ANTIBIOTICOS

Autor: DONAT LUIS MARÍA VICTORIA.
Año: 2004.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: Dep. Biotecnologia .
Centro de realización: Universidad Politécnica de Valencia.

Resumen: El fuego bacteriano de las rosáceos es una enfermedad de fácil diseminación dificil control que afecta a los frutales de pepita, principalmente peral y manzano, y a plantas ornamentales. El agente etiológico de esta enfermedad es Erwinia amylovora, una enterobacteria considerada como organismo de cuarenta en la Unión Europea.Esta bacteria ha sido identificada en la mayoría de los paises del centro y norte de Europa, y en los últimos veinte años también se ha extendido por los países del Mediterráneo. en España, se han detectado diversos focos desde 1995, en distintos hospedadores procedentes de varias Comunidades Autonómas, habiéndose aplicado programas intensivos de erradicación en casi todas ellas. En esta investigación se ha llevado a cabo una caracterización fenotípica y genotípica de una amplia colección de aislados españoles de E. Amylovora de diversos orígenes geográficos, hospedadores y años de aislamiento. La evaluación de los datos obtenidos, tras la realización de análisis fisiológicos, bioquímicos y moleculares de las cepas españolas, ha mostrado su escasa diversidad fenotípica y genotípica. No obstante, los resultados de la cracterización molecular mediante electroforesis en campo pulsante y otras técnicas, apoyan dos hipotesis sobre el origen y la diseminación del fuego bacteriano en nuestro país; en primer lugar, la introducción de material vegetal infectado procedente de otros países de Europa como posible responsable de varios de los focos de infección de esta enfermedad en España, y en segundo lugar, la existencia de, al menos, tres fuentes de inóculo distintas. Por otro lado, la primera descripción de una cepa de E. amylovora que carece del plásmido PEA29 de forma natural, representa una novedad con implicaciones importantes para el diagnóstico molecular de la enfermedad, asi como para la hipótesis acerca del papel de este plásmido en la virulencia del patógeno del fuego bacteriano.

Autor: SAUGAR CRUZ JOSÉ M..
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CIB-CSIC).

Resumen: Leishmania es un protozoo parásito de vertebrados, causante del conjunto de enfermedades denominadas leishmaniasis, cuyo tratamiento se limita a quimioterapia. El principal problema es la aparición cada vez más frecuente de resistencias a los tratamientos convencionales, siendo necesario buscar tratamientos alternativos. Los compuestos que actúan por interacción directa con fosfolípidos ácidos de la membrana plasmática, con desestabilización de la misma, se encuentran entre los principales candidatos. Este mecanismo dificulta notablemente la aparición de resistencias. Entre estos compuestos se encuentran la bacteriocina AS-48, producida por Enterococcus faecalis, y los D,L-alfa-péptidos cíclicos (nanotubos peptídicos), no ensayados anteriormente frente a Leishmania. Ambos compuestos son leishmanicidas a concentraciones micromolares, frente a promastigotes de L.donovani y a amastigotes de L.pifanoi. La actividad de As-48 frente a macrófagos infectados se habasa en un mecanismo complementario que conlleva la permeabilización de la membrana, con salida de ATP, activación de receptores purinérgicos e inducción de NOS2. El tercer compuesto estudiado es miltefosina (hexadecilfosfocolina). Desarrollada inicialmente como fármaco antitumoral, ha demostrado actividad leishmanicida y recientemente ha sido aprobada en India como primer fármaco oral para tratamiento de la leishmaniasis visceral. A pesar de numerosos estudios, se desconoce su mecanismo de acción, tanto sobre células tumorales como sobre Leishmania. En este trabajo se demuestra que en ausencia de suero miltefosina ejerce una acción tipo detergente, gobernada por interacciones hidrofóbicas entre el compuesto y la membrana plasmática. En presencia de suero la membrana actuaría como captador de miltefosina, favoreciendo la eficacia del transportador descrito para este compuesto. Una vez en el interior celular ejercería un efecto pleiotrópico Miltefosina también activa los macrófagos infectados, con inducción de NOS2. Leishmania induce una mayor incorporación de alquil-lisofosfolípidos en el macrófago infectado respecto a la célula sin infectar, que demuestra por primera vez la inducción de la incorporación preferente de un fármaco leishmanicida.

Autor: MARTÍN BARRASA JOSÉ LUIS.
Año: 2003.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: CIENCIAS MEDICAS Y DE LA SALUD.
Centro de realización: CENTRO SUPERIOR DE CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: En la actualidad la dosificación de los antibióticos en los animales así como la frecuencia de administración, es menos rígida que la establecida para humanos. Estos condicionantes unidos a la mayor escasez de estudios famacocinéticos en medicina veterinaria y la variedad de animales existentes, traen consigo una serie de problemas entre los que destacan una complicación del tratamiento y sobre todo la aparición de fenómenos de resistencia bacteriana frente a los antimicrobianos, verdadero caballo de batalla de lasa diversas administraciones e instituciones sanitarias a nivel mundial. Uno de los problemas que con más frecuencia se plantean en las consultas veterinarias de animales de compañía, es la selección del tratamiento empírico adecuado para una infección determinada. Este tratamiento se verá obviamente condicionado por la determinación de los microorganismos más frecuentes en un área geográfica y por patrones de sensibilidad a antibióticos que presentan dichos microorganismos en la región en cuestión. Quizás una de las infecciones más representativas de este problema sea la otitis canina. A partir de cepas bacterianas procedentes de cuadros clínicos de otitis externas caninas crónicas, esta tesis describe los patrones de sensibilidad en diversos grupos bacterianos así como los mecanismos de resistencia frente a aminoglicósidos y quinolonas encontrados en nuestra zona geográfica. De este modo y utilizando entre otras técnicas, un método fenotípico para la detección de mecanismos de resistencia a aminoglicósidos. Desarrollado por los laboratorios Shering-Plough, y técnicas de amplificación y secuenciación del ADN de regiones que determinan resistencia a quinolonas (genes gyrA y parC), se observo que las cepas Gram (-) resistentes, de manera natural o seleccionada, frente a aminoglicósidos presentaban como mecanismo de resistencia casi exclusivo, una alteración en la permeabilidad de la membrana a veces acompañado de la fosforilasa modificadora de aminoglicósidos APH (3') -II. En cambio fueron las mutaciones sobre las subunidades GyrA y ParC del complejo ADN girasa junto con una sobrexpresión de bombas de expulsión activas, los mecanismos de resistencia frente a quinolonas que se detectaron en nuestras cepas Gram (-). En base a estos resultados, y dentro de nuestra zona geográfica, proponemos que en los protocolos terapéuticos que se establecen en la clínica veterinaria de animales de compañía y en concreto para el tratamiento de las otitis externa caninas crónicas, se haga un uso racionalizado de los antimicrobianos. Se debería evitar en los tratamientos empíricos el empleo de las quinolonas y reservarlas para aquellos casos estrictamente necesarios y apoyados en pruebas específicas de susceptibilidad a antibióticos siempre que fuera posible. Solo de este modo se contribuiría a paliar los fenómenos de multirresistencia y resistencias cruzadas a antimicrobianos, considerados como uno de los mayores problemas actuales de salud pública.

Autor: VICENTE ULLÁN RICARDO.
Año: 2002.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: La ruta de biosíntesis de cefalosporina C en Acremonium chrysogenum esta totalmente caracterizada excepto el paso de conversión de isopenicilina N en penicilina N. En este trabajo, se han caracterizado dos transcritos localizados corriente abajo del gen pcbC. Dichos transcritos se corresponden con los genes cefD1 y cefD2, cuyas proteínas deducidas presentan respectivamente homología con acil-CoA sintetasas de ácidos grasos de cadena larga y alfa-metilacil-CoA racemasas. La inactivación dirigida de los genes cefD1 y cefD2, mediante la técnica de doble marcador mostró que los transformantes interrumpidos no sintetizan cefalosporinas, carecen de actividad isopenicilina N epimerasa y acumulan isopenicilina N. Para restaurar la actividad isopenicilina N epimerasa y la síntesis de cefalosporinas en los transformantes interrumpidos, es necesario la complementación en "trans" con ambos genes. Sin embargo, la complementación en "trans" con los genes cefD1 y cefD2 por separado; no restaura la actividad isopenicilina N epimerasa ni la síntesis de cefalosporinas. Este trabajo demuestra que en Acremonium chrysogenum la conversión de isopenicilina N en penicilina N, tiene lugar a través de un sistema de epimerización que no había sido descrito antes en la biosíntesis de antibióticos. En dicho sistema, la isopenicilina N es activada como CoA por la isopenicilinil N-CoA-sintetasa codificada por el gen cefD1. Posteriormente la isopenicilinil N-CoA es racemizada a penicilinil N-CoA, por la isopenicilinil N-CoA epimerasa codificada por el gen cefD2. Finalmente una tioesterasa hidroliza el enlace CoA tioster, liberando pinicilina N.

Autor: CUADRADO LÓPEZ YOLANDA.
Año: 2002.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LEÓN.

Resumen: Por analogía con la formación de rizobitoxina en Burkholderia andropogonis (Michell y Frey, 1988), la biosíntesis de AVG en Streptomyces sp. NRRL 5331 debería seguir una ruta equivalente, derivando del ácido aspártico y siendo la homnoserina un intermediario esencial, como ocurre en la biosíntesis de la tronina, la metionina y la isoleucina. Los genes que codifican para Ask y Asd han sido clonados y caracterizados en Streptomyces sp. NRRL 5331, encontrándose juntos (solapan en cuatro nucleótidos) formando un operón. Se han observado una relación directa entre el número de copias del gen ask y el incremento observado en la producción de AVG. Así, el transformante con una copia extra del gen ask produjo un 30% más de AVG que la cepa control, mientras que el transformante con el gen ask en alto número de copias y el transformante con los genes ask y asd sobreexpresados produjeron un 250% y un 300% más de AVG que la cepa parental, respectivamente. La actividad enzimáca de la Ask Streptomyces sp. NRRL 5331 es fuertemente estimulada por lisina e inhibida en un 30% por meso -2,6-diaminopimélico a concentraciones altas (20 mM). El resto de aminoácidos (treonina, metionina, isoleucina, homoserina o AVG) no ejercen ningún tipo de efecto ni individualmente ni concertados sobre la actividad aspartoquinasa. La síntesis de aspartoquinasa en Streptomyces sp. NRRL 5331 es fuertemente reprimida a concentraciones bajas de metionina (5 mM), ligeramente reprimida a altas concentraciones de isoleucina (20 mM) y de DAP (20 mM). Existe una relación clara entre la regulación de aspartoquinasa y la producción de aminoetyoxivinilglicina. Así, se ha detectado una disminución del 30% en la producción de aminoetoxivinilglicina cunado se creció Streptomyces sp. NRRL 5331 en medio mínimo con DAP 20 mM, concentración a la cual se detecta un 28% de inhibición de la actividad y un 30% de represión en la síntesis de la aspartoquinasa. De un modo análogo en presencia de metionina 2,5 mM la producción de AVG se redujo en un 30%, nivel equivalente a la represión observada en la síntesis de la aspartoquinasa. Es más, cuando la represión de la Ask fue del 50% debido al aumento de la concentración de metionina hasta 5 mM, dejó de detectarse producción de AVG. Esto sugiere que la aspartoquinasa es uno de los puntos clave en la ruta biosintética de la aminoetoxivinilglicina debido a que de su regulación depende la disponibilidad de aspartilfosfato, intermediario esencial para su síntesis.

Autor: GUERRERO POZUELO ESTER .
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS. CSIC.

Resumen: En el presente trabajo se ha estudiado la acción leishmanicida de un conjunto de péptidos que incluyen análogos sintéticos de cecropina A-melitina, así como cinco análogos de péptidos antibióticos de anfibios bajo tres modelos, sobre parásitos aislados, en macrófagos infectados y en macrófagos genéticamente modificados para la producción endógena de los mismos. Se determinó el mecanismo de acción de aquellos con alta actividad leishmanicida sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania, que resultaron ser todos con la excepción de buforina. El proceso letal se basó en la permeabilización de membrana del patógeno mediante interacción estequiométrica péptido-fosfolípido. Todos resultador activos a una concentración micromolar. El análogo de cecropina CA(1-8)M(1-18) resultó el más potente y fue elegido par estudios posteriores. La importancia de su estructuración en alfa hélice de dicho péptido se determinó por comparación de su actividad con la de diferentes diastereómeros sintéticos obtenidos del mismo por incoroporación de su actividad con la de diferentes diastereómeros sintéticos obtenidos del mismo por incorporación de aminoácidos D. Los péptidos activos en membrana inducen la expresión de NOS2 en macrófagos murinos, dicho mecanismo es parcialmente responsable de la eliminación de amastigotes en células infectadas. La inducción de NOS2 requiere el concurso de las vias NF-kB y AP-1, cuya activación está relacionada con la permeabilización de la membrana del macrófago, salida de ATP intracelular y activación de receptores purinérgicos, esencialmente el P2X7. Los macrófagos modificados genéticamente para la expresión de NHP-1 o CA(1-8)M(1-18) redujeron la carga parasitaria en un 50% por mecanismos diferentes a la inducción de NOS2, sirviendo como etapa previa a una terapia génica contra Leishmania basada en estos péptidos.

Autor: ALLENDE VEGA NEREA.
Año: 2002.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Basándonos en la cierta flexibilidad de sustrato de las glicosiltransferasas (GTFs) de macrólidos se han generado cepas de Streptomyces lividans potencialmente capaces de generar nuevos derivados de macrólidos que presente distintos azúcares unidos a su estructura. Estas cepas se caracterizan por contener integrados en su cromosoma los genes oleG2 y eryBV que codifican GTFs de macrólidos. Dichos genes fueron clonados bajo el control del promotor del gen de resistencia de eritromicina. Las cepas recombinantes fueron transformadas con diferentes plásmidos de azúcares capaces de dirigir la biosíntesis de diferentes deoxiazúcares (DOHs) y posteriormente fueron incubadas en presencia de eritronólido B. Los productos de la biotransformación fueron analizados por TLC, HPLC y HPLC-MS, comprobando que OleG2 transfiere eficientemente los DOHs: L-olivosa y con peor eficiencia L-digitoxosa y L-ramnosa mientras que EryBV fue mucho más flexible transfiriendo con mayor eficiencia los DOHs: L-olivosa, L-digitoxosa y L-rodinosa, además de un D-azúcar, la D-olivosa. Todos estos DOHs fueron transferidos a la posición 3 del eritronólido B y no presentan actividad antibacteriana. Con la finalidad de obtener nuevos compuestos activos, era necesario una segunda glicosilación en posición 5 del aglicón, para ello los extractos obtenidos de la cepa S.lividans conteniendo el gen eryBV fueron empleados en una segunda biotransformación utilizando una cepa mutante de Saccharopolyspora erythraea capaz de dirigir y transferir el D-azúcar, D-desosamina a la posición 5. Como resultado se obtuvieron nuevos derivados de eritromicinas que presentaban diferentes azúcares neutros y con cierta actividad antibiótica ensayada frente Bacillus subtillis.

Autor: GONZÁLEZ PEDROSA ANA M..
Año: 2002.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En la presente tesis se describe la caracterización de cuatro genes presentes en una región de ADN de Streptomyces argillaceus ATCC 12956. Estos cuatro genes parecían estar implicados en la biosíntesis de los azúcares D-olivosa, D-oliosa y el azúcar metilado D-micarosa presentes en el antitumoral mitramicina, siendo mtmC un posible codificador de una metiltransferasa implicada en la biosíntesis de D-micarosa, mtmU y mtmV, posibles codificadores de una reductasa y una deshidratasa respectivamente, ambas implicadas en los primeros pasos de la biosíntesis de los tres azúcares citados, y mtmW, cuyo producto génico mostró similitud con redutasas implicadas en la biosíntesis de motivos de azúcar en otros antibióticos policetídicos. Tras la inactivación génica mediante reemplazamiento génico se comprobó que los cuatro genes estudiados eran asenciales para la biosíntesis de la mitramicina interviniendo mtmC, mtmU y mtmV en la generación de los azúcares y mtmW en una de las últimas modificaciones que sufre la estructura policetídica para convertirse finalmente en mitramicina.

Autor: MARTÍNEZ MARTÍNEZ M. SANTOS.
Año: 2002.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha realizado un análisis comparativo de la disposición en tejido pulmonar de levofloxacino, cefepima y netilmicina, antibióticos empleados en el tratamiento de infecciones respiratorias. Dicho estudio se ha llevado a cabo utilizando técnicas de pulmón aislado de rata y se ha analizado la influencia de determinados factores, particularmente el flujo tisular, sobre la cinética de disposición de los tres agentes antibacterianos. Las diferentes estrategias de análisis farmacocinético de los datos aplicadas: momentos estadísticos y modelos de dispersión, demuestran que los tres antibióticos es levofloxacino el que presenta una mayor capacidad de acceso al tejido pulmonar, siendo por lo tanto el más indicado, desde un punto de vista farmacocinético para el tratamiento de infecciones respiratorias provocadas por patógenos intracelulares. Netilmicina y cefepima presentan un comportamiento cinético muy similar en tejido pulmonar. La administración simultánea de los antibióticos produce una disminución del grado de distribución pulmonar de netilmicina y también, en menor grado, de levofloxacino y aunque las diferencias en los valores de algunos parámetros resultan ser estadísticamente significativas, la magnitud de la interacción detectada es moderada, pudiendo tener, o no, relevancia en el ámbito clínico. Finalmente, se comprueba que el grado de vascularización tisular afecta significativamente a los parámetros de distribución pulmonar de los tres agentes antibacterianos y aunque no se descartan otros factores, las diferencias inter-especie en el grado de vascularización tisular parecen contribuir decisivamente a las diferencias inter-especie observadas en los procesos de distribución de los fármacos.

Autor: TRIGO DAPORTA MATILDE.
Año: 2002.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El aumento de la prevalencia de la resistencia a penicilina y macrólidos frente a Streptococcus pneumoniae apunta a las quinolonas como una importante alternativa terapéutica. La resistencia a quinolonas en este microorganismo, aunque presenta una prevalencia muy baja, es ya un hecho. La resistencia a quinolonas en Streptococcus pneumoniae se debe a alteraciones en las topoisomerasa y sistemas de expulsión activa, pero hasta este momento no se conoce las relaciones de dependencia entre estos dos mecanismos de resistencia. Para aclarar estas relaciones se realiza un estudio de selección secuencial de resistencias en presencia y ausencia de un inhibidor de bombas de flujo: reserpina. Entre los resultados obtenidos podemos destacar los siguientes: La exposición a las antiguas quinolonas genera resistencia a ellas mismas y a las nuevas quinolonas. La presencia de reserpina en el proceso de selección abole la aparición de fenotipos de expulsión aumentada, que sí se hacen evidentes cuando la selección se lleva a cabo en ausencia de reserpina. La exposición de una cepa silvestre a concentraciones subinhibitorias de norfloxacino puede originar altos niveles de resistencia a quinolonas debido exclusivamente a sistemas de expulsión activa, sin mutaciones en las QRDR de las topoisomerasas. A diferencia de lo que sugieren otros autores, la incubación en presencia de inhibidores de bomba como reserpina, no sólo no dificulta la emergencia de mutantes resistentes por cambios en las topoisomerasas sino que incluso precipitan la aparición de estos mutantes.

Autor: SECO MARTIN ELENA M..
Año: 2002.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA (CSIC).

Resumen: Se ha llevado a cabo una caracterización de los metabolitos activos producidos por Streptomyces sp. 108, una cepa aislada de suelos, revelando la presencia de oxitetraciclina (bactericida) y dos antibióticos macrólidos tetraenos (fungicidas) en el caldo de cultivo. Se ha caracterizado parcialmente el "cluster" biosintético de ambos tetraenos, revelando la presencia de genes que parecen intervenir claramente en la formación de uno u otro compuesto. Además, se muestra la caracterización parcial de otro "cluster" de biosíntesis de un probable macrólido no polieno sin identificar. Disrupción en las diferentes rutas biosintéticas han puesto de manifiesto competencias metabólicas entre ellas. Mediante manipulación genética de alguno de los genes del "cluster" biosintético de los tetraenos se ha favorecido la producción de nuevos macrólidos tetraenos, algunos de ellos con mayor actividad biológica y mayor solubilidad que los parentales 108I y 108II, cuya modificación química sería interesante extrapolar a otros tetraenos de interés industrial.

Autor: HIJARRUBIA IBRAHIM M. JOSÉ.
Año: 2001.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La biosíntesis de lisina en hongos filamentosos tiene lugar mediante la ruta del alfa-aminoadipato. La importancia de alfa-aminoadipato viene dada por la posibilidad de incorporación de este intermediario hacia la síntesis de metabolitos secundarios como los antibióticos beta-lactámicos penicilina, sintetizada por P. Chrysogenum, y cefalosporina, sintetizada por A. Chrysogenum. En este trabajo se profundiza en el conocimiento de la utilización del alfa-aminoadipato reductasas de los mismos. Esta enzima cataliza la transformación de alfa-aminoadipato a alfa-aminoadipato-semialdehído en la ruta de síntesis de lisina. Se ha clonado y caracterizado el gen lys2 que codifica para la alfa-aminoadipato reductasa de A. Chrysogenum. La proteína codificada por este gen (Lys2) contiene todos los dominios de la actil-CoA ligasas y otras enzimas como las péptida sintetasas, que activan los aminoácidos mediante ATP para formar aminoacil-AMP.Asimismo, hemos encontrado el sitio de unión de NADPH de las proteíans Lys2. La complementación de la cepa LG de P. Chrysogenum (alterada en el gen lys2, auxótrofa de lisina) con el gen lys2 de A. Chrysogenum demuestra que se forma una holo-Lys2 funcional, es decir que la fosfopatoteinil transferasa Lys5 de P. Chrysogenum puede utilizar la proteína apo-Lys2 de A. Chrysogenum como sustrato a modificar introduciendo el brazo de fosfopantoteína. Se ha demostrado que la adición de lisina a medios de fermentación no ejerce represión sobre la actividad alfa-aminoadipato reductasa de A. Chrysogenum y P., chrysogenum. Por otra parte, se observa un fuerte efecto de inhibición "in vivo" por lisina. El nitrato en diferentes medios de fermentación, ocasiona una disminución acusada de la actividad alfa-aminoadipato reductasa, así como de la concentración de proteína Lys2. Este efecto es revertido al añadir lisina al medio de cultivo. Por primera vez se ha purificado a homogenedidad y carcterizado bioquímicamente la alfa-aminoadipato reductasa de P. Chrysogenum. El análisis estructural de los dominios de la alfa-aminoadipato reductasa de P. Chrysogenum demuestra que: * El dominio de adenilación previamente postulado se enmarca entre dos dominios DUF. * El sitio de unión de NADPH se encuentra en un dominio independiente del dominio de reducción. Se ha estudiado la acilación "in vivo" de la proteína Lys2 y de los diferentes fragmentos de proteólisis obtendios, demostrando su naturaleza como estructuras funcionales independientes. El fragmento aislado más pequeño que lleva a cabo la acilación del alfa-aminoadipato es de 30 kDa. Se ha establecido que el ácido alfa-aminoadípico marcado unido a la proteína Lys2 se libera mediante tratamiento con ácido perfórmico pero no con ácido fórmico, lo que demuestra la unión tioéster entre el alfa-aminoadipato y la alfa-aminoadipato reductasa.

Autor: MASEDA RODRÍGUEZ ANA BELEN.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha investigado el efecto que tiene la luz sobre el crecimiento, productividad, composición bioquímica y proteoma de la microalga marian Nannochloropsis gaditana. Utilizando una metodología de cultivo discontinuo con diferentes ciclos de luz: oscuridad, la condición óptima de producción de biomasa fue de 12:12. La fase de oscuridad favorece el crecimiento. En el cultivo semicontinuo con diferentes tasas de renovación, concentración de nutrientes y ciclos de luz: oscuridad 12:12 y 24:0, la productividad máxima se alcanza en la condición de 12:12, 4 mg át. N/l y 40% día -1 de tasa de renovación. La intensidad luminosa de 200 umol quanta m-2 s-1 maximiza la productividad. La carotenogénesis se indujo con elevada intensidad luminosa y ausencia de nitrógeno. La microalga produjo astaxantina y cantaxantina como pigmentos secundarios en concentraciones de 1.9 y 2 fg/cél respectivamente. El escalado de la producción se realizó en fotobioreactores con capacidad de 50 y 100 litros. Se comparó la productividad y la composición bioquímica en cultivo discontinuo (fase estacionaria) con la del semicontinuo (fase de estabilización). El cultivo semicontinuo tiene mayor productividad y mayor contenido celular de proteína. Se analizó la variación de la composición bioquímica en la fase de estabilización a lo largo del ciclo de luz. Se observó que existe un incremento progresivo de los componentes celulares (proteínas, lípidos, carbohidratos y pigmentos). Cuando en la fase estacionaria se adicionaron diferentes micronutrientes al medio de cultivo se incrementó la producción. Se desarrolló una metodología de precipitación de proteína para el isoelectroenfoque. La técnica permitió analizar mediante proteoma, proteínas específicas d ela microalga aún cuando la escasa información sobre microalgas presente en la base de datos (NCBlnr) no hizo posible la identificación de las proteínas.

Autor: OLIVER PALOMO ANTONIO.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: A pesar de que la infección por P.aeruginosa en los pacientes de fibrosis quística (FQ) se produce generalmente por una única cepa que persite a lo largo de los años, los asilamientos de P.aeruginosa, encontrados en un mismo paciente presentan una amplia variabilidad morfológica con alta frecuencia de variantes inmóviles, auxótrofos o resistentes a los antibióticos. Por otro lado, el pulmón del paciente FQ presenta una serie de peculiaridades entre las que destacan la compartimentalización, y la enorme presión selectiva producida por los prolongados tratamientos antibióticos y la respuesta inmunitaria. Estas dos circunstancias nos llevaron hace algunos años a formular la hipótesis de que estas condiciones medioambientales podrían estar favoreciendo la selección de variantes de P.aeruginosa mutadoras (con frecuencia de mutación incrementada) las cuales serían responsables de la enorme variabilidad fenotípica, incluida la resistencia a los antibióticos, basándonos para ello en los resultados de experimentos previamente realizados in vitro. El 20% de los aislamientos de P.aeruginosa obtenidos de los pacientes FQ fueron mutadores, encontrándose al menos un aislamiento mutador en el 36% de los pacientes. Por el contrario, ningún aislamiento de P.aeruginosa obtenido de 75 pacientes con infecciones agudas (sepsis o neumonía) fue mutador. Los aislamientos mutadores de P.aeruginosa fueron significativamente más resistentes a los antibióticos que los no mutadores, demostrando por primera vez en la naturaleza una asociación entre mutadores y resistencia a los antibióticos. En una segunda fase del estudio, se caracterizaron mediante clonación, secuenciación y estudios de complementación en cepas de laboratorio de E. Coli y en las cepas clínicas de P.aeruginosa gran parte de los genes de P.aeruginosa cuya defecto conduce a un incremento en la frecuencia de mutación (genes mutadores). Se han caracterizado los genes del sistema de reparación de emparejamientos erróneos en el ADN (MMR) (mutS, MutL, y uvrD), los genes del sistema de prevención y reparación del daño oxidativo mediado por la 8-oxodGuanina (mulT, mutM, y mutY) y la subunidad de la ADN polimerasa, mutD ó dnaQ. Mediante experimentos de complementación se demostró que la mayoría de las cepas mutadoras aisladas de los pacientes FQ (7 de 11) son deficientes en el sistema de MMR (4 mutS, 2mutL y 1 uvrD). En cuatro de las siete cepas (3 mutS y 1 mulT) se encontró que la inactivación de los genes era debida a cambios en el marco de lectura. En la cuarta cepa mutS se encontró una inserción de 3,3 Kb después del décimo mucleótido del gen y una delección de 54-nt producida entre dos repeticiones directas de 8-nt, siendo esta deleción la principal responsable de la inactivación del gen. La segunda cepa mutL presentó la mutación K310M, equivalente a la K307 de E.coli, residuo esencial para actividad ATPasa de MutL. Por último, la cepa uvrD presentó tres mutaciones en el sitio conservado de unión a ATP (motivo I) también esencial para la actividad de la ADN helicasa II. Finalmente, mediante el seguimiento de los aislamientos de P.aeruginosa obtenidos secuencialmente de las secreciones respiratorias de los pacientes FQ, se demuestra por primera vez, la persistencia a lo largo de los años de cepas mutadoras en poblaciones naturales.

Autor: RUIZ ESPAÑA NEUS.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: La investigación de la membrana externa de Serratia marcescens y su contribución en la resistencia a los antibióticos beta-lactámicos y quinolonas ha sido objeto de estudio de nuestro grupo de investigación. Continuando en la misma línea de investigación, hemos profundizado en algunos de los mecanismos de resistencia a los antimicrobianos en S. Marcescens. Por un lado, se ha estudiado la entrada de antibióticos beta-lactámicos y quinolonas a través de la membrana externa de S.marcessens a partir de cepas mutantes de porinas Omp1 y Omp2. Por este motivo, se ha determinado la cinética de acumulación de ciprofloxacina de estos mutantes y se ha calculado el coeficiente de permeabilidad a cefaloridina. Dada la importancia de la proetína Omp1 como vía de acceso de antibióticos, se ha profundizado en su estructura y funcionamiento. Se ha determinado su secuencia y a partir de esta se ha establecido un modelo teórico sobre la estrcutrua tridimensional del monómero de porina. Se ha purificado la proteína y se han realizado medidas de conductancia que han permitido demostrar que se trata de una proteína formadora de canal y, segudiamente, se ha visualizado por microscopía de fuerza atómica. Finalmente, se iniciaron estudios sobre los mecanismos de salida del antibiótico a través de la membrana, es decir, sobre los sistemas de reflujo en S.marcescens.

Autor: SABATE PINA MONTSERRAT.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Autor: PALOMO GUIO ESTEBAN .
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: MICROBIOLOGÍA I (DPTO FACULTAD DE MEDICINA).

Resumen: Estudio basado en la investigación cuantitativa(1.280 cuestionarios) y análisis posterior de las adquisiciones realizadas de antibióticos en los horarios de guardias de las oficinas de farmacia. Se cuantificó la prevalencia del consumo de antibióticos frente al total de medicamentos dispensados en la guardia, asi como la magnitud del consumo total de antibióticos, la adquisición de los mismos por automediación y la distribución según subgrupos terapéuticos y la relación de enfermedades que motivan su adquisición.

Autor: LÓPEZ GARCÍA NATIVIDAD-ANA.
Año: 2000.
Universidad: PUBLICA DE NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DPTO. PRODUCCIÓN AGRARIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA.

Autor: PÉREZ REDONDO M. ROSARIO.
Año: 2000.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En Streptomyces clavuligerus la agrupación biosintética de ácido clavulánico, un inhibidor de B-lactamasas, está situada corriente debajo de los genes de biosíntesis de cefamicina C. En el trabajo se muestra la carcterización de una región de aproximadamente 12 kb de extensión que contiene la mayor parte de la información necesaria para la biosíntesis de ácido clavulánico. De los ocho marcos de lectura contenidos en el fragmento analizado se profundiza en el estudio de cuatro de ellos. El gen pyc codifica la proteína que condensa los dos percusores de la molécula de ácido clavulánico, arginina y glicerdehído-3-fosfato. La interrupción de este gen condiciona la producción de ácido clavulánico al medio de cultivo utilizado, lo que apunta a la existencia de un duplicado génico de pyc. Orf-6 codifica una proteína homóloga de ornitina acetilfransfereasa, enzimas implicadas en la biosíntesis del precursor arginina.La interrupción de orf-6 afecta negativamente a la producción de ácido clavulánico. Hemos determinado que este gen se halla bajo el control transcripcional negativo ejercido por argR, el represor de la biosíntesis de arginina. Car codifica la enzima responsable del último paso biosintético: la reducción del clavulanato-9-aldehído a ácido clavulánico. La inactivación de este gen imposibilita la producicón de ácido clavulánico. claR codifica un activador transcripcional. Se ha desmostrado que controla la transcripción de los genes biosintéticos orf-6 y car y que, está controlado por el regulador superiro de cefamicina C y ácido clavulánico, ccaR.Según los experimentos de inactivación y amplificación génicas, claR regula positivamente la producción de ácido clavulánico. Además, se han realizado análisis de los transcritos correspondientes al regulador claR y a los genes estructurales tardíos.

Autor: CAMPELO DIEZ ANA BELEN.
Año: 2000.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: SE CONSTRUYO UNA CIENOTECA DE S.ARISEOS IMRU 3570 EN EL CODIGO SUPERCOS 1 Y SE RASTREO CON UN FRAGMENTO INTERNO AL GEN pabAB. SE OBTUVIERON 2 CLONES POSITIVOS A PARTIR DE LOS CUALES, POR "CHROMOSOME WALKING" SE CLONARON 200 kpb, DE LAS QUE 40 kpb SE SECUENCIARON. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA REVELE 13 ORFs, ALGUNAS DE LAS CUALES PUEDEN ESTAR IMPLICADAS EN LA BIOSINTESIS DE CANDICIDINA, UN ANTIBIOTICO ANTIFUNGICO, MACROLIDO, POLIENO Y AROMATICO. A LOS PRODUCTOS DEDUCIDOS DE ESTAS ORFs SE LES ASIGNARON LAS SIGUIENTES FUNCIONES: PROTEINAS REGULADORAS (Ort1,Ort2 Y Ort3), GLUCOSILTRANSFERASA (CanG), TIOESTERASA PREVIAMENTE DESCRITA Y DELIMITADA EN ESTE TRABAJO (CanT), PARA SINTASA PREVIAMENTE DESCRITA Y ESTUDIADA POR CRIADO ET AL. (1993), DOS POLIPEPTIDOS DE UNA PKS DE TIPO I. LA EXTENSION DE LA DKS DE TIPO I SE DETERMINO POR HIBRIDACION CON EL GEN ERYA II DE SAC. ERYTRAEA, OBTENIENDOSE UN FRAGMENTO DE HIBRIDACION POSITIVA DE 126 kpb. SE SECUENCIÓ UN FRAGMENTO PaeI DE APROXIMADAMENTE 1 kpb Y SE IDENTIFICARON 2 ORFs: UN POLIPEPTIDO DE UNA PaeI ALBERARIA EL OTRO LIMITE DE LA PKS DE CANDICINA. LA INTERRUPCIÓN DEL GEN pabAB DIO LUGAR A LA CEPA s.ARIJEW ABC28 QUE NO PRODUCE CANDICINA. ESTA CEPA CONDUCE SU METABOLISMO A LA PRODUCCION DE UN COMPUESTO CON ACTIVIDAD ANTIFONGICA. CUANDO SE ADICIONA PABA, SE RESTABLECE LA PRODUCCION DEL ANTIBIOTICO CANDICINA. LOS GENES canG,canA Y pabAB PRESENTAN TRANSCRITOS MONOCISTRONICOS Y BI-O POLICISTRONICOS EN MEDIO DE PRODUCCION DE CANDICIDINA (MEDIO SPG) Y EN MEDIO LECHEVALIER. CUANDO SE ADICIONA FOSFATO 10mM AL MEDIO LECHELALIER NO SE DETECTARON TRANSCRITOS PARA LOS GENES ESTUDIADOS. EN LA EONA INTERGENICA CORRIENTE ARRIBA DE canG Y canA SE DETECTO UN INICIO DE TRANSCRIPCION EN CADA CASO. EN LA INTERGENICA CORRIENTE ARRIBA DE pabAB SE DETECTARON DOS INICIOS DE TRANSCRIPCION Y UN TERCERO EN LA EONA 31 DEL GEN SITUADO CORRIENTE ARRIBA DE pabAB X TRANSCRITO EN LA MISMA DIRECCION.