GENETICA MOLECULAR DE LEVADURAS

Autor: ALVAREZ TABARES ISABEL.
Año: 2004.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El trabajo presentado pone de manifiesto nuevas funciones de dis2, una serin/treonin fosfatasa de tipo PP1 de s.pombe, mediante el estudio de su localización a lo largo del ciclo celular. Por microscopia confocal y microscopia de fluorescencia se ha estudiado la localización de dis2 en la cepa salvaje de s.pombe y en cepas que llevan mutuaciones en genes que codifican para proeteínas presentes en las estructuras subcelulares en las que se localiza la fosfatasa. De esta manera se ha demostrado su presencia en el SPB mitótico, en los centrómeros, en el anillo central donde se forma el septo y en estructuras tipo caperuza localizadas en los extremos celulares.

Autor: GONZÁLEZ SANTAMARÍA PATRICIA.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR "SEVERO OCHOA".

Resumen: La fase de lectura abierta YDL097c, asignada el gen RPN6, es esencial para el crecimiento vegetativo en Saccharomyces cerevisiae. La proteína codificada por YDL097c, denominada Rpn6, es una subunidad reguladora del protesoma 26S, proteasa celular responsable de la degradación citoplasmática. Se generaron cepas de levadura en las que la copia genómica de RPN6 está eliminada (rpn6-A1), de forma que las células mutantes expresan condicionalmente la proteína en un medio de cultivo adecuado. En ausencia de Rpn6p se produce una acumulación progresiva de proteínas multiubiquitinadas, y la proteína homóloga S9 del proteasoma humano complementa la mutación rpn6-A1. Tras incubaciones prolongadas en el medio restrictivo, las células mutantes en RPN6 cesan su crecimiento, deteniéndose en metafase. Las células muestra un fenotipo terminal uniforme, característico de una parada en metafase: células dobles que no han sufrido citocinesis, contenido 2C de ADN, núcleo no dividido con un huso mitótico corto e intranuclear, y elevados niveles de actividad quinasa asociada a Cdc28. Asimismo, los sustratos de la enzima ligasa APC, Pds1 y Clb2, se acumulan en las células de cepa mutante condicional en condiciones restrictivas. La función de Rpn6 es esencial en mitosis, en concreto para que tenga lugar la anafase. Por otra parte, se purificaron proteasomas a partir de las células de la cepa rpn6-A1 mediante cromatografía de afinidad. Los proteasomas obtenidos muestran una actividad peptidasa inferior a la de proteasomas silvestres, mientras que su actividad ATPasa es idéntica. Además, los proetasomas mutantes presentan una movilidad electroforética mayor en geles no desnaturalizantes que los proteasomas silvestres, siendo su coeficiente de sedimentación en gradientes de densidad menor. Asimismo, los proteasomas obtenidos a partir de las células de la cepa rpn6-A1 han perdido las subunidades que componen la tapa del complejo regulador 19S: La proteína Rpn6 presenta un motivo estructural denominado PCI y localizado en su extremo carboxilo terminal, que es esencial para la función de Rpn6, puesto que versiones truncadas de la proteína que carecen en parte o por completo de dicho motivo son incapaces de complementar la ausencia de Rpn6. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que los proteasomas ensamblados en una cepa mutante rpn6-A1 de levadura están alterados tanto en su estructura como en su composición, y esta desestructuración está provocada por la ausencia de la proteína Rpn6. En este trabajo se muestra la primera evidencia de que la tapa del complejo regulador del proteasoma está implicada directamente en la actividad proteolítica del holoenzima 26S.

Autor: PELAEZ ANDRES ANA ISABEL.
Año: 1999.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El objetivo de la Tesis es la identificación, secuenciación y caracterización del gen recR de S. Lividans así com de una orf (pauta de lectura abierta) de pequeño tamaño que le precede y que podría ser esencial para su función en recombinación y reparación del ADN. Para ello se asiló y secuenció un fragmento portador de las dos orfs. El análisis y comparación de dichas secuencias en bases de datos permitió establecer homologías con genes equivalentes de otros microorganismos. Con el fin de demostrar la participación del gen recR en fenómenos de reparación y recombinación, se procedió primeramente a la inactivación del mismo mediante el tratameinto de la cepa mutada con metilmetanosulfonato y con radiación ultravioleta, agentes mutagénicos que causan daños en el ADN, comprobándose de esta forma que la cepa mutada era más sensible a estos agentes que la cepa silvestre. Finalmente se realizaron experimentos de complementacion de la cepa recR,para lo que se procedió a la transformación con plásmidos integrativos en los que se clonaron los genes intactos procedentes tanto de la cepa silvestre como de E. Coli y B. Subtilis.