ANTICUERPOS

Autor: RESPALDIZA SALAS M. NIEVES.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: SERVICIO DE INMUNOLOGÍA HH.UU. VIRGEN DEL ROCIO.

Resumen: El lupus eritematoso sistémico (LES) es un proceso inflamatorio considerado como el prototipo de las enfermedades autoinmunes sistémicas. Su expresión clínica y biológica muestra una gran heterogeneidad. Las alteraciones inmunológicas se ponen de manifiesto por la presencia de múltiples autoanticuerpos dirigidos frente a diversas estructuras celulares. Se acepta generalmente que su etiología es multifactorial, con contribuciones de factores ambientales y genéticos. En el presente trabajo, mediante un extenso seguimiento clínico y biológico de 288 pacientes diagnosticados de LES según los criterios revisados del Colegio Americano de Reumatología (CAR), se ha realizado el estudio de las posibles asociaciones entre la sintomatología clínica, datos biológicos y respueta autoinmune en el contexto de un fondo genético que puede influir en la susceptibilidad a padecer la enfermedad, en la expresión de manifestaciones clinicas y en la producción de autoanticuerpos. El estudio abarca la respuesta frente a anticuerpos convencionales del LES, y hace un especial énfasis en la detección en esta patología de nuevos autoanticuerpos, como anticuerpos anti-Dek y anticentrómetro. Se han estudiado las asociaciones clínicas de todos estos anticuerpos con objeto de determinar posibles subgrupos dependiendo del perfil de autoanticuerpos mostrado por los pacientes. Por otro lado, se ha realizado el análisis de las moléculas HLA de clase II, implicados en esta patología tanto en relación con su distribución en la susceptibilidad a padecer LES como en relación con su papel en la producción de los diferentes autoanticuerpos encontrados en esta patología.

Autor: SANJUÁN NANDÍN IRENE.
Año: 2002.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Hemos utilizado la tecnología convencional de obtención de anticuerpos monoclonaes desarrollada por Milstein y Köhler para obtener anticuerpos monoclonales humanos. Para ello hemos utilizado cepas de ratones transgénicos que contienen los transgenes para las cadenas pesadas u y ligeras humanas y que son knock-out para la cadena u y k de ratón. Teniendo en cuenta que la mayoría de las patologías tumorales linfocitarias del sistema inmune derivan de linfocitos B, nuestro principal objetivo fue obtener anticuerpos monoclonales humanos frente a linfocitos B humanos, por lo que utilizamos como célula inmunizante una línea celular con fenotipo de linfocito B maduro (IVP y Hmy-2). Hemos obtenido 13 anticuerpos monoclonales humanos de isotipo IgM/Kappa. La mayoría de los hibridomas mostraron inestabilidad, siendo necesaria la reclonación para el mantenimiento de los clones secretores. La cantidad de IgM que secretan es de aproximadamente 1 ug/mL. Todos los hibridomas obtenidos utilizan exclusivamente el segmento VH1, por tanto, la diversidad de anticuerpos depende de la variabilidad generada en la región CDR3 por la combinación de diferentes segmentos D y J y por inserción de nucleótidos P y N. Existe una mayor variabilidad en la cadena ligera kappa por el uso de varios segmentos Vk y la presencia de un número mayor de mutaciones. El uso de un único gen VH es suficiente para generar un repertorio amplio de anticuerpos, sin embargo, la restauración de la respuesta inmune humoral es deficiente porque sólo encontramos una concentración de las mutaciones somáticas en el CDR1 dellocus Vk1. Basándonos en el patrón de reconocimiento celular diferenciamos 2 grupos de anticuerpos un grupo de Ac anti-células B, con u reconocimiento restricto hacia este tipo celular y otro grupo de Ac anti-leucocitarios, con un reconocimiento extenso dentro de las poblaciones hematológicas. El hecho de haber obtenido distintos anticuerpos que presentan un reconocimiento altamente específico, así como tener varios anticuerpos que reconocen el mismo tipo celular, es un resultado muy interesante, sobre todo cuando se piensa en su potencial terapéutico frente a leucemias. Como los anticuerpos obtenidos son IgM y poliméricos nos hemos centrado en el estudio de lisis celular por fijación del complemento. Estos anticuerpos lisaron con gran efectividad todas las poblaciones leucocitarias con complemento de conejo, mientras que lisis con el complemento humano dependió del anticuerpo usado. Esta heterogenidad en la lisis se vio con el uso como dianas de líneas celulares, leucocitos de sangre periférica, poblaciones linfoides de ganglios linfáticos y en células leucémicas también detectamos cierto aumento de sensibilidad de la lisis enlas células de leucemias y linfomas teniendo en cuenta la homogeneidad de los anticuerpos hemos de concluir que la lisis depende de la molécula y célula diana.

Autor: CUNÍ VALLDURIOLA SANDRA.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FUNDACIÓN LAIR.

Resumen: Se han estudiado vías de transducción de señales implicadas en la resistencia de las células B de la LLC frente a la apoptosis mediada por Fas. Por otro lado se han estudiado vías de señalización procedentes del medio extracelular que previenen la apoptosis espontánea que sufren las células b de la LLC en cultivo. Los resultados obtenidos de este trabajo de investigación demuestran que la vía de señalización PI3-K/PKB/NF-kB mantiene la viabilidad de las células B de la LLC en cultivo y confiere resistencia frente a la apoptosis mediada por Fas. Estos resultados proporcionan oportunidades para el desarrollo de nuevas drogas terapéuticas y para el progreso en la lucha contra esta neoplasia.

Autor: PASTOR VARGAS CARLOS.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FACULTAD CC QUIMICAS.

Resumen: La interacción entre los complejos antígeno-anticuerpo (inmunocomplejos, IC) y el tercer componente (C3) es uno de los pasos fundamnteales que conduce a la eliminación del Antígeno. Además, estos complejos C3-IC cumplen diversas funciones en la activación y desarrollo de la respuesta inmune. Dada la importancia de esta interacción, se ha realizado una amplia investigaciónpara determinar la naturaleza de la unión y en ella se han descrito que, en la IgH1 humana, tanto elfragmenteo Fab como el Fc están implicados en la lunión con C3. Mientras la interacción C3-Fab está bastante estudiada, la unión C3-Fc ha sido objeto de un estudio menos exhaustivo. El objetivo de este trabajo ha sido el estudio de la implicación de los dominos Ch2 y Ch3 de la IgG humana en la interacción con C3. Para ello se han generado un conjunto de anticuerpos que no unen C3 por la región Fab, por carecer del domino Ch1, pero que mantienen su capacidad de activar C3. Además, a estos anticuerpos les hemos introducido la secuencia especifica que reconocer el factor Xa, tanto en la zona bisagra ("hinge") como en el interdomino Ch2-Ch3 de tal forma que, mediante digestiones dirigidas, podemos aislar el o los dominos implicados en la interacción con la molécular de C3b intacta. Los resultados obtenidos han permitido caracterizar la unión de C3 tanto al domino Ch2 como al domino Ch3. La unión de C3 en el dominio Ch2 se produce, en la región bisagra ("hinge"), concretamente en el péptido 219SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK248. Los candidatos más probables de esta región lo constituyan los residuos 223Thr y 225Thr. La unión de C3 en el domino Ch3 se produce, muy probablemente, en el extremo carboxilo teminal, concretamente en el péptido 440SOLSLSPGK447. El candidato más probable de esta región los constituye el residuo 447Lys.

Autor: ESCUDERO LIROLA ESTHER.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: HOSPITAL RAMON Y CAJAL DE MADRID.

Resumen: Utilizando lo anticuerpos monoclonales (AcM)HP2/1 y HP2/4 que reconocen la cadena alfa de la integrina VLA-4 y el AcM HUTS-21 que reconoce la cadena beta 1 activada de la misma integrina en humanos, hemos caracterizado funcionalmente en la rata los epítopos reconocidos por estos anticuerpos en la integrina VLA-4 de rata. Utilizando el modelo experimental de nefritis autoinmune inducido por cloruro de mercurio (HgC12) en la cepa de ratas Brown Norway, que se caracteriza por síntesis de auto-anticuerpos(entre ellos anti-membrana basal glomerular), depósito de inmunoglobulinas en el glomérulo con desarrollo de proteinuria y nefritis tubulointersticial, hemos administrado estos ACM como posibles agentes terapéuticos para estudiar sus posibles efectos sobre el desarrollo de la enfermedad. Hemos encontrado que las tres AcM tienen efectos protectores sobre el infiltrado del parénquima renal. Además el AcM HP2/1 previene la síntesis y depósito de Acs anti-membrana basa glomerular y disminuye la proteinuria. Sin embargo los AcM HP2/4 y HUTS-21 sólo bloquean el infiltrado celular renal, sin modificar la producción de auto-anticuerpos contra la membrana basal glomerular. Estos datos estarían indicando el papel dual e independiente que presentan las integrinas VLA en la síntesis de auto-anticuerpos y en la infiltración. Además también parece que las integrinas VLA necesitan presentar una conformación activada para que se produzca el desarrollo de este modelo experimental. Por otro lado, habiendo encontrado que al bloquear la vía de adhesión leucocitaria VLA-4/VCAM-1 a través de uno de sus componentes,utilizando otro AcM dirigido contra la molécula VCAM-1 de ratas hemos observamos que se bloquea igualmente la extravasación leucocitaria desde la circulación al parénquima renal, sin modificar el resto de los parámetros bioquímics e inmonológicos estudiados, con lo que confirmamos que en este modelo la via VLA-4/VCAM-1 parece ser la vía de adhesión principal para que se produzca la infiltración celular del tejido renal.

Autor: PRIETO GARCÍA M. BELEN.
Año: 2000.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La presencia de células fetales en sangre materna constituye una intersante fuente de tejido fetal, puesto que su aislamiento permitiría realizar una diagnóstico prenatal no invasivo a todas las embarazadas. En esta memoria se estudia la capacidad de varios anticuerpos monoclonales, desarrollados por nuestro grupo de investigación, para el aislamiento de eritroblastos fetales de la sangre materna. Para ello, se describe la puesta a punto de un método de enriquecimiento celular por centrifugación en grandiente de densidad doble y posterior selección positiva mediante la técnia de separación celular activada por partículas magnéticas, MACS. En primer lugar , se seleccionan las condiciones más idóneas de centrifugación engradiente para el enriquecimiento de eritroblastos. Se comparan cuantro de nuestros anticuerpos para elegir aquel que aísle eritroblastos en la mayor cantidad de meustras posible. Se demuestra que uno de los cuatro anticuerpos ensayados es significativamente más efica que el resto, aislado eritroblastos en todas las muestras e sangre materna procesadas con él. Asímismo, se modifican las condiciones de la separación celular y la citocentrifugación para conseguir mayor recuperación de eritroblastos. Se demuestra, también, que a mayor tiempo transcurrido entre la extracción de la sangre y su procesamiento en el laboratorio, la recuperación de eritroblastos disminuye significativamente y se modifica la distribución celular enl as interfases del gradiente.Se comparan dos de nuestros anticuerpos con el anticuerpo anti-CD71 comercial más utilizado en la bibliografía demostrándose que nuestros anticuerpos recuperan un número significativamente superior de eritroblastos de sangre materna que el anticuerpo comercial en la mayoría de los casos, si ben dan lugar, en gen real, a preparaciones con mayor contaminación por otros tipos celulares. Se aplican técnicas de PCR y FISH para el diagnóstico del sexo fetal, como maracador del origen fetal de las células aisladas en embarazos portadores de fetos cromosómicamente normales.Los resultados ratifican los hallazgos de otros autores acerca de la frecuencia extremadamente baja de eritroblastos fetales en sangre materna cuando el feto es normal. Sin embargo, se consigue aislar ADN fetal libre en el plasma materno de un grupo de gestantes portadoras de fetos normales, determinándose correctamente el sexo y el Rh fetal en todos ellos (eficacia diagnóstica del 100%). Este hallazgo pone de manifiesto que la proproción ADN fetal/ADN materno en el plasma de las embarazadas protadoras de fetos sanos es considerablemente mayor que la proproción eritroblastos fetales/eritroblastos maternos en circulación materna durante el embarzo. El análisis FISH de los eritroblastos aislados de la sangre de un grupo de gestantes portadoras de fetos trisómicos permite concluir que elporcentaje de eritroblastos fetales es, en estos casos, significativamente mayor que cuando se trata de un feto normal. Nuestros anticuerpos han logrado diagnosticar correctamente la trisomía correspondiente en el 86% de los casos patológicos estudiados, demostrándose así su potencial utilidad para el cribado de aneuploidías y el desarrollo de un método de diagnóstico prenatal no invasivo.

Autor: BENITO GONZALEZ M. CARMEN.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: Los reordeamientos secundarios (RS) en la región variable de las inmunoglobulinas (lgs)y principalmente en el locus de las cadenas ligeras, se sabia que ocurrian solamente en la medula, en la superficie de las IgM (slgM+) de las celulas B inmaduras, como un mecanismo de tolerancia central. Pero recientemente se ha encontrado que esto tambien ocurre en algunas celulas B maduras activadas del centro germinal, que podría ser utilizado como un mecanismo de selección negativa de celulas B autorreactivas resultado de hipermutaciones somaticas. En la actualidad no hay datos de la existencia de un RS de las cadenas ligeras de la lg(IgL) en celulas B perifericas humanas productoras de un anticuerpo asociado a una enfermedad autoinmune conocida. Nosotros mostramos un RS de la cadena de un Ig en una celula B transformada por EBV (MB91) productora de un anticuerpo IgM anti-islote pancreatico (ICA) derivado de celulas B perifericas CD5- procedentes de un paciente diabetico tipo 1 al debut clinico de la enfermedad. Este clon MB91 que expresa RAG1 y RAG2, contiene un unico reordenamieto de la cadena pesada de la Ig(Igh R) (GB AJ249378), sin embargo posee dos reordenamientos de la cadena ligera (Ig R):i) uno codifica el segmento V 1-4 unido a J 3-C 3, que codifica las cadenas del ICA-IgM , con un patrón minimo de hipermutaciones somáticas (GB AJ249377), ii) el otro usa el segmento génico V 4-1 tambien unido a J 3-C 3, el cual contiene "stop codons" que determinan la perdida de producción de ICA-IgM (GB AJ249379), y provocan la detención del crecimiento de las celulas MB91, dado lugar a su muerte celular. La idea de que el RS aberrante es el V 4-1y que reemplace el original V 1-4, anulando la síntesis de la cadena y por tanto la imposibilidad de sintesis de una IgM completa queda corroborado por: 1)El pl teórico de las cadenas del ICA-IgM del clon MB91 homologo al V 1-4- J 3- C 3, es el más semejante al unico pl hayado experimentalmente de la cadena . 2)El hecho de no poder aislar clones HY-MB91 que expresen VH5 y RS aberrante, sugiere que los HY que producen solo cadenas u sin ligeras son tóxicos para las celulas y mueren, solo sobreviniendo los que han perdido la producción de reordenamientos IgH.

Autor: COSTA RIEROLA MONTSERRAT.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓ CONTINUADA.

Resumen: En el año 1989 se describió en nuestro laboratorio, en un grupo de pacientes de hepatitis autoinmune tipo 1 que no respondían bien al tratamiento con coricoesteroides, la presencia de unos autoanticuerpos dirigidos contra un complejo formado por una proteína y un RNA 4,5S (tesis doctoral de la Dra. Mª José Amengual). La secuenciación de dicho RNA demostró que se trata de un tRNA portador de selenocisteína (tRNA (ser)sec) asociado a una proteína de 48kDa que probablemente está implicada en la via de inserción de selencisteína en eucariotas (Gelpí C. Sontherimer EJ, Rodríguez-Sánchez JL. (1992). Autoantiboidies against a serine tRNA-protein complez implicated in cotranslational selenoycisteine. Proc. Natl. Acad, Sci. USA, 89: 9739-9743). En esta tesis doctoral se ha analizado la especificidad, la frecuencia y el significado de dichos anticuerpos en la hepatitis autoinmune tipo 1. Concretamente se han detectado anticuerpos anti-tRNP (ser)sec en un 47,5% de los 59 sueros analizados pertenecientes a pacientes de hepatitis autoinmune tipo1, comparado con ninguno de los 509 sueros control testados, demostrando pues una alta especificidad y una frecuencia importante de los anticuerpos anti-tRNP (ser)sec para la hepatitis autoinmune tipo 1. Además, considerando la necesidad de transplante hepático y la muerte por causa hepática como índice pronóstico a largo plazo, los resultados obtenidos indican que la presencia de anticuerpos anti-tRNP (ser)sec se asocia a un pero pronóstico a largo plazo. En segundo lugar se ha comprobado que el complejo antigénico tRNP (ser)sec se encuentra en la fracción soluble de un extracto de hígado de rata, junto a muchas otras proteínas. En este sentido las citoqueratinas 8 y 18 yla glutatión-S-transfersa (GST), también estan presentes en la fracción soluble de un extracto de hígado, y habían sido descritas por algunos autores como el antígeno mayoritario contra el cual iban dirigidos los anticuerpos anti-SLA (antígeno soluble de hígado) en pacientes de hepatitis autoinmune. Por ello y en tercer lugar se ha procedido a demostrar que los anticuerpos anti-tRNP (ser)sec son diferentes a los anticuerpos 8 y 18 y a los anticuerpos anti-GST. Concretamente los anticuerpos anti-citoqueratinas 8 y 18 se ha demostrado que son altamente frecuentes en la hepatitis autoinmune tipo 1 pero a diferencia de lso anticuerpos anti-tRNP (ser)sec no son específicos de dicha enfermedad. En cuanto a los ancicuerpos anti-GST son mucho menos frecuentes que los anticuerpos anti-tRNP (ser)sec en la hepatitis autoinmune tipo 1. Por útlimo se ha conseguido clonar, expresar y purificar la proteína antigénica asociada al anti-tRNP (ser)sec. Con el fin de caracterizar la/s proteína/s antigénica/s asociadas/s anti-tRNP (ser)sec, se ha realizado un "inmunoscreening" de un banco de cDNA de hígado humano utilizando sueros anti-tRNP (ser)sec positivos. El resultado ha sido el aislamiento de dos clones: 13 y 19. El clon 19 codifica para una proteína de 48,8 kDa de peso molecular. El clon 13 es un cDNA más corto, prácticamente idéntico al clon 19, que codifica para una proteína de 35,9 kDa. Ambos cDNAs han sido expresados en Escherichia Coli y anticuerpos eluídos de las dos proteínas recombinantes purificadas han sido capaces de inmunoprecipitar el tRNP (ser)sec de un extracto de células HeLa S3, demostrando su cross-reacción con el complejo antigénico de mamíferos. Datos de clonaje recientemente publicados referentes al antígeno/s diana de los anticuerpos presentes en pacientes de hepatitis autoinmune que reaccionan con el antígeno soluble de hígado SLA y el antígeno de hígado y páncreas (LP) han puesto de manifiesto que estos dos autoanticuerpos son idénticos y que el antígeno clonado muestra una homología de secuencia de un 99% con el tRNP (ser)sec.

Autor: DOIZ UNZUE OLGA.
Año: 1999.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En esta tesis doctoral se han intentado evaluar la sensibilidad y especificidad así como la comparación de unas técnicas serológicas (HAI, ELISA tipo IgG, IgM de dos caras comerciales diferentes y ELISA IgA y western Blot) para el diagnóstico de la midatidores humana, así como para ver su evolución eran tratamientos quirúrgicos en pacientes curados ó con quistes hidatidicas eras la cirugía. Por otra parte se ha intentado realizar un nuevo método de purificación de antigenos midatidias para mejorar las técnicas de ELISA comparando con las técnicas de western blot, empleando en ambas cass los mismos antigenos. Para estudiar la especificidad de cada una de las técnicas se han realizado las pruebas en unos grupos control con probabilidad de dos secciones falsamente positivos en la serología de -- por alguna causa --: ainidad --, estimulación polidoral de sistema inmune, hepatopátias, etc... La técnica más sensible, específica de las estudiadas fue de western blot, con sensibilidad de 10% y especificidad 80-95%.

Autor: ALLER ALVAREZ M. ISABEL.
Año: 1998.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En este trabajo se ha realizado, mediante análisis inmunocitoquímico, el estudio de la distribución de las subunidades alfa1, alfa2, alfa3 y del receptor del GABA, en Gallus gallus, mediante anticuerpos creados frente a secuencias aminoacídicas sintéticas de estas subunidades de rata. Además, mediante autorradiografía se han caracterizado los subtipos BZ1 y BZ2 de los sitios de unión de las benzodiazepinas en el complejo receptor del GABAa. Los receptores del subtipo I predominaron en aves deforma similar a lo que ocurre en mamíferos. Los anticuerpos utilizados para marcar las subunidades del receptor del GABAa en aves, muestran que las regiones inmunogénicas utilizadas para obtenerlos están conservadas en la evolucíon. EL componente gabérgico mediado a través del complejo receptor del GABAa a lo largo del tallo cerebral, diencéfalo y bulbo olfatorio parece conservar su función en aves y mamíferos mientras que en el Wulst visual, área dorsoventricular y área hipocampal es menos importante en aves que en las correspondientes áreas homólogas de mamíferos.

Autor: MENDOZA HERNANDEZ JUAN LUIS.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: La acalasia es una enfermedad neuromuscular crónica que afecta al esófago. Actualmente la base etiopatogénica de esta enfermedad es desconocida, se han propuesto diferentes teorías; 1) genética, mediado por un mecanismo autosómico recesivo, 2) infecciosa secundaria fundamentalmente a procesos virales, 3) degenerativa, consecuencia de una enfermedad neurodegenerativa tanto a nivel del sistema nervioso central como periférico, y 4) autoinmune, basado en una mayor prevalencia de HLA de clase II DQw1 y en la existencia de autoanticuerpos frente al plexo mientérico. Obejtivos: Determinar y comparar el porcentaje de individuos con autoanticuerpos frente al plexo de auerbach en pacientes con acalasia y controles sanos. Estudiar las especificidades alélicas de los genes de clase II: HLA-DR y DQ en una muestra amplia de individuos con acalasia y compararlos con un grupo de controles sanos. Determinar en los pacientes con acalasia la posible asociación entre determinados genes de clase II: HLA-DR y DQ y la existencia de autoanticuerpos frente al plexo de Auerbach. Valorar las posibles implicaciones de factores demográficos, clínicos o manométricos con la existencia o no de autoanticuerpos contra el plexo de Auerbachy determinados genes del HLA de clase II. Intentar caracterizar diferentes subgrupos de pacientes con acalasia en relación con la presencia de autoanticuerpos contra el plexo de Auerbach y su asociación con determinados genes de clase II, para establecer en el futuro protocolos y nuevas líneas de actuación terapéuticas en estos pacientes. Material y métodos: Se incluyeron de forma consecutiva a 100 individuos. De ellos 60 fueron diagnosticados de acalasia (45 clásica y 15 vigorosa) mediante manometría esofágica, esofagograma baritado y endoscopia alta. Los 40 restantes eran voluntarios sanos. La recogida de los datos clínicos, de filiación y antecedentes personales se realizó mediante la cumplimentación de un cuestionario. La determinación de los autoanticuerpos frente al plexo de Auerbach se realizó mediante doble inmunofluorescencia indirecta. Sobre criosecciones de intestino de rata y de humano se realizó el doble marcaje con anticuerpos frente a la fracción Fc de las IgG humanas y anticuerpos frente a la molécula completa de IgG de conejo frente a los neurofilamentos de alto peso molecular del plexo mientérico. La determinación de los alelos de los genes de HLA de clase II DRB1, DQA1 y DQB1 por métodos de biología molecular: el DNA fue amplificado por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y posteriormente se determinó el alelo por hibridación con sondas de oligonucleótidos secuencia-específicos (SSO). Resultados: El 48.3% de los pacientes con acalasia presentan autoanticuerpos séricos frenteal plexo de Auerbach, un porcentaje muy superior al observado en los controles sanos (7.5%) (p

Autor: REY MARTINEZ ELENA.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Utilizando tecnología recombinante hemos generado el primer panel de aAcs monoclonales humanos dirigidos contra el RAC a partir de linfocitos de sangre periférica donados por un enfermo con MG. A partir de esta colección, diez aAcs han sido caracterizados en detalle funcionalmente así como a nivel estructural y genético. Dicho análisis nos ha permitido detectar una preferencia por la utilización de estos aAcs de segmentos VH1 y en general de segmentos VH localizados próximamente dentro del locus VH. Además, nuestros datos permiten afirmar que el proceso de selección de mutantes de alta afinidad presumiblemente responsables de las alteraciones funcionales características de esta enfermedad es conducido por el propio RAC y more específicamente por la región MIR previamente definida como la principal diana antigénica en la miastenia gravis experimental inducida en ratas. Adicionalmente, nuestro estudio ha definido el primer motivo estructural contenido en aAcs anti-RAC y de esta forma constituye el primer paso en la construcción de un modelo de correlación entre estructura y función en este sistema. Por último, este trabajo contribuye a reforzar la validez de las genotecas combinatoriales como el método de aleación para el estudio longitudinal de aAcs humanos.#

Autor: ANDRADE LILLO WINSTON SOCRATES.
Año: 1997.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: MEDICINA.

Resumen: No se conoce el sitio de unión de los anticuerpos monoclonales anti-CD3 a pesar de su amplio uso clínico. Se ha demostrado que el anticuerpo anti-CD3 7D6 reconoce un determinante alotípico en CD3 de ratón y no se reconoce CD3-EPSILON por sí solo, si no que reconoce solo el módulo CD3-EPSILONGAMMA y no el CD3-EPSILON D. Por secuenciación y transfección en células Cos, hemos demostrado que el cambio de solo un aminoácido, la ASN89 LYS89 en la región extracelular de CD3-EPSILON de ratón es responsable del reconocimiento alotípico de 7D6 y la variación de este aminoácido define dos alelos para CD3-EPSILON de ratón. Un panel de seis anticuerpos monoclonales anti-CD3 de ratón también reconocen módulos y no subunidades aisladas en transfectantes de células Cos, aunque no discriminan entre CD3-EPSILON GAMMA y CD3-EPSILON D. El no reconocimiento de subunidades aisladas podría deberse a un control de plegamiento de CD3-EPSILON. En un modelo bi y tridimensional de CD3-EPSILON, el aminoácido ASN89 se ubica en un giro beta extracelular muy expuesto, que si es sustituido se pierde la unión de todos los anticuerpos anti-CD-3. Todos los anticuerpos anti-CD3 de ratón analizados compiten entre sí por la unión a CD3-EPSILON.

Autor: BARRIO FERNANDEZ JOSE LUIS DEL.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA III PROGRAMA DE DOCTORADO: MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA.

Resumen: En esta Tesis se defiende la hipótesis de que la prevalencia de anti-VHA en deficientes mentales residentes en instituciones es más elevada que en la población general. Los objetivos planteados son: conocer la situación epidemiológica de la hepatitis A en deficientes mentales; evaluar si la prevalencia de hepatitis A es dependiente de la presencia de deficiencia mental, así como del resto de variables asociadas a esta característica; y, por último, realizar un análisis coste-beneficio de un programa de inmunización activa en este grupo de población. Y las conclusiones obtenidas fueron las siguientes: 1. La prevalencia de anti-VHA+ en los discapacitados psíquicos es mayor que en la población general. 2. Esta mayor prevalencia no es consecuencia del régimen de institucionalización, puesto que en la población control no se da esta diferencia con la población general. Por lo tanto, la presencia de deficiencia mental es un marcador de riesgo para la infección por VHA. 3. No se aprecian diferencias en la prevalencia de anti-VHA+ según el sexo ni en el grupo de discapacitados psíquicos ni en el de invidentes, pero la edad y el n. de años ingresado si suponen un factor de riesgo en ambos grupos. 4. La evolución del patrón de prevalencia de anti-VHA+ de endemicidad intermedia hacia endemicidad baja que se está observando en la población española general no ocurre en el colectivo de discapacitados psíquicos institucionalizados. 5. La relación coste-beneficio de la inmunización activa de los discapacitados psíquicos no supone un ahorro económico respecto al tratamiento de la enfermedad, pero dada la elevada prevalencia encontrada entre el colectivo de los discapacitados psíquicos residentes en instituciones, se hace necesaria su inmunización activa como beneficio para ellos mismos y para la población general. 6. La utilización de la vacuna contra el VHA monodosis de 1.440 E1.U. o la vacuna combinada frente al VHA y el VHB, supone un abaratamiento considerable de la inmunización activa contra la hepatitis A tanto en aspectos económicos como en la comodidad de su administración para los pacientes y para los profesionales encargados de administrarlas.

Autor: EZKURRA GARCIA UNZUETA PILAR A..
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: INMUNOLOGIA, MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA, MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA.

Resumen: La adhesión de C. albicans a los implantes médicos de materiales plásticos es un requisito esencial para el desarrollo de candidiasis asociadas a la utilización de estos dispositivos. Una de las aproximaciones para bloquear la adhesión es la aplicación de anticuerpos monoclonales contra las adhesinas de C. albicans. En este trabajo, hemos aislado y caracterizado las adhesinas de C. albicans que median su adhesión al poliestireno y a resinas de metacrilato de las prótesis orales como manoproteínas de 60, 68, 200 y superior a 200 kDa. Estas adhesinas se localizan fundamentalmente en la capa fibrilar de los tubos germinales, son liberadas al medio de cultivo y su expresión aumenta cuando el hongo se desarrolla in vivo. Estas moléculas son capaces de unirse al poliestireno mediante interacciones hidrófobas y presentan cierta homología antigénica con otras adhesinas microbianas y con algunas moléculas del hospedador humano. Tras la inmunización con estas moléculas, obtuvimos el anticuerpo monoclonal (AcM) 21E6 que, junto con otros anticuerpos monoclonales y policlonales, utilizamos para determinar su efecto sobre la filamentación y la adhesión de C. albicans al poliestireno in vitro. Entre todos ellos, únicamente los que reconocían algún epitopo presente en las adhesinas de C. albicans inhibían o incrementaban la adhesión, independientemente de su capacidad para afectar a la filamentación. Las adhesinas aisladas de la superficie plástica provocaban un aumento de la adhesión. Hemos encontrado una asociación entre la reactividad del AcM21E6 sobre 30 aislamientos clínicos y la adhesión de éstos al poliestireno.

Autor: LUQUE JIMENEZ ALFONSO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA.

Resumen: Las integrinas son glicoproteínas de transmembrana celular formadas por la asociación no covalente de una subunidad alfa con una beta. Funcionalmente, van a mediar adhesión entre células o entre células y diferentes componentes de la matriz extracelular. Estas adhesiones celulares vía integrina-ligando son de vital importancia en innumerables fenómenos biológicos, como por ejemplo: el desarrollo embrionario, la coagulación sanguínea, las reacciones inflamatorias y las respuestas inmunes. Las integrinas pueden encontrarse en diferentes estados de activación, pudiendo ser modificados tanto por estímulos extracelulares como intracelulares. En este trabajo se describe la regulación funcional del heterodímero VLA-1 por cationes divalentes y por anticuerpos activadores, y la regulación de la activación de las integrinas VLA mediante la caracterización de anticuerpos monoclonales que reconocen estados activados sobre la subunidad beta1 de estas integrinas.

Autor: MARTIN FERNANDEZ M. ROSA.
Año: 1997.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA EVOLUTIVA.

Resumen: La dopamina es una catecolamina que actúa como neurotransmisor en el sistema nervioso central en funciones tan importantes como el control motor, la estabilidad emocional y el aprendizaje. En este trabajo hemos determinado la distribución y expresión de los receptores de la dopamina en la neocorteza de rata. Como primer objetivo produjimos anticuerpos policlonales específicos para cada uno de los cinco subtipos de receptores dopaminérgicos utilizando péptidos sintéticos derivados del tercer segmento intracelular de los receptores dopaminérgicos tipo-D2, y del extremo C-terminal de los receptores tipo-D1. En inmunoblots de corteza cerebral de rata el anticuerpo anti-D1 reconoce una banda proteica de 45 kDa, anti-D5 una banda de 47 kDa, anti-D2 dos bandas, una de 49 kDa y otra de 93 kDa, anti-D3 una banda de 49 kDa y anti-D4 una banda de 41 kDa. Estos tamaños moleculares proteicos coinciden con el tamaño de los distintos subtipos de receptores dopaminérgicos y que se deducen a partir de sus correspondientes secuencias de cDNA. Además, estos anticuerpos fueron capaces de inmunoprecipitan los receptores de dopamina nativos y ensamblados en las membranas celulares de corteza cerebral de rata. Los receptores dopaminérgicos de la familia tipo-D1 se expresan homogéneamente en todas las áreas corticales de la neocorteza de rata. Dentro de la familia tipo-D1 pudimos observar una expresión más acusada de los receptores D5 que de los receptores D1. Los receptores D5 son expresados por neuronas neocorticales piramidales y por interneuronas. Los estudios de doble marcaje demuestran que una subpoblación de estas interneuronas dopaminoceptivas son de naturaleza inhibidora GABAérgica, lo que proporcina una evidencia directa del papel regulador de estos receptores en la neurotransmisión GABAérgica. En el caso de los receptores D1 no se pudo determinar la morfología de las posibles neuronas neocorticales que expresan estos receptores dado que la inmunotinción con el anticuerpo anti-D1 se localizó fundamentalmente a nivel de neuropilo. Los receptores dopaminérgicos de la familia tipo-D2 se expresan en todas las áreas corticales de la neocorteza de rata. Con la excepción del receptor D2 que muestra una expresión con gradiente de disminución rostro-caudal, el resto de los subtipos de la familia tipo-D2 se expresan homogéneamente en toda la neocorteza. Dentro de la familia tipo-D2, los receptores D4 son los que presentan un mayor grado de expresión. Los receptores pertenecientes a la familia tipo-D2 son expresados por neuronas piramidales y por interneuronas. Una subpoblación de estas interneuronas que expresan receptores D2, D3 o D4 son de naturaleza inhibidora GABAérgica, lo que indica la existencia de una regulación dopaminérgica mediada por estos receptores en la liberación del neurotransmisor GABA. En base al grado de expresión proteica de los diferentes subtipos de receptores dopaminérgicos por las neuronas corticales pudimos observar que la neurotransmisión dopaminérgica en la neocorteza de rata está mediada principalmente por los receptores D4, dentro de la familia tipo-D2, y por los receptores D5, dentro de la familia tipo-D1. Además pudimos observar también una complementariedad laminar de expresión de las dos familias de receptores dopaminérgicos en la neocorteza de rata. En la capa II-III, donde se localizan las neuronas de proyección intracortical, la neurotransmisión dopaminérgica esta mediada por los receptores D4 mientras que en las capas más profundas (V y VI), donde se localizan las neuronas de proyección extracortical, la neurotransmisión dopaminérgica está mediada fundamentalmente a través de los receptores D5.

Autor: VILA ENRIQUEZ PILAR.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: La presencia de anticuerpos naturales, anticuerpos anti-idiotipo o anticuerpos patológicos tiene gran relevancia en diversos campos de la hemostasia, entre otros podemos destacar su papel en: patología relacionada con el Factor VIII, hemofília y Síndrome Antifosfolípido Primario. En la presente tesis se investigaron los siguientes aspectos: 1. Prevalencia, seguimiento y significado clínico de los anticuerpos anticardiolipina (ACA) en sujetos normales. 1.1. La prevalencia de ACA IgG en nuestra población era de 6.5% y la de ACA IgM 9.4%. 1.2. No se observó relación entre los donantes ACA positivos y los datos clínicos y de laboratorio estudiados. 1.3. No encontramos relación entre ACA y AL. 1.4. Creemos que el AL y ACA identifican distintos autoanticuerpos, por tanto deben realizarse ambos cuando se sospeche AAF. 1.5. No tenemos datos clínicos ni de laboratorio que nos expliquen las positividades encontradas en los donantes y desconocemos si en el futuro desarrollarán alguna complicación tromboembólica, o si estamos ante la primera manifestación de una enfermedad autoinmune. 2. Anticuerpos anti-Factor VIII(FVIII-Ac) en el plasma de pacientes con hemofilia A y en individuos sanos. 2.1. El método ELISA descrito es eficiente para detectar FVIII-Ac específicos en el plasma. 2.2. Se encontraron FVIII-Ac en el plasma de 15% de los donantes, similar a lo previamente publicado. 2.3. Observamos un 27% de FVIII-Ac en pacientes con hemofilia A. 2.4. En los pacientes con hemofilia A e historia de inhibidor existía una fuerte correlación entre el nivel de FVIII-Ac y el título de unidades Bethesda (UB) correspondiente. 2.5. La media de edad de los pacientes con FVIII-Ac positivo era mayor que la del grupo negativo. La media de edad del inicio del tratamiento sustitutivo era menor en pacientes FVIII-Ac negativos. En el grupo HIV+ la proporción de pacientes severos era el doble que en los HIV-. 3. Acción de un aloanticuerpo de un paciente con enfermedad de von Willebrand severa sobre el Factor VIII y sobre su interacción con el Factor von Willebrand. 3.1. La fracción IgG de la paciente con EvW severa con inhibidor y el anticuerpo de conejo anti-FvW reaccionaban con FvW normal inmovilizado, inhibiendo su unión al r-FVIII de una forma dosis dependiente. 3.2. La IgG de inhibidor de la paciente así como el anticuerpo IgG anti-FvW policlonal de conejo mostraban una actividad inhibitoria parcial frente al FVIII en el ensayo Bethesda. 3.3. La ausencia de FVIII-Ac detectables en pacientes con aloanticuerpos en EvW y anticuerpo de conejo, sugiere que la actividad inhibitoria parcial de ambos anticuerpos, puede no ser específica y debida a un impedimento estérico. 3.4. La actividad inhibitoria parcial del aloanticuerpo humano contra el r-FVIII o contra el FVIII monoclonal, no estaba influenciada por la adsorción con hematíes lavados AB. 3.5. Los aloanticuerpos contra el FvW interfieren en la unión FVIII-FvW.

Autor: JURADO ROGER AURORA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: MEDICINA .

Resumen: LA COEXISTENCIA DE MARCADORES DE INFECCION POR VIRUS C EN PACIENTES CON ANTICUERPOS ANTI-LKM1, CARACTERISTICOS DE LA HEPATITIS AUTOINMUNE TIPO 2, HA LLEVADO A ALGUNOS AUTORES A CLASIFICAR A ESTA EN DOS GRUPOS, 2A Y 2B, EN BASE A LA AUSENCIA O PRESENCIA DE MARCADORES DE VHC. DIAGNOSTICAR A LOS PACIENTES CON ANTI-LKM1 COMO AFECTOS DE UN TIPO U OTRO DE ENFERMEDAD TIENE IMPORTANTES CONNOTACIONES TERAPEUTICAS. POR ELLO, EL OBJETIVO PRINCIPAL DE ESTA TESIS ERA ESTABLECER CARACTERISTICAS DIFERENCIALES, CLINICAS Y GENETICAS, CON EL FIN DE DELIMITAR LA FINA LINEA DIVISORIA ENTRE AMBOS GRUPOS DE PACIENTES. PARA ELLO SE HAN REALIZADO DISTINTOS ABORDAJES DE LA ENFERMEDAD, CUYOS RESULTADOS SE RESUMEN A CONTINUACION. EL TRABAJO QUE SE PRESENTA ESTUDIA POR PRIMERA VEZ EN PROFUNDIDAD LA ASOCIACION HLA EN LOS PACIENTES CON HEPATITIS AUTOINMUNE VERDADERA TIPO 2 (A) Y LOS PACIENTES CON HEPATITIS CRONICA POR VIRUS C CON ANTICUERPOS ANTI-LKM1 (B). EN EL GRUPO A, EL ANTIGENO DQ2 ESTA PRESENTE EN EL 93,3% DE LOS PACIENTES (FRENTE A UN 48% EN LOS CONTROLES) Y EN EL GRUPO B, DR7 ESTA PRESENTE EN EL 82,3% FRENTE A 43,6 DE LOS CONTROLES. ES LA PRIMERA VEZ QUE SE DESCRIBE EN ESTA ENFERMEDAD UNA ASOCIACION CON LOS ANTIGENOS HLA DE TAL MAGNITUD. ESTE HALLAZGO, ADEMAS DE EVIDENCIAR UN PERFIL GENETICO DISTINTO ENTRE LOS PACIENTES DE UNO Y OTRO GRUPO PUEDE AYUDAR EN EL DIAGNOSTICO DIFERENCIAL. PARA EL CLINICO, CLASIFICAR A LOS PACIENTES EN UNO U OTRO GRUPO TIENE IMPORTANTES CONNOTACIONES TERAPEUTICAS. LOS INMUNOSUPRESORES, ADECUADOS PARA EL TRATAMIENTO DE LA HEPATITIS AUTOINMUNE, PODRIAN PERPETUAR UNA ENFERMEDAD VIRAL MAL DIAGNOSTICADA COMO AUTOINMUNE. POR OTRA PARTE, EL TRATAMIENTO CON INMUNOMODULADORES COMO EL INTERFERON ES EXTREMADAMENTE PELIGROSO EN UNA ENFERMEDAD AUTOINMUNE MAL DIAGNOSTICADA COMO VIRAL. OTRA DE LAS APORTACIONES DE ESTA TESIS ES EL ESTUDIO DE LA REACTIVIDAD DE LOS ANTICUERPOS ANTI-LKM1 FRENTE A UN PEPTIDO PERTENECIENTE A LA SECUENCIA DEL CITOCROMO P450IID6 QUE CONTIENE DOS REGIONES CON HOMOLOGIA DE SECUENCIA PARCIAL CON LA SECUENCIA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C. EL ESTUDIO EVIDENCIA QUE TANTO LOS PACIENTES CON HEPATITIS AUTOINMUNE VERDADERA COMO LOS ASOCIADOS A LA INFECCION POR VIRUS C SON CAPACES DE RECONOCER AL PEPTIDO, SIN EXISTIR DIFERENCIAS A ESTE RESPECTO. ESTO, APOYA LA TEORIA DE LA SIMILITUD MOLECULAR COMO MECANISMO IMPLICADO EN LA PRODUCCION DE ANTICUERPOS CON ACTIVIDAD ANTI-LKM1 EN EL GRUPO B. LA TERCERA APORTACION ES EL ESTUDIO CONCERNIENTE AL RECEPTOR HUMANO DE LA ASIALOGLICOPROTEINA QUE EN CONTRA DE LO QUE CABRIA ESPERAR, ES UN MARCADOR POCO UTIL PARA DIFERENCIAR ENTRE HEPATITIS AUTOINMUNE Y HEPATITIS VIRAL. POR OTRA PARTE, LOS ANTICUERPOS ANTI-LC1 SI SON UTILES EN ESTE SENTIDO ASOCIANDOSE PRINCIPALMENTE A LA HEPATITIS AUTOINMUNE VERDADERA.

Autor: MUÑOZ HERRERA ESTHER.
Año: 1996.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: INMUNOLOGIA.

Resumen: LA SOLUBILIZACION Y LA ELIMINACION DE LOS COMPLEJOS ANTIGENO-ANTICUERPO ESTA MEDIADA POR LA UNION COVALENTE DEL TERCER COMPONENTE DEL COMPLEMENTO (C3) A LAS MOLECULAS DE ANTICUERPO QUE FORMAN EL INMUNOCOMPLEJO. USANDO IGG AGREGADA POR CALOR COMO MODELO DE IC SE HA LOCALIZADO UN UNICO SITIO DE UNION DE C3B EN EL DOMINIO CH1. SIN EMBARGO, CON INMUNOCOMPLEJOS FORMADOS POR OVOALBUMINA E IGG DE CONEJO ANTI-OVOALBUMINA, C3B SE UNE A LAS REGIONES FAB Y FC. PARA ESTUDIAR LA UNION DE C3B SE HAN A LOS DIFERENTES DOMINIOS DE IGG Y PARA EVALUAR LA IMPLICACION DE CH1 EN LA UNION DE C3B SE HAN CONSTRUIDO ANTICUERPOS RECOMBINANTES SIN EL DOMINIO, CH1, CUYA ESTRUCTURA ES: VH-PEPTIDO DE UNION-VL-REGION BISAGRA- CH2-CH3. INMUNOCOMPLEJOS GENERADOS CON ESTOS ANTICUERPOS INTERACCIONAN CON C3B Y ACTIVAN LA VIA ALTERNATIVA DE FORMA SEMEJANTE A LA MOLECULA DE INMUNOGLOBULINA ENTERA. ENSAYOS DE DIGESTION PROTEOLITICA Y DE INTERACCION CON PROTEINAS BACTERIANAS NOS HA SERVIDO PARA DETERMINAR REGIONES Y RESIDUOS ESPECIFICOS DE INTERACCION DE C3B CON LA MOLECULA DE INMUNOGLOBULINA.