FISIOLOGIA ENDOCRINA

Autor: JONES BARBERA JONATHAN RICHARD.
Año: 2004.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNANDEZ.

Resumen: La diabetes es una de las enfermedades más comunes del mundo, con una prevalencia del 2-5% y en continuo crecimiento. El tratamiento de dicha enfermedad, actualmente incurable, consiste principalmente en dieta equilibrada, ejercicio fisico e inyecciones de insulina. Sin embargo, en los ultimos 5 años se ha conseguido trasplantar islotes pancreáticos en pacientes diabéticos con una tasa de éxito muy alta. Desafortunadamente, existe una gran falta de donantes, pudiendo cubrir unicamente el 1% de los casos de diabéticos. Por es necesario buscar fuentes alternativas para obtener células beta pancreáticas, como puede ser la diferenciación de células madre embrionarias hacia células productoras de insulina. En este trabajo se diseña un protocolo de diferenciación de células madre embrionarias de ratón hacia células productoras de insulina, empleando factores exógenos que dirijan la diferenciación de las células hacia un destino pancreático. A partir de estas células diferenciadas se seleccionan las células productoras de insulina mediante un plasmido que contiene el promotor del gen Nkx6.1, un factor de transcripción específico de la célula beta. Las células resultantes se analizarán a nivel génico mediante RT-PCR, a nivel proteico mediante inmunocitoquímica e radioinmunoanálisis, y funcional mediante estudios de secreción de insulina y trasplante en ratones diabéticos. Como resultado se obtuvieron células que producían insulina y respondieron frente a concentraciones estimulantes de glucosa. Al trasplantar en ratones diabéticos se conseguió normalizar sus glucemias durante todo el tiempo del experimento. Experimentos de inmunohistoquimica y el efecto en la glucemia tras retirar el trasplante mostraron que las células trasplantadas fueron las responsables de la normalización de la glucemia y no una posible regeneración de las células beta del ratón.

Autor: VIGO GAGO EVA M..
Año: 2003.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El óxido nítrico (NO) es un gas biológicamente activo sintetizado a partir de la L-arginina en casi todos los tipos celulares del organismo y que participa en diversos procesos, como la regulación del tono vascular, neurotransmisión y la citotoxicidad mediada por células. Debido a su bajo peso molecular y a su naturaleza lipofilica, el NO difunde rápidamente a través de las membranas lipídicas y de las celulares de bacterias y hongos. La magnitud y la duración de la síntesis de NO por las células determina que su acción sea fisiológica o patológica. Las acciones fisiológicas son medidas por pulsos de pequeñas cantidades de NO (10-12 M aprox.) producido transitoriamente por dos enzimas constitutivas, que fueron detectadas orgininariamente en células endoteliales (eNOS) y en neurones (nNOS). Las actividades patológicas son el resultado de la producción sostenida de altos niveles de NO (10-9 M) por parte de la enzima óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). Los macrófagos, células prototípicas de las NOS inducible, comienza a producir NO varias horas después de la estimulación con citoquinas. Así, la inhibición de la producción de NO en respuesta a estímulos inflamatorios sería una estrategia útil en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias. Puesto que los extractos de Eucalyptus globulus Labill, Thymus vulgaris L., Pinus sylvestris L y Plantago lanceolata L., han sido utilizados tradicionalmente en el tratamiento de bronquitis, asma y otras enfermedades inflamatorias, este trabajo se centró en el estudio de los efectos de estos extractos sobre la producción de NO inducido por la estimulación con lipopolisacárido (LPS) e interferon- (IFN- en la línea celular de macrófagos de ratón J774A.1 y en cultivos primarios de macrófagos peritoneales de ratón. Se evaluarón además los efectos sobre la viabilidad celular, expresión del ARNm de iNOS, expresión de la proteína iNOS y efecto scavenger o captador de radicales NO. Los resultados obtenidos demuestran que los cuatro extractos utilizados disminuyen de forma significativa la producción de óxido nítrico actuando a través de la inhibición de ARNm de iNOS. Además, tanto Eucalyptus globulus Labill., como Thymus vulgaris L., inhiben la expresión proteica de iNOS y poseen propiedades antioxidativas, a través de la captación de radicales NO. Pinus sylvestris L., y Plantago lanceolata L., no muestran un significativo efecto "scavenger" (captador de radicales NO), in inducen un decremento de la expresión proteica de iNOS. En conjunto, en el presente trabajo se demuestra que el pre-tratamiento con los extractos de Eucalyptus globulus Labill, Thymus vulgaris L., Pinus sulvestris L., y Plantago lanceolata L., en macrófagos de ratón estimulados con LPS+IFN- inhiben la producción de óxido nítrico y por tanto podrían ser utilizados como tratamiento de patologías respiratorias de tipo inflamatorio.

Autor: BALDELLI ROBERTO.
Año: 2003.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este estudio se pretende evaluar: 1,- La relación entre el estado de secreción de GH y los niveles de leptina en pacientes acrómegalicos antes y despés de seis meses de tratamiento con análogos de somatostatina. 2,- El efecto directo del eje somatotropo sobre la secreción de leptina en cultivo de tejido adiposo humano. PACIENTES, MATERIAL Y MÉTODOS 1,- CULTIVOS DE EXPLANTES Las muestras de tejido adiposo omental se obtuvieron tras intervenciones quirúrgicas abdominales. Los pacientes no estuvieron bajo ningún tipo de tratamiento conantibióticos en el momento de la cirugía abdominal y la presencia de neoplasia fue motivo de exclusión. El estudio fue aprobado por el Comité Ético del hospital y se solicitó el consentimiento de cada paciente participante en el estudio. El grupo de donantes de tejido comprendió 18 pacientes. Tras la intervención quirúrgica el tejido adiposo fue transportado inmediatamente al laboratorio bajo condiciones estériles, en una solución Krebs-Ringer-HEPES (KRH) con la siguientes composición en mM/I: NaCl, 125; KCI, 5; MgSO4, 1.2; CaCl2 2; KH2PO4, 1.2; glucosa, 6; HEPES, 25 (pH 7.4, ajustado con NaOH). Una vez el tejido en el laboratorio, se eliminaron vasos sanguíneos y tejido conectivo, se lavó con KRH, se cortó en fragmentos (300 a 400 mg de tejido por pocillo) y se realizaron varios lavados más con KRH hasta que el tejido estuvo totalmente limpio. Los fragmentos de tejido se colocaron en placas de 6 pocillos a las que se añadieron 2.5 ml de medio DMEM suplementado con bicarbonato sódico (3.7 g/l), glutamina (2mM), piruvato sódico (1mM),p enicilina (100 U/ml), estreptomicina (100 ug/ml) y suero fetal de ternera (0.5%). Tras un período de incubación de 24 horas a 37º C en un incubador de CO2 con un autocalibrado periódico (HERAEUS), bajo una atmósfera humidificada de 95% aire - 5% CO2, se aspiró el medio y se añadieron 2.5 ml de medio de cultivo fresco a cada pocillo, junto con el estímulo y vehículo apropiado para cada caso. Cada 8 horas se procedió a la estimulación por un total de 24 horas (3 estimulaciones). Una vez recogidas, las muestras se almacenaron inmediatamente a -20ºC hasta su posterior análisis. La cantidad de leptina secretada al medio de cultivo se determinó mediante radioinmunoensayo (LINCO Research, Inc). 2,- PACIENTES ACROMEGALICOS Y MÉTODOS En el estudio participaron 20 pacientes, 9H y 11M, con 42.2 +- 14.2 años de edad (media +- D.E.). Como diagnóstico bioquímico se valoraron los niveles de GH en plasma (11.0 +- 1.3 ng/ml) que no son suprimidos (mayor 1.0 ng/ml) durante la sobrecarga de glucosa; además se midieron los niveles de IGF-I (705.5 +- 66.2 ng/ml). Ninguno de los pacientes operados eran hipopituitáricos. Nueve pacientes fueron tratados con SR-lanreotida 30 mg (LAN) y once con octreotida-LAR 30 mg (LAR). El control de la enfermedad se obtuvo en los pacientes con niveles de GH menor 2.5 ng/ml y con niveles deIGF-I normales con respecto a las edades de los pacientes. 3,- RADIOINMUNOENSAYO DE LEPTINA HUMANO La cuantificación de la cantidad de leptina secretada al medio in vivo e in vitro, se realizó con kit comercial (Human Leptin RIA kit, Linco Research, Inc, St Charles) cuyo límite inferior de sensibilidad es de 0.5 ng/ml de leptina y cuyo límite superior es de 100 ng/ml, siendo el coeficiente de variación intraensayo de 8.3% y el interensayo de 6.2%. 4,- ANÁLISIS ESTADÍSTICO El IMC (índice de masa corporal) es el peso en Kg dividido por el cuadrado de la talla expresada en metros. La secreción de leptina se expresó como la cantidad de leptina secretada al pocillo por una muetras (ng/ml) mutliplicada por el volúmen total del mismo (2.5 ml) y dividido por los gramos de tejido es decir, ng de leptina/g tejido. El área bajo la curva se obtuvo por el método trapezoidal y se expresó como ng d eleptina por g de tejido a 96h. El análisis estadístico de los resultados obtenidos se realizó mediante una t-Student apareada en el caso de que las muestras a las que se realizaron distintos tratamientos procediesen del mismo pacientes. La correlación entre dos variables se llevó a cabo mediante el coeficiente de correlación de regresión simple. RESULTADOS 1,- EFECTO DEL EJE SOMATOTROPO SOBRE LA SECRECIÓN DE LEPTINA IN VITRO In vivo, en diversas situaciones patológicas, se observa una relación inversa entre los niveles de leptina y GH, como es el caso de la obesidad, del síndrome de Cushing, la malnutrición y la acromegalia entre otras. El tejido adiposo humano cultivado en presencia de GH a diferentes concentraciones (10-12, 10-10, 10-8 y 10-6M) mostró un claro efecto inhibidor sobre la secreción de leptina a las 48 h de secreción y a las dosis de 10-8 y 10-6 M. Se desconoce si la somatostatina ejerce algún papel relevante sobre la secreción de leptina. No se sabe si se puede actuar directamente sobre los adipocitos, o bien hacerlo indrectamente a através de otra shomonas. Si se sabe que existen receptores de somatostatina en el tejido adiposo. Con el fin de analizar si la somatostatina ejercía algún tipo de efecto sobre la secreción de leptina, el tejido adiposo fue cultivado en presencia de diferentes concentraciones de esta hormona, las mismas que en el caso de la GH, 10-12, 10-10, 10-8 y 10-6 M. Se observó un efecto inhibidor de la secreción de leptina a las 48 horas a la dosis de 10-6M. Se estudió también el efecto de IGF-I al ser este péptido el mediador natural de muchas de las acciones de la GH. En este caso el tejido adiposo fue estimulado, al igual que en los experimentos con somatostatina y GH, a dosis de 10-12, 10-10 y 10-8M a 48h, no observándose ningún tipo de efecto con ninguna de las dosis estudiadas. Se desconoce si la GHRG ejerce algún papel directo sobre la secreción de leptina. No sabemos si puede actuar directamente sobre los adipocitos, o indirectamente a través de la GH. Con el fin de analizar si la GHRH ejercía algún tipo de efecto sobre la secreción de leptina, el tejido adiposo fue cultivado en presencia de diferentes concentraciones de esa hormona, 10-12, 10-10 y 10-8M. Se observó un efecto inhibidor de la secreción de leptina a los 48 horas a la dos dosis (10-12 y 10-8M). In vivo, en diferentes condiciones fisio-patológicas, se observa un papel directo de los segretagogos de GH en el determinar un aumento de masa grasa corporal. Tratando de dilucidar la posibilidad de que los secretagogos de GH puedan actuar de algún modo sobre los mecanismos de regulación de la secreción in vitro de leptina, se cultivaron explantes de tejido adiposo humano y el tejido adiposo humano cultivado enp resencia de GHRP-6 a diferentes concentraciones (10-12, 10-10 y 10-8M) mostró un claro efecto inhibidor sobre la secreción de leptina a las 48 horas de secreción y a la dosis de 10-8M. 2,- EFECTO DE EL EJE SOMATOTROPO Y DE LA TERAPIA CON ANALOGOS DE SOMATOSTATINA SOBRE LA SECRECIÓN DE LEPTINA EN PACIENTES AGROMEGALICOS En los 20 pacientes los niveles circulantes de GH y IGF-I disminuyeron significativamente después de 6 meses de tratamiento con los análogos de somatostatina (P menor 0.0005 vs.tiempo basal). La diferencia de leptina basada en el sexo se midió antes y después de la terapia, con niveles más elevados en mujeres que en hombres (p menor 0.05). Los niveles de leptina aumentaron durante el tratamiento, tanto en hombres como en mujeres (p menor 0.005, ambos). En condiciones basales los valores de leptina no se correlacionaron con el IMC (r=0.058, p=0.8) aunque después de la terapia si se encontró esta correlación (r=0.501, p menor 0.05). DISCUSIÓN Una vez realizados los estudios de secreción espontánea de leptina por el tejido adiposo (Menendez, 2000), nos planteamos estudiar el efecto de las diferentes hormonas que componen el eje somatotropo sobre los mecanismos de regulación de la secreción de leptina. En trabajos anteriores, nuestro grupo analizó el papel de distintas hormonas (Casabiell, 1998; Piñeiro, 1999) sobre la secreción in vitro de leptina. En el presente trabajo se ha analizado la influencia de diferentes hormonas del eje somatotropo (GH, GHRH, Somatostatina, GHRP-6, IGF-I). En cuanto a esta posible relación entre leptina y el eje somatotropo, se han publicado varios estudios que sugieren la existencia de una interacción entre leptina, GH, somatostatina e IGF-I, que podría además tener relevancia patológica. En la obesidad, los niveles de GH y de proteínas transportadoras de IGF-I disminuyen, haciendo que los niveles de IGF-I libres aumenten (Scacchi, 1999). En condiciones de ayuno en humanos se produce una marcada disminución de los niveles de leptina circulante, mientras que la secreción de GH aumenta (Ahima, 1996;Hartman, 1992). Por otra parte, la administración de GH provoca una pérdida neta de tejido adiposo así como un aumento del gasto energético (De Boer, 1995). Es posible que la leptina ejerza un efecto inhibidor sobre la secreción de GH que explicaría los elevados niveles de leptina y los bajos niveles de GH observados en pacientes obesos. Esto podría estar mediado por una acción hipotalámica de la leptina. Al mismo tiempo, se ha demostrado que la leptina inhibe la síntesis y secreción de GH. Además, los receptores de leptina a nivel hipofisario parecen regular positivamente la secreción de GH, al mismo tiempo que el receptor de leptina parece estar positivamente regulado por GHRH. La leptina también se expresa y se sintetiza en la hipófisis. Se ha encontrado localizada en células hipofisarias junto con la GH, entre otras hormonas. Los estudios realizados en roedores muestran resultados diferentes respecto a los obtenidos en humanos ya que la regulación del eje somatotropo es diferente en las dos especies; han sido, sin embargo, de gran utilidad al observarse que la leptina participa en la regulación de la secreción de GH al igual que sucede en humanos. Hasta el momento no existía una explicación del efecto de la GH sobre la secreción de leptina. Todos los datos parecían indicar la existencia de un efecto inhibidor; sin embargo, no estaba claro si este efecto se ejercía directamente sobre el tejido adiposo o si se trataba de un efecto inidirecto debdio a la estimulación de la lipolisis a nivel de los adipocitos. En un intento de clarificar este punto, se optó por realizar una estimulación del tejido adiposo con diferentes concentraciones de GH, somatostatina, GHRH. GHRP-6 y IGF-I, analizando el efecto de estas hormonas sobre la secreción de leptina al medio de cultivo. Los resultados obtenidos muestran un comportamiento inhibidor de la GH, GHRH, GHRP-6 y SMS sobre la secrección de leptina y ningún tipo de efecto en respuesta al IGF-I. Para explicar las alteraciones de los niveles de estas hormonas presentes en determinadas situaciones patológicas humanas se podría sugerir, a la vista de estos resultados in vitro y in vivo, la siguiente hipótesis; por una parte, los pacientes acromegálilcos tienen elevados niveles de GH en plasma mientras que los de leptina son bajos, esta situación se podría explciar como consecuencia de un efecto directo de la GH sobre sus receptores en el adipocito inhibiendo la secreción de leptina. El tratamiento con análogos de somatostatina determina una disminución significativa de los niveles plasmáticos de GH y un concomitante aumento de los niveles de leptina. Las diferencias de leptina basadas en el sexo se observan tanto antes como después de el tratamiento. La leptina no se correlaciona con el IMC en condiciones basales, mientras que después de la terapia con análogos de somatostatina, esta correlación se restablece. Es posible que los niveles bajos de leptina en condiciones basales se deben a distintos mecanismos como: A,- Un aumento en la masa magra y a una disminución de la masa grasa. B,- El efecto de la GH. C,- Alteraciones en la secreción de la insulina. CONCLUSIONES Como conclusión de este trabajo se puede afirmar: 1,- El posible papel de la leptina como marcador de eficacia clínica y bioquímica de el tratamiento con análogos de somatostatina en los pacientes acromegalicos. 2,- La posbile acción directa del eje somatotropo sobre la secreción in vitro de leptina por tejido adiposo humano.

Autor: FERNÁNDEZ PASCUAL SERGIO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La L-glutamina, que carece de capacidad secretora alguna, es, sin embargo, metabolizada por islotes pancreáticos a velocidad equiparable a la de la D-glucosa, el secretagogo fisiológico de insulina. La L-glutamina origina, durante su metabolismo en islotes, grandes cantidades de L-glutamato, L-aspartato y GABA. Este GABA es sintetizado a partir de L-glutamato por acción de la Glutamato Ácido Decarboxilasa (GAD). Este enzima, en su isoforma de 65 KDa, es el antígeno de mayor prevalencia en la Diabetes Mellitus de tipo I (insulino-dependiente, o Diabetes infantil). La L-glutamina potencia la secreción estimulada por determinados alfa-cetoácidos ramificados, alfa-aminoácidos y la propia D-glucosa, lo que se acompaña con un descenso en los niveles intracelulares de GABA procedente del metabolismo de la L-glutamina. Este descenso de GABA intracelular es debido a un aumento del metabolismo del aminoácido y no al aumento de su liberación mediante exocitosis de microvesículas de tipo sináptico (SLMVs). El aumento de los niveles intracelulares de GABA mediante derivados permeabilizados (etil o metil ésteres) de GABA (o su análogo estructural, la beta-alanina) provoca una fuerte inhibición de la secreción de insulina, así como la inhibición de la oxidación de D-glucosa, la velocidad de glicolisis y la fosforilación del monosacárido, sin afectar al metabolismo del piruvato en el ciclo de Krebs. Este efecto metabólico del aumento de los niveles intracelulares de GABA, es la consecuencia del consumo de ATP por el transporte de la amina a SLMVs, proceso que compite con el cierre de los canales de potasio sensibles a ATP. La consecuencia final de la competencia entre ambos procesos que requieren ATP es la no despolarización de la membrana plasmática en respuesta a estímulos secretores, lo que produce la inhibición de la exocitosis de los gránulos de secreción que contienen insulina.

Autor: GARCIA SAN FRUTOS MIRIAM.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: PABELLON DOCENTE, HOSPITAL RAMON Y CAJAL..
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Está ampliamente establecido que la tasa de secreción de la hormona de crecimiento (GH) disminuye con el envejecimiento. La hormona de crecimiento está integrada en un complejos circuito de regulación, en el que participan el SNC, el nivel hipotalámico, el nivel hipofisario y el nivel periférico, por lo que es necesario dilucidar cuáles son los mecanismos, y a qué nivel se producen los cambios responsables de la disminución de GH en el envejecimiento. El objetivo principal de este trabajo fue dilucidar qué mecanismos hipofisarios son responsables de la disminución de GH en el envejecimiento: -Para describir los posibles cambios del sistema GH-IGF-I en el envejecimiento, se realizaron estudios in vivo, en el que utilizamos ratas Wistar macho de 3 meses de edad, equivalentes a ratas jóvenes; de 11 meses de edad, equivalentes a ratas adultas de mediana edad y ratas de 24 meses, equivalentes a ratas viejas. -Para estudiar la sensibilidad de las células somatotropas a señales reguladoras de GH en el envejecimiento, como la respuesta a GHRH, a secretagogos (ghrelina y GHRP-6), a SS y a IGF-I se realizaron estudios in vitro, en el que utilizamos cultivos primarios mixtos de células adenohipofisarias de ratas jóvenes (3 meses) y viejas (24 meses). Los resultados confirman que la edad regula fisiológicamente toda cascada de componentes del sistema GH-IGF-I, confirmándose que en la rata vieja se produce una disminución en la actividad de este sistema endocrino que incluye: disminución de la expresión génica de GHRH y SS hipotalámicos, y disminución de su contenido péptico en hipotálamo y en eminencia media; descenso de la expresión génica de GH en hipófisis, con la consiguiente disminución del contenido de GH-IR hipofisaria; caída de los niveles circulantes de GH; menor expresión de IGF-I en hígado y disminución de IGF-I circulante. Por lo que se podría considerar el envejecimiento como un modelo fisiológico de déficit parcial de GH. No se han encontrado cambios en la expresión hipofisaria de Pit-1 y CREB que pudieran relacionarse con la menor expresión del gen de GH con la edad. Se demuestra la disminución de la expresión hipofisaria de los receptores de GHRH, de secretagogos, y de sstr2 y 5, sin que se modifique la del receptor IGF-I, manteniéndose la capacidad de respuesta de las células hipofisarias de ratas viejas a sus ligandos en porcentaje respecto a los niveles basales de cada grupo de edad. Se demuestra un aumento de la expresión hipofisaria de IGF-I, que podría relacionarse, al menos parcialmente, con la disminución de GH en el envejecimiento. También se podría descartar una disminución en el número de células somatotropas como mecanismo implicado en la disminución de GH en el envejecimiento. Estos datos permiten concluir, que en el envejecimiento no se produce una alteración primaria hipofisaria que pudiera ser responsable del déficit de GH, y que una menor expresión y secreción de GHRH hipotalámico sería el acontecimiento primario de las alteraciones del sistema GH-IGF-I que ocurren en el envejecimiento.

Autor: KANINDA TSHILUMBU JOHN PATRICK .
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Desde hace mucho tiempo se sabe que la hormona tiroidea (T3) juega un papel importante en la regulaicón del metabolismo general, crecimiento y diferenciación de diversos tipos celulares. También, uno de los efectos más coocidos de T3 es su regulación de la funcionalidad mitocondrial. Aunque este efecto sobre la mitocondria ha sido muy estudiado en tejidos como el hígado, se sabe mucho menos sobre su acción en las mitocondrias de cerebro, un órgano que precisamente es muy dependiente del estado tiroideo durante el desarrollo. Datos previos del laboratorio han mostrado que la T3 es un importante regulador tanto de la expresión del genoma mitocondrial como de la funcionalidad de la mitocondrial Tfam, una proteína muy importante en la biogénesis de la mitocondria, podría estar regulado por T3 en cerebro y por tanto actuar de mediador de la acción de esta hormona sobre las mitocondrias de este órgano. Hemos demostrado que los niveles de mRNA y proteína Tfam están disminuidos en el cerebro de neonatos hipotiroideos y que estos niveles se recuperan después de un tratamiento con T3, lo que indica que esta hormona es la causante de esta regulación. Hemos demostrado también que la T3 induce la expresión del gen Tfam en células de neuroblastoma, estando las secuencias responsables de esta activación localizadas en un fragmento comprendido entre los nucléotidos -145/+1 y que también existe una secuencia localizada entre los nucleótidos -1239/-1212 que es capaz de mediar el efecto de esta hormona. El efecto de T3 sobre el promotor de Tfam es específico de la isoforma TRbeta1 del receptor de T3. También, otros ligandos de receptroes nucleares como vitamina D3 (VD3) y ácido todo-trans retinoico (AR) son capaces de activar la expresión de Tfam, mientras que 15 deoxy-* 12,14 -prostaglandina J2 (15d-PGJ2), ligando del receptor nuclear PPARgamma, inhibe significativamente la actividad de este promotor. Finalmente hemos observado una interacción entre las rutas activadas por los receptores nucleares de T3, AR y VD3 y rutas de señalización extracelulares. En concreto mostramos que todas las rutas de señalización analizadas (PKA,PKC, MAPKs y PI-3K) activan al heterodímero RXRalfa/TRbeta1 vacío, mientras que todas ellas, menos PI-3K bloquean el efecto de T3 sobre el promotor de Tfam. Estas rutas de señalización interfieren también de diversas maneras sobre el efecto de VD3 y AR sobre dicho promotor mientras que no modifican el efeto de 15 deoxy-* 12,14-prostaglandina J2.

Autor: BORRÁS BLASCO CONSUELO.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: Uno de los mayores logros del siglo XX es el aumento de la esperanza de vida de la población humana. En Europa, ésta se ha duplicado entre 1900 y 1992. En todos los casos la esperanza de vida de las mujeres supera a la de los hombres. De hecho, en España en 1900, la esperanza de vida para los hombres era de 33.7 años y para las mujeres de 35.1, es decir, un 3.8% superior en mujeres frente a hombres. En 1992 la esperanza de vida de los hombres era de 73.7 años, mientras que la de las mujeres era 83.8, lo cual supone un 9.9% más en las mujeres que en los hombres. La base de la diferencia de esperanza de vida entre machos y hembras está aún por esclarecer. Este fenómeno no es atribuible a diferencias sociológicas, puesto que también se produce en otras especies. En nuestro laboratorio, las ratas Wistar hembras muestran un 16% más de vida media que las ratas Wistar machos. En la presente tesis demostramos que las diferencias de longevidad entre machos hembras tienen una base biológica: los estrógenos suponen una ventaja ante la supervivencia de las hembras, puesto que inducen la expresión de enzimas antioxidantes, y ello las protege frente al estrés oxidativo, y por tanto les confiere una mayor longevidad. Así pues, el estrés oxidativo contrado en los machos es superior al de las hembras. Se determinó la producción de peróxido de hidrógeno en mitocondrias hepáticas y cerebrales (sinápticas y no sinápticas) aisladas de machos y hembras y observamos que las procedentes de los machos producen una cantidad significativamente superior de peróxido de hidrógeno. Asimismo, los niveles del antioxidante endógeno glutatión reducido son mayores en las mitocondrias procedentes de las hembras en comparación con los machos. A consecuencia del mayor estrés oxidativo en los machos, el DNA mitocondrial de los mismos está hasta cuatro ves más oxidado que el de las hembras. El aumento de este parámetro está asociado a una menor longevidad. Todo ello se puede explicar porque las hembras se comportan como dobles transgénicos, que sobreexpresan las enzimas antioxidantes glutatión peroxidasa y manganeso superóxido dismutasa. Además la expresión del marcador de envejecimiento 16S rRNA está disminuida en los machos en comparación con las hembras, lo cual supone que con una misma edad cronológica, las hembras poseen una edad biológica menos que los machos, es decir son más jóvenes que los machos. Otro parámetro relacionado con la longevidad que determinamos es la actividad telomerasa, la cual además posee un elemento de respuesta a estrógenos, y obtuvimos que las hembras poseen una actividad telomerasa superior en comparación con los machos. Por otro lado, los estudios in vitro realizados en la presente tesis, empleando un cultivo celular de células MCF7, que provienen de carcinoma mamario, indican que el mecanismo por el cual los estrógenos inducen la expresión de enzimas antioxidantes está mediado tanto por los receptores estrogénicos, como por la activación de la vía de señalización de las MAP Kinasas. Además, los efectos antioxidantes del estradiol son mimetizados por la genisteína, el fitoestrógeno más abundante presente en la soja. La importancia de este hecho recae en este caso, la genisteína no sólo no posee efectos cancerígenos, sino que previene el desarrollo de diversos cánceres como el mamario o el de próstata.

Autor: RAMOS JOSEMARIA BELÉN.
Año: 2002.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD VETERINARIA.

Resumen: Fosfatidilcolina (PtdCho), fosfolípido mayoritario de la membrana. En los últimos años, se ha visto que su inhibición resulta citotóxica. Por otra parte, ceramida esta metabolicamente relacionada con la PtdCho a través de la esfingomielina síntasa. El uso de análogos de ceramide de cadena corta, como C2-ceramida, ha sido ampliamente utilizado en el estudio de la señalización de ceramida endógena, incluyendose también su uso como estímulo apoptótico. Para nuestros estudios hemos utilizado C2-ceramida como estímulo citotóxico en células de neurobastoma NB16. Observamos que C2-ceramida induce citotoxicidad por mecanismos principalmente necróticos, aunque un pequeño porcentaje de células presentaban fenómenos apoptóticos. Además, C2-ceramida activaba la caspasa iniciadora 8 y la efectora 3, y sin embargo su inhibición no prevenía los efectos tóxicos de la C2-ceramida, por lo que concluimos que la activación de caspasas no era un prerequisito en la cascada citotóxica de C2-ceramida. Por otra parte, describimos que la citotoxicidad inducida por C2-ceramida en neuronas granulares de cerebelo podía prevenirse por la adición de PtdCho exógena y a su vez, C2-ceramida inhibía tempranamente la síntesis de PtdCho, atribuyendo los efectos tóxicos de C2-ceramida a la inhibición de la síntesis de PtdCho. Siguientes estudios en células COS-7 para dilucidar el paso concretamente inhibido en la ruta de síntesis de PtdCho por C2-ceramida, nos llevó a concluir que el paso inhibido era el segundo, correspondiente a la CTP: fosfocolina citidililtransferasa (CCT). Además, pudimos demostrar que esta inhibición era directa. En contraposición, análogos de ceramida de cadenas más largas resultaron menos o nada efectivos en la inhibición de esta enzima. Estos resultados sugieren que la señalización de ceramida endógena esta mediada por diferentes mecanismos que la de C2-ceramida. Finalmente, hemos descrito que la inhibición de la CCT por C2-ceramida es a través de la alteración de la unión de CCT a la membrana, donde es plenamente activa, basándose este mecanismo de inhibición de la teoría de estrés de la curvatura elástica de la membrana. Además, observamos como C2-ceramida induce la translocación de CCTalfa al núcleo, el cual se considera reservorio de la forma inactiva de esta enzima. La última parte de esta tesis doctoral se centró en la dilucidación de la regulación de la síntesis de PtdCho a través de la localización subcelular de la CCT en dos condiciones diferentes: bloqueo de señales mitogénicas y tratamientos con el citoprotector litio. Observamos que la inhibición de la ruta de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MEK/ERK), inhibía la síntesis de PtdCho y llevaba a la acumulación de la CCT en núcleo; sin embargo, tratamientos con litio activaban la síntesis de PtdCho y hacían que disminuyese la localización nuclear de la CCt. Por tanto, la localización de la CCT parece estar regulada por señales que también regulan la síntesis de PtdCho.

Autor: MUKALA NSENGU TSHIBANGU ANDRE.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El objetivo general de este trabajo de tesis doctoral fue investigar hasta qué punto la capacidad secretora de insulina por parte del estimulante fisiológico más importante, glucosa, podría remedarse cualitativa y cuantitativamente con sustratos de metabolización exclusivamente mitocondrial, sorteando la obligatoriedad de la glicolisis que se encuentra afectada en algunos casos de diabetes (MODY de tipo II). La impermeabilidad de algunos intermediarios dicarboxílicos del ciclo de Krebs en la membrana plasmática, como el ácido succínico ó SAD). El SAD estimuló de forma dosis-dependiente una secreción bifásica mantenida de secreción de insulina en islotes perifundidos de rata. Esta respuesta secretora, así como la de la glucosa, fue disminuida en un porcentaje similar al de la decarboxilación de (2- 14C)piruvato por el dimetiléster derivado del ácido malónico (MAD), un inhibidor competitivo del a succínico deshidrogenasa mitocondrial. Sin embargo, el inhibidor no modificó la velocidad de glicolisis medida como la producción de 3H2O a partir de D-(5-3H)glucosa 20 mM. La combinación de dos sustratos "mitocondriales", como SAD y piruvato, permitió alcanzar hasta un 70% de la respuesta secretora máxima obtenida por un estímulo óptimo de glucosa. El SAD elevó el calcio citosólico e indujo oscilaciones rápidas del mismo de forma similar a la glucosa en islotes aislados de ratón. Mientras que el MAD inhibió tanto la elevación del calcio citosólico como sus oscilaciones en respuesta a SAD, sólo sumprimió las oscilaciones pero mantuvo los niveles medios de calcio citosólico en presencia de glucosa. La glicolisis parece ser capaz de mantener por si sola unos valores elevados de calcio citosólico. La L-glutamina, otro sustrato "mitocondrial", se metaboliza bien en las células de los islotes (producción de 14CO2 a partir de L-alfa-aminoácido marcado) y elevada las concentraciones intracelulares de L-aspartato, L-glutamato y GABA pero no estimula la secreción de insulina. Se concluye que la L-glutamina, cuya concentración plasmática es relativamente elevada con respecto a las de otros L-alfa-aminoácidos, es efizcamente transportada y metabolizada en las células beta de los islotes pancreáticos pero es convertida mayoritariamente a GABA y es pobremente oxidada en el ciclo de Krebs, siendo esta la causa de su falta de capacidad secretora.

Autor: RODRÍGUEZ RODRÍGUEZ SANTIAGO.
Año: 2002.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTADE DE MEDICINA.

Resumen: El glutamato es el principal aminoácido excitatorio del sistema nervioso central. Este aminoácido ejerce sus acciones a través de receptores específicos presentes en neuronas postsinápticas, los cuales se dividen en receptores metabotrópicos e ionotrópicos. Los receptores ionotrópicos del glutamato (iGluRs) poseen un canal iónico en su estructura y se divide en receptores delta, AMPA (AMPARs), KA (KARs) y NMDA (NMDARs). Estos tres últimos se hallan presentes como en hipófisis como en el hipotálamo. A este nivel estos receptores participan en la regulación de múltiples hormonas entre las que se encuentra la hormona de crecimiento (GH), si bien se desconoce a través de que vías (directamente sobre la hipófisis, donde se encuentran las células secretoras de GH, y/o sobre el hipotálamo, donde se produce el principal péptido estimulador de GH, GHRH, y el principal péptido inhbidor de GH, somatosatina (SS)) estos receptores actúan sobre GH. Con este objetivo elaboramos diferentes modelos experimentales in vivo e in vitro donde evaluamos como la manipulación de los iGluRs afecta a la secreción de GH y a la expresión génica de GHRH y SS. Adicionalmente se evaluó si las acciones de estos recptores, al igual que lo que ocurre en la regulación de otras funciones, están mediadas por el óxido nítrico (NO), el cual por datos previos obtenidos en nuestro laboratorio sabíamos que participa en la regulación de GH a través de SS. Nuestros datos nos permiten concluir que los AMPARs estimulan la secreción de GH, a través de la liberación de GHRH hipotalámica, a pesar de que a nivel hipofisario estos receptores ejercen una inhibición tónica de dicha secreción. Los KARs también estimulan la secreción de GH a través de la liberación de GHRH hipotalámica. Por otra parte, los NMDARs son fundamentales para una correcta secreción de GH ejerciendo un efecto positivo sobre dicha secreción a través de la modulación de la liberación de GHRH y de SS hipotalámicas. Además, la vía de los NMDARs y del NO sobre SS son independientes. Finalmente, observamos que el bloqueo de los NMDARs inhibe la expresión génica de GHRH hipotalámica.

Autor: DIZ CHAVES YOLANDA M..
Año: 2002.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Autor: QUESADA PEINADO M. CARMEN.
Año: 2002.
Universidad: JAEN .
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: Es conocida la importancia de la relación entre enzimas proteolíticos y el cáncer de mama, no sólo por su implicación en el desarrollo de la enfermedad, sino también su participación en el proceso de matástasis. Las aminopeptidasas (AP) son un grupo enzimático al que no se ha prestado demasiada atención en relación a la capacidad invasora y de metástasis tumoral. Se ha demostrado su relación con múltiples factores hormonales implicados en el cáncer de mama, y de ahí, la importancia de estudiar su papel en esta enfermedad. De acuerdo con todo lo anterior, el diseño de la presente investigación se basa en primer lugar en los estudios previos, sugerentes de la influencia de los esteroides en la actividad aminopeptidásica. Por lo tanto, pretendemos analizar el comportamiento de estos enzimas en voluntarias sanas y en pacientes con cáncer de mama, en relación al estado hormonal de la mujer, tanto en condiciones anteriores, como posteriores a la menopausia. Por otro lado, la cirugía mamaria supone una importancia trangresión que bien pudiera influiren el estado hormonal y metabólico de la paciente y, consecuentemente, en la actividad aminopeptidásica. Por lo tanto, analizaremos la actividad sérica de las AP antes del proceso quirúrgico, en el momento de finalizar la extirpación mamaria y tres días después de la cirugía. Además, la utilización de la quimioterapia con carácter neoadyuvante, previa al tratamiento quirúrgico en algunas pacientes, supone una importante agresión al organismo de la mujer afectado gravemente a la función hepática y renal, entre otros. Dicha agresión supone cambios en la función metabólica que presumiblemente podrán modificar la actividad aminopeptidásica. Puesto que las PA son importantes reguladores de la función de diversas horomonas peptídicas, su modificación, debida a las condiciones que supone la existencia de un cáncer de mama, podría reflejar el estado funcional de las hormonas que metabolizan. Por tanto, para evaluar el papel clínico de estos enzimas en el cáncer de mama, se determinarán seis actividades de aminopeptidasas (alanina-, argininia-, cistina-, aspartato-, glutamato- y piroglutamato aminopeptidasa) en suero de voluntarias premenopáusicas y postmenopáusicas sanas, así como en esuero de pacientes premenopáusicas y postmenopáusicas diagnosticadas de cáncer de mama, en el mismo rango de edad, sometidas o no a quimioterapia antes del tratamiento quirúrgico, y a las que se extraerán las muestras de suero antes de la extirpación, inmediateamente después de la cirugía y tres días después de ésta. Simultáneamente, y con objeto de llevar a cabo un análisis comparativo, así como estudiar posibles relaciones con la actividad AP, realizaremos un amplio estudio a nivel sérico de diversos parámetros bioquímicos, incluyendo las principales hormonas. En resumen, según el diseño anteriormente expuesto, de la presente investigación se derivarán las siguientes observaciones: * Efecto de las condiciones de pre- y postmenopausia en voluntarias sanas y en pacientes con cáncer de mama. * Efecto de la quimioterapia. * Efecto del estado periquirúrgico. * Efecto del cáncer de mama en pre- y postmenopaúsicas. 1,- La comparación entre los grupos de premenopáusicas y psotmenopáusicas sanas, de los diferentes parámetros analizados en suero, demuestra que el grupo de postmenopáusicas presenta mayores niveles de sodio, potasio, LDL-colesterol, fosfatasa alcalina, lactato deshidrogenasa, adenosín deaminasa, colinesterasa, hormona folículo estimulante, hormona luteotropa y piroglutamato aminopeptidasa. Sin embargo, el cociente LH/FSH, el estradiol y la progesterona son menores en postmenopáusicas. El resto de parámetros estudiados no muestra diferencias entre ambos grupos. Estos resultados podrían sugerir que los esteroides sexuales ejercen un efecto esencialmente inhibidor durante el período gonadal funcional de la mujer. 2,- La comparación entre pacientes premenopáusicas y postmenopáusicas sin o con tratamiento quimioterápico demuestra: 1º,- Que la mayoría de las diferencias observadas en condiciones fisiológicas entre mujeres pre y postmenopáusicas se pierden en presencia de cánder de mama. 2º,- Que entre las pacientes que no han recibido quimioterapia, las postmenopáusicas muestran mayores niveles de lactato deshidrogenasa, adenosín deaminasa, hormona foliculo estimulante, hormona luteotropa y alanina aminopeptidasa y menores de estradiol y progesterona. Sin embargo, entre las pacientes que recibieron quimioterapia, las postmenopáusicas muestras mayores niveles de adenosin deaminasa pero menores de hormona folículo estimulante, de hormona luteotropa, del cociente LH/FSH y de cistina aminopeptidasa. El resto de parámetros no muestra diferencias. Estos resultados sugieren que en las diferencias observadas intervienen, no sólo la influencia de las condiciones derivadas de la existencia del cáncer de mama, sino también el efecto del tratamiento quimioterápico. 3,- La comparación entre pacientes que han recibido quimioterapia y las que no han recibido demuestra: 1º,- Que en las pacientes que han recibido quimioterapia incrementan los niveles de lactato deshidrogenasa, adenosin deaminasa, glutamato piruvato transaminasa, hormona folículo estimulante, hormona luteotropa, alanina aminopeptidasa y cistina aminopeptidasa, y disminuye los de estradiol. 2º,- Que en las pacientes postmenopáusica, la quimioterapia incrementa adenosin deaminasa, glutamato piruvato transaminasa y del cociente colesterol/HDL, y disminuye los del HDL-colesterol, apolipoproteína A1, amilasa y proteíans totales. Estos resultados demuestran que la quimioterapia modifica los niveles de diversos parámetros y que, excepto en el caso de ADA y GPT, esa influencia depende de la que las gónadas de la paciente estén o no funcionalmente activas. 4,- La comparación entre las muestras de suero obtenidas en el properatorio inmediato a la cirugía, sin haber anestesiado aún a la paciente (toma 1), inmediatamente después de la cirugía, con la paciente aún bajo el efecto de la anestesia (toma 2) y tres días después de la cirugía (toma 3), demuestra: 1º,- Que los pacientes premenopáusicas sin quimioterapia muestran en la toma 2 un incremento de potasio, prolactina y hormona tiroidea y un descenso de los niveles de proteínas totales, y en la toma 3 un descenso de hierro, bilirrubina total y cortisol. 2º,- Que las pacientes premenopáusicas con quimioterapia muestrasn un aumento de creatin fosfokinasa, prolactina y hormona tiroidea en la toma 2, y un descenso d ehormona estimulante del tiroides en la toma 3. 3º,- Que las pacientes postmenopáusicas sin quimioterapia presentan en la toma 2 un incremento de potasio, prolactina, beta-endorfina y hormona tiroidea y un descenso de proteínas totales, colinesterasa y piroglutamato aminopeptidasa, y en la toma 3 un incremento de glucosa y un descenso de hierro, HDL-colesterol, apolipoproteía-A1, proteínas totales, lactato deshidrogenasa y creatin kinasa MB. 4º,- Que las pacientes postmenopáusicas con quimioterapia presentan en la toma 2 un incremento de potasio, prolactina, beta-endorfina, vasopresina y hormona tiroidea y un descenso de proteínas totales y colinesterasa, y en la toma 3, un aumento de cloruros y un descenso de colesterol, LDL-colesterol, apolipoproteína B, proteínas totales, lactato deshidrogenasa, cratin kinasa MB, hormona estimulante del tiroides y cortisol. Estos resultados sugieren la importancia de la influencia de la anestesia y/o del estrés quirúrgico en la analítica de las pacientes. 5,- La comparación entre controles de premenopáusicas y la toma 1 de los distintos grupos de pacientes con cáncer de mama demuestra: 1,- Que las pacientes premnopáusicas sin quimioterapia presentan mayores niveles de amilasa, cortisol y ArgAP, y menores de cloruros, glutamato piruvato transaminasa, creatín fosfo kinasa, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas y beta-endorfina. 2º,- Que las pacientes premenopáusicas con quimioterapia presentan mayores niveles de lactato deshidrogenasa, adenosin deaminasa, hormona foliculo estimulante, hormona luteotropa, cortisol, AlaAP, ArAP, CysAP y AspAP, y menores de cloruros, creatin fosfo kinasa, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas y beta endorfina. 3º,- Que las pacientes postmenopáusicas sin quimioterapia presentan mayores niveles de sodio, urea, lactato deshidrogenasa, adenosin deaminasa, amilasa, hormona folículo estimulante, hormona luteotropa, cortisol, AlaAP y ArgAP, y menores de cloruros, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas, beta-endorfina, estradiol y progesterona. 4º,- Que las pacientes postmenopáusicas con quimioterapia presentan mayores niveles de triglicéridos, apolipoproteína-B, cociente colesterol/HDL, adenosin deaminasa, glutamato piruvato transaminsa, hormona folículo estimulante, hormona luteotropa, cortisol, AlaAP, ArgAP, GluAP y pGluAP y menroes de cloruros, HDL-colesterol, creatin fosfo kinasa, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas, cocientes LH/FSH, beta-endorfina, estradiol y protesterona. 6,- La comparación entre controles de postmenopáusicas y la toma 1 de los distintos grupos de pacientes con cáncer de mama demuestra: 1º,- Que las pacientes premenopáusicas sin quimioterapia muestran mayores niveles de bilirrubina total, -nucleotidasa, amilasa, cociente LH/FSH, estradiol, progesterona, cortisol y ArgAP, y menores de potasio, cloruros, LDL-colesterol, lactato deshidrogenasa, glutamato piruvato transaminasa, creatín fosfo kinasa, creatín kinasa MB, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas, hormona folículo estimulante, hormona luteotropa, beta-endorfina, AspAP y GluAP. 2º,- Que las pacientes remenopáusicas con cáncer de mama presentan mayores niveles de 5-nucleotidasa, hormona luteotropa, cociente LH/FSH, cortisol, AlaAP, CysAP^y ArgAP, y menores de cloruros, creatín fosfo kinasa, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas y beta-endorfina. 3º,- Que las pacientes postmenopáusicas sin quimioterapia muestran mayores niveles de 5-nucleotidasa, glutamato piruvato transaminasa, amilasa, cociente LH/FSH, cortisol, AlaAP y ArgAP, y menores de cloruros, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas y beta-endorfina. 4º,- Que las pacientes postmenopáusicas con quimioterapia presentan mayores niveles de triglicéridos, cociente colesterol/HDL, lactato deshidrogenasa, 5-nucleotidasa, adenosín deaminasa, cortisol, AlaAP y ArgAP, y menores de cloruros, HDL-colesterol, proteínas totales, colinesterasa, hormona liberadora de gonadotropinas, hormona folículo estimulante y beta-endorfina.

Autor: CARRAMIÑANA BARRERA FRANCISCO.
Año: 2001.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El objetivo de este estudio es la deteccion y caracterizacion en la zona de salud de Zafra (Badajoz) de los componentes del sindrome metabolico en relacion con la diabetes tipo 2, nalizando la importancia del cuidado integral de estos pacientes desde la Atencion Primaria. Para ello hemos estudiado el grado de obesidad, distribucion de la grasa corporal, tension arterial, acido urico y grado de control glucemico y lipidico, con el fin de identificar los factores de riesgo precursores del sindrome metabolico. Asimismo se han determinado los marcadores. Insulina, Pepetido C, PAI-I con el objeto de valorar estos marcadores y analizar sus relaciones con el resto de parametros, observando su posible implicacion en el desarrollo del sindrome metabolico. Los individuos estudiados eran sujetos normales, obesos, diabeticos tipo 2 y sujetos con intolerancia a la glucosa. Siendo la edad media de 65 años. Hemos encontrado correlacion de la edad con la presion arterial sistolica, glucosa pospandrial, hemoglobina glicada, creatinina, indice cintura-cadera, insulinemia basal y resistencia insulinica, en forma inversacon el colesterol en HDL. Encontramos que la glucemia pospandrial es mejor marcador con respecto al sindrome metabolico, especialmente en sujetos normales y diabeticos. Encontramos la mayor proporcion de hiperinsulinemia en los varones con ITG. Los valores mas elevados de leptina se encuentran en la poblacion obesa y diabeticos. Encontrandose los valores.

Autor: POMARES URBAN RAQUEL.
Año: 2001.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNÁNDEZ.

Resumen: Las células beta pancreáticas son responsables de la secreción de insulina por la acción de diferentes secretagogos, y es modulada por neurotransmisores y hormonas. Por la influencia de los estímulos relacionados con la comida (olor, sabor, visión ..) se produce una secreción refleja de insulina que permite al organismo responder más eficientemente al incremento de glucosa que se produce tras la absorción de los nutrientes. Esta secreción refleja de insulina se conoce como fase cefálica y se produce por una descarga del nervio vago y en presencia de glucosa subumbral (8mM). Esta fase está en relación con la observación de que es más efectiva en términos de secreción de insulina una carga oral de glucosa que vía intravenosa, donde en la carga oral de glucosa existiría una descarga vagal. Mediante registros intracelulares hemos podido observar una potenciación de la sensibilidad de la célula beta en respuesta a glucosa después de la exposición al agonista muscarínico carbacol. Esta potenciación tiene una duración temporal de 30-40 minutos, y para que se produzca es necesaria la coincidencia temporal de glucosa y carbacol. Hemos caracterizado este fenómeno como asociativo, con cierto paralelismo con el LTP descrito en sistema nervioso. Esta potenciación de la respuesta de la célula beta a la glucosa puede ser inhibida por la estaurosporina, sugiriendo la participación de la PKC. Proponemos que la potenciación de la actividad eléctrica de la célula beta pancreática pude ser clasificada como una variedad de mecanismo memoria celular, por lo que podemos generalziar este concepto a sistemas no neuronales, y nos permite proponer que la fase preabsotiva o cefálica de la digestión puese ser responsable del incremento en la sensibilidad a los nutrientes antes de la comida, mientras que permanecería baja entre comidas.

Autor: JARABO AMORÓS ISRAEL.
Año: 2001.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de realización: UNIVERSIDAD ALICANTE.

Resumen: Estudios previos analizados en dicha población, mostraron la posibilidad de la existencia de dos poblaciones separadas entre sí por los valores de glucemia que aparecían en los animales. Todos estos estudios preliminares realizados en la población total de Octodon degus, hicieron que nos planteáramos la posibilidad de que este animal pudiera servirnos para el estudio de la diabetes tipo 2 no insulino dependiente. El objetivo principal de la presente tesis consistió en responder a las siguientes preguntas: ¿Es el Octodon degus un posible modelo de animal de laboratorio, para el estudio de la diabetes mellitus tipo 2 (no insulino dependiente)?. Para intentar responder a esta pregunta en el presente trabajo se muestra cuáles han sido los puntos estudiados en el mismo: 1,- Estudio de los parámetros bioquímicos y fisiológicos tanto en sangre como en plasma del animal. 2,- Estudio del acoplamiento estímulo-secreción en los islotes de Langerhans del páncreas del animal, concentrándonos en dos puntos principales: A,- Respuesta secretora a secretagogos nutrientes y no nutrientes. B,- Estudios morfológicos e histológicos de los islotes de Langerhans del animal objeto de estudio y comparación con los de la rata Wistar y del ratón OF-1. Todas los procesos estudiados en el presente trabajo nos indican que el Octodon degus, no es un modelo de animal interesante para el estudio de la diabetes tipo 2, pero sí podría ser un buen modelo para el estudio de situaciones de hiperglucemia transitoria, como sucede en las mujeres embarazadas, además de un buen modelo para el estudio de cataratas. Basándonos en los resultados presentados en el presente trabajo se aprecia como hay una gran similitud de resultados entre los estudios realizados sobre secreción en aplicación de diferentes nutrientes y no nutrientes en rata y en octodon, siendo lo más destacado la diferencia entre las cantidades de insulina secretada, que difieren en diferentes aspectos con los de raton. Además también queda demostrado que no existe dos grupos de vesículas secretoras en el interior de las celulas beta como pudiera indicarnos el hecho de que la secreción muestre un patrón bifásico. Este patrón pude ser debido a las diferencias que aparecen en la actividad eléctrica de las células de octodon, rata y ratón, que reflejan muy buen acoplamiento entre las células beta de ratón, y muy poco entre las células de rata como es bien sabido, encontrandose entre ambos el octodon, puesto que presenta un patrón más parecido a groso modo al ratón y otro más parecido a la rata sin presentar rafagas sino espigueo continuo. ¿A que serían debidas estas diferencias? Pensamos en que la respuesta podia estar en el estudio de la biofísica de la membrana, es decir, nos centramos en la cantidad de uniones de hendidura que presentaba el octodon degus frente a las de rata y ratón, en colaboración con Paolo Meda es suiza fueron realizados y observamos que habia menor número de estas en octodon y rata que en ratón, siendo estas últimas las menos numerosas. Aunque esto no esta reflejado en el presente trabajo de tesis. Octodon degus puede ser un modelo igualmente valido que la rata y el ratón para el estudio de la biofísica y fisiología celular del islote de langerhans.

Autor: ALONSO GARCÍA ANA.
Año: 2001.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: Apenas se dispone de información sobre los mecanismos moleculares responsables de la relación entre insulina y esteroides sexuales. En este trabajo hemos intentado clarificar el papel del 17beta-estradiol sobre los cambios en la sensibilidad a la acción de la insulina caracterizado los primeros pasos de la cascada de señalización insulínica en la rata. Utilizamos ratas ovariectomizadas tratadas con distintas dosis de 17beta-estradiol. Comprobamos que el 17beta-estradiol modula la sensibilidad a la acción de la insulina de forma dosis-dependiente. También hemos observado que el 17beta-estradiol es capaz de modular la ruta de señalización intracelular de la insulina, controlando no sólo la expresión de los genes del receptor de insulina y de su principal sustrato, IRS-1, sino también la cantidad de sus respectivas proteínas y la asociación entre IRS-1 y el enzima fosfoatidilinositol-3-quinasa (PI3-quinasa), de manera dependiente de tejido.

Autor: BENITO VICENTE GLORIA ELENA.
Año: 2001.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: DPTO FISIOLOGÍA Y FARMACOLOGÍA.

Resumen: El calcitriol, hormona asociada clásicamente con el metabolismo óseo, se ha sido relacionada recientemente con el páncreas endocrino: se ha descrito que el tratamiento con calcitriol, previo a la inducción de diabetes experimental, tiene un papel protector sobre el desarrollo de la enfermedad. Sin embargo, se desconoce si el calcitriol podría tener un efecto positivo en el tratamiento de una diabetes ya establecida. El primer objetivo de este trabajo fue la descripción de nuestro modelo de diabetes experimental, estudiando la micromorfología del páncreas en ratas tratadas con estreptozotocina (STZ). Así observamos que la administración de una única dosis de 60 mg STZ/Kg induce diabetes mellitus, provocando una drástica disminución en el número de islotes de Langerhans y en el contenido de insulina pancreática. La evolución a largo plazo de esta diabetes no es homogénea, por lo que existen otros factores, aún no identificados, que intervienen en este modelo experimental. En segundo lugar, comprobamos que el calcitriol disminuye las dosis de insulina exógena que precisan animales en los que se indujo diabetes con STZ, y este efecto está asociado a un incremento en el contenido de insulina en el páncreas. Sin embargo, este hecho no ese acompaña ni de incremento de insulina del número de islotes ni de la presencia de insulina en zonas pancreáticas extrainsulares. La administración de calcitriol resulta, pues, beneficiosa para el control de la glucemia al disminuir las necesidades de insulina exógena y, por tanto, para la evolución de la diabetes. Finalmente, nos propusimos dilucidar si el tratamiento con calcitriol tenía un efecto beneficioso sobre la osteoporosis y, en ese caso, a qué era debido dicho efecto. En este sentido, el efecto protector del calcitriol sobre la osteopenia diabética no es un efecto directo sobre el hueso, sino que es una consecuencia de la acción beneficiosa del calcitriol sobre la diabetes.

Autor: QUESADA MOLL IVAN.
Año: 2000.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El calcio es un segundo mensajero que está implicado en la transducción de numerosas funciones celulares tales como la secreción. En el islote de Langerhans la secreción hormonal controla la homeostasis de la glucosa en sangre y disfunciones del sistema degeran en la patología de las diabetes. En este trabajo se quiso estudiar el papel del ion calcio en dicha secreción tanto a nivel celular como subcelular. Para ello se utilizaron dos técnicas: 1,- Mediante microscopía confocal convencional se procedió a analizar las señales de calcio para la secreción generadas por glucosa procedentes de células, alfa, beta y -- del islote de Langerhans inmunoidentificadas, así como se estudiaron diferentes etapas de su proceso de acoplamiento estímulo-secreción de insulina, mientras que tal característica no se da en las células alfa y --. En estas últimas la secreción tendría lugar por reclutamiento de las células como elementos individuales. 2,- Mediante microscopía confocal de detección puntual se analizaron la presencia de gradientes de calcio submembranales cuya función parece muy asociada a la secreción conservativa y con carácter sostenido de las células del islote. Estos gradientes están modualdos por la acción de la glucosa.

Autor: CHIFFELLE GÓMEZ ITALO ALFONSO.
Año: 2000.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALÁ.

Resumen: Para ver los efectos de las variaciones en el contenido de colesterol celular y mevalonato sobre la expresión de la proteína Ras y diméro Betagamma en células GH4C1, incubamos estas células por diferentes períodos de tiempo en suero libre de lipoproteínas, LPDS (situación de alta síntesis de mevalonato), LPDS suplementado con 25 HC y colesterol (baja síntesis de mevalonato) con y sin mevalonato, y determinamos la cantidad de ras en la fracción en membranas o en el homogenado total. La presencia de mevalonato es requerido imprescindible para que Ras se procese y se ancle a la membrana plasmática. De hecho, el aumento del mevalonato produjo un aumento de la localización de Ras en la membrana y su disminución la redujo. Este efecto parece estar relacionado con la disponibilidad de restos farnesilos. Además del conocido papel del mevalonato en el anclaje Ras en la membrana plasmática, hemos encontrado que, al menos en nuestras células, el mevalonato también regula la expresión de Ras, dado que tanto el mRNA de ras como los niveles de proteína se inhiben en función la dosis de mevalonato. El colesterol también disminuyó de forma paralela los niveles de Ras, y los de su mensajerjo de forma dependiente del tiempo. La adición de mevalonato no modificó el fecto del colesterol, aunque lo adelantó en el tiempo, lo que parece indicar que el colesterol actúa por un mecanismo similar al mevalonato, gracias a su capacidad de modificar la cantidad y el metabolismo del mismo. Nuestros datos parecen indicar que la expresión de Ras se inhibe por la acumulación de algún derivado no esteroideo del mevalonato. En primer lugar, la expresión de Ras disminuyó tanto si se aumenta la síntesis endógena de mevalonato (células en presencia de LPDS) como si se aumenta la proporción de mevalonato que acumula productos no esteroideos (adición de colesterol y 25-hidroxicolesterol). Por otra parte, la supresión total de la síntesis de mevalonato, por adición de lovastatina, previene la inhibición de la expresión del gen de ras producida por colesterol. En células GH4C1 la presencia del complejo betagamma en la membrana plasmática depende por un lado de la prenilación de gamma, que a su vez es función de la disponibilidad mevalonato (la adición de mevalonato a células tratadas con lovastatina desplazó el dímero del citosol a la membrana), y por otra de la estructura de microdominios de la membranas plasmática, que depende del contenido de colesterol (ya que aunque se tenga gamma prenilada, un aumento de colesterol desplaza el dímero hacia el citosol y, por el contrario, si se disminuye el contenido de colesterol, betagamma vuelve a asociarse a la membrana). En resumen, el contenido de colesterol celular regula tanto de la vía de señalización que se inicia con Ras como las que se inician a través de proteínas G heterotriméricas, modificando no solamente el anclaje de algunas de estas proteínas a la membrana plasmática, sino también, como queda demostrado para el caso de Ras, regulando su expresión a través de los cambios en la vía del mevalonato.

Autor: GUTIERREZ GONZALEZ MANUEL ANGEL .
Año: 1999.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se ha comparado el nuevo método de determinación directa del HDL-c basado en las enximas colesterol oxidasa y colesterol estersa modificadas, con los dos métodos de precipitación de referencial. El nuevo método es estandarizado y posee ventajas que hacen que recomendemos su uso en el análisis lipídico. El ejercicio Físico moderado incrementa el HDL-c a expensas de la subfracción HDL3-c, tanto en sujetos sanos como en pacientes hiertensos, excepto en las mujeres hipertensas, que lo hace a expensas de la subfracción HDL2-c. Se reconoce incrmento enlos parámetros HDL3-fosfolípidos y Apo A-I, aunque en menor medida en los pacientes hipertensos. El tratamiento con calcioantagonistas (verapamil a dosis de 240 mg/día) unido a la actividad física realizada, mejora a las dos semanas de terapia en los pacientes hipertensos, parámetros como índice de masa corporal, glucemia, HDL-c a expensas de HDL3-c, HDL-fo a expensas de HDL3-fo. Con el transcurso del tratamiento y la actividad física realizada, se observa que las lipoproteínas HDL aumentan su densiad y la lipoproteinas LDL la reducen.