GENETICA

Autor: LÓPEZ CASTEL ARTURO.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La presencia de inestabilidad genómica se relaciona con el desarrollo de procesos tan importantes como el cáncer o el envejecimiento. Su origen lo podemos encontrar en la alteración de los distintos procesos del metabolismo del DNA como pueden ser la replicación, reparación, recombinación o control del ciclo celular. Hoy en día, pro tanto, existe un gran interés en identificar y conocer el mecanismo de actuación de los factores implicados en la estabilidad del genoma, entre ellos la reparación del DNA. Dado que Drosophila melanogaster es un excelente organismo modelo para el análisis genético del que se han aislado diferentes mutantes deficientes en la reparación del DNA, perite profundizar en la compresión de los mecanismos de reparación, sus inerconexiones y sus implicaciones. Todo ello constituyó la base para el planteamiento, la realización y la consecuencia de este trabajo, donde utilizando dos técnicas molecualres, como la reacción en cadena de la polimerasa con cebadores arbitrarios (AP-PCR) y la amplificación específica por PCR de loci microstálite estudiamos el papel de dos genes importantes (MSH2 y PCNA) en diferentes procesos celulares en el mantenimiento de la estabilidad genómica de Drosophila melanogaster aprovechando la existencia de mutantes para ambos genes (spell y mus209). Los resultados obtenidos han mostrado, primkero que la AP-PCR, técnica no utilizada hasta ahora en Drosophila, permite la detección de daño en el genoma con fiabilidad. Tras el análisis de ambos genes hemos podido observar que: 1,- La pérdida de función del gen MSH2, tanto en homocigosis como en heterocigosis produce inestabilidad genómica general y de microsatélites en la línea germinal en Drosophila melanogaster, posiblemente debido a la implicación de este gen en otros procesos importantes del metabolismo del DNA aparte de su función crucial en reparación de apareamientos erróneos (MMR). 2,- Este gen también en la modulación del daño genético inducido, como en el caso de la bleomicina expuesto por nosotros. 3,- El gen PCNA también está jugando un papel importante en la estabilidad general y de microsatélite en la línea germinal de Drosophila melanogaster debido a sus propiedades multifuncionales relacionadas con el metabolismo del DNA. 4,- Las alteraciones encontradas con ambos genes en condiciones heterocigotas indican que un solo alelo funcional en ambos casos es insuficiente para garantizar la estabilidad del genoma. En el caso de humanos, esto podría provocar haploinsuficiencia con sus consecuencias negativas en el desarrollo tumoral.

Autor: REYES MOSCOSO JANET.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: En este trabajo se indujeron linfomas tímicos mediante tratamiento con radiaciones ionizantes gamma en ratones híbridos F1 obtenidos por cruces entre cepas consanguíneas de ratón. En este modelo experimental se realizó el análisis alelotípico de 4 cromosomas. En dos de ellos, el 5 y el 16, las pérdidas fueron modestas; se encontraron pérdidas altamente significativas en uno sólo de ellos: el cromosoma 12. En esta región de deleción se encuentran un gen que codifica para un importante factor de trancripción, YY1, ubicuo e universal. YY1 tiene función dual ya que puede actuar tanto como activador como represor, presentó sobre-expresión. Esto nos permitió descartarlo como candidato a gen supresor pero se constata su participación, directa o indirecta, en el proceso de linfomagénesis en ratón. Se estudió de forma preliminar a nivel funcional el gen Tcf-1, que se encontró sobre-expresado. Este gen podría estar actuando como oncogén, activado como consecuencia de la translocación 1;5, evento temprano de la linfomagénesis. El oncogén c-Myc se estudió a nivel de dosis génica y funcionalmente usando la técnica LightCycler, puesta a punto en nuestro laboratorio. Se encontró en el 100% de los tumores analizados amplificación de dosis génica y sobre-expresión del gen. La correspondencia de estos dos eventos no fue perfecta por lo que podría pensarse que existen otros mecanismos aparte de la amplificación de dosis génica que promueven la sobre-expresión de c-Myc, como podría ser la sobre-expresión de Yy1. Finalmente, se realizó el estudio mutacional de p53. No se encontraron mutaciones frecuentes en los exones, 5,6,7,8, que norlmalmente acumulan éstas en la literatura. Las escasas mutaciones corresponden con las variantes ya referidas por otros autores. El exón 1 del oncogén K-Ras presentó un bajo procentaje de mutaciones en los codones 12 y 13, lo que concuerda con los resultados previos en los que se refiere que el nivel de mutaciones en este exón en linfomas tímicos inducidos con radiaciones ionizantes es modesto.

Autor: LORCA PASCUAL JUAN MANUEL.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Mucor circinelloides es un hongo filamentoso que presenta diversas respuestas a la luz azul, entre ellas, la inducción de la biosíntesis de carotenos. El gen crgA, un gen inducido por luz, parece actuar como regulador negativo de la carotenogénesis en este hongo, ya que la deleción completa del gen en la estirpe silvestre conduce a una sobreacumulación de carotenos en los micelios en condiciones de luz y oscuridad. El efecto represor de crgA sobre la biosíntesis de carotenos se lleva a cabo mediante el control de la expresión de los genes carotenogénicos estructurales, sin embargo, todavía no se conoce en profundidad como se lleva a cabo esta función reguladora. La secuencia de aminoácidos deducida del gen crgA muestra distintas regiones estructurales significativas: un dominio RING-finger, una posible señal de localización nuclear, tramos ricos en glutaminas y un posible dominio de isoprenilación. Con el objetivo de profundizar en el conocimiento del modo de acción de crgA, se ha analizado el papel que juega cada uno de estos dominios en su función reguladora de la carotenogénesis. Para ello, en primer lugar se ha obtenido, mediante mutagénesis química, un marcador adecuado en la estirpe nula para crgA, permitiendo la utilización de dicha estirpe en los experimentos de transformación. Posteriormente se han determinado con exactitud los extremos 5' y 3' de crgA para la construcción de plásmidos portadores de todas las regiones reguladoras necesarias para la correcta expresión del gen. Éstos plásmidos se han utilizado para la transformación del mutante nulo y se ha comprobado su capacidad para la complementación del fenotipo mutante para la carotenogénesis que presenta dicha estirpe, indicando que la proteína CrgA expresada es funcinal. A continuación, mediante mutagénesis dirigida, se han generado alelos mutantes de crgA alterados en sus regiones significativas y estos alelos se han utilizado para transformar el mutante nulo para crgA. El fenotipo para la carotenogénesis de estos transformantes se ha comparado con el que presentan los transformantes obtenidos con la versión silvestre del gen, para analizar la importancia de cada uno de los dominios alterados en la función de la proteína. Los resultados obtenidos han permitido la identificación de dos dominios funcionales en CrgA: el dominio RING-finger y un tramo rico en glutaminas, esenciales para su correcta función como regulador de la carotenogénesis. El resto de los dominios analizados no parecen ser esenciales, al menos en relación con la carotenogénesis aunque no se puede excluir que sean importantes para otras funciones controladas por la proteína, como el crecimiento vegetativo. También se ha llevado a cabo el estudio de la proteína CrgA, mediante el uso de anticuerpos monoclonales o mediante la producción de anticuerpos policlonales dirigidos específicamente contra la proteína CrgA. Los resultados obtenidos indican que la concentración de proteína CrgA en Mucor circinelloides es muy baja, debido a un bajo nivel de expresión, a una alta inestabilidad o ambas cosas. La identificación de los dominios funcionales de CrgA, que podría mediar la degradación de un hipotético activador de la carotenogénesis en condiciones de oscuridad. Los experimentos que se están realizando actualmente se ecaminan hacia la demostración del modelo propuesto.

Autor: GARCÍA RONDON ANA BEATRIZ.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La transcripción es el proceso por el cual se copia la información contenida en el DNA, a una molécula de RNA. Se divide en las etapas de iniciación, en la cual la polimerasa de RNA (RNAP) se une al DNA, abre la doble hélice y comienza la síntesis del RNA; la elongación, en la cual la RNAP completa la sínteseis del RNA, y terminación, cuando finaliza la síntesis del RNA y la RNAP se separa del Dna. En las tres etapas la RNAP requiere otros factores para su actuación. En esta tesis se estudia el papel del complejo THO en elongación de la transcripción. En primer lugar, se define al complejo THO como una unidad funcional. A continuación se determina que es capaz de unirse a DNA y RNA in vitro. Mediante ensayos de transcripción in vitro se analiza el papel en elongación de la transcripción llegándose a la conclusión de que el complejo THO es necesario para que la elongación de la transcripción sea eficiente. El análisis transcripcional se extiende al complejo Spt4-Spt5 demostrándose por primera vez que tiene un papel positivo en elongación de la transcripción y al complejo Paf1 donde mediante transcripción in vitro se demuestra su implicación en elongación de la transcripción in vitro se demuestra su implicación en elongación de la transcripción. Por último se describe cómo mutaciones en componentes del poro nuclear afectan la expresión de ciertos genes in vivo.

Autor: GARCÍA DEL BARRIO GUILLERMO.
Año: 2001.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: En el presente trabajo se ha abordado el desarrollo de vectores no virales para terapia génica en músculo. Las formas farmacéuticas escogidas a tal efecto han sido del tipo micropartículas biodegradables, fabricadas a partir de copolímeros de ácido láctico-co-glicólico. En dichas micropartículas se han encapsulado tanto DNA plasmídico (pDNA) como adenovirus recombinantes defectivos. Se buscó caracterizar y evaluar las micropartículas formuladas, así como diseñar un método de fabricación que garantizase la integridad del material génico encapsulado. Las micropartículas se prepararon mediante el método de la evaporación del disolvente tras la formación de una emulsión múltiple de tipo A/O/A. Para ello se empleó un nuevo procedimiento patenado llamado TROMS ("Total Recirculation One-Machine System"). En dicho procedimiento, la emulsificación de las fases se consigue mediante la inyección turbulenta de las mismas. Se analizaron los factores con influencia en la formación de la emulsión múltiple, el tamaño de las micropartículas obtenidas y la encapsulación de una molécula hidrosoluble modelo (fluoresceína sódica). En concreto, se estudió la influencia del tiempo de recirculación de las emulsiones en el sistema, el diámetro interno de las agujas empleadas y el flujo de bombeo de las fases. Una vez estudiado el procedimiento, se procedió a su aplicación para encapsular pDNA (cuyo gen marcador fue el de la luciferasa bajo el promotor del citomegalovirus (CMV), denomidano abreviadamente px2luc) y adenovirus (cuyo gen marcador fue el de la beta-Galactosidasa, también bajo el promotor del CMV, denominado AdvLacZ). Así mismo se comparó con procedimientos convencionales de fabricación, en concreto el uso de ultrasonidos para la primera emulsión (A/O) y del Ultra-Turrax para la segunda (emulsión A/O/A). Las micropartículas preparadas se caracterizaron en cuanto a su tamaño, morfología, integridad del material encapsulado, contenido en principio activo y eficacia de encapsulación. Así mismo se evaluó su eficacia para liberar de forma sostenida el principio activo encapsulado (ensayos de liberación in vitro) y su eficacia tras su administración in vivo tras su inyección en músculo. El TROMS resultó ser un procedimiento de fabricación adecuado y versátil para formular micropartículas, en el que se puede escoger de forma sencilla el tamaño de las mismas como su formulación, hasta el punto de resultar útil para su aplicación a escla semi-industrial. La formación de la emulsión se produce bajo condiciones más suaves energéticamente que las técnicas convencionales de homogeneización, tal y como se concluyó analizando la integridad del material encapsulado (tanto px2luc como AdvLacZ). Las micropartículas con pDNA liberación de forma sostenida el plásmido durante 24 ó 40 días, dependiendo del polímero empleado en la fabricación. La integridad del plásmido liberado se conservó en gran medida a lo largo del ensayo. Su aplicación in vivo, comparada con la administración de DNA desnudo, mostró eficacias de transfección no muy altas a corto plazo, pero de larga duración y constantes en el tiempo. En cuanto a las micropartículas con adenovirus, se consiguió la liberación de partículas infectivas in vitro durante al menos 5 días. In vivo mostraron eficacias de transducción incluso 7 semanas después de la administración.

Autor: ÁLVAREZ FERNÁNDEZ M. LIDIA .
Año: 2001.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.

Resumen: Se ha estudiado la mutagenicidad de N-etilnitrosourea (ENU) en células germinales femeninas de D.melanogaster, utilizando el sistema vermilion, que permite la determinación de frecuencias y espectros de mutación simultáneamente, y bajo distintas condiciones de reparación, eficientes y deficientes para los sistemas de reparación por escisión de nucleótido (NER) y de tolerancia mediada por "bypass" del daño (BMT). Los resultados de este trabajo demuestran que: 1,- ENU es mutagénico en oocitos y oogonias de Drosophila. 2,- O6-etilguanina y las etilaciones en nitrógenos no contribuyen significativamente a su mutagenicidad en células eficientes en reparación, porque se reparan por el enzima metilguanina metiltransferasa (MGMT) y por el sistema NER, respectivamente. 3,- O2-etiltimina y O4-etiltimina son los aductos con mayor relevancia mutagénica; en su reparación no interviene MGMT, y se necesitan los sistemas NER y BMT para su procesamiento. 4,- Además, BMT está implicado en el procesamiento de O2-etilcitosina. 5,- La comparación de todos estos resultados son los descritos para células germinales masculinas demuestra la utilidad de las células femeninas en estudios de mecanismos de acción de mutágenos/carcinógenos, especialmente cuando se analiza reparación, y determina la necesidad de realizar este tipo de estudios en la línea germinal en ambos sexos.

Autor: TRIGUEROS SOLER SONIA.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTÍFICAS.

Resumen: En esta tesis se ha estudiado la estabilidad de pequeños minicromosomas circulares y delos genes ribosómicos en células de S.cerevisiae deficientes en actividad topoisomerasa. Se ha expresado la topoisomerasa I de E. Coli que selectivamente relaja la supehelicidad negativa del DNA, en las células deficientes en actividad topoisomerasa y se ha estudiado el efecto de esta actividad en la estabilidad de los minicromosomas y genes ribosómicos. Se ha fusionado las dos subunidades que codifican para la DNA gyrasa de E.coli y se ha expresado esta proteína en S.cerevisiae. Este enzima relaja selectivamente la superhelicidad positiva. Se ha estudiado es efecto de esta actividad es la estabilidad de los minicromosomas y de los genes ribosómicos. Los resultados indican que un déficit de actividad relajadora del DNA provoca que minicromosomas circulares de pequeño tamaño generen amplias distribuciones de multímeros las cuales se encuentran en equilibrio dinámico alrededor de formas circulares de tamaño superior. La frecuencia de recombinación mitótica homóloga de estas células se encuentra incrementada en dos órdenes de magnitud. La relajación selectiva de la superhelicidad positiva, mejora su velocidad de crecimiento, evita la escisión de los genes ribosómicos, evita la multimerización de minicromosomas y la hiper-recombinación mitótica. La fusión GyrBA posee actividad para relajar la superhelicidad positiva, pero cadece de actividad decatenasa. La actividad de GyrBA mejora el crecimiento de las células, evita la escisión de los genes ribosómicos, pero no evita la multimerización de los minicromosomas, ni reduce la hiper-recombinación mitótica. En conclusión, el exceso de superhelicidad negativa en el DNA es un determinante primario de inestabilidad génica. En consecuencia, las tipoisomerasa I y II actúan como supresores de los procesos de recombinación mitótica relajando la superhelicidad negativa. El nivel de actividad relajadora que garantiza la estabilidad génica depende de la cantidad de topoisomerasa intracelular pero también del grado de compartimentalización del DNA en dominios topológicos.

Autor: AMADOR CATALAN AMAYA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El gen Adh, que codifica para el enzima alcohol deshidrogenasa, es uno de los genes más extensamente estudiado, tanto a nivel estructural como de expresión, en la familia Drosophilidae. La estructura del gen, incluida la región promotora, ha cambiado a lo largo de la historia evolutiva de los drosofílidos. El patrón de expresión temporal y específico de tejido es particular de cada especie. No obstante esta divergencia interespecífica del patrón de expresión, algunos elementos reguladores se han conservado a lo largo de la evolución. Este conjunto de características convierten el gen Adh de los drosofílidos en un buen modelo para el estudio de los mecanismos evolutivos de la regulación de la expresión génica en los eucariotas. D. Funebris presenta un nivel muy bajo de actividad ADH debido a una baja síntesis de enzima ADH respecto a la especie de referencia D. Melanogaster. Ello implica una regulación distinta del gen Adh. Los objetivos de esta tesis son el análisis de la estructura de la región genómica de D. Funebris que contien el gen Adh, la determinación de su patrón de expresión temporal y específico de tejido yla identificación que putativos elementos cis reguladores mediante similitud con los elementos reguladores descritos para los genes Adh de otras especies de Drosophila. El análisis de 7,5 kb de secuencia de un clon que hibridaba con una sonda del gen Adh de D. Melanogaster, demuestra la presencia de una duplicación directa en tándem de 2,9 kb que comprende el gen Adh y 1,6 kb de la región 5'flanquante al mismo. Los fragmentos duplicados son idénticos. El análisis para determinar la presencia de esta duplicación en varias cepas de D. Funebris de diverso origen goegráfico ha demostrado que es una duplicación no fijada. Se ha caracterizado un elemento moderadamente repetido situado a 5' del gen Adh y dentro de la región duplicada. Este elemento presenta características estructurales comunes y similitud de secuencia con las familias IS, GEM y SGM de elementos repetidos del grupo obscura, Experimentalmente se ha demostrado que el gen Adh de D. Funebris se expresa a partir de un único promotor en larvas y adultos y que la expresión está regulada temporalmente. La estructura más general y considerada como la ancestral de los drosofílidos consiste en un gen de copia única y dos promotores en tándem, los promotores distal y proximal. La estructura del gen Adh de D.funebris, consistente en un gen de copia única (cepas que no contienen la duplicación) y un único promotor, es nueva y distintas de las descritas hasta la fecha para las otras especies de Drosophila. La inserción del elemento moderadamente repetido en la región 5' pudo producir la pérdida del promotor distal y haber originado de este modo la nueva estructura. Se ha determinado los perfiles de expresión temporal y específicos de tejido a nivel de mRNA y la actividad ADH de una cepa homozigota para la duplicación y una cepa no portadora de la duplicación. Los resultados de la cuantificación de mRNA de larvas y adultos sugieren que la región de 1,6 kb que flanquea a 5' el gen Adh y está comprometida en el fragmento duplicado, contiene los elementos necesarios para la correcta expresión en larvas. Se han identificado secuencias similares a los elementos cis reguladores de la expresión del gen Adh de D.melanogaster. El orden de estos elementos se ha mantenido en general. Sin embargo la inserción de elementos moderadamente repetido ha variado la distancia entre algunos de estos elementos y ello puede haber alterado el patrón de expresión. El gen Adh de D.funebris es un ejemplo de cómo la inserción de elementos transponibles en las regiones reguladoras de los genes puede producir alteraciones del patrón de expresión.

Autor: CODONY SERVAT CARLES.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Se desarrolló una técnica para practicar los complejos de splicing formados en una reacción de splicing "in vites" a partir de extractos nucleares de celulas Erlich-Esta tecnica esta basada en la incorporación del nucléstido modificado bromouridina (BcV) en el tráscrito y su purificación mediante anticuerpos anti BcV, junto con los complejos asociados al transcrito. Se vio que los dos tipos de U1-suRNP presentes en los extractos Erlich estan presentes en los splicrosomas purificados. Se caracterizó la reacción de trans-splicing in vitro. En primer lugar sus sutratos derivados del gen ceruitin octavoil tcusterosa se comparó son los resultados obtenidos in vivo y de caracterizó una secuencia activadora de trans-splicing. En ensayos de trans-splicing de competición se testaron diferentes sustratos, se determinó las indicaciones en que se producia la competición, se caracterizaron diferentes secuencias involucradas en la competición y el nivel del ensamblaje del splicisoma donde se desarrollaba la competición. Se determinó que las proteinas SR estaban involucradas en la competición. Finalmente se vio que era posible intervenir una reacción de un-splicing mediante una reaccion de trans-splicing.

Autor: MOLINA RODRIGUEZ FELIPE.
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS. UNIDAD DE GENETICA.

Resumen: Estudios fisiológicos y genéticos han evidenciado el requerimiento de la transcripción jpara el ninico de replicación del cromosoma de Escherichio coli. Sin embargo no ha podio hallarse el promotor implicado en este evento. Los resultados de este trabajo muestran que inserciones cromosómicos en los genes --al origen de replicación moc y fid, afectan a los parámetros del ciclo celular produciendo una disminución de las velocidades de replicación y crecimiento; existiendo una región de aproximadamente 2 Kpdo alrededor de onic susceptible a la acción de los insectos sobre el ciclo celular. Además el genotipo debido a un inserto puede suprimirse con otro. Sugiriendo que el mantenimiento de cierto ---alrededor de aric y sencial para le óptimo funionamiento del inicio de replicación.

Autor: AGUILERA MARTINEZ OSCAR.
Año: 1999.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: Las transferrinas son una familia de proteínas que hace su aparación con el filo de los cordados ya en los primeros estadíos de la escala evolutiva. Como rasgo destacado y diferencial esta la capacidad de todas ellas de unir metales(principalmente hierro) al igual que aniones hecho único en la metalobioquímica. Las transferrinas están compuestas de una única cadena polipeptídica de 680-700 aa y con un peso molecular que varia de los 78-86 kDa. Dicha cadena polipeptídica se halla dividida en dos lóbulos claramente definicidos en las tres transferinas:Lóbulo N LóbulobC y región conectora. Cada lóbulo está a su vez dividido en dos dominios diferentes N1;N2 C1 y C2 en cisura entre ambos dominios hay un sitio de unión al hierro por lóbulo El sitio N y el sitio C estan distanciados 42 A uno de otro. Las transferrinas poseen una gran variedad de propiedades en los seres vivos relacionadas, directa o indirectamente con una acción antimicrobiana. Entre los modelos que diversos autores han propuesto para explicar la actividad antibacteriana de esta familia de proteínas destacan: 1 captación competitiva del hierro. Metabolito indispensable para el crecimiento celular 2 una acción antimicrobiana directa o en colaboración con otras moléculas como la lisozima en el caso de la lactofern 3 alteración de procesos metabolicos tales como la incorporación de glucosa en S.mutans. 4 alteración de lamembrana externa en gram negativos 5 la presencia de dominios catiónicos intramoleculares con propiedad bactericida. Ninguno de estos modelos explica satisfactoriamente la probada capacidad antibacteriana de las transferrinas.

Autor: PALICIO HERRERO MARTA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: 1. La incidencia del fenotipo mutador asociado a inestabilidad de microsatélites es inferior en la población española que en otras poblaciones. Esta diferencia se debe probablemente a una diferente etiología del cáncer colorrectal en nuestra población. 2. Los pacientes jóvenes con CCR presentan el fenotipo MMP con mayor frecuencia que los pacientes con una edad tardía de presentación. Estos pacientes deben someterse a un seguimiento más intenso. 3. Los tumores con fenotipo MMP+ presentan las mismas características clínico-patológicas que los descritos en otras poblaciones. 4. Los tumores colorrectales con fenotipo MMP+ presentan mutaciones en el gen TGF-beta RII con la misma frecuencia que los descritos en otras poblaciones por lo que el proceso de tumorogénesis puede considerarse equivalente. 5. Se ha detectado mutación en el gen hMSH2 en el 10% de las familias con CCHNP analizadas. Este porcentaje es menor que el descrito en otras poblaciones. Esta diferencia puede deberse a una etiología diferente o al criterio de selección de las familias que se ha basado únicamente en la historia familiar. 6. La técnica diseñada en este estudio para el análisis de mutaciones en el gen hMSH2 resulta adecuada ya que puede detectar los dos tipos de mutaciones más frecuentes descritos en este gen. Además es más rápida que el análisis del ADN genómico. 7. Se ha detectado un polimorfismo en el exón 13 del gen hMSH2 que es un factor de riesgo de desarrollar cáncer colorrectal en la población española aunque no supone un factor de mal pronóstico. No se ha podido detectar ningún efecto del polimorfismo sobre la función o la estructura de la proteína que justifique este aumento de susceptibilidad.

Autor: ESPINOSA BLAY LLUIS.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD BIOLOGIA.

Resumen: El epitelio intestinal esta constituido por una monocapa de células que a nivel estructural se organizan formando una serie de invaginaciones i evaginaciones llamadas criptas i villi. Una de las caracteristicas mas importantes de este tejido es su capacidad para regenerarse de forma continuada durante toda la vida del organismo adulto. Los mecanismos que controlan el mantenimiento de la homeostais del sistema aun no se conocen. Con el fin de profundizar en el estudio de estos mecanismos hemos centrado nuestro interes en el aislamiento de transcritos expresados especificamente durante los primeros estadios de la diferenciacion intestinal mucosecretora. Como modelo de la diferenciación hemos utilizado dos lineas celulares establecidas: HT-29 M6(fenotipo mucosecretor) y HT-29(fenotipo indeferenciado) y la estrategia empleada para detectar las secuencias expresadas diferencialmente ha sido la hibridación sustractiva. Este trabajo ha dado lugar al aislamiento de 33 cDNAs independientes, un tercio de los cuales se expresa diferencialmente en la población mucosecretora, y que corresponden a 4 grandes grupos: proteinas ribosomales, transcritos mitocondriales, transcritos que contienen secuencias repetitivas de la familia Alu y transcritos que no pertenecen a ninguno de los grupos anteriores. En este ultimo grupo cabe destacar el clon que codifica para la serin-treonin quinasa EMK1, la cual forma parte de un nuevo grupo de quinasas en el que se incluyen Par-1,MARK1 y 2, y c-tak1. Utilizando en paralelo tecnicas de criba de bancos de cDNA y RACE-PCR hemos obtenido la secuencia codificante completa de EMK1 y posteriormente hemos caracterizado la estructura del gen. Mediante tecnicas de PCR y por comparacion entre los distintos cDNAs de que disponiamos hemos identificado 3 distintas isoformas de la quinasa (EMK1a, EMK1B y EMK1y) y una variante mas (A16), definida por la ausencia del exon 16. Mediante ensayos de Spot dot y Northern blot hemos demostrado que EMK1 presenta niveles aumentados en HT-29 M6 y Caco-2(linea celular de fenotipo absortivo), respecto de la linea indeferenciada HT-29 y que ademas la expresion de las distintas isoformas que la quinasa es un fenomeno estrictamente regulado.

Autor: COSTAS COSTAS JAVIER.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El presente trabajo trata de incrementar los conocimientos actuales sobre la dinámica evolutiva de los elementos móviles de tipo retrovial (ampliamente distribuidos en todos los eucariotas), centrándose en el estudio del retrotransposón blod en el complejo melanogaster de Drosophila y del retrovirus endógeno ERV9 en humanos. El análisis de la evolución de blod comienza con su detección, tanto mediante PCR como mediante hibridación, en todas las especies del subgrupo melanogaster excepto D. orena y D. erecta, siendo su modo más probable de evolución la transmisión vertical desde el ancestro del subgrupo y su pérdida en el linaje que conduce a estas dos especies. Empleando tanto PCR y clonación como búsqueda de secuencias en las bases de datos del GenBank, muestreamos parte de la región reguladora de diversas inserciones de blod a partir de las cuatro especies del complejo melanogaster. El análisis filogenético de estos elementos reveló que podían ser divididos en dos subfamilias, presentes en el ancestro del complejo. La principal característica distintiva de las dos subfamilias es la ausencia de dos pequeñas pautas de lectura abiertas en una de ellas que están presentes tanto en la otra subfamilia como en los retrotransposones más próximos: mdg1, 412 y Stalker. Diversos indicios sugieren que la subfamilia que carece de estas pautas de lectura abiertas es la más activa, al menos en D. melanogaster, donde ha sufrido un proceso de expansión. El estudio del retrovirus endógeno ERV9 comenzó con la identificación de 156 inserciones en el genoma humano mediante la búsqueda de secuencias similares a las primeras 676 bp de la larga repetición terminal de ERV9 en la base de datos Genbank. Estos elementos fueron agrupados en 14 subfamilias basados en diversas diferencias nucleotídicas características. La edad de cada subfamilia fue estimada de forma aproximada mediante la divergencia promedio entre la secuencia consenso de la subfamilia y cada uno de los elementos que la integran. La determinación del orden secuencial de las diferencias características permitió la identificación de 4 linajes distintos, que retuvieron su capacidad de transposición durante largos periodos de tiempo. La posibilidad de que ERV9 siga estando activo en el genoma humano no puede ser descartada. Finalmente, se presentan evidencias de evolución en mosaico de uno de estos linajes.

Autor: VALLINA LOPEZ DORIGA IRIA FLAVIA.
Año: 1998.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Recientemente se ha generado un nuevo modelo murino de síndrome de Down. Se trata de una trisomia que incluye una región del cromosoma 16 que abarca gran parte de la regiaón crítica del SD del cromosoma 21 humano. Una de sus ventajas es la viabilidad, lo que permite el estudio de su fonotipo a lo largo de toda su vida. El análisis neuromorfológico general del modelo Ts65Dn no mostró alteraciones, sin embargo en los estudios estereológicos se observó una reducción la celularidad del giro dentado y un aumento en la región CA3. El volumen hipocámpico fue similar. La organización estructural de los principales núcleos catecolaminérgicos fue similar en ambos grupos de animales. Tampoco hubo diferencias en la densidad de los adrenoceptores beta, pero sí una ligera disminución en su afinidad. También se encontró una disminución en la eficacia de la señal transmembrana de este receptor, el sistema adenilil ciclasa, tanto en corteza como en hipocampo. La caracterización del fenotipo conductual de los animales mostró que no existen diferencias en los reflejos sensoriomotores entre animales control y trisómicos, ni en emotividad. Los ratones Ts65Dn fueron hiperactivos en condiciones de oscuridad, y mostraron una mayor conducta exploractoria, aunque con un patrón menos eficiente. En la prueba del laberinto acuático de Morris los animales trisómicos presentaron una alteración en el aprendizaje y en la memoria, especialmente en la memoria de trabajo.

Autor: RODRIGUEZ DAGA RAFAEL.
Año: 1998.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Etd1 identifica una nueva proteína relacionada con la actina (Arp) en función de su homología. La localización celular de esta proteína es similar a la localización de la actína. Esta proteína Etd1 es necesaria para la correcta localización de la actina y su falta de función conduce a una lisis indiscriminada de la pared celular. Su expresión es muy baja y esta regulada de forma dependiente de ciclo. El gen adyacente a etd1, lif1, codifica para el factor eID4a de S. pombe. La falta parcial de actividad eIF4a induce una parada del ciclo específica en G2. Dicha parada es consecuencia principalmente de la alta dependencia que la traducciN DE LOS MRNAs de cdc25 tiene la maquinaria de inicio de la traducción. Esta sensibilidad, y la que tambien nuestra cdc13 en menor escala, podría depender de características comunes de la región 5' del mensajero de estos genes. La sensibilidad a la traducción de Cdc25 podría servir a la célula eucarionte para coordinar el crecimiento con la división. La falta de función de Wee1 genera hipersensibilidad a cicloheximida. Entre los nuevos genes que pueden controlar la mitosis por Cdc2 se encuentra el gen dis1, homólogo al inhibidor IPP2 de fosfatasas tipo pp1. La proteína Spr1 homóloga a la importina alfa eucariótica, es necesaria para inhibir la entrada en mitosis, y su sobreexpresión inhibe el ciclo en G2. Esta proteína está localizada principalmente en el nucleolo, y tambien se encuentra en el núcleo y en los microtúbulos. El análisis gennético de este gen indica que aun habiendo otras importinas, la correspondiente a Srp1 está implicada en el transporte de Wee1 al núcleo.

Autor: BULLEJOS MARTIN MONICA.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: En este trabajo se ha realizado un estudio del gen SRY (Sex-determining Region of the Y chromosome) desde dos puntos de vista. Por un lado, se han analizado sus posibles implicaciones en fenómenos de alteración en la determinación y/o diferenciación sexual en algunas especies de mamíferos en las que previamente se habían descrito fenómenos de reversión sexual. Y por el otro, el empleo de las secuencias de la caja conservada HMG de este gen para el establecimiento de filogenias moleculares. Para ello se han empleado machos y hembras de 28 especies pertenecientes a los órdenes: Rodentia, Quiroptera e Insectivora. Mediante un estudio histológico llevado a cabo en distintas especies del género Talpa se ha puesto de manifiesto que en dicho género todas las hembras XX presentan ovotestes bilaterales con desarrollo de tejido ovárico a pesar de que dichas hembras carecen del gen SRY. Por otro lado, mediante técnicas de PCR, "Southern-blot" y secuenciación se ha puesto de manifiesto que en la mayoría de estas especies la caja HMG del gen SRY se encuentra localizada en el cromosoma Y. Sin embargo, también se descrito la existencia de algunas excepciones. Este ha sido el caso de la especie Microtus cabrerae, en la que se ha encontrado que todas las hembras son XX, y portadoras del gen SRY en el cromosoma X, que se encuentra en forma de copias múltiples, probablemente dispuestas en tándem. En esta misma familia se ha encontrado que en todas las especies analizadas el gen SRY está en forma de copias múltiples mono- y polimórficas, localizadas en el cromosoma Y. Otro caso con anomalías en la localización del gen SRY es la especie Crocidura russula, en la cual también es probable que el gen SRY se encuentre presente tanto en machos como en hembras. En cuanto al empleo de las secuencias de la caja HMG del gen SRY para el establecimiento de relaciones filogenéticas, los datos obtenidos al emplear secuencias de diferentes especies pertenecientes a los órdenes Insectivora, Quiroptera, Primates, Rodentia y Artiodactila indican que este dominio de unión al ADN es poco adecuado para su empleo en la reconstrucción de filogenias, debido a su corta longitud, su alto grado de conservación en esta región y su presencia en forma de copias múltiples en algunas especies.

Autor: CHARRO MARBAN M. JESUS.
Año: 1997.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.

Resumen: Este trabajo aborda la codificación de información olfatoria de tipo de olor y concentración a nivel de recepción en Drosophila melanogaster mediante análisis funcional. En primer lugar, se estudia la captación diferencial de olores a través de dos tipos de órganos olfatorios: antenas y palpos maxilares. Los datos apuntan hacia un funcionamiento cualitativo similar en cuanto a los olores que ambos son capaces de captar, pero con una menor aportación de los palpos a la señal total, como podría esperarse por su menor número de receptores (décima parte). En el segundo punto, se plantea la existencia de señales diferenciales dependientes de distintas cascadas de transducción como base de codificación olfatoria a nivel de neurona primaria, utilizando mutantes que afectan las rutas de transducción de AMPc y del IP3. La ruta del IP3 muestra una activación general, mientras que la del AMPc sólo se activa ante determinados tipos y concentraciones de estímulo. Además, los datos apuntan hacia un funcionamiento diferencial de ambas rutas en grupos celulares distintos.

Autor: SORIANO VALVERDE SILVIA .
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: Los elementos transponibles (ETs) se hallan en todos los organismos estudiados y pueden ser una fuente de mutación. La frecuencia de transposición puede incrementarse bajo ciertas condiciones ambientales, por lo que hemos estudiado si mutágenos de acción conocida pueden tener acción transposogénica y en que medida. Se analizó la reversión somática a nivel fenotípico y a nivel molecular en mutantes de Drosophila melanogaster portadores de retrotransposones insertos en el gen white, tras el tratamiento con tres agentes alquilantes: EMS, ENU, MMS. Se observa una clara relación entre presencia de retrotransposón e incremento de la frecuencia de reversión somática; en algunos casos la reversión puede estar asociada a escisión del ET por recombinación entre las repeticiones terminales del mismo o entre las secuencias flanqueantes del DNA genómico. Asimismo, se analizó la reversión germinal inducida por los mismos agentes alquilantes en tres mutantes insercionales que presentan el retrotransposón B104 inserto en diferentes posiciones del gen white. El análisis molecular de los revertientes hallados revela que no se ha producido escisión de B104. Al analizar la causa del fenotipo revertiente, se vió que estaba asociada a modificadores secundarios (genes que actuan en trans sobre white), algunos de los cuales han sido cartografiados. Finalmente, también se hallaron otros mutantes inducidos por el tratamiento, que presentaban pérdida de pigmentación en los ojos debido a deleciones en el locus white.

Autor: SUAREZ FIGUERAS SUSANNA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: GENETICA.

Resumen: Se ha inducido reversión a fenotipo salvaje en la línea somática y germinal de dos cepas de D. melanogaster portadoras del alelo white-ivory, la cepa ywi y la cepa wi tetraplicada (portadora de una tetraplicación del locus white), mediante los agentes alquilantes EMS, MMS y ENU. El análisis molecular y la cuantificación de pigmentos rojos de las líneas creadas a partir de los revertientes obtenidos a nivel germinal procedentes de la cepa ywi, indica que este fenotipo es debido a la pérdida extremadamente precisa de las 2,96kb duplicadas en tándem características del alelo white-ivory. En el caso de la cepa wi tetraplicada se han obtenido tres fenotipos diferentes en el análisis de mutación en la línea germinal, tras realizar el análisis molecular y la cuantificación de pigmentos rojos, hemos encontrado que los revertientes a fenotipo salvaje han perdido la duplicación de 2,96kb en al menos, una de las copias del locus white; los individuos de fenotipo de ojos oscuros presentan deleciones de 1 y 2 kb en dos de las copias del gen white, y los mutantes de ojos claros tienen un número menor de copias del gen white que la cepa (wi) 4.