INMUNOQUIMICA

Autor: GORDILLO MUÑOZ SERGIO.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: En nuestros días, existe un tratamiento efectivo y una vacuna contra la tuberculosis que no son capaces de controlar la infección latente de más de un tercio de la población mundial. Además, M.tuberculosis mata más de 3 millones de personas al año, por lo que se considera a este microorganismo como el más virulento ya que mata más personas que ningún otro agente infeccioso por si solo. Una de las razones principales de este fracaso en la erradicación de la tuberculosis es la capacidad de permanecer latente y evitar así los mecanismos de defensa de la respuesta imnune que favorecerían su destrucción. Actualmente, el estado de latencia de M.tuberculosis no está bien caracterizado y serí necesario estudiarlo a fondo para poder desarrollar estrategias que permitieran su destrucción. Este trabajo intenta aportar nuevas ideas sobre el bacilo latente a nivel genético y metabólico basándose en el estudio de la respuesta al estrés en un modelo in vitro y en el modelo murino por aerosol. El enorme trabajo realizado se puede resumir en tres apartados: en un principio se caracteriza de forma muy completa el modelo murino de tuberculosis por aerosol en ratones resistentes y susceptibles; posteriormente, se realiza un estudio in vitro de la respuesta a la acidificación y la determinación de los genes más importantes relacionados con la latencia; finalmente, se estudia los genes más representativos en el modelo in vivo con un ratón resistente buscando la similitud con la tuberculosis humana. La acidificación del fagosoma no ha sido demasiado considerada como mecanismo de destrucción bacilar últimamente. Este estudio enfoca plenamente el ácido como la estrategia de destrucción principal de M.tuberculosis y permitiría indentificar los mecanismos que permiten la supervivencia y adaptación. El objetivo principal será entonces la búsqueda de marcadores moleculares que permitan determinar la presencia de bacilos latentes en el tejido. Concretamente, este estudio ha permitido conocer cómo varía la expresión de más de 50 genes relacionados con la respuesta al ácido en un modelo in vitro que podría reproducir las condiciones presentes en el interior del macrófago. Posteriormente, se ha estudiado la expresión de los genes más relevantes en ratones infectados por aerosol consiguiendo información sobre el comportamiento de este baciolo en su hospedador durante todo el proceso de infección mediante la caracterización inmunológica de un modelo crónico para el estudio de 24 citocina. Previamente, se ha caracterizado ámpliamente la patogenia de este modelo crónico comparando la susceptibilidad a la infección de dos cepas de ratón.

Autor: PELEGRÍN VIVANCOS PABLO.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: Durante el desarrollo de la presente Tesis Doctoral se ha llevado a cabo la caracterización de la interleuquina-1b (IL-1b) de dorada (Sparus aurata L.). Nuestro trabajo se ha elaborado en tres etapas. En una primera etapa se abordó la clonación del gen de la IL-1b de dorada mediante una aproximación por clonación homóloga utilizando RT-PCT. El cDNA de la IL-1b de dorada contiene 1.271 nucleótidos (nt) que incluyen un marco de lectura abierta de 762 nt, un extremo 5' no traducido (UTR) de 102 nt y un extremo 3'UTR de 407 nt. El gen está compuesto por 5 exones y 4 itrones. La secuencia posee un alto grado de homología a nivel de aminoácidos con otras IL-1b de peces (del 38% al 96%), encontrándose la mayor homología con las secuencias de sargo (Diplodus puntazzo) y de dentón (Dentex dentex), especies de la misma familia que la dorada y cuyas IL-1bs también han sido parcialmente obtenidas en el presente trabajo. El transcrito de la IL-1b se acumulan en diferentes órganos linfomieloides en peces infectados experimentalmente con la bacteria Vibrio anguillarum, así como en leucocitos y macrófagos estimulados in vitro con derivados bacterianos (LPS y DNA) y linfoquinas. En la segunda etapa del estudio, la IL-1b de dorada se expresó en Escherichia coli como una proteína de fusión a 6xHis y se purifició mediante cromatografía de afinidad a una resina de cobalto. La IL-1b purificada se utilizó como inmunógeno para obtener un anticuerpo policonal específico. La última etapa del presente trabajo se centró en el estudio de la producción y el mecanismo de liberación de la IL-1b de dorada utilizando el anticuerpo obtenido. Tanto el LBS y el DNA bacteriano como las linfoquinas fueron capaces de inducir la acumulación intracelular de un polipéptido de unos 30 kDa que represente el precursor de la IL-1b (proIL-1b). La adición de ATP no produjo el procesamiento ni la liberación de la IL-1b en las células de riñón cefálico. Sin embargo, la adición de ATP a los fibroblastos de la línea celular de dorada SAF-1 produce la liberación de microvesículas conteniendo una forma de la IL-1b de unos 22 kDa. La adición de un inhibidor específico de la caspasa 1 previene el procesamiento post-traduccional de la IL-1b, resultando en la liberación de la proIL-1b tras la adición de ATP.

Autor: AYLLON CASES VERONICA.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA.

Resumen: En este trabajo se describe que la molécula proappoptótica Bad, que se fosforila en residuos de serina, es un sustrato para la fosfatasa PP1alfa. La actividad de esta enzima aumenta cuando a las células se les quita el factor de crecimiento, lo que induce como consecuencia la muerte por apoptosis. Estos resultados nos han permitido concluir que la apoptosis desencadenada por falta de factores de crecimiento se correlaciona con una defosforilación de Bad, llevada a cabo por la fosfatase PP1alfa, lo que permite a esta molécula llevar a cabo su función apoptótica. Este trabajo también recoge resultados que demuestran que la molécula proapoptotica Bad y la fosfatasa PP1alfa forman parte de un complejo en el que también están incluida la molécula antiapoptótica Bcl-2. El papel de Bcl-2 en este complejo trimolecular, Bcl-2/Bad/PP1alfa es el de subunidad reguladora de PP1alfa, que permite el acercamiento de la enzima (PP1alfa) a su sustrato Bad. Además, este trabajo muestra que la secuencia por la que se asocia Bcl-2 a PP1alfa es identica al motivo de unión que poseen las diferentes subunidades reguladoras de PP1alfa descritas hasta ahora. La continuación de este trabajo ha sido demostrar que otras proteínas antiapoptóticas que pertenecen a la familia de Bcl-2 como son Bcl-w y Bcl-x son también capaces de dirigir a la enzima PP1alfa hacia su sustrato Bad. Los datos obtenidos en este trabajo han sido debidamente controlados, contrastados y son científicamente consistentes. Además, han dado lugar a varias publicaciones científicas como se ve en la Tesis.

Autor: VEGA MARAY ANA M..
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: En esta memoria doctoral se ha observado el comportamiento del polen de Urticaceae en la atmósfera de Ponferrada durante los años 1995 a 2000. Se ha estudiado su distribución anual, mensual, semanal y diaria, y se han realizado análisis estadísticos de correlación entre este tipo polínico y diversos factores meterorológicos, de ello se deduce que las concentraciones anuales han sido bajas, si bien en los años 1999 y 2000 se han alcanzado los valores máximos. Los meses con niveles más elevados se han mantenido constantes a lo largo del periodo de estudio, y han sido junio y julio. El índice de distribución intradiario indica que el polen de Urticaceae se distribuye de manera uniforme a lo largo del día. El estudio estadístico demostró que los parámetros meteorológicos que más influencia ejercen sobre la concentración de polen son, de forma positiva: las temperaturas (máxima, mínima, media, seca, húmeda y de rocío), la humedad absoluta, la razón de mezcla y los vientos procedentes del S.O. Y N.O., y de forma negativa: la lluvia, la humedad relativa y los periodos de calma. Además, queremos destacar que, con la humedad absoluta, se obtienen correlaciones mayores que con la humedad relativa. Se ha comprobado también, que la utilización de periodos polínicos principales definidos por distintos investigadores influye en las correlaciones con los parámetros meteorológicos; los mejores resultados se han obtenido con el periodo polínico completo mientras que los valores más bajos con el periodo polínico principal establecido por Mullenders y col. (1972). Se ha llevado a cabo el estudio ultraestructural del grano de polen maduro y activado durante 10, 15 y 20 minutos de Parietaria judaica y del grano de polen activado 10, 15 y 20 minutos de Urtica dioica. El citoplasma vegetativo del grano de polen maduro de P.judaica, se caracteriza por tener abundantes vacuolas electroclaras, pocos plastidios y grandes paquetes de retículo endoplasmático rugoso. Sin embargo, en el polen activo hay pocas vacuolas y plastidios, no aparecen los paquetes de retículo endoplasmático rugoso y hay abundantes amiloplastos. En los primeros minutos de la activación, la intina 3 experimenta un importante cambio morfológico. Durante el proceso de activación, se han observado diferencias morfológicas en la ultraestructura de los pólenes de P.judaica y U.dioica, tanto en la pared, como en el citoplasma. Mediante técnicas inmunocitoquímicas, se ha localizado el alergeno mayoritario del polen de P.judaica (Par j 1) (mediante dos anticuerpos monoclonales) y las proteínas alergénicas (mediante suero de un paciente alérgico) en los granos de polen de P.judaica y U.dioica en los mismos tiempos en los que se ha realizado el estudio ultraestructural. En el grano de polen de P.judaica, se produce una rápida difusión de las proteínas alergénicas hacia el exterior, por lo que pensamos que son las responsables del reconocimiento polen-estigma. Este hecho confirma la existencia de una convergencia entre los mecanismos del proceso reproductor y la liberación de proteínas en las mucosas de las personas sensibles. Las proteínas alergénicas localizadas en el grano de polen activado de U.dioica con el suero humano, son mucho menos abundantes que las observadas en P.judaica, con lo que se corrobora el menor potencial alergógeno de U.dioica.

Autor: REVILLA GRANDE ANA ISABEL.
Año: 2001.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: OBJETIVOS 1,- Determinar la incidencia de la patología tiroidea en la provincia de Soria durante el periodo 1992-1998. 2,- Medir las diferencias por edad y sexo. 3,- Calcular la incidencia de dicha patología en las diferentes zonas de salud y cuantificar si existen diferencias entre ellas. 4,- Analizar los aspectos más relevantes de las tiroidopa-- en nuestro medio. PACIENTES Y MÉTODOS Estudio descriptivo observacional de periodo (transversal) 1992-1998. La población accesible fueron todos los pacientes con patología tiroidea, pertenecientes a la provincia de Soria, mayores de 15 años, que estaban siendo controlados en el Hospital del Insalud de Soria y cuyo diagnóstico había sido realizado en el periodo comprendido entre 1992-1998. El estudio se realizó en el área de salud de Soria, con 14 zonas básicas de salud. Se calculan tasas de incidencia acumuladas para dicho periodo. RESULTADOS Se estudian 660 casos de nuevo diagnóstico. La incidencia total de la patología tiroidea ajustada: 8,20 x mil, incidencia total ajustada en la mujer: 15,35 x mil, en el hombre, 1,32 x mil edad media: 52,95 años, de=16,15. La incidencia de las distintas patologías (por mil): Bocio multimodular (BMN)=2,95. Hipertiroidismo: 2,92. Enfermedad de graves: 0,83. BMN tóxico=1,35. Hipertiroidismo subclinico: 0,57. Adenoma tóxico: 0,22. Mirotiroidismo: 2,53. Hipotiroidismo subclinico: 1,36. Tiroiditis: 1,1. Nódulo único: 1,55. CA. Papilar: 0,14. CA. Folicular: 0,12. En todas las patologías existe predominio en el sexo femenino, con diferencia estadísticamente significativa, excepto en el cáncer de tiroides.

Autor: CUESTA PEÑAFIEL ALBERTO.
Año: 2001.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En la presente Tesis Doctoral se ha estudiado la respuesta citotóxica natural de los leucocitos de dorada (Sparus aurata L.) frente a células tumorales, siendo cuantificada mediante citometría de flujo. Así mismo, se ha modulado y estudiado la expresión del ligando de Fas (FasL) y del receptor de las células citotóxicas naturales (NCCRP-1). Además, hemos estimado el parámetro cinético velocidad máxima de lisis durante dichas respuesta citotóxica. La actividad citotóxica de los leucocitos, es detectada a partir de 10 min., y resulta ser mayor para los leucocitos de riñón cefálico que para los del exudado peritoneal, bazo o sangre. La velocidad máxima de lisis de las células tumorales L-1210 es mayor que las de las K562. Los leucocitos de dorada expresan constitutivamente FasL citoplasmático, pero no en la membrana. También expresan el NCCRP-1. La actividad citotóxica de los leucocitos de riñón cefálico de dorada fue casi siempre mayor tras su tratamiento in vitro o in vivo con diferentes inmunomoduladores naturales tales como vitaminas (C, E, A), quitina, factor activador de macrófagos, levaduras o con el inmunomodulador sintético levamisol, dependiendo de la concentración y tiempo ensayado. El tratamiento in vivo mediante inyección intraperioneal de vitamina A o quitina también aumentó considerablemente dicha actividad. Por el contrario, los factores de estrés ensayados (cara elevada, anestesia e hipoxia) no producen un efecto inhibitorio importante sobre dicha respuesta citotóxica. En definitiva, podemos afirmar que la actividad citotóxica natural de los leucocitos de dorada es una reacción rápida en la que está implicada una población heterogénea de leucocitos formada por linfocitos, manocitos/macrófagos y granulocitos acidófilos. Dicha reacción podría ser llevada a cabo con la intervención de las moléculas FasL y NCCRP-1. Esta actividad se ve estimulada con la presencia de sustancias naturales o sintéticas y apenas se ve afectada por el estrés.

Autor: ALONSO LEBRERO JOSE LUIS.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNVIERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.

Resumen: LAS MOLECULAS DE ADHESION PSGL-1 E ICAM-3 Y LA PROTEINA DE UNION A ACTINA, MOESINA, SE ACUMULAN EN LA REGION SUBCELULAR POSTERIOR O UROPODO DE NEUTROFILOS ESTIMULADOS POR QUIMIOATRAYENTES. TANTO MOESINA COMO EZRINA INTERACCIONAN CON LAS REGIONES CITOPLASMICAS DE PSGL-1 E ICAM-3 MEDIANTE SUS DOMINIOS AMINO TERMINALES. LOS 1 PRIMEROS AMINOACIDOS DEL DOMINIO AMINO TERMINALES. LOS 11 PRIMEROS AMINOACIDOS DEL DOMINIO CITOPLASMICO DE PSGL-1 PERMITEN LA ASOCIACION A MOESINA Y SON SUFICIENTES PARA LA REDISTRIBUCIÓN DE PSGL-1 AL URÓPODO CELULAR. PSGL-1 TAMBIEN SE ASOCIA A TRAVES DE SU REGION CITOPLASMICA CON VARIAS PROTEINAS ENTRE LAS QUE SE ENCUENTRA SYK. PARA ESTA ASOCIACION CON SYK SON NECESARIOS LOS 18 PRIMEROS AMINOACIDOS DE LA REGION CITOPLASMICA E PSGL-1. UNA FRACCION DE SYK SE LOCALIZA JUNTO CON PSGL-1 EN EL UROPODO CELULAR DE LINFOCITOS POLARIZADOS.

Autor: GUTIERREZ DEL ARROYO VALENCIANO ANA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: U.A.M..

Resumen: El estado de la proteína p53 está implicado en la respuesta a determinados agentes anticancerosos de acción genotóxica. La proteína p53 está implicada en la inducción de la apoptosis y debería de considerarse a la hora de escoger tratamientos antitumorales. Otros agentes, si bien activan p53, parece que también activan mecanismos de apoptosis independientes de p53. Los estudios sobre la citotoxicidad de agentes anticancerosos se pueden realizar mediante experimentos in vitro. El tipo de experimentos y la duración de los mismos son importantes a la hora de valorar los resultados. La transfección de p53Val135 en BAF3 no tiene efecto sobre la sensibilidad de las células a drogas. La sobreexpresión de p53wt en las células BAF3 no provoca inducción del receptor de muerte Fas. Parece que es necesario qu p53 esté activa para que se induzca esta expresión. Fas tiene un papel en la apoptosis que se produce tras irradiación con rayos X. El aumento del número de receptores en la membrana determina la susceptibilidad a entrar en apoptosis. La inducción de Fas en la membrana tras irradiación es dependiente de p53. La IL3 modula los niveles de proteína p53 y, por tanto, la entrada de la célula en apoptosis tras irradiación. La IL3 parece que actúa a través de proteínas reguladoras de p53.

Autor: LOZANO REINA JOSE MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE CORDOBA.

Resumen: INTRODUCCIÓN El factor de Necrosis Tumoral ( TNF-) es un factor implicado en el daño hepatocelular que participaría a su vez en la repsuesta inflamatoria desencadenada, siendo origen de la cascada de citoquinas y mediadores celulares. Los efectos biológicos atribuidos al TNF- son las consecuencias de la unión de dicho factor a sus dos receptores de membrana descritos, TNF-R55 y TNF-R75. TNF-R55 se relaciona con los efectos citotóxicos atribuidos al TNF-,por el contrario se desconoce la acción del TNF-R75. Las prostaglandinas (PGs) han demostrado ser citoprotectoreas, mejorando la necrosis en una lesión hepática. Se ha especulado sobre los mecanismos de acción de las PGs, entre los que estaría su efecti inmunomodulador. MATERIA Y MÉTODOS Se provocó una lesión hepática por D-galactosamina (D-GaIN) wistar macho, dividiéndolas en 8 grupos: control, D-GaIN, PGE1, PGE1+ D-GaIN, anti-TNF- +D-Gain, antinecrosis y apoptosis.Se midieron los niveles intrahepáticos de TNF- y serológicos de TNF, IL-1, IL-6, IFN y óxido nítrico (NO) así como los niveles de activación de linfocitos T y de monocitos/macrófagos. También se evaluó la expresión hepática de los receptores TNF-R55 y TNF-R75 para el TNF-. CONCLUSIONES 1. El tratamiento con D-GaIN induce necrosis y apoptosis en el hígado. 2. Esta lesión hepática se relaciona con la activación de macrófagos /monocitos circulantes y la liberación de TNF-, IL-6 e IFN. Así mismo, este daño hepatocelular se asocia con un aumento de la expresión del receptor p55 para el TNF. 3. La administración de anticuerpo anti-TNF reduce en un 50% la lesión hepática lo que indica la existencia de otros factores implicados en el desarrollo de la toxicidad por D-GaIN. 4. LA pre-adminsitración de PGE1, reduce todos las parámetros de lesión hepática inducida por D-GaIN. 5. La protección por PGE1 revierte las alteraciones inmunes inducidas por D-GaIN. 6. La adminstración de anticuerpo anti-TNF- indica que la protección por PGE1 depende de los niveles circulantes de TNF-. 7. El aumento de la expresión de TNF-R75 en hepatocitos por PGE1 se asocia con su actividad hepatoprotectora.

Autor: CALZADA GARCIA M. JOSE.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En la presente tesis doctoral, se planteó el estudio estructural y funcional de la integrina plaquetaria aIIbB3, que funciona como receptor de fibrinógeno y otras proteinas adhesivas. Este estudio se llevó a cabo fundamentalmente con técnicas inmunoquímicas, mediante las cuales, utilizando una colección de anticuerpos monoclonales dirigidos a los subunidades de la integrina y cuyos epítopos se han determinado en este trabajo, se han podido hacer experimentos que han permitido valorar la cantidad de receptor en superficie y la cantidad de receptor total, tanto en plaqueta humana como en plaqueta de otras especies animales de interés para un estudio comparado de dicho receptor, ya que estas especies son utilizadas como modelos experimentales de lesión vascular en clínica. También se ha hecho un estudio comparado del receptor de fibrinógeno(aIIbB3) con el receptor de vitronectina (avB3) en celula endotelial humana, siendo tambien de gran interes, ya que ambos receptores tienen en comun la subunidad B3, y la subunidad aIIb tiene una homologia de un 74% con la subunidad av. Este estudio ha demostrado que dicha subunidad confiere a la subunidad B3 una conformación distinta a la que adopta cuando está formando heterodímero con av en lugar de con aIIb. Los estudios inmunoquímicos de este receptor de fibrinógeno, también han permitido demostrar cambios estructurales en el mismo tras activación, asi como la existencia de distintos estados de activación agonista-dependientes, que presentan distintos cambios conformacionales. Anteriormente tan sólo habia evidencias funcionales de la existencia de estos distintos estados de activación el receptor, pero aquí se ha demostrado además la existencia de cambios estructurales en estos distintos estados activados. A pesar de las dificultades de este trabajo, se ha llevado a buen fin al menos la mayor parte de los objetivos propuestos en el mismo, con resultados interesantes que ayudaran a la optimización y desarrollo de nuevos bloqueantes de aIIbB3 usados frente a enfermedades como trombosis arterial aguda e hiperplasia neointimal, pasando previamente por la etapa de ensayos clinicos en las distintas especies aquí estudiadas.

Autor: FERNANDEZ TROY NEUS.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA (UB).

Resumen: En este trabajo se pone de manifiesto la importancia que pueden tener los mecanismos de control posttranscripcional en la expresion de GM-CSF durante la activación de linfocitos T y de TNF-a durante la activacion de monocitos humanos y en el proceso de diferenciacion a macrófagos. En la primera parte se ha puesto a punto un sistema para medir media de RNA basado en el operón de resistencia a la tetraciclina de E.coli. Se utilizan dos plasmidos. Uno codifica una proteina de fusion que actuara como un transactivador, formada por el dominio de activacion de la transcripción de la proteina VP16 de Herpes simplex. El segundo plásmido contiene un gen reporter controlado por el promotor de B-actina y por siete secuencias del operon (tetO). Cuando los dos plasmido se expresan en una misma celula, el transactivador se une a las secuencias tetO y activa la transcripcion del gen reporter. En presencia de tetraciclina, esta se une al tetR, cambiando su conformacion e impidiendo su union al promotor, con lo que la transcripcion queda reducida a niveles minimos determinados por el promotor de B-actina. Se ha demostrado que es un sistema altamente especifico, ya que permite el bloqueo unicamente de la transcripcion del gen que se este estudiando sin afectar al metabolismo general de la celula. Mediante la utilizacion de esta tecnica se ha demostrado que el ARE de la 3´UTR del mRNA de GM-CSF, aunque es necesario para mantener su corta vida media, no es suficiente para inducir el aumento de vida media en respuesta a la coestimulacion por CD28, en celulas Jurkat. En la segunda parte se ha estudiado la expresion de TNF-a en respuesta a la activacion de monocitos humanos por TSST-1 regula la traduccion de TNF-a en monocitos humanos, ya que causa un desplazamiento de su mRNA hacia fracciones polisomales y aumenta la tasa de sintesis de la proteina TNF-a. Ademas, se ha observado que la activacion por LPS modula de forma diferente la produccion de TNF-a por parte de monocitos y macrofagos. Estos ultimos producen mayor cantidad de protena en el sobrenadante, lo que se correlacioina con un aumento de la vida media del mRNA de TNF-a en macrófagos,en respuesta a LPS, respecto al de monocitos. En conjunto, estos resultados muestran que, los mecanismos de control de la estabilidad del RNA y la traduccion pueden ser importantes en el control de la respuesta inmunitaria.

Autor: CULLELL YOUNG MARTI.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Loa macrofagos son células cuyo origen se encuentra en la médula ósea y que médula ósea y que juegan un papel fundamental en la respuesta inmunitaria. Una de la funciones de los macrófagos la presentación de antígeos exógenos procesados a los linfocitos T por medio de las moléculas de clase II del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC-II). La expresión de los genes de MHC-II se regula de forma coordinada, gracias a que en los promotores de todos los genes de MHC-II hay las mismas secuencias reguladoras. El IFN-y es la principal citocina que regula la expresión de los genes de MHC-II en macrófagos, y el objetivo de este trabajo ha sido el estudio de la regulación de la expresión de los genesde MHC-II en macrófagos, y el objetivo de este trabajo ha sido el estudio de la regulación de la expresión del gen I-Aa, uno de los genes del MHC-II de ratón, en cultivos primarios de macrófagos murinos de médula ósea. El IFNy aumenta la tasa de transcripcion el gen I-Aa, lo que se traduce en un aumento de los niveles de mRNA de I-Aa. Sin embargo,se observó una disociación entre el aumento de la tasa de transcripción y el aumento de los niveles de mRNA inducidos por el IFNy. Dicha disociación podria deberse a variaciones en la distribución núcleo-citoplasma del mRNA de I-Aa, pero observamos que la mayor parte del mRNA de I-Aa se encuentra en el citoplasma y que IFNy no modifica su distribución intracelular. Se analizó la estabilidad del mRNA de I-Aa, observándose que éste es muy estable y que su estabilidad no se ve afectada por el IFNy. Por tanto, la elevada, estabilidad del MRNA de I-Aa permite su acumulación dentro del macrófago, lo que explicaría la diferencia entre el aumento de la tasa de transcripción y de los niveles de mRNA de I-Aa inducidos por el IFNy. Además, el IFNy aumenta la unión de los ribosomas al mRNA de I-Aa permite su acumulación dentro del macrofago, lo que explicaría la diferencia entre el aumento de la tasa de transcripción y de los niveles de mRNA de I-Aa inducidos por el IFNy. Además, el IFNy aumenta la unión de los ribosomas al mRNA de I-Aa, lo que a su vez aumenta la tasa de traducción y los niveles de proteina I-Aa. Por último,el IFNy aumenta la vida media de la proteina I-Aa y la expresión de ésta en la superficie del macrófago. En conclusión, la regulación de la expresión de los genes de MHC-II por el IFNy en macrófagos murinos tiene lugar a diferentes niveles.

Autor: DELGADO FERNANDEZ MARCIAL.
Año: 1998.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: OBJETIVO: Conocer el comportamiento sérico del factor de necrosis tumoral alfa, de la interleucina 1 alfa, de la interleucina 6 y del interferón gamma en pacientes diagnosticados de brucelosis, seguidos al diagnóstico, al final del tratamiento y al final del periodo de seguimiento (6 meses). RESULTADOS: Tanto en los pacientes como en los controles no se detectaron niveles superiores a 10 pg/ml al diagnóstico, al final del tratamiento o al final del seguimiento. Los pacientes presentaron IL-1 alfa superiores en un 19.3% de los casos, con respecto a los controles (3%). Los pacientes con esplenomegalia presentaban superiores a 10 pg/ml en un porcentaje significativamente superior. Los niveles superiores a 10 pg/ml presentaban niveles significativamente superiores de interferón gamma circulante. La persistencia de niveles de IL-1 alfa se asociaba a antecedentes de formas o desarrollo de formas complicadas o cuadros articulares reactivos. No detectamos ascensos significativos en los pacientes con respecto a los controles con respecto a los niveles séricos de IL-6 (22.3 versus 13% con valores superiores a 10 pg/ml). El 50.6% de los pacientes presentaron niveles séricos superiores a 10 pg/ml, frente al 25% de los controles. Los pacientes más jóvenes y los con menor demora diagnóstica producían significativamente niveles de IFN gamma superiores a 10 pg/ml. Los niveles séricos elevados de IFN gamma se asocian significativamente a una mayor presencia de esplenomegalia, y se correlacionan de forma inversa con el contaje de leucocitos totales. Los niveles séricos se normalizan con la respuesta al tratamiento. Las recaidas se asocian a nuevas elevaciones de los niveles de IFN-gamma.

Autor: BENITEZ BAENA RAFAEL.
Año: 1998.
Universidad: GRANADA .
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Las células tumorales son capaces de expresar moléculas que actúan como antígenos en el huesped por lo que pueden ser reconocidas por el sistema inmune y consecuentemente destruidas. Este papel del sistema inmune en la prevención o eliminación de tumores establecidos es un fenómeno reconocido hace años e identificado como inmunovigilancia. Sin embargo, algunos tumores pueden expresar proteínas antigénicas y aunque la inmunovigilancia puede prevenir, limitar y/o eliminar el crecimiento de algunos tumores, las células malignas son capaces de evadir la acción del sistema inmune mediante un proceso conocido como escape tumoral. Los mecanismos responsables son varios entre los que se incluye la pérdida de expresión de moléculas HLA por parte del tumor, la pérdida de moléculas inductoras de señales coestimuladoras y la supresión directa de la respuesta inmune. La falta de expresión de moléculas HLA en la superficie de las células tumorales impide la formación de complejos de antígenos peptídicos tumorales ya procesados con las moléculas de clase I, por lo que no pueden ser reconocidos por los linfocitos T citotóxicos específicos, encargados de eliminar las células malignas. La pérdida de la expresión de moléculas HLA en los procesos tumorales puede obedecer a múltiples causas: defectos en los genes que codifican la b-2microglobulina, alteraciones en las proteínas TAP-1 y tAP-2, pérdida completa de uno de los cromosomas 6, o grandes delecciones del mismo, etc.. Se plantea el presente trabajo con objeto de estudiar el fracaso de la inmunización con péptidos antigénicos MAGE-1 y MAGE-3 en dos pacientes diagnosticados de melanoma maligno y tratados con esta terapia antitumoral. Igualmente se pretende establecer las bases moleculares de la pérdida de la expresión de moléculas HLA de calse I en las las líneas celulares y en los tumores de las que se originaron, pertenecientes a ambos pacientes y por último se intenta rediseñar, si procede, las pautas a seguir en el tratamiento experimental con péptidos antigénicos para conseguir una terapéutica más eficaz. Los resultados experimentales nos han permitido concluir que los dos pacientes estudiados presentan una pérdida total de la expresión de moléculas HLA de clase I (fenotipo I) en las metástasis tumorales. Se ha podido demostrar además que la causa de la falta de expresión es la existencia de alteraciones en el gen b2-m. En ambos casos se ha podido ver que ésta obedece a que uno de los alelos del gen está mutado y el otro deleccionado. Las alteraciones concretas que presentan los alelos del gen de la b2-m son la sustitución de una T por una A en el codón de inicio de un alelo y delección del alelo presente en el cromosoma homólogo, en uno de los pacientes, y sustitución de una C por una G en un alelo, que origina la aparición de un codón STOP y la delección del otro alelo del gen de la b2-m. En definitiva, es muy probable, que el fracaso de la inmunización con péptidos antigénicos MAGE-1 y MAGE-3 en los dos pacientes pueda explicarse por la ausencia de la expresión de moléculas HLA de clase I en las metástasis. La inclusión de nuevos pacientes en los protocolos de inmunización debería venir acompañada de un estudio inmunohistoquímico del tumor y del estudio de los genes de la b2-m con objeto de mejorar la eficacia del tratamiento.

Autor: FERNANDEZ PINEDA M. ANGUSTIAS.
Año: 1998.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Los Antígenos del Complejo Mayor de Histocompatibilidad, conocidos como HLA en el hombre constituyen los productos de un conjunto de genes situados en el brazo corto del cromosoma 6, que dan origen al sistema antígeno más polimórfico que existe en humanos. La función de estos antígenos HLA consiste en la presentación de péptidos antígenos a los linfocitos T. Las moléculas HLA de clase I presentan péptidos, generalmente de origen endógeno, como pueden ser péptidos virales o tumorales, procesados en el interior de la célula a los linfocitos TCD8, especialmente a los CTLs (Linfocitos T citotóxicos). Es conocido desde hace tiempo que la expresión de antígenos HLA de clase I está alterada en tumores. Dado el papel central de dichos antígenos en el reconocimiento y presentación antígenica, (los linfocitos T sólo reconocen al antígeno en el contexto de las moléculas HLA), este fenómeno puede suponer un mecanismo por parte de las células malignas para escapar de la inmunovigilancia. El estudio de las alteraciones de la expresión de antígenos HLA en tumores ha ido avanzado con la disponibilidad de Anticuerpos Monoclonales (AcMos) que reconozcan diferentes epítopos conformacionales de estas moléculas. Así en la década de los 70, se podían detectar pérdidas totales de antígenos HLA gracias a la existencia de AcMos contra determinantes monomórficos. En la década de los 80, aparecieron AcMos específicos de locus que permitían detectar pérdidas a este nivel, y en estos últimos años han aparecido AcMos frente a especificidades alélicas. Nuestro grupo de investigación, basándose en estudios inmunohistoquímicos y de biología molecular ha propuesto la siguiente clasificación de fenotipos HLA alterados en tumores: FENOTIPO I, cuando existe pérdida total de expresión de antígenos HLA, FENOTIPO II, cuando existe pérdida de haplotipo, FENOTIPO III, que tiene lugar cuando existe pérdida de locus y FENOTIPO IV, cuando existe pérdida alélica. El primer objetivo de esta tesis ha sido realizar un escrutinio de AcMos frente a especificidades alélicas HLA de clase I que presenten un adecuado funcionamiento en inmunohistología. Así se han estudiado 53 AcMos que reconocen alelos del locus A y 50 AcMos frente a alelos del locus B. Este estudio se ha llevado a cabo en secciones criostáticas de tumores empleando la técnica inmunohistoquímica de la peroxidasa modificada con el sistema biotina-estreptoavidina. Puesto que se trataba de ensayar AcMos frente a especificidades alélicas, era necesario conocer el tipaje de clase I de los pacientes, lo cual se ha realizado en linfocitos de sangre periférica mediante la técnica de la microcitotoxicidad mediada por complemento. Tras estudiar la reactividad inmunohistoquímica de estos AcMos, y en función de su Sensibilidad y Especificidad, se han seleccionado una pequeña proporción en relación con el número total estudiado, en concreto un 28% de AcMos específicos de alelos tanto para el locus A como para el locus B. Contando con este panel de AcMos, se ha tratado de profundizar en la alteración de la expresión HLA en carcinomas de mama, siendo éste el segundo objetivo de esta tesis. Para ello se ha empleado la misma metodología que en el objetivo anterior y se ha estudiado la expresión de antígenos HLA en este tipo de carcinomas a nivel de determinantes monomórficos (encontrando un 52.4% de casos con pérdida en la expresión de clase I a este nivel), locus-específico (apareciendo que un 21.1% de los casos tienen alteración en la expresión de locus) y a nivel de alelo (se han encontrado un 15% de pérdidas de expresión alélica), este último nivel representa la novedad de este estudio. Los resultados obtenidos indican que existe una frecuencia muy alta (88.5%) de fenotipos HLA alterados en este tipo de carcinoma. Puesto que el panel de AcMos que reconocen alelos HLA de clase I, no abarca todas las especificidades posibles no se puede descartar que la frecuencia de estas alteraciones en carcinomas de mama sea aún mayor. Al tratar de correlacionar las alteraciones en la expresión HLA de clase I con los parámetros clinicopatológicos de los tumores de mama, no se ha encontrado ninguna asociación estadísticamente significativa. Por último se ha analizado uno de los mecanismos moleculares que puede estar implicado en el fenotipo I, esto es, una alteración genética de la B2-microglobulina(B2m). Para ello se han seleccionado 10 casos de entre 80 tumores de colon que presentan el citado fenotipo I. Se ha analizado DNA tanto de tejido normal como tumoral de estos 10 casos mediante SSCP (Polimorfismo conformacional de la cadena simple) y se ha obtenido la secuencia nucleotídica de los dos exones codificantes de esta proteína (exón 1 y exón 2), empleando el método de terminación en cadena descrito por Sanger utilizando didesoxinucleótidos modificados, marcados con Fósforo 33. Ninguno de los diez casos estudiados ha presentado mutación en el gen de la B2m, por lo que parece que este mecanismo no es el principal responsable ni el más frecuente en tumores de colon que presentan un fenotipo I.

Autor: ENRIQUEZ GUTIERREZ EMILIANO.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Hemos realizado un estudio inmunohistoquímico y morfométrico de la adenohipófisis de ratas machos de la cepa Sprague-Dawley, controles y tratados con glutamato monosódico (GMS) (4mg/g peso, vía subcutánea) a los cuatro días de vida. Los animales fueron sacrificados a los 9,11,18,25,34,64,79 y 94 días de edad. Se han empleado antisueros frente a la GH, la LH y la PRL para analizar las posibles modificaciones en la inmunorreactividad y en el área y en la densidad celular de los adenocitos marcados. Las células somatotropas tienden a aumentar su área celular hasta los 34 días, después el tamaño se estabiliza, lo que interpretamos en relación con el crecimiento hasta la pubertad. En los animales tratados de intensidad de tinción de los somatotropos y el estudio morfométrico sugieren un déficit en la liberación de GH hasta los 34 días de edad, como consecuencia de la afectación neutológica. En los animales tratados de 64 y 79 días la densidad celular está incrementada, lo que consideramos como posible respuesta compensadora al déficit señalado. A los 9j días las células somatotropas son similares en animales tratados y controles lo que aboga en favor de la recuperación de los mecanismos que controlan la secreción de la GH. Tanto en las ratas tratadas como en los controles el área y la densidad celular de los adenocitos LH es paralela hasta los 64 días. En los animales sacrificados a los 79 y 94 días de vida existe una discordancia en el área celular, siendo en los tratados menor a los 79 días y mayor a los 94, lo que se corresponde con la aparición de grandes células vacuoladas, similares a las células "en anillo de sello" de la castración, indicativo del retraso de la publertad determinado por la administración de GMS. Los datos relativos a las células de PRL, permiten suponer la existencia de una hiperactividad en los animales tratados hasta los 64 días, probablemente debida a la afectación del sistema tuberoinfundibular dopaminérgico. La evaluación global de nuestros resultados nos permite afirmar que la repercusión del efecto neurotóxico inducido por el GMS en el núcleo arcuato de ratas macho es de escasa importancia, hecho que atribuimos a la repoblación neuronal de este territorio..

Autor: RIBA GARCIA FRANCISCO ASIS.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Hemos realizado un estudio inmunohistoquímico para poner de manifiesto la neurohormona LHRH en ratas macho normales, sexualmente maduras, así como en animales sometidos a castración o castración simulada con o sin posterior tratamiento con propionato de testosterona. Los animales experimentales fueron sacrificados uno, seis y veintiún días después de la intervención quirúrgica. En los distintos grupos de animales se ha determinado la media de la superficie de sección de las cisternas del hipotálamo mediobasal. Hemos constatado la existencia de una relación entre las cisternas del hipotálamo mediobasal de la rata macho y fibras LHRH. Tal asociación es más marcada en el caso de las cisternas del surco tuberoinfundibular que en el de las cisternas periventriculares. La castración simulada no provoca modificaciones de las cisternas ni de las fibras LHRH presentes en el hipotálamo mediobasal, por lo que descartamos que la anestesia o la intervención quirúrgica pueda afectar a estos elementos. La castración quirúrgica no provoca cambios en el aspecto de las cisternas. Veintiún días después de practicada la intervención se ha observado un incremento significativo de la superficie media de sección de las cisternas. Este hecho difiere tanto por su cronología como por el grado del incremento de lo que ocurre en ratas hembras tras la castración, de acuerdo con observaciones previas realizadas en nuestro Departamento. El tratamiento con propionato de testosterona de los animales castrados impide el referido incremento del tamaño de las cisternas. Tanto en animales castrados como en los sometidos a castración simulada el tratamiento androgénico parece conllevar una tendencia a la disminución del calibre de las cisternas, si bien los datos no son estadísticamente significativos. Asimismo, este tratamiento provoca una aparente disminución del número de cisternas de hipotálamo mediobasal. Tanto en los animales castrados como en los tratados con propionato de testosterona, independientemente de que estos últimos hubiesen sido castrados o sometidos a castración simulada, hemos apreciado una aparente disminución en la intensidad de tinción para LHRH que podría relacionarse con una disminución de la neurohormona presente en le hopotálamo mediobasal. El conjunto de nuestras observaciones permite deducir que las cisternas del hipotálamo mediobasal de la rata macho participan en los mecanismos de regulación de la función gonadotropa, si bien su papel ha de ser cuantitativa y cualitativamente distinto del que se ha propuesto para las hembras, pudiendo constituir una manifestación más de dimorfismo sexual..

Autor: CAMINOS BENITO M. ELENA.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Las neurotrofinas y sus receptores están implicados en la supervivencia, diferenciación y desarrollo de las neuronas. Para entender el papel de estas moléculas en el sistema visual, hemos investigado su distribución en la retina, nervio óptico, techo óptico y núcleos preópticos de un teleósteo (la tenca), que tiene capacidad de regenerar su sistema nervioso después de una lesión, y en la retina de un mamífero (la rata), que carece de dicha capacidad. Para desarrollar este trabajo, realizamos el pinzamiento del nervio óptico de tencas que después permanecieron vivas entre 1 y 250 días. Empleamos técnicas inmunohistoquímicas (anticuerpos contra NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, TrkA, TrkB, TrkC y p75); histoquímica; hibridación in situ, inmunoprecipitación y western blot. Detectamos: NGF y BDNF en células de Muller en tecna; el mRNA de BDNF y trkB en retinas de ratas adultas y neonatales; BDNF, NT-3, TrkA y TrkB en macroglía del nervio óptico normal. Entre 4 y 90 días después de la lesión, la inmunorreactividad de TrkA y su mRNA aumentaron en la retina de tenca y todas las neurotrofinas, excepto NT-3, y sus receptores los detectados en macrófagos del nervio óptico. Entre 15 y 30 días después de la lesión observamos terminaciones BDMF-inmunorreactivas sólo en el hemitecho cotralateral al nervio lesionado. Estos resultados nos indican que ciertas neurotrofinas actuan en la retina de tenca a través de las cbelulas de Muller, y en el nervio óptico a través de células macromicrogliales; que TrKA está implicado en los procesos de regeneración de la retina de tenca; que BDNF y TrkB intervienen en el desarrollo y funcionamiento normal de la retina de rata; y que BDNF participa en la reorganización y reestablecimiento de las sinapsis en el techo óptico durante la regeneración de los axones ópticos..

Autor: TABARES DOMÍNGUEZ PASCUAL.
Año: 1997.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: OBJETIVOS Análisis de las variaciones inmunológicas de la esquizofrenia y su correlación con el eje HHA. MATERIAL Y MÉTODOS Determinación de IL-6, ACA y ANA Determinación de ACTH, Corticol, correlación con las variables procesuales de la esquizofrenia. Población. 43 esquizofrénicos y 19 S.C. RESULTADOS Existen valores superiores de IL-6 en los esquizofrénicos frente a S.C. Correlación estadísticamente significativa RESPECTO 1,- El estadio de la enfermedad 2,- La edad de inicio 3,- El número de ingresos

Autor: ALVAREZ MARTINEZ M. VICTORIA.
Año: 1996.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: LOS PEPTIDOS FORMILADOS, EL FRAGMENTO C5A DEL SISTEMA DEL COMPLEMENTO Y LA INTERLEUQINA-8 (11.-8) SON POTENTES QUIMIOTRAYENTES PARA LAS CELULAS IMPLICADAS EN LAS RESPUESTAS INFLAMATORIAS. LOS GENES QUE CODIFICAN LOS RECEPTORES DE PEPTIDOS FORMILADOS (FPR), C5A (C5AR) E IL-8 (IL-8R) PERTENECEN LA SUPERFAMILIA DE LA RODOPSINA. TODAS ESTA MOLECULAS POSEEN SIETE DOMINIOS TRANSMEMBRANALES Y SE ENCUENTRAN ACOPLADOS A PROTEINAS-G PARA LA TRANSDUCCION DE LA SEÑAL GENERADA POR LA UNION DEL LIGANDO. EN EL HOMBRE, EXISTEN 3 GENES PARA LOS RECEPTORES DE PEPTIDOS FORMILADOS (FPR1, FPR2 Y FPRL2), UN GEN PARA EL RECEPTOR DE C5A (C5AR) Y DOS GENES PARA LOS RECEPTORES DE INTERLEQUINA-8 (IL8RA E IL8RB). LOS GENES FPR1, FPR2, FPRL2 Y C5AR SE HALLAN EN EL CROMOSOMA 19 Y LOS GENES IL8RA E IL8RB ESTAN EN EL CROMOSOMA 2. A EXCEPCION DEL GEN C5AR, TODOS ELLOS CARECEN DE INTRONES EN SU SECUENCIA TRADUCIDA. EL GEN C.5AR POSEE UN INTRON QUE SEPARA LA REGION 5' NO TRADUCIDA Y EL PRIMER CODON (METIONINA) DEL RESTO DE LA SECUENCIA TRADUCIDA. MEDIANTE SECUENCIACION DIRECTA Y DE CLONES PLASMIDICOS, HEMOS OBTENIDO LAS SECUENCIAS CODIFICANTES DE LOS GENES FPR1, FPR2, FPRL2, C5AR, IL8RA E IL8RB EN EL HOMBRE, CHIMPANCE, GORILA, ORANGUTAN Y MACACO. LAS SECUENCIAS DE ESTOS GENES PRESENTARON ELEVADOS NIVELES DE IDENTIDAD ENTRE ESPECIES, CON LAS MAYORES DIVERGENCIAS EN AQUELLOS DOMINIOS DE LAS MOLECULAS IMPLICADOS EN EL ENLACE AL LIGANDO. PERO EN EL ORANGUTAN Y EL MACACO EL GEN IL8RA TENIA UNA INSERCION DE DOS PARES DE BASES QUE LA CONVERTIA EN UN PSEUDOGEN. EL ANALISIS EVOLUTIVO DE LAS SECUENCIAS NUCLEOTIDICAS DE LOS 6 GENES EN PRIMATES SUPERIORES SUGIERE LA AUSENCIA DE PRESIONES SELECTIVAS IMPORTANTES Y LA VARIACION OBSERVADA OBSERVANDO SERIA CONSECUENCIA DE MUTACIONES NEUTRAS CARACTERISTICAS DEL PROCESO EVOLUTIVO. ADICIONALMENTE, HEMOS CONSTRUIDO EL MAPA FISICO DE ESTOS GENES EN LOS PRIMATES SUPERIORES UTILIZANDO LA ELECTROFORESIS EN GELES DE CAMPO PULSANTE. EN EL HOMBRE, CHIMPANCE, GORILA, ORANGUTAN Y MACACO LOS GENES FPR1, FPR2, FPRL2 Y C5AR FORMAN UNA ASOCIACION DE LIGAMIENTO EN LA CUAL C5AR Y FPRL2 FLANQUEARIAN A FPR1 Y FPR2, ESTANDO FPR1 MAS PROXIMO A C5AR. LOS GENES IL8RA E IL8RB DE LOS 5 PRIMATES TAMBIEN SE ENCUENTRAN FISICAMENTE LIGADOS EN UN FRAGMENTO MENOR DE 175 KB. TODOS ESTOS RESULTADOS SUGIEREN UN ORIGEN COMUN, EN EL CUAL UN GEN PRECURSOR SUFRIO SUCESIVAS DUPLICACIONES HASTA GENERAR EL REPERTORIO DE SECUENCIAS PRESENTES EN LOS PRIMATES.