea, pero faltan estudios que evalúen su diversidad genética. En una colección de 63 cultivares tradicionales de diferentes países del Mediterráneo se estimó la diversidad, las relaciones genéticas entre cultivares y su implicación en la formación del rendimiento. Se usaron tres tipos de marcadores [gluteninas, amplified fragment length polymorphism (AFLP) y microsatélites (single sequence repeats, SSR)] para determinar la diversidad total así como la de cuatro zona geográficas dentro de la Cuenca Mediterránea: suroeste de Europa, norte de África, sureste de Europa y suroeste de Asia. Se llevaron a cabo tres ensayos de campo en condiciones de secano para determinar las diferencias en fenología, formación del rendimiento y acumulación de biomasa. Los índices de diversidad (D y PIC) para el conjunto de cultivares reveló niveles similares de diversidad presente en variedades modernas y antiguas de trigo duro. Para las gluteninas, la D total presentó un rango entre 0,49 y 0,77, con un promedio de 0,67. Para los AFLPs, el PIC fue de 0,24, siendo los valores máximo y mínimo 0,32 y 0,22, respectivamente. En cuanto a los SSRs, el promedio, máximo y mínimo fueron 0,70, 0,89 y 0,34, respectivamente. Los AFLPs y SSRs mostraron dos vías de expansión del trigo duro a través de la Cuenca Mediterránea, una por su cara norte y la otra a lo largo de la costa Sur. Las relaciones entre grupos de cultivares de orígenes distintos sobre la base de las frecuencias alélicas de gluteninas y las relaciones genéticas entre cultivares evaluadas con AFLPs y SSRs sugirieron dos vías de introducción del trigo duro en la Península Ibérica, una por el sureste de Europa y la otra por el norte de África. Las variedades asociadas a las vías de dispersión norte o sur alcanzaron rendimientos similares, pero mostraron diferentes estrategias en su formación y distribución de la biomasa en planta. Los cultivares del norte desarrollaron un ciclo más largo hasta espigado, mayor duración del periodo de elongación del tallo, mayor capacidad de ahijamiento, mayor biomasa en los hijuelos, menor proporción de espigas con grano y espigas con menor número de granos que las del sur. Por otro lado, los cultivares del sur fueron más eficientes en la producción de biomasa en antesis, mostraron mayor índice de cosecha y mayor altura de la planta. Los cultivares del norte basaron su rendimiento en el peso del grano, mientras las del sur lo hicieron principalmente en el número de espigas por m2. Sin embargo, la fenología fue el factor más importante explicando variaciones el rendimiento en ambos grupos. El rendimiento en grano se relacionó con la biomasa y el área foliar en el estadío primer nudo detectable, revelando la importancia del crecimiento temprano para el rendimiento de los cultivares tradicionales de trigo duro en ambientes semiáridos del Mediterráneo.

Autor: CONEJERO RODILLA ANA.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia .
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: El objeto de este proyecto ha sido avanzar en el campo de la hibridación somática en cucurbitáceas y,en particular, en el cruce cucumis melo(+) Citrullus colocynthis. El objetivo a largo plazo es la obtención de hibridos somáticos, tanto osimétricos como asimétricos, que en caso de ser fértiles, servirían como puentes genéticas para la transfenci de genes deseables (concretamente los que confieren tolerancia a la salinidad y el estrés hídrico, así como resistencia a diversas enfermedades ) desde la especie donante ( Citrullus colcynthis) a la receptora (Cucumis melo). Los estudios realizados eneste proyecto con el material de partida han mostrado oque la ccesión R309 de la especie Citrullus colocynthis (L.) Schard. nuestra mayor tolerancia al estrés hídrico que la variedad de melón Cantaloup Charentais, por lo que puede utilizarse en programas de mejora de la tolerancia al estrés hidrico de lal especie cultivada. Estos trabajos han permitido también la caracterización de las descendencias (TG2 y TG3) de la colección de plantas transgéncias de Citrullus colocynthis accesión R309, lo que facilitará la selección de lso genotipos transféncios más adecuados para su posterior utilización en experimentos de hibridación somática. Se ha ensayado el método de quimiofusión en lámina fina desarrollado en nuestro laboratorio en distintos sistemas de parentales. Los mejores resultados se han conseguido empleando unas concentraciones de polietilenglicol del 25% y 30% y una concentración inicial en lamezcla de protoplastos de 1X10(6) pp/ml. Por último conviene resaltar que también se ha avanzado en diversos aspectos relacionados con el diseño de estrategias para la selección de híbridos somáticos Cucumis melo (+) Citrullus colocynthis.

Autor: ROQUE MESA EDELIN MARTA.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia.
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: END1 es unn gen de guisante (Psum sativum L.) específico de antera que comienza a expresarse desde estadios tempranos del desarrollo (primordio de antera) en aquellas lineas celulares que darán lugar a los tejidos epidermis, conectivo, capa intermedia y endotecio, y en estos tejidos una vez desarrollados. La región promotora de dicho gen es capaz de dirigir la expresión específica del gen uidA (GUS) a las anteras de plantas de diferentes espeices (Arabidopsis thaliana, Nicotiana tabacum y Lycopersicon esculentum).El patrón de expresión del gen GUS en esas plantas es similar al del gen END1 en guisante. Esta especificidad que confiere el promotor END1 para la expresión de un gen foráneo en las anteras ofrecía la posibilidad de utilizarlo, fusionándolo a un gen citotóxico, como una herramienta biotecnológica para la obtención de plantas transgénica androestériles. En este trabajo, hemos fusionado la región 5´completa (-2736/6) del promotor de END1 a la secuencia codificante de la ribonucleasa extracelular producida por el Bacillus amyloliquefaciens, barnasa. Con esta construcción hemos transformado dos plantas, modelo, Arabidopsis y tabaco y una planta de interés agronómico, el tomate. La expresión del gen citotóxico barnasa donde END1 es activo, trajo como consecuencia una degeneración de tejidos de la antera que inhibió el desarrollo de los granos de polen. Las plantas transgénicas resultantes fueron adroestériles. Los estudios a nivel histológico de las anteras transgénicas mostraron que los efectos de la barnasa comienzan a observarse muy pronto en el primordio de antera, cuando este está consttuido solo opor células indiferenciadas, y continúa observándose a lo largo del desarrollo de la misma. De manera general, al final del programa de desarrollo, las anteras transgénicas eran de menor tamaño, su morfología era distinta de las de las anteras silvestres correspondientes, y en su interior se observaba el tejido conectivo colapsado y una estructura amorfa en lugar de granos de polen viable. La posible pérdida de las células parietales primarias por la acción ribonucleasa podría estar afectando la diferenciación de las células esporógenas, contugas en el territorio del futuro microsporangio. Estos resultados muestran que el promotor de END1 podría ser una herramienta biotecnológica útil de los programas de obtención de semillas híbridas de diferentes cultivos de interés agronómico. En el caso particular del tomate, todas las plantas transgénicas androestériles produjeron frutos parteocárpicos. Este resultado muestra que existe una relación entre la androesterilidad y el desarrollo autónomo del ovario en esa especie- Por otra parte, se ha realizado un análisis del promotor del gen END1. Para este análisis se realizaron delecciones sucesivas de la región 5´del gen y los fragmentos resultantes se fusioaron transcripcionalmente al gen delator uidA(GUS). Con estas construcciones se transformaron plantas de A.thaliana y se estudió la expresión del gen uidA mediante el ensayo histoquímico de la actividad de b-glucuronidasa. Hemos visto que el fragmento de 366/-6 de la región 5´ es la secuencia mínima con capacidad para dirigir la correcta expresión espacial y temporal del gen END1. La pérdida de la expresión de GUS en las anteras de las plantas de Arabidopsis thaliana transformadas con el fragmento de laregión 5´donde se elimina el motivo CArG2, apoya la hipótesis de que END1 podría estar regulado directamente por los genes de identidad de órgano de clase B y C.

Autor: SOSA DEL CASTILLO DAYNET.
Año: 2004.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Elaboración de un mapa genético de la judía (Phaseolus vulgaris L.), especialmente enfocado a la búsqueda de regiones del genoma de la judía asociadas con la resistencia a la enfermedad "grasa de las judias", causada por la bacteria "Pseudomonas syringue pv. phaseolicola", y en la caracterizacion de variedades de uso frecuente en Cuba en cuanto su respuesta a esta enfermedad y mediante marcadores moleculares -enzimas, RAPD, ISSR, ADN cp y ADN mt-.

Autor: PINEDA CHAZA BENITO JOSE.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia.
Centro de realización: Universidad Politécnica Valencia.

Resumen: El principal objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido la identificación de genes o combinaciones de genes que conduzcan a un aumento de la tolerancia a la salinidad y/o estrés hídrico en plantas transgénicas de tomate. En concreto, se han obtenido plantas transgénicas de tomate p73 con distintos genes presuntamente relacionados con la tolerancia a la salinidad y/o el estrés hídrico: HAL1, HAL3, HAL5, AtNHX1 y TPS (cedidos por el Dr. Ramón Serrano IBMCP-Valencia), tas14 y tsw12 (cedidos por el Dr. Pintor Toro, IRNA, Sevilla) y el gen asnA (cedido por Van der Have). Nuestro propósito ha sido utilizar la transformación genética como una herramienta para el análisis funcional de genes candidatos. Para ello, a partir de los transformantes primarios (TG1) se han obtenido sus descendencias TG2 y, en una segunda fase, las descendencias TG3 con el fin de identificar las líneas homocigotas y acigotas para cada uno de los transgenes. De esta forma, se ha podido llevar a cabo un estudio exhaustivo sobre el efecto de cada gen, comparando la tolerancia de las líneas homocigotas con respecto a la de sus correspondientes líneas acigotas mediante ensayos a corto, medio y largo plazo. Asimismo, hemos combinado transgenes implicados en diferentes funciones para evaluar hasta qué punto se puede incrementar el grado de tolerancia mediante esta estrategia. La evaluación de estos materiales transgénicos ha indicado que la expresión individual o conjunta de algunos genes conduce a un aumento de la tolerancia al estrés salino y/o hídrico.

Autor: MARTIN CARNES JOSE JAVIER.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: E.T.S. DE INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: En el presente trabajo se ha utilizado la técnica de hibridación in situ de fluorescencia (FISH) para analizar la evolución en la asociación de distintas regiones cromosómicas a lo largo de la profase temprana de la primera división meiótica en Arabidopsis thaliana. Se emplearon sondas correspondientes a distintos tipos de secuencias, como la secuencia repetida pAl1b, que constituye la gran mayoría de la cromatina centromérica, la secuencia repetida pAR21, que se localiza en la heterocromatina pericentromérica, la sonda pAt2512 correspondiente a la secuencia de un tRNA que se encuentra en el brazo corto del cromosoma I, y el BAC F19K16 que se corresponde con una secuencia distal del brazo corto del cromosoma I. Contrariamente a lo indicado por otros autores, se comprobó que la cromatina no sufre ningún tipo de reorganización en células en interfase premeiótica y en leptotena, permaneciendo con una disposición similar a la encontrada en células somáticas. Es en cigotena temprana cuando se produce un cambio en la distribución de la cromatina en el interior del núcleo que conduce al agrupamiento de las regiones centroméricas, y que lleva además aparejada la asociación homóloga de esas regiones, al menos en el cromosoma I. Así mismo se ha observado que el proceso de asociación homóloga tiene lugar en dos etapas claramente diferenciadas. En la primera, se observa un incremento brusco en los niveles de asociación homóloga en las regiones pericentroméricas y distales analizadas. Posteriormente, hay un avance más suave en todas las regiones analizadas hasta conseguir la plena asociación. En esta segunda etapa se ha observado una clara dependencia entre las regiones centroméricas e insterticiales. El análisis de células en diplotena y metafase I con las sondas específicas anteriormente señaladas ha revelado que la distribución de quiasmas es uniforme tanto a lo largo del brazo corto del cromsoma I como entre distintos bivalentes de un mismo ecotipo. Mediante el empleo de la sonda de rDNA 45S se comprobó que las regiones organizadoras del nucleolo (NOR) se fusionaban en la profase temprana y que esta fusión tenía lugar en dos etapas. En un primer momento, en células en premeiosis y leptotena, las regiones NOR se agrupan en un volumen reducido del núcleo apareciendo dos señales nítidas junto a un número indeterminado de señales descondendas, en contraposición con las células somáticas en las que se observaron cuatro señales nítidas. En una segunda etapa, en cigotena temprana, las regiones NOR se fusionan completamente, apareciendo una única señal en los ecotipos Columbia y Wassilewskija, manteniéndose en este estado hasta la etapa de diplotena. El análisis de los mutantes meióticos asy1 y dmc1, que tienen afectados procesos de apareamiento y recombinación respectivamente, reveló que el primero de ellos muestra ciertos niveles de asociación homóloga, sobre todo en la región pericentromérica del cromosoma I correspondiente a la sonda pAR21, mientras que el mutante dmc1 no muestra signos de asociación en ninguna de las regiones analizadas. Este comportamiento se asemeja a lo observado previamente en eucariotas inferiores, como levaduras, en los que el apareamiento de las regiones homólogas es posterior y dependiente de las etapas iniciales de la recombinación.

Autor: ROBLEDO ARNUNCIO JUAN JOSE.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: ETSI DE MONTES.
Centro de realización: ETSI DE MONTES.

Resumen: Este estudio busca aportar información experimental sobre la estructura genética y la dispersión polínica del pino silvestre (Pinus sylvestris L.) que sea aplicable a la conservación de los recursos genéticos de sus poblaciones ibéricas. Para ello se analiza la estructura geográfica de la diversidad genética molecular de las poblaciones de la especie situadas en la Meseta Norte utilizando microsatélites del cloroplasto (cpSSR). Mediante el uso de microsatélites nucleares (nSSR), se evalúa el posible efecto de dos prácticas selvícolas de regeneración natural, aclareo sucesivo uniforme y por bosquetes, sobre la dispersión polínica y el sistema de reproducción de la especie. Finalmente, se investiga el patrón espacial de la dispersión polínica en una población marginal de pino silvestre y se realiza un estudio comparativo de su sistema de reproducción en relación con el observado en poblaciones grandes de la especie. Las poblaciones de pino silvestre de la Meseta Norte mostraron niveles de variabilidad niveles de variabilidad molecular muy elevados en los cpSSR analizados (diversidad haplotípica He = 0,977) y una estructura poblacional muy débil ( ST = 0,031; p = 0,010), sugiriendo ausencia de procesos importantes de deriva genética. Las poblaciones más diversas son las situadas en la Sierra de Guadarrama y las más diferenciadas genéticamente son pequeñas poblaciones marginales en el interior de la Meseta y en la Sierra de Gredos. Las relaciones genealógicas entre los haplotipos indican una mayor similitud genética entre poblaciones ubicadas en distintos sistemas montañosos vertientes a la misma cuenca hidrográfica que entre poblaciones en vertientes opuestas del mismo sistema montañoso, resultado coherente con los procesos de migración altitudinal sugeridos por los registros fósiles de la especie. No se encontraron efectos significativos de las prácticas selvícolas de regeneración natural sobre los parámetros del sistema de reproducción del pino silvestre (tasa de autogamia y probabilidad mínima de endogamia biparental). La disminución de la densidad asociada a las cortas tampoco tuvo efectos significativos sobre la estructuración genética de la nube de polen ( ft). Desde el punto de vista de la polinización, estos resultados sugieren que los métodos de regeneración natural basados en el aclareo sucesivo, habitualmente empleados en las masas de pino silvestre españolas, son compatibles con el objetivo del mantenimiento de la diversidad genética de la especie. El análisis espacial de la dispersión polínica en la población marginal mostró un patrón claramente leptocúrtico, detectándose además un 4,4% de inmigración polínica desde árboles situados fuera de la población. Los árboles de la población pequeña mostraron una tasa media de autogamia (s = 0,25) ocho veces superior y una tasa media de paternidad correlacionada (rp = 0,20) cien veces superior a la de los árboles de las poblaciones grandes. Esta diferencia sería debida principalmente a la restricción espacial de la dispersión combinado con el aislamiento, si bien la variación individual de la fecundidad y la asincronía fenológica floral tendrían un efecto comparable sobre la tasa de paternidad correlacionada.

Autor: REDONDO GOMEZ SUSANA.
Año: 2003.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: En esta Tesis Doctoral se persiguen dos objetivos generales, muy relacionados: 1. Analizar los mecanismos que intervienen en el desarrollo de la sucesión en una marisma mareal, concretamente en las Marismas del Río Odiel (Huelva). En este objetivo general se enmarcan dos de los objetivos parciales de esta Tesis: -Seguir la evolución de las comunidades vegetales durante cinco años y conocer los mecanismos que han acontecido en la sucesión. -Aplicar técnicas de amplificación al azar de ADN polimórfico (RAPD) para esclarecer la identidad del nuevo colonizador de la marisma y comprobar si se trata de un híbrido. Además, estudiar su modo de colonización y el papel que desempeña en el desarrollo sucesional de la marisma. 2. Estudiar la tolerancia a los factores ambientales de las especies implicadas en el proceso de sucesión, relacionando dicha tolerancia con los patrones de sucesión y zonación.. Los objetivos parciales de esta segunda parte son: 3. Observar las respuestas de la germinación a la salinidad y la radiación para el género Sarcocornia. 4. Comparar la capacidad fotosintética de asimilación de CO2 y la respuesta estomática de diferentes taxones de Sarcocornia respecto al incremento de la intensidad de la radiación. 5. Estudiar la respuesta al estrés térmico de la eficiencia fotoquímica potencial mediante medidas de la fluorescencia de la clorofila a, como método sensible de estrés en la vegetación (Figueroa et al., 1997). En esta segunda parte los resultados fisiológicos se discuten en relación con el hábitat en el que se encuentra cada taxón (zonación) y en el momento en que aparece en la sucesión, con el fin de conocer el papel de los diferentes factores ambientales. 6. Efectuar un estudio anatómico de las ramas de los taxones citados.

Autor: LÓPEZ VICENTE MERCÈ.
Año: 2003.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: E.T.S. D'ENGINYERIA AGRÀRIA.
Centro de realización: IRTA.

Resumen: El almendro (Prunus amygdalus Batsch) es una especie predominantemente autoincompatible y salvo algunas variedades requiere la polinización cruzada para producir almendras. La introducción de la autocompatibilidad en las nuevas variedades es un objetivo principal en la mayoría de los programas de mejora. Es el frutal del género Prunus de floración más temprana, aunque también hay variedades que son muy tardías. Las frecuentes condiciones climáticas adversas dificultan su polinización entomófila y el cuajado de frutos. Ello, junto con la incidencia de heladas primaverales, origina importantes diferencias productivas anuales en las plantaciones con la consiguiente repercusión sobre el precio y comercio mundial de la almendra. Estas oscilaciones en la producción pueden ser reducidas mediante la plantación de variedades autógamas de floración tardía y adaptadas a las condiciones de cultivo de cada zona. En este trabajo, realizado dentro del programa de mejora del almendro del IRTA, se ha estudiado la transmisión de la autocompatibilidad y la autogamia en 377 individuos originarios de siete familias procedentes de cruzamientos controlados entre variedades y/o selecciones.En cada cruzamiento uno de los parentales era autocompatible. Los donantes de autocompatibilidad utilizados fueron dos variedades italianas "Falsa Barese" (S1Sf) y "Tuono" (S1Sf) y, dos genotipos procedentes de esta última. "Lauranne" (S3Sf) y la selección FLTU18 (S1Sf). Cuatro delas familias segregaban 1:1 para autocompatibilidad y el resto originaban teóricamente el 100% de individuso autocompatibles. También se han revisado los genotipos S de 28 variedades y se han identificado los genotipos de 73 selecciones obtenidas en programas de mejora. Se utilizaron cuatro técnicas (1 de campo y 3 de laboratorio) para determinar la autocompatibilidad y/o autogamia de los individuos pertenecientes a las siete familias: embolsamiento de flores en campo y posterior conteo del cuajado de frutos, observación del crecimiento de los tubos polínicos mediante microscopía de fluorescencia tras la autopolinización de flores en laboratorio, electroforesis de las ribonucleasas (RNasas) estilares y PCR utilizando cebadores específicos de los alelos S de incompatibilidad en laboratorio. La transmisión de la autocompatibilidad se comprobó genéticamente en todos los descendientes de las siete familias analizadas. La transmisión del nivel de autogamia a partir de "Falsa Barese" y "Lauranne" a los individuos autocompatibles fue la esperada, obteniéndose una gran frecuencia de individuos altamente autógamos. Sin embargo, en dos del as familias ("Glorieta" x "Tuono" y "Glorieta" x FLTU18) se observó un elevado porcentaje de individuos autoincompatibles en campo, aproximándose a una segregación fenotípica 1:1 no esperada. En la mayoría de los individuos de estas dos familias la autogamia observada fue baja. Gracias a la combinación de las cuatro técnicas anteriores se ha determinado que la variedad "Francolí", considerada hasta este trabajo autoincompatible, es realmente autógama, y se ha determinado su genotipo (S1Sf). También se han reasignado genotipos de incompatibilidad a cinco variedades: "Achaak" (S2S25), "Ardechoise" (S1S25). "Desmayo Largueta" (S1S25), "Ferrastar" (S2S25) y "Gabaix" (S10S25).Se ha identificado y secuenciado un nuevo alelo de incompatibilidad (S25) proveniente de "Desmayo Largueta" y "Gabaix". Este nuevo alelo S25 eleva a 26 el número de alelos de incompatibilidad determinados en almendro, y junto con los nuevos cinco genotipos propuestos, ha originado el establecimiento de dos nuevos grupos de incopatibilidad (XVI y XVII). La formación sobre los genotipos de incompatibilidad S generada a lo largo de este trabajo y la recopilada a partir de la bibliografía se ha recogido en una nueva Base de datos de 134 genotipos, que será muy útil para mejoradores.

Autor: BENTEBIBEL SALIMA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El objetivo de la tesis ha sido: demostrar y comparar el potencial para producir paclitaxel y baccatina III de una suspensión celular de T.baccata inmovilizada y sin inmovilizar en perlas de alginato cálcico, y cultivada en condiciones optimizadas en tres diferentes tipos de birreactores, un "wave" de 2L, agitación mecánica de 5L y airlift de 4L. Este objetivo se ha conseguido plenamente y los resultados obtenidos, en su conjunto, nos han permitido establecer las siguientes conclusiones finales. Los más altos niveles de paclitaxel (43,43 mg-L-1) y de baccatina III (7,98 mg.L-1) se consiguieron durante el cultivo de las células inmovilizadas en perlas de alginato cálcio en, respectivamente, el biorreactor de agitación mecánica y el biorreactor "wave", sin que en ninguno de los dos casos disminuyera la producción previamente alcanzada en el cultivo a pequeña escala. La producción de baccatina III de 7,98 mg.L-1 en 16 días de cultivo en el biorreactor "wave", aunque muy considerable, es inferior a la conseguida previamente por nuestro grupo de investigación (56,03 mg.L-1). Sin embargo, la producción de paclitaxel de 43,43 mg.L-1, conseguida también en 16 días de cultivo en el biorreactor de agitación mecánica, es, según nuestra información, la más alta alcanzada por los diferentes grupos de investigación que estudian el cultivo de células de Taxus como posible fuente comercial de este anticancerígeno. Lo expuesto, muestra la idoneidad de la inmovilización de las células de T.baccata en perlas de alginato cálcico para incrementar la producción depaclitaxel, y a la vez, que el sistema descrito puede servir de base para una posible fuente comercial de este taxano, al superar ampliamente la productividad alcanzada (2,7 mg-L-1.día-1), al limite que justifica su producción biotecnológica (1-2 mg.L-1.día-1).

Autor: SANCHEZ BELL ESTHER.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA / UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: En el contexto agrícola europeo actual, las variedades tradicionales bien pueden ocupar un lugar significativo si son evaluadas y sometidas a un proceso de selección y mejora genética. Además, los consumidores demandan calidad, variación y valor oganoléptico a los productos alimentarios. En Cataluña persisten tipos varietales tradicionales de judía para consumo en grano de entre las que destaca la judía Ganxet (Phaseolus vulgaris L.), reconocida por la forma ganchuda de su semilla. El objetivo general de la tesis era definir los límites como clase comercial y seleccionar líneas puras prototípicas del tipo varietal Ganxet para facilitar su trazabilidad y puesta en el mercado. Se ha constituido una colección de 69 entradas de germoplasma cultivado bajo la denominación Ganxet. Las entradas inequívocamente reconocibles como Ganxet presentan plantas tardías, con hábito de crecimiento indeterminado trepador de tipo IV, entrenudos largos, hojas y vainas verde oscuro y flores blancas. Presentan vainas de 13,9 a 17 cm de longitud con 3,7 a 5,8 semillas por vaina y producciones de 36,3 a 51,9 g/planta. Las semillas son de tamaño medio-grande (38,8 a 61,9 g/100 semillas), aplanadas y arriñonadas (grado de gancho entre 1,5 y 2,8 sobre 3) con un 23,26% a 27,63% de proteína, 1,48% a 2,10% de grasa y 7,45% a 8,90% de episperma. Las semillas absorben entre un 42,73% y 48,12% de agua durante el remojo. Se han seleccionado siete líneas puras prototípicas del tipo varietal Ganxet con un nivel de polimorfismo equivalente al que se encuentra dento de clase comercial. Presentan vainas de 14,7 a 15,7 cm de longitud con 4 a 4,6 semillas por vaina y producciones de 57,7 a 65,9 g/plantas. Las semillas son de tamaño grande (50,3 a 52,3 g/100 semillas), aplanadas y arriñonadas (grado de gancho entre 2,1 y 2,9 sobre 3) con un 27,14% a 29,32% de proteína, 21,77% a 23,41% de fibra dietética, 0,067% a 0,082% de glucosa, 24,72% a 27,50% de almidón y 8,9% a 9,6% de episperma. La línea pura seleccionada L67 está a disposición de los agricultores y se encuentra en fase de registrado bajo la denominación Montcau. El germoplasma Ganxet, evaluado mediante marcadores RAPD, es de acervo genético mesoamericano de la raza Mesoamérica con introgresiones, al menos, de la raza Durango.

Autor: PÉREZ SÁNCHEZ RAFAEL.
Año: 2003.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El presente estudio ha tenido como objetivo fundamental contribuir al conocimiento de los factores que afectan a la producción cuantitativa y cualitativa del aceite esencial de Thyms sygis (Labiatae) en la zona sur de la Península Ibérica. Además, teniendo en cuenta el polimorfismo químico de la especie, este trabajo ha estado orientado por un lado a comparar y estudiar la capaciedad antifúngica de aceites colectivos obtenidos de poblaciones silvestres, y por otro lado, a analizar aceites de plantas individuales obtenidas en áreas mas reducidas, para poder caracterizar quimiotipos e investigar la variabilidad genética. Como complemento , que ha ayudado a atender la variabilidad de la especie, se ha llevado a cabo un estudio de la biología reproductiva con el que se han puesto de manifiesto la importancia de la ginodioecia en el flujo genético de las poblaciones naturales. Este trabajo constituye el primer estudio integrado sobre Thymus en el que se analiza su actividad antifúngica, su caracterización química y las posibles fuentes de variación de sus aceites esenciales. Estas fuentes son; fenología, bioclimatología, constitución genética y biología floral. Se han caracterizado siete quimiotipos distintos en cuanto a la composición química de los aceites esenciales de Thymus zygis, encontrando como mayoritariamente, el quimiotipo fenólico timol. Los precursores de este compues, p-cimeno y g-terpineno tienen también una importante representación en la mayoría de los individuos estudiados. La composición química de los aceites esenciales de Thymus zygis varía considerablemente en función de la fase fenológica en la que se encuentre la planta. Por lo tanto, cualquier clasificación química de estos aceites debe tener en cuenta esta fase fenológica en el momento de la extracción. Se ha demostrado la existencia de un control de la tasa de autogamia mediante la biología floral y la estructura sexual de las poblaciones de Thymus zygis. Estos factores regulan la variabilidad y la adaptación de los caracteres de estas plantas al medio ambiente.

Autor: IRIGOYEN MIGUEL MARÍA LUISA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA CELULAR Y GENÉTICA (UNIVERSIDAD DE ALCALÁ)..

Resumen: La obtención de líneas de avena resistentes a patógenos es un importante objetivo para tratar de incrementar la producción de este cereal. La identificación de marcadores moleculares ligados a genes de resistencia a patógenos puede facilitar la selección de líneas resistentes. Gracias a la descripción molecular de genes de resistencia de distintas plantas ha sido posible aislar secuencias de avena con similaridad a dichos genes. Estas secuencias, conocidas como análogas a genes de resistencia (RGAs), han sido utilizadas como sondas en experimentos de RFLPs y se han establecido sus relaciones de ligamiento con otros marcadores previamente localizados en un mapa de avena hexaploide. La comparación entre grupos de ligamiento de los mapas de avena hexaploide y diploide ha permitido relacionar una región que contiene RGAs con la región en la que se localiza un importante cluster de resistencia a Puccinia coronata causante de la roya de la corona en avena. Se ha realizado también un estudio de la diversidad de las secuencias RGAs en diferentes especies del género Avena. Las secuencias aisladas se han alineado junto a secuencias de genes R conocidos y secuencias RGAs de otras especies pudiéndose comprobar que, en el árbol filogenético obtenido, estas no formaban un grupo monofilético por lo que se deduce que este tipo de secuencias aparecieron antes de la divergencia de las Poaceae y que aquellas secuencias que se localizan en un mismo grupo serían secuencias ortólogas. Por último se ha intentado relacionar directamente las secuencias RGAs con genes R identificados en Avena, empleando dos colecciones de líneas casi-isogénicas. Para ello se han buscado polimorfismos en experimentos de RFLPs empleando como sondas cuatro de las secuencias RGAs aisladas, y se ha realizado una búsqueda de polimorfismos tipo RAPDs. De esta forma se ha identificado una pareja de líneas cuyo gen de resistencia podría formar parte de la familia multigénica a la que pertenece uno de los marcadores RGA aislados en este trabajo.

Autor: GARCIA MONTERO ESTHER.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: E.T.S.I. AGRONOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRONOMOS.

Resumen: El objetivo final de esta tesis es analizar la disposición del material genético en la interfase de células somáticas de cereales. El material elegido para este análisis, consiste en células somáticas de meristemos radiculares y del tapete de anteras de híbridos interespecíficos trigo-centeno, trigo-tritordeum y trigo-triticale. Los genomios pueden diferenciarse en interfase mediante técnicas de hibridación in situ con fluorescencia (FISH), utilizando como sondas DNA genómico o secuencias especie-específicas. Previamente al estudio de la organización de la cromatina en interfase en dichos híbridos, se han caracterizado una serie de secuencias repetidas dispersas de centeno, buscando secuencias específicas que permitiesen identificar la cromatina de centeno en híbridos mediante FISH, evitando la hibridación cruzada e incrementando la exactitud al combinar distintos tipos de sondas. Los resultados obtenidos por PCR muestran que existen copias de todas secuencias analizadas en diversas especies de la tribu Triticeae, no siendo exclusivas del género Secale. Dado que podría existir hibridación cruzada, dichas secuencias han sido descartadas para identificar genomios específicos en los híbridos mediante FISH. Por otro lado, se han caracterizado tres secuencias repetidas subteloméricas de centeno, buscando un patrón específico para cada pareja de cromosomas homólogos del genomio R. Para cada una de las líneas de centeno analizadas se ha observado un patrón específico de la disposición de dichas secuencias. En el estudio de la distribución de un genomio concreto en el núcleo en interfase, se ha comparado la distribución observada para el número de dominios por núcleo del genomio marcado, con la esperada según una distribución binomial en la que se asume que dichos dominios se distribuyen al azar en el núcleo en interfase. Los resultados indicaron que cada genomio no se localiza en una región concreta, sino que se distribuyen por todo el núcleo. Así mismo, los cromosomas de los genomios de centeno y cebada se distribuyen al azar en el núcleo de las células somáticas en interfase. En híbridos trigo-centeno se ha analizado, además, la posible influencia del gen Ph1 sobre la organización espacial del genomio R en la interfase de células somáticas. Los datos obtenidos parecen indicar que el sistema de diploidización del trigo no induce una mayor organización de la cromatina en interfase somática en dichos híbridos. Las pruebas realizadas en las células somáticas binucleadas del tapete mostraron que el número de los dominios estudiados es elevado inmediatamente después de la cariocinesis. A continuación, los cromosomas se descondensan, disminuyendo el número de dominios observados. En lo referente a la disposición de cromosomas homólogos durante la interfase de células somáticas en líneas de adición y translocación trigo-centeno, se observó una tendencia de los cromosomas homólogos a disponerse en paralelo y orientados en el mimo sentido, pero no se observan indicios claros de asociación somática

Autor: ORTEGA VILLALMANZO FELISA .
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Los programas de mejora en el nivel diploide permiten aprovechar las ventajas de la herencia disómica e incorporar el germoplasma de las especies silvestres. El primer paso de este programa consistió en obtener haploides de los genotipos autotetraploides (2n=4x=48) vía pseudogamia. De esta forma, se obtuvieron 246 dihaploides capaces de tuberizar y se identificaron los genotipos 4x y clones inductores que produjeron mayor cantidad de dihaploides por baya. Además, se identificó la presencia de material genético del inductor IvP48 en 1 dihaploide de los 94 estudiados con SSRs. Los clones dihaploides primarios fueron seleccionados en campos de ensayos y se identificaron 6 clones con el gen Ryadg, con los marcadores RYSC3 e Y-1. La segunda etapa del programa diploide consistió en la obtención de poblaciones diploides mejoradas. Para ello, se seleccionaron clones diploides avanzados que se cruzaron para obtener nuevas poblaciones 2x. Además, se incorporó el germoplasma de 10 especies silvestres al germoplasma cultivado de patata mediante cruzamientos de hibridación interespecífica. Así, se obtuvieron 14.435 semillas de 49 cruzamientos diferentes. Se evaluaron 13 de estas familias encontrándose buenos valores de resistencia a PVY, floración y fertilidad masculina, clones con diplopolen y elevados niveles de materia seca. Por otro lado, se obtuvieron 722 clones de 11 retrocruzamientos diferentes. La familia híbrida 00-811BL y un primer y segundo retrocruzamientos diferentes. La familia híbrida 00-811BL y un primer segundo retrocruzamiento, se caracterizaron molecularmente con SSRs comprobándose la reducción de bandas características de la especie silvestre en el segundo retrocruzamiento. Los SSRs también fueron utilizados para realizar una selección de genoma completo en la familia híbrida 00-S3C demostrándose que la recuperación de los caracteres Tuberosum puede acelerarse aplicando marcadores moleculares en la selección. En la fase final del programa se obtuvieron 505 clones 4x mediante USP de los que se seleccionaron 110 por el buen aspecto de los tubérculos.

Autor: RUIZ FERRER VIRGINIA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIÓN BIOLÓGICAS (CSIC).

Resumen: En el presente trabajo se aborda el estudio de las propiedades funcionales y estructurales de la proteína HC-Pro implicada en la transmisión de potyvirus por pulgones. El mecanismo molecular de transmisión parece basarse en la interacción entre dos proteínas virales denominadas proteína de la cápsida (CP) y factor de adquisición (HC-Pro), así como entre el HC-Pro y el estilete del pulgón, de modo que el HC-Pro actuaría a modo de "puente" entre la partícula viral y el vector. Se ha empleado un nuevo sistema de expresión heteróloga, como es la levadura metilotrófica P.pastoris, para la expresión de la proteína HC-Pro de TEV. Dicha proteína es capaz de interaccionar in vitro con viriones de TEV purificados a partir de planta infectada así como de mediar en la transmisión de TEV por pulgones, siendo el primer sistema heterólogo que permite obtener una proteína HC-Pro funcionalmente activa. Con el fin de incrementar la pureza de la proteína hisHC-Pro de TEV obtenida a partir de planta infectada, se utilizó una columna de NTA-níquel y diferentes sistemas de elución. Se analizó el comportamiento del hisHC-Pro de TEV obtenido con cada uno de los tapones de elución en transmisión, se determinó la cantidad de níquel presente en cada uno ellos, así como el posible papel desempeñado por el níquel en la transmisión de TEV por pulgones. Poco se sabe hasta el momento de la relación existente entre las propiedades estructurales de la proteína y su función durante el proceso de transmisión. Partiendo de una proteína hisHC-Pro de TEV que presentaba una actividad en transmisión próxima al 100%, se analizó el comportamiento de la proteína en solución mediante experimentos de ultracentrifugación analítica y se procedió a su reconstrucción tridimensional a partir de las imágenes obtenidas por microscopía electrónica. Las estructuras obtenidas por ambas metodologías son compatibles con el dímero, el tetrámero y el hexámero de la proteína hisHC-Pro de TEV.

Autor: VELAZQUEZ MORALES IGNACIO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Los procesos de organogénesis in vitro de brotes y raíces pueden ser inducidos en explantes de tejidos vegetales, y permiten obtener plantas regeneradas completas. El conocimiento de los genes que controlan estos procesos puede realizarse haciendo uso de la variación natural existente en poblaciones de la especie modelo Arabidopsis thaliana. Se ha analizado la variación existente entre 26 poblaciones naturales de Arabidopsis thaliana -ecotipos-, todos ellos utilizados para obtener líneas recombinantes endogámicas (RILs). Se ha encontrado un amplio rango de variación, mayor en organogénesis de brotes que de raíces, sugiriéndose que dicha variación afectaría a genes relacionados con auxinas y citoquininas, fitohormonas que inducen estos proceos, y el tipo de azúcar con los medios de cultivo. E análisis de ATLs en la organogénesis de brotes y de raíces a partir de distintos explantes en dos poblaciones de RILs, Ler/Col y Ler/Cvi, ha permitido identificar y localizar distintos QTLs responsables de la variación encontrada entre los parentales. Además, el uso de algunas líneas casi isogénicas (NILs) en la población Ler/Cvi nos ha permitido confirmar el efecto de algunos de los QTLs detectados. Los resultados parece indicar la existencia de etapas comunes para los dos procesos organogénicos, controladas por genes en los QTLs que actuarían bien durante la adquisición de competencia organogénica, o bien en el control del ciclo celular. Otros genes parecen controlar etapas propias de uno u otro proceso organogénico o bien etapas específicas del tipo de explante, hoja o raíz, y de la composición de los medios de cultivo. Por su posición en el mapa y por la función en el proceso se proponen genes candidatos, de entre genes previamente conocidos, en las regiones cromosómicas identificadas.

Autor: CRISTÓBAL SÁNCHEZ M. DOLORES .
Año: 2003.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIERÍAS AGRARIAS.

Resumen: La caracterización morfológica y bioquímica ha puesto de manifiesto la existencia de una alta variabilidad en las variedades locales objeto del estudio. Se han obtenido correlaciones altas entre algunos parámetros morfológicos cuantitativos y tipos de semillas con determinados alelos isoenzimáticos. La aplicación de las isoenzimas permitió identificar 17 loci, de los cuales nueve fueron polimórficos. Los datos de la interpretación genética realizada sobre los patrones de bandas de estos últimos se utilizaron en los análisis de variación inter e intra poblacional, detectándose un coeficiente de diferenciación bajo, en relación a lo observado en otras especies cultivadas autógamas. El posible intercambio de semillas entre agricultores de apunta como una de las causas de los valores encontrados para el mencionado parámetro. No se detectó ninguna estructura geográfica en las variedades incluidas en el estudio.

Autor: RAMOS MONREAL ALVARO.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S. INGENIEROS AGRONOMOS MADRID.

Resumen: Se ha evaluado la colección completa de variedades locales españolas de guisante. Para ello se han utilizado 17 descriptores cuantitativos y 9 cualitativos así como 3 descriptores de datos de pasaporte. La colección ha consistido en 270 poblaciones locales y se realizó la evaluación en el año 1999 con fecha tradicional de primavera y en el año agrícola 1999/2000 en el que la siembra se realizó en periodo otoñal. Fue utilizado un diseño de campo aumentado sin repeticiones, utilizando parcelas testigo para controlar la posible heterogeneidad espacial. El objetivo era estudiar, racionalizar y jerarquizar la variabilidad detectada, estableciendo unos criterios sencillos de clasificación que en un futuro permitieran un mejor menejo de la colección para sus posibles usos en mejora menejo de la colección para sus posibles usos en mejora vegetal, así como estudiar la distribución geográfica de la variabilidad detectada en las poblaciones locales de guisante en todo el territorio español. El resultado del trabajo ha permitido establecer siete posibles zonas de evolución del guisante dentro del territorio español. Se ha detectado una apreciable variabilidad en la expresión de los caracteres utilizados entre cada zona geográfica y también dentro de cada una de ellas. Y la colección se ha manifestado como una interesante fuente de variabilidad genética que puede servir como material en futuros programas de mejora.

Autor: CORDEIRO RODRIGUES LUCIANO.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S. INGENIEROS AGRÓNOMOS (MADRID) FAC. CC. AGRARIAS Y AMBIENTALES (SALAMANCA).

Resumen: Cerezos y guindos son cultivos de zona templada, de interés creciente en la actualidad debido a sus calidades nutricionales y a su uso industrial. Hoy en día, la gran mayoría de las variedades cultivadas son fruto de planes de mejora llevados a cabo en países con tradición en estos cultivos. La utilización de estas variedades ha llevado al abandono de las tradicionales, que son un repositorio de genes de interés inmediato o futuro, por lo que su estudio es de marcada importancia. En este trabajo se ha caracterizado las siguientes variedades de cerezo (P.avium L.): Precoce Bernard, Burlat, Lisboeta, Francesa de Alenquer, Saco 1, Saco 2, Tardif de Vignole, Maringa y Morangao. Se estudiaron también ocho variedades de guindo (P. Cerasus L.): Pedro Miguel D'Óbidos, Sobral D'Óbidos, Martinho D'Óbidos, Galega, Garrafal Rosa, Seixas, Garrafal y Garrafal Negra, de una colección ubicada en la cara norte de la sierra de Gardunha, en Alcongosta, Fundao, en la zona interior del centro de Portugal. Los métodos que se han empleado para conseguir este objetivo han sido: la descripción morfológica, el estudio isoenzimático, y el análisis del ADN mediante RAPDs, así como la observación de los distintos estadios fenológicos durante un período de tres años consecutivos. Entre las variedades estudiadas se han detectado algunos casos de homonimias, como en los cerezos Saco 1 y Saco 2, que se ha concluido que se trata de variedades diferentes, y otros casos de sinonimias, como los guindos Galega y Garrafal Rosa, que son la misma variedad, y lo mismo sucede con las tres variedades, Pedro Miguel D'Óbidos, Martinho D'Óbidos y Sobral D'Óbidos,que corresponden a sinonimias de la misma variedad. El estudio morfológico realizado, además de facilitar una adecuada caracterización, permitió una distinción de las variedades estudiadas. El análisis isoenzimático, cuyo sistema más discriminante ha sido el de la fosfoglucomutasa, permitió complementar los resultados obtenidos con los descriptores morfológicos. Estos estudios se completaron con los marcadores RAPDs, si bien los resultados obtenidos no son del todo concluyentes y presentan algunas dificultades de reproducibilidad, aportando sin embargo una primera información con vista a la caracterización molecular de estas variedades. El seguimiento fenológico realizado también ha permitido sacar algunas conclusiones y datos comparativos de las variedades estudiadas, en particular en lo que se refiere a la mayor o menor precocidad de cada una de ellas.