GENETICA VEGETAL, 3

Autor: CAMINERO SALDAÑA CONSTANTINO.
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLÓGICAS.

Resumen: diversos motivos apuntan al guisante proteaginoso como un buen candidato para ser incluido en las rotaciones de los secanos en regiones que, como la castellano-leonesa, tienen pocas alternativas al cultivo de cereal. Sin embargo, los muchos años de abandono que sufrió este cultivo se han traducido enlos escasos rendimientos que de él se obtienen en nuestra región: apenas una tercera parte de los obtenido con el cereal. En definitiva, parece necesario comprobar si el guisante proteaginoso puede ser un cultivo rentable, explorar acerca de si el adelanto de la tradiconal fecha de siembra primaveral a otras más temprana puede ser una buena estrategia para conseguirlo y se deberá definir el ideotipo para un plan de mejora genética de guisante proteaginoso adaptado a la siembra invernal en las condiciones de los secanos de Castilla y León. Se han evaluado 16 genotipos de guisante en siembras otoñales, invernales y primaverales, durante tres campañas de cultivo (1997/98, 98/99 y 99/00), en dos localidades muy diferentes, así cómo en ensayos en cámara de ambiente controlado. La analítica estadística considerada ha utilizado diversas descomposiciones del modelo de análisis de varianza, la regresión conjunta, el análisis AMMI, algunos métodos no pramétricos y técnicas híbridas entre las anteriores. En todas las campañas, en las dos localidades se detectaron los máximos de rendimiento en condiciones de adelanto de fecha de siembra. Dichos máximos han resultado competitivos cuando se comparan con los rendimientos estimados de las mejores variedades de cebada. En siembra primaveral no se ha detectado esa posible competitividad. Sin embargo, ninguna de las variedades habitualmente sembradas en Castilla y León (Azur, Rafael, Esla, Solara y Balelt) ha demostrado ser la más competitiva en los ambientes seleccionados, con lo que se hace evidente que es necesario un cambio varietal en el cultivo de guisante de la región. La información aportada por la evaluación de distitnos caracteres ha permitido la detección, para el carácter rendimiento, de altos coeficientes de determinación parcial de la interacción "genotipo x adelanto de la fecha de siembra", justificando la definición de covariables genotípicas que pueden influir en la definición del ideotipo buscado, que ha quedado cómo sigue: deberá presentar una alta capacidad de ramificación durante los primeros estados del crecimiento inicial y durante los rigores invernales, una fenolopía del ciclo reproductivo de carácter semitardío, con valores medios o altos para los caracteres altura de planta, número de nudos totales y número de nudos a la primera vaina, y deberán presentar un alto porcentaje de supervivencia en pruebas de -9ºC en cámara de ambiente controlado. No se aconseja que presente tamaño de semilla grande y podrá ser, indistintamente, de morfología de hoja semiafila o convencional.

Autor: ALONSO GÓMEZ MERCEDES.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.

Resumen: El trabajo se ha centrado en el género Pelargonium y en especial en el gerario zonal (Pelargonium x hortorum Bailey) debido al interés de esta planta como ornamental y a la disminución de la diversidad genética de esta especie debido al ataque masivo que está sufriendo por el taladro del geranio (Cacyreus marshalii Butler) en toda la Península y Baleares. La pérdida de los explantes iniciales debido a la oxidación fenólica se ha reducido lavando el material vegetal con una solución antioxidante después de su esterilización y antes de su introducción in vitro, se ha añadido al medio de cultivo un producto antioxidante (L-cysteina) y se han cultivado los explantes en la oscuridad durante la primera semana en las cámaras de cultivo. También se ha obtenido regeneración de plantas mediante embriogénesis somática utilizando como explantes raíces, cotiledones e hipocotilos de semillas germinadas in vitro. Los reguladores de crecimiento utilizados para la regeneración a partir de estos explantes y la forma de regeneración ha producido variaciones genéticas, no siempre deseables, pero que nos ha permitido desarrollar nuevas variedades debido al cambio de color de la flor y a una duplicación cromosómica. Se han obtenido plantas a partir de yemas laterales, hojas y pecicolos de plantas procedentes del invernadero y se ha puesto a punto la multiplicación a partir de explantes de plantas establecidas in vitro a partir de peciolos, hojas, yemas laterales y raíces. Se han estudiado 46 medios de regeneración para las plantas procedentes de invernadero. Los medios de cultivo consistieron en medio base LS con una combinación de 0; 0,1; 1 y 10 mg/L de las auxinas AIA con las citoquininas BAP y KIN. El mayor número de plántulas se obtuvo con una combinación de 10 mg/L de BAP y 1mg/L de ANA. Para la determinación de los medios de cultivo de los explantes procedentes de plantas cultivadas in vitro y basándonos en los resultados anteriores se utilizaron combinaciones de 0; 0,1; 1 y 10 mg/L de BAP y ANA con las sales de cultivo LS y B5 (Gamborg et al., 1968). Los mejores resultados se obtuvieron con el uso de sales LS para todos los explantes. Para la regeneración a partir de hojas el medio más adecuado para nuestras condiciones de cultivo contiene 1mg/L de BAP y 10mg/L de ANA y en el caso de yemas laterales y raíces el medio con 10mg/L de BAP y 1mg/L de ANA. Las plantas regeneradas mediante las diferentes técnicas se enraizan en medio LS sin reguladores de crecimiento. Las raíces producidas en este medio de cultivo permite una mejor aclimatación de los explantes a condiciones externas. La aclimatación se realiza en un invernadero mediante un sistema "fog-system" con una humedad del 70 al 90%. La mejor tasa de regeneración se ha obtenido a partir de yemas laterales y sobre todo a partir de raíces por lo que hemos seleccionado estos explantes para los experimentos transformación genética. Los ensayos de sensibilidad a antibióticos determinan que las variedades ensayadas son poco sensibles a kanamicina incluso a concentraciones de 400 mg/L y muy sensibles a higromicina. Los plásmidos construidos contienen un gen marcador para GUS o para GFP, un gen Cry de resistencia a la lepidópteros y en caso de incluir el gen de selección en planta. El gen de resistencia a higromicina. Las plantas transformantes obtenidas contienen el transgen, confirmándose tanto por ensayo histoquímico como por PCR.

Autor: MIRANDA FONTAÍÑA M. EUGENIA .
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTADE DE BIOLOXÍA.

Resumen: Es este estudio se evalúa la influencia de factores nutritivos, genéticos y ambientales en la multiplicación clonal in vitro y en el posterior comportamiento ex vitro, de material adulto de 35 clones de castaño (Castanea crenata x C.sativa, Castanea mollissima x C.sativa) seleccionados previamente por su comportamiento en plantaciones. El tipo de material más adecuado para el establecimiento in vitro a partir de brotes anuales y basales de cepas con más de 30 años, situadas en vivero, con segmentos de tallos con una yema axilar, procedentes de brotes cuya longitud supere los 50 cm., de consistencia semileñosa, con hojas completamente expandidas y yemas axilares con cierto grado de desarrollo. El momento del año adecuado para recoger brotes con estas características comprende desde mediados de mayo a principios de julio. Este material alcanza el primer subcultivo con mayor rapidez y necesita un menor número de recultivos. En la fase de multiplicación in vitro cada uno de los 35 clones es propagado en seis medios de cultivo diferentes. Se aportan datos de las tasas de multiplicación, desarrollo de necrosis apical y de clorosis para todos los clones. El genotipo es el factor que más influye en la manifestación e caracteres relacionados con las tasas de multiplicación, estos caracteres presentan valores de heredabilidades clonales superiores a 0,9. El medio de cultivo es el factor que explica una mayor proporción de la varianza para las variables desarrollo de la necrosis apical y clorosis, en esta última características también adquiere importancia la interacción clon-medio de cultivo. Se obtiene una variabilidad clonal importante, así para clones híbridos los coeficientes de multiplicación varían entre 1,96 y 8,45 dependiendo del clon. Los clones de Castaneda sativa presentan tasas de multiplicación in vitro medias o bajas respecto a los clones híbridos. Las tasas de multiplicación están muy influenciadas por el tipo de explanto, siendo superiores en explantos de la zona basal, y también están influenciadas por el sistema de cultivo, mejorando los rendimientos cuando se emplea el cultivo en doble fase. Se propone una escala para estudiar y describir el color y la presencia de clorosis en los cultivos. En la etapa de elongación in vitro se obtiene que el medio de cultivo empleado en la fase de multiplicación influye en la calidad de los brotes producidos durante la elongación. El efecto clonal vuelve a tomar importancia en esta etapa y condiciona los rendimientos. En la fase de enraizamiento se definen los tratamientos auxínicos, fungicidas, las condiciones y el ambiente para realizar el proceso de enraizamiento en condiciones ex vitro, en cámara de crecimiento. El tipo de sustrato va a influir en el porcentaje de microestaquillas enraizadas, el número de raíces y la presencia de necrois en la base de la microestaquilla. Se obtienen excelentes resultados con sustratos esterilizados y formados por perlita y corteza de pino. La viabilidad clonal vuelve a ser un factor muy importante, así los porcentajes de enraizamiento varían entre un 46 y un 100%, mientras que el número medio de raíces oscila entre 3 y 21 dependiendo del clon. Los valores de repetitividades clonales son muy elevados para las variables porcentajes de supervivencia y de enraizamiento y número medio de raíces. En la etapa de aclimatación se describen las instalaciones y las condiciones ambientales necesarias para realizar esta fase con éxito. El material vegetal procedente de las distintas etapas de la micropropagación presenta diferencias significativas en tasas de transpiración y en la resistencia estomática a la difusión de vapor de agua. En la fase de comportamiento en vivero y plantación, se aportan resultados de calidad de planta al finalizar el desarrollo en vivero. Se compara en plantación el material micropropagado con plantas propagadas por acodo bajo. Las plantas clonadas in vitro presentan su supervivencia superior al 90% y, a pesar del menor tamaño de partida respecto a las plantas procedentes de acodo, alcanzan durante los primeros años crecimientos anuales similares y superiores a 50 cm. El material micropropagado presenta diferencias clonales significativas en supervivencia, crecimiento en altura, tipo de fuste y en la formación de fruto. La formación de fruto es un carácter muy influenciado por la variabilidad clonal y no se han obtenido diferencias significativas entre plantas procedentes de las dos técnicas de propagación vegetativa comparadas, lo que indica que, independientemente de que el cultivo in vitro sea una técnica considerada "de rejuvenecimiento", la formación de castaña es un carácter dependiente del genotipo y no se aprecia un posible retraso en la fructificación en plantas de los clones micropropados en este estudio. Finalmente se evalúa el efecto que tienen la falta de normalidad y de homogeneidad de varianza, en datos de variables de multiplicación in vitro sobre los valores de F y los niveles de significación procedentes de los análisis de varianza y sobre las repetitividades clonales. Se cuestiona el uso de transformaciones y de valores medios cuando los datos originales no cumplen las condiciones de normalidad y homoescedasticidad.

Autor: CHICO FERNÁNDEZ JOSÉ MANUEL.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: INGEBI (CONICET-UBA, ARGENTINA).

Resumen: El estudio abarca un enfoque bioquímico y molecular. En el estudio bioquímico se identificó por primera vez una actividad de quinasa de proteínas dependiente de calcio (CDPK) en extractos obtenidos a partir de hojas de tomate. La actividad de la proteína es dependiente de concentraciones micromolares de calcio. Se inhibe con EGTA y en presencia de calcio con los inhibidores estaurosporina, cloropromacina y W7. La actividad fue detectada en las fracciones solubles y particuladas de extractos crudos. Mediante ensayos de Western blot se identificó una CDPK de 58 kDa en ambas fracciones. Por otro lado la proteína parcialmente purificada de los extractos solubles tiene la capacidad de autofosforilarse. En este estudio molecular se hizo el rastreo de una biblioteca de ADNc de células de tomate que habían sido tratadas con elicitores de Cladosporium fulvum. Se obtuvo un clon positivo al que se denominó LeCDPK1, por ser la primera isoforma encontrada en esta especie. Esta isoforma presenta todos los dominios característicos de la familia las CDPKs, tiene un peso molecular estimado de 58 kDa y en su dominio característico de la familia las CDPKs, tiene un peso molecular estimado de 58 kDa y en su dominio amino terminal se puede observar una secuencia consenso de miristoilación y palmitoilación respectivamente. Utilizando un sistema de transcripción y traducción in vitro se obtuvo la proteína recombinante correspondiente que presentó propiedades bioquímicas muy similares a las de la proteína endógena. Estudios de Sothern blot mostraron que el gen es de copia única o de muy bajo número de copias y que probablemente existen muy pocas isoformas relacionadas con la identificada. El ARNm de LeCDPK1 se expresa en raíces, tallos, hojas y flores de plantas de tomate. Hojas de tomate cortadas y expuestas a diferentes señales de defensa o a una suspensión conidial de Colletotrichum cocodes presentan una inducción del mensajero de LeCDPK1. Asimismo la luz UV induce la expresión del transcrito en plantas mutantes def1. Plantas de tomate dañadas muestran una inducción temporal del ARNm de LeCDPK1. Esta inducción se produce a escala local, en el lugar de daño, como a escala sistémica, en hojas no dañadas. El aumento del mensajero se correlaciona con un aumento en la síntesis de CDPK/s. A su vez estos incrementos se correlacionan con un aumento de actividad de CDPK. Se establece la hipótesis de que la CDPK soluble puede translocarse a la membrana en respuesta al daño o previamente a éste y que las proteínas de ambas fracciones correspondan con LeCDPK1. Esta hipótesis está apoyada por los resultados expuestos en la tesis. Todos ellos indican la participación de esta isoforma en respuesta de defensa en plantas de tomate.

Autor: FERNÁNDEZ ZAPATA JUAN CARLOS.
Año: 2001.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESCUELA POLITÉCNICA SUPERIOR DE ORIHUELA.

Resumen: La creación de un banco de Germoplasma de Punica granatum en la E.P.S., de Orihuela en el año 1992 por el Dr. Melgarjo permite el estudio sistemático del material autóctono de la zona. Este trabajo tipifica a nivel morfológico, bioquímico y agrofisiológico los clones denominados: ME3-1 ME-14 ME-15 BO1 PTO8 MO5 El estudio de estos clones proporciona unos resultados que mediante la confección de fichas varietales permiten la caracterización buscada. Se presentan, asimismo, "matrices de integración" que ponen de manifiesto la posición relativa con respecto a cada parámetro de los distintos clones estudiados.

Autor: MUÑOZ MARTÍN M. ÁNGELES.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIDAD DE FISIOLOGÍA VEGETAL.

Resumen: Los Geminivirus MSV (virus del estriado del maíz) y WDV (virus del enanismo del trigo), pertenecientes al género Mastrevirus, son unos virus vegetales que infectan monocotiledóneas cuyo material genético consiste en una molécula de DNA de cadena sencilla circular de aproximadamente 2.7 kb. Replican y transcriben su genoma vía un intermediario de cadena doble. La transcripción ocurre de manera bidireccional a partir de una región intergénica que no codifica ninguna proteína, produciendo solo 4 proteínas. Hacia la derecha o en sentido del virión (o V) las proteínas de movimiento y de la cápside (V1 y V2 respectivamente), y hacia la izquierda, o en el sentido complementario las proteínas no estructurales C1 o RepA y C1C2 o Rep, ambas por procesamiento diferencial del mismo tránscrito. Al codificar tan pocas proteínas necesitan de la maquinaria celular tanto para replicar como para transcribir su genoma, en combinación con las proteínas no estructurales. La proteína Rep es necesaria para el inicio de la replicación por el mecanismo del circulo rodante, mientras que RepA de WDV parece estar implicada en la activación de la transcripción en sentido del virión, aunque durante mucho tiempo se asignó este papel a Rep y no esta claro si ésta también contribuye en la función activadora. Ambas proteínas son modulares pudiendo ejercer varias funciones y se ha comprobado que tanto Rep como RepA de WDV y RepA de MSV interaccionan, mediante un motivo conservado, con la proteína celular de Reinoblastoma (RB), proteína clave en la progresión de ciclo celular de fase G1 a S en mamíferos mediante la interacción con el factor transcripcional E2F, pudiendo interferir con la regulación del ciclo celular de plantas. Nosotros nos hemos interesado en el estudio de la transcripción en sentido V de estos dos virus, mediante experimentos de expresión transitoria en hojas de maíz y estable en plantas de tabaco y en el papel que las proteínas no estructurales Rep y RepA puedan tener en la expresión, tanto para saber más acerca de su ciclo de infección viral como para usarlos como herramientas del estudio de la regulación de la transcripción de plantas y para su posible uso en biotecnología. Los experimentos de expresión transitoria nos han permitido caracterizar parcialmente las proteínas vegetales responsables de la actividad del promotor en sentido V de MSV en ausencia de proteínas virales y comprobar que RepA de WDV por si sola activa la expresión de los promotores en sentido V de WDV y el heterólogo de MSV, mientras que Rep reprime la expresión de todos los promotores virales y vegetales testados. Las activación del promotor heterólogo de MSV está mediada por el dominio de interacción con RB de RepA, mientras que el de WDV no, a pesar de que el promotor de WDV posee dos sitios muy parecidos al sitio consenso de unión del factor transcripcional E2F, y uno de ellos une de manera específica proteínas de plantas y es capaz de conferir a un promotor mínimo -46 35S activación mediada por RepA con el dominio de interacción RB intacto. Los estudios de transformación estable han permitido iniciar un proyecto de uso de estos promotores en biotecnología como promotores inducibles por nemátodos. Los resultados de este trabajo han permitido la aprobación de una patente internacional y la publicación de un artículo que se encuentra en prensa y otro en tramites para su publicación, así como de numerosas comunicaciones a congresos nacionales e internacionales.

Autor: W.F. YAISH MAHMOUD.
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Las secuencias de ADN de tipo NBS de lenteja que se han aislado y analizado (32 secuencias) muestran similitud con los mismos tipos de secuencias de otras especies vegetales especialmente de leguminosas. Las secuencias que codifican para los NBS en lenteja tienen la misma estructura que los genes descritos para otras plantas y tienen todos los motivos conservados que presenta este tipo de genes de resistencia: kinasa-1 (P-loop), kinasa-2a, kinasa-3 y GLPL. Además, muestran otros motivos de función desconocida que aparecen en los genes de resistencia. El estudio filogenético de estas secuencias muestra que los NBS de la lenteja pertenecen a dos grupos principales y se agrupan con la clase TIR de genes de resistencia. La secuencia de ADN en las regiones que flanquean un clon de NBS (3C1) muestra la presencia del dominio TIR en la región N-terminal de esta proteína y seis motivos LRR en el extremo C-terminal. El dominio TIR presenta un alto porcentaje de similitud con los mismos dominios de otros genes de resistencia tanto a nivel de secuencia aminoácidos como en su perfil de hidrofobicidad. Se ha caracterizado la región reguladora 5' de una secuencia de NBS (3C1) que presenta señales reguladoras de transcripción semejantes a las de otros genes de resistencia: cajas TATA, cajas TAATTG y cajas bHLH. El gen de beta-1,3-glucanasa de la lenteja muestra un nivel alto de similitud con los genes de otras especies de leguminosidad, especialmente los de guisante y alfalfa. Se ha detectado menor variabilidad en los genes de beta-1,3-glucanasa entre las especies del género Lens. No se ha podido clonar la secuencia de ADN que codifica para el péptido señal de este gen; posiblemente está separado de la zona que codifica para la proteína madura por un intrón grande. La secuencia de beta-1,3-glucanasa de lenteja clonada codifica para una proteína madura que tiene un peso molecular deducido de 37531 Dalton y pI de 5.86. Las relaciones filogenéticas entre las especies de Lens usando estas secuencias coinciden en parte con las obtenidas por otros estudios, especialmente respecto a las relaciones entre L.culinaris, L.orientalis y L.tomentosus. Se ha construido un mapa genético de judía usando la técnica de AFLP que generó 74 marcadores distribuidos en trece grupos de ligamiento que cubren 1021 cM, con un espaciado promedio de 13 cM. Se identificaron dos QTL relacionados con la resistencia a la grasa, asociados a dos grupos de ligamiento (VIII y XII) que explican un 71% de la variancia total. Se han clonado 21 secuencias de microsatélites del tipo (GA)n a partir del genoma de judía. Ocho de estos clones de microsatélites tienen una ordenación relativamente simple de microsatélites, en cambio los otros 13 contienen motivos distribuidos de manera compleja. La secuencia PVMADS de microsatélites contiene una secuencia de caja MADS que muestra un alto grado de similitud con el mismo tipo de secuencias de otras plantas.

Autor: GÓMEZ ORTE EVA.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA .
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: DPTO. GENÉTICA MOLECULAR DEL IBMB, CSIC.

Resumen: El Retrotransposon (RTN) grande es un RTN de tipo GYPSY presente en maíz en aproximadamente 5500 copias. Tiene una peculiaridad que es la presencia de una región comprendida entre la integrasa y la LTR3' muy larga. En esta región se encuentra el Gen 23. El Gen 23 es un gen orientado en sentido opuesto al resto de los genes del RTN, y a diferencia de estos, que se transcribirian a partir de un único promotor situado en la LTR 5' de grande, el gen 23 se transcribe a partir de su propio promotor. Mediante transformación por bombardeo de diferentes tejidos de maiz, se ha visto, que este promotor es funcional en todos los tejidos estudiados. La obtención de plantas transgénicas de arroz transformadas con el promotor del gen 23 fusionado al gen informador GUS, nos ha permitido saber que el promotor es activo en las células situadas alrededor de los haces vasculares. Además, el gen 23 se transcribe, pero, aunque hay mas de una copia que se transcribe, no lo hacen todas, o al menos, no lo hacen en las mismas condiciones. El estudio de la secuencia nucleotidica de diferentes copias del gen 23 nos indica que tiene una región 5'm bastante conservada, pero que la región 3' es más variable, especialmente en tamaño. Las diferentes copias se agrupan en dos familias mayoritarias, una de las cuales, daría lugar a una proteina que tiene una señal de localización nuclear. Hemos demostrado, que la secuencia KRKR presente en la mayoría de las copias del gen 23, es necesaria para la localización nuclear de la proteína. El hecho de que la mayoria de las copias del RTN posean el gen 23, el elevado grado de conservación de su secuencia, la mayor tasa de cambios sinónimos frente a no sinónimos y el hecho de que en la mayoría de las copias no se rompa la pauta de lectura, sugiere que este gen se traduce a proteína y cumple alguna función dentro del RTN. La localización nuclear de la proteína de fusión P23-GFP y la distribución de aminoácidos básicos de forma similar al de la integrasa del HIV (en cuyo caso se demuestra que unen ácidos nucleicos) sugiere que esta proteína puede estar implicada en el transporte a nucleo del DNA del RTN permitiendo su integración una nuevas posiciones del genoma.

Autor: VALDERRAMA VALENCIA M. ROSARIO ELSA.
Año: 2001.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA.

Resumen: En este trabajo se ha analizado 115 individuos F2 procedentes de un cruce interespecífico entre un parental silvestre resistene a O.crenata (Pisum fulvum) y un parental cultivado susceptible a O.crenata (Pisum sativum cv Messire). Se ha construido un mapa con 104 marcadores RAPDs, y 1 STS, distribuidos en 16 grupos de ligamiento, que abarcan una distancia mapa de 1603.3 cM y una densidad media de 15.3 cM/Marcador. Se ha detectado dos QTLs, uno para resistencia a O.crenata y otro para longitud de vaina. El primero de ellos está ubicado en el grupo de ligamiento II, explica el 15,2% dela varianza fenotípica del carácter y muestra un efecto aditivo. Este QTL de resistencia a jopo dista 4 cM del marcador OPAE02 525 siendo la longitud de intervalo de 13.4 cM. Para la longitud de la vaina se ha detectado otro QTL ubicado en el grupo de ligamiento VIII localizado en el marcador OPAI01 412, con una longitud de intervalo de 18.2 cM. Este QTL explica el 14.12% de la varianza fenotípica del carácter y muestra efecto aditivo. El STS P-482 nos ha permitido adscribir el grupo de ligamiento IX al cromosoma 2 del mapa consenso de la especie.

Autor: LEÓN MORENO LORENZO.
Año: 2001.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S.I.A.M..

Resumen: Durante 4 años se han evaluado progenies (748 genotipos) procedentes de cruzamientos recíprocos entre las variables "Arbequina", "Frantoio" y "Picual". Sistemáticamente se han evaluado la cosecha, fecha de maduración, componentes del rendimiento graso y composición en ácidos grasos. Para cualquiera de las características evaluadas se han obtenido amplios intervalos de variación, iguales o superiores a los obtenidos en muestras aleatorias de variedades del Banco de Germoplasma de olivo del CIFA "Alameda del Obispo" de Córdoba. Se ha estudiado la influencia de las diferentes fuentes de variación en la expresión de los caracteres y se ha determinado la heredabilidad y la repetibilidad, que han mostrado valores muy diferentes en las distintas características analizadas. Se han encontrado correlaciones significativas entre muchas de las 66 posibles combinaciones entre los 13 caracteres agronómicos evaluados. También se han obtenido altos coeficientes de correlación entre los datos obtenidos el primer año y los siguientes para algunas de las características estudiadas como el primer año y los siguientes para algunas de las características estudiadas como el contenido de aceite o el contenido de ácido oleico. Esto indica que los datos del primer año pueden ser suficientes para una preselección de los genotipos más prometedores, evitando así el alto costo que supone realizar estas determinaciones durante varios años. Finalmente se ha estudiado la posibilidad de utilizar la espectroscopia en el infrarrojo cercano (NIRS) para el análisis de aceituna intacta. Los resultados obtenidos indican que la tecnología NIRS puede ser útil para reducir el coste y el tiempo requerido para evaluar el elevado número de genotipos que genera el programa de mejora, consiguiéndose la suficiente precisión para seleccionar genotipos en base al rendimiento graso y contenido de ácido oleico, dos de los objetivos más importantes del programa de mejora de olivo. Los resultados obtenidos representan una base muy prometedora para la mejora varietal en olivo. En base a estos resultados, se ha hecho una primera preselección de 20 genotipos que se han propagado para evaluar su comportamiento en ensayos de campo más completos.

Autor: GISBERT GARCÍA ELENA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.

Resumen: El trabajo se ha centrado en el estudio de la especie Primula vulgaris Huds. (syn. P. Acaulis), debido al interés de esta planta como ornamental, partiendo de un objetivo básico como es la caracterización de la floración. Del mismo modo, se ha puesto a punto un método de regeneración de las variedades de P.acaulis Danova roja, Danova azul, Danova amarilla, P.polianithus amarilla, P.polianthus, P.polianthus rosa, prímula doble y Petunia hybrida grandiflora. Se han comparado el tiempo de germinación y el porcentaje de germinación, de semillas de diferentes variedades de Prímula, empleando tres medios base diferentes. El mejor medio de germinación fue el compuesto por medio base MS, suplementado con 30 g/L de azúcar y 7 g/L de agar. La multiplicación se ha producido a partir de explantes procedentes de cultivo in vitro. En Prímula el mayor número de plántulas se obtuvieron empleando como explantes ápices, de las plantas germinadas in vitro, sobre el medio base MS con una combinación de reguladores de crecimiento de 2,5 mg/L de BAP y 1,5 mg/L de IAA. En petunia, el mayor número de plántulas se obtuvieron empleando como explantes ápices, de las plantas geminadas in vitro, sobre el medio base MS con 1 mg/L de BAP. Se ha estudiado la estructura floral de las distintas variedades Prímula, obteniendo una misma estructura floral independientemente de la variedad con la que nos encontremos. Tal estructura esta compuesta por un primer verticilo correspondiente a cinco sépalos, un segundo verticilo correspondiente a seis pétalos, un tercer verticilo correspondiente a seis estambres e internamente el aparato reproductor femenino (gineceo). Se ha observado el efecto que produce en Prímula diferentes tratamientos químicos (5-Azacytidina, ácido giberelico y paclobutazol) que en otras especies producen floración. Igualmente, se ha observado el comportamiento de la Prímula frente al fotoperiodo y a la vernalización. Se ha estudiado las relaciones filogenéticas existentes entre las diferentes variedades de Prímula, utilizando marcadores moleculares del tipo AFLPs. Se ha obtenido un mutante, en Prímula, que presenta un nuevo color en las flores. Se ha puesto a punto el método de transformación de Prímula, obteniendo plantas transformantes, en las cuales la presencia del transgen se ha confirmado tanto por ensayo histoquímico como por PCR.

Autor: NUÑIZ MENÉNDEZ LUIS MIGUEL.
Año: 2001.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALÁ.

Resumen: Una de las principales aportaciones de la biotecnología a la mejora genética vegetal es la del desarrollo de las técnicas de regeneración de plantas a partir del cultivo in vitro de células, tejidos u órganos. La androgénesis consiste en la obtención de formas vegetales por regeneración a partir de microesporas. A las plantas homocigóticas derivadas de la duplicación cromosómica de los gametofitos haploides se les denomina "haploides duplicados" (HD). Esta metodología puede resultar de utilidad cuando se aplica a materiales con fines de mejora para reunir genes de diferentes variedades. Se ha llevado a cabo el estudio de los factores genéticos que intervienen en el proceso de androgénesis a partir de cultivo in vitro de anteras en triticale en dos variedades, "Torote" y "Presto". Para diversos parámetros relacionados con la respuesta adrogenética, los valores medios de "Presto" superan a los de "Torote". De este modo, "Torote" y "Presto" se pueden considerar como variedades de bajo y alto potencial androgenético, respectivamente. El híbrido intervarietal muestra heterosis, que llega a ser de hasta 460% superior respecto al mejor de los parentales, para el número de plántulas verdes/1000 anteras. Se han producido 73 líneas haploides duplicadas fértiles a partir del cultivo de anteras del híbrido a partir del cultivo de antenas del híbrido intervarietal "Torote" x "Presto". El análisis de segregación en las líneas HD ha permitido construir un mapa de marcadores moleculares. Éste consta de 36 grupos de ligamiento, de los cuales 21 fueron identificados mediante microsatélites localizados en cromosomas de trigo y centeno. La longitud total del mapa es de 2606,1 cM. Con relación a la localización de factores genéticos implicados en androgénesis se han localizado regiones QTL en los cromosomas 4R y 6B (inducción de embriones haploides), grupos de ligamiento GL5 y GL14 (regeneración de plántulas desde embriones haploides), cromosoma 3R (capacidad fotosintética de los regenerantes) y tres regiones implicadas en el control del número de plántulas verdes obtenidas por 1000 anteras en cultivo, en los cromosomas 4R, 5A y en GL-5. Los marcadores moleculares más próximos a estos QTL podrían ser utilizados en futuros programas de mejora de la respuesta androgenética como marcadores para asistir a la selección (MAS).

Autor: ASENSIO SÁNCHEZ-MANZANERA M. CARMEN.
Año: 2001.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: SERVICIO DE INVESTIGACIÓN Y TECNOLOGÍA AGRARIA (J. CASTILLA Y LEÓN).

Resumen: Uno de los mayores problemas de producción que presenta el cultivo de judías en Castilla y León, son las enfermedades causadas por Xanthomonas axonopodis pv.phaseoli y Pseudomonas savastonoi pv.phaseolicola. Estas enfermedades se conocen como "tabaquera de las judías" y "grasa de las judías", respectivamente. Ambas enfermedades están distribuidas por toda la región y su severidad y pérdidas de rendimiento dependen de la climatología, las variedades cultivadas y los niveles de población de los patógenas. Las dos bacterias se transmiten por semilla y son de difícil control mediante productos fitosanitarios o prácticas culturales. El uso de variedades resistentes, solas o en combinación con otros métodos, es la mejor alternativa para controlar los dos patógenos. Así, la disponibilidad de variedades resistentes a ambas enfermedades ayudará y estabilizará el rendimiento dentro de una producción sostenible y respetuosa con el medio ambiente. El objetivo del estudio fue comprobar la efectividad del método de "Selección de Gametos" (GS) para la mejora genética simultánea de la resistencia a tabaquera y grasa de las judías en generaciones tempranas (F1 a F4) de poblaciones de judías. Se han realizado dos cruzamientos dobles, codificados como ZARA III = Wilkinson2 / Montacalm // Casasola / Harris y ZARA IV = Wilkinson 2 /// ICA Tundama / Edmund // VAX3 / PVA773, ZARA II = Morada Larga /// ICA Tundama / Edmund // VAX3 / PVA773 y ZARA V = Casasola /// Wilkinson 2 / Montcalm // Casasola / Harris. En ZARA V la F1 del cruzamiento doble utilizado como parental masculino en el último cruzamiento fue evaluado para grasa y tabaquera. Solo se utilizaron plantas resistentes para cruzar con la variedad Casasola. Se realizó selección desde F1 a F4 en cámara climática o en campo. Para las inoculaciones con P.savastanoi pv.phaseolicola se utilizaron inóculos preparados con un aislado o mezcla de aislados. Para ambas enfermedades se han utilizado dos métodos de inoculación, aspersión y agujas múltiples, para inocular en hoja. La tabaquera fue más severa en campo que en cámara. Por el contrario, la grasa fue más severa en cámara. Los genotipos utilizados como parentales de los cruzamientos mostraron una reacción diferencial en hojas y vainas para ambas enfermedades. Wilkinson 2 fue resistente a tabaquera en hoja pero susceptible en vaina. Montcalm fue resistente en vaina pero susceptible en vaina. Montcalm fue resistente en vaina pero susceptible en hoja, VAX3 fue resistente o medianamente resistente tanto en hoja como en vaina. Edmund, Harris y Casasola se mostraron resistentes o mdianamente resistentes a la mayor parte de aislados de P.savastanoi pv.phaseolicola. La raza Psp-6 fue la más virulenta. El método de "Selección de Gametos" fue efectivo en F1,F2,F3 y F4, para ambas enfermedades. Las plantas F1 seleccionadas como resistentes produjeron descendentes resistentes en F2 y en generaciones siguientes. De la misma manera, plantas F1 susceptibles produejron sólo descendientes susceptibles. El coeficiente de correlación para tabaquera entre la F1 y sus familias F1:2 fue positiva y significativa (R = 0,54, P

Autor: ARANZANA CIVIT M. JOSÉ.
Año: 2001.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LLEIDA.

Resumen: El melocotonero (Prunus persica (L.) Batsch) es uno de los cultivos frutales de mayor importancia económica en España y en Europa. El activo proceso de renovación varietal de esta especie, la protección de los derechos del obtener y del agricultor y los retos que se plantean en la obtención de nuevas variedades, crean la necesidad de disponer de un método objetivo, fiable, sencillo y de fácil automatización para realizar estudios de variabilidad e identificación varietal en melocotonero. Los marcadores moleculares, y especialmente los SSRs y los AFLPs, aparecen como técnicas idóneas para cubrir esas necesidades. En este trabajo se ha construido una genoteca enriquecida para la secuencia microsatélite (CT)n a partir de ADN genómico de melocotonero. El método utilizado ha resultado altamente efectivo, ya que por cada 1,5 colonias secuenciadas se ha obtenido un SSR amplificable en melocotonero. Los 35 SSRs desarrollados se han estudiado en un conjunto de 25 cultivares de melocotonero, resultando 24 de ellos polimórficos (69%). Todos los SSRs desarrollados, juntamente con los descritos por otros autores (109 en total), se han estudiado en la población del mapa de referencia de Prunus. Los 96 loci mapados se han distribuido en los 8 grupos de ligamiento cubriendo el 82% de la distancia del mapa, encontrándose un marcador SSR cada 5,4 cM. Una vez conocida la distribución de los marcadores en los grupos de ligamiento, sugerimos la utilización de 24 de ellos como "genotyping set" para posteriores estudios en melocotonero. Con 16 marcadores SSR y 9 AFLP se ha estudiado un conjunto amplio de cultivares representativos de los actualmente presentes en el mercado. Los dos tipos de marcadores han resultado muy polimórficos. Los SSRs han amplificado un promedio de 7,3 alelos por marcador y han identificado individualmente 185 de los 212 cultivares estudiados (87%). Los AFLPs han amplificado 47 fragmentos polimórficos (5,2 por combinación de cebadores) identificando individualmente 187 de los 210 cultivares estudiados (89%). La mayoría de cultivares idénticos con un marcador (algunos de ellos descritos como mutantes) lo han sido también con el otro. Por otro lado, ambos marcadores han distinguido entre algunos de los mutantes conocidos estudiados. El estudio de esta colección de cultivares con SRRs ha permitido descubrir y analizar aspectos de la organización de la variabilidad que pueden permtir la realización del test de identidad varietal con mayor eficiencia y robustez. El carácter codominante de los SSR ha permitido también comprobar el pedigrí descrito para algunos de los cultivares estudiados. El conjunto de los cultivares tradicionales de carne dura, y particularmente los de origen español, han mostrado un nivel de variabilidad superior y una estructura genética distinta del resto de cultivares, la mayoría procedente de los programas de mejora modernos.

Autor: DÍAZ VÁZQUEZ RAQUEL.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: ESCUELA TÉCNICA SUPERIOR DE INGENIEROS DE MONTES.

Resumen: En el presente trabajo se expone el programa de mejora genética a largo plazo de Junglans regia L., iniciado en el Centro de Investigaciones Forestales y Ambientales de Lourizán. En primer lugar se describe la prospección realizada por el noroeste español durante los años 1997 y 1998 y se hace una caracterización de la variación ecológica del área de prospección. A continuación se evalúan los datos registrados durante tres periodos vegetativos en el ensayo de progenies de polimización abierta instalado en dos sitios con la semilla de las 43 progenies gallegas. Así, se estudia la brotación de las progenies consideradas, se evalúa el comportamiento de la especie en distintas calidades de sitio y se determinan los componentes de la varianza, las heredabilidades y la existencia de interacción genotipo*ambiente de distintos caracteres de la planta en estado juvenil. Posteriormente, se comparan las ganancias y los coeficientes de endogamia que se obtendrían según se empleasen distintos métodos de selección para instalar huertos semilleros de semilla y se hace una propuesta para el establecimiento de huertos semilleros de semilla dentro del programa de mejora genética a largo plazo del CIFA Lourizán.

Autor: MERLO SÁNCHEZ ESTHER.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: CIFA LOURIZÁN/INRA ORLEANS.

Resumen: Esta tesis pretende avanzar en el conocimiento de aspectos fundamentales dentro de una estrategia intensiva de mejora de Pseudotsuga menziessi Mirb Franco. SELECCIÓN DE PROCEDENCIAS Se desarrolla en un ensayo de procedencias IUFRO de P.menziesii localizado en la provincia de Orense (RIU 2). Las procedencias con mayor altura a los cinco años son las que han tenido un mayor crecimiento a los diez y quince años respecto de la media en la parcela. La altura media por procedencia tiene una alta variabilidad poblacional (entre 62% y 45%), unos valoresaltos de heredabilidad (h2 entre 0,87 y 0,82) y una alta correlación lineal fenotípica a distintas edades (r2 entre 0,96 y 0,98; P

Autor: DOMINGUEZ CARMONA EVA M. .
Año: 2000.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El objetivo de esta memoria estaba encaminado a ahondar en el estudio del fallo del cuajado de frutos de tomate en invierno, debido fundamentalmente a problemas relacionados con la formación y germinación del polen. Se estudiaron las especies tolerantes al frío L. Pennellii y L. Hursutum. En primer lugar, la puesta a punto de los medios de germinación del polen indicó la necesidad de emplear un medio distinto para cada especie silvestre del género Lycopersicon. En segundo lugar, se observó un efecto paliativo de las bajas temperaturas nocturnas sobre la fertilidad del polen de tomate debido al cultivo de las plantas en macetas de pequeño tamaño. Por otro lado, la herencia del carácter de tolerancia al frío resultó dominante dentro la especie L. Pennelli pero no se pudo estudiar en L. Hirsutum por falta de entradas sensibles. Esta última especie mostró un elevado numero de anomalias en el cruce con L.esculentum que desaconsejaron su empleo. Finalmente, se inició un programa de mejora aplicando el estrés de selección a la fase gametofitica en vez de a la planta adulta. Los resultados, tanto de fertilidad del polen como de marcadores moleculares indicaron que la selección gametofitica no es una herramienta adecuada para la mejora de este carácter.

Autor: SEGUI SIMARRO JOSE M..
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CIB/CSIC.

Resumen: El polen cultivado in vitro, tras someterlo a un tratamiento de estrés, es capaz de desviarse de su ruta de desarrollo gametofítico hacia una nueva vía esporofítica, proceso denominado embriogénesis del polen, por el cual el grano de polen inmaduro o microspora se multiplica para dar lugar a un embrión y posteriomente a una planta haploide. Las plantas haploides y doble-haploides son de enorme interés para la obtención de líneas isogénicas en mejora vegetal de una forma rápida además de para estudios genéticos y de mutagénesis. El objetivo de esta Tesis Doctoral es el estudio, desde el punto de vista celular, del proceso de inducción a la embriogénesis haploide. Como modelo experimental se han utilizado microsporas aisladas de anteras de Brassica napus inducidas y cultivadas in vitro durante las primeras etapas del proceso de aislamiento e inducción y el posterior desarrollo embriogénico. Tras la inducción, en la célula se suceden gran cantidad de acontecimientos, cambios en determinados componentes citoplásmicos. Aumenta la síntesis específica de ciertas proteínas implicadas en las distintas respuestas que se originan, disparándose cascadas de transmisión de señales de estrés al interior celular. En esta Tesis se ha caracterizado los cambios celulares, citplásmicos y en los compartimentos nucleares, originados por la inducción a embriogénesis. Se han encontrado determinadas estructuras que pueden constituir marcadores celulares del proceso. Asimismo se han descrito cambios en la expresión y localización subcelular de diferentes proteínas de estrés, específicamente proteínas de choque térmico (HSP 70 y HSP 90), implicadas en la respuesta mediada por dicho tratamiento. Durante el proceso, se han detectado variaciones en la expresión in situ de varios elementos de las cascadas de MAP quinasas encargadas de la transmisión de señales extracelulares de estrés, encontrándose diferentes patrones de expresión. Estos resultados aportan nueva información sobre los mecanismos celulares que operan durante la inducción de embriogénesis de microsporas y sus primas fases de desarrollo, acercándose a la comprensión del proceso.

Autor: NAVARRO SOLAZ CRISTINA.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR DE PLANTAS-CSIC.

Resumen: En el presente trabajo se ha profundizado en el estudio de los procesos de iniciación floral y en la especificacion de la identidad de organos florales en guisante. Hemos utilizado el analisis de mutantes homeotipos de guisante y de las interacciones entre los mismos, para identificar las distintas funciones que posiblemente contribuyen a los procesos anteriormente mencionados, especialmente, a la especificacion de los primordios comunes y los procesos subsiguientes de diferenciacion de petalos y estambres a partir de los mismos. Tambien hemos caracterizado algunos genes MADS de guisante previamente aislados en nuestro laboratorio (PEAM1-PEAM6), analizando su patron de expresión durante estadios tempranos del desarrollo inflorescente y floral en plantas de fenotipo silvestre y mutante; asi mismo, hemos aislado y caracterizado dos nuevos genes MADS de guisante , PEAM7 y PEAM8, con homologia a genes de funcion C; finalmente, hemos intentado establecer la identidad molecular de los mutantes analizados, mediante estudios de correlacion con los genes MADS de guisante posiblemente relacionados.

Autor: ORTEGA MAYAGOITIA ELIZABETH.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSTITUTO CAVANILLES DE BIODIVERSIDAD Y BIOLOGIA EVOLUTIVA.

Resumen: Los humedales semiaridos son ambientes hidrológicamente inestables y heterogeneos debido al gran numero de factores que interactuan en ellos (escasa profundidad, grandes poblaciones de macrofitos, aportes externos de nutrientes, formacion de charcas aisladas en periodos de sequia,etc) Bajo estas circunstancias, el plancton de estos sistemas puede tener patrones distintos y de mayor complejidad que los descritos en lagos. En esta tesis se describen la estructura y dinamica del plancton de un humedal hipertrofico semiarido (el Parque Nacional Las Tablas de Daimiel, ciudad Real, España) a escala estacional e interanual, analizando su heterogeneidad espacial y temporal e identificando los factores que regulan la comunidad. Para ello se combino un estudio de campo en el que se tomaron muestras en 5 puntos del humedal con una frecuencia mensual durante 1996,1997 y 1998, y una serie de experimentos en laboratorio en microcosmos controlados. Los grupos estudiados fueron: bacterioplancton, microalgas planctonicas (incluyendo picoplancton autotrofo), ciliados, rotiferos, copeodos y cladoceros. Se econtraron en total 94 taxa de microalgas y 91 de metazooplancton, mas dos familias de ciliados. Las especies mas comunes fueron Cryptomonas erosa, Cyclotella meneghniana, Nitzchia palea, N.acicularis, Euglena splendens y Planktothrix agardhii entre las algas; y Lecane closteorcerca, Lepadella patella, Testudinella patina, Criodaphnia cf.dubia, Daphnia curvirostris y Acanthocyclops robustus entre los zooplanctones. La biomasa del plancton en los puntos muestreados refleja claramente el carácter hipertrofico del humedal, y fue muy variable en su distribucion y dinamica, aunque se encontraron patrones estacionales relativamente bien definidos: de la biomasa total de las microalgas y del bacterioplancton, y de cada uno de los grupos taxonomicos de microfauna. Fue notoria la ausencia de asociaciones de algas y de un patron estacional general en la estructura de fitoplancton. El aumento en el volumen de agua y del area de inundacion que inicio en 1997, provoco el recambio de especies y el aumento de la biomasa total de fitoplancton, ciliados, rotiferos y copepodos, y una disminucion en la de cladóceros. El hecho de que el zooplancton de mayor tamaño este constituido por copecodos ciclopoides omnivoros la mayor parte del año es la razon por la que la biomasa de fitoplancton no es controlada por el zooplancton, aunque la estructura de este ultimo si pueda serlo por los peces planctivoros. Las interacciones troficas tiene una influencia menor en la estructuracion del plancton, frente a la que produce la gran variabilidad abiotica a la que estan sometidas las comunidades biologicas en este ecosistema. La respuesta de los diferentes componentes del plancton a los cambios ambientales estacionales e interanuales estan relacionados con sus caracteristicas biologicas y sus estrategicas ecológicas, asi como con las condiciones particulares del humedal. Se propone un modelo conceptual de la dinamica del plancton en humedades semiaridos.