GENETICA VEGETAL, 5

Autor: FERNANDEZ CUBERO OSCAR.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FAC. CC BIOLÓGICAS.

Resumen: El objetivo de la presente tesis ha sido doble. Por una parte se pretendió el desarrollo de una filogenia molecular del género de hongos liquenizados Physconia, ampliamente representado en la Península Ibérica tanto en la variedad de especies como en el número de poblaciones, la cual permitiese evaluar los conocimientos existentes sobre la sistemáticas y evolución de este grupo. Por otra, se pretendió describir y analizar la variabilidad en intrones en el gen de la subunidad pequeña ribosómica nuclear. En cuanto a la filogenia del género, se obtuvo la secuencia de las regiones ITS ribosómicas en individuos de 14 de las aproximadamente 20 especies del género. La reconstrucción filogenética permitió establecer las relaciones de estas especies, estableciendo que Physconia thompsonii pertenece en realidad al género Anaptychia y que el género puede ser dividido en tres agrupaciones principales, tal y como es propuesto por ciertos autores. Otras propuestas sin embargo han sido desmentidas, como las que establecen una mayor separación de P. Grisea. Los caracteres morfológicos asociados con el cortex inferior aparecen como los más informativos desde el punto de vista evolutivo, mientras que el resto de caracteres críticos en la sistemática del género habrían aparecido en diversas ocasiones. Solo P. Perisidiosa y P.venusta aparecen como posible "pares de especies". En cuanto a los intrones presentes en la SSU rDNA nuclear, se han caracterizados 17 localizaciones diferentes de inserción, correspondiendo 10 de ellas a intrones de tipo I y 7 de ellas a intrones espliceosomales. Procesos de inserciones "de novo", deslizamiento y transposición estarían involucrados en la evolución de estos.

Autor: IBAÑEZ MARCOS JAVIER .
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: INSTITUTO MADRILEÑO DE INVES. AGRARIA Y ALIMENTARIA.

Resumen: En este trabajo se ha evaluado la utilidad de tres técnicas de análisis del ADN (RAPD, STMS y AFLP) para conseguir varios objetivos en relación conv ariedades de vid (Vitis vinifera L.). Productoras de uva de mesa sin semillas. Asimismo se han desarrollado métodos matemáticos para determinar la fiabilidad de la asignaciónd e una muesrra problema a una variedad determinada a partir de datos obtenidos con cada una de las tres técnicas. El objetivo principal del trabajo era establecer un método de identificación de muestras problema. Ello implica la identificación en sí, la caracterización de una colección de variedades semejantes a la implicada (apirenas) y el desarrollod e métodos matemáticos que, a partir de los datos generados, permitan estimar la fiabilidad de la asignación de la muestra problema a la variedad. La evaluación de cada técnica melecular se ha realizado en función de estos tres aspectos. Las tres técnicas empleadas han demostrado su utilidad para la identificación en sí. También pueden ser utilizadas todas ellas para caracterizar una colección de variedades de uva de mesa apirena. Todas las accesiones pertenecientes a distinas variedades han podido ser distinguidas con facilidad. La técnica AFLP además ha mostrado diferencias entre clones de la misma variedad. El análisis de STMSs es el más indicado con este propósito de caracterización, por delante del análisis de RAPDs. En contra del análisis AFLP está el estrecho margen existente entre variabilidad intra e intervarietal, que puede complicar la distinción entre accesiones de la misma y de distinta variedad. Se ha desarrollado dos análisis matemáticos aplicables a datos obtenidos a partir de la amplificación de (numerosas) secuencias anónimas, en este caso RAPD y AFLP. Estos análisis son extrapolables a otras especies donde los cultivares sean propagados vegetativamente. Teniendo en cuenta todos los factores, entre los métodos aquí analizados, el más indicado para efectura la identificación varietal es el análisis de 6 loci microsatélite. Otro objetivo de este trabajo era determinar la utilidad de cada sistema marcador para obtener informacióna cerca de las relaciones genéticas existentes entre las variedades. Mediante análisis de STMSs se ha podido confirmar la práctica totalidad de progenitores descritos para las variedades empleadas. Asimismo se han obtenido progenitores compatibles para varias de las variedades de las que se desconoce el cruzamiento original. El estudio de 6 loci STMS en cambio ha demostrado poca utilidad a este respecto en los análisis de agrupamientos, resultando más indicados los de RAPD y AFLP. El primero refleja mejor alas realciones entre variedades hermanas, mientras que con AFLP aparecen más cercanos los padres e hijos. El análisis conjunto de datos reflejar mejor, aunque no totalmente, las realaciones genéticas existentes. Por último, se ha evaluado la utilidad de la metodología molecular y matemática empleada para otros aspectos de la protección legal de obtenciones vegetales: los tests de distinción, necesarios para obtener un Título de la obtención vegetal, y el establecimiento de la Derivación Ensencial, concepto clave en la nueva legislación internacional sobre la protección.

Autor: SUAREZ MARIN M. FERNANDA.
Año: 1999.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: A pesar de la imprtancia económica y ecológica que tienen los árboles y del hecho de que el nitrógeno es un elemento limitante del crecimiento de estas plantas, las aproximaciones moleculares al metabolismo del nitrógeno en árboles, y particularmente en gimnospernas, son escasas. En este trabajo se ha analizado la localizacióntisular precisa de la expresión de los dos miembros de la familia géncia GS identificados hasta el momento en P. Sylvestris; como aproximación a establecer si cada una de las isoenzimas que codifican realiza una función independiente y espcializada o si, por el contrario, son componentes de rutas metabólicas redundantes. Los resultados obtenidos mediante distintas aproximaciones experimentales indican: * El gen GS1b está implicado en la reasimilación del nitrógeno liberado en la degradación de la sproteínas de reserva durante la geminación y en la removilización del nitrógeno almacenado enlas moléculas utilziadas para su transporte en estadios plantulares. * La existencia de una coordinación entre gen GS1a y del gen Fd-GOGAT par a la asimilación del nitrógeno en tejido fotosintético. * Los mecanismos de regulación del isogén GS1a, en estadios iniciales del desarrollo de pino,podrían ser similares a aquellos que regulan la expresión del gen GS2 en angiospermas.

Autor: PEREZ TORNERO OLAYA.
Año: 1999.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La mejora genética clásica de las especies de Prunus es un proceso que presenta serias limitaciones. La producción de descendientes de cruzamientos controlados va desde la recolección y preparación del polen de los parentales masculinos hasta la estratificación, germinación de las semillas y establecimiento de las plántulas en campo. La posterior evaluación de descendientes para llevar a cabo la selección de los individuos sobresalientes debe esperar a que terminen los prolongados periodos de juvenilidad característicos de este material vegetal (3 a 6 años). La inversión en tierra de cultivo y mano de obra necesaria para el cuidado de los árboles es considerable. Generalmente, desde que se planta una semilla híbrida hasta el registro o patente de una nueva variedad transcurre un periodo de tiempo de entre 10 y 20 años. En ocasiones el proceso se complica enormemente cuando el mejorador se ve obligado a utilizar parentales poco adaptados o con caracteres no deseados. En estos casos la heterocigosidad de las variedades de Prunus produce una muy heterogénea segregación en las descendencias que disminuye enormemente la probabilidad de seleccionar individuos que reúnan las características deseadas. La ingeniería genética se está convirtiendo en una tecnología muy poderosa y revolucionaria que ofrece una alternativa para superar las limitaciones de la mejora clásica mediante la introducción de genes, hasta ahora no disponibles para los mejoradores de plantas, y de esta manera producir cambios pequeños, discretos y definidos en genotipos establecidos. Para la aplicación de la mayoría de estas técnicas genéticas a la mejora vegetal se requiere una regeneración de novo eficiente de plantas a partir de células y cultivo de tejidos. Solo unos pocos años atrás la regeneración de especies de frutales leñosos era considerada difícil o imposible. Sin embargo, cada vez son más numerosos los artículos científicos en los que se da cuenta de la regeneración con éxito de plantas a partir de material adulto de variedades establecidos. Sistemas de micropropagación con altas tasas de proliferación son valiosos no solo para mejorar los procesos de propagación vegetativa de una determinada variedad, sino que deben constituir la bade para la introducción de la variación genética deseada de forma controlable. En cualquier caso, es necesario ser capaz de regenerar brotes viables y propagables ya sea por organogénesis o por embriogénesis somática a partir de explantos obtenidos de cultivos in vitro. La regeneración de plantas a partir de células individuales o de explantos más complejos es, por tanto, el proceso clave en cualquier trabajo de manipulación genética. Al menos que esta pueda ser conseguida de forma consistente y eficiente, no será posible conseguir una mejora genética pormedio de métodos somáticos. Para conseguirlo, una fuente de células y tejidos genéticamente homogéneos es imprescindible. Los brotes en micropropagación son una fuente ideal de hojas, raíces y tallos. En una región como la nuestra donde la fruticultura tiene una gra importancia económica es de vital importancia contar con grupos de investigación capaces de utilizar estas nuevas tecnologías para aplicarlas a la consecución de objetivos de interés económico para las empresas y agricultores de la región. Enmarcado en el programa de mejora genética de la especie albaricoquero que se lleva a cabo en el Departamento de Mejora y Patología Vegetal del C.E.B.A.S., existe el interés de desarrollar esta tecnología en una especie modelo como el albaricoquero. Determinados problemas como la obtención de variedades de albaricoquero resistentes al virus de la Sharka se podrían afrontar de forma mucho más eficiente que por medio de la mejora clásica. El objetivo fundamental del presente trabajo ha sido desarrollar protocolos eficientes para la micropropagación del albaricoquero y la regeneración de brotes a partir de tejidos somáticos de la planta. Disponer de material de albaricoquero micropropagado nos proporcionará una fuente de material aséptico y genéticamente homogéneo a partir del cual llevar a cabo la regeneración de nuevos brotes. Por otra parte, ser capaces de micropropagar el albaricoquero permitirá multiplicar los brotes regnerados. Disponer de un protocolo eficiente de regeneración permitirá en un futuro transformar genéticamente variedades de albaricoquero para introducir cambios pequeños y discretos de forma controlada. La introducción del albaricoquero a partir de meristemos en reposo vegetativo, permitió el establecimiento del material in vitro sin grandes problemas de contaminación, externa o interna. El momento óptimo de introducción fue justo antes de la apertura de las yemas. Aunque el momento de introducción no afectó a la supervivencia de los meristemos, si que fue importante en la producción de brotes más largos y saludables. Se recomienda la introducción en dos fases, un primer medio con BAP (0,5-2 mg/l) para asegurar una alta supervivencia de los meristemos, seguido de un medio con la concentración de BAP reducida (0,5-1 mg/l), al que se le añade GA3 (2-4 mg/l), lo cual induce la elongación de los explantos. Las importantes diferencias encontradas entre genotipos, hace necesaria la optimización de las combinaciones hormonales para cada variedad. El albaricoquero tiene requerimientos muy específicos para su proliferación in vitro. En este estudio se encontró una alta variabilidad entre los distintos genotipos en cuanto a su respuesta a las diferentes composiciones de macronutrientes probadas, así como en la concentración de BAP en la que se obtuvo la tasa de proliferación más elevada, aunque en la práctica se pudo observar que las necesidades de BAP de las variedades estudiadas se movían en un rango de concentraciones que oscilan entre 0,4 y 0,7 mg/l. Concentraciones más altas produjeron rosetas de hojas y, después de varios subcultivos, hiperhidratación y habituación a las citoquininas. La variedad 'Lorna' resultó ser la más productiva mientras que 'Búlida' fue la variedad con una productividad más baja, siendo ésta aproximadamente tres veces menor que en 'Lorna'. Estas importantes diferencias entre genotipos, hacen necesario estudiar los requerimientos de cada variedad independientemente, lo que supone que para micropropagar comercialmente distintas variedades de albaricoquero no solo haya que tener en cuenta el interés comercial de la variedad en el mercado, sino que será muy importante estudiar la rentabilidad de su micropropagación. La conservación del material por el método de crecimiento reducido a bajas temperaturas, es claramente útil para la preservación de clones de albaricoquero que sean requeridos como stock para continuar la propagación in vivo o in vitro, y para incrementar la flexibilidad, permitiendo resolver dificultades que puedan aparecer durante la propagación. Nuestros resultados muestran un sistema sencillo de almacenamiento durante 3 a 6 meses a 3grado C sin ninguna pérdida de material vegetal y/o tasa de proliferación. El problema de la hiperhidratación de los explantos pudo ser resuelto con la utilización de un sistema de "Bottom Cooling", reduciéndose los niveles de hiperhidratación sin afectar a las tasas de proliferación. Este tratamiento también fue eficaz revirtiendo la hiperhidratación en explantos afectados. Los brotes de albaricoquero cultivados in vitro enraizaron con facilidad, aunque con importantes problemas de necrosis apical que pudieron ser subsanados con la utilización de bajas concentraciones de auxinas y la aplicación de soluciones concentradas de BAP en el ápice del explanto. Aunque las variedades comerciales de albaricoquero son generalmente injertadas sobre pie franco, y esto indica que el cultivo in vitro podría ser un método adecuado de propagación, es necesario estudiar el comportamiento en campo de las variedades autoenraizadas antes de su micropropagación comercial. En este estudio hemos podido comprobar que las plántulas pudieron ser aclimatadas en elevados porcentajes cuando no concurrieron condiciones climáticas extremas y la aclimatación se llevó a cabo de una forma gradual. Por otra parte, resultó de gran importancia el estado de las plántulas procedentes de la Etapa III. Cuando estas estuvieron sanas y presentaron un buen sistema radicular mejoraron los resultados obtenidos durante la aclimatación. Por lo tanto, modificaciones en la Etapa III que conduzcan a plantas más sanas tendrán una gran repercusión en el porcentaje de plántulas aclimatadas. Por primera vez se ha puesto a punto un protocolo reproducible de regeneración de albaricoquero a partir de material adulto con el que, en función del genotipo, se han podido conseguir porcentajes de regeneración de casi el 60%, utilizando un medio de cultivo en el que todos los componentes fueron los mismos que los utilizados en el medio de proliferación excepto el agente solidificante y los reguladores del crecimiento. Los mejores resultados se han obtenido con la inducción en oscuridad entre 2 y 3 semanas, la utilización de agargel, como agente solidificante, y TDZ (2 mg/l) y NAA (0,5-0,75 mg/l) como reguladores del crecimiento. Los resultados de esta memoria y la experiencia derivada del trabajo realizado constituyen el conocimiento y el fundamento necesarios para la realización de futuros estudios sobre transformación genética de variedades de la especie albaricoquero.

Autor: IBAÑEZ TORRES ASCENSION.
Año: 1999.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En el presente trabajo se han establecido diferentes procedimientos biotecnológicos que permitirán en un futuro próximomejorar la productividad y calidad del cultivar de uva de mesa Napoleón, autóctono de la Región de Murcia. Dicho cultivar ocupa el primer lugar en cuanto a producción y exportación, sin embargo, su estado sanitario es bastante deficiente, encontrándose muy afectado por el virus del Enrollado (GLRaV, 3) y, en menor grado, por el virus del Entrenudo Corto Infeccioso (GFLV). La presencia de estos virus afecta negativamente la producción y calidad de la uva, sobre todo en lo que respecta a su coloración y sabor; así como la longevidad de las parras. Se ha logrado la obtención de plantas libres de los virus anteriormente indicados, mediante la utilización de técnicas de Cultivo "in vitro" de Tejidos Vegetales, combinadas o no con el Tratamiento Termoterápico previo, con aire caliente, de las plantas de partida. El cultivo "in vitro" de ápices permite "per se" el logro de altos porcentajes (91-100%) de saneamientopara el virus del Enrollado, no habiéndose observado diferencias para los tres clones ensayados. Cuando se cultivan yemas axilares, los porcentajes de saneamiento disminuyen drásticamente, dependiendo de la épica del año escogida para el establecimiento de los cultivos y la posición de las mismas en el extremo distal de los brotes. La aplicación de termoterapia en plantas coinfectadas por los virus del Enrollado y del Entrenudo Corto Infeccioso fue imprescindible para la eliminación de este último en los cultivos de ápices y yemas axilares. La rápida multiplicación de las plantas saneadas requiere la puesta a punto de un protocolo de manipulación, así como la definición de una secuencia de medios apropiada, para una óptima micropropagación del cultivar Napoleón. Los medios de cultivo MS y C2D, conteniendo 2 mg/L de 6-benciladenina (BA), presentaron óptimos valores para los distintos parámetros cuantificados durante el establecimiento "in vitro" de ápices de vid sobre diferentes medios. La época del año durante la cual se realiza el establecimiento de los cultivos afectó de manera importante la respuesta "in vitro" de los ápices, con respecto a su viabilidad y producción de brotes y yemas axilares. La adición de citoquininas al medio de cultivo resultó esencial para la brotación y formación de múltiples brotes a partir de yemas axilares. De ellas, la BA fue la que mejor respuesta ofreció, principalmente a las concentraciones de 1,5 y 2 mg/L, con las que se llegó a alcanzar el 100% de brotación, una media de 8,7 yemas y 2,5 brotes por explanto y unos coeficientes de multiplicación de yemas y de brotes máximos. El mantenimiento de los cultivos, mediante transferencias sucesivas a medio fresco conteniendo 1,5 ó 2 mg/L de BA, permitió estabilizar los nivels de brotación alcanzados a la vez que produjo un aumento sustancial hasta el 3er subcultivo en la producción de brotes yde yemas por explanto, disminyendo notablemente en el siguiente. De acuerdo con los resultados obtenidos, parece prudente limitar a tres el número de ciclos de multiplicación, ya que más transferencias inducen la aparición de fenómenos de vitrificación y degeneración de los cultivos. La individualización de los brotes procedentes de los medios de multiplicación, que contenían BA, e inoculación sobre medio basal MS/2 propició porcentajes de enraizamiento satisfactorios en todos los casos (>86%), con un desarrollo importante de raíces secundarias (>75%). La transferencia de las plantas enraizadas a condiciones "extra vitrum" se realizó de modo exitoso, observándose un crecimiento continuado de las plantas en proceso de aclimatación, así como la elongación de las raíces producidas "in vitro" y su ramificación. La supervivencia lograda al final del periodo de aclimatación fue del 90%. El enraizamiento directo "in vivo" bajo condiciones medioambientales controladas, no resultó satisfactorio, con independencia del tratamiento auxínico efectuado. Palabras clave: Uva, Vitis vinífera, Napoleón, cultivo "in vitro", termoterapia, saneamiento, plantas libres de virus, micropropagación.

Autor: PRADA SAEZ M. ARANZAZU.
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: ETSI DE MONTES.

Resumen: La tesis tiene como objetivo el estudio del comportamiento vegetivo y reproductivo de 48 familias de polinización abierta procedentes de un huerto semillero de Pinus halepensis instalado en Alaquas (Valencia). Las progenies se estudiaron en dos ensayos localizados en Cucalón(Castellón) y Enguera (Valencia). Los parámetros estudiados fueron el crecimiento en altura y la producción de flores. Para ambos parámetros se obtuvieron diversos parámetros genéticos: heredabilidad y coeficientes de correlación y predicción genética a lo largo de varios años de medición. Se estudiaron los componentes del crecimiento en altura nº de ciclos, longitud de cada ciclo, nº de unidades de tallo y longitud de la unidad de tallo y su peso respecto a los parámetros genéticos mencionados. Los valores de heredabilidad resultaron muy bajos en el peor sitio (Enguera):0.06 a los 12 años de edad de las plantas, y moderadamente bajos en la mejor calidad de estación (Cucalón):0.30 a los 7 años. Se apreció un incremento de la heredabilidad con el tiempo. La producción de flores femeninas se mostró como un rasgo con elevado control genético y fenotípicamente relacionado con el desarrollo vegetativo. Por último, se determinó que, en las mejores condiciones de ensayo, el metodo de selección más eficiente con el fin de mantener el mayor grado de diversidad para una determinada ganancia genética es aquel que considera el grado de parentesco de los individuos seleccionados. Los resultados obtenidos aconsejan una estrategia de mejora basada en sublíneas, como la mejor alternativa para equilibrar ganancia y diversidad genética.

Autor: SOLLA HACH ALEJANDRO.
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES .
Centro de realización: ETSI DE MONTES.

Resumen: El olmo campestre (Ulmus minor Miller)es la especie más abundante del género Ulmus en la Peninsula Iberica y ha tenido, años atrás, una amplia representación en el paisaje urbano y rural. Durante la decada de los 80, el hongo Ophiostema novo-ulmi Brasier causa la práctica desaparición de las olmedas y de los ejemplares singulares a lo largo de todo el territorio peninsular. En 1986 se inicia un programa, a nivel nacional, con los objetivos de conservar los recursos genéticos de los olmos ibéricos todavía existentes y obtener ejemplares resistentes a través de ciclos de mejora genética. En los ciclos de mejora, la resistencia de los olmos se evalúa inoculando una supensión de esporas del patógeno. Para hacer una correcta selección es preciso someter a la planta a las condiciones más favorables para el desarrollo de sintomas. Se estudian cuatro factores incidentes en la sintomatología manifestada por grafiosis: la composición del inóculo infectivo, la repetición de las inoculaciones, el diámetro de los vasos del xilema y el estado hídrico del suelo. A partir de los resultados obtenidos, y para favorecer el desarrollo de síntomas, se deduce la conveniencia de inocular una sola cepa agresiva durante dos años consecutivos. Interesa estimular el crecimiento en la planta durante los años previos a su inoculación. Resulta adecuado, además, regar el suelo en abundancia durante las inoculaciones y suspender los riegos cuando la planta comienza a mostrar síntomas. Numerosos olmos propagados entre 1990 y 1995 fueron inoculados con grafiosis en condiciones favorables el desarrollo de síntomas. Se evalúa la resistencia de los mismos a la enfermedad, los rasgos ornamentales, la capacidad de propagación y el crecimiento. Tras una valoración conjunta se eligen nueve ejemplares que seran utilizados como progenitores en futuros cruzamientos controlados. También se seleccionan 22 olmos de resistencia aceptable, candidatos a ser utilizados como progenitores una vez alcanzada su madurez sexual. El trabajo finaliza con una propuesta de actuaciones a realizar en futuros el ciclo de mejora. Entre otras lineas sugeridas, destaca la instalación de parcelas a lo largo del territorio peninsular con los olmos seleccionados, a fin de observar su adaptación y estudiar la posibilidad de darles salida al mercado.

Autor: JIMENEZ SANCHO M. PILAR .
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS DE MONTES.
Centro de realización: ETSI DE MONTES.

Resumen: En la presente tesis se realiza el estudio de la variabilidad genética de Quercus suber L. A través de dos tipos de marcadores moleculares: isoenzimas y ADN de cloroplastos. La variación enzimática se estima a partir de 22 poblaciones, mediante 9 loci polimórficos. A partir de las frecuencias alélicas se obtienen diversos parámetros de diversidad genética entre y dentro de poblaciones, que ofrecen valores tipicos de las especies del genero. Se observa una gran diversificación intrapoblacional, que se atribuye a las características reproductivas y vitales de la especie. Los factores con más influencia sobre los patrones de variabilidad son el aislamiento de las poblaciones y en los relacionados con la historia de la especie, que determinan una mayor o menor importancia de los fenómenos de deriva. El estudio de la variabilidad de cloroplastos se lleva a cabo sobre 35 poblaciones de alcornoque. Mediante estos marcadores se detecta la existencia de una introgresión genética con encina. Este intercambio genético entre las dos especies sigue un patrón geográfico, ya que en las poblaciones de la mitad oriental de la Península Ibérica el citoplasma de Q. Suber ha sido totalmente sustituido por el de Q. Ilex. Sobre la base de los datos enzimaticos, se calcula la contribución de cada población a la diversidad total de la especie. Esta información es aplicable en los programas de conservación, principalmente a la hora de decidir qué poblaciones deben incluirse en ellos. Finalmente, se considera como los datos obtenidos del analisis de la variación genetica deben ser tomados en cuenta en el diseño de las estrategias de conservación de recursos geneticos.

Autor: IGLESIAS CULEBRAS ADRIANA.
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: En la Tesis se pone a punto el desarrollo de técnica a inoculación controlada y criterios de selección para el cribado de material por su resistencia o tolerancia. Así mismo, se caracterizan diversas entradas de C. Melo L. Frente al colpaso, y se estudia el control genético de la resistencia a dicha afección presente en la variedad agrestic de c. Melo (Post81).

Autor: TERRADA MAYOR M. ESTELA.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: En los últimos años se han desarrollado metodologías que permiten la expresión en Escherichia coli de fragmentos de anticuerpos que pueden tener características semejantes a los anticuerpos completos y mostrar capacidad de unión a un antígeno. Sin embargo, el uso de anticuerpos recombinantes en patología vegetal está en fase muy inicial, aunque puede ofrecer una serie de ventajas como son minimizar el uso de animales para la obtención de anticuerpos, disminuir su coste de producción o mejorar la eficiencia de anticuerpos específicos. En este trabajo se ha pretendido profundizar en la metodología de producción de anticuerpos recombinantes y evaluar las posibilidades de su uso en patología vegetal. Para ello, se eligieron como modelo dos anticuerpos monoclonales (AMCs) específicos del virus de la tristeza de los cítricos (CTV), dada la importancia económica de esta enfermedad. Se han obtenido los anticuerpos recombinantes 3DF1scFv y 3CA5scFv a partir de los genes de los AMCs 3DF1 y 3CA5 y se han expresado en E. coli como proteínas de fusión con fosfatasa alcalina (APS) o con motivos de dimerización (ZIP o CL-ZIP). Los scFvs fusionados a fosfatasa alcalina facilitan la fase de detección en la técnica ELISA, mientras que los dímeros scFv-ZIP o scFv-CLZIP son capaces de tapizar placas ELISA y atrapar antígenos. Así se ha dispuesto de reactivos de fácil aplicación para la detección de CTV en material vegetal mediante ELISA. Los anticuerpos recombinantes 3DF1scFv, 3CA5scFv-APS, 3DF1scFv-ZIP, 3CA5scFv-ZIP y 3CA5scFv-CLZIP se han comparado con los AMCs 3DF1 y 3CA5, observándose que muestran la misma especificidad que los originales. Los ensayos ELISA-DAS recombinante realizados con los reactivos 3DF1scFv-APS, 3CA5scFv-APS, 3DF1scFv-ZIP y 3CA5scFv-CLZIP, o la técnica inmunoimpresión-ELISA con los reactivos 3DF1scFv-APS y 3CA5scFv-APs, han permitido obtener la misma fiabilidad que los estuches comerciales disponibles para la detección rutinaria del virus en material vegetal. Tanto los anticuerpos recombinantes específicos de CTV como otros específicos de TYLCV o TSWV ensayados en este trabajo son un ejemplo de que la expresión en bacterias de fragmentos de anticuerpos puede constituir una alternativa frente a la producción convencional de AMCs mediante la tecnología de hibridomas.

Autor: GARCIA GIL M. ROSARIO.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Análisis genético basado en un mapa de ligamiento obtenido a partir de una población de 80 individuos obtenidos de un cruce intergnérico (C. vilkameriana x P. trifoliáta). Los caracteres que han sido objeto de estudio están relacionados con la mejora de la variedad (producción y fertilidad), y con la mejora del patrón de cítricos (apomixis y tolerancia a la salinidad). Se han obtenido marcadores moleculares asociados a QTL's que controlan los tres primeros caracteres mencionados que podrán emplearse para realizar una selección de genotipos en un programa de mejora asistida pro marcadores (MAS). También se han realizado estudios sobre la interacción genotipo x ambiente y sobre la estabilidad de los QTL's a lo largo de los años. Los estudios de tolerancia a la salinidad muestran que hay más de un mecanismo de restricción al paso de iones cloro. Estos estudios también han permitido establecer caracteres como posibles estimadores precoces de la tolerancia a la salinidad, que serán empleados en posteriores análisis de QTL's que controlan este carácter.

Autor: RODRIGUEZ MEDINA ALICIA.
Año: 1998.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: La producción y la estabilidad en los rendimientos de un cultivo como el de la cebada depende en gran medida de la adaptación que exista entre las diferentes fases de su desarrollo y las condiciones ambientales de la zona de cultivo. El fotoperiodo, la vernalización y la temperatura propiamente dicha son los principales factores ambientales que influyen en el desarrollo de la cebada. El conocimiento de los genes que en respuesta a estos factores controlan las distintas fases del desarrollo es fundamental para adaptar variedades a ambientes particulares y por lo tanto, para maximizar los rendimientos. Actualmente se conocen tres tipos de genes que controlan el tiempo a espigado en los cereales: los genes que controlan la respuesta a la vernalización y que regulan la floración a través de las bajas temperaturas, los genes que controlan la respuesta al fotoperiodo y que regulan la floración a traves de la longitud del dia y los genes de precocidad per se que aceleran o retrasan la floración con independencia del fotoperiodo y/o la temperatura. Con este trabajo, a través del estudio de la herencia de caracteres de desarrollo tales como el número de hojas del tallo principal (NHTP), el número de hojas en roseta (NHR), los días de nascencia a espigado (DNE), la integral térmica de nascencia a espigado (ITNE) y el filocrono (FIL), caracteres todos ellos influidos por las condiciones de fotoperiodo y temperatura, se pretende progresar en el conocimiento del control genético de la respuesta a estos factores ambientales. Para ello, se seleccionó material (tanto variedades comerciales como cebadas locales) de primavera, o lo que es lo mismo, sin requerimientos de vernalización y con distinto grado de sensibilidad al fotoperiodo y a la temperatura, y se realizaron ensayos en invernadero, con padres, F1S y F2S procedentes de varios cruzamientos, en ambiente controlado. Se establecieron dos condiciones de ensayo, una más favorable para el desarrollo o de alta inducción (fotoperiodo de 18 horas de luz y temperatura entre 5-15 grados C) y otra menos favorable o de baja inducción (fotoperiodo de 12 horas de luz y temperatura entre 10-20 grados C). A partir de los resultados obtenidos se han podido caracterizar estas cebadas de primavera en función de sus requerimientos de vernalización, su sensibilidad al fotoperiodo y su precocidad per se; información que una vez que sea ampliada con la de otras cebadas puede ser de gran utilidad para futuros programas de mejora cuyo objetivo sea la obtención de variedades adaptadas a determinadas condiciones climáticas. Tambie han puesto de manifiesto que el carácter tiempo a espigado, tanto si se mide en días como en grados día, es un carácter altamente heredable y que muchos casos puede estar controlado tan sólo por uno o dos genes mayores. Y además, nos han permitido explicar de forma bastante satisfactoria la herencia de este carácter mediante genes de vernalización, de sensibilidad al fotoperiodo y de precocidad. En cuanto al número de hojas del tallo principal, han mostrado que es un carácter que tiene una heredabilidad tan alta como el tiempo a espigado y que, aunque está fuertemente correlacionado con él, no parece que sean exactamente los mismos genes los responsables de ambos caracteres. De hecho, nuestros resultados parecen apoyar la idea de que existen dos sistemas génicos, uno que controle el tiempo a espigado y otro que determine el número de hojas que van a desarrollarse sobre el tallo principal, lo que permitiria que estos dos caracteres fueran sensibles a las condiciones de fotoperiodo y de temperatura en distinto grado. Otro tema mucho más complejo es de qué forma y en qué momento se sincronizan para que el espigado se produzca tan sólo unos días después de la aparición de la hoja bandera.

Autor: MARTINEZ GOMEZ PEDRO .
Año: 1998.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: Son bien conocidas la importancia del cultivo del albaricoquero en nuestro país y las cuantiosas pérdidas que el virus de la sharka (Plum pox potyvirus -PPV-) está causando. Ante la falta de eficacia de los métodos de control de la enfermedad, la única solución definitiva es el cultivo de variedades resistentes y adaptadas a cada zona. En este marco se encuadra la presente Tesis Doctoral que tiene por objetivo analizar diferentes aspectos relacionados con la resistencia del albaricoquero al virus de la sharka y su aplicación a la mejora de la especie. Respecto a los métodos de detección del virus, la observación visual de síntomas en combinación con la técnica ELISA-DASI han resultado ser los métodos más aplicables para la evaluación de la resistencia en un programa de mejora. Por otro lado, el conocimiento de la localización del virus en los tejidos y en la planta puede ser de gran importancia en el estudio de la resistencia. Hemos comprobado como la distribución del virus (tanto la proteína de la cápsida como el ácido nucleico) es más homogénea en Nicotiana benthamiana que en el melocotonero GF305 y albaricoquero. Tanto en plantas de GF305 como de albaricoquero se observa una distribución irregular del virus. Uno de los principales aspectos a tener en cuenta en un programa de mejora para resistencia a la sharka es la disponibilidad de un método fiable de evaluación de este carácter. Hemos puesto a punto diferentes etapas del método "in vivo" de evaluación de la resistencia en condiciones controladas. También se presentan los primeros resultados obtenidos en la evaluación "in vitro" de la resistencia del albaricoquero a la sharka, que unas posibilidades esperanzadoras para su aplicación en los programas de mejora de esta especie. La evaluación de diferentes variedades de albaricoquero pone de manifiesto la resistencia de Stella, Stark Early Orange, Goldrich, Harcot, NJA2, Pandora y Avilara al aislado del virus de la sharka ensayado. Las variedades españolas presentaron un nivel de susceptibilidad diferente que es necesario contrastar con nuevos ensayos. A pesar de su apariencia cuantitativa, los resultados obtenidos sobre la herencia del "carácter resistencia a sharka" en albaricoquero parecen indicar que se trata de un carácter monogénico siendo la resistencia dominante y los genitores resistentes utilizados heterocigóticos para este carácter.

Autor: CAMPO RAMIREZ LAURA.
Año: 1998.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: El presente estudio pretende profundizar en el conocimiento de cómo la densidad y la competencia de plantas influyen en: (1) los caracteres agronómicos, morfológicos y fisiológicos del cultivo de maíz grano; (2) los caracteres de producción y calidad del maíz forrajero; (3) los parámetros fenotípicos y genotípicos de los caracteres mencionados anteriormente con vistas a determinar cual es la densidad de plantas más idónea en los trabajos de selección. El material vegetal estaba compuesto por 36 híbridos comerciales de maíz elegidos aleatoriamente entre los disponibles en el mercado. Dieciséis híbridos eran del ciclo de maduración FAO 200, 11 de ciclo FAO 300 y 9 del ciclo FAO 400. Se establecieron tres experimentos diferentes en los años 1996 y 1997. Los experimentos 1 y 2 fueron realizados en Mabegondo (A Coruña) en un diseño de parcelas sub-sub-divididas para estudiar los caracteres de maíz grano y forraje respectivamente. Las parcelas principales se asignaron a las densidades que fueron 2.75, 4, 6, 9, y 13.5 pl/m2. Las parcelas subdivididas fueron los 36 híbridos dispuestos en Latice 6x6. Las parcelas subsubdivididas fueron tres surcos, asociados al tamaño de la parcela experimental. Los resultados más significativos obtenidos fueron que el aumento de densidad provocó cambios fisiológicos y morfológicos en la planta de maíz. El rendimiento grano aumentó significativamente hasta la densidad de 9 pl/m2. El tamaño de parcela de dos surcos, 8 m2, fue suficiente para reducir el error experimental de los ensayos de producción de maíz grano. El índice de superficie foliar total se obtiene multiplicando las superficies de la hoja de la mazorca y las inmediatas superior e inferior por 2,57 y por el número de plantas por m2. El modelo exponencial de predicción del rendimiento de maíz grano en función de la densidad proporcionó también un buen ajuste y unas densidades óptimas de siembra para cada híbrido más realistas que el modelo exponencial. La estimación de la varianza genética máxima para rendimiento de maíz grano se obtuvo a la densidad de 6 pl/m2, por lo que se recomienda esta densidad para los experimentos de selección siempre que haya un buen control del error experimental y de la interacción genotipo x ambiente. La densidad máxima de siembra estudiada, 13,5 pl/m2, fue la que alcanzó el máximo rendimiento forrajero. Densidades de siembra por debajo de 9 pl/m2 implicarían pérdidas importantes de la producción forrajera. El modelo inverso de predicción de la producción forrajera en función de la densidad proporcionó un buen ajuste para cada uno de los híbridos estudiados. Las densidades más idóneas para la selección de rendimiento del maíz forrajero fueron indistintamente la de 2,75 pl/m2 ó 13,5 pl/m2. Mientras que para la calidad nutritiva del maíz forrajero la densidad más idónea sería 2,75 pl/m2.

Autor: MARTINEZ VILCHEZ INMACULADA M..
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La alfa-L-fucosidasa es un enzima que hidroliza enlaces glicosídicos entre residuos de fucosa y otros monosacáridos. En guisante se ha purificado una fucosidasa de 20 kDa. Nuestros análisis de fraccionamento subcelular yde inmunocitoquímica por microscopia electrónica realizados a partir de diferentes tejidos de guisante demuestran que la fucosidasa es una proteína vacuolar. Experimentos de transcripción/traducción in vitro confirman que la fucosidasa se sintetiza como pre-proproteína con un propéptido carboxi terminal. Esta proteína se expresa de forma estable, procesándose y acumulándose correctamente en las vacuolas de células de Arabidopsis transgénicas, en protoplastos transformados transitoriamente de Arabidopsis o en las vacuolas de levadura. Mediante el análisis de la acumulación de un conjunto de fucosidasas mutadas, contruidas por delección de aminoácidos carboxi terminales o por mutagénesis dirigda en posibles señales de direccionalidad amino y carboxi terminales, se ha demostrado que el determinante de la direccionalidad vacuolar de esta proteína se encuentra dentro de sus últimos 9 aminoácidos. También se ha demostrado que la fucosidasa llega a la vacuola tras haber pasado por el Apt. de Golgi y las prevacuolas de almacenamiento. La expresión de la fucosidasa en E. coli ha permitido comprobar que este enzima sólo es activo si previamente se ha procesado su propéptido carboxi terminal.

Autor: VOLTAS VELASCO JORDI.
Año: 1998.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: La cebada (Hordeum vulgare L.) es un cereal de zonas templadas ampliamente cultivado en climas mediterráneos. Durante las últimas décadas, los incrementos en rendimiento debidos a actividades de mejora genética en estos ambientes han sido poco importantes. Futuros incrementos pueden verse acelerados por un mejor conocimiento de los procesos que limitan la productividad de los genotipos en situaciones de falta de agua. La presente tesis pretende ampliar el conocimiento actual de dichos procesos. Con este fin se ha evaluado en ensayos situados en la provincia de Lérida, Navarra y Valladolid un conjunto dediez genotipos de cebada que difieren en adaptación a ambientes semiáridos. Inicialmente, un conjunto de tres genotipos modernos y altamente productivos fue utilizado para examinar el efecto que una reducción del sumidero reproductivo (número de granos por espiga) provocaba sobre el peso y el crecimiento del grano en condiciones semiáridas. Los incrementos en peso obtenidos en respuesta a una reducción del sumidero del 5/% fueron progresivamente superiores en aquellos ambientes con granos testigo de menos peso. Por el contrario, el nitrógeno se acumuló uniformemente en todos los ambientes en respuesta a una reducción del sumidero. Estos resultados sugieren que el rendimiento final se encuentra fuertemente limitado, en ambientes productivamente pobres, por la disponibilidad de carbohidratos durante el llenado del grano, mientras que la acumulación de proteínas en el grano parece independiente de las condiciones ambientales en las que el llenado tiene lugar. La influencia de estreses abióticos tales como la sequía o las altas temperaturas en el proceso de llenado de los granos se examinó en detalle utilizando el conjunto de los diez genotipos ensayados en doce ambientes. Los posibles factores causantes de interacción genotipo-ambiente (GxE) en el peso del grano, la tasa y la duración de llenado se estudiaron mediante el uso de modelos estadísticos biaditivos. Se detectaron sensibilidades genotípicas diferenciales a la incidencia de sequía y a las elevadas temperaturas de post-antesis para el peso final del grano. La presencia de GxE para la tasa de llenado se explicó por el efecto conjunto de variables climáticas de pre-antesis, lo que sugirió que las diferencias genotípicas pudieran deberse parcialmente a diferencias en el balance fuente/sumidero entre cebadas dedos y seis carreras en antesis. La existencia de GxE para la duración del llenado pudo atribuirse principalmente a diferencias en fecha de antesis entre genotipos, indicando la existencia de una estrategia de escape a la sequía de algunos genotipos al final del ciclo de cultivo. La relación entre rendimiento y discriminación isotópica del carbono ( ) en granos se evaluó extensamente en un grupo de 22 ambientes. La existencia de GxE para el rendimiento sugirió la presencia de una interacción cualitativa con un punto de cruce aproximado inferior a 3 t ha-1. Por el contrario, la clasificación degenotipos para no cambió substancialmente con el ambiente. En general, aquellos genotipos con bajos valores de y, por tanto, con elevadas eficiencias de transpiración, fueron superiores en ambientes poco productivos (

Autor: FREITAS ALVES M. ESTEFANIA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Se han realizado cultivos in vitro de Sinapidendron sp y Secale cereale L. En el primer caso se ha puesto a punto una técnica de micropropagación para tres especies de este género, definido como un endemismo raro de la isla de Madeira. Las plantas regeneradas por formación de yemas axilares fueron analizadas mediante técnicas moleculares para comprobar su fidelidad genética. La amplificación del ADN de estas plantas, a través de reacciones de PCR con oligos específicos para la detección de variabilidad, reveló diferencias inter- e intraespecíficas, pero no intraclonales. Los cultivos de centeno (Secale cereale L.), realizados a partir de explantes de embrión inmaduro, originaron plantas regeneradas por embriogénesis somática, que fueron utilizadas para el estudio de la variación somaclonal. El análisis del ADN en estas últimas plantas, a través de la técnica de PCR-RAPD, posibilitó la identificación de zonas variables alteradas durante el cultivo in vitro. Se clonaron y secuenciaron algunas de estas secuencias variables, que podrán ser usadas para el diseño de oligos específicos a emplear en el estudio de la variabilidad inter e intraclonal.

Autor: GONZALEZ RUMAYOR VICTOR.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Se han puesto a punto técnicas de cultivo de tejidos de Crocus sativus L. encaminadas a la producciónde azafrán in vitro. Para ello se han seguido dos estrategias. Por una parte se ha procedido al estudio de los factores que afectan a la regeneración de estigmas, evaluando la productividad del sistema en cada una de las condiciones analizadas. En segundo lugar se ha procedido a la obtención de callos con el objetivo de establecer suspensiones celulares con capacidad biosintética, de los compuestos cruciales del azafrán (croacina, picrocroacina y safranal) que sirven de base para la producción de azafrán molido. En este caso se han estudiado también las condiciones de cultivo que conducen tanto a la mayor producción de biosoma como a los mayores niveles de producción de metabolitos secundarios. En todos los casos se han analizado las características organolépticas del azafrán obtenido in vitro.

Autor: GARCIA MARTINEZ ERNESTO.
Año: 1998.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La presente Tesis está realizada dentro de un programa de Mejora Genética de uva de mesa orientado a la obtención de variedades sin semilla (apirenas) de calidad. El objetivo principal de esta memoria es la optimización de las hibridaciones y de las diferentes técnicas necesarias para la obtención de híbridos con los parentales seleccionados. Las hibridaciones han sido realizados con dos métodos diferentes: el método clásico, con producción de semillas y su siembra, para cruzamientos entre variedades con semilla x variedades apirenas y el método de cultivo in vitro de esobozos seminales y embriones, para cruzamientos estre variedades apirenas. Con el método clásico se han realizado ensayos para aumentar la germinabilidad de las semillas, que en el caso de la vid es muy baja de forma natural, con la aplicación de diferentes concentraciones de ácido sulfúrico como agente escarificador, de GA3 como hormona reguladora del crecimiento y de cianamida de hidrógeno como compuesto estimulante de la germinación de semillas. Además se ha observado la influencia de los parentales en los porcentajes finales de semillas germinadas. Con el cultivo in vitro de esbozos y embriones se ha estudiado la influencia de la fecha óptima de extracción de los esbozos seminales para su cultivo in vitro para diferentes parentales femeninos en relación al porcentaje de obtención de embriones, germinación de éstos y obtención de plántulas finales. Así como la influencia de los parentales en el número de bayas obtenidas, en los porcentajes de embriogénesis y poliembrionía, en la germinación de embriones y en la obtención de plántulas finales. Además, se ha realizado un estudio de la viabilidad del polen de las variedades apirenas más utilizadas en los diferentes cruzamientos como parental masculino. De los resultados obtenidos, se ha podido determinar las concentraciones más adecuadas de ácido sulfúrico, GA3 y cianamida de hidrógeno que aumentan de forma importante la germinabilidad de las semillas y también qué variedades responden mejor al cultivo in vitro de sus esbozos seminales y embriones, la fecha más idónea para la recogida de sus bayas y el sexo con el cual deben ser usadas en un cruzamiento. Lo cual permitirá en el futuro mejorar los porcentajes finales de plántulas obtenidos con el cultivo in vitro y conseguir por lo tanto un mayor rendimiento de éste.

Autor: GOMEZ MENA M. CONCEPCION.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Mediante análisis genético de mutantes se han identificado dos nuevos loci de Arabidopsis thaliana (L) Heynh implicados en la represión de la floración en condiciones no inductivas. Las mutaciones ebs (early bolting in short days) y esd1 (eartly in short days 1) se han localizado en los cromosomas 4 y 3, respectivamente. Mediante análisis de dobles mutantes se han determinado las interacciones genéticas de estos dos genes durante la transición floral. La función de ESD1 se requiere a lo largo de todo el desarrollo de la planta y podría participar en la adquisición de competencia para florecer. Además, el locus ESD1 participa en la ruta de regulación de la floración mediada por fitocromo B. El locus EBS participa en diferentes procesos de desarrollo de la planta, desde la germinación al desarrollo de las flores. EBS reprime el desarrollo reproductivo y el efecto represor de éste gen podría llevarse a cabo mediante la regulación o interacción con los productos de los genes FT y FWA. Además, la expresión de los genes homeóticos APETALA3 y AGAMOUS está reprimida localmente por el producto génico de EBS. El efecto represor de éste gen podría realizarse indirectamente a través de la actividad de los genes FT y FWA. Por último, mediante clonaje posicional se ha identificado un fragmento de 27 kb candidato a contener la secuencia génica de EBS..