INGENIERIA GENETICA, 2

Autor: ESTRADA MARTIN BEATRIZ.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGIA MOLECULAR SEVEROOCHOA.

Resumen: Esta tesis estudia la regulación y la función del gen Abdominal-B (Abd-B) de Drosophila melanogaster. Abd-B es un gen HOX que especifica la identidad de la parte posterior del abdomen y la genitalia (segmentos 5-9) de Drosophila. La regulación del gen Abd-B es muy compleja y en esta tesis hemos estudiado las secuencias reguladoras del gen necesarias para que se exprese correctamente en el segmento octavo ya que no se conocían muy bien. Hemos descubierto que existen una secuencias localizadas en la region 5´del gen que son capaces de dirigir la expresión de un gen Lac-Z en el segmento octavo. Además hemos estudiado molecularmente unos alelos muantes de Abd-B, llamados iab-8,9, estudios sugieren tambien que existen secuencias reguladoras requeridas para la correcta expresión del gen Abd-B en el segmento octavo en la region 5´del mismo. La función de Abd-B en la genitalia no se conocia muy bien, en esta tesis hemos estudiado la función de este gen en el desarrollo de la genitalia adulta de la mosca. Hemos descubierto que Abd-B se requiere para la correcta especificación de la genitalia y cuando se elimina su función esta se transforma en una pata u ocasionalmente en un antena. Las células mutantes para Abd-B en la genitalia desreprimen la expresión de genes necesarios normalmente para que se desarroyen las patas, como Dll y dac. Por tanto, Abd-B antagoniza el desarrollo de apendices en la genitalia.

Autor: NADAL MOYANO SALVADOR.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ETSIAM.

Resumen: Una amplia colección de Vicia faba L. formada por 102 líneas pertenecientes a la colección de trabajo del Departamento de Mejora y Agronomía del CIFA de Córdoba, fueron evaluadas para distintas condiciones de polinización : 1) polinización libre y 2) ausencia de polinizadores, con dos niveles de consanguinidad, autofecundación 1 y autofecundación 2,. El objetivo fue conocer las influencias que el modo de polinización ejerce sobre caracteres relacionados con la flor, con la distribución de la producción y con caracteres más estrechamente relacionados con la producción. Igualmente se estudió, para un menor número de genotipos, la tasa de alogamia y su actividad polinizadora, con el objetivo de identificar posibles relaciones entre alogamia, actividad polinizadora y autofertilidad. En líneas generales para los tres grupos botánicos estudiados, major, equina y minor, el cambio en las condiciones de polinización y aumento de nivel de consanguinidad, modificó la mayoría de los caracteres, modificándolos o disminuyendo sus valores con el aumento de la consanguinidad. Se dieron diferencias para cada grupo botánico para los caracteres más "sensibles" al cambio en las condiciones de polinización. Los valores obtenidos en la estimación de la tasa de alogamia, se encuadran dentro de los reconocidos para la región mediterránea. Los polonizadores más frecuentes correspondieron al grupo de las abejas solitarias y en concreto a Eudera numida, realizando más del 80% de las vistas positivas en los genotipos estudiados, estando presente en la mayoría del periodo de floración, apareciendo las abejas domésticas y al final de la floración. Fue por la tarde cuando se produjo la actividad de forrajeo ni para la abundancia de los polinizadores para los distintos genotipos, a pesar que determinados genotipos mostraron el doble de actividad y abundancia que otros. Se propuso un criterio de clasificación de los genotipos en base a su autofertilidad, al igual que se calcularon dos índices de autofertilidad. En cambio no se detecto ningún patrón de conducta para los cambios en los caracteres con las conidiciones de polinización y aumento del nivel de autofertilidad, ni relación con la tasa de alogamia, se detectó una tendencia negativa entre el número de flores en cada genotipo, con la tasa de alogamia y con la actividad polinizadora. Por todo ello, a la hora de diseñar las estrategias de conservación en la especie, se tiene que tener un perfecto conocimiento por grupos botánicos, y a nivel de cada genotipo individualmente, conociendo si para los materiales objeto de conservación, la ausencia de polinizadores y aumento del nivel de consanguinidad, modifican caracteres de gran importacia en la planta, lo cual obligará a elegir un método de conservación u otro.

Autor: GARCIA MACEIRA FE ISABEL.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Fusarium oxisporum es una de las especies más abundantes, tanto en suelos naturales como cultivados, incluye patógenos virulentos que producen marchitez vascular, provocando en las plantas síntomas carácterísticos de la enfermedad denominada fusariosis. Para colonizar el sistema vascular el hongo debe ser capaz de atravesar las barreras estructurales de la planta, dentro de las que figuran la pared celular.La pectina es uno de los principales constituyentes de la pared de las células vegetales por lo que se piensa que la producción de enzimas pectinolíticas participan en el mecanismo de patogénesis de muchos microorganismos, entre ellos F. Oxysporum f.sp. Lycopersici. El sistema pstinilítico de F. Oxysporum está constituído por al menos, seis pectinasas:PG1,PG2, PG3, PG5,PL1 Y PL2. En este trabajo se aisla y caracteriza a la enzima PG3. Esta exopoligalacturonasa es secretada por F. Oxysporum f. Sp. Lycopersici durante el crecimiento del hongo en presencia de sustratos pécticos como única fuente de carbono. Una expresión similar tienen los genes pectinolíticos pgx4 y pg5, también aislados durante esta tesis. La presión de ambos genes no sólo se ha observado in vitro sino también en plantas de tomate infectadas, lo que indica su participación durante el proceso patogénico de F. Oxysporum.Para aclara dicho papel, es necesario la inactivación de los mismos y el análisis del comportamiento patotípico de los mutantes resultantes. F. Oxysporum había sido reportado como refractario a la integración homóloga de un DNA exógeno. La optimacización del método de transformación genética, nos permitió concluir sobre el papel individual de pgx4 y pg5 en el proceso patogénico de F. Oxysporum f.sp. Lycopersici en su interación con plantas de tomate. El papel de las enzimas pectinolíticas en el proceso de infección de muchos fitopatógenos continúa siendo muy controvertido pese a que se ha descrito la función de enzimas individuales en diversos sistemas patógenos-hospedador.

Autor: ROSA NAVARRO RAUL JOSE DE LA.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ETSIAM.

Resumen: En esta tesis se ha tratado de dar un primer paso en la adaptación de los marcadores moleculares a la mejora de olivo. Para ello, se ha ensayado distintos protocolos de extracción de ADN, de reacción de PCR y de electroforesis, eligiendo aquéllos que maximizaban el polimorfismo entre los parentales del cruzamiento de las variedades 'Leccino' y 'Dolce Agogia'. Así, la matriz elegida para la electroforesis fue la poliacrilamida que, aunque más costosa de realizar daba mayor número de polimorfismos por unidad de tiempo y de coste. En el mapa de ligamiento realizado, con la descendencia de cruzamiento de 'Leccino' y 'Dolce Agogia' (programa MAPMAKER), se han empleado marcadores RAPD y AFLP los cuales se han distribuido uniformemente en casi todos los grupos de ligamiento. Éstos han sido muy hetereogéneos tango en su tamaño como en el número de marcadores que los integraban. Curiosamente, el número de grupos obtenido con cuatro o más marcadores ha sido de 22 en 'Leccino' y 23 en 'Dolce Agogia' (siendo 23 el número cromosómico del olivo). Ha sido destacada la utilidad de los dendogramas en la confirmación de los grupos de ligamiento obtenidos. Por último se ha demostrado la utilidad de los RAPD en la detección de contaminación por autofecundación en los cruzamientos de olivo. Con todo ello se ha visto la utilidad de los marcadores moleculares en la mejora genética de olivo.

Autor: TOSAL PELAEZ LUIS.
Año: 1999.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En la presente Tesis se analiza la influencia que diferentes factores tienen sobre los mecanismos de inducción de mutaciones, utilizando para ello el sistema vermilion de Drosophila melanogaster. En primer lugar se analiza la posible existente de complementación intragénica en el locus vermilion. Los resultados obtenidos reafirman la fiabilidad del sistema empleado. El espectro molecular de mutación inducido con N-etil-n-nitrosourea(ENU) en estadios premeióticos opone de manifiesto la gran semejanza que existe con los datos disponibles en ratón in vivo. Ambos espectros están formados principalmente por mutaciones en sitios AT, resultado de alquilaciones en los oxígenos de la timina, observándose una eficiente reparación, en estos estadios, del resto de alquilaciones inducidas por ENU. Se han analizado dos sistemas de reparación, el sistema de reparación postreplicativa, mediante el empleo de la mutacion mus308, y el sistema de reparación por excisión de nucleótido (NER),mediante el mutante mus201. Se han obtenido los espectros moleculares de mutación inducidos con ENU en estadios postmeióticos, utilizando lineas deficientes en esos sistemas de reparación. Los resultados obtenidos muestran que el locus mus308 está implicado en el bypass postreplicativo, posiblemente mediado por recombinación, de aductos en los oxígenos de las pirimidinas. Su función es incrementar el tiempo disponible por las células para la reparación libre de error de esos daños por otros sistemas de reparación. Además, del análisis del sistema NER de Drosophila se desprende su implicación en la reparación del daño inducido por ENU.En concreto,este sistema repara alquilaciones en los átomos de nitrógeno, alquilaciones en el O 6-guanina y/o O 4-timina, y muy probablemente también en el O 2-timina. La reparación de estos daños depende por tanto de la acción de, al menos, dos sistemas, el sistema de reparación postreplicativa en el que esta implicado el locus mus308, y el sistema de reparación por encisión de nucleótido. Por último se ha analizado la influencia del metabolismo en el proceso de inducción de mutaciones con dietilnitrosamina(DEN), un compuesto muy semejante a ENU pero que requiere activación metabólica. Se ha obtenido el espectro molecular de mutación inducido por DEN en estadios postmeióticos, poniéndose de manifiesto la importancia del metabolismo. El espectro molecular de mutación recuperado no está formado exclusivamente por mutaciones puntales, sino que presenta varias reordenaciones. Así, una alta proporción de las mutaciones obtenidas se debe a daños inducidos por metabolismos originados en la ruta de activación de DEN. En resumen, se concluye que los tres factores analizados: el estadio celular, los sistemas de reparación del DNA y el metabolismo xenobiótico, influyen de manera decisiva en la mutagenicidad de los agentes ensayados, ya que son capaces de modificar la relevancia mutagénica de las distintas lesiones que inducen. Además, el sistema vermilion de Drosophila ha demostrado ser una herramienta idónea para estudiar diferentes aspectos que afectan la mutagenicidad de los agentes ensayandos, ya que son capaces de modificar la relevancia mutagénica de las distintas lesiones que inducen. Además, el sistema vermilion de Drosophila ha demostrado ser una herramienta idónea para estudiar diferentes aspectos que afectan la mutagenicidad de agentes genotóxicos.

Autor: MARAVI SAN MARTIN ROCIO.
Año: 1999.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En humanos, uno de los tumores mas interesantes para estudio es el carcinoma medular de tiroides, tanto por los avances obtenidos en elcampo de la biologia molecular en cuanto a su génesis, como por la posibilidad de establecer un diagnóstico precoz. Existen pocos casos de enfermedades en las que se pueda observar una correlación tan clara entre la presencia de mutaciones en un gen concreto, el RET en este caso, y la patología originada por las mismas. El único problema para estos estudios se plantea por el número limitado de muestras con las que se cuenta, lo que hace dificilmente extrapolables los resultados, al menos desde un punto de vista estadístico. En este sentido, la rata presenta una tasa de aparición de carcinomas medulares de tiroides espontáneos bastante más alta que los humanos, lo que unido a su mayor disponibilidad otorga una gran ventaja para su estudio, y por ello, es un buen modelo experimental. Por ello, realizamos el estudio molecular del protooncogén RET en rata, concretamente en la estirpe Wag/Rij, tanto en tejido normal como tumoral, utilizando amplificaciones, secuenciaciones y SSCP. Posteriormente comparamos los resultados entre sí. Con ello hemos obtenido la estructura molecular del protooncogén ret, su secuenciación completa en la rata y la tasa de mutaciones que presenta.

Autor: QIAN CHENG .
Año: 1999.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En este trabajo, hemos investigado diferentes estrategias de terapia génica para el tratamiento del carcinoma hepatocelular (HCC). Primeramente, hemos utilizado el vector adenoviral para vehiculizar el gende la timidin kinasa del viru herpes simplex (HSV-tk) (AdCMVtk). Hemos el ganciclovir (GCV). La inyección intratumoral de AdCMVtk en tumores establecidos en modelos murinos de HCC conllevó a la regresión de los tumores. Por otro lado, se utilizó la administración de AdCMVtk intraportal seguida de administración de GCV para el tratamiento de ratas a las que se había inducido HCC con el carcinógeno dietil nitrosamina. En estos experimentos se observó una regresión total de los tumores en el 63% de los animales tratados. Sin embargo, este tratamiento indujo tmbién una muerte del 47% de los animales por la toxicidad hepática del tratamiento. Para reducir la toxicidad, hemos explorado nuevas estrategias con una expresión más restricitiva del gen HSV-tk en las células HCC usando el promotor de la alfa-feto proteina (AFP) (AdAFPtk). Nuestros resultados mostraron que la administración de AdAFPtk podía destruir selectivamente las céilas HCC que producen AFP.Como una segunda parte del estudio, hemos usado el vector adenoviral para transferir el gen de la interleukina-12 (IL-12) para potenciar la respuesta inmune antitumoral. Nuestros resultados mostraron que las células HCC podía producir altos niveles de IL-12 murina y humana tras la infección con AdCMVmIL-12 y AdCMVhIL-12 respectivamente. El tratamiento por inyección intratumoral de AdCMVmIL-12 en tumores establecidos en el modelo murino indujo un efecto supresor del crecimiento tumoral y prolongó la supervivencia de los ratones. La hIL-12 producida por las células HCC infectadas por AdCMVhIL-12 era funcional. Nuestros datos indican que los adenovirus recombinantes que expresan HSV-tk o bien IL-12 pueden constituir armas prometedoras para el tratamiento del cancer hepático. Estos datos avalan el paso a desarrollar ensayos clínicos en pacientes con un jepatocarcinoma para el que no existen alternativas terapéuticas.#

Autor: BATLLE GOMEZ EDUARD.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: El tratamiento de las células epiteliales intestinales con el éster de forbol TPA causa la dispersión de las colonias celulares o "scattering". La sobreexpresión de un mutante constitutivamente activo de la PKC alfa reproduce este efecto indicando que esta isoforma es la responsable de la dispersión producida por el TPA. Las células que sobreexpresan la PKC alfa activa manifiestan mayores niveles de la proteasa u-PA y una disminución de los niveles de E-cadherina. Estos cambios comportan un comportamiento invasivo de dichas células. La disminución de los niveles de E-cadherina conlleva una localización nuclear de la beta-catenina. Uno de los efectos de esta relocalización es la inducción del factor transcripcional Snail. Hemos demostrado que la sobrexpresión de Snail disminuye los niveles de E-cadherina. Esta disminución se debe a la acción directa de Snail sobre el promotor de E-cadherina. Snail se uune directamente a tres cajas 5'CACCTG 3' presentes en el promotor dE-cadherina. La expresión de Snail correlaciona con la perdida de E-cadherina en células epiteliales tumorales.

Autor: HUGUET GUTIERREZ EVA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se demuestra que los espermatozoides de ratón son capaces de captar genes, tanto en condiciones de cultivo (in vitro) como en circunstancias fisiológicas (in vivo). Esto último, se ha conseguido mediante una técnica nueva que permite la inyección de genes en el conducto deferente. La incubación in vitro se realizó con espermatozoides, procedentes de la causa epididimaria y del conducto deferente de ratón, a una temperatura de 37 grados C y en una atmósfera con un 5% de CO2. Con una concentración de 500 ng/ml de moléculas de DNA en el cultivo. El procedimiento de inyección in vivo del DNA en el conducto deferente de los ratones, es un proceso que evita una manipulación excesiva del gameto masculino y permite, que posteriormente a ella, ocurra una cópula normal. Esta técnica consistió en operar ratones machos adultos y sexualmente maduros. Cada conducto deferente fue inyectado con 30-50 ul de la solución que contenía 500 ng/ml de DNA (construcciones pMGH y CPV-1). Las técnicas realizadas para localizar las moléculas de DNA fueron: hibridación in situ fluorescente (FISH), hibridación in situ sobre cortes de microscopía electrónica, algunas pruebas moleculares como slot blot semicuantitativo, PCR con DNAs genómicos de espermatozoides y secuenciación de DNA. Posteriormente, se utilizó un nuevo plásmido que contenía la GFP (Green Fluorescent Protein, GFP) para inyectar a los ratones, los cuales se dejaban recuperar hasta el día siguiente para ser cruzados con hembras normales. Algunas de estas hembras tuvieron crías, cuyo DNA (extraído de una biopsia de la cola) fue analizado por PCR para detectar la presencia o ausencia de los genes foráneos inyectados, determinando así la presencia de individuos transgénicos. Los resultados que se obtuvieron con la microscopía parecen indicar que aproximadamente un 70-80% de los espermatozoides de ratón son capaces de asociar el DNA, y con la microscopía electrónica se mostró como aparecían principalmente sobre el núcleo del gameto. Este DNA podría integrarse o al menos unirse al DNA genómico, ya que con las pruebas de secuenciación se obtuvo una homología de un 98.6%. Además, se obtuvo un 5,6% de animales Tg en la primera progenie (F1) y un 8.6% en la segunda progenie (F2) con la GFP. Por último, el resultado del estudio de expresión de GFP en diversos tejidos (cerebro, pulmón, corazón, riñon, hígado, pared abdominal, testículo, ovario, bazo), resultó ser positivo en hígado, riñon y pared abdominal. Con esta técnica nueva de inyección in vivo de DNA en el tracto reproductor masculino, se demuestra la posibilidad de obtener animales Tg mediante este procedimiento, ya que el espermatozoide serviría de vector para las construcciones génicas que serían introducidas en el oocito en la fecundación. Además, no sólo cabría la posibilidad de inyectar genes en este conducto, sino cualquier otro tipo de sustancias, con el fin de buscar explicaciones a ciertas dudas sobre la fisiología del tracto reproductor masculino. De cualquier modo, los resultados que se han obtenido no dejan de ser preliminares, y se espera realizar un número mayor de experimentos, con el fin de garantizar la eficacia de esta técnica y la búsqueda de los factores que regulan este fenómeno.

Autor: PALOMINO SANCHEZ M. CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: Se han medido los caracteres inducción, dividión y regeneración en Brassica napus. Estos caracteres están controlados por sistemas genéticos diferentes. Actúan genes mayores que determinan la capacidad o no de respuesta y también un número indeterminado de genes menores y el ambiente determinarían las variaciones observadas. Se obtuvo un marcador RAPD asociado a inducción y un marcador asociado a floración, que explicó el 44% de la variación para éste carácter. También se detectaron variaciones entre un doble haploide espontáneo y el genotipo original, identificadas como pérdida de una banda, al amplificar con marcadores RAPDs, o aparición de una nueva banda ausente en el genotipo oroginal. En la comparación entre una población F2 y una haploides, descendientes del mismo híbrido F1, se observó sobrerepresentación de alelos Topaz en algunos marcadores analizados en la población de haploides, indicativo de presión de selección en relación con el proceso de cultivo in vitro.

Autor: SILLERO SANCHEZ DE PUERTA JOSEFA CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: Las habas, Vicia faba, son una leguminosa atacada por un gran número de enfermedades. Entre ellas destacan dos enfermedades fúngicas, Ascochyta fabae y Uromyces viciae-fabae, y una planta parásita, el jopo, Orobanche crenata, principal limitante del cultivo de las habas en la Cuenca Mediterránea. En este trabajo se han encontrado nuevas fuentes de resistencia a cada una de las tres enfermedades. Se han encontrado dos tipos de resistencia frente a A. fabae: resistencia cualitativa y resistencia cuantitativa. En cuanto a la roya, U. viciae-fabae, se ha detectado, además de resistencia parcial, un nuevo tipo de resistencia hipersensitiva, no descrito con anterioridad a este trabajo. Besta se manifiesta por la presencia de halos necróticos rodeando a los uredosoros. Las resistencias a estas dos enfermedades no dependen de las condiciones ambientales ni de la edad de la planta, ni tampoco de la precocidad o del contenido en taninos de las líneas. La resistencia a roya ha sido caracterizada tanto a niveles macro y microscópicos como a nivel bioquímico, y, mientras la resistencia parcial es debida a deposiciones de callosa, la hipersensitiva lo es a compuestos fenólicos. En cuanto al jopo, se han detectado fuentes de resistencia en habas y en diversas especies del género Vicia, así como en especies cultivadas o no de otras leguminosas, como Pisum, Lens, Cicer y Lathyrus. Entre los diversos mecanismos de resistencia descritos frente a esta planta parásita se encuentra una menor germinación de las semillas de jopo, resistencia al establecimiento, al desarrollo del jopo y resistencia hipersensitiva.

Autor: BEN GARA ABDERRAMAN .
Año: 1998.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: GENETICA.

Resumen: Se han estudiado los parámetros genéticos de los caracteres logevidad, conformación y plroducción en primera lactación, así como las posibilidades de predicción de los valores genéticos de los toros de los caracteres duración de la vida productiva a partir de sus valores genéticos de los caracteres de producción y conformación, además de las respuestas genéticas de varios índices de selección combinados producción-conformación para determinar los pesos óptimos de los caracteres de producción y conformación en un índica de selección para mejora de las producciones y de la longevidad. Se dispuso de los datos del control lechero oficial de 769.282 lactaciones de 332.763 vacas en 6092 rebaños, así como de 235.248 calificaciones morfológicas. Los caracteres de longevidad se estimaron para 79.308 vacas en control durante 5 años consecutivos desde su primer parto. Los parámetros genéticos de los distintos caracteres incluidos en los análisis se estimaron por el método EM-REML aplicando un Modelo Animal. La estimación de las ecuaciones de predicción de la longevidad a partir de otros caracteres se hizo mediante la regresión múltiple paso a paso; para la construcción de índices de selección combinando varios caracteres se utilizó un método de programación cuadrática combinando varios caracteres según respuestas genéticas relativas deseadas. El estudio de los índices combinados de selección demuestra que las respuestas genéticas óptimas en las producciones de leche y proteína, la duración de la vida productiva y la conformación de la ubre se obtienen con un índice combinando la producción y la conformación con pesos respectivos de 2 y 1. En la producción entran la cantidad y el porcentaje de proteína con pesos respectivos de 9 y 1. En la conformación sólo entra el sistema mamario. Las respuestas genéticas obtenidas con este índice son similares a las obtenidas con el índice de selección de CONAFE(ICO,1995)

Autor: RECIO HOYOS M. CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: VALLADOLID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ANATOMIA PATOLOGICA PROGRAMA DE DOCTORADO: MEDICINA LEGAL, TOXICOLOGIA, DENTOLOGIA Y LEGISLACION.

Resumen: Ante el desarrollo de la ingeniería genética se presentan nuevas situaciones que afrontar tanto en la medicina clínica como en el conocimiento del origen de las especies, conocer en qué medida estamos determinados por nuestros genes, la posibilidad de fabricar seres humanos según un modelo preestablecido. Realizamos un estudio de los antecedentes históricos de la ciencia genética y de su evolución asi como de los diferentes niveles de aplicación de la nueva genética. Prestamos especial atención al proyecto genoma humano. Revisamos las implicaciones éticas de las técnicas de investigación y de sus aplicaciones. Hacemos un repaso histórico de las principales declaraciones y documentos nacionales e internacionales que hacen un llamamiento a secundar criterios éticos. Estudiamos las implicaciones legales, valorando si el ordenamiento avanza acorde con los descubrimientos científicos. Contrastamos las legislaciones de los diferentes paises con las normativas éticas.

Autor: RODRIGUEZ GARCIA ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: Se ha clonado y secuenciado un fragmento de 6082 nucleótidos del genoma de Streptomyces clavuligerus y se han localizado en él cuatro genes de la biosíntesis de arginina que forman una agrupación argDRGH. Los genes argD, argG y argH clonados complementan los auxótrofos correspondientes de Escherichia coli. Corriente abajo de la agrupación argDRGH se encuentra un marco de lectura abierta cuya interrupción conduce al aumento en la resistencia a acriflavina y la disminución de la resistencia a naranja de acridina. La amplificación de argR conlleva un descenso de la actividad biosintética ornitina carbamoiltransferasa y un aumento en la actividad catabólica ornitina aminotransferasa. La interrupción de argR conduce al efecto opuesto sobre la actividad ornitina carbamoiltransferasa. Se ha determinado mediante ensayos de protección frente a la digestión con DNasa I la secuencia de nucleótidos en la region 5' del gen argC Streptomyces clavuligerus que es protegida por la proteína represora AhrC de Bacillus subtilis. La amplificación independiente de los genes argG y argR estimula la producción de acido clavulánico. La interrupción de argR disminuye la producción de ácido clavulánico. El efecto de argR sobre la producción de ácido clavulánico puede deberse a su efecto positivo sobre la expresión del gen regulador de la biosíntesis de clavulánico ccaR. Además, argR está autorregulado en la transcripción. Asimismo este gen reprime la transcripción de ORF4 DE LA AGRUPACIN de biosíntesis del ácido clavulánico. Los genes argG, argH y argR se transcriben dando origen a mensajeros monocistrónicos. Adicionalmente existen mensajeros policistrónicos argG-H Y argB-D-R.

Autor: VIDAL CORTADA JOSEP.
Año: 1997.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: La disfunción de la célula -- pancreática es fundamental en la patogénesis de la diabetes tipo 2. El orígen de tal defecto parece ser genético pero su base está por determinar en la mayoría de pacientes. Se plantea el posible papel en este sentido de la glicerolfosfato deshidrogenasa mitocondrial (GDH-m), el enzima limitante de la lanzadora del glicerolfosfato. Se describe un defecto en la actividad de la enzima en un porcentaje elevado de pacientes con diabetes tipo 2, así como en linfocitos de pacientes con diabetes gestacional. Els estudio de las actividades enzimáticas en linfocitos no sugiere una base genética del defecto observado. El análisis del DNA del dominio del calcio y de la flavin adenosin deaminasa demuestra la presencia de mutaciones en algunos casos aislados. La extensión del estudio a una serie más larga de diabéticos ofrece resultados negativos.

Autor: ESTEBAN RODRIGO ESTHER.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.

Resumen: El tritórdeo es un anfiploide producto del cruzamiento entre la cebada silvestre Hordeum chilense y el trigo. El tritórdeo está siguiendo un programa de mejora en el que es muy importante aumentar su base genética a partir de una colección de numerosas entradas de Hordeum chilense. Hay caracteres de interés agronómico que no son fáciles de encontrar en especies silvestres por lo que hemos recurrido a la cebada cultivada. Hemos obtenido líneas disómicas de tritórdeo para los cromosomas 2,4,5 y 7 de cebada a partir del cruzamiento de las diferentes líneas de adición de cebada en trigo por tritórdeo. Se han obtenido además un gran número de plantas con introgresiones cromosómicas de cebada en tritórdeo, traslocaciones en su mayoría centroméricas a pesar de que no hemos observado apareamiento interespecífico en meiosis. En un caso, una planta tenía un par de cromosomas homólogos de H. Chilense con dos introgresiones intercalares de trigo y una de cebada.

Autor: HUERTAS GONZÁLEZ M. DOLORES.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La protección cruzada frente a la estirpes patogénicas de F. Oxysporum mediante la coinfección de estirpes no patogénicas es un fenómeno que se ha estudiado en diversas especies cultivadas. En el presente trabajo, la coinfección con distintas razas de F. Oxysporum pertenecientes a la misma forma specialis, tenía como objetivo determinar si la especificidad en la interacción raza-cultivar se ajusta al modelo gen-a-gen. Se hicieron experimentos en cámaras de cultivo, inoculando simultáneamente varios cultivares de tomate con distintas razas de F. Oxysporum. Los resultados muestran la existencia de una protección cruzada en plantas de tomate frente a la raza 2 (virulenta) de F. Oxysporum inducida por esporas vivas de la raza 1 (avirulenta) de la misma forma specialis. La enzima PL1, es una endo-pectato liasa sintetizada por F. Oxysporum f.sp. Lycopersici y secretada durante la degradación del tejido vascular y en raices de plantas infectadas, lo que indica su posible función en patogénesis. El gen pelA de F. Solari f.sp. Pisi se utilizó como sonda para clonar el gen Pll de F. Oxysporum f.sp. Lycopersici. P11 tiene una fase abierta de lectura de 824 nucleótidos codificantes para un plipéptido de 238 aminoácidos y se induce in vitro en presencia de PGA o tejido vascular de tomate como únicas fuente de carbono, además mediante RT-PCR se observó expresión in planta en tallo y raíz de plantas infectadas con F. Oxysporum F.sp., lycopersici. Transformantes de Fol con una copia ectópica del gen P11 tienen alterada la expresión del gen y muestran una producción reducida de la enzima. Por otro lado, estos transformantes no causan síntomas de enfermedad en plantas de tomate, tal vez por que el plásmido utilizado en la transformación esté integrado de forma ectópica y haya inactivado algún otro gen que podría se esencial para la patogénesis del hongo. El gen prtl de F. Oxysporum F.sp. Lycopersici codifica una serino-proteasa extracelular perteneciente a la familia de las subtilisinas. Este gen tiene una fase abierta de lectura de 1209 nucleótidos codificantes para un polipéptido de 403 aminoácidos. La posición de los residuos de aminoácidos que constituyen el centro catalítico de la enzima. Asp. His y Ser están muy conservados. Además, existe una alta homología con serino-proteasa fúngicas como del hongo entomopatógeno Metarhizium anisopliae, y el endofito Acremonium Typhinum. Prtl se induce fuertemente en el hongo crecido en colágeno más glucosa, aunque existen niveles basales de transcritos en los demás medios ensayados. Mediante RT-PCR se detecta la expresión de prtl en plantas infectadas con F. Oxysporum f.sp lycopersici, indicando que esta enzima se expresa durante todo el ciclo de la enfermedad.

Autor: RUÍZ ROLDÁN M. CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: F. Oxysporum f. Sp. Lycopersici es un hongo filamentoso que causa enfermedad vascular en plantas de tomate. Para penetrar en el interior de la planta, el hongo debe degradar las paredes celulares vegetales uno de cuyos componentes fundamentales es el xilano degrado por la acción de las xilanasas. Se ha purificado y caracterizado una xilanasa de F. Oxysporum f. Sp. Lycopersici, XYL1, cuyas características son similares a las de otras xilanasas fúngicas de la familia F. Asimismo, se ha aislado y caracterizado dos genes xilanasa, XY12 y XY13, ambos pertenecientes a la familia F de xilanasas. Los dos genes se expresan en presencia de xilano o de tejido vascular de tomate como única fuente de carbono. La expresión de XY12 en planta se detectó en los últimos estadíos de la enfermedad coincidiendo con la muerte de la planta. En cambio XY13, se expresó durante todo el ciclo de la enfermedad, desde la penetración por las raices hasta la muerte de la planta. La transformación de la estirpe 45-87 de este hongo con un vector portador del gen XY13 interrumpido por el gen marcador de resistencia a higromicina resultó en la integración ectópica de dicho vector en la región adyacente al gen XY13. Los transformantes obtenidos eran avirulentos y sobreproducían una xilanasa básica.

Autor: CASTILLA CASTRILLON JOAQUIN.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: 1. SE HA DETERMINADO LA SECUENCIA DE LOS GENES DE LAS CADENAS LIGERA Y PESADA DEL ANTICUERPO 6A.C3 NEUTRALIZANTE PARA EL VGPT, CONCLUYENDO QUE EL MODULO VARIABLE DE LA CADENA LIGERA KAPPA PERTENECE AL SUBGRUPO V Y EL MODULO VARIABLE DE LA CADENA PESADA GAMMA PERTENECE AL SUBGRUPO IIIC, SEGUN LA CLASIFICACION DE KABAT. 2. SE HA CONSTRUIDO UN ANTICUERPO RECOMBINANTE QUIMERICO MURINO-HUMANO CON ESPECIFICIDAD PARA EL VGPT. ESTE ANTICUERPO SE HA SECRETADO DE FORMA TRANSITORIA EN CELULAS EPITELIALES COS Y DE FORMA ESTABLE EN CELULAS SP2/0, OBTENIENDOSE TITULOS EN RIA DE 10 ELEVADO A 3 QUE REDUCEN LA INFECTIVIDAD DEL VIRUS EN UN FACTOR SUPERIOR A 10.000, COMPARABLES A LOS DEL ANTICUERPO 6A.C3 ORIGINAL. 3. SE HA DEMOSTRADO LA PROTECCION DE CULTIVOS CELULARES FRENTE A INFECCIONES VIRALES MEDIANTE LA EXPRESION DE ANTICUERPOS RECOMBINANTES. LA PRODUCCION DE VIRUS EN ESTAS LINEAS CELULARES DISMINUYO 100.000 VECES. ESTE TRABAJO SE PODRIA UTILIZAR PARA EL DESARROLLO DE SISTEMAS DE TERAPIA GENICA SOMATICA BASADOS EN LA EXPRESION DE ANTICUERPOS. 4. SE HA DESARROLLADO UN SISTEMA QUE PERMITE LA EXPRESION INDUCIBLE DE GENES DE INMUNOGLOBULINA EN CULTIVOS CELULARES DE GLANDULA MAMARIA DE RATON, UTILIZANDO MODULOS DE EXPRESION ESPECIFICOS DE TEJIDO, PARA COMPROBAR LA FUNCIONALIDAD DE ESTAS CONSTRUCCIONES ANTES DE UTILIZARLAS EN LA OBTENCION DE ANIMALES TRANSGENICOS. 5. SE HAN OBTENIDO ANIMALES TRANSGENICOS QUE SECRETAN ENTRE 1-20 MG/ML DE RACMS EN LA LECHE DURANTE LA LACTANCIA. LOS TITULOS DE ANTICUERPOS OBTENIDOS REDUJERON LA INFECTIVIDAD DEL VGPT EN UN FACTOR SUPERIOR A 10 ELEVADO A 6, LO QUE PROBABLEMENTE PERMITA PROTEGER A LA DESCENDENCIA FRENTE A LA INFECCION POR CORONAVIRUS. 6. SE HA DEMOSTRADO QUE LA COINTEGRACION DE MODULOS DE EXPRESION DE GENES DE INMUNOGLOBULINAS CON SECUENCIAS DE ANCLAJE A LA MATRIZ NUCLEAR (SECUENCIAS MAR) AUMENTO 1000 VECES LOS NIVELES DE EXPRESION DE LOS ANTICUERPOS SECRETADOS EN LA LECHE DE RATONES TRANSGENICOS, INDICANDO LA EFICACIA DE LA COINTEGRACION DE LAS SECUENCIAS MAR EN LA EXPRESION DE LOS TRANSGENES.

Autor: DOMINGUEZ DEL TORO EDUARDO.
Año: 1996.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: NEUROQUIMICA, HISTOLOGIA, INSTITUTO DE NEUROCIENCIAS PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.

Resumen: EL CLONAJE DE LA SUBUNIDAD ALFA7 DEL RECEPTOR NICOTINICO NEURONAL DE ACETILCOLINA, CAPAZ DE UNIR ALFA-BUNGAROTOXINA, UNIDO A LA DISPONIBILIDAD DE ANTICUERPOS MONOCLANES ESPECIFICOS CONTRA DICHA SUBUNIDAD, NOS PERMITIO ABORDAR EL ESTUDIO DE SU LOCALIZACION EN EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL (SNC) Y PERIFERICO (SNP) Y COMPARARLA CON LA DE LOS SITIOS DE UNION DE LA TOXINA, QUE HABIAN SIDO DESCRITOS CON ANTERIORIDAD. LA SUBUNIDAD ALFA7 SE EXPRESA EN EL SNC DE FORMA UBICUA, CON UNA BUENA CORRELACION CON LOS SITIOS DE UNION DE LA TOXINA. SE DESCRIBEN TAMBIEN LOS CAMBIOS EN LA EXPRESION DE LA SUBUNIDAD ALFA7 QUE SE SUCEDEN EN EL CEREBELO DE LA RATA DURANTE EL DESARROLLO POSTNATAL. EL PATRON DE EXPRESION DE LA SUBUNIDAD ESTA RELACIONADO CON LOS ACONTECIMIENTOS QUE OCURREN EN DICHO PERIODO, E INDICAN QUE EXISTE UNA FUERTE REGULACION DE SU EXPRESION Y UN POSIBLE PAPEL EN LA SINAPTOGENESIS. EN LOS ESTUDIOS DE SU EXPRESION EN EL SNP (CELULAS CROMAFINES) SE INVESTIGARON LOS MECANISMOS IMPLICADOS EN LA EXPRESION GENETICA A NIVEL DEL PROMOTOR Y SU ACTIVACION POR EL FACTOR DE TRANSCRIPCION EGR-1.