GENETICA VEGETAL, 2

Autor: FORNES PULLARELLO LUIS FERNANDO.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: ETSIM-UPM.

Resumen: Pinus taeda L. Es una de las especies de mayor cultivo e industrialmente más importante en el mundo y en la República Argentina. Las principales regiones de plantación son el Noroeste (NEA) y Noroeste Argentino (NOA). El presente trabajo tiene por objetivo determinar la disposición en un huerto semillero clonal de primera generación, de los ramets de 121 árboles fenotípicamente superiores de Pinus taeda de pedigrí desconocido. El criterio utilizado es lograr un equilibrio entre ganancia genética esperada y un nivel aceptable de diversidad, reduciendo el riesgo de depresión por endogamia. La población de mejora estudiada se encuentra en la zona subtropical del NOA. Se analizaron cuatro aspectos fundamentales, cuya solución constituye el elemento esencial de esta memoria: caracterización y evaluación del material genético mediante el empleo de marcadores morfológicos (16 variables de origen materno) y molecurales (10 loci microsatélites nucleares), estimación de los niveles de endogamia y relaciones de parentesco. A partir de estos resultados se ha propuesto una estrategia de mejora y conservación de la diversidad génica. Los resultados muestran que los marcadores morfológicos son poco efectivos para este tipo de análisis, al igual que las isoenzimas. Sin embargo, los microsatélites nucleares sí son adecuados para la caracterización y estructuración de la población de mejora (PM). La diversidad genética de la PM es moderamente alta (0.6), siendo la población testigo APS de Marion-FL genéticamente más diversa. El test comparativo muestra diferencias significativas entre ambas poblaciones, pudiendo descartarse a Marion como origen de la PM. Entre los parámetros genéticos estimados, el índice de parentesco medio (O=0.045) es orientativo pero no suficiente para conocer la estructura parental que pueda contener una PM de pedigrí desconocido. El coeficiente de Loiselle permite conocer el tipo y grado de relaciones parentales que puedan existir en la PM. Así, la población en estudio presenta una carga parental de hermanos completos y medios hermanos importante. Esto es atribuible a la historia del material genético (EE.UU), cuya estrategia de mejora fue de multiprocedencias, con individuos dispuestos aleatoriamente en los huertos semilleros. Por esta misma razón, se ha encontrado individuos altamente endogámicos, a los que conviene aislar de la PM. En cuanto a la organización de la PM (97 clones) en el huerto semillero, el diseño más conveniente para poblaciones de mejora con una estructura parental compleja, pequeñas y cerradas, es el de sublíneas desconectadas, fijas, sistemáticas, de 4 individuos. El diseño puede mejorar con el uso de barreras divisorias y un distanciamiento entre clones de al menos 15m. De esta manera, desaparece el flujo de polen entre hermanos completos, se reduce sensiblemente el de medios hermanos y aumenta el tamaño efectivo de la población. Para finalizar, se propone una estrategia de mejora para la próxima generación a corto y largo plazo, combinando sistemas de cruzamientos simples con índices de selección más elaborados. Dicha estrategia es más bien conservadora, dado que se trata de un material localmente apreciado y que la ganancia esperada en la primera generación (22%) es considerable. Este estudio demuestra la conveniencia de efectuar controles sobre el material forestal de reproducción proveniente de las poblaciones de producción que habitualmente se emplean, dado que muchos huertos semilleros aún continúan diseñándose aleatoriamente sin conocer en profundidad la estructura genética de la población de mejora y la estructura parental que la misma pueda contener.

Autor: MENA MARMOLEJO ALICIA.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRÓNOMOS.

Resumen: Las rascadera (Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott) ha sido tradicionalmente un cultivo de subsistencia, que en el pasado formó parte de la dieta alimenticia de las comunidades negras y de la comunidad indígena del departamento del Chocó (Colombia). Sin embargo, su consumo ha disminuido por procesos de actualización y por el abandono delas fincas, originándose un proceso de erosión genética del material. La creación de un Bando de germoplasma de aráceas comestibles en el departamento del Chocó garantizará la recuperación y conservación de estos recursos fitogenéticos, no sólo en esta rgión, sino en el país en general. Colombia es uno de los paises sudamericanos donde se encuentra una mayor variabilidad de cultivares de rascadera, que los agricultores han mantenido durante siglos. Sin embargo, hasta el momento, no se ha realizado ningún estudio en profundidad sobre la variabilidad del cultivo en esta zona. H.D.M. Chavarriaga inició el establecimiento de un banco de germoplasma de clones de aráceas comestibles del departamento de Antioquina, en la Universidad Nacional de Colombia (con sede en Medellín). Esta colección incluía 31 clones de Xanthosoma. En la actualidad, se desconoce el estado de dicha colección. El desparamento del Chocó es una de las regiones de Colombia que presenta mayor variabilidad de especies de aráceas comestibles. La Universidad Tecnológica del Chocó mantiene en la actualidad una colección de 126 entradas de rascadera que requerían ser caracterizadas, provenientes de varios municipios que corresponden a las tres cuencas hidrográficas que conforman el departamento: Atrato, San Juan y Baudó. En la presente tesis doctoral, además de documentar los aspectos etnobotánicos de la rascadera practicados por la comunidades negras del departamento del Chocó, se ha profundizado en la caracterización de la colección, morfológicamente, empleando marcadores moleculares de Tipo AFLP y analizando la secuencia del gen nad1. La caracterización completa de la colección contribuye a conocer su riqueza genética, lo cual dará las bases para establecer un programa de recuperación y mejora de su cultivo en el departamento del Chocó. Recuperar y mejorar el cultivo de la rascadera en El Chocó es importante para garantizar la conservación de este germoplasma, cuyas características organolépticas y propiedades nutritivas son mejores o similares que las de otras especies de mayor importancia económica. Además, el promomver su consumo en esta región puede contribuir a que muchas familais del Pacífico incrementen sus ingresos y mejoren su calidad de vida con la comercialización a nivel local o externa. Este programa puede también tener impacto en el desarrollo de otras zonas que se encuentren condiciones similares. El estudio etnobotánico muestra la situación en la que se encuentra el germoplasma de rascadera en E1 Chocó, considerando las tres cuencas hidrográficas analizadas (Atrato, San Juan y Baudó), donde las personas encuestadas identifican tres tipos varietales: un tipo de rascaderas blanca, un tipo de rascadera morada y otra denominada panameña. La identificación de estas vairedades se lleva a cabó fundamentalmente en base a características morfo-agronómicas, similares a las mencionadas en otros estudios sobre esta especie. Además, se confirma el carácter tradicional de esta especie en el departamento del Chocó. Se trata de un cultivo de substancia, asociado mayoritariamente a las huertas de las viviendas y a las fincas de agricultores características de la región. El arraigo de la rascadera en la cultura de estas comunidades se verifica en la diversidad de usos. La caracterización morfológica de la colección de rascadera de la Universidad Tecnológica del Chocó se basó en el descriptor publicado por el Internacional Plant Genetic Resource Institute (IPGRI) para el género Xanthosoma, incluyendo también algunos descriptores utilizados por las comunidades de la zona para identificar el material. Empleando caracteres tanto cualitativos como cuantitativos, se encontró una importante variación para la mayoría de los caracteres vegetativos y de producción de los materiales de las tres cuencas analizadas. El conocimiento etnobotánico y la caracterización morfológica generan las bases para el análisis de la variación del germoplasma vegetal, pero este tipo de información no es suficiente, si se considera que el ambiente puede influenciar algunas características. En estos casos, es recomendable emplear marcadores de ADN para profundizar en el análisis de la variabilidad y facilitar el manejo de las coleecciones de germoplasma de rascadera. Por una parte, el análisis de la secuencia del gen nad1 ha permitido profundizar en la taxonomía de la aráceas. Por otro lado, el análisis con AFLP ha permitido conocer con más detalle la estructura de la variación en la colección. El grado de polimorfismo encontrado en esta colección fue del 100%. Este grado de polimorfismo contrasta con los escasos estudios previos realizados, donde se indica un bajo grado de polimorfismo molecular en colecciones de esta especie. La caracterización molecular ha permitido también determinar el grado de variación del germoplasma de rascadera colectado en cada una de las zonas muestreadas y la identificación de posibles duplicados en la colección, lo que será sin duda de utilidad para el manejo y posterior utilización de este germoplasma en programas de recuperación y de mejora de este cultivo.

Autor: JESÚS BARBOSA CRISTIANE DE.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: Se estudió el comportamiento de 62 accesiones del Banco de Germoplasma de cítricos del Instituto Valenciano de Investigación Agraria (IVIA). Estas accesiones recogían plantas de 39 especies y variedades de cítricos, 7 especies de híbridos y 16 especies de géneros afines. La sensibilidad de cada una de ellas a diferentes viroides fue testada inoculándolas con una mezcla de: Viroide de la exocortis de los cítricos (Citrus exocoirtis viroid, CEVd), Viroide de la hoja curvada de los cítricos (Citrus ben leaf viroid, CBLVd), Viroide del enanismo del lúpulo (Hop stunt viroid, HSVDd), Viroide del enanismo de los cítricos (Citrus dwarfing viroid, CDVd) y Viroide IV de los cítricos (Citrus viroid IV, CVd-IV). Los resultados de los análisis de detección de estos viroides por sPAGE, hibridación molecular y indexación en cidro, mostraron que la mayoría de las especies estudiadas eran susceptibles a la infección por el CEVd, CBLVd, HSVd, CDVd y CVd-IV. La acumulación de los viroides durante la infección se mostró dependiente de la especie y de la variedad inoculada. Las especies Atalantia citroides, Microcitrus australis, Citrus shukokan, Eremocitrus glauca, mandarino Nova y Fortunella.crassifolia son aquellas en las que quizás puedan encontrarse fuentes de resistencia ya que: 1,- En A.citroides y M.australis no se detectó ninguno de los viroides inoculados. 2,- En C.shukokan, E.glauca y mandarino Nova no se detectó el CEVd. 3,- En F.crssifolia no se detectó el CBLVd. Se identificaron además 10 especies (C.clementino cv. Nules, C.excelsa, C.myrtifolia cvs. Hoja P y Hoja G, C.grandis, C.paradisi, Dweet Tangor, mandarino Kinnow, Tangelo Orlando y F.crassifolia) en las que fue extremadamente difícil detectar al menos uno de los viroides inoculados, y en especial el CEVd. Por otra parte, se mostraron sensibles a los viroides estudiados 16 especies y variedades de cítricos, y 1 especie de género afín: C.depressa, C.latifolia, C.bergamia cvs. Burjasot y Calabria, C.limettiodes cv. Lima Dulce Palestina, C.limon cv. Fino cv. Fino, Verna y Lima Gigante, C.medica cv. Poncil, C.pyriformis, C.hystrix, C.ichangensis, C.karna, C.meyeri, C.excelsa, C.macroptera, C.webberi y M.australis x M.australasica. Sobre algunas de las especies que mostraron sensibilidad, se realizaron inoculaciones independientes con cada especia de viroide. Se observó que el CEVd induce síntomas en C.limettiodes y C.pyriformis; El CBLVd en C.karma, C.limettiodes y C.inchangensis; el HSVd, (variante CVd-Iia) en C.inchangensis; El HSVd (variante CVd-IIc) en C.meyeri y C.karma, el CDVd en C.latifolia y C.inchangensis; y el CVd-IV en C.karma, C.latifolia y C.ichangensis. Durante el análisis de comportamiento de las especies frente a la infección con viroides, se detectaron dos RNAs de movilidad distinta en A.citroides y M.australis. Estos RNAs eran diferentes a los inoculados y se denominaran Viroide de A.citroide (AcVd) y Viroide de M.australis (MaVd). Los estudios de caracterización del AcVd mostraron que se trataba de un RNA infeccioso del tipo viroidal. Se estudió también la transmisión mecánica de viroides en las variedades comerciales, Clementino de nules, naranjo Navelino y limonero Verna, en condiciones de campo. También se evaluó la transmisión mecánica de estos patógenos en una parcela comercial de Clementino de Nules. Los resultados de los estudios mostraron que el CEVd, CBLVd, HSVd y CDVd se transmiten mecánicamente y con baja eficiencia en las condiciones de campo de la Comunidad Valenciana. El limonero Verna ha sido la variedad más susceptible a la infección por transmisión mecánica de viroides y especialmente del CEVd.

Autor: ATARES HUERTA ALEJANDRO.
Año: 2003.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRÓNOMOS INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS.

Resumen: El melón es una de las especies hortícolas más importantes en el mundo. En este trabajo pretendemos abordar el desarrollo de diversos métodos que permitan la transferencia de genes al acervo génico de melón mediante la transformación y fusión de protoplastos. En primer lugar, empleando el protocolo de aislamiento, cultivo y regeneración de plantas a partir de protoplastos de melón, desarrollado previamente en nuestro grupo, estudiamos dos vías para la selección de las células procedentes de protoplastos transformados o fusionados. Utilizamos cotiledones de ocho días con dos días de precultivo en medio NB 2,5/1,0 como fuente de protoplastos y comprobamos que las células regeneradas no podía seguir su crecimiento si se añadían 5 mg.l-1 de kanamicina desde el inicio del cultivo o 50 mg.l-1 de kanamicina en la fase de gelificación. En cambio, en la fase de minicallos, ni siquiera una concentración de 100 mg.l-1 de kanamicina era suficiente para inhibir el crecimiento. Por otra parte, vimos que la adición desde el inicio del cultivo de NaCl 50 nM era suficiente para impedir el crecimiento de los protoplastos de melón. En cambio, cuando se aplicaba el mismo agente selectivo en la fase de gelificación, hacía falta un tratamiento con NaCl 150 mM para detener el crecimiento, aunque a menores concentraciones también veíamos un claro efecto sobre el cultivo. Conviene resaltar que se ha conseguido la trasformación estable de nuestro material, mediante dos métodos, la electroporación (transformación de protoplastos mediante el empelo de corrientes eléctricas) y la quimioporación (transformación de protoplastos mediante la adición de polietilenglicol). En el primer caso, hemos comprobado la importancia que tiene la adición de calcio en el medio de electroporación cuando ésta se lleva a cabo a temperatura ambiente. En ambos métodos, hemos constatado una mayor eficacia de transformación al utilizar una concentración de 100 ug.ml-1 de plásmido. Además, hemos lgorado detectar la expresión transitoria del gen gfp en el 3% de los protoplastos transformados y, por ambos métodos, podemos obtener entre 500 y 800 agregados transgénicos por experimento de transformación. Por otra partes, hemos comprobado la eficacia de un nuevo método de transformación que combina las ventajas de la utilización del Agrobacterium con el manejo de protoplastos. Con este protocolo se podría mejorar de forma significativa la eficacia de transformación respecto del método de transformación mediante cocultivo de explantes primarios con Agrobacterium. En la útlima parte de este trabajo, hemos evaluado una colección de plantas transgénicas de Lycopersicon pennellii con el propósito de utilizar los genotipos más interesantes como parental donante en programas de hibridación somática con especies de cosecha. Dadas las características de esta especie, podría ser una fuente de variación adecuada para la transferencia de genes que confieran mayor tolerancia a distintos tipos de estrés, como el ocasionado por la salinidad, utilizando la técnica de fusión de protoplastos. Los 26 genotipos analizados han integrado desde una hasta cinco copias del gen nptll. Tras comprobar mediante citometría de flujo que todos ellos eran diploides, realizamos distintos experimentos para evaluar sus resistencia a kanamicina ya que este antibiótico se iba a utilizar para la identificación de los posibles híbridos somáticos. A partir de los resultados obtenidos, preseleccionamos siete genotipos en los que analizamos su tolerancia al estrés salino. Al final de estos experimentos, elegimos el genotipo 103 con cinco copias del gen nptll, que tiene una alta resistencia a kanamicina y expresa una buena tolerancia al NaCl. A continuación, abordamos los trabajos de fusión de protoplastos entre melón y Lycopersicon pennellii mediante dos métodos: químico y químico-eléctrico. Tras ajustar las condiciones que permitían el crecimiento posterior del cultivo, intentamos la recuperación de los eventos de fusión mediante el cultivo en medios con kanamicina en distintas etapas. Se comprobó que la selección en la fase de gelificación con 50 ó 75 mg.l-1 de kanamicina puede ser la más adecuada para recuperar los híbridos somáticos.

Autor: ALAPONT ASENSIO CARMEN PILAR.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: E.T.S.I. AGRÓNOMOS.
Centro de realización: DE INVESTIGACIONES AGRARIAS.

Resumen: Las giberelinas (GAs) son hormonas que intervienen en numerosos aspectos del desarrollo vegetal, incluyendo la elongación del tallo. El primer caso en la ruta de biosíntesis de GAs es la conversión del geranilgeranil difosfato (GGPP) a ent-kaureno, vía copalil difosfato (CPP). Estas dos reacciones están catalizadas por las ciclasas ent-copalil difosfato sintasa (CPS) y ent-kaureno sintasa (KS), respectivamente. En este trabajo se ha aislado un clon de cDNA, CcPS1, que codifica una CPS del híbrido citrange Carrizo (Citrus sintesis (L.) Obs x Poncirus trifoliata (L.) Raf, ampliamente utilizado como patrón en cítricos) y se ha evaluado el efecto de su sobreexpresión sobre el fenotipo de plantas transgénicas de tabaco. También se ha obtenido un clon parcial de un gen, CcPS2, que posiblemente codifica una segunda CPS en citrange Carrizo. Se ha desmostrado que CcCPS1 procede del parental Poncirus trifoliata, mientras que CcCPS2 procede de Citrus sinensis, el otro parental de citrange Carrizo. Se ha obtenido la secuencia de DNA genómico correspondiente a la región codificante del gen CcCPS1 y se ha encontrado que este gen codifica tras proteínas diferentes, denominadas CcCPS1a, CcCPS1b, CcCPSc, como consecuencia de un mecanismo de corte-empalme alternativo en el proceso de maduración del pre-RNAm. Sin embargo, únicamente los productos de expresión en E.coli del clon CcCPS1b son capaces de metabolizar GGPP a CPP in vitro. CcCPS1 se expresa en muy bajos niveles y su expresión está limitada a órganos vegetativos y reproductivos en crecimiento activo. La expresión de CcCPS1 se induce a corto plazo por un aumento en la temperatura, y también mediante la aplicación de inhibidores de la ruta de biosíntesis de GAs. Plantas transgénicas homocigotas de Nicotiana tabacum que sobreexpresan el clon CcCPS1b de citrange Carrizo eran más altas (entre9-12%) y tenían un fenotipo de inflorescencias y entrenudos y pedúnculos florales más alargados (entre 33-117%) que las plantas control a finalizar su desarrollo. La sobreexpresión de CcCPS1 (así como la de las GA 20-oxidasa) CcGA20ox1 y CmGA20ox1) aceleró la germinación de las semillas transgénicas. Además, las semillas transgénicas que expresan la CPS fueron más resistentes al paclobutrazol, sobre todo en condiciones de oscuridad. La longitud final del hipocotilo de las plántulas trasngénicas, sin embargo, fue similar a la de las plantas control. Tanto los hipocotilos como los tallos de plantas transgénicas, sin embargo, fue similar a la de las plantas control. Tanto los hipocotilos como los tallos de plantas transgénicas en crecimiento, incrementaron su longitud tras la apllicación de GA3, mientras que la aplicación de paclobutrazol inhibió su crecimiento, efecto revertido por la aplicación exógena de GA3. La expresión ectópica de CcCPS1 aumentó el contenido de todas las GAs analizadas de la ruta de la 13-hidroxilación temprana de la biosíntesis de Gas (GA44, GA19, GA20, GA29, GA1, GA8). El contenido en GA1 (la GA activa) en brotes de las plantas transgénicas fue X veces superior respecto al de las plantas control. Plantas de tabaco híbridas que expresan una CPS (CcCPS1) y una GA 20-oxidasa (CcGA20ox1 ó CmGA20ox1) mostraron un fenotipo que parece ser el resultado de la suma de los efectos causados por cada uno de estos genes separadamente en plantas transgénicas. Los resultados sugieren que CcCPS1 es un gen cuya expresión se encuentra estrictamente regulado a lo largo del desarrollo vegetal, y que el fenotipo observado en las plantas transgénicas de tabaco que sobreexpresan CcCPS1 es debido a un mayor contenido en GA1. La sobreexpresión conjunta de una CPS y una GA 20-oxidasa tiene un efecto aditivo sobre el fenotipo de las plantas híbridas. Por tanto, es posible manipular el contenido endógeno de GAs activas, y como consecuencia, la estatura de las plantas, mediante la sobreexpresión ectópica de uno ó más genes de la ruta de biosíntesis de GAs.

Autor: BENCHACHO MOHAMMED.
Año: 2002.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: El estudio enzimático de 17 poblaciones marroquíes de Avena barbata y 10 poblaciones de Avena murphyi de España y Marruecos mediante isoenzimas, proteínas de reserva, RAPDs y ISSRs ha mostrado que: Marruecos es una zona de alta diversidad para Avena barbata, y no han aparecido diferencias importantes en el nivel de variabilidad entre las poblaciones de Avena murphyi de España y Marruecos, si bien en este último país las poblaciones son más polimórficas. La amenaza de desaparición a la que se enfrentan sus poblaciones, pone de manifiesto la necesidad de localizar todas las poblaciones existentes y proceder a su conservación ex situ. Los marcadores moleculares utilizados han proporcionado una información de gran utilidad en el diseño de programas de conservación ex situ de Avena murphyi; sin embargo, su aplicación a programas de conservación in situ debería completarse con estudios sobre otras características genéticas y demográficas de las poblaciones.

Autor: ALI-MOUSA EMERAN BAHNASY AMERO.
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CORDOBA.

Resumen: Mediante el estudio de los caracteres morfológicos de las teliosporas y uredosporas, la morfología de la vesícula subestomática, la gama de huéspedes, el empleo de especies diferenciales de Vicia y el patrón de variabilidad genética mostrado por marcadores moleculares se han podido clasificar las royas recogidas sobre habas, lentejas y veza como verdaderas especies diferentes y no meras formas fisiológicamente distintas (razas) o formae specialis de U.viciae-fabae como estaba descrito antes. Sugerimos los nombres U.viciae-fabae, U.lentis-culinaris y U.viciae-sativae para las royas de habas, lentejas y veza, respectivamente. Al estudiar la gama de huéspedes de 8 royas de leguminosas se encontró que tanto la roya del caupí (U.vignae) como la roya de altramuz (U.lupinicolus) tienen una estrecha gama de huéspedes, al no infectar más que a su huésped propio (caupí y altramuz, respectivamente). La roya del garbanzo (U.ciceris arietini), la de habas (U.viciae-fabae), la de lentejas (U.lentis-culinaris) y la de la veza (U.viciae-sativae) sólo infectaron a sus propios huéspedes y a guisantes. La roya de la alfalfa (U.striatus) tiene como gama de huéspedes la alfalfa y el garbanzo como había sido descrito, pero tiene como nuevo huésped las lentejas. La roya del guisante (U.pisi) puede infectar además de a guisantes y almortas a garbanzos y lentejas. Partiendo de un grupo de 25 aislados de U.viciae-fabae se han identificado 17 razas distintas. La raza 17 de Egipto es la más virulenta y aún no hemos encontrado líneas resistente a ella, por lo que hay que buscar en el futuro fuentes de resistencia a esta raza. La infección con roya causó un incremento del contenido en fenólicos totales en líneas con resistencia parcial y con resistencia hipersensible y de actividad peroxidasa en esta última. Por TLC y HPLC se detectaron al menos tres compuestos presentes sólo en las líneas resistentes, que se inducían como resultado de la infección.

Autor: JIMÉNEZ MARTÍNEZ JUAN FRANCISCO.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Se ha estudiado un grupo de táxones pertenecientes al género Antirrhinum L., las series Valentina Rothm y Sempervirentia Rothm. Los táxones que las forman son ocho, A. Sempervirens, A.pertegasii, A.pulverulentum, A.microphyllum, A.Valentinum, A. Subbaeticum y A. Martenii (este último está supuestamente extinguido, y por tanto no ha sido incluido en los estudios realizados). Todas las clasificaciones taxonómicas realizadas hasta la fecha coinciden en que se trata de un grupo natural que presenta características ecológicas y morfológicas homogéneas, sin embargo, el estatus taxonómico de algunas de las especies que componen ha sido objeto de debate contínuo. Con el fin de ver las relaciones evolutivas dentro de este grupo de táxones, y tendiendo en cuenta la taxonomía clásica no resuelve estas relaciones, se han utilizado marcadores moleculares tanto nucleares como citoplasmáticos. Estos marcadores, por una parte, han sido utilizados con éxito en diferentes grupos de plantas, y por otra, en el género Arntirrhinum apenas han sido utilizados para estos propósitos. Así, los ensayos realizados han sido principalmente: * Estudio de las relaciones taxonómicas de las series Valentina y Sempervirentia a partir de RAPD. * Estudio de la variación morfológica y molecular a partir de marcadores ISSR y citoplasmáticos de A.gr.pulverulentum, formado por A.microphyllum y a.pulverulentum, ya que a partir de RAPD, no se podían separar taxonómicamente. * Estudio de las relaciones filogenéticas del género Antirrhinum a partir de marcadores moleculares cloroplásticos. Las conclusiones obtenidas en la realización de esta tesis indican que: 1,- El estudio de Antirrhinum subbaeticum mediante marcadores RAPD sugiere que esta especie está empobrecida genéticamente debido a repetidos cuellos de botella poblacionales o genéticos. Tales evidencias no parece que hayan acaecido en la evolución de los otros táxones de las series Valentina y Sempervirentia. 2,- La discriminación de los táxones de la serie Valentina mediante marcadores RAPD ha podido ser efectuada en algunos casos. Las evidencias encontradas apuntan que: A.- A.charidemi, A.subbaeticum y A.valentinum forma un grupo diferenciado del resto de táxones. B,- A.subbaeticum no debería ser incluido en la sinonimia de A.valentinum; una hipótesis a confirmar apunta al posible origen híbrido de A.subbaeticum siendo uno de sus posibles progenitores A.valentinum con base en las similitudes morfológicas y genéticas que presentan. C,- A.pertegasii presenta unos perfiles genéticos diferenciados de A.sempervirens, al cual se había subordinado en ocasiones. D,- La distinción entre A.pulverulentum y A.microphyllum es poco evidente y no aparece excesivamente apoyada por los marcadores RAPD. E,- Las relaciones taxonómicas de A.charidemi no han podido ser claramente establecidas mediante marcadores RAPD. 3,- El estudio integrado de la variación morfológica y molecular (marcadores ISSR, secuencias del espaciador clorplástico trnT-trnL) no ha permitido el establecimiento de discontinuidades consistentes entre las especies A.pulverulentum y A.microphyllum, por lo que se aboga por el reconocimiento de una sola especie en dicho complejo. Parte de las poblaciones del grupo A.pulverulentum, situadas en su extremo suroeste, presentan un haplotipo cloroplástico inusual en la sección Sempervirentia. Se establece la hipótesis de que ello es debido a la captura del ADN cloroplástico de una especie actualmente alopátrica, A.grossi, mediante fenómenos de hibridación introgresiva. 4,- El estudio filogenético de las secuencias nucleotídicas del espaciador cloroplástico trnT-trnL no ha permitido establer una hipótesis evolutiva resuelta para la mayor parte de las especies de Antirrhinum. Aún así, emerge la evidencia de que las series Valentina y Sempervirentia, así como buena parte de las diversas clasificaciones infragenéricas propuestas en Antirrhinum no son monofiléticas. Una probable explicación a estos resultados podría ser la existencia actual o pasada de fenómenos de hibridación e introgresión que han acaecido en el género.

Autor: GOMEZ DE NOVA PEDRO JOSE.
Año: 2002.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGIA .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El género Festuca L. pertenece a la familia de las gramíneas (Poaceae). Su importancia radica en el tipo de césped que forma y su carácter perenne, que hace que se pueda utilizar como forrajera, céspedes ornamentales o fijadoras de suelos. Su taxonomía es altamente compleja, dividiéndose el género en subgéneros, secciones e incluso grupos en donde los numerosos ecotipos, la variabilidad de algunos taxones, el parecido de otros y la descripción reciente de nuevos taxones hace que sea uno de los géneros más difíciles de clasificar. En este trabajo se ha logrado estudiar la variabilidad y relaciones existentes entre 93 poblaciones silvestres españolas de 2 subgéneros (Festuca y Schedonorus) y 6 secciones (Festuca, Aulaxyper, Eskia, Subbulbosae, Scariosae y Schedonorus). En el conjunto de las muestras estudiadas (32 taxones diferentes) cabe destacar la presencia de 12 endemismos ibéricos y 7 iberonorteafricanos, así como la presencia de una especie incluida en la Lista Roja de la Flora vascular española como especie vulnerable (F. clementei), y dos poblaciones que no pudieron asignarse a ningún taxón conocido, pero que se incluyeron dentro de la sección Festuca por sus características. Para el estudio de variabilidad se utilizaron los análisis de RAPDs y AFLPs, y para el esclarecimiento de la filogenia el análisis del intrón del trnL de cloroplasto. Además, se implantó el material en campo para conocer el comportamiento de éste sometido a la presión de cultivo y hacer una valoración de la variabilidad inter e intrapoblacional presentada y su posible aprovechamiento en programas de selección y mejora. En todos los casos se puso de manifiesto el alto grado de polimorfismo, discriminándose todas las poblaciones y mostrando en líneas generales concordancia entre los resultados obtenidos con los diferentes métodos. En algunos casos se encontraron correlaciones entre los índices de similitud y la distancia geográfica de poblaciones del mismo taxón. El control Lolium rigidum, mostró su mayor similitud con la sección Schedonorus en concordancia con otros autores. El análisis filogenético presentó dos grandes ramas evolutivas correspondientes a las denominadas festucas de "hoja ancha" (Schedonorus, Subbulbosae y Scariosae) y de "hoja fina" (Festuca, Aulaxyper y Eskia). En todos los análisis se observó la alta relación de las secciones Festuca y Aulaxyper que algunos autores consideraron como la misma sección (Ovinae Hack.). Las especies F. ampla y F. capillifolia de la sección Festuca aparecieron separadas de ésta, uniéndose la primera a la sección Aulaxyper y la segunda a Schedonorus en RAPDs o a Eskia en los filogenéticos, proponiendo la ubicación de F. ampla dentro de Aulaxyper y la exclusión de F. capillifolia de la sección Festuca. F. elegans ssp. merinoi debería excluirse de Eskia y formar parte de una sección ya propuesta por otros autores (Pseudatropis), mientras que este estudio no comparte la tendencia de incluir F. scariosa en Eskia, y sí como hasta ahora en la sección Scariosae. F. trichophylla y F. iberica mostraron un alto polimorfismo que motivó la formación de grupos no bien definidos por lo que no se pudo esclarecer las relaciones de estos taxones y se precisan de estudios posteriores. Al no mostrar agrupamiento las subespecies de F. rivas-martinezii ni las de F. rubra se sugiere, si estudios posteriores lo ratifican, considerarlas como especies diferentes. La aparición de dos niveles ploídicos diferentes en F. nigrescens ssp. nigrescens, uno de ellos sin describir en la bibliografía y claramente separados en el estudio, sugiere la posible existencia de un nuevo taxón dentro de este grupo. Los estudios de campo mostraron un alto grado de variabilidad que pone de manifiesto el alto potencial de este género para su utilización en procesos de selección y mejora para su utilización como forrajeras, ornamentales y en recuperación de suelos.

Autor: CARBALLO GONZÁLEZ-CORROTO JESÚS ÁNGEL.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: La dosis de 31,5 Gy de rayos X redujo a la mitad (C50) la longitud de las raíces de Allium cepa L., previamente creciendo en condiciones de equilibrio dinámico, en relación a las no irradiadas, 96 horas después de dicha irradiación. La inhibición del crecimiento de la raíz resultó ser función lineal del logaritmo de la dosis de irradiación previa, en el rango de dosis estudiadas (entre 2,5 y 40 Gy). El tamaño de los nucleoides obtenidos por desnaturalización alcalina a pH 12,2 de núcleos aislados incluidos en microgeles, se incrementó con la dosis de radiación previa. El DNA monocatenario detectado por FISH en dichos nucleoides, resultante de las roturas y de los sitios lábiles a alcalinidad en el genoma, formaba un anillo en el interior de la envoltura nuclear en ausencia de radiación y a dosis bajas de ésta. Dicho DNA se distribuía en focos dispersos por todo el nucleoide en las irradiadas. Dichos focos se resuelven a veces en pequeñas subunidades homogéneas que siguen líneas perpendiculares al perímetro del nucleoide. La citometría de flujo mostró que, en las primeras 24 h después de la irradiación, se produce una acumulación de células en G2, con contenido 4C, a la vez que disminuyen las mitosis en la población meristemática, como mostraba, el índice mitótico y la presencia de fosfoproteínas mitóticas, aisladas en inmunotransferencias y reconocidas por el anticuerpo MPM2. A tiempos mayores que la duración de un ciclo medio control (16 h), la bajada en células G2 acumuladas va seguida de una ola mitótica tardía. La parada de células en G2 inducida por rayos X es consecuencia de la activación de la ruta de chequeo de daño en el DNA que controla la entrada en mitosis. Así: A,- Dicha acumulación es transitoria. B,- La ola mitótica que sigue está formada por células con fracturas cromosómicas, demostrando que se ha producido el proceso conocido como "adaptación" sin reparación previa al bloqueo de ciclo que controla la transición G2/mitosis. C,- Finalmente, la cafeína (un agente que cancela las rutas de chequeo en las que participa la quinasa ATM) anticipa dicha "adaptación". Las mitosis con cromosomas rotos son el origen de las células con micronúcleos que aparecen en los meristemos después de irradiación. Por otra parte, la resolución de puentes cromosómicos en anafase, por estrangulamiento a cargo de la placa de citocinesis en crecimiento, asegura la inestabilidad genómica transmitida de forma clonal en los meristemos previamente irradiados. Así, la presencia de roturas del DNA en el G1 de los núcleos hijos inducirá la recombinación reparativa no homóloga, formándose cromosomas dicéntricos. La implantación de rutas de chequeo de daño en el DNA no tiene lugar hasta que la proliferación celular está plenamente establecida. Así, los picos de la primera ola mitótica que aparece después de la estimulación a proliferar de células G0 de los blastemas durmientes ocurren a tiempos semejantes en las raíces previamente irradiadas y en las no irradiadas. Por último, las células proliferantes de estos meristemos de plantas inician un programa de muerte (suicidio) en presencia de DNA no reparado, como mostró la citometría de flujo adaptada a la detección de extremos 3'OH del DNA (técnica TUNEL), la aparición de células con morfología apoptótica típica y la fragmentación del DNA en geles de agarosa. La inducción de dicho programa de muerte celular se realiza en G2 como alternativa a la entrada en mitosis por adaptación de ruta de chequeo. La opción del suicidio se ve favorecida frente a la adaptación a chequeo al aumentar la dosis de irradiación. La iniciación de muerte celular en respuesta a H202 sugiere un papel para las especies de oxígeno reactivas en la inducción de apoptosis. Finalmente, mientras la cafeína atenúa la selección de la vía apoptótica en estos meristemos en respuesta a daño inducido por radiaciones ionizantes, a la vez que favorece la adaptación sin reparación de las células mantenidas en G2 con DNA dañado.

Autor: MARTÍN PALOMEQUE RAQUEL.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA.

Resumen: El objetivo del presente trabajo ha sido el de profundizar en el estudio de la respuesta de defensa vegetal y, en concreto, en el conocimiento de los mecanismos de activación y control del proceso de muerte celular que acompaña a la inducción de una respuesta hipersensible de defensa. Para ello, hemos caracterizado la planta mutante designada dcd4 (del inglés, deregulated cell death) en la que aparecen, de forma espontánea, lesiones necróticas en la superficie foliar durante su desarrollo. Asimismo, hemos estudiado el efecto de la mutación dcd4 en la interacción de las plantas con diferentes tipos de patógenos, obteniendo que dicha mutación aumenta la resistencia de las plantas frente a patógenos biotrofos mientras que incrementa la susceptibilidad frente a patógenos de tipo necrotrofo. Mediante técnias de mapeo cromosomico, hemos localizado la mutación dcd4 en el cromosoma II de Arabidopsis. La mutación encontrada altera el codón de iniciación de la traducción de un gen que codifica una proteína rica en prolinas de localización extracelular. La proteína DCD4 alterada participa en el control del proceso de muerte celular y, probablemente, en procesos de señalización relacionados con la defensa vegetal.

Autor: DÍEZ NAVAJAS ANA M..
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UPV-EHU.

Resumen: En 1994 NEIKER inició en el País Vasco, junto con las Diputaciones Forales, un programa de selección en judía-grano a partir de una recolección de cultivares locales realizada previamente. Tras una fase de caracterización preliminar se llevó a cabo la selección, obteniendo los cultivares Tolosana, Alavesa y Malen. Durante este proceso se detectó un grave problema de enfermedades producidas por los virus del mosaico común y necrótico, y bacterias, sobretodo Pseudomonas syringae pv.phaseolicola, que afectan gravemente al cultivo y se transmiten por semilla. Diferentes técnicas de detección de estos patógenos se discuten en este trabajo, así como la introducción de genes de resistencia mediante un programa de mejora. Hasta conseguir a líneas definitivas mejoradas, se propone el saneamiento de las semillas previamente a la siembra de las mismas.

Autor: VILANOVA NAVARRO SANTIAGO.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS .
Centro de realización: E.T.S.I. AGRONOMOS.

Resumen: En términos económicos, el albaricoquero (Prunus Armeniaca L.) es una de las especies más importantes dentro de los frutales de hueso. Sin embargo, la aparición y expasión del "Plum Pox Viurus" (PPV) o Sharka amenaza con reducir la extensión de este cultivo en Europa. Para superar este factor limitante, se iniciaron varios programas de mejora en Francia, Grecia, Italia y España. En todos ellos se está introduciendo la resistencia a Sharka, mediante métodos de mejora tradicionales, a partir de fuentes de resistencia, que en la mayoría de los casos con variedades autoincompatibles. El objetivo final de estos programas de mejora es la obtención de nuevos cultivares autocompatibles, resistentes a Sharka y con buena caliadd agronómica y comercial para su utilización en las regiones Mediterráneas. Dentro de este objetivo, la detección de la resistencia a Sharka y la autocompatibilidad son el cuello de botella del proceso de selección. La medotología para determinar la resistencia a Sharka, descrita por primera vez por Audergon y Morvan (1990) y posteriormente mejorada por Martínez-Gómez y Dicenta (1999) y Moustafa et al. (2001), es un procedimiento muy largo. Por otra parte, la determinación de la autoincompatibilidad mediante la observación del crecimiento de los tubos polínicos en el estilo o los ensayos de identificación de las ribonucleasas estilares, son también métodos lentos y complejos. Recientemente, técnicas basadas en la clonación y caracterización molecular de los alelos S de almendro y cerezo han permitido la identificación de manera rápida y sencilla de los alelos S mediante PCR. La selección asistida por marcadores moleculares (MAS) para los caracteres resistencia a PPV y autoincompatibilidad incrementaría la eficiencia de los programas de mejora. Para llevar a cabo esta estrategia tanto los mapas genéticos como las librerías genómicas son herramientas muy útiles. Dentro del género Prunus, el albaricoquero es la especie más apropiada para el estudio de marcadores asociados a la resistencia a PPV ya que no existen fuentes de resistencia en melocotonero, la especie de Prunus mejor caracterizada genéticamente. Teniendo en cuenta el contexto descrito, en este trabajo se plantearon los siguientes objetivo; incorporar marcadores codominantes al mapa de "Goldrich" x "Valenciano", de manera que se puedan establecer homologías con otros mapas desarrollados en el género Prunus; construir un nuevo mapa genético de albaricoquero a partir de una población F2 segregante para los caracteres resistencia a Sharka y autoincompatibilidad; estudiar en las dos poblaciones la herencia de la resistencia a PPV y situar ambos caracteres en los mapas de ligamiento que se desarrollen y finalmente construir una librería BAC de albaricoquero, caracterizarla y aplicarla a la detección de genes de interés y al desarrollo de nuevos marcadores. En esta tesis se han incorporado al mapa de "Goldrich x Valenciano" 18 marcadores codominantes (4 RFLPs y 14 SSRs), previamente mapeados en otras especies de Prunnus, lo que ha confirmado la transportabilidad de este tipo de marcadores y ha permitido establecer homologías entre 7 grupos de ligamiento de este mapa y otros mapas de Prunus ya publicados. Se ha construido un nuevo mapa genético de albaricoquero con marcadores AFLP y SSR, basado en una población F2 procedente de la autofecundación del cultivar "Lito", que contiene 211 marcadores y dos caracteres de importancia agronómica: resistencia al virus de la Sharka y autoincompatibilidad. La distancia media entre marcadroes es de 3,84 cM y contiene 22 loci codominantes comunes a otros mapas de especie del género Prunus, lo que ha permitido establecer homologías entre los grupos de ligamiento de este mapa y cuatro mapas de Prunnus previamente publicados. El análisis de los resultados de segregación del carácter resistencia a PPV en las dos familias estudiadas "G x V" y "L x L" no permite descartar o aceptar de forma difinitiva ninguno de los modelos de herencia propuestos hasta el momento. Por esta razón, el carácter se ha incluido en el mapa basándonos en los dos fenotipos claramente distinguibles, resistente/susceptible. En ambos mapas el carácter se situó en el grupo de ligamiento G1. La segregación del carácter autoincompatibilidad en la familia "L x L", se determinó por primera vez, en albaricoquero, a partir de la amplificación por PCR de fragmentos correspondientes a alelos S. El locus se situó en el grupo G6 del mapa de "L x L", posición que coincide con la previamente descrita por otros autores en almendro y melocotonero. Se ha construido una librería BAC de albaricoquero, usando un procedimiento simplificado, que presenta una cobertura mejor que la conseguida en librerías desarrolladas en otras especies d ePrunus. Con estos resultados, existe una probabilidad teórica de más del 99% de poder aislar una secuencia de ADN de copia única. El rastreo de esta librería con 11 sondas RFLP procedentes de diferentes especies de Prunnus y con una sonda homóloga al gen de la S-RNasa permitió estimar una cobertura real de aproximadamente 7,5 veces el genoma haploide. Esta cobertura permite el paseo cromosómico y el desarrollo de "contigs" en cualquier región genómica. El rastreo de la genoteca con una sonda homóloga al gen de la S-Rnasa y el posterior análisis de los clones detectados, dio como resultado dos fragmentos positivos que contienen secuencias altamente homólogas a genes de S-RNAsa de otras especies de Prunus y podrían correspondera a los alelos S1 y S2 del cultivar "Goldrich". Por último, se han desarrollado 16 pares de cebadores SSR, de manera dirigida, en la región donde se encuentra mapeado el carácter resistencia a Sharka. Esto permitirá saturar esta región, facilitando así la búsqueda de un marcador que pueda ser usado para la selección asistida.

Autor: DOMINGOS JOSE PEDRO.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: CENTRO DE CONSERVACIÓN Y MEJORA DE LA AGRODIVERSIDAD VALENCIANA.

Resumen: El Centro de Conservación y Mejora de la Agrodiversidad (COMAV) de la Universidad Politécnica de Valencia alberga una de las colecciones más importantes de entradas del género Lycopersicon, incluyendo el tomate cultivado (Lycopersicon esculentum, L.esculentum var.cerasiforme) y sus especies silvestres relacionadas (L.cheesmanni, L.pimpinellifolium, L.hirsutum, L.pennellii, L.chmilewskii, L.parviflorum L.peruvianum y L.chilense). A pesar de ser el tomate una de las hortalizas de mayor importancia económica a nivel mundial, siguen existiendo ambigüedades en su taxonomía así como dudas sobre su domesticación. De hecho, se observan en muchas ocasiones formas intermedias entre el tomate cultivado y la variedad botánica cerasiforme, así como entre la forma cerasiforme y la especie L.pimpinellifolium. Igualmente se han detectado formas intermedias entre L.pimpinellifolium y la especie L.cheesmanii, endémica de las islas Galápagos. Estas especies constituyen el subgénero Eulycopersicon, intefértiles con el tomate cultivado. De ellas, las variedad botánica cerasifrome esta considerada como el ancestro del tomate y se ha comprobado la existencia de fenómenos de introgresión entre L.pimpinellifolium y el tomate. Las teorías sobre la domesticación del tomate no son únicas, opiniéndose las teorías de Jenkins (1948) y Rick (1958) frente a las más recientes de Rick y Fobes (1975) y Rick y Holle (1990). Para contribuir a la clarificación de estos aspectos, en la presente Tesis Doctoral se persiguen los siguientes objetivos: 1,- Estudio de la variabilidad morfológica y molecular de estas especies. 2,- Esclarecimiento de las relaciones filogenéticos entre las especies del subgénero Eulycopersicon. 3,- Establecimiento de estrategias de conservación de estas especies y en especial de Lycopersicon pimpinellifolium, para la que se han descrito diferencias importantes en el grado de alogamia. 4,- Inicio de la formación de una colección nuclear en la colección de entradas de L.pimpinellifolium del COMAV. Se han ensayado un total de 165 entradas del género Lycopersicon, perteneciendo 48 de ellas a Lycopersicon esculentun var.cerasiforme, 86 a L.pimpinellifolium y 31 a L.esculentum, en las campañas de otoño-invierno durante los años 2000-01 y 2001-02. Para la caracterización morfológica de las plantas se han seguido los descriptores de tomate publicados por el IPGRI. La caracterización molecular se realizó mediante marcadores AFLP. Los datos se han analizado mediante análisis multivariante, realizando Análisis de Componentes Principales y Análisis Cluster. En el análisis de datos cuantitativos se han calculado las distancias euclídeas y se ha empleado el método de agrupamiento UPGMA. La robustez y nivel de fiabilidad se ha medido mediante la técnica de remuestreo bootstrap. Se realizó un análisis de la Varianza (ANOVA) y posteriormente la prueba de comparación de medias de Newman-Keuls y un ANOVA factorial para determinar el efecto Entrada por Año. Se cálculo la similitud genética entre las diferentes entradas para cada combinación de cebadores, usando el coeificiente de Dice. Se estimó el nivel de polimorfismo y la diversidad genética según Nei (1973). El análisis de componentes principales efectuado con el conjutno de las entradas estudiadas ha permitido la adscripción de gran parte de ellas a las especies de Lycopersicon esculentum, L.pimpinellifolium y L.esculentum var.cerasiforme. Sin embargo, la separación no fue completa, sino que se observó una gradación continua entre ellas, probablemente como consecuencia de un proceso de especiación simpátrica no finalizado en el momento actual. La no identificación de marcadores moleculares específicos de especie apoyan esta hipótesis. La existencia de cruzamiento interespecíficos contribuiría al mantenimiento de esta situación, constituyendo L.esculentum, L.esculentum var.cerasiforme y L.pimpinellifolium formas extremas de este continuo. Se identificaron una serie de caracteres cualitativos propios de las formas más típicas de las especies en estudio. Así, el color antociánico del tallo, el tipo de hoja "pimpinellifolium", generalmente de menor tamaño, pinnada y con bordes enteros y el estilo muy proyectado fueron característicos de L.pimpinellofolium L. Esculentum se caracterizó fundamentalmente por caracteres relativos al fruto, como la variación en la forma y el color del fruto maduro y de la piel, formas irregulares de la sección transversal, de la cicatriz estilar y del ápice del fruto, todo ello asociado al proceso de domesticación sufrido por esta especie. La ausencia de los caracteres típicos de las dos especies descritas caracterizó a la var.cerasiforme. El número de flores por inflorescencia, el número de pétalos y la longitud, anchura y peso del fruto, no mostraron interacciones Entrada x Año. Estos caracteres, junto con los cualitativos comentados anteriormente, se consideran como los más discriminantes entre L.pimpinellifolium, L.esculentum var.cerasiforme y L.esculentum. El análisis cluster efectuado con el conjunto de caracteres morfológicos agrupa a las entradas de L.pimpinellofolium con las de var.cerasiforme, mientras que el realizado con datos moleculares agrupa L. Esculentum con var.cerasiforme, quedando L.pimpinellifolium separada de ambas. Esto apoya la hipótesis de que la var.cerasiforme es el ancestro a partir del cual se produjo la domesticación del tomate. El conjunto de entradas estudiadas de L.pimpinellifolium ha presentado elevada variabilidad para características vegetativas, de flor y de fruto, contribuyendo a demostrar que L.pimpinellifolium, es una especie muy variable, en contra de los establecido anteriormente. Otros estudios realizados con estas entradas han demostrado también su variabilidad para características de calidad y de resistencia a enfermedades, convirtiéndola en una colección sumamente útil para la mejora. En las entradas estudiadas en este trabajo se observa una gradación en cuanto a la exerción estigmática, asociada a órganos flores de mayor tamaño y mayor grado de alogamia, encontrándose mayor frecuencia de estilo muy proyectado en los Departamentos más septentrionales de Piura y Lambayeque, mientras que en Cajamarca y La Libertad, abundan las entradas con estilos no proyectados o incluso insertos. Las poblaciones procedentes de Piura y Lambayeque tienen una diversidad genética total mayor, probablemente como consecuencia del mayor grado de alogamia. Este hecho tiene improtantes implicaciones en las labores de muestreo y regeneración en los Bancos de Germoplasma. El conjunto de entradas de L.esculentum var.cerasiforme caracterizadas han mostrado una elevada variabilidad para caracteres morfológicos, tanto vegetativos como de fruto. Esta variabilidad ha resultado estar asociada al origen, siendo mucho más uniformes y con características propias de cerasiforme las procedentes México, mientras que las de Ecuador y otras procedencias son mucho más variables, no correspondiendo en ocasiones a la forma típica de esta variedad. Las entradas de L.esculentum estudiadas se agrupan según su origen, México o España, tanto según sus características morfológicas como molecularmente. En primer caso se debe probablemente a las diferentes presiones de selección ejercidas en ambos paises. En el segundo seria consecuencia del distanciamiento geográfico de ambos grupos de entradas hace más de 500 años. La sentradas procedentes de México pertenecen a tipos criollos, muy apareciadas por sus características de calidad, resistencia al agrietado y capacidad para cuajar a bajas temperaturas. Estas entradas serán de gran utilidad para su empleo en programas de mejora. La mayor diversidad genética total encontrada para las entradas de México, apoyaría la existencia de un cuello de botella debido al limitado número de individuos transportados desde México a España, donde se inició la difusión por Europa. Se han establecido tres grupos de entradas de L.pimpinellifolium, las procedentes de las Islas Galápagos, las colectadas en Cuzco y las del norte de Perú, con marcadas diferencias tanto morfológicas como moleculares. Todos ellos deberán estar representadas en la colección nuclear de esta especie del Banco de Germoplasma del COMAV. Mediante la realización del análisis cluster se ha determinado la existencia de duplicados en la colección, mediante su agrupamiento en los árboles con valores de bootstrap muy elevados. Esta información permitirá la eliminación de tales entradas para la formación de la colección nuclear. La mayor diversidad genética en las entradas procedentes de los Departamentos de Piura y Lambayeque frente a las de Cajamarca y La Libertad aconsejan una mayor representación de las primeras en la colección nuclear, a fin de asegurar que la mayor parte de esta diversidad genética quede recogida en la colección

Autor: FERRIOL MOLINA MARIA.
Año: 2002.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I. AGRONOMOS.

Resumen: El Banco de Germoplasma del Centro de Conservación y Mejora de la Agrodiversidad Valenciana (COMAV) posee una colección de germoplasma de Cucurbita spp., y de Lagenaria siceraria que incluye más de 1000 entradas de cultivares tradicionales, mantenidos por los agricultores durante siglos y que actualmente corren un grave riesgo de erosión genética. Estas variedades proceden fundamentalmente de España, aunque también existen representantes de América, África y otros países de Europa. Muchas de las entradas conservadas en la colección del COMAV se colectaron en estado de semilla, desconociéndose su identificación a nivel de especie. Los objetivos de la presente tesis doctoral incluyen la estructuración de la colección de calabaza mantenida en el COMAV, mediante la clasificación específica de las entradas y su relación con los datos de pasaporte existentes. Además, se plantea el estudio de la estructura de la variación extra e interespecífica de la colección, a partir de una caracterización morfológica y molecular de la misma. Para ello, se emplearán distintos tipos de marcadores moleculares que proporcionen informaciones complementarias y que permitan establecer relaciones genéticas entre los distintos cultivares. Estos análisis se emplearán para el inicio de una colección nuclear, seleccionando un subconjunto de entradas que incluyan la máxima diversidad genética con una redundancia mínima. La evolución morfológica de las semillas de todas las entradas, así como la caracterización de frutos y plantas de una gran parte de la colección, permitió la clasificación a nivel específico de los cultivares de calabaza mantenidos en el Banco de Germoplasma del COMAV. A partir de esta información se estructuró la colección en función de la especie y de los datos de pasaporte (lugar de colecta, tipo de uso, nombre local, etc.). La caracterización morfológica de 119 entradas de C.maxima, 69 de C.pepo y 47 de C.moschata indicó la existencia de una variabilidad en casi todos los caracteres evaluados, poniendo de relieve el papel de punte que jugó España en la diversificación y difusión de tipos nuevos de calabazas entre América y Europa. La mayoría de los cultivares pudieron clasificarse en tipos morfológicos de características homogéneas, aunque algunos de ellos no pudieron incluirse en ningún tipo establecido debido a sus características intermedias o peculiares. La caracterización molecular de esta subcolección se llevó a cabo empleando marcadores SRAPs, que amplifican preferentemente regiones codificantes del genoma, y marcadores RAPDs y AFLPs, que analizan la diversidad genética neutral. La distinta naturaleza de cada sistema de marcadores permitió obtener informaciones complementarias útiles para establecer la estructura de la variación existente en cada una de las especies consideradas. En C.maxima y C.moschata, las entradas se agruparon fundamentalmente en función del continente de origen. En el caso de las entradas españolas de C.moschata se observó incluso una separación entre los cultivares procedentes de las Islas Canarias y los de la península. Los resultados de C.maxima sugieren un efecto de "cuello de botella" en la introducción de esta especie de América a Europa. Las distintas entradas de esta especie se agruparon además en función del tipo de uso (consumo humano, forraje y ornamental), asociado al color de la carne de los frutos y relacionado con otros caracteres agronómicos de interés. En C.pepo, las entradas pertenecientes a la spp.pepo se separaron claramente de las pertenecientes a la ssp.ovifera. Dentro de cada subespecie, se observó una cierta agrupación por morfotipos. En la spp.ovifera, los cultivares se agruparon en función del color del fruto, carácter asociado al grado de mejora de las variedades consideradas. La información proporcionada tanto por la caracterización morfológica como por la molecular se está empleando para iniciar el establecimiento de una colección nuclear de calabaza. La selección de las entradas se realizará en función de criterios taxonómicos, datos de pasaporte (fundamentalmente el origen geográfico y el tipo de uso) y características morfológicas y moleculares. La colección nuclear establecida facilitará la optimización del mantenimiento y conservación de estos recursos fitogenéticos, así como su empleo por agricultores y mejoradores de todo el mundo.

Autor: NOGUERA DÍAZ FRANCISCO JAVIER.
Año: 2002.
Universidad: ALMERIA.
Centro de lectura: ESCUELA POLITÉCNICA SUPERIOR.
Centro de realización: ESUCELA POLITÉCNICA SUPERIOR.

Resumen: Los actuales programas de mejora genética de melón deben dar respuesta a un número cada vez mayor de requerimientos exigidos por parte de agricultores y consumidores, particularmente en caracteres de producción y calidad de fruto. Entre los caracteres que deben incorporar las nuevas variedades comerciales de melón se encuentra la monoicidad. Para conseguir este objetivo la mejora genética tiene a su alcance un conjunto de técnicas de genética molecular, complementarias a las técnicas clásicas, entre las que cabe destacar la selección asistida o facilitada por marcadores moleculares. En este trabajo se han valorado diferentes tipos de marcadores moleculares para su utilización en programas de mejora de melón, y se han identificado marcadores moleculares ligados al gen de esta especie que controla el carácter monoico/adromonoico. Así, de los tres tipos de marcadores moleculares analizados en melón, RAPDs, SSRs y AFLPs, son los AFLPS lo que presentan mayores ventajas para el análisis genético, toda vez que son los marcadores que detectan un mayor número de polimorfismos en el genoma de esta especie. Las poblaciones segregantes del tipo Charentais compuestas por líneas doble haploides se han mostrado como un material de especial utilidad para la búsqueda de marcadores moleculares ligados al carácter monoico/andromonoico de melón. Y por el contrario, la utilización de poblaciones segregantes generadas a partir de parentales filogenéticamente muy alejados no asegura la identificación de marcadores ligados al carácter analizado. La utilización conjunta de marcadores AFLPs y la estrategia BSA en estas poblaciones ha permitido identificar 5 marcadores moleculares en una región genómica de 47 cM adyacente al gen A/a. Los marcadores identificados no se encuentran distribuidos uniformemte a ambos lados del gen A/a, habiéndose demostrado su utilidad inmediata en programas de mejora genética asistida o facilitada por marcadores moleculares. A pesar de que los AFLPs son considerados marcadores moleculares de herencia dominante, dos de los marcadores AFLPs encontrados en la región del gen A/a mostraron un modo de herencia codominante. Asimismo destacar que los marcadores dCAPS constituyen una excelente alternativa para desarrollar marcadores codominantes, de fácil implantación en programas de mejora genética de melón. La utilización de la estrategia anchor-PCR con diferentes enzimas de restricción ha permitido conocer las regiones genómicas flanqueante al marcador M5 que se encuentra estrchamente ligado al carácter monoico/andromonoico en melón. De esta forma ha sido posible desarrollar nuevos marcadores específicos tanto del alelo dominante como del alelo recisivo del gen responsable del carácter monico/andromonoico en genotipos Charentais e Italiano. El análisis de este marcador en un conjunto de híbridos comerciales de melón indica que se trata de un marcador molecular muy útil para predecir el tipo sexual en cultivares de los tipos Charentais e Italiano. La utilidad de este marcador en otros tipos de varietales no ha podido ser establecida, si bien la presencia de una secuencia tipo SSR en una de las regiones flanqueantes al marcador indican un enorme potencial para la detección de polimorfismo en la región genómica del gen A/a.

Autor: PÉREZ PÉREZ JOSÉ MANUEL.
Año: 2002.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNÁNDEZ.

Resumen: Se sabe relativamente poco acerca de la naturaleza y las funciones de los genes responsables de la dorsoventralidad de las hojas de las plantas, una característica que las distingue de otros órganos vegetales, cuya simetría es radial. En esta tesis se han caracterizado 7 estirpes mutantes de Arabidopsis tahliana, cuyas hojas vegetativas están enrolladas hacia el envés, a diferencia de las de sus ancestros silvestres, que son aplanadas. Hemos denominado ultracurvata (ucu) a estos mutantes, a los que hemos considerado candidatos a ser portadores de mutaciones en genes relacionados con la dorsoventralidad foliar. Un análisis de complementación de los mutantes ocu nos ha permitido asignarlos a dos genes, UCU1 y UCU2. Al grupo de complementación UCU1 pertenecen tres alelos inducidos mediante metanosulfonato de etilo, dos de ellos semidominantes e indistinguibles en sus efectos fenotípicos (ucu1-1 y ucu1-2), y el tercero recesivo y más débil (ucu1-3). Los alelos de UCU2 son recesivos y fueron inducidos mediante bombardeo con neutrones rápidos (ucu2-1), rayos X (ucu2-2), rayos X (ucu2-2) y mutagénesis insercional con el ADN-T de Agrobacterium tumefaciens (ucu2-3 y ucu2-4). Los mutagenes ucu1-1, ucu1-2, ucu1-3 y ucu2-3 fueron aislados en el laboratorio de J.L.Micol, mientras que ucu2-2 y ucu2-4 formaban parte de colecciones de dominio público obtenidas por otros investigadores. Hemos estudiado la morfolgoía de los mutantes ucu. Los alelos semidominantes ucu1-1 y ucu1-2 y todos los ucu2 causan enanismo, dado que reducen el crecimiento de todos los órganos a lo largo de su eje proximodistal. Este rasgo se manifiesta claramente en las hojas de los mutantes, que son similares en anchura a las silvestres pero apreciablemente más cortas. Las células de los mutantes ucu1 muestran una expansión longitudinal insuficiente. Todos los órganos de morfología radial de los mutantes ucu2 presentan además rotación helicoidal. La reducción del tamaño de las células de los mutante ucu1 con respecto a las silvestres es mucho mayor en la epidermis abaxial que en otros tejidos foliares, lo que explica la forma circinada de sus hojas. También hemos analizado algunos aspectos de la fisiología de estos mutantes, comprobando que su gravitropismo no está alterado. Los mutantes ucu1 manifiestan fotomorfogénesis constitutiva, generando hojas tras su germinación y cultivo en la oscuridad, a diferencia de los ucu2, que se comportan en este aspecto como sus ancestros silvestres. Hemos analizado los efectos de la administración de citoquininas, giberelinas, brasinosteroides, auxinas y algunos inhibidores del transporte de estas últimas sobre el crecimiento de los mutantes ucu. La adición de estas sustancias al medio de cultivo no restauró el fenotipo silvestre en ningún caso. Los homocigotos ucu1-1/ucu1-1 y ucu1-2/ucu1-2 son muy insensibles a la inhibición del crecimiento radicular causada por el 24-epibrasinólido, un brasinosteroide, e hipersensibles al 2,4-D, una auxina sintética. Los mutantes ucu2 presentan una respuesta de hipersensibilidad a la adición al medio de cultivo de los inhbidores del transporte de auxinas. Hemos identificado los genes UCU1 y UCU2 siguiendo un abordaje posicional. Su cartografía de baja resolución se llevó a cabo mediante análisis del ligamiento a microsatélites polimórficos y la de alta resolución tras desarrollar nuevos marcadores moleculares a fin de estrechar las regiones candidatas y finalmente secuenciar varios genes de estas últimas. El producto del gen UCU1 pertence a la subfamilia de las quinasas de serina y treonina representada por SHAGGY en Drosophila melanogaster y por GSK3 en los vertebrados, que participan en la ruta de transducción de señales de Wingless y Wnt, respectivamente. Las mutaciones ucu1 son cambios de base que causan la sustitución de aminoácidos muy conservados entre los miembros de la subfamilia y alteran un dominio proteico cuya función se deconoce. El producto del gen UCU2 es un peptidil prolil cis/trans isomerasa, similar alas inmunofilinas de tipo FKBP (FK506-binding protein), cuyos homológos en los animales participan en la modificación postraduccional de los receptores de los esteroides, entre otros procesos. Las mutaciones ucu2-1 y ucu2-2 son deleciones que eliminan a UCU2 y a varios genes vecinos. Por su parte, ucu2-3 es una reorganización que altera un segmento de 40 pb del último exón del gen y trunca su producto proteico. No hemos determinado la naturaleza molceular de ucu2-4, una mutación presuntamente insercinal. Los rasgos mutantes de los homocigotos para los alelos semidominantes ucu1 se manifiestan también en las plantas transgéncias ucu1/ucu1 portadoras de un transgén que contiene el alelo silvestre UCU1. En consecuencia, las mutaciones ucu1 son antimorfas o neomorfas. La naturaleza estructural de las mutaciones ucu2, dos de las cuales son deleciones, indica su carácter nulo. Con el propósito de establecer la eventual existencia de intercciones genéticas, hemos cruzado los mutante ucu entre sí y con otros previamente descritos, que fueron elegidos por sus alteraciones en la ontogenia foliar o en la síntesis o la señalización de fitohormonas. Los dobles mutantes ucu1 ucu2 muestran un fenotipo aditivo y son semejantes a los mutantes bri1, en los que no se transduce la señal hormonal de los brasinosteroides. Casi todos los demás dobles mutantes manifestaron aditividad fenotípica. Se constató sinergia en los dobles mutantes en los que participan mutaciones en genes relacionados con la señalización de las auxinas. Considerados en conjunto, nuestros resultados sugieren que los genes UCU1 y UCU2 están implicados en la señalización de las auxinas y los brasinosteroides. Aunque la actividad de estos dos genes es necesaria para el crecimiento de Arabidopsis thaliana, la de UCU1 se requiere en mayor medida en la epidermis abaxial de la hoja que en otros histotipos de este órgano.

Autor: GUMA IRMA ROSANA.
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: Avena barbata es una gramínea predominantemente autógama, originaria del Mediterráneo y naturalizada en distintas regiones en América. En poblaciones españolas y californianas de A. Barbata se han descrito diferentes ecotipos, caracterizados por combinaciones alélicas específicas para loci isoenzimáticos, marcadores morfológicos y variantes delADN ribosomal. Con el objetivo de analizar la variabilidad genética intra e interpoblacional y la estructura genética multilocus en 52 poblaciones de A. Barbata procedentes de diferentes regiones ecogeográficas de la Argentina, se utilizaron marcadores isoenzimáticos y de ADN. Dentro de éstos últimos se incluyeron el análisis de RAPD, ISSR y de algunas regiones del genoma mitocondrial y del cloroplasto (ADNmt y ADNcp). La variabilidad hallada en las poblaciones a partir del análisis de 14 loci isoenzimáticos se debe a la coexistencia de diferentes genotipos homocigotos que no se combinan aleatoriamente sino que muestran desequilibrios gaméticos entre los distintos loci, dando lugar a la formación de complejos o asociaciones multilocus. El patrón de distribución de la variación está relacionado con factores ambientales, especialmente la precipitación y la temperatura, al igual que ocurre en las poblaciones españolas y californianas. Los complejos multilocus comunes aparecen asociados con los mismos parámetros ambientales en las diferentes regiones, lo que apoyaría la adaptación de dichos genotipos a ambientes concretos. Todos los alelos y los genotipos hallados para los loci isoenzimáticos analizados en las poblaciones argentinas de A. Barbata se encuentran descritos para las poblaciones de España, lo que sustenta su origen español. La reducción en la variabilidad observada en las poblaciones argentinas, al considerar los loci individualmente, estaría determinada posiblemente por el efecto fundador que ocurre en los procesos de colonización. Sin embargo, la estructura genética multilocus indica que se han producido procesos importantes de reorganización alélica. El polimorfismo para marcadores RAPD e ISSR fue más elevado que el encontrado a apartir de marcadores isoenzimáticos, permitiendo detectar la presencia de variabilidad genética incluso en poblaciones monomórficas para isoenzimas. Los RAPD y los ISSr proporcionan el mismo tipo de información, tanto en relación al polimorfismo existente en las poblaciones como a las relaciones genéticas entre las mismas. Por el contrario, los resultados obtenidos a partir de los marcadores isoenzimáticos sólo están débilmente correlacionados con los obtenidos para marcadores de ADN, lo que podría deberse a su implicación en los procesos de adaptación. Los maracadores de ADNcp y ADNmt no presentaron variación. La distribución de la variabilidad genética depende en gran medida del tipo de marcador utilizando. Así, mientras que para loci isoenzimáticos la variabilidad interpoblacional es el factor más importante para marcadores de ADN lo es la intrapoblacional.

Autor: ROIG MONTANER M. CRISTINA.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: IBMCP.

Resumen: El objetivo de esta tesis consiste en obtener plantas transgenicas de melon con tres genes relacionados con el estrés salino y el estrés hídrico. Estos genes son: i)HAL1 aislado en Saccharomyces cerevisiae por el grupo del Dr. Ramon Serrano IBMCP, ii) TAS14 aislado en plantas de tomate sometidas a estrés hidrico por el grupo del Dr. Jose Antonio Pintor Toro (CSIC-Sevilla), iii) TSW12, aislado en plantas de tomate sometidas a estrés salino por el mismo grupo. Ademas, se ha realizado la evaluacion de la posible tolerancia a estos tipos de estrés abiotico en la descendencia de estas plantas. La evaluacion de la tolerancia in vitro se realiza mediante la adición de distintas concentraciones de NaC1 o-manitol al medio de cultivo. Se discute el posible valor de estos genes en relacion con la introduccion en plantas horticolas.

Autor: RUIZ LAFORA CARLOS.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS-UNIVERSITAT DE VALENCIA.

Resumen: Los cítricos son las especies frutales mas importantes a escala mundial, siendo actualmente España el cuarto país productor. Esto contrasta con la escasez de estudios genéticos para su mejora, lo cual es debido a que presentan varios problemas, entre ellos su compleja biologia reproductiva. En los programas de mejora de cítricos y en los viveros es muy importante distinguir entre individuos zigóticos y nucelares para poder eliminar los genotivpos no deseados. Normalmente, los isoenzimas se han empleado para determinar el origen genetico de las plantas jovenes. En el primer trabajo se propone el uso de marcadores microsatélites como una metodologia alternativa y los comparamos con los isoenzimaticos parala distincion de plantulas zigoticas. Con objeto de facilitar el analisis de microsatelites se desarrolló tambien un protocolo rapido de extracción de ADN y un metodo de alta resolución yfacil revelado sin utilizar fluorocromos ni radiosótopos. Una vez comprobada la gran utilidad que tienen los microsatélites en la mejora genética por su nivel de polimorfismo, rapidez, sencillez y gran repetibilidad que posee, nos planteamos la obtención de nuevos microsatelites de cítricos. En total se obtuvieron 33 nuevos marcadores se emplearon para la realización de mapas genéticos en tres familias segregantes. Se construyó un mapa para cada uno de los parentales de cada familia, que poseen entre 48 y 120 marcadores, dependiendo de la terozigosis de cada parental. El análisis comparativo entre genomas fue posible gracias al uso de los marcadores. SSR principalmente, observandoles varias reorganizaciones entre las distintas especies, asi como entre las dos variedades de Poncirus trifoliata. Para la realización de los mapas de ligamiento tambien se usaron otros tipos de marcadores como los IRAPs, que aunque son menos informativos porque no son codominantes, producen gran numero de polimorfismos muy repetitivos con pocas combinaciones de cebadores y su distribucion en el genoma es, en general, aleatoria. Una vez obtenidos los nuevos marcadores SSRs, e IRAPs en cítricos, y sabiendo su localización genímica, nos propusimos utilizarlos para investigar sobre el origen de la variación molecular en el grupo de los mandarinos clementinos, debido a su importancia económica y por tratarse de un reto, ya que es una especie que se propaga vegetativa, por lo que la variabilidad genética es muy limitada. Se emplearon distintos tipos de marcadores con objeto de comparar su nivel de polimorfismo en una colección de 24 variedades. No se observó nigun polimorfismo al emplear SSR, por lo que la recombinación somatica no debe ser una fuente importante de variabilidad en esta especie. Cuando se emplearon ISSRs, RAPDs, y AFLPs, solo un 2,4% de las combinaciones de cebadores produjeron polmorfismos, en comparación con los generados al emplear IRAPs (14,6%). Además, el diagrama evolutivo basado en estos últimos polimorfismo se ajusta bastante bien al origen conocido de algunas variedades.