MICROBIOLOGIA

Autor: SORIANO LASHERAS MARGARITA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La aplicación de enzimas en la industria constituye una de las aportaciones más recientes en las tecnologías de producicón, debido a su elevada eficiencia catalítica, a que su uso no daña el medio ambiente y a su alta rentabilidad económica. En los últimos años ha aumentado de forma importante la aplicación de enzimas microbianos en la industria. La mayoría de estos enzimas son degradadores de polisacáridos de la pared celular vegetal, como celulosas, hemicelulosas y pectinas. La pectina en un polímero formado principalmente por cadenas de ácido galacturónico, parcialmente esterificado. Las pectinasas son las enzimas que degradan la pectina. El principal objetivo de la tesis fue caracterizar pectinasas con potencial aplicación industrial. Para ello, primero se realizó el análisis de los sistemas degradadores de pectina de las cepas bacterianas Paenibacillus sp.BP-23 y Bacillus sp. BP-7, aisladas previamente por el grupo de investigación a partir de suelo de arrozal del Deltal del Ebro. El sistema pectinolítico de ambas cepas mostró una multiplicidad de bandas, motivo por el cual, se procedió a la clonación, purificación y caracterización de pectinasas a partir de las cepas analizadas y de Bacillus subtiles 168. Los estudios realizados indican que PelA de Paenibacillus sp. BP-23 YvpA de Bacillus subtilis son enzimas nuevos, con características diferentes a las pectato liasas conocidas, que permiten identificar un subgrupo de enzimas dentro de las pectato de la familia PL3. La inusual elevada actividad sobre pectina de los dos enzimas estudiados en este trabajo los hace buenos candidatos para aplicaciones biotecnológicas relacionadas con la degradación de pectina de sustratos naturales. En el contexto de la utilización creciente de enzimas en la industria se planteó la producción del más activo de ellos, la pectato liasa PelA, en cantidades elevadas para poder realizar ensayos de aplicación industrial, utilizando cepas huésped de Bacillus subtilis. Con este fin se construyeron vectores lanzadera que replican tanto en Bacillus subtilis como en Escherichia coli. Los resultados obtenidos en este trabajo suponen una aproximación a la tarea de sobreproducir pectato liasas, lo que ha permitido la identificación de problemas específicos de la expresión de los enzimas en estudio y posibilitarán la construcción futura de nuevas cepas recombinantes de productividad y rendimiento aumentado.

Autor: ALTARRIBA SANPONS MARIA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: Como ha sido demostrado en diversos trabajos previos llevados a cabo por nuestro grupo de investigación, tanto del flagelo polar como el flagelo lateral de Aeromonas spp., están implicados en la patogenicidad de este género bacteriano. Por este motivo, nuestro grupo se propuso llevar a cabo un estudio en profundidad de la genética implicada en la formación de esta estructura bacteriana. Mientras en trabajos previos se describió la codificación y función del flagelo lateral de Aeromonas spp., el objetivo de esta tesis fue la descripción del polar. Mediante diferentes sistemas de clonación, se ha conseguido clonar gran parte de los genes implicados en la codificación de los genes del flagelo polar, a excepción de una de las agrupaciones génicas. De este modo hemos podido describir tres grandes agrupaciones génicas que comprenden unos 70 genes implicados en la flagelación polar de Aeromonas spp. Estos 70 genes están distribuidos en tres regiones génicas clarametne diferenciadas, a las cuales denominamos flg, fla/neu y fli/lfg. De todas estas regiones, la región génica fli/lfg constituye la mayor región genética descrita en microorganismos flagelados destinada a un único tipo de flagelación, incluyendo unos 40 genes diferentes. El estudio de cada una de las regiones fue completado construyendo mutantes por recombinación en un punto de 19 de los genes descritos. Se estudiaron los patrones de movimiento para cada uno de los mutantes para poder determinar cómo afecta cada uno de los genes en la movilidad del género Aeromonas. Asimismo, se hizo un estudio exhaustivo de las regiones promotoras de cada uno de los operones descritos en cada región genética. El estudio del patrón de movilidad de los diferentes mutantes permitió afirmar que los sistemas de flagelación polar y lateral de Aeromonas hydrophila son completamente independientes y no comparten elementos estructurales. Sin embargo, para el aparato de exportación asociado al ensamblaje de flagelo, no se ha podido demostrar una independencia absoluta entre el flagelo polar y el flagelo lateral, ya que la mutación del gen flhA afecta tanto al movimiento en enjambrado como al movimiento por natación. El estudio de las regiones genéticas mencionadas también permitió describir dos genes vinculados a la glicosilación específica, uno para el flagelo polar situado al final de la agrupación génica fla, y otro al final de los genes denominados lfg, que afectaría únicamente a la flagelación polar. También se pudo concluir que las proteínas de tipo Fli y Lfg son incompatibles con la flagelación peritrica de Escherichia coli.

Autor: FLÁNDEZ CANET MARTA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: MICROBIOLOGÍA II, FACULTAD DE FARMACIA, UCM.

Resumen: Las fosfatasas de especificidad dual (DSPs) son uno de los elementos claves en la regulación negativa de las rutas de transducción de señales mediadas por MAPKs. Esto es debido a que son capaces de desfosforilar los aminoácidos conservados treonina y tirosina que se encuentran en el dominio de activación de las MAPKs. La actividad de la DSP Msg5 es primordial para el mantenimiento de unos niveles bajos de activación de la ruta de integridad celular en Saccharomyces cervisiae. El efecto de esta fosfatasas sobre el mantenimiento de la pared celular es tal que su ausencia confiere sensibilidad celular a Rojo Congo. Además, la región regulatoria amino terminal de Masg5 es la responsable de su interacción con la región amino catalítica de Slt2, la MAPK de esta ruta. Ensayos in vivo e in vitro demuestran que ambas proteínas actúan de manera recíproca. Msg5 se une y desfosforila a Slt2 en condiciones basales; y Slt2 se une y fosforila a Msg5 en respuesta a la activación de la ruta de integridad celular. La existencia de un inicio alternativo de la traducción en MSG5 conlleva la presencia de dos isoformas de Msg5, que son funcionales sobre Slt2 y con igualmente fosforialdas en respuesta a la activiación de la integridad celular. El hecho de que tras la activación de la ruta disminuya la interacción de Msg5 y Slt2, sugiere que Slt2 regula la acción de esta proteín fosfatasa en estas condiciones mediante la alteración de la unión entre ambas.

Autor: FUENTE GONZÁLEZ RICARDO DE LA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Las células madres se podrían definir como unas células indiferenciadas que residen en un tejido especializado y con capacidad de división in vitro durante largos periodos de tiempo y que, ante los estímulos adecuados, pueden diferenciar a tipos celulares especializados del tejido de origen. Dentro de ellas están las células madre mesenquimales, que han sido identificadas en tejidos de varias especies animales y principalmente aisladas a partir de médula ósea. En el presente trabajo se ha realizado un estudio a nivel genético y molecular de condrocitos articulares humanos desdiferenciados y s eha demostrado que esta población es análoga a la de células madre mesenquimales aisladas a partir de médula ósea humana. De esta forma se ha visto que: la población de condrocitos articulares desdiferenciados puede ser expandida in vitro durante largos periodos de tiempo sin que se produzcan alteraciones cromosómicas, presenta un patrón de marcadores de superficie idéntico al de la población medular y, además, expresan todos los marcadores de superficie característicos de células madre embrionarias humanas. También se han realizado estudios de diferenciación celular hacia tejidos especializados (tejido óseo, adiposo, cartilaginoso y muscular, endotelio y sistema nervioso) pertenecientes a las tres capas del desarrollo embrionario, demostrándose así su multipotencialidad, lo que supone su posible aplicación en terapia celular. Por parte se presenta el primer estudio del proteoma de una célula madre mesenquimal, en el que se presenta que esa población y los condrocitos articulares tienen un patrón proteomico casi idéntico. Análisis ontológicos muestran que ambas poblaciones expresan genes que previamente han sido relacionados con el mantenimiento y la capacidad de diferenciación de las células madre. Por último se ha desarrollado un nuevo modelo pre-clínico de implante autólogo de condrocitos articulares en lesiones condrales articulares, empleándose una matriz compuesta por un plasma autólogo rico en factores de crecimiento.

Autor: BALADRÓN JIMÉNEZ BEATRIZ ISABEL.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA, ISC III.

Resumen: El objetivo primordial de este estudio se relaciona con la tarea sanitaria encomendada a los Laboratorios de Salud Pública, en cuanto a la vigilancia y control de la enfermedades infecciosas. Actividades de caracterizavción o tipificación de proveen una información de gran utilidad para las autoridades sanitarias a la hora de enfrentarse a la prevención y el control de las enfermedades infecciosas. En este trabajo, la finalidad a la hora de atender esta tarea sanitaria, es doble, por un lado, la comparación de los aislados de enfermos no relacionados entre si, permite un conocimiento preciso de las cepas de Legionella que causan infección y por otro lado, la comparación de aislados de enfermos con aislados recuperados de las supuestas fuentes de infección, permite establecer su posible relación epidemiológica. Esta tesis pretende analizar varias técnicas disponibles para estos dos fines. Se seleccionaron dos grupos de cepas: uno de L.pneumophila SG1 procedentes de enfermos no relacionados, y otro formado por parejas o grupos aislados clínico/ambiental, es decir de aquellos episodios infecciosos en que dispusimos al menos de un aislado de origen clínico y otro de origen ambiental. En este estudio se aplicaron cuatro técnicas: la primera fue la utilización de anticuerpos monoclonales por ser la técnica más accesible. La segunda fue AFLP (Amplified Fragments Length Polymorphism) por ser una técnica estandarizada en varios laboratorios europeos con la intención de intercambiar perfiles en lugar de cepas; La tercera fue la electroforesis en campo pulsante (PFGE) por ser una técnica que en los últimos años están teniendo una gran aceptación como método de tipificacón para una gran variedad de especies bacterianas, entre las que se encuentra Legionella; y la cuarta fue la secuenciación de varios genes (SBT), por ser una técnica prometedora en cuanto a la facilidad en la interpretación de los resultados.

Autor: CHÁVARRI MARTÍNEZ ALBERTO.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: La tos ferina es una grave enfermedad respiratoria humana causada por la infección de la bacteria gram-negativa Bordetella pertussis. Como en muchos otros países europeos, la introducción de una vacunación rutinaria en la década de los 60 trajo consigo una drástica reducción de la morbilidad y mortalidad. Por ejemplo en el año 2000 la incidencia en Navarra fue de 0,70 casos por 100.000 habitantes. La hipótesis de este trabajo es que la incidencia real de esta enfermedad es mucho mayor de la notificada debido a casos de tos ferina no reconocidos en adolescentes y adultos. Para estudiar esta hipótesis se determinó por medio de ELISA el nivel de anticuerpos frente a la toxina pertúsica (PT) en una muestra representativa (n=1065) de la población adulta de Navarra, agrupada según sexo, edad, zona geográfica y ámbito de residencia. Un nivel de IgG anti-PT mayor que 100 UE/mL fue detectado en el 2,3% de las muestras. De acuerdo con un estudio reciente este nivel es indicativo de una infección reciente por B.pertussis. Estos datos fueron confirmados por otros análisis como la determinación de anticuerpos frente a otros factores de virulencia de B.pertussis como hemaglutinina filamentosa (FHA) y pertactina (PRN), el seguimiento en el nivel de IgG-PT en los sueros positivos e inmunoblot. No se detectó una asociación entre la serpositividad a B.pertussis y ninguno de los siguientes parámetros epidemiológicos: sexo, edad y residencia en ámbito rural o urbano. Sí que se detectó una asociación con la zona geográfica de residencia. Específicamente, el porcentaje de seropositivos en la zona de Navarra Media, resultó ser muy superior al del resto de zonas con un 8% frente al 2,3% y 2,1% de Ribera y Pamplona respectivamente, mientras que en la zona Norte, por el contrario, no se detectó ningún suero positivo. No se ha podido implicar a ningún factor epidemiológico como responsable de este fenómeno. Se estudió además el grado de inmunidad de la población frente a una infección por B.pertussis determinando el nivel de IgG-PRN e IgG-PT, dos tipos de anticuerpos que han resultado tener una buena correlación la protección frente a la enfermedad. Así, se vió que un 24,6% de población tiene una alta susceptibilidad a contraer la enfermedad, un 70% una susceptibilidad media y únicamente un 5,3% se encuentra totalmente protegida. Estos resultados ponen de manifiesto la existencia de una elevada circulación de B.pertussis en la población adulta de Navarra y subrayan la improtancia que podría tener la administración de dosis de refuerzo dela vacuna acelular en la adolescencia y en la edad adulta. Se propone la reinmunización con una vacuna acelular de baja carga antigénica (dTpa) a los adolescentes (13-15 años) coincidiendo con la actual vacunación con el preparado dT. Secundariamente al estudio de seroprevalencia, se ha comprobado de manera preliminar la alta eficacia, por medio de experimentos en un modelo murino de infección respiratoria, de una vacuna experimental frente a B.pertussis basada en micropartículas, que emplea como antígeno sobrenadantes de cultivos en medio líquido de B.pertussis.

Autor: RODRÍGUEZ CUESTA JUAN ANGEL.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Los modelos experimentales de carcinogénesis y progresión metastática de tumores animales constituyen una herramienta imprescindible para el estudio fisiopatológico y la búsqueda de terapéuticas innovadoras contra el cáncer. Sin embargo, existen determinados microorganismos capaces de infectar a los animales durante la fase experimental. Las infecciones pueden provocar cambios fisiopatológicos, alterar la respuesta inmune e incrementar la variabilidad entre individuos de un mismo grupo experimental. Recientemente, hemos demostrado que citocinas proinflamatorias, tales como el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-alfa) y la interleucina-18 (IL-18), producen efectos pro-adhesivos y pro-angiogénicos que estimulan el proceso metastático. No obstante, no se conoce con precisión el impacto de las elevaciones en los niveles endógenos de tales citocinas inflamatorias inducidas por agentes infecciosos sobre la progresión metastática en animales de laboratorio. En este trabajo se estudió si las infecciones naturales y experimentales en el ratón influyen sobre la capacidad metastática de las células del melanoma murino B16 (MB16). Para ello se utilizaron animales con diferente procedencia en los que se analizó su estado sanitario a través de un amplio prgrama de monitorización sanitaria. Se comparó la capacidad de las células del melanoma para colonizar el hígado de animales mantenidos bajo diferentes condiciones experimentales. Posteriormente, se cuantificó en estos animales la concentración sérica de algunas citoquinas. Se puede concluir que, tanto las infecciones naturales como la infección con C.albicans, son capaces de incrementar la capacidad de las células cancerígenas para colonizar el tejido hepático, probablemente a través de un mecanismo dependiente de la elevación del TNF-alfa y la IL-18.

Autor: A.I. ADHAM YAEESH SIRIN.
Año: 2002.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Hemos podido a obtener la expresión en corinebacterias de genes de Streptomyces y Aspergillus que codifican para enzimas extracelulares no tiene lugar a partir de los promotores endógenos, sino a partir de promotores reconocidos por la maquinaria transcripcional de las corinebacterias, como el promotor del gen de resistencia a kanamicina/neomicina del transposón Tn5, o el promotor del gen cspB de Corynebacterium glutamicum. B.lactofermetum excreta muy pocas proteínas al medio de cultivo, y cuando alguno y dos de los genes de Strptomyces que codifican para enzimas extracelulares (xysA o celA1) se expresan, el producto génico pasa a ser una de las proteínas mayoritarias en el sobrenadante de cultivo. Durante el proceso de secreción de la xilanasa de S.halstedii, B.lactofermentum procesa el péptido señal de la pre-xilanasa de una manera idéntica al Streptomyces productor. Al expresarse los genes estudiados bajo el control del promotor del gen de resistencia a kanamicina, la producción de enzimas extracelulares en B.lactofermentum es constitutiva e independiente de la presencia del sustrato del enzima. El procesamiento de la proteína Xys1L (dominio catalítico + dominio de unión a celulosa) a Xys1S (dominio catalítico) en B.lactofermentum es diferente al procesamiento en Streptomyces. B.lactofermentum no procesa mas del 10% de la proteína Xys1L en 96 h mientras que las cepas de Streptomyces procesan los totalmente Xys1L a Xys1S en 48-84h. La interrupción génica de los ORF4 y ORF5 (dos de las tres ORFs situadas aguas abajo del gen ftsZ y no esenciales para la viabilidad de B.lactofermentum) permiten integrar el gen de la xilanasa, y cualquier otro gen, en el cromosoma de B.lactofermentum, obteniéndose cepas de grado alimentario cuando el segundo proceso de recombinación tiene lugar. El operon melC de Streptomyces glucescens ha sido usado para construir vectores sonda para promotores de corinebacterias, y permite selección promotores fuertes o débiles como promotores que se expresan en distintos momentos del crecimiento de B.lactofermentum. Usando mutagénesis por PCR, hemos conseguido un promotor (Pxysm) que se expresa en B.lactofermentum mientras que el promotor silvestre (Pxys) no se expresaba.

Autor: GÜERRI SANTOS M. LUISA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARAMCIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Estudiando las características de las cepas de Salmonella aisladas en el Hospital Universitario "La Paz" (Madrid) durante los últimos once años concluímos que el serogrupo más frecuente es el D9 (exceptuando el año 1996 en el que predomina el B4), la población más afectada son los niños, y los casos de bacteriemia tienen lugar en pacientes con factores predisponentes (VIH y otras enfermedades debilitantes). Se observa un aumento de la resistencia a antibióticos, especialmente llamativa para los beta-lactámicos y las quinolonas de primera generación. Llama la atención el elevado porcentaje de resistencias a la combinación amoxicilina/clavulánico. El estudio molecular de las cepas revela que la resistencia a ampicilina es consecuencia de la presencia de una beta-lactamasa tipo TEM, se localiza el gen que la codifica en un plásmido conjugativo. La secuencia de dicha enzima descarta que se trate de una IRT. Buscando otras causas que justifiquen el fenotipo de resistencia observado en las cepas, se encuentran otras beta-lactamasas de tipo PSE y OXA y se atribuye la sensibilidad disminuída a la combinación amoxicilina/clavulánico a la presencia de estas enzimas en los aislados junto a las de tipo TEM. Se localizan los genes que las codifican en integrones de localización cromosómica. Se localizan dos de los integrones en la isla genómica I de S.typhimurium y se caracteriza la misma amplificando los genes flanqueados por dichos integrones. El fagotipado de las muestras revela que la mayoría pertenece al fagotipo DT 104 y posee un perfil de resistencias característico.

Autor: RIVAS GONZÁLEZ DEL REY BLANCA DE LAS.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: S.pneumoniae es un importante patógeno humano responsable de entre un 10% y un 25% de los casos de neumonía y el principal agente causal de meningitis y otitis media en niños. Cada año se producen 4 millones de fallecimientos entre la población infantil de menos de 5 años de edad debido a infecciones causadas por este microorganismo. Cuando se comenzó a estudiar el proceso de lisis en neumococo, se descubrió que la amidasa LytA es la principal responsable de la autolisis de tres microorganismo. Asimismo, también se descubrieron una serie de proteínas, pertenecientes a los fagos que infectan neumococo, que también eran capaces de provocar la lisis en este microorganismo. Todas ellas, a escepción de la Cp17. Se poseían dominios de unión a colina; la colina es un aminoalcohol presente en la pared de neumococo y por el que este microorganismo posee un requerimiento nutricional absoluto. Este conjunto de proteínas que poseen dominios de unión a colina conforman la familia de las CBPs. A medida que se ha ido conociendo la secuencia del fenoma de nuemococo, se han ido identificando nuevas CBPs. En este trabajo nos hemos centrado en el estudio de dos nuevas proteínas pertenecientes a esta familia, LytB y Pce. Ambas poseen una organización modular típica de las CBPs, LytB posee 18 motivos de unión a colina en su dominio N-terminal, mientras que Pce posee 10 y están situados en su dominio C-terminal, tal y como ocurre en la mayoría de las CBPs. LytB ha sido identificada como una posible N-acetilglucosaminidasa responsable de la separación de las células hijas de neumococo. Esta enzima posee una localización polar demostrada tras la obtención de una proteína de fusión entre LytB y la proteína fluorescente GFP. Además, LytB representa la primera mureín hidrolasa de neumococo que no es capaz de provocar la lisis de este microorganismo. Por otra parte, Pce ha sido identificada como la primera fosforilcolín enterasa aislada en neumococo, y con la clonación y expresión de su dominio N-terminal se ha demostrado que es en este dominio donde se reside la actividad catalítica

Autor: CARPINTERO FEIJOÓ YOLANDA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El aumento de la prevalencia de las micosis ha determinado que los fármacos antifúngicos se empleen masivamente en diferentes grupos de pacientes. Esto ha producido el desplazamiento de especies sensibles por otras con resistencia intrínseca, primaria o adquirida. Los estudios de sensibilidad in vitro permiten detectar las resistencias y ayudan a elegir mejor alternativa terapéutica. La correlación de estas pruebas con la clínica es reducida, debido a que no han tenido en cuenta variables que influyen en la respuesta al tratamiento como la farmacocinética, aspecto que puede estudiarse con modelos animales. Se estudió el comportamiento cinético de la anfotericina B convencional y liposomal en ratones CD1 adultos no infectados. Asimismo, se desarrolló un modelo de candidosis sistémica en ratones adultos infectados mediante la inoculación intravenosa 10(7) UFC/ml de C.albicans. Observamos que la determinación de las concentraciones plasmáticas de anfotericina B mediante HPLC presentaba una sensibilidad superior a la del bioensayo. Las concentraciones plasmáticas obtenidas tras la administración intravenosa de anfotericina B convencional y liposómica se ajustaron a un modelo bicompartimental. La administración de dosis múltiples de la forma liposomal 1,2 mg/kg producía descensos significativos mayores en las UFC/g de tejido hepático, esplénico y pulmonar, y menores en tejido renal que la forma convencional. El descenso de la IFC/g de tejido muestra una relación significativa con la concentración tisular de anfotericina B, esta relación fue estadísticamente significativa en tejido hepático con ambas formulaciones. En tejido esplénico se encontró mejor correlación con las concentraciones plásmaticas de ambas formulaciones. En tejido pulmonar sólo hubo correlación con las concentraciones del a anfotericina lipídica. En tejido renal hubo una cierta correlación con las concentraciones de la forma convencional, pero no con las de la liposomal. El parámetro PK/PD que mejor se correlaciona con la eficacia fue Cmax/CMl (-0,70, hígado y bazo).

Autor: JARABO LORENZO ADRIANA.
Año: 2002.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y BIOLOGÍA CELULAR.

Resumen: En la tesis se estudia la biodiversidad genotípica y fenotípica de poblaciones rizobianas aisladas de cinco especies de leguminosas arbustivas endémicas de Canarias y de varios géneros de Lupinus y Omithopus de orígenes geográficos muy diversos. La primera parte de la tesis se dedica al estudio taxonómico y filogenético de estos rizobios. La caracterización de los aislados mediante análisis de polimorfismo de los fragmentos de restricción y la secuenciación del gen de ARN ribosomal 16S incluyeron a todos los aislados en el género Bradyrhizobium dentro del linaje Bradyrhizobium japonicum-Rhodopseudomonas palustris. La filogenia del ARNr 16S resolvió tres grupos diferentes de aislados: el denominado grupo BGA1 resultó muy próximo a la especie B.japonicum, de manera que los aislados de este grupo podrían pertenecer a esta especie; el grupo BTA1 contiene a la mayoría de los aislados (el 60%) y éste y otros análisis apuntan que este grupo puede representar una nueva especie para el género Bradyrhizobium; por último, el grupo BES5 presentó también características que los diferencian de las otras especies del género y, a la espera de una mayor caracterización, podría representar también una nueva especie. Estas propuestas se vieron apoyadas por un análisis de perfiles electroforéticos de los ARNs de bajo peso molecular (ARNr 5S y ARNts) al resolver básicamente los mismos grupos que los establecidos con el gen ADNr 16S. El análisis de la región intergénica 16S-23S y la estructura del genoma revelada por los perfiles obtenidos a partir de oligonucleótidos de secuencias. ERIC mostraron una alta diversidad dentro de cada grupo 16S, sin encontrarse en general correlación entre los distintos análisis. La región intergénica mostró cierta correlación con la planta hospedadora, diferenciando cada uno de los grupos 16S en dos subgrupos en función de un tipo de planta. La filogenia de la región simbiótica con el gen nodC puso de manifiesto que todos los aislados, independientemente de su genotipo 16S, formaron un grupo coherente con valor de bootstrap del 100%, lo que indica el origen monofilético de este gen y posiblemente de toda la región simbiótica. El hecho de que los aislados de las cinco especies de leguminosas arbustivas de Canarias y los aislados de Lupinus pertenezcan a la misma tribu de leguminosas, Genisteae, podría ser la explicación. Este análisis además está en concordancia con las propiedades infectivas encontradas, así todos los aislados de las leguminosas genistoides formaron un grupo de inoculación cruzada. En la segunda parte del trabajo se realiza una caracterización en los aislados de la capacidad de sintetizar y catabolizar el ácido indol 3 acético y el estudio de la o las vías catabólicas que están presentes en estas bacterias. Las cepas ensayadas producen cantidades muy distintas de la hormona cuando se suplementan los medios con triptófano, estas diferencias pueden ser significativas en el proceso simbiótico dado que el papel principal de las fitohormonas y en concreto del ácido indol-3-acético en el crecimiento vegetal. En cuanto al catabolismo es una actividad mucho más restringida ya que sólo pudo ser detectada en las cepas ensayadas de B.japonicum y en 27 cepas de aislados, de éstos únicamente 5 aislados pudieron crecer con la auxina como única fuente de carbono. La capacidad de crecer con ácido indol-3-acético como única fuente de carbono podría representar en estas cepas una ventaja competitiva para estos rizobios. La caracterización, por HPLC, de la ruta catabólica del ácido indol-3-acético en estas bacterias mostró que todas ellas presentan la misma ruta descrita para la cepa de Bradyrhizobium japonicum USDA110 en la que el AIA se transforma en dioxindol-3-acético, dioxindol, isatina e isatínico y este último forma el compuesto final de la vía el ácido antranílico.

Autor: ALKORTA GURRUTXAGA MIRIAM.
Año: 2002.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UPV.

Resumen: Se desarrolló un modelo experimental de sepsis en ratón inmunocompetente para estudiar la actividad de varios antibióticos betalactámicos y quinolonas orales (amoxicilina, cefuroxima, cefpodoxima, cefaclor, levofloxacino, moxofloxacino y gemifoxacino) frente a distintas cepas de S.pneumoniae (SP). Las cepas estudiadas fueron: sensible a penicilina; resistente parcial la penicilina; resistente a penicilina; resistente a pinicilina+amoxicilina; sensible a ciprofloxacino; y dos cepas resistentes a ciprofloxacino. Los ratones fueron inoculados intraperitonealmente con la Dosis Letal Mínima (mínima dosis de microorganismo con la que moría 100% de los ratones inoculados en un plazo máximo de 7 días). Para provocar la infección, debido a que las cepas de neumococo no eran virulentas para el ratón se utilizó Adyuvante de Freund para el estudio de los beta-lactámicos y Mucina para el de las fluoroquinolonas. Tras provocar la infección se administraron los antibióticos por vía oral con el fin de calcular la Dosis Protectiva (dosis de antibiótico con la que sobrevivía el 100% de los ratones infectados en un plazo de 15 días). Los estudios "in vivo" se complementaron calculando los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos para las Dosis Protectivas en suero de ratón. Todas las cepas de SP fueron también estudiadas "in vitro": CMI, CMB y curvas de letalidad. Los antibióticos beta-lactámicos se estudiaron también "ex vivo" calculando la Actividad Inhibitoria y Bactericida del suero de voluntarios sanos y de ratones que previamente habían tomado los antibióticos a estudio. En el grupo de los beta-lactámicos, amoxicilina resultó el más activo en todos los estudios ("in vitro", "in vivo" y "ex vivo") seguido de cefpodoxima y por último cefuroxima. Cefaclor se excluyó tras los malos resultados obtenidos en las fases iniciales del estudio. Todos los antibióticos resultaron activos con la cepa sensible a penicilina. Con las quinolonas, gemifloxacino resultó la más activa, seguida de moxifloxacino y por útlino de levofloxacino. Los parámetros farmacodinámicos (con este criterio de 100% de supervivencia) no siempres pueron buenos predictores de eficacia.

Autor: MONREAL AZCÁRATE DANIEL.
Año: 2002.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: Se obtuvieron mutantes rugosos de Brucella abortus mediante inserción de un transposón en dos genes de la región wbk (wbkA [glicosiltransferasa putativa, anteriormente denominada rfbU] y per [perosamina sintetasa]), en manB (pmm [fosfomanomutasa, anteriormente llamda rfbK]) y en un gen no asignado. En consonancia con los datos genéticos, el análisis electroforético, la cuantificación del ácido 2-ceto-3-manno-D-octulosónico y los inmunoblots con anticuerpos monoclonales frente a la cadena O y frente a los epítopos externo e interno del núcleo del lipopolisacárido (LPS) mostraron que los mutantes wbk no expresaban cadena O y no presentaban defectos en el núcleo del LPS. El núcleo del LPS del mutante manB carecía del epítopo externo, y dicho gen fue denominado manB núcleo para distinguirlo del gen manB O-Ag' perteneciente a la región wbk. El cuarto gen (provisionalmente denominado wa**) codificaba una glicosiltransferasa putativa implicada en la síntesis del núcleo interno del LPS, pero el mutante conservaba el núcleo externo. El análisis de la sensibilidad a fagos y a polimixina, la exposición o expresión de los epítopos de proteínas de membrana externa, núcleo del LPS y lípido A, el grado de acilación del lípido A, la sensibilidad al sistema del complemento, el potencial zeta y la hidrofobicidad de superficie mostraron diferencias significativas en la topología de la membrana externa y en las propiedades generales de los mutantes. En el modelo murino, los mutantes presentaron diferentes grados de atenuación e indujeron producción de anticuerpos frente a LPS de tipo rugoso y frente a proteínas de membrana externa. Los mutantes deficientes en el núcleo de LPS y la cepa RB51 no resultaron vacunas efectivas frente a B.abortus en el modelo murino. Los mutante per y wbkA indujeron protección, pero menos que la cepa vacunal lisa S19, y los controles sugerían que en estas diferencias influían grandemente los anticuerpos anti-cadena O. Los mutantes defectivos en el núcleo del LPS no resultaron vacunas efectivas en el modelo murino frente a B.ovis, mientras que los mutantes wbkA y per y la cepa RB51 confirieron niveles de protección semejantes a los de la cepa S19. Estos resultados sugieren que las vacunas rugosas de Brucella deberían poseer el núcleo del LPS completo para alcanzar su máxia eficacia.

Autor: RODRÍGUEZ MOREJÓN KENDRA CATALINA.
Año: 2002.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: La taxonomía de los géneros Achaetomium y Chaetomium esta basada fundamentalmente en criterios morfológicos (Chowdhery, 1980; von Arx et al., 1984; von Arx, 1985; Cannon, 1986, von Arx et al., 1988); (Chivers, 1915; Ames, 1963; Seth 1970, Dreyfuss, 1976; von Arx et al., (1986). Según el sistema de clasificación más reciente para los miembros de la división Ascomycota (Erickson 2002), dichos géneros se encuentran ubicados en el orden Sordarial, familia Chaetomiaceae, reconociéndose para el primero tres especies y 105 para el segundo. Las especies del género Chaetomium tienen una distribución cosmopolitan, y debido a su propiedad celulolítica desarrollan sobre papel, cartón, tejidos, restos vegetales y semillas almacenadas; también se encuentran sobre estiércol de diferentes aves y mamíferos (vor Arx et al., 1996), en el suelon (Domsch, et al., 1980) y han sido aislados a partir de muestras clínicas (Hoog et al., 2000), muestras de aire (Kumar et al., 1998; Aira y La Serna, 1999; Stchigel et al., 2002), y con menor frecuencia de agua de mar y sedimentos fluviales (Kobayashi et al., 1996; Valenzuela et al., 2001). Las especies del género Achaetomium también presentan una distribución cosmopolita, y aunque mayormente ha sido encontradas en el suelo, pueden estar asociadas al desarrollo de enfermedades en plantas y en el hombre (Cannon, 1986; Abbott et al., 1995). El género Chaetomium se caracteriza por presentar colonias de crecimiento rápido, de color pardo, oliva o gris, de aspecto granular, algodonoso o lanoso, que pueden presentar o no exudados, o producir pigmentos difusibles en diversos medios de cultivo y, que por lo general, carecen de olor. Sus ascomas son ostiolados, generalmente superficiales, globosos, subglobosos, piriformes, ovoides, obovoides, ampliamente elipsoidales o ampuliformes, que pueden presentar o no un cuello largo, usualmente cubiertos de pelos o setas, y se pueden fijar al sustrato mediante hifas especializadas (rizoides). El peridio es membranáceo y puede presentar tres tipos de textura: epidermoidea, angularis o intricata de forma individualizada, o la combinación de dos de ellas. Los ascos se desarrollan en fascículos básales, son usualmente octosporados, unitunicados, evanescentes y presentan un estípe (o pie), son generalmente claviformes, pero también pueden ser fusiformes, obovoides o cilíndricos. Las paráfisis son raramente observables, y desaparecen en una fase temprana del desarrollo. Las ascosporas son unicelulares, prácticamente incoloras cuando son jóvenes, marrón (más común) o gris oliváceo al madurar, más o menos translúcidas, y pueden tener uno o dos poroso germinativos, los que varían de posición según la especie. Las ascosporas de este género no presentan capa mucosa, apéndices u otras ornamentaciones, y se liberan de manera pasiva, en forma de masas negruzcas amorfas,o en forma de cirros. La mayoría de las especies de Chaetomium no presentan anamorfos. Las especies del género Achaetomium se caracterizan por presentar colonias de crecimiento rápido, de color amarillento debido a la pigmentación de los pelos peridiales, con escaso micelio aéreo y con exudado rojizo en algunas de sus especies. Sus ascomas son ostiolados, tomentosos, de globosos a piriformes, su peridio presenta un considerable grosor, generalmente con textura intricata desordenada; sus ascos son mayoritariamente cilíndricos o sub-cilíndricos, unitunicados, tempranamente evanescente; y las ascosporas son pardo oscuras, con un poro germinativo generalmente apical (excepto en la especie tipo), y no presentan apéndices o envolturas mucilaginosas u ornamentación, y al igual que las especies Chaetomium son liberadas hacia el exterior de manera pasiva, en forma de masas negruzcas o de cirros. Algunas especies de Achaetomium presentan estado conidial. La problemática taxonómica que se presenta en ambos géneros puede resumirse en dos puntos fundamentales: 1,- La existencia de grupos de especies morfológicamente relacionadas en Chaetomium, donde la delimitación taxonómica entre ellas es difícil de establecer a través de métodos taxonómicos clásicos. 2,- La existencia de estrechas relaciones morfológicas entre las especies de los géneros Chaetomium y Achaetomium. Estas problemáticas se han agudizado en los últimos años debido a que los trabajos taxonómicos realizados no han incluído estudios moleculares, y los pocos que se han realizado no han esclarecido satisfactoriamente dichos problemas taxonómicos que se presentan. Los objetivos de la presente tesis hans ido los siguientes: 1,- Aislar en cultivo puro e identificar el mayor número de especies de los géneros Achaetomium y Chaetomium, procedentes de distintos sustratos y regiones geográficas, contribuyendo así al conocimiento de su biodiversidad, distribución, taxonomía, y fisiología. 2,- Caracterizar y documentar gráficamente los aislamientos pertenecientes a los géneros Achaetomium y Chaetomium que puedieran ser nuevas especies para la Ciencia. 3,- Esclarecer la posición taxonómica y los límites biológicos de las especies incluidas en los grupos morfológicos "Chaetomium bostrychodes", "Chaetomium globosum " y "Chaetomium indicum" mediante el empleo de técnicas moleculares y características morfológicas. 4,- Clarificar la relación taxonómica de Chaetomium irregulare respecto al género Achaetomium. La aportación de esta tesis a la taxonomía de los géneros Achaetomium y Chaetomium basada en los objetivos anteriormente formulados es la siguiente: Se aislaron especies de Chaetomium a partir de sustratos inusuales, tales como sedimentos fluviales y líquenes. Se describieron e lustraron 3 nuevas especies de Chaetomium para la Ciencia, ellas son: Chaetomium macrostiolatum Stchigel, K.Rodríguez & Guarro, Chaetomium olivicolor K.Rodríguez, Stchigel & Guarro y Chaetomium tarraconensis Stchigel, K.Rodríguez & Guarro. En el estudio molecular se observó que las regione sD1 y D2 del gen 28S rDNA presentaban un elevado grado de conservación, produciendo árboles filogenéticos cuyas ramas presentaban bajo soporte estadístico. Estos resultados indican que la zona escogida deber ser utilizada con cautela en el estudio taxonómico de dichos géneros. En el grupo morfológico "Chaetomium bostrychodes", no se obtuvo una buena correspondencia entre los criterios taxonómicos clásicos empleados en la clasificación y los resultados moleculares obtenidos, proponiéndose además la exclusión de C.quadrangulatum del grupo. Se demostró morfológica, cultural y molecularmente la variabilidad intraespecífica de la especie C.globosum, y fue posible distinguir entre sí los aislamientos de las especies C.globosum, C.elatum y C.spirochaete. El análisis de secuencias de la región ITS fue útil para ratificar la ubicación taxonómica de C.cruentum en el género Chaetomium. Desde el punto de vista morfológico y molecular fue posible diferenciar las especies que conforman el grupo morfológico "Chaetomium indicum", revalidándose además la especie C.dolichortrichum para el género. Se describió e ilustró una nueva especie de Achaetomium para la Ciencia: Achaetomium geophilum K. Rodríguez. Stchigel & Guarro se propone la transferencia de C. Irrgulare al género Achaetomium como una nueva combinación; Achaetomium irregulare (Sörgel) K. Rodríguez.

Autor: GARCÍA GUTIÉRREZ M. TERESA.
Año: 2002.
Universidad: JAEN.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE JAÉN.

Resumen: 1,- Caracterización de la raza. E.faecalis productora de la enterocina EJ97. 2,- Optimización de la producción de enterocina EJ97. 3,- Actividad de la enterocina EJ97 frente al crecimiento y la viabilidad de L.monocytogenes. 4,- Actividad de la enterocina EJ97 frente al crecimiento y la viabilidad de B.coagulans. 5,- Actividad de la enterocina EJ97 frente al crecimiento y la viabilidad de de B.macroides/B.maroccanus.

Autor: GONZALES RIOS LITTMAN.
Año: 2001.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: EN LA TESIS SE DA CUENTA DE UN NUEVO HONGO, CON CAPACIDAD PARA DEGRADAR LIGNINAS, QUE FUE AISLADO DE MUESTRAS DE SUELO DE LA AMAZONIA PERVANA. SU SISTEMA LIGNINOLITICO ESTA CONFORMADO POR UNA ACTIVIDAD LACASA ASOCIADA O NO AL MICELIO, UN SISTEMA REDUCTOR ASOCIADA AL MICELIO Y UNA SUSTANCIA DE BAJO PASO MOLECULAR QUE LIGA Fe2+. LOS TRES COMPONENTES DEL SISTEMA LIGMINOLITICO DEL HONGO (PETRIELLIDIUM FUSOIDEUM) COOPERAN EN PRESENCIA DE UN AGENTE REDUCTOR COMO LA HIDROQUINOMA, NADH O ACIDO ASCORBIDO, RINDIENDO ESPECIES ACTIVAS DE OXIGENO COMO EL RADICAL ANION SUPEROXIDO (O2), EL PEROXIDO DE HIDROGENO (H2O2) Y FINALMENTE EL RADICAL HIDROXILO (OH). ESTE ULTIMO POR SU ELEVADO POTENCIAL REDOX LLEVA A CABO LA FRAGMENTACION DE LA LIGNINA FACILITANDO ASI SU INCORPORACION Y SUBSIGUIENTE MINERALIZACION A CO2.

Autor: RÍOS ALONSO LAURA DEL.
Año: 2001.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: En el presente trabajo se han estudiado los diferentes mecanismos inmunitarios que caracterizan la respuesta contra Chlamydophila abortus, una bacteria intracelular obligada que causa el aborto enzoótico en los pequeños rumiantes.Para ello se ha comparado la respuesta inmune que desarrollan dos líneas consanguíneas de ratones que presentan distinta susceptibildiad frente a la infección por C. Abortus y posteriormente, se han evaluado los mecanismso inmunitarios presentes en la respuesta contra tres cepas de Chlamydohila di distinta virulencia. Con estos estudios descriptivos se ha comprado que la respuesta contra C. Abortus se caracteriza por la producción de citokinas Th1, como la IL-12 y el IFN-gamma. Por otro lado, se demuestra que la resistencia a la infección está asociada con una mayor presencia de linfocitos CD8+ y PMN y con la producción de TNF-alpha en las primeras fases de la infección. Una vez demostrado el establecimiento de la respuesta Th1, se ha realizado un estudio funcional de las principales citokinas relacionadas con esta respuesta durante la infección con C. Abortus. Así, se estudió en primer lugar la inmunidad desarrollada por ratones genéticamente deficientes en IL-12, y posteriormente, se neutralizo el IFN-gamma circulante en estos animales, para establecer el papel que desempeñan estas citokinas durante la infección.Los resultados obtenidos nos indican que la IL-12 tiene u npapel limitado durante la resolución de la infección, aunque su ausencia determinó un retraso en la eliminación de la bacteria y además, se comprobó que esta citolina no es necesaria para el establecimiento de una respuesta de memoria durante la reinfección. Por otro lado, se demostró que la IL-12 participa, en cierta forma, en la patología asociada a la respuesta inflamatoria que se desarrolla durante la infección. Por último, se observó que el bajo nivel de IFN-gamma que se produce de forma independiete a la IL-12 en los animales deficientes resulta sufiente e imprescindible para el desarrollo de una imunidad protectora contra la infección. Una vez realizada el estudio funcional de las citokinas relacionadas con la respuesta celular, se evaluó la importancia de la respuesta humoral en nuestro modelo de infección, para lo que se utilizaron ratones deficientes en linfocitos B. Con este experimento se demostró que estas células son esenciales durante las primeras fases de la infección primaria, aunque su papel es limitado en el desarrollo de la respuesta inmune adquirida, por lo que su función no está relacionada con la capacidad de producir anticuerpos. Por último, se estableció un modelo de coinfección con el parásito Nippostrongylus brasiliensis para estudiar cómo interfiere la indución previa de una respuesta Th2 en el desarrollo de la respuesta Th1 durante la ifnección por C.abortus.En esta experiencia se observó que la coinfección no interfiere en la producción de IFN-gamma durante las primeras fases de la infección, pero sí inhibe la producción posterior del mismo, lo que determina un retraso en la eliminación de la bacteria, que en última instancia desencadena el aborto en los ratones gestantes.

Autor: GALAN MONTEMAYOR JUAN CARLOS.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El presente trabajo de Tesis ha permitido el descubrimiento de dos importantes hechos de gran relevancia, en campos tan distantes como la quimioterapia de las infecciones, la genética molecular de los mecanismos de resistencia a los antimicrobianos y la biología y evolución de los elementos genéticos capaces de transferencia horizontal, abriendo perspectivas de gran interés sobre la importancia ecológica y evolutiva de microorganismos probablemente ancestrales. Se ha descubierto la primera beta-lactamasa presente en cocos anaerobios y puede sugerirse que se trata de un enzima muy primitivo, en correspondencia con los hallazgos que también sugieren una gran antigüedad para el microorganismo-huésped A.fermentan. El hallazgo que haya sido clasificada como beta-lactamasa 2be (espectro-extendido) le da un particular interés. Además se ha descubierto que dicha beta-lactamasa se encuentra codificada en un novedoso elemento genético de doble recombinasa, muy probablemente adquirido por transferencia horizontal y también probablemente de gran antigüedad, lo que abre un nuevo campo, cuyo interés puede dimensionarse en el hecho de que el único elemento conocido con un sistema de dobel recombinsa es el implicado en la resistencia a la meticilina en S. Aureus.

Autor: RUEDA GONZÁLEZ SONSOLES.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FARMACIA.

Resumen: La división celular es una etapa crucial en el ciclo celular de Escherichia coli, que tiene lugar con diferente frecuencia dependiendo del medio en el que vive. Comienza con el ensamblaje de un elemento estructural en el sitio de división conocido como anillo Z que actúa posiblemente como anclaje para las demás proteínas de división. La formación del anillo es compleja y se ha comprobado en esta tesis que durante la replicación del cromosoma aparece en el lugar de la división una estructura denominada anillo abierto, posteriormente este anillo se convierte en un anillo cerrado que se mantiene hasta la separación de los cromosomas, uno cada polo de la célula. Esta tesis se ha centrado en el estudio de las propiedades de persistencia, constancia y dependencia del anillo Z para determinar cómo actúa la proteína FtsZ en el proceso de la división celular.