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MICROBIOLOGIA, 2

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219 tesis en 11 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11
  • CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE LOS GENES ENG1 Y ENG2 DE CANDIDA ALBICANS .
    Autor: RÍOS SERRANO INMACULADA.
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: MICROBIOLOGÍA II.
    Resumen: La pared celular fúngica es una estrategia rígida que rodea la célula por la parte externa de la membrana plasmática y que es esencial para el mantenimiento de la integridad celular. La biosíntesis y el ensamblaje de los diferentes componentes que integran la misma, presentan un considerable interés desde el punto de vista farmacéutica, ya que la pared es una estructura esencial para las células y dada su ausencia en eucariotas superiores, un conocimiento mas profundo de la misma podría conducir a la identificación de potenciales dianas para el desarrollo de agentes antifúngicos de acción selectiva. En el trabajo de esta tesis doctoral se aborda el estudio de dos genes del hongo patógeno Candida albicans:CaENG1 y CaENG2, que podrían codificar para dos endo-beta-1,3-glucanasas que como tales y dada su elevada similitud con las proteínas homólogas de la levadura Saccharomyces cerevisiae, podrían ejercer su función a nivel de la pared celular. La eliminación individual de cada uno de estos genes y en combinación con otras glucanasas, ha permitido obtener diferentes mutantes: eng1, eng1, eng2, eng1 xog1 eng2 xog1 que han constituido la base del trabajo experimental de esta tesis. En primer lugar, ni la capacidad de crecimiento de estas estirpes mutantes, ni la capacidad de realizar la transición morfológica característica de Candida albicans, se ven afectada por la deleción de estos genes respecto de las cepas parentales empleadas como controles. El estudio de la virulencia en un modelo murino de infección sistémica, no ha permitido observar diferencias significativas entre el comportamiento de estas cepas y las parentales. También se han analizado diversos parámetros celulares que no se ven afectados en gran medida. Se pude observar una cierta alteración respecto a la sensibilidad a compuestos que afectan la síntesis correcta o el ensamblaje adecuado de los diferentes componentes estructurales de la pared celular.
  • TIPIFICACIÓN MOLECULAR, PERFIL DE SENSIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS Y CARACTERIZACIÓN DE LOS QRDR DE LAS TOPOISOMERASAS II Y IV EN STENOTROPHOMONAS MALTOPHILIA .
    Autor: VALDEZATE RAMOS SYLVIA .
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: El estudio de la epidemiología de la infección/colonización de Stenotrophomonas maltophilia en pacientes con fibrosis quística (FQ) indicó que durante el período 91-98 la incidencia y prevalencia anual fluctuó entre el 2,9-8,8% y el 3,3-15,9%, respectivamente. La tipificación de los aislamientos mediante electroforesis en campo pulsado (PFGE) mostraron valores de incidencia clonal anual que oscilaron el 3,3-16,3%, resaltando la ausencia de una tendencia clara al aumento de estos pacientes. En 24% de los pacientes en los que se aisló S.maltophilia se evidenciaron dos situaciones: 14 pacientes (56%) presentaron un único cultivo positivo y 11 (44%) presentaron episodios repetidos, diferenciándose un patrón de persistencia de uno o dos clones en 5 y 1 paciente, respectivamente, y un patrón de variabilidad de diferentes clones en 5 pacientes. La adquisición nosocomial de S.maltophilia en los pacientes hospitalizados no-FQ se realizó de formas independiente, observándose una gran heterogeneidad en los perfiles genómicos, sin encontrarse agrupaciones clonales en función del tipo de muestra, tipo de infección o el servicio clínico de procedencia del paciente. Los antimicrobianos con un menor porcentaje de resistencia en los aislamientos de los dos grupos de pacientes (FQ y no-FQ) fueron la minociclina (0%), y doxiciclina (0-1%), las nuevas quinolonas (
  • CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE RESIDUOS POLIMÓRFICOS DEL ANTÍGENO DE HISTOCOMPATIBILIDAD HLA-DP .
    Autor: DÍAZ GIL M. GEMA.
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA (UCM).
    Resumen: El Complejo Principal de Histocompatibilidad humano (HLA) agrupa a un amplio número de genes que están implicados en la respuesta inmunitaria. En este grupo de genes se incluyen las moléculas de clase II (HLA-DP, DQ y DR), que unen péptidos antigénicos, presentándolos para que sean reconocidos por linfocitos T CD4+. Una de las principales características de las moléculas de clase II es su elevado polimorfismo. La cristalización de las moléculas HLA-DR y HLA-DQ ha supuesto un importante avance para determinar la importancia de polimorfismo en su ficción. Sin embargo, es muy poca la información disponible sobre la implificación de HLA-DP en la respuesta inmune, debido principalmente a la falta de una estructura cristalina y los escasos análisis funcionales realizados en esta molécula. El objetivo de este trabajo ha sido caracterizar el papel del polimorfismo de la cadena beta de HLA-DP en la funcionalidad de esta molécula. Para ello, se generaron, mediante mutagénesis dirigida, alelos mutantes de DPB1*02012 sustituyendo los aminoácidos presentes en las posiciones polimórficas de dicho alelo por los aminoácidos presentes en esas mismas posiciones en otros alelos de HLA-DP. La LCL 45.EM1, una línea celular linfoblastoide B, que expresa niveles normales de mRNA DPA1 pero no es capaz de transcribir DPB1, fue transfectada con el cDNA de DPB1*02012 silvestre o mutado. Estos transfectantes se utilizaron para evaluar la importancia de polimorfismo en la formación de epítopos reconocidos por anticuerpo monoclonales HLA-DP específicos, en la especificidad de unión peptídica de esta molécula y en el reconocimiento mediado por células T. En el presente trabajo, se ha demostrado el papel de cada uno de los residuos de HLA-DP en la funcionalidad de esta molécula, así como su participación concreta en la presentación antigénica y reconocimiento por células T. Además mediante modelización informática se ha obtenido una estructura de la molécula HLA-DP, que ha sido validada experimentalmente, solventado así, el problema que suponía la ausencia de una estructura cristalina de esta molécula.
  • EVALUACIÓN DE MÉTODOS BASADOS EN LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE TIPOS GENÉTICOS Y ESTUDIO DE RESISTENCIA A ANTIMICROBIANOS EN SALMONELLA .
    Autor: SOTO GONZÁLEZ SARA M..
    Año: 2001.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE OVIEDO.
    Resumen: Esta Tesis se centró en optimización y aplicación de técnicas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la diferenciación intraespecie y el estudio de la resistencia a antimicrobianos en Salmonella. Protocolos seleccionados basados en PCR junto con otros métodos de tipificación fueron aplicados a estudios de epidemiología molecular de Salmonella en Asturias y permitieron: 1,- Establecer los tipos genéticos (TG) más frecuentes de los serotipos pandémicos Typhimurium y Enteritidis y su relación con genotipos-R. 2,- Describir por primera vez en Typhimurium plásmidos de virulencia-resistencia asociados a TGs emergentes, y caracterizar plásmidos de resistencia en Enteritidis y Wien. 3,- Establecer los TGs de serotipos poco frecuentes -Ohio, Panama y Wien- implicados en alertas epidemiológicas emitidas en 1998-99.
  • DESARROLLO DE UN MEDIO DE CULTIVO Y DE SONDAS MOLECULARES ESPECÍFICAS PARA BIFIDOBACTERIUM SPP .
    Autor: NEBRA SERRANO YOLANDA.
    Año: 2001.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Bifidobacterium es uno de los géneros predominantes en el intestino humano. De ahí se derivan sus dos principales aplicaciones para el hombre: como componente de productos probioticos y como microorganismo indicador de contaminación fecal. La utilización de las bifidobacterias como probióticos o como indicadores de contaminación fecal presenta una serie de limitaciones relacionadas con su detección y enumeración en las muestras ambientales: falta de un medio de cultivo completamente selectivo, la fisiología anaerobia del género, el estado fisiológicamente dañado de una proporción de las bifidobacterias presentes en muestras ambientales y la falta de un sistema de discriminación entre las especies de origen animal y las especies de origen humano que permita determinar el origen de la contaminación fecal. El objetivo de esta tesis fue tratar de solventar dichos problemas. Para ello, se diseñó un nuevo medio de cultivo para el género Bifidobacterium. El nuevo medio, al que se denominó BFM, presentó un nivel de recuperación de diferentes especies de Bifidobacterium similar a la del medio rico BL medium descrito en la bibliografía como el medio óptimo de recuperación de la bifidobacterias. En cambio, el medio BFM presentó una gran capacidad de selección de las bifidobacterias respecto de otras especies bacterianas no pertenecientes al género Bifidobacterium. La aplicabilidad del nuevo medio se valoró realizando un recuento de las bifidobacterias presentes en una muestra controlada que en este caso correspondía a yogures tipo "BIO". El medio BFM fue capaz de recuperar las bifidobacterias presentes en los yogures inhibiendo el crecimiento de la flora acompañante (lactobacilos y estreptococos). La presencia en las muestras ambientales de oxígeno o de sus derivados puede afectar a la fisiología o al metabolismo de las bacterias presentes en dichas muestras, sobretodo si las bacterias tienen una fisiología anaerobia. Para recuperar a las bifidobacterias fisiológicamente dañadas presentes en muestras de agua se desarrolló un protocolo basado en la adición de agentes reductores para reducir el potencial redox de la muestra. Dicho protocolo es capaz de aumentar ligeramente la recuperación de las bacterias anaerobias de la muestra, así como la de las bifidobacterias. Para descriminar el origen de la contaminación fecal del agua se desarrolló un sistema de detección de especies de Bifidobacterium con un origen exclusivamente humano o con un origen exclusivamente animal basado en la utilización de la técnica de hibridación ADN-ADN mediante sondas específicas. Se diseñaron dos sondas basadas en la secuencia del 16S ADNr. Una de las sondas, BDE, detecta exclusivamente B.dentium, especie que se ha aislado exclusivamente a partir del hombre, mientras que la otra sonda, BAN, detecta un grupo de especies de origen humano. Se diseñó un protocolo de detección de las especies diana de dichas sondas en muestras ambientales. Utilizando dicho protocolo se pudo comprobar la elevada correlación entre la detección de B.dentium y el origen humano de la contaminación fecal.
  • BÚSQUEDA DE PEROXIDASAS LIGNINOLÍTICAS EN PLEUROTUS USANDO KTBA Y DÍMEROS MODELO DE LIGNINA COMO SUBSTRATOS .
    Autor: PARCERIAS SIMOES CARAMELO LUCILIA CRISTINA.
    Año: 2001.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CSIC).
    Resumen: En el presente estudio se seleccionaron dos especies del género Pleurotus, Pleurotus eryngii y Pleurotus pulmonarius. El poder oxidativo de cultivos líquidos y de SSF fue valorado usando el test oxidación del KTBA. Las condiciones de SSF son de particular interés puesto que son semejantes a las encontradas en los hábitats naturales de los basidiomicetos ligninolíticos. Una vez identificadas y purificadas las enzimas capaces de producir etileno a partir de KTBA, se compararon sus propiedades fisicoquímicas. Además, se investigaron sus propiedades catalíticas usando substratos tan diversos como KTBA, compuestos aromáticos fenólicos y no fenólicos, mediadores y Mn2+. La demostración de la capacidad ligninolítica de éstas enzimas se llevó a cabo comprobando la degradación de dímeros modelos, tanto en presencia como ausencia de mediadores. Por último, se estudió la reacción de oxidación del KTBA por radicales libres, enzimas puras como la LiP, e intermediarios como el alcohol veratrílico. De este trabajo se puede por tanto que las especies de Pleurotus producen 3 tipos de peroxidasas que pueden degradar lilgnina pero, sin embargo, no tienen una enzima con las características de una LiP. Éstas enzimas son semejantes en términos de secuencia N-terminal y propiedades catalíticas. Los resultados obtenidos, junto con la información proveniente de los modelos moleculares de las peroxidasas de Pleurotus eryngii, sugieren que se desarrolló una arquitectura molecular híbrida entre la LiP y MnP, que incluye diferentes sitios de interacción con el substrato. La enzima híbrida oxidaría el Mn2+ en la proximidad del propionato interno del hemo, en un sitio formado por 3 aminoácidos acídicos. La oxidación del alcohol veratrílico y otros substratos aromáticos se podría justificar a través de una transferencia electrónica de largo rango.
  • CATABOLISMO DE LA PROLINA EN P.PUTIDA KT2440. CONSTRUCCION DE UN SISTEMA DE CONTENCION BIOLOGICA DEPENDIENTE DE PROLINA.
    Autor: VILCHEZ TORNERO SUSANA.
    Año: 2000.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: ESTACION EXPERIMENTAL DEL ZAIDIN.
    Resumen: En esta tesis se ha estudiado el catabolismo de la prolina en P.putida KT2440. El estudio incluye el aislamiento y secuenciación de los genes putA y putP responsables del catabolismo de la prolina en este organismo, así como el aislamiento y caracterización de mutantes deficientes en la lutilizaciónd e este compuesto. Tras la secuenciación del operón se caracterizó la expresión de los genes implicados en el catabolismo de la prolina en distinas condiciones y fondos genéticos (IHF, sigma 38 y PtsN). Los promotores del operón se utilizaron para la construcción del elemento regulador de un sistema de contención biológica dependiente de prolina., basado en la fusión de los promotores PputA y PputP al gen lacl. Tras la inserciónestable del elemento regulador a trvés de un minitransposón en una cepa de P.putida KT2440, se indtrodujo el elemento matador basado en la fusiónde unpromotor derivado del promotor Plac y el gen suicida (genE) del fago X174, tras la obtención de la cepa suicida se comprobó el correcto funcionamiento del sistema de contención condicionada por la presencia de prolina en el medio.
  • DINÁMICA DE COLONIZACIÓN DE CATÉTERES DE POLIURETANO POR ESPECIES DEL GÉNERO CANDIDA .
    Autor: ABERKANE ZAOUCHE AMEL.
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL.
    Resumen: EN ESTA TESIS SE HA TRATADO DE COMPARAR LA CAPACIDAD DE DISTINTAS LEVADURAS CORRESPONDIENTES A CUATRO ESPECIES DEL GÉNERO CANDIDA PARA LA COLONIZACIÓN DE CATÉTERES DE POLIURETANO. ESTA CAPACIDAD SE DETERMINA A TRAVÉS DE ENSAYOS DE COMPETICIÓN ENTRE PAREJAS DE LEVADURAS CON SIMILAR DENSIDAD EN EL INÓCULO INICIAL, QUE SE REALIZA EN MEDIOS NO ESTRUCTURADOS (MEDIO YEPD), Y ESTRUCTURADOS(INCLUSIÓN DE UN CATÉTER). LOS PARÁMETROS MEDIDOS DURANTE LA COMPETICIÓN INCLUYEN LA ADHESIÓN INICIAL, ADHESIÓN ESPECÍFICA, EXPLOTACIÓN PRECOZ DE SUPERFICIE, CRECIMIENTO SOBRE CATÉTER Y COLONIZACIÓN FINAL. LAS DIFERENCIAS OBSERVADAS ENTRE DISTINTAS ESPECIES DE CANDIDA SON LAS SIGUIENTES:1) C. TROPICALIS POSEE UNA VENTAJA SUBSTANCIAL RESPECTO A C. ALBICANS EN LA COLONIZACIÓN DE CATÉTERES; 2) C. GLABRATA POSEE UNA VENTAJA SUBSTANCIAL RESPECTO A C. ALBICANS EN LA COLONIZACION DE CATÉTERES;3) C. ALBICANS POSEE UNA VENTAJA SOBRE C. PARAPSILOSIS EN LA COLONIZACIÓN DE CATÉTERES, A PESAR DE QUE LA EXPLOTACIÓN INICIAL DE LA SUPERFICIE ES ALGO PERO, Y TAMBIÉN ES MENOR SU CAPACIDAD DE MULTIPLICACIÓN. LOS FENÓMENOS DE ADHESIÓN INCIAL A CATÉTERES(ESTUDIOS EN LAS PRIMERAS CUATRO HORAS) MUESTRAN UN ALTO GRADO DE VARIABILIDAD EN EL TIEMPO, INDICANDO UN PROCESO DINÁMICO DE FIJACIÓN-DESPEGAMIENTO. SIN EMBARGO, EN GENERAL, LOS ESTUDIOS DE ADHESIÓN SE CORRELACIONAN CON LA COLONIZACIÓN POSTERIOR, PARTICULARMENTE EN EL PAR C. ALBICANS/C. GLABRATA.
  • MECANISMOS RESPONSABLES DEL FENOMENO DE LA TOLERANCIA AL LIPOLISACARIDO DE ESCHERICHIA COLI EN MONOCITOS HUMANOS.
    Autor: VAZQUEZ ARAUJO M. BEGOÑA.
    Año: 2000.
    Universidad: NAVARRA.
    Centro de lectura: CIENCIAS .
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA. FAC. CIENCIAS.
    Resumen: La respuesta monocitaria a un estimulo con lipopolisacárido (LPS) es la producción de diferentes tipos de mediadores solubles. Entre ellos, los más caracteristicos son citoquinas proinflamatorias como IL-1B y TNFa. En los procesos de sepsis y shock septico los mediadores que deben estar restringidos al sitio de infección, se encuentran a nivel sistémico, con los alteraciones funcionales que esto implica. En estos pacientes se ha encontrado un estado de tolerancia a LPS, caracterizado por la incapacidad de los monocitos de elaborar una respuesta adecuada ante un estímulo con LPS. En este trabajo se estudia mediante citometría de flujo un modelo de inducción de tolerancia in vitro en el que se observa una disminucion en la producción de TNFa que no se acompaña de descenso de IL-1B. Mediante el marcaje simultáneo de CD14 y citoquinas intracelulares comprobamos que los monocitos en los que se ha inducido tolerancia no presentan una menor expresion de CD14. Asimismo, mediante la adicción de agentes bloqueantes del aparato de Golgi para evitar la liberación de los mediadores inmunosupresores posiblemente implicados, y junto con los datos presentados de tolerancia selectiva, descartamos la implicación, unicamente, de mediadores solubles. El uso de agentes bloqueantes del aparato de Golgi nos permitió regular negativamente la expresión de CD14 de membrana de los monocitos, posibilitando el estudio de la via del CD14 soluble. Comprobamos la funcionalidad de dicha via en monocitos que unen complejos sCD14-LPS mediante la produccion de citoquinas proinflamatorias y la imposibilidad de desarrollar tolerancia a traves de este receptor soluble en el modelo estudiado.
  • IMPLICACIÓN DE LA PROTEÍNA QUINASA PAK SKM1 Y DE LA GTPASA CDC42 EN PROCESOS DE CRECIMIENTO POLARIZADO EN SACCHAROMYCES CEREVISIAE.
    Autor: RODRÍGUEZ PACHÓN JOSÉ M..
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: Las proteínas PAK Ste20 y Cla4 son efectores del aGTPasa Cdc42 implicados en el crecimiento polarizado en Saccharmyces cerevisiae. Skm1, objeto de este estudio, es la tercera proteína PAK de esta levadura. La sobreexpresión de Skm1 y de su dominio quinasa conduce a fenotipos morfológicos similares a los obtenidos por la sobreexpresión de un alelo activado de Cdc42. Ambas proteínas muestra, además, interacción mediante el sistema de "dos híbridos". La sobreexpresión de los dominios quinasas C-terminales de las proteínas PAK conduce a la hiperfosforilación de las MAP quinasas Slt2, Kss1 y Fus3, lo que parece indicar una pérdida en la especificidad de sustrato en estas proteínas cuando se las priva de su extremo N-terminal. Esta fosforilación de la MAP quinasa Slt2 no desaparece al eliminar la señalización a través de la ruta de feromonas, lo que parece indicar un cruce de rutas al nivel de la MAPKKKK. La activación de Cdc42 por eliminación de sus proteínas GAP Rgal1, Rga2 y Bem3 conduce también a la activación de las tres MAP quinasas. El control de la actividad de Slt2 por Cdc42 depende de Ste20 (no de Skm1), Ste7, y las MAP quinasas Fus3 y Kss1. La GTPasa Rhol ejerce un papel modulador sobre la actividad de Slt2, pero los efectos de Cdc42 activo y la sobreexpresión de las proteínas PAK truncadas sobre Slt2 no dependen del Rho1.
  • CARACTERIZACIÓN DE CEPAS AUTÓCTONAS DE BORRELIA, BURGDORFERI SENSU LATO. ANÁLISIS DE FACTORES DE VIRULENCIA.
    Autor: SELLEK CANO RICELA ESPERANZA.
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.
    Resumen: Se han estudiado la patogenicidad de 15 cepas autóctonas de Borrelia burgdorferi sensu lato en el modelo animal en ratones C3H/HeN, habiéndose observado una gran variabilidad. El estudio de los factores de virulencia se ha centrado en la cepa que presentó una mayor virulencia en dicho modelo (cepa PV6 de B. Garinii). Mediante cultivo seriado in vitro, se han modificado las características de virulencia de dicho aislado. Se han caracterizado los pases obtenidos, que han presentado una disminución progresiva de patogenicidad hasta su desaparición concluyendo: Qu en la cepa PV6 de B. Garinii, se produjo una reducción de la habilidad de infectar y causar enfermedad en los ratones con el cultivo seriado in vitro. Fue a partir del pase 6 cuando la cepa perdió la capacidad de migrar por la piel y disminuyó la capacidad de inducir inflamación en la ATT y de producir infección sistémica. Que se observó una correlación entre dotación de flgelos y migración por piel e invasividad. Estas carcterísticas de patogenicidad disminuyen a partir del pase 6, momento en el que la dotación flagelos desciende en un 20%. Que se observó una relación entre presencia del plásmido lp25, que contiene el fen ulsE, y la inducción de inflamación en la ATT. Un 12,5% de los ratones inoculados con el pase 29, sufren inflamación de la ATT, correlacionando con una menor presencia de ulsE. Que se observó mediante Inmunoblot, ELISA, RT-PCR y microscopia electrónica, una clara asociación entre la dotación de flagelos de la cepa PV6 de B. Garinni y la capacidad de ésta de invadir tejidos de hospedador. Que no se observó una relación directa entre la presencia del plásmido lp25 conteniendo el gen ulsE y la infectividad de la cepa PV6 de B.garinii. Sin embargo, si se observó una relación inversa en la intensidad de la banda correspondiente a ésta protéina y el número de pases en cultivo, sugiriendo que en pases altos existe una cierta proproción de clones patógenos pero no lo suficente para producir enfermedad. Que no se ha encontrado una correlación entre el perfil plasmídico o proteíco y patogenicidad y organotropismo. Que en el estudio del nivel de patogenicidad de las cepas autóctonas en el modelo animal de El, se ha observado una gran variabilidad entre éstas, pudiendo ser responsables de los cuadros subclínicos o alterados en humanos. Que se ha demostrado la capacidad de las cepas de B. Burgdorferi, B. Garinii y B. Valaisiana de infectar ratones. Posiblemente las cepas autóctonas de B. Garinii y B. Valaisiana son mantenidas en la naturaleza por ciclos que incluyen vectores y reoedores, al estar disponibles en piel.
  • PIM1, UNA MAP QUINASA DE INTEGRIDAD CELULAR EN PICHIA PASTORIS. UTILIZACIÓN DE LOS MUTANTES PIM1 PARA LA LIBERACIÓN DE PROTEÍNAS HETERÓLOGAS .
    Autor: COSANO MAYA INMACULADA C..
    Año: 2000.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FARMACIA.
    Resumen: La levadura metilotrófica Pichia pastoris ha sido empleada de manera satisfactoria para la expresión de proteínas heterólogas, tanto intracelulares como de secreción.como sistema de expresión es muy similar a Saccharomyces cerevisiae, pero presenta ciertas ventajas, entre ella sunas modificaciones psot-traduccionales más parecidas a las que tienen las células eucriotas superiores. En nuestro laboratorio se ha desarrollado un sistema para la liberación de proteínas heterólogas basado en el empleo de mutantes autolíticos de S. Cerevisiae, remediables osmoticamente, que lisan a latas temperaturas. Estos mutantes son deficientes en el gen SLT2, una MAP quinasa responsable de la integridad celular.Dichos mutantes son capaces de liberar las proteínas intracelulares en ausencia de estabilizador osmótico. Estas proteínas pueden ser separadas fácilmente de los restos celulares por simple centrifugación. Con el objeto de ampliar este sistema a P. Pastoris clonamos el gen homólogo a SLT2 (PIM1) de esta levadura mediante hibridación en colonia, empleando como sonda un fragmento de dicho gen amplificado por PCR, utilizando oligonuclotidos degenerados de zonas conservadas en MAP quinasas. La proteína Pim 1 de P. Pastoris presenta todas las características estructurales de las proteína quinasas, así como las secuencia característica TEY de regulación de MAP quinasas. La interrupción de este gen origina el mismo fenotipo que el que presentna los mutantes slt2 de S. Cerevisiae; autólisis a 37ºC y sensibilidad a caféina, ambos remediables en presencia de un estabilizador osmótico. A pesar de que Pim1 en P. Pastoris se activa en preencia de los mismo estímulos qu eactivan Slt2 de S. Cerevisiae, el gen PIM1 no complementa los defectos utantes slt 2 de cervisiae. Tras su incubación a 37ºC y un posterior choque osmótico, los mutantes pim 1 que expresan la proteína modelo b-lactamasa liberan un 60% de la proteína heteróloga producida. Estos resutlados nos permiten especular sobre un posible uso de los mutantes pim1 para la obtención de proteínas recombinantes a un nivel industrial.
  • GENÉTICA DE LA PROLIFERACIÓN INTRACELULAR DE SALMONELLA ENTERICA EN CÉLULAS EUCARIOTICAS NOFAGOCITICAS .
    Autor: CANO GONZÁLEZ DAVID.
    Año: 2000.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Salmonella enterica es un patógeno intracelular que puede ocasionar gastroenteritis,enfermedad sistemica o ambas en humanos y una gran variedad de animales. La disponibilidad de cultivos celulares del hospedador y la factilidad con la que Salmonella enterica invade alguno de ellos ha permitido el uso de cultivos celulares como modelos in vitro para el estudio de la biología de tres etapas claves en el proceso infectivo. La supervivencia en macrófagos,la invasión de células no fagocíticas y la proliferación intracelular en células no fagocíticas. En esta Tesis se han usado fibroblastos de ratón, NRK, como prototipo de células eucarióticas y se ha recurrido a la Genética bacteriana clásica para identificar funciones de Salmonella enterica que intervienen en la interación con el hospedador mediante la búsqueda de mutantes que proliferasen en el interior de células NRK. De esta manera se ha determinado que Salmonella enterica posee sistemas de autocontrol que impiden la proliferación del patóngeo enlineas celulares no permisivas. La más importante parece ser el sistema Phop-PhoQ aunque también intervienen otros reguladores del virulencia como SlyA, SpvR, RpoS. Además se describe por primera vez una proteína, IgA que también intervien en el control de la proliferación intracelular en células no permisivas y que ejerce este efecto a través del sistema de dos componentes RcsB-RcsC. Esta protéina es también necesaria para la virulencia en el modelo animal del ratón y es una función esencial para la viabilidad de la bacterias como se demustra por el hecho de que es imposible obtener un mutante nulo en el gen igA. En la viabilidad intracelular del patógeno participan el fectos sigma RpoE y el sistema de secreción de tipo III codificado en la isal 2 de patogenicidad de Salmonella entérica. La permanencia prolongada de Salmonella enterica en elinterior de células no permisivas requiere una adaptación al metabolismo anaeróbico como se demustra por el hecho que una persistencia prolongada en el interior de células NRK seleccione mutantes carentes de funciones relacionadas con el metabolismo oxidativo como Lpd, HemL, AroD.
  • INFLUENCIA DE LA RADIACION LUMINOSA SOBRE LAS BACTERIAS AUTOCTONAS Y ALOCTONAS DE LOS SISTEMAS ACUATICOS .
    Autor: GARCIA BRINGAS JUAN MANUEL.
    Año: 2000.
    Universidad: PAIS VASCO.
    Centro de lectura: CIENCIAS .
    Centro de realización: FACULTAD CIENCIAS.
    Resumen: Los objetivos especificos planteados en este trabajo son: 1. Evaluar el efecto de la radiacion solar sobre las poblaciones de E.coli presentes en los sistemas acuaticos, ponderando la importancia relativa de los tres componentes del espectro: UV-B (280 a 320 nm), UV-A (320 a 400 nm) y visible (400 nm). 2. Conocer los mecanismos implicados en los procesos de fotoinactivacion atribuibles a los componentes visible, UV-A y UV-B del espectro solar. Valorar la participación de sensibilizadores endógenos, sensibilizadores exógenos y oxigeno molecular en los procesos de fotoinactivación. 3. Conocer el papel desempeñado por las sustancias humicas, disueltas en los sistemas acuaticos, en los procesos de fotoinactivacion que experimentan las bacterias expuestas a radiacion solar. 4. Conocer la respuesta a la radiación solar en distintos tipos bacterianos. Valorar las consecuencias biologicas derivadas de un aumento en la radiación solar. Las conclusiones más importante deducidas son: El efecto de la radiación solar en E.coli se traduce en un escenso progresivo de las funciones metabolicas, originando celulas en estado activo no cultivable, si bien la exposicion selectiva a radiacion UV-A no induce la formación de estas celulas. Las lesiones producidas por cualquier de tres componentes del espectrosolar se originan sin la medicion del oxigeno molecular. Estas lesiones seran tanto mas graves cuanto menor sea le contenido de sustancias humidicas en el medio acuoso, dada su capacidad de absorción de la radiación solar. La sensibilidad frente a la radiacion solar es una caracteristica de cada tipo bacteriano, por lo que un incremento de la radiación solar incidente en la superficie terrestre procaría cambios la dinamica de las poblaciones microbianas en los medios acuaticos, afectando tanto a la densidad como a la composicion de morfotipos dominantes.
  • BASES PER A LA FORMULACIO DE L´AGENT DE BIOCONTROL CANDIDA SAKE CPA-1 .
    Autor: ABADIAS SERO M. ISABEL.
    Año: 2000.
    Universidad: LLEIDA.
    Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
    Centro de realización: UNIVERSITAT DE LLEIDA.
    Resumen: El control de las enfermedades en postcosecha de fruta mediante el uso de microorganismos antagonicos se ha presentado como la alternativa mas prometedora a los productos quimicos de sintesis. La cepa CPA-1 de la levadura Candida sake, aislada en el laboratorio de Patologia del Centro UdL-IRTA ha demostrado ser un excelente agente de biocontrol frente a los principales patogenos de postcosecha de fruta de pepita. Hasta el momento se ha patentado en España y cinco paises más. Sin embargo, para su aplicación a nivel comercial, es necesario formular este agente de biocontrol, con la finalidad de presentar el producto y facilitar su aplicación y distribucion. Este producto formulado ha de tener una viabilidad alta, ser estable en el tiempo y tener una eficacia comparable a la de las celulas frescas. Ademas, su aplicación deberia ser mediante la tecnologia y existente. En esta tesis se estudian aspectos fundamentales y aplicados con la finalidad de obtener formulaciones efectivas de C.sake, necesarias para su aplicación comercial. En primer lugar se estudio la posibilidad de deshidratar este agente de biocontrol mediante liofilizacion, estudiando distintos factores que pueden afectar en la viabilidad. Mediante la combinacion de distintos factores, se obtuvieron viabilidades de hasta un 85%. Las celulas deshidratadas fueron efectivas en el control de Penicillium expansum en manzanas "Golden Delicious", pero en menor grado que las celulas frescas. En segundo lugar se estudio el efecto que tiene la modificacion de la actividad de agua de un medio de cultivo a base de melaza en el potencial hidrico de las celulas de c.sake, en su crecimiento, en la acumulación de reservas endogenas y en la resistecia al estrés hidrico. Finalmente, estos estudios sirvieron de base para preparar formulaciones liquidas del agente de biocontrol conservando las celulas en soluciones isotonicas. Se consiguió una formulacion isotonica, que despues de siete meses de conservacion a 4º C, mantuvo su viabilidad y efectividad contra P.expansum en manzanas "Golden Delicius". Cinco de los capitulos de esta tesis han sido redactados en ingles para optar a la acreditacion de Doctorado Europeo en la UdL.
  • CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE MOLÉCULAS DE MEMBRANA EXTERNA DE AEROMONAS IMPLICADAS EN LA VIRULENCIA .
    Autor: NOGUERAS MAS MERCEDES.
    Año: 2000.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FAC. BIOLOGÍA.
    Resumen: En esta tesis doctoral se realiza la caracterización genética de dos moléculas de la membrana externa de Aeromonas. En la primera sección se investiga la implicación de la porina en la activación del complemento. Para ello se realiza un estudio comparativo en las tes especies de Aeromonas de mayor importancia: Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii sabria, Aeromonas salmonicida. Una vez demostrada la implicación de esta porina en este fernómeno se procede a su clonaje, secuenciación y mutagénesis. En la segunda sección se estudia la regulación por temperatura de I lipopolisacárido de Aeromonas hydrophila, descrito como un importante factor de virulencia. Para caracterizar mutagénesis mediante el transposón miniTn5. De este modo, se detecta un sistema de regulación de dos componentes que también estará implicado en la regulación de la actividad proteásica.
  • EFLUJO, UN POSIBLE MECANISMO DE RESISTENCIA EN MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS .
    Autor: ALMEIDA DA SILVA PEDRO EDUARDO.
    Año: 2000.
    Universidad: ZARAGOZA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: La tuberculosis es una de las enfermedades infecciosas más antiguas que se conocen destacándose por su alta tasa de mortalidad a lo largo de los tiempos. Su presencia entre la humanidad siempre ha cobrado un alto precio, tanto desde el punto de vista sanitario como del económico. Se estima que un tercio de la población mundial está infectada con Mycobacterium tuberculosis y que 5 a 10% de estas personas desarrollarán la enfermedad durante su vida. Actualmente se estima que cerca de 8,4 millones de personas desarrollan tuberculosis al año, mientras 2 millones mueren por causa de la enfermedad. Uno de los métodos más eficaces para el control de las enfermedades infecciosas en general, y la tuberculosis en particular, es la detección de casos bacilíferos y la correcta aplicación de la terapia, cuyo tratamiento convencional es una combinación de fármacos suministrados por un período de seis a nueve meses. No obstante, esta solución sencilla tiene ahora su eficacia comprometida por el crecimiento de infecciones causadas por cepas resistentes antituberculosos. El estudio de las bases moleculares de la resistencia puede mejorar la eficacia de la terapia actual y aportar conocimiento para el desarrollo de nuevos fármacos que puedan superar los mecanismos de resistencia conocido, o la posibilidad de usar adyuvantes que puedan aumentar la actividad de los fármacos actuales, inhibiendo o atenuando algunos de esos mecanismos de resistencia. Este estudio tiene como propuesta principal presentar una contribución al conocimiento de los sistemas de eflujo de antibióticos como posible mecanismo de resistencia en M.tuberculosis. En el presente trabajo caracterizase dos locus presentes en el genoma del M.tuberculosis que codifican proteínas transportadoras con características de bombas de flujo. Son identificados su ubicuidad en el género Mycobacterium, mecanísmo de acción, niveles de expresión, su rango de substratos e los niveles de resistencia conferidos.
  • INVASION CELULAR E INDUCCION DE APOPTOSIS POR LISTERIA MONOCYTOGENES.
    Autor: PARRA CABALLERO M. CONSUELO.
    Año: 1999.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: HOSPITAL RAMON Y CAJAL.
    Resumen: Listeria monocytogenes es un cocobacilo Gram+, intracelular facultativo capaz de causar graves afecciones en individuos inmunosuprimidos, mujeres embarazadas y neonatos, luego de la ingesta de alimentos contaminados con este microorganismo. El primer sitio invadido por L. Monocytogenes es el intestino. Dependiendo de la respuesta inmune del huésped Listeria puede llegar y diseminarse por via sanguinea o linfatica a organos tan importantes como el hígado, bazo, cerebro y atravesar la placenta, produciendo graves afecciones tales como meningitis, encefalitis y abortos. El objetivo de esta tesis doctoral fue hacer estudios de invasión y multiplicación de la Listeria en líneas celulares que representan estos organos diana. Para ello utilizamos hepatocitos Hep-G2, células intestinales Caco-2, neuroblastomas N2A y neuronas adultas extraidas de los ganglios de raiz dorsal. Ensayando a su vez 4 cepas de L. Monocytogenes importantes por su capacidad para producir altas unidades de hemolisina (Listeriolisina O), mayor factor de virulencia de L.monocytogenes. Las 4 cepas escogidas (LO28, EGD-A, P14 y P14-A) presentaron niveles altos de invasión y citotoxicidad en los tres huespedes infectados, encontrando que en neuroblastomas N2A no solo tiene la capacidad de invadir el citoplasma celular sino también el núcleo. La mayor citotoxicidad producida sobretodo por las cepas EGD-A y P14-A, produjeron muerte celular por apoptosis en altos porcentajes en las tres líneas celulares usadas siendo menor en infecciones hechas con la cepa LO28 y P14, resultado demostrado morfológica, bioquímica y molecularmente. Concluyendo que la principal arma que usa este patogeno en la inducción de dicha muerte celular es la Listeriolisina O. Por otro lado L. Monocytogenes cepa P14-A tuvo la capacidad de penetrar a las neuronas adultas extraidas de ganglios de raiz dorsal a las 2 horas de infección, resultado confirmado mediante microscopia confocal.
  • METODOS MOLECULARES DE ESTUDIO DE LAS POBLACIONES DE PSEUDOMONAS STUTZERI.
    Autor: GUASP MASCARO CATERINA M..
    Año: 1999.
    Universidad: ISLAS BALEARES.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: UNIVERSITAT ILLES BALEARS.
    Resumen: Pseudomonas Stutzari es un microorganismo común en diveros hábitats y ha recibido una especial atención debido a sus especiales capacidades metabólicas como degradador de compuestos aromáticos (Garcia-Valdés et al.,1988). Se han diseñado métodos moleculares que permiten la identificaión y el seguimiento de P. Stutzari en muestras naturales. La identificaión de P. Stutzaeri se consiguió utilizando cebadores específicos para amplificar el gen rDNA 16S seguido por el análisis RFLP ("restrction frament length polymorphism") al tratar los productos de PCR con la endonucleasa BamHI. Por otra parte, se han utilizado métodos molecualres de tipado basados en la amplificaicón por PCR con cebadores para secuencias consenso derivadas de regiones invertidas repetidas palindrómicas altamente conservadas encontradas en enterobacterias (ERIC). Finalmente, se ha utilizado un método de Western Blot y "fingerprinting" inmunológico para la diferenciación de las cepas de P. Stutzeri. La asignación de las cepas a una genomovar determinada se ha conseguido de una manera rápida y fácil mediante amplifiación por PCR de las regiones espaciadoras intrgénicas 16S-23S rDNA (ISR) y su poserior análisis por RFLP tras la digestión con el enzima de restricción TaqI. Además, se han secuenciado estas regiones y, después de su análisis, se ha comprobado que los grupos obtenidos conciden perfectamente con cada una de las genomovares de P. Stutzeri. Se han utilizado las técnicas de ecología microbiana molecular para hacer un seguimiento de la cepa degradadora de naftaleno AN10 en la biorremediación en un modelo experimental de microcosmos de sedimiento marino contaminados con salcilato, naftaleno o queroseno JetA1. Para ello se ha utilizado el análisis por DGGE de dos genes, el rRNA 16S y el gen catabólico nhAC, involucrado en la oxidación inicial del naftaleno a 1,2 dihidroxinaftaleno.
  • ESTUDIO DE LA REGULACION TRANSCRIPCIONAL Y POSTRADUCCIONAL DE LA EXPRESION DE HLA-DP .
    Autor: COIRAS LOPEZ M. TERESA.
    Año: 1999.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: DPTO: MICROBIOLOGIA II (FACULTAD DE FARMACIA).
    Resumen: Esta tesis está basada en el estudio de la regulación transcripcional y postraduccional de la expresión de las moléculas de clase II HLA-DP. Para ello se han utilizado unas líneas celulares linfoblastoides mutantes, obtenidas en nuestro laboratorio mediante mutagénesis. Estas líneas celulares expresan en superficie los isotipos de clase II HLA-DR y DQ, pero no expresan HLA-DP, aunque poseen los genes necesarios para la expresión del alelo DPw2 (DPA1*0103;DPB1*02012). El presente trabajo se ha basdo en las caracterización de estas líneas para determinar cuál es el defecto molecular que presentan. Para ello se han llevado a cabo experimentos de RT-PCR para definir la cantidad de tránscritos de los genes DPA1 y DPB1 que presentan estas líneas en el citoplasma. En función de los resultados obtenidos se handividio estas líneas en varios grupos; líneas mutantes transcripcionales, líneas mutantes no transcripcionales. El primer grupo incluye aquella slíneas que careceno presentan pequeñas cantidades de tránscritos de DPA1 y/o DPB1, mientras que el segundo grupo incluye una líneas afectada en la estructura del ORF del gen DPA1*0103 y otra línea que posee una alteración en la ruta de procesamiento de estas moléculas HLA-DP. Mediante el estudio de estas líneas mutantes se han intentado dilucidar los mecanismos específicos de regulación de la expresiónde HLA-DP, tanto a nivel de factores transcripcionales como de secuencias promotoras específicas de la expresión de estos genes.
219 tesis en 11 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11
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