INMUNOLOGIA, 2

Autor: SANZ MILIÁN MAGDALENA.
Año: 2001.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA - UNIVERSIDAD DE NAVARRA .

Resumen: La mezcla de polímeros del péptido S(124-147) (S(124-147(p) mimetiza epitopos B del antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (HBsAg) capaces de ser reconocidos por sueros de sujetos vacunados (44%) así como por sueros de ratones inmunizados con HBsAg. Dicho péptido ha sido encapsulado eficientemente en micropartículas de PLGA. De entre las diferentes micropartículas elaboradas aquellas que contienen el polímero con mayor proporción de ácido láctico (RG 756) y Tween 80, son las que presentan una más alta eficacia de encapsulación y menor liberación inicial del péptido así como la liberación más sostenida. Al estudiar la inmunogenicidad del péptido en micropartículas se observó que la respuesta obtenida tras administración parenteral en ratones Balb/c era similar a la alcanzada con la misma dosis de dicho péptido en adyuvante de Freud. Los anticuerpos inducidos por el péptido S(124-147)p reconocen al HBsAg. Los perfiles de citoquinas inducidos por el péptido pusieron de manifiesto que dicho péptido induce una respuesta Th0/Th1 en ratones Balb/c. La inmunización junto con un péptido DTh (FIS, aminoácidos 106-118 de la mioglobina de esperma de ballena) en Adyuvante de Freud aumenta la respuesta inmune inducida por el péptido S(124-147)p. Se ha estudiado la respuesta inducida tras la inmunización de ratones con micropartículas mixtas que contienen el péptido S(124-147)p y el FIS y micropartículas del S(124-147)p con micropartículas del FIS, detectándose distintos perfiles de citoquinas (IFN-gama e IL-4) lo que permite modular la respuesta T helper. La inclusión del DTh en la misma micropartícula disminuye el ratio IFN-gama/IL-4 y favorece la inducción de la respuesta humoral. Ya que una de las principales vías de entrada del virus de la Hepatitis B es a través de mucosas, se han elaborado micropartículas mixtas de tamaño inferior a 5 um para ser administradas por vía oral, con polímeros de recubrimiento energético (HP-50, CAP) que han resultado adecuadas para proteger de la degradación gástrica a los péptidos localizados en la superficie de las mismas. Estos sistemas pueden ser captados por las placas de Peyer y permiten controlar la liberación de los antígenos por lo que es de suponer que se comporten como sistemas eficaces de administración oral de vacunas y disminuyan el riesgo de tolerancia.

Autor: ROBLES MARTÍNEZ M. SAGRARIO.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El objetivo del presente trabajo ha sido identificar si el bloqueo de la apoptosis afecta mecanismos de selección, positiva y negativa que operan en el timo y si ello conlleva el desarrollo de manifestaciones linfoproliferativas y/o autoimunes. Para este fin generamos ratones transgénicos que expresaban inhibidores de apoptosis, p35 y OpIAP en células T. Además para realizar el análisis más fino, cruzamos estos animales con ratones transgénicos que expresan un único receptor de células T (F5) y que posee especificidad para un epitopo de la nucleoproteína del virus de la gripe. Los resultados obtenidos permiten concluir que la sobreexpresión de -- proteínas, p35 y OpIAP, inhibe la apoptosis que subyace a la selección negativa de los linfocitos en el timo. Además, la presencia de OPIAP hace a las células T más susceptibles a la estimulación mediada por el receptor clonotípico, lo cual se refleja en una mayor producción de citoquinas y la mayor susceptibilidad al desarrollo de respuestas de inflamación en el modelo de hipersensibilidad por contacto. Sin embargo, en ninguno de los modelos de transgénicos analizados los ratones parecen ser más sensibles al desarrollo de enfermedades autoinmunes ni linfoprolilferativas. Conscuentemente, el presente trabajo permite concluir que la homeostasis del sistema inmune, a fin de garantizar la ausencia de respuesta contra los componentes propios, no esta únicamente basada en el control de la selección de células T, sino que han de existir otros mecanismos paralelos, posiblemente basados en la existencia de células reguladoras.

Autor: ORDOQUI GARCÍA ELENA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: H.G.U. "GREGORIO MARAÑÓN" U. COMPLUTENSE.

Resumen: Las reacciones adversas a medicamentos plantean problemas diagnósticos debido a los escasos medios seguros y fiables existentes en la actualidad para su estudio tanto in vivo como in vitro. La confirmación diagnóstica implica un riesgo para el paciente, ya que conlleva la exposición al medicamento. El objetivo de este trabajo es valorar la utilidad de la determinación de la triptasa sérica desgranulada de los mastocitos, en el diagnóstico de las reacciones adversas a medicamentos. Esta técnica in vitro resulta segura para el paciente. Se estudian 66 pacientes, 27 con alergia a medicamentos confirmada por prueba cutánea, detección de IgE específica y/o prueba de exposición, que habían presentado: 7 shock anafiláctico (SA), 14 anafilaxia (ANA) y 17 urticaria-angioedema (U-AE). Se incluyen 12 con idiosincrasia a antiinflamatorios no esteroideos (IDIO), 6 reacciones adversas no alérgicas (RANA) y 10 pacientes con síntomas leves tras recibir placebo (PLA). Como controles, 10 sujetos sanos. Las técnicas empleadas para la determinación de triptasa son RIACT® y UniCAP® . Se aprecian grandes incrementos de triptasa sérica estadísticamente significativos en los grupos de SA y ANA, con ambas técnicas diagnósticas y muy pequeño en URT-AE. En el grupo de IDIO se objetiva un leve incremento sólo con la técnica RIACT®. No se observan cambios en los grupos RANA y PLA. Los niveles séricos de los controles y los basales de todos los grupos son superponibles. El tiempo en que se alcanza el pico de triptasa varía considerablemente entre pacientes son similares reacciones, unos llegan al máximo en 20-30 minutos, otros en 2 horas y algunos en 3-4 horas. Como conclusiones, destacar la utilidad de la medición de triptasa sérica en el diagnóstico de SA y ANA, pero es preciso seriar las determinaciones para captar su pico. No es útil en las reacciones leves de U-AE e IDIO. El punto de corte de UniCAP® se debe reducir ya que 9,45 U/1 es un óptimo umbral. El incremento de triptasa es variable incluso cuando el pico no llega al umbral pero existe un incremento significativo. La técnica UniCAP® presenta sensibilidad y especificidad similares a RIACY®, pero es más cómoda y evita el uso de isótopos radiactivos.

Autor: SERRANO TORRES PILAR.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El receptor para antígeno de la célula T(alfa,beta) (complejo TCR/CD3) es una estructura multiproteica de estequiometría desconocida integrada por las cadenas variables TCR (TCRalfa y TCRbeta), responsables del reconocimiento de antígeno, y las cadenas invariantes CD3 (CD3*, CD3gamma, CD3* y CD3*), responsables del ensamblaje-expresión del complejo y de la señalización intracelular. Su estructura global - mínima alfabeta,------- se supone compartida por todas las células Talfabeta, CD4+ y CD8+. Sin embargo, el papel fisiológico de cada una de las cadenas invariantes es aún desconocido, y es tema de debate si sus funciones son redundantes o específicas. El estudio de mutantes (naturales o inducidos, ratón o humanos) constituye una útil aproximación para el esclarecimiento de estas cuestiones. En este trabajo se analiza desde múltiples puntos de vista (fenotípico, funcional y bioquímico), en modelos desarrollados in vitro (linfocitos T inmortalizados con Herpesvirus saimiri), un caso de inmunodeficiencia humana de CD3gamma. Los resultados: 1,- Confirmar que la cadena CD3gamma tiene un papel especializado en la construcción de complejos TCR/CD3 en el linaje CD8+ respecto al Cd4+ (DA Zapata et al J.Biol. Chem. 274, 35119-35128, 1999). 2,- Sugieren que, además, podría existir una implicación funcional de la cadena CD3gamma, para determinados trabajos como la producción de IL2 (Pacheco-Casto y cols. 1998), la modulación mediada por PMA, la polarización, o la apoptosis se encuentran afectados en ausencia de CD3gamma, pero no para otros como la citolisis, la proliferación, la síntesis de TNFalfa (Pacheco-Castro y cols. 1998). Sin embargo, CD3gamma contribuiría para ajustar cinéticamente otras funciones como la dinámica basal, modulación mediada por ligandos, la fosforilación o los cambios en la expresión de moléculas de membrana. Estos resultados funcionales y otros obtenidos en los modelos K.O de las cadenas CD3 (ITAM less), nos sugieren que, al menos parte de, estos desajustes funcionales más o menos dependientes de CD3gamma son el resultado, de la conformación adoptada por el receptor mutante.

Autor: MIÑAMBRES GARCÍA EDUARDO.
Año: 2001.
Universidad: CANTABRIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO MARQUÉS DE VALDECILLA.

Resumen: El suero procedente del drenaje venoso cerebral, de pacientes con traumatismo craneo-encefálico o hemorragia intracraneal espontanea grave, presenta algún factor soluble capaz de inducir apoptosis celular in vitro en celulas linfoides. La tasa de apoptosis celular se relaciona con el pronóstico de los pacientes así, como con todos los índices de gravedad estudiados al ingreso en la unidad de cuidados intensivos. El factor soluble inductor de apoptosis es un opioide endógeno, generado tras la lesión cerebral, o exógeno como el fentanilo. La inducción de apoptosis se relaciona con un aumento de la expresión de BAX (proteína intracelular Pro-Apoptótica) y un descenso en la expresión de Bcl-Xl (proteína intracelular anti-apoptótica). Las células jurkat apoptóticas expresan autoantígenos que son reconocidos por autoanticuerpos de pacientes con enfermedades autoinmunes. Debido a la expresión de estos autoantígenos se induce, en los pacientes con daño cerebral agudo, la producción de novo de autoanticuerpos meses después de la agresión cerebral.

Autor: HERREROS VILLANUEVA M. LOURDES.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: CC. QUIMICAS.

Resumen: En el desarrollo de esta Tesis Doctoral se ha estudiado el papel del estroma tumoral en la infiltración leucocitaria en focos tumorales metastásicos de melanoma humano. Los resultados obtenidos indican que los fibroblastos presentes en el estroma son responsables de gran parte de la migración leucocitaria haci estos focos, principalmente de la migración monocítica, mediante la producción de la quimioquina MCP-1. Los linfocitos T infiltrantes del tumor ejercen un papel activador de este fenómeno, vía factores solubles, entre los que se han identificado TNF-alpha e IFN-gamma. Durante la migración celular se producen cambios importantes en el citoesqueleto de la célula. En este trabajo se ha desarrollado también el estudio de la localización subcelular de la proteina de citoesqueleto paxilina en leucocitos. Se ha encontrado presente en el MTOC (centro organizador de microtúbulos), de forma constitutiva, interaccionando "in vitro" e "in vivo"con las molécula alpha-tubulina y gamma-tubulina.

Autor: CAMPILLO MARQUINA J0SE ANTONIO.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: HOSPITAL CLINICO DE SAN CARLOS.

Resumen: La médula ósea contiene células supresoras naturales capaces de inhibir diferentes respuesta proliferativas mediante la producción de óxido nítrico. Estas células han sido recientemente caracterizadas como progenitores mieloides. El óxido nítrico está implicado no solamente en la actividad supresora natural, sino en diferentes situaciones patológicas que conciernen a la médula ósea. Los glucocorticoides inhiben la producción de óxido nítrico actuando sobbre la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible y sobre citacinas necesarias para su inducción. Los resultados indican un efecto diferencial de los glococorticoides sobre la producción de óxido nítrico en función de la presencia o no de endotoxina. En este sentido, cuando el estímulo empleado es la endotoxina, estos agentes inhiben solo ligeramente la producción de óxido nítrico. Por el contrario, dicha inhibición es potente cuando la producción de óxido nítrico es a través del receptor de TNFAlfa. Por otro lado, se demuestra un efecto directo de los glucocorticoides sobre la población productora de IFNGamma en médula ósea, caracterizada como una población Thy 1.2+B200-CD3+CD4-CD8-NK1.1

Autor: SACEDON AYUSO ROSA.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FC. DE BIOLOGIA; UCM.

Resumen: En el presente estudio se han utilizado dos modelos experimentales, ambos in vivo, conel fin de estudiar el papel de los glucocorticoides en los procesos de diferenciación intratímicos. El primero de ellos consiste en el análisis de la maduración temprana del primordio tímico enla progenie de ratas adrenalectomizadas que se desarrollan en ausencia de glucocorticoides circulantes hasta el establecimiento del HPA fetal. El segundo modelo experimental permite el estudiod el desarrollo tímico en ausencia parcial de receptores de glucocorticoides. Así, se analizó la ontogenia del timo de ratones transgéncios que expresabanun RNAm complementario de una región específica del receptor de glucocorticoides, lo cual da lugar a una reducciónd e un 60-70% en el número de dichos receptores presentes en el timo. De los resultados obtenidos se puede concluir la importancia de los glucocorticoides durante los procesos de maduración intratímicos que afectan tanto a los timocitos, incluso antes de su llegada al primordio tímico como a las poblaciones no linfoides tímicas, epitelio y células dendríticas.

Autor: CRIADO CARRASCO GABRIEL.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS.

Resumen: El análisis de la identeidad de las tirosina-quinasas asociadas al complejo TCR/CD3 realizado en hibridomas y líneas en cultivo ha dado lugar a diferentes resultados, que no representan adecuadamente las asociaciones moleculares presentes en linfocitos normales. Para completarlos, nos planteamos estudia en linfocitos T CD4+aislados de bazo de raton las tirosina-quinasas asociadas a TCR/CD3 y el papel que juega CD4 en esa asociación. Los resultados de este estudio demuestran que en estas células la principal fuente de actividad tirosina-quinasa asociada al complejo TCR/CD3 es lck y que CD4 contribuye aportando el 50% de esta 1ck asociada y regula negativamente la actividad de las tirosinaquinasas asociadas a TCR/CD3. Por otro lado, la participación de la región citoplásmica de CD4 y su asociación a 1ck en la activacion a través del TCR se habia estudiado previamente en hibridomas y lineas transformadas, independientes de antígeno para su mantenimiento con resultados contradictorios. Por ello, nos planteamos analizar la contribución de CD4 a esta activación en la linea SR.D10,dependiente de antígeno para su mantenimiento, utilizando mutantes de CD4 con mutaciones que impiden la asociación de 1ck. Los resultados derivados de este trabajo indican que CD4 potencia la activación a través del TCR. La aportación de las diferentes regiones de CD4 a esta potenciación depende de las diferencias en la eficacia de los sistemas de activación, dependiente de diferentes parámetros. Cuando la eficiencia del mecanismo de activación es alta, basta la región extracelular de CD4 para potenciar la respuesta, mientras que en sistemas con menos eficacia es, cesaria la asociación de 1ck a CD4 par contribuir a la señalización a través el TCR.

Autor: VELERT VILA M. MAR .
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACION HOSPITAL LA FE. VALENCIA.

Resumen: Los leucocitos polimorfonucleares(PMN) poseen mecanismos de defensa, dependientes e independientes del oxígeno, frente a la mayoria de agentes patógenos. En condiciones fisiológicas, la activación de estas células durante la fagocitosis o exposición a agentes extraños desencadena la generación de radicales libres derivados del oxígeno en un proceso denominado explosión respiratoria. Cualquier alteración que provoquen los fármacos en el metabolismo oxidativo de los PMN, sobre todo en los pacientes inmunodeprimidos, va a comprometer el éxito de la terapia establecida. El objetivo de esta investigación es estudiar el efecto que los fármacos antiinflamatorios, ampliamente utilizados en clínica, ejercen sobre la generación de anión superóxido y peróxido de hidrógeno de los PMN. Para ello se necesita estandarizar el método de cuantificación de estos oxidantes dado que no existe consenso internacional acerca de los métodos a utilizar,y cuantificar los valores normales de su liberación in vitro, tanto en estado basal como activado, en la población sana. Para la cuantificación de anión superóxido se utiliza al método de reducción del citocromo c y para medir la generación de peróxido de hidrógeno el método de oxidación del rojo fenol. Ambos métodos espectrofotométricos utilizan pequeño volumen de células y de reactivos lo que permite analizar gran número de muestras en paralelo y, también permiten el seguimiento de la cinética de reacción. Para determinar la influencia de cada antiinflamatorio y de su combinación con otros fármacos (antifúngicos, antivírico y antibioticos) se establecen dos condiciones experimentales :1)la adiccion de los fármacos a la mezcla de reacción, sin pretratamiento de los PMN y, 2)el pretratamiento de los neutrófilos con los fármacos durante 30 minutos a 37º C. Esto nos permite distinguir si el efecto observado se debe a la acción directa de los fármacos sobre las especies oxidantes generadas, a modo de depuradores, o si se necesita un tiempo de contacto previo para la penetración de los fármacos al interior celular o la alteración de los mecanismos de activación de la exploxión respiratoria. En general, la presencia de los distintos farmacos ensayados no altera el metabolismo oxidativo de los PMN en reposo ni activados con un ester de forbol(PMA). Sin embargo, el pretratamiento de los neutrófilos durante 30 minutos a 37º C con los fármacos modifica de forma diferente la generación de especies oxidantes cuando se mide la respuesta de esta células en estado activo. En este caso los resultados dependen del tipo y concentración de fármaco utilizado: -Dexametasona, Hidrocortisona, AAS y Fenilbutaosna inhiben la explosión respiratoria. -Fluconazol e Intraconazol no modifican el metabolismo oxidativo a diferencia de la Anfotericina B. -Ninguno de los antiviricos ensayados(Aciclovir, Ganciclovir y Foscarnet)inhiben la generación de especies oxidantes. -Grepafloxacino inhibe la generación de peróxido de hidrógeno y, en cambio, Ofloxacino estimula la liberación de anión superóxido. Cuando se combinan los antiinflamatorios con antifúngicos, antivíricos o antibióticos, no se modifica la generación espontánea de radicales oxidantes, pero sí se observan resultados diferentes en la respuesta de los neutrófilos al estímulo con PMA dependiendo de la concentración y tipo de fármacos combinados.

Autor: GARCÍA GILA MERCEDES.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS-CSIC.

Resumen: El trabajo experimental ha consistido en estudiar diversos aspectos funcionales e la integrina a4b1 en patologías de células B. En primer lugar se ha estudiado el papel de a4b1 en la regulación de apoptosis en líneas celulares B de diferente origen. Los resultados demuestran que esta integrina previen la apoptosis inducida por privación de suero en ciertos casos independientemente del origen celular. Sin embargo no parece intervenir en la apoptosis inducida pro anti-IgM o anti-Fas, sugiriendo diferentes rutas de señalización en estos casos. La ocupación de a4b1 también previene la apoptosis espontánea de células de leucemia linfoide crónica B (LLC-B) por mecanismos que implican modulación del cociente BcL-2/Bax. Por otra parte, se han realizado estudios "in vivo" para determinar el posible papel de a4 en la progresión de células malignas en el mieloma múltiple. La inyección de un Acm anti-a4 en ratones con mieloma inducido reducía algunso síntomas de esta patología sugiriendo que esta pdoría ser una nueva vía terapeútica futura. Estos resultados ayudarán a explicar la supervivencia de algunas células B malignas así como la localización de células de mieloma en la médulo ósea. Parte de estos resultados ya han sido publicados y otros están en preparación.

Autor: OTEO VIVES MARTA.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CC. BIOLOGIAS.

Resumen: El sistema CD1 es un conjunto de moléculas relacionados con HLA de clase I implicadas en la presentación de lípidos y glicolípidos de microbacterias a los linfocitos T. En este trabajo se realiza un análisis del polimorfismo de los cinco genes CD1 humanos de forma exhaustiva por PCR y SSCP. Se describen 4 nuevos alelos de CD1 en individuos sanos de distinto origen étnico. Uno de estos alelos resulta de un cambio de Cys por Trp en el triplete 52 de CD1A y su frecuencia varía desde un 10% en individuos Caucasoides a un 50% en Mongoloides. Con el fin de caracterizar estructuralmente dicho alelo, el c-DNA que codifica la secuencia completa de los alelos salvaje y mutado de CD1A se transfectó en líneas celulares deficientes de HLA de clase I demostrándose que ambos alelos eran capaces de expresarse en la membrana de las células transfectadas. Mediante inmunoprecipitación y posterior electroforesis en condiciones reductoras y no reductoras se comprueba que CD1 se encuentra en forma monomérica en la superficie de dichas células. Así mismo, se analizan los genes CD1 en una serie de pacientes que presentan una serie de infecciones por micobacterias no tuberculoides en ausencia de inmunodeficiencias conocidas. Nuestros resultados indican que estos pacientes no presentan alteraciones enlos genes CD1.

Autor: GARCIA NAVARRO RAQUEL.
Año: 2000.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA U. NAVARRA.

Resumen: El virus de la hepaitis de la marmota (WHV) y el virus de la hepatitis B (HBV) son muy similares en cuanto a organización genomica, respuesta inmune antiviral y patobiologia de la infección. La respuesta inmune celutar T frente al antigeno de la nucleocapside (HBcAg o WhcAg) juega un papel critico en el aclaramiento viral y en la protección frente a la infección. Nuestro estudio muestra que la vacunación congenica de marmotas sanas con un plasmido que codifica para WhcAg (pCw) estimula la proliferación de celulas T especificas frente al WHcAg, pero estas celulas no producen interferon gammma (IFN-y) a pesar del estimulo antigenico. Tras la infección experimental con WHV, los animales inmunizados con pCw mostraton una viremia mas alta y duradera que las marmotas control no inmunizadas, y uno de los animales vacunados desarrollo infección cronica. Con el objetivo de inducir la respusta TH1, otro grupo de marmotas fue co inmunizado con plasmidos expresando WHcAg y la Interleuquina 12 (IL 12w) de marmota. Estos animales mostraron una respuesta proliferativa especifica frente al WHcAg con alta producción de IFN-y, y resultaron protegidos de la infección por WHV, mostrando una viremia inexistente o presenando valores esporadicos muy bajos, en algunos casos. Nuestros resultados muestran que la inmunización con la pistola genica puede generar un perfil de respuesta TH2, que puede incluso favorecer la replicación del virus. Sin embargo, se puede reconducir la respuesta hacia un perfil TH1, mediante la coadministración de IL-12, consiguiendo asi una inmunidad protectiva frente a la infección por WHV. Estos datos demuestran el papel crucial de la respuesta TH1 en el control de la replicación de los hepadna virus, y abre nuevas posibilidades en el area de la vacunologia frente al virus de la hepatitis, no solo a nivel profilactico sino tambien en la terapia de la hepatitis cronica.

Autor: RODRÍGUEZ PÉREZ M. CARMEN.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) y la tromocitopenia ligada al cromosoma X (XLT) son debidos a mutaciones en el gen WASP. WAS se caracteriza por trombocitopenia congénita, eczema e infecciones además de una elevada susceptibilidad a padecer enfermedades autoinmunes y procesos tumorales, fundamentalmente tumores linforretituclares. XLT, según lo recogido en la literatura actual, constituye una tromocitopenia congénita que carece prácticamente de infecciones , con inexistente o mínima dermatitis eczematosa; y sin alteraciones inmunológicas o éstas son mínimas. En el presente estudio hemos estudiado 57 pacientes recogidos en la base de datos de la Sociedad Europea de Inmunodeficiencias ESID, 22 de estos pacientes son seguidos en la Clinica Pediátrica de la Universidad de Brescia (Italia). En 56 de estos pacientes han sido halladas mutaciones del gen WASP. Los hallazgos clínicos, inmunológicos, moleculares y bioquímicos han sido analizados en este grupo de enfermos. Los resutlados de este estudio señalan que XLT y WAS, son la misma enfermedad siendo XLT la forma inicial y WAS la forma final de evolución natural de la enfermedad; que existe una correlación genotipo-fenotipo; que es de enorme valor pronóstico la expresión de la proteína WASP y que la esplenectomia carece de eficacia si previamente se han producido hemorragias importantes.

Autor: MARTIN FERNANDEZ M. PILAR.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICIAS.

Resumen: En este trabajo de Tesis doctoral presentado por Dña. Pilar Martin Fernandez se ha llevado a cabo el análisis de la respuesta inmune frente al virus del tumor mamario del raton (MMTV). Los datos obtenidos demuestran que el virus MMTV induce una activación policlonal de las celulas B que favorece el proceso de infeccion de estas. Por otra parte se ha demostrado que la infeccion por MMTV determina la diferenciación de una población de plasmablastos extrafoliculares, que constituye la principal poblacion de celulas infectadas por MMTV, y que tiene capacidad para soportar la replicacion viral. Ademas los datos presentados demuestran que los plasmablastos extrafoliculares son capaces de transmitir la infeccion por MMTV a la glandula mamaria y posteriormente a la progenie. Finalmente se ha mostrado que la infección por MMTV determina importantes cambios en las poblaciones de celulas dendriticas en el ganglio popliteo, relacionados con la participación de estas celulas en la infeccion por MMTV.

Autor: ALONSO COLMENAR LUIS MIGUEL.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: EN EL PRESENTE TRABAJO HEMOS LLEVADO A CABO UNA CARACTERIZACION FENOTIPICA, POR CITOMETRIA DE FLUJO MULTIPARAMETRICA, Y DE LAS POTENCIALIDADES PARA GENERAR CELULAS T, NK Y DENDRITICAS (DC), EN XENOCULTIVOS ORGANOTIPICOS RATA/TIMO FETAL DE RATON-SCID, DE LAS POBLACIONES MAS INMADURAS DE TIMO ADULTO Y FETAL Y DE CELULAS LINFOHEMATOPOYETICAS DE HIGADO FETAL DE RATA, ENCONTRANDO QUE TALES POBLACIONES PRESENTAN UN FENOTIPO CD45+CD8-CD4-TCR/CD3-CD2-CD44+CD53+THY-1+. EN EL TIPO FETAL, ADEMAS, ENCONTRAMOS QUE TAL POBLACION CONTIENE CELULAS CON UNA BAJA EXPRESION DE NKR-P1A, LAS CUALES SON FUNDAMENTALMENTE CELULAS COMPROMETIDAS CON EL LINAJE NK, AL CONTRARIO DE LO HATA AHORA DESCRITO EN RATON. TAL POBLACION NO FUE ENCONTRADA EN TIMO ADULTO NI EN HIGADO FETAL AUNQUE EN ESTE ULTIMO EXISTEN, IGUALMENTE, ALGUNAS CELULAS COMPROMETIDAD CON EL LINAJE NK. POR OTRA PARTE, DEMOSTRAMOS QUE LA VIA PRINCIPAL DE MADURACION T TRANSCURRE A TRAVES DE UN PROGENITOR BIPOTENTE COMUN A CELULAS T Y DC QUE ES ENCONTRADO, TAMBIEN, EN HIGADO FETAL, ALGO PREVIAMENTE NO DEMOSTRADO EN OTRAS ESPECIES. HEMOS CLONADO UN FRAGMENTO CDNA DE CADENA pre-TCRa DE RATA Y DEMOSTRADO LA PRESENCIA DE TRANCRITOS ARN PARA ESTA Y TCRB MADURA NO SOLO EN LAS POBLACIONES TIMICAS CD2-, LO QUE DEMUESTRA UN COMPROMISO T PREVIO A LA ADQUISICION DE CD2 EN LA DIFERENCIACION INTRATIMICA, SINO TAMBIEN EN LA POBLACION DE HIGADO FETAL LO QUE PONE DE MANIFIESTO QUE EL COMPROMISO T PUEDE TENER LUGAR EXTRATIMICAMENTE. ESTE HECHO ES POSTERIORMENTE CONSTATADO AL DEMOSTRAR LA APARICION DE CELULAS T INMADURAS CD2+CD8+ EN CULTIMOS ORGANOTIPICOS DE HIGADO FETAL. FINALMENTE, DEMOSTRAMOS QUE EL ESTROMA TIMICO FETAL INDUCE MAS CELULAS TCRaB MADURAS CD8-SP QUE CD4-SP,INDEPENDIENTEMENTE DEL TIPO DE PROGENITOR T UTILIZADO, LO QUE PONE DE MANIFIESTO LA IMPORTANCIA DEL ESTROMA EN LA GENERACION DEL RATIO CD4:CD8.

Autor: JORGE ARELLANO ROCIO.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: ISC III.

Resumen: El factor intercambiador de nucleótidos de guanina de Ras, hSos1, está involucrado en el acoplamiento de los receptores de factores de crecimiento con la ruta de señalización mitogénica dependiente de Ras. La región amino-terminal (NDP) de hSos1 está constituida por un dominio con homología a Dbl (DH),un dominio con homología a pleckstrina (PH), y por una región, que nosotros hemos denominado N-Ter, sin homología conocida hasta hoy. La presente Tesis Doctoral es un estudio del efecto que los distintos dominios que componen esta región amino-terminal (la región N-Ter, el dominio DH, el dominio PH y la región DH-PH) tienen sobre la actividad de hSos1 y la funcionalidad en la activación fisiológica de Ras. Mediante ensayos de formación de focos transformantes, actividad MAPK y estado de activación de Ras, hemos podido determinar que la región completa (NDP), así como la región DH-PH, tienen un papel regulador positivo mientras que la región N-Ter ejerce de regulador negativo; y el efecto de estos dominios sobre la activación de Ras es independiente del tipo de proteína Ras (H, K o N-Ras). Esta región N-Ter, correspondiente a los primeros 200 residuos de hSos1, ejerce dicha regulación negativa mediante una interacción específica con el dominio PH, de tal modo que la región DH-PH queda cubierta. Para identificar proteínas que puedan estar participando en estas regulaciones, por interacción con estos dominios, se ha realizado un ensayo de doble híbrido en levaduras. Así, hemos observado que la región N-Ter interacciona in vitro, in vivo y semi-in vivo (levaduras) con la proteína cGMP-PDE9A (una fosfodiesterasa que hidroliza el segundo mansajero cGMP a su forma no ciclada) y con pA28a (subunidad reguladora del protesoma 26S). Esta región DH-PH también interacciona semi-in vivo con las proteínas pA28b (otra subunidad reguladora del proteosoma 26S), p112 (reguladora del proteosoma 20S) y la caperonina Hsp75.

Autor: FORACALES FERNÁNDEZ SONIA VANINA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: Se ha caracterizado un nuevo factor de transcripción denominado ACII, implicado en la regulación de la expresión de los genes de clase II del complejo principal de histocompatibilidad. Las moléculas de clase II tienen una función clave en la respuesta inmunitaria. Su expresión es miu especifíca y se encuentra regulada mayoritariamente a nivel de la transcripción. El factor ACII también tiene una expresión específica de tejido e idéntica a la de los genes de clase II. Su patrón de expresión es temprano expresándose previamente a los genes de clase II y sin requerir de la síntesis proteica de novo tras una inducción mediada por el IFNy. La inducción mediada por el IFNy se produce a través de la via Jak/Stat, así el homodímero activo de Stat se une a las cajas GAS presentes en el promotor de ACII, induciendo su expresión. La expresión constitutiva en los linfocitos B está mediada por el factor Lyf1, específico del linaje linfocítico. El promotor de ACII no contiene caja TATA aunque posee una caja unificadora y varias cajas SP1 y USF definidas como iniciadoras de la transcripción en muchos genes TATA-less. Además posee varios inicios de transcripción sugiriendo la presencia de más de un promotor que regule la expresión de ACII en distintos tipos celulares de forma distinta.

Autor: BUXADÉ FORTUNY MARIA .
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA. UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: El Factor de Necrosis Tumoral-alfa (TNFalfa), es una citocina proinflamatoria esencial y por lo tanto es una diana farmacológica importante en determinados procesos inflamatorios patológicos. En este trabajo se ha estudiado la regulación transcripcional y post-transcripcional del TNFalfa en linfocitos T activados vía el TCR y componentes activos del suero, y las vías señalización implicadas en esta regulación. La expresión de TNFalfa en linfociots T CD4+ puede ser inhibida con inhibidores de la fosfatidilinositol 3-quinasa, P13K (Wortmanina y LY294002), de la p38 MAPK (SB203580) y de la Erk MAPK-quinasa, MEK1 (PD98059). La P13K está involucrada en el control traduccional del TNFalfa. Se demostró que la inducción de la traducción del TNFalfa no sólo depende de la estimulación por antígeno, sino que también está modulada por suero. El suero incrementa la producción de TNFalfa en linfocitos T activados vía el TCR, sugiriendo que los circuitos endocrinos tienen un papel importante en la respuesta inflamatoria derivada del TNFalfa. La MAP quinasas p38 y Erk se han relacionado con la maquinaria general de traducción, ya que controlan la activación de la quinasa MNK1, y por tanto, la fosforilación y activación del factor de inicio de la traducción eIF4E. Para estudiar la implicación de la MNK1 y el eIF4E en la eficiencia de traducción del TNFalfa en linfocitos T Jurkat, se crearon distintas construcciones con elementos del gen de TNFalfa. Se insertaron las regiones no traducidas 5' y 3' de los cDNAs de la beta-globina y del TNFalfa en una construcción con el gen reportero GFP (Green Fluorescent Protein). Se observó que el 3'UTR del TNFalfa es inducible por estimulación con anticuerpos anti CD3+anti-CD28 en células Jurkat transfectadas con el reportero GFP. La inducibilidad de la GFP bajo el control del 3'UTR del TNFalfa es sensible a la inhibición farmacológica con los inhibidores de MEK1 y p38 MAPK. Además, la sobreexpresión de la MNK1 incrementada la eficiencia de traducción del gen reportero GFP-3'UTR. Estos resultados sugieren que el 3'UTR del TNFalfa es importante en el control traduccional ejercido por la vía de ERK / p38MAPK - MNK1 - eIF4E.

Autor: MONGAY SOLER LÍDIA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVSERSITAT DE BARCELONA.