ANTIBIOTICOS, 2

Autor: ALIAGA ALMEDO ROXANA REVECA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUDADA .

Resumen: La alta incidencia de las enfermedades infecciosas, la importancia de las enterobacterias como agentes causales más frecuentes y el surgimiento de cepas resistenes a los antibióticos son factores que concurren en uno de los mayores problemas de la medicina actual y del futuro: la multiresistencia. En esta Tesis se aborda el problema de las cepas de neterobacterias portadores de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEAs) y cefamicinasas, en el ámbito de la población atendida en el Hospital de la Santa Creu y Sant Pau de Barcelona. De 1997 a 1999 se han obtenido en el Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, 13800 cepas de enterobacterias, entre las cuales se identificaron y caracterizaron las portadoreas de BLEAs y cefamicinasas. Después de una primera selección, en función al patrón de resitencia por la técnica de disco difusión y la posterior caracterización fenotípica y genotípica de las beta-lactamasas, fueron identificadas 35 cepas de Escherichia coli (0,455 de las cepas aisladas de esta especie bacteriana); 9 de Klebsiella pneumoniae (1,83%); 2 cepas de Salmonella enterica (0,11%); y una de Proteus mirabilis (0,11%) portadoras de las enzimas investigadas. Además del patrón de resistencia, la caracterización incluyó ensayos de sinergia, biotipado, punto isoeléctrico e identificación del en respectivo mediante PCR. Las betas-lactamasas de espectro extendido en E. Coli hans ido CTX-M-9 (27 cepas); SHV-2 (6 cepas); TEM-10 (1 cepa) y TEM-12 (1 cepa). CTX-M-9, actualmente predominante, ha aumentado su incidencia cinco veces (0,45%) respecto al trienio anterior (0,08% en 1994-1996). Por otra parte, se ha observado por primera vez en el ámbito de nuestro hospital, la presencia de cefamicinasas plasmídicas tipo CMY-2 en una cepa de cada una de las siguientes especies Klebsiella pneumoniae, Salmonella enterica y Proteus mirabilis. Respecto a las características de los pacientes y naturaleza de la infección, en el 73% de los casos la infección estaba localizada a nivel del tracto urinario y en el 61% de los casos, el paciente era mayor de 60 años, el 80% de los pacientes fue de sexo feminino y la enfermedad de base predominante fue la neoplasia sólida. Como dato relevante para efectos de vigilancia epidemiológica, se consta que la incidencia de beta-lactamasa de espectro extendido y cefamicinasas plasmídicas en el ámbito de nuestro hospital aunque es pequeña ha aumentado tres veces (0,48%) respecto al trienio anterior (0,14%) no evidenciándose en ningún caso la presencia de brotes epidémicos intrahospitalarios.

Autor: LOPEZ DE ANDRES ANA ISABEL.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Los antibióticos están considerados como uno de los grupso farmacológicos más controvertidos e importantes dentre de la terapéutica acutal tanto a nivel intrahospitalario como extrahospitalario por un doble motivo: amplia utilización y elevado coste. Para mejorar su utilización se han descrito dos tipos de estrategias: educación de los prescriptores y programas de control de uso. El objetivo de este trabajo ha sido evaluar el impacto del programa de control de uso de los antibióticos, puesto en marcha en 1992, en las precripciones realizadas en un hospital universitario. Para ello ha sido necesario la validación de unos criterios de utilización empírica de los antibióticos enun grupo de patologías seleccionadas (neumonía, infección urinaria, colecistectomía y artroplastia de cadera), el análisis de las adecuación de las prescripciones antimicrobianas y su comparación antes y después de la puesta enmarcha del programa. Los resultados indican disminución en la prescripcióny aumento en la adecuación de los antibióticos restringidos por el programa así como una mejora en la prescripción profiláctica de los antimicrobianos tras la introducción de medidas educativas. Por tanto, se podría deducir que el establecimiento de un programa de control restrictivo se debe apoyar en la aplicación conjunta de medidas educativas (inforamción y formación continuada al personal sanitario) que faciliten una utilización cuidadosa y no discriminada de este grupo de fármacos.

Autor: AVILES MARIN PABLO MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En la presente tesis se ha estudiado el Efecto Inóculo en dos Cefalosporinas de Tercera Generación y en dos Cefamicinas en Escherichia coli ATCC 25922 y su posible relevancia terapéutica. Para ello se han realizado experimentos que permitieran monitorizar la estabilidad del antibiótico durante el desarrollo de las pruebas de susceptibilidad, tanto con inóculo alto como con bajo. Además también se ha estudiado qué influencia tiene la densidad del inóculo bacteriano inicial sobre la velocidad de erradiación de cada uno de los antimicrobianos. Además, se han estudiando las correlaciones entre los resultados in vivo después de una infección letal en rata y las C.I.M.s obtenidas con los dos inóculos, alto y bajo, respectivamente. Los resultados experimentales obtenidos indican que el Efecto Inóculo presente en los Cefalosporinas de Tercera Generación, no se debe a la destrucción de los antibióticos por beta-lactamasas bacterianas. Además este Efecto Inóculo se pone de manifiesto cuando las Cefalosporinas de tercera Generación se ensayan frente E. Coli ATCC25922 en experimentos dinámicos, tales como curvas de mortalidad. Además también se refleja cuando se aplican aproximaciones farmacodinámicas, como la Ecuación de Hill y los parámetros que la definen. Además, las predicciones de la actividad in vivo de una Cefalosporina de Tercera Generación son mejores, si los resultados in vitro se ha obtenido con el inóculo alto, que se puede considerar como más representativo de la densidad bacteriana presente en un foco de infección. En definitiva el Efecto Inóculo se puede considerar una ayuda para la investigación en antibioterapia, porque utiliza las células bacterianas en un estado muy semejante al que estas puedan adoptar en el foco de infección, no sólo en número sino en características fisiológicos, y por lo tanto de síntesis y expresión de las moléclas diana de la actividad antibiótica.

Autor: LAZARO OCIO BEATRIZ.
Año: 1999.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La tesis demuestra que las bajas temperaturas favorecen la supervivencia de C.jejuni en condiciones adversas. Se estudia la relacion de la supervivencia con la morfología celular. Se analizan las proteinas totales por lectroforesis bidimensional. Se describe el manteniento del DNA cromosómico y de sus perfiles de restrición. Se demuestra que C. Jejuni es capaz de sobrevivir fuera del hospedador natural, perdiendo su cultavilidad pero mantiene una viabilidad potencial que permite que recupere la capacidad de crecimiento tras periodos de inanción largos en medios tamponales a 4º c.

Autor: GARCÍA GARCÍA FRANCISCA.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: FACULTAT DE QUÍMICA UNIV. BARCELONA.

Resumen: A partir del sistema 2,4-dimetil-1-metoxi-8-oxabiciclo -(3.2.1)-oct-e-en-3-ona se han sintetizado butenolidas funcionalizadas en posición C4, por rotura del enlace C1-C2 del bicilo inicial, las cuales son sintones muy versátiles en la preparación de prostanglandinas y feromonas. También se ha desarrollado una nueva metodología para preparar sistemas cicloheptánicos polisubstituidos, en los cuales se generan más de cuatro estereocentros consecutivos. El precursos de estos anillo ciloheptáncios es el 2,4-dimetil-1-metoxi-8-oxabiciclo-(3.2.1)-oct-6-en-3-ol, sobre el cual se ensaya la reacción de apertura de su puente oxigenado y la reacción de adición sobre el doble enlace en posición C6-C7. Mediante la utilización de estas dos reacciones se puede obtener, con buenos rendimientos, los sitemas cilcoheptánicos anteriormente mencionados, que son unos de los objetivos de la Tesis. Esta nueva metodología desarrollada se ha aplicado en la síntesis de una serie de subunidades de antibióticos macrólidos, como la síntesis del fragmento C17-23 del antibiótico ionomicina, el fragmento C7-C12 de las moléculas de tirandamicina y se ha estudiado la síntesis de la lactona de Prelog-Djerassi.

Autor: NAVARRO PARDOS CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: Se ha realizado el estudio de sensibilidad antimicrobiana de 301 cepas de S. pneumoniae, obtenidas durante los años 1995-1996, frente a distintos antimicrobianos, por antibiograma y determinación de C.I.M por el sistema PASCO o el sistema E-test. Se ha obtenido 61,8% de cepas resistentes a penicilina, presentando 20,6% resistencia de alto nivel a la misma. La resistencia a eritromicina, tetraciclina, cloranfenicol, cotrimoxazol y ciprofloxacino ha sido de 30,9% 40,9%, 30,2%, 66,4% y 13,3% respectivamente. Se ha demostrado que la resistencia a penicilina se asocia significativamente con la resistencia a todos los antibióticos estudiados excepto ciprofloxacino. La actividad de las cefalosporinas de tercera y cuarta generación como cefotaxima y cefepima se mantiene en las cepas con resistencia intermedia o de alto nivel a penicilina. El estudio de los fenotipos de resistencia al grupo de los macrólidos, lincosamidas y estreptograminas tipo B ha demostrado que el mecanismo de resistencia debido a modificación de la diana, que da lugar al fenotipo de resistencia MLSb, por síntesis de metilasas que codifican los genes ermAM es el más frecuente, siendo el fenotipo M de limitada prevalencia. El sistema de eflujo implicado como responsable del fenotipo M se ha puesto de manifiesto mediante su inactivación bloqueando el transporte con CCCP. Los genes mef E son los determinantes genéticos del fenotipo M, caracterizado en neumococos, que puede coexistir de forma excepcional con el gen msr A/B procedente de estafilococos. En el análisis de los factores de riesgo asociados a la resistencia de S. pneumoniae a penicilina se realizó análisis bivariante y multivariante mediante regresión logística demostrando que son estadísticamente significativos la administración de betalactámicos previos y el antecedente de otitis. A nivel hospitalario se ha comprobado que el consumo de macrólidos ha aumentado durante el periodo del estudio y en el ámbito extrahospitalario se ha incrementado el uso de betalactámicos en el área III de Zaragoza y de macrólidos en la provincia de Teruel.

Autor: LOPEZ HERNANDEZ SUSANA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: Las especies de Acinetobacter son coco-bacilus gramnegativos implicados frecuentemente en la infección nosocomial. Su gran ubicuidad facilita su aparición en forma de brotes. Estos microorganismos presentan elevada resistencia a la mayoría de los antibióticos, especialmente a los betalactámicos. El principal mecanismo de resistencia a este grupo de antimicrobianos es la producción de betalactamasas. Estos enzimas, no sólo parecen afectar a cefalosporinas de 3 generación, sino que también se han encontrado nuevas betalactamasas que confieren resistencia a carbapenémicos. La resistencia a imipenem y meropenem puede aparecer en cepas aisladas, o bien en cepas relacionadas genéticamente.

Autor: NEGRI PINARES M. CRISTINA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El presente Trabajo tiene por objeto el evaluar la posibilidad de que muy pequeñas diferencias en la sensibilidad a antibióticos, como las producidas por modificaciones de un sólo aminoácido en la estructura de una proteína (beta-lactamasa) implicada en la resistencia, puedan ser efectivamente seleccionadas por antibióticos. Para comprobar la hipótesis se han fabricado variantes monomutadas de las beta-lactamasas TEM-1 y TEM-12, que se han introducido en cepas isogénicas. Estas cepas, dotadas de marcadores neutros, se han sometido a ensayos de competición en cocultivos con concentraciones diferentes de antimicrobianos, y se han estimado las variaciones en la proporción de las subpoblaciones en distintas condiciones experimentales. Los resultados indican que la selección de muy pequeñas diferencias es posible a concentraciones muy determinadas (concentraciones selectivas), dando lugar a picos específicos de selección para cada variante molecular. Los datos obtenidos sugieren que la evolución de las beta-lactamasas clásicas hacia enzimas de espectro extendido se ha llevado a cabo de forma secuencial por la selección de variantes monomutadas en concentraciones muy bajas de cefalosporinas de la tercera generación. El modelo es aplicable a aspectos mas generales de la selección de proteínas mutantes en microorganismos.

Autor: HERNANDEZ ALLES SANTIAGO.
Año: 1998.
Universidad: ISLAS BALEARES.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: La terapia antimicrobiana para tratar infecciones causadas porcepas de K.pneumoniae productoras de beta-lactamasas de espectro extendido (ESBL) puede seleccionar mutantes deficientes en porinas. Estos mutantes presentan un alto grado de resistencia a cefoxitina y cefalosporinas de tercera generación, pero las carbapenemas mantienen su actividad, por lo que constituyen una de las mejores opciones para tratar infecciones causadas por estas cepas. La pérdida de expresión de la porina OmpK36 en cepas clínicas se debe en gran parte a la transposición de secuencias de inserción dentro del gen ompK36. Las secuencias de inserción también pueden provocar una menor expresión de porina, incrementando moderadamente la resistencia a cefoxitina. Se ha clonado y secuenciado el gen de la porina OmpK35 de K.pneumoniae. La regulación en función de la osmolaridad y la secuencia de aminoácidos indican que es una porina de tipo OmpF. La expresión de la porina OmpK35 permite una mayor tasa de difusión de azúcares y antibióticos que la porina OmpK36. Las cepas clínicas no productoras de ESBL expresan principalmente ambas porinas OmpK36 y OmpL35, mientras que la mayoría de cepas productoras de ESBL muestran una baja expresión o no expresan OmpK35. Se seleccionaron mutantes in vitro resistentes a antibióticos Beta-lactámicos derivados de cepas no productoras de ESBL, los cuales mostraron principalmente alteraciones de la expresión de OmpK35. La alteración de la expresión de porinas en mutantes derivados de cepas productoras de ESBL es un mecanismo poco frecuente.#

Autor: CAMPO MORENO ROSA M. DEL.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se ha observado un alto porcentaje de resistencia a los antibióticos aminoglicósidos gentamicina y estreptomicina en cepas de Enterococcus aisladas en el Hospital Clínico Universitario de Zaragoza, especialmente en las cepas de muestras significativas, donde los porcentajes fueron muy superiores a los detectados en cepas de Enterococcus de heces humanas. Los mecanismos enzimáticos más frecuentemente detectados en cepas con resistencia de alto nivel a gentamicina y estreptomicina fueron APH(3') y AAC(6')-APH(2"). En el 5% de las cepas con resistencia de alto nivel, se detectaron al menos cuatro mecanismos enzimáticos diferntes. Se ha detectado la enzima ANT(4')(4") por primera vez en la especie E.faecalis, lo que sugiere la diseminación genética entre las distintas especies de Enterococcus. En cepas de Enterococcus con resistencia de alto nivel a gentamicina y con el gen completo de la enzima bifuncional aac(6')-aph(2"), se han observado diferentes expresiones fenotípicas: expresión bifuncional AAC(6')-APH(2"), expresión disociada [actividad AAC(6') sin APH(2") y viceversal] y no expresión enzimática. Se ha comprobado la baja frecuencia de resistencia a antibióticos glicopeptídicos en las cepas de Enterococcus del mismo hospital. Se ha estudiado el mecanismo de resistencia a vancomicina en cepas de Enterococcus vanA aisladas en diferentes hospitales españoles, detectando un mismo patrón electroforético en campos pulsados de cepas de E.faecalis aisladas en hospitales de Barcelona, Logroño y Oviedo. En todas las cepas resistentes a vancomicina estudiadas, se ha comprobado la presencia de todos los genes del operón vanA, así como el gen ermB. Se ha estudiado la producción de bacteriocinas en 304 cepas de Enterococcus de diferentes orígenes y con diferente patrón de resistencia a aminoglicósidos y glicopéptidos, comprobando la mayor producción de bacteriocinas en la especie E.faecalis y en las cepas procedentes de muestras clínicas significativas. Asi mismo se ha comprobado la transferencia conjunta de los determinantes de resistencia a vancomcina y eritomicina y de la producción de bacteriocinas, y se ha demostrado la mayor producción estadísticamente significativa en las cepas con resistencia a vancomicina de origen clínico. Del mismo modo, se ha comprobaado el valor ecológico de la producción de bacteriocinas.

Autor: AISSAOUI HABIBA.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: En el presente trabajo, se ha estudiado la capacidad antifúngica de Arhrinurn ogaeisoernub FVB 570, Arthrinium aureum FVB 574 y Arthrinium serenensis FVB 548 frente a especies de Aspergillus niger FVB 1004, Aspergillus fumigatus FVB 1005, Aspergillus terricola FVB 1006 y de Penicillium selerotiorum FVB 1007, cuando las cepas se desarrollan en un substrato natural como es un suelo de viñedos, del cual estos hongos han sido aislados. Asimismo se ha estudiado la actividad que estas cepas de Aspergillus y de Penicillium pueden desarrollar al enfrentarse con las cepas de Arthrinium. En una primera fase del trabajo se estudió la viabilidad de las cepas en una alícuota de los suelos, obteniéndose curvas de recuperación de las colonias que han permitido deducir la viabilidad de las cepas en el substrato. Los resultados han mostrado que las tres cepas de Arthrinium estudiadas inhiben el crecimiento de las cepas de Aspergillus y de Penicillium, sin embargo Arthrinium phaeospermum fue la única cepa que presentó una disminución del crecimiento en el suelo cuando estaba en presencia de cepas de Aspergillus o de Penicillium. Como en algunos investigaciones, se comprobó que cepas de Arthrinium han sido causantes de una intoxicación a partir de la producción de un metabolito tóxico que fue denominado ácido 3-nitropropiónico, por lo que se consideró de interés estudiar la posible presencia de dicho metabolito en los extractos crudos de las tres cepas de Arthrinium. Con el fin de detectar la presencia de este metabolito se realizaron cromatografías en capa fina. Los resultados obtenidos han determinado que en ningún caso se ha detectado la presencia de este metabolito en los extractos de Arthrinium evaluados. Se han estudiado también las actividades enzimáticas de los extractos crudos de las tres cepas de Arthrinium antes citadas con el sistema APLZYM. Los tres extractos estudiados han mostrado actividad enzimática derivada de la presencia de fosfata ácida y naftol-AS-IB-fosfohidrolasa. El extracto crudo de Arthrinium phaeospermum además de estas enzimas posee N-acetil-beta-glcosaminidasa, esterasa y esterasa lipasa. Finalmente se ha llevado a cabo el estudio de la actividad antibiótica de los extractos crudos de Arthrinium phaeospermam, de Arthrinium serenensis y de Arthrintam auream frente a bacterias y a hongos filamentosos inoculados en un pienso siguiendo el mismo modelo experimental mencionado anteriormente. Los resultados han mostrado que los extractos crudos de las tres cepas de Arthrinium tienen actividad antibiótica frente a Fusarium moniliforme FVB 458, Salmonella typhimurium CECT 443 y frente a Escherichia coli cepa CECT 515. Sólo el extracto crudo de Arthrinium phaeospermum tiene actividad frente a Aspergillus flavus FVB 879, mientras que sólo el extracto crudo de Arthrinium aureum tiene actividad antifimgica frente a Penicillium purpurogenum FVB 381. Cabe destacar que ninguno de los extractos crudos de las tres cepas de Arthrinium ha presentado activiad injibidora frente a Staphylococcus aureus CECT 976, ni tampoco frente a Aspergillus nidulans FVB 612.

Autor: BAQUERO ARTIGAO M. ROSARIO.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: Esta memoria, describe la caracterización y funciones de los genes dacD y sbmC, situados en el minuto 44 del mapa genético de Escherichia coli. dacD codifica una proteína fijadora de penicilina (PBP) de 43.346 Da, con actividad DD-carboxipeptidasa, a la que se ha denominado PBP6b. Esta proteína es la cuarta PBP de E. coli con esta actividad. sbmC codifica una proteína citoplasmática de 18.095 Da que secuestra microcina B17 (MccB17). Este secuestro se refleja en las dos propiedades siguientes: resistencia de células sensibles a microcina exógena y retención de microcina endógena en células productoras, es decir, bloqueo de la exportación de antibiótico. Además la doctoranda, ha demostrado que la expresión de sbmC responde a dos estímulos, daño al DNA y entrada de las células en fase estacionaria. Es éste, un elegante ejemplo de adaptación fisiológica bacteriana. La bacteria produce simultáneamente una proteína (sbmC) que la protege de la toxina (MccB17) que ella misma produce. Y produce la proteína en cuanto siente (detecta) la presencia de toxina. Tres reguladores globales de E. coli: Lex A, CAMP-CRP y sigma S controlan la expresión de sbmC.

Autor: GONZALEZ NUÑEZ JOSE.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA I PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA MEDICINA.

Resumen: Determinación de la prevalencia a nivel nacional, mediante entrevista y chequeo de la dedicación adquirida a 1.000 personas (nivel de confianza del 95.5% y margen de error del +- 3.16%) que habían adquirido envares antibioticos. Clarificación de la automedicación por tipo de antibiótico, enfermedad a tratar, sexo, edad y nivel de estudios de la población; grado de conocimiento de la posología y duración del tratamiento; adquisición por terceras personas. Grado de conocimiento de los antibióticos y su uso, determinando los motivos de automedicación. Complementariamente análisis de la actitud y comportamiento de los farmaceuticos en relación a la automedicación.

Autor: GRACIA CURRAS ELENA.
Año: 1997.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: PATOLOGIA ANIMAL PROGRAMA DE DOCTORADO: PATOLOGIA ANIMAL: SANIDAD ANIMAL.

Resumen: En el presente trabajo de Tesis se describe el desarrollo de un nuevo test que permite conocer de modo más eficaz la sensibilidad de Staphylococcus aureus a diferentes antibióticos, cuando las bacterias crecen adherida a una superficie y formando biofilms. El test desarrollado utiliza la bioluminiscencia como técnica para determinar la viabilidad bacteriana. Esta técnica, se ajusta a las condiciones del estudio y a la bacteria considerada (S. aureus), en el capítulo 1 de la tesis. La bioluminiscencia se utiliza en la cuantificación bacteriana para discriminar aquellos biomateriales empleados en cirugía ortopédica que favorecen la colonización bacteriana (aleaciones de acero y titanio, Capítulo 2). En este capítulo se describe la evolución de la adherencia a biomateriales en función del tiempo y la cepa, y se demuestra una mayor adherencia cuando las bacterias son formadoras de exopolisacáridos. En el capítulo tercero se describe la metodología empleada para la obtención de biofilms bacterianos comparando diversos soportes, (poliestireno, gelatina, poli-L-lisina y placas preparadas para cultivos celulares), se concluye qe el material más adecuado para el desarrollo de biofilms son las placas de poliestireno con un pretratamiento comercial para favorecer los cultivos celulares. Sobre estas placas, en el capítulo cuarto se desarrolla el test de antibióticos, ensayando la efectividad de 15 antimicrobianos sobre biofilms de 6, 24 y 48 horas de edad, y observando que varios de los antibióticos que eran efectivos en antibiogramas convencionales (microdilución en medio líquido), resultaban ineficaces para eliminar biofilms bacterianos, (amikacina, estreptomicina, gentamicina, tobramicina, eritromicina, clindamicina, ciprofloxacina, ofloxacina). El efecto de los antibióticos sobre el biofilm se visualizó por microscopía electrónica. Con tres antibióticos ensayados in vitro, cefuroxima, tobramicina y vancomicina, se realizó un ensayo in vivo (capítulo 5), para confirmar el poder predictivo del test in vitro. Se provocó una osteomielitis experimental en ratas y se instauró un tratamiento en condiciones cercanas a la terapéutica en humana. Se comprobó que los resultados in vivo corroboraron los datos preliminares in vitro, de modo que la cefuroxima era capaz de resolver la infección, la tobramicina resultaba totalmente ineficaz y la vancomicina adoptaba una posición intermedia. El test propuesto podría ayudar a predecir mejor la eficacia de distintos antimicrobianos, por lo que incumbe en especial a la industria farmacéutica y a laboratorios de bacteriología, de cara al diseño, mejora y/o selección de antibióticos, para combatir infecciones crónicas que afecten a la especie humana y a las especies animales. Puede ser empleado para todas las especies bacterianas que formen biofilms (Staphylococcus, Pseudomonas), es de fácil desarrollo, automatizable y económico, por lo que parece una interesante a aportación en el campo de la microbiología.

Autor: RODRIGUEZ ESPARRAGON FRANCISCO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: CIENCIAS MEDICAS Y DE LA SALUD.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS CLINICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA CLINICA.

Resumen: Los antibióticos aminoglicósidos siguen constituyendo una parte importante del arsenal de fármacos antibacterianos. A pesar de su toxicidad y del desarrollo de nuevos agentes antimicrobianos como fluoroquinolonas, carbapenems y monobactams, los aminoglicósidos continúan en uso clínico. Esto se debe a que carecen de efecto inoculo, a su excelente actividad bactericida frente a gramnegativos y a varios grampositivos, su limitada tendencia al desarrollo de resistencias durante la terapia y porque constituyen la base de las combinaciones de antibióticos. Los aminoglicósidos poseen también un efecto post-antibiótico prolongado y dependiente de la concentración. Todos estos factores, pero especialmente su largo efecto post-antibiótico, indican que los aminoglicósidos pueden ser administrados con eficacia en terapias de dosis única. En modelos animales experimentales, las terapias de dosis única reducen significativamente la toxicidad. Las características anteriormente señaladas y las nuevas estrategias de administración presagian una necesidad futura continuada. Pseudomonas aeruginosa constituye un patógeno oportunista típico responsable de un gran número de infecciones nosocomiales. Presenta también una marcada resistencia a un gran número de agentes antimicrobianos. En Pseudomonas aeruginosa la entrada de los aminoglicósidos se produce a través de un proceso trifásico que sin embargo, presenta algunas características peculiares. En Pseudomonas aeruginosa existen distintos mecanismos de resistencia descritos frente a antibióticos aminoglicósidos: resistencia ribosómica, resistencia por alteraciones en el transporte del antibiótico, resistencia por alteraciones en la permeabilidad de la membrana externa, resistencia adaptativa y resistencia por modificación enzimática. La resistencia ribosómica es un fenómeno mutacional raro y de escasa importancia clínica. La resistencia originada por alteraciones en el transporte es también un fenómeno mutacional que afecta a proteínas transportadoras de la membrana interna y que, en ocasiones, se encuentra asociada a otro tipo de mecanismos de resistencia. Produce resistencia cruzada a todos los antibióticos aminoglicósidos de importancia clínica. La resistencia por alteraciones de la permeabilidad de la membrana externa puede deberse a alteraciones mutacionales o adaptativas que afectan a proteínas de membrana externa y/o al lipopolisacárido (LPS). La resistencia adaptativa es un fenómeno de reciente caracterización que a menudo, es responsable del fracaso de las terapias. La presencia continuada del antibiótico origina una desregulación en la segunda fase de entrada del antibiótico. Esta desregulación se traduce en resistencia a todos los antibióticos aminoglicósidos. La descripción de la resistencia adaptativa ha permitido a su vez, el desarrollo de las estrategias de dosificación únicas, y la aparición de distintos modelos experimentales en los que se generan cepas con resistencia adaptativa, mediante el crecimiento en presencia del antibiótico a dosis subinhibitorias. La resistencia enzimática mediada por la producción de tres clases distintas de enzimas: acetilasas, adenilasas y fosforilasas, es la que mayor importancia clínica posee puesto que, la practica totalidad de los genes de resistencia que codifican para enzimas modificadores, se han descrito en plásmidos o en transposones y pueden por tanto transferirse. Por todo lo anteriormente expuesto hemos considerado interesante analizar, en una población de Pseudomonas spp aisladas de muestras de pacientes del Hospital Insular, que mecanismos de resistencia a aminoglicósidos están presentes y caracterizar si su codificación es cromosómica o extracromosómica. Analizamos la susceptibilidad de los aislados mediante antibiograma y mediante el calculo de las concentraciones mínimas inhibitorias. Determinamos los patrones de resistencia a antibióticos aminoglicósidos presentes en nuestros aislados y serotipamos los aislados resistentes. Los mecanismos de resistencia se han caracterizado a través del ensayo radioenzimático y por medio del fenotipo de resistencia. La caracterización fenotípica se realizó mediante la utilización de 12 discos de antibióticos aminoglicósidos cargados de tal forma, que se compensan las diferencias individuales en la susceptibilidad de cada antibiótico. La interpretación de los resultados se realiza por exclusión comparando la susceptibilidad relativa obtenida frente a un antibiótico considerando los doce discos en conjunto y siguiendo una serie de pasos secuenciales. Se han contrastado los resultados obtenidos con los datos de la hibridación frente a 17 sondas génicas que reconocen genes de enzimas acetilasas, adenilasas y fosforilasas. Comprobamos mediante conjugación y curación la codificación genética de la resistencia. Determinamos la presencia de plásmidos no conjugativos mediante la movilización utilizando dos plásmidos movilizadores diferentes. Realizamos mediante diferentes métodos, la extracción de ADN plasmídico. Los resultados muestran que son tres los mecanismos de resistencia a aminoglicósidos presentes en nuestros aislados: alteraciones en la permeabilidad, modificación enzimática por la acetilasa AAC(6')-II y la combinación AAC(6')-II más una permeabilidad reducida. En todos los aislados, independientemente del mecanismo de resistencia descrito, existe también actividad fosforilasa por la presencia de los enzimas APH(3')-I y APH(3')-II o APH(3')-III. Todos los aislados que presentaban actividad AAC(6')-II hibridaron con la sonda aac(6')-Ib y de forma mas débil con la sonda aac(6')-IIa. Ningún aislado hibridó con las sondas aph(3')-I, aph(3)-II o aph(3')-III. En uno de los aislados resistente por alteraciones de la permeabilidad, fue posible obtener transconjugantes y extraer ADN plasmídico. La caracterización de plásmidos que confieran resistencia a aminoglicósidos no mediada por la producción de enzimas modificadores es un fenómeno muy poco frecuente. Correlacionando los serotipos con los mecanismos de resistencia a aminoglicósidos encontramos que las cepas con serotipo O:6 y las no tipables presentaban como mecanismo de resistencia la disminución de la permeabilidad. Las cepas con serotipo O:11 eran resistentes por alteración de la permeabilidad, por la presencia de AAC(6')-II solo o acompañado de una disminución de la permeabilidad.

Autor: RUIZ BLAZQUEZ JOAQUIN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: INGENIERIA QUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: Se estudio la implicación de diversos factores en el desarrollo de resistencia frente a quinolonas en E. coli, A. baumannii, S. Typhimunium y C. jejuni. Se comprobó que el mecanismo de adquisición de resistencia frente a estos antibióticos más frecuente fue la presencia de mutaciones en la subunidad 1 de la ADN-GIRASA (GyrA), siendo predominantes las mutaciones a nivel del codon-83 de E. coli o del equivalente en los otros microorganismos estudiados. Asimismo se constato que la topoisomerasa IV, en estos microorganismos actua como diana secundaria, mutando, también, la subunidad A(Par C). Mutaciones en G y rB, Par E, la sobreexpresión de sistemas de expulsión activa o problemas de impermeabilidad de membrana, como mucho, tienen un rol testimonial y modulador en el desarrollo de resistencia frente a quinolonas.

Autor: CARDOZA SILVA ROSA ELENA.
Año: 1997.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En este trabajo se ha llevado a cabo la purificación y caracterización de una actividad cefalosporina C acetilhidrolasa a partir de caldos de cultivo de Nocardia lactamdurans. La proteina purificada es un monomero de 72.1 kDa deducido de filtración en gel y de 70.7 kDa a partir de SDS-PAGE. La secuencia de su extremo amino terminal fue: Gly-Gly-Ala-Ala- Pro-Gly-Gly-Pro-Gly-Ala-His-Pro-Leu-Trp-Leu-Pro-Ala-Gly-Lys-Asp. La enzima presento una Km de 7.0 mM frente a CPC y de 8.3 mM frente a 7 -ACA; se trata de una carboxilesterasa del tipo alfabeta-EST sensible a DFP, no termoestable. la formación de la enzima no se vio reprimida por glucosa ni por iones amonio, pero si se observo una actividad mayor en los cultivos cuando se controla el pH del cultivo a 7.0. Tambien se detecto actividad CAH en otras cepas de Nocardia lactamdurans siendo la actividad independiente de la producción de Cefamicina C. La secuencia de la zona adyacente a la agrupación de genes de cefamicina C, revelo la presencia de 3 marcos de lectura, ORF14,ORF15 y ORF16. ORF14 codifica una proteina de Mr deducido de 54.3 kDa que muestra similitud con hidroxilasas que intervienen en la biosintesis de antibioticos poliquetidos. ORF15 tiene un Mr deducido de 30.7 kDa y muestra similitud con N-acetil transferasa implicadas en la acetilacion de antibioticos de la familia de la estreptotricina. El marco de lectura ORF16 no se encuentra completo y la proteina que codifica no presenta similitud con otras proteinas de las bases de datos.

Autor: ADRIAN CABESTRE FRANCISCO.
Año: 1996.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA, MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: HEMOS ESTUDIADO LA RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS MLS EN 58 CEPAS DE ESTREPTOCOCOS: 36 DE ESTREPTOCOCOS BETA-HEMOLITICOS Y 22 ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO VIRIDANS. LOS FENOTIPOS MLS SE DETERMINARON ESTUDIANDO LA SENSIBILIDAD A MACROLIDOS DE 14, 15 Y 16 ATOMOS, CLINDAMICINA, VIRGINIAMICINA Y PRISTINAMICINA POR EL METODO DE DIFUSION EN AGAR. EN LA MAYORIA DE LAS CEPAS RESISTENTES A ERITROMICINA HEMOS DETECTADO UN PATRON DE RESISTENCIA DISOCIADA 14MMR-15MMR-16MMS-LS-SS. EL MECANISMO DE RESISTENCIA A ERITROMICINA MAS ESTUDIADO Y MEJOR CONOCIDO ES LA MODIFICACION DEL SITIO DIANA DEBIDO A LA ACCION DE UNA FAMILIA DE ENZIMAS, LAS METILASAS, QUE IMPIDEN EL ACCESO DEL ANTIBIOTICO A SU SITIO DE UNION EN EL RIBOSOMA. LA METILACION DA LUGAR AL FENOTIPO DE RESISTENCIA MLSB. AUNQUE EL FENOTIPO DE RESISTENCIA MLSB FUE IDENTIFICADO EN PRIMER LUGAR EN AISLADOS CLINICOS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS, EN LA ACTUALIDAD SE HAN CARACTERIZADO UN GRAN NUMERO DE GENES QUE CODIFICAN METILASAS TANTO EN MICROORGANISMOS GRAM-POSITIVOS COMO GRAM-NEGATIVOS. A ESTOS GENES SE LES DENOMINA USUALMENTE ERM, Y EN LOS ESTREPTOCOCOS SE HA ENCONTRADO LA VARIANTE ERMAM. PARA LA DETECCION DE GENES ERM SE UTILIZO LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA CON OLIGONUCLEOTIDOS DEGENERADOS. PARA CLASIFICAR EL PRODUCTO DE LA PCR SE REALIZARON HIBRIDACIONES CON SONDAS ERM ESPECIFICAS. SOLAMENTE FUE ENCONTRADO UN TIPO DE GEN ERM EN TODAS LAS CEPAS QUE DIERON POSITIVA LA PCR: ERMAM. UN SEGUNDO TIPO DE RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS MLSB ES CONSECUENCIA DE LA INACTIVACION DEL ANTIBIOTICO DEBIDA A LA EXISTENCIA DE VARIOS TIPOS DE ENZIMAS INACTIVANTES. ESTAS ENZIMAS SE HAN DETECTADO PRINCIPALMENTE EN LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE Y HASTA LA FECHA, NINGUNA FORMA DE INACTIVACION HA SIDO DETECTADA EN ESTREPTOCOCOS. EL ESTUDIO DE LA INACTIVACION ENZIMATICA SE REALIZO MEDIANTE EL ENSAYO MICROBIOLOGICO DESCRITO POR LAMPSON ET AL. EN NINGUNA DE LAS CEPAS ESTUDIADAS LA RESISTENCIA A ERITROMICINA ERA DEBIDA A LA INACTIVACION DEL ANTIBIOTICO, LO QUE SI HEMOS COMPROBADO EN AISLADOS CLINICOS DE E. COLI. EN 1990, SE DEMOSTRO QUE EN UNA CEPA DE STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS LA RESISTENCIA A MACROLIDOS DE 14 Y 15 ATOMOS (Y NO A LOS DE 16) ERA DEBIDA A UNA BOMBA DE EFLUJO DEPENDIENTE DE ENERGIA. ESTE MISMO AÑO, SE CONSIGUIO AISLAR Y SECUENCIAR EL GEN IMPLICADO, DENOMINANDO A DICHO GEN MSRA. EN 1996, FUE DESCRITO POR PRIMERA VEZ EN ESTREPTOCOCOS UN FENOTIPO DE RESISTENCIA M (MACROLIDOS DE 14 Y 15 ATOMOS) DEBIDO A UN MECANISMO DE EFLUJO ACTIVO. EN ESTE TRABAJO, ESTUDIAMOS LAS BASES GENETICAS DE UN POSIBLE MECANISMO DE EFLUJO ACTIVO EN LAS CEPAS CON FENOTIPO M EN LAS QUE NO SE DETECTARON GENES ERM, ENCONTRANDO EN LOS ESTREPTOCOCOS UN DETERMINANTE DE EFLUJO DE MACROLIDOS, HASTA AHORA NO CARACTERIZADO EN LOS ESTREPTOCOCOS, IDENTICO A LOS ENCONTRADOS EN ESTAFILOCOCOS.

Autor: CLERCH JUAN BERTA .
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y DE MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA BASICA.

Resumen: EN ESTE TRABAJO, SE HA DETERMINADO LA CAPACIDAD MUTAGENICA DE LAS QUINOLONAS (4-QS), ANTIMICROBIANOS INHIBIDORES DE LA DNA GIRASA, EN SALMONELLA TYPHIMURIUM (ST), PROFUNDIZANDO EN SUS MECANISMOS DE MUTAGENESIS. LOS RESULTADOS OBTENIDOS INDICAN QUE LAS 4-QS SON CLARAMENTE MUTAGENICAS EN CEPAS DE S.TYPHIMURIUM TANTO CON DIANAS MUTACIONALES CON PARES DE BASES A.T COMO G.C SIEMPRE Y CUANDO SEAN PROFICIENTES EN LA ENDONUCLEASA UVRABC Y CONTENGAN EL PLASMIDO PKM101, QUE CODIFICA LAS PROTEINAS MUCAB IMPLICADAS EN LA MUTAGENESIS SOS. ADEMAS, LA POTENTE 4-Q CIPROFLOXACINA PRESENTA UN AMPLIO ESPECTRO MUTACIONAL Y LA INDUCCION DE LA MAYORIA DE LOS SUCESOS MUTAGENICOS DEPENDE DE MUCAB, SI BIEN SE REQUIERE QUE ESTAS ESTEN SOBREEXPRESADAS. ESTO EXPLICA PORQUE LAS 4-QS PRESENTAN UNA DEBIL O NULA ACTIVIDAD MUTAGENICA EN ESCHERICHIA COLI (EC). ADEMAS, LOS ESTUDIOS DE MUTAGENESIS REALIZADOS CON UV Y CIPROFLOXACINA, TAMBIEN HAN DEMOSTRADO QUE DEBEN EXISTIR DIFERENCIAS FUNCIONALES ENTRE LAS PROTEINAS MUCAB Y UMUDC(EC) EN LA MUTAGENESIS. POR OTRA PARTE, SE HAN CONSTRUIDO Y CARACTERIZADO DOS MUTANTES DE S. TYPHIMURIUM (LEXA1 Y LEXA2) QUE PRESENTAN UN FENOTIPO LEXA(DEF), SI BIEN LOS GENES SOS PARECEN ESTAR MAS DESREPRIMIDOS EN EL MUTANLEXA2 (N-TERMINAL) QUE EN LEXA1 (C-TERMINAL). LOS RESULTADOS DE MUTAGENESIS Y SUPERVIVENCIA INDICAN QUE LAS PROTEINAS MUCAB Y UMUDC(EC) PARTICIPAN EN LA REPARACION MUTAGENICA DEL DAÑO EN EL DNA EN LEXA1 PERO NO EN LEXA2(DEF). EL POSTERIOR ESTUDIO DE ESTOS MUTANTES PUEDE APORTAR UN MAYOR CONOCIMIENTO DE LA REPARACION SOS EN GENERAL Y DE ESTE MECANISMO EN S. TYPHIMURIUM EN PARTICULAR. EN ESTE TRABAJO, TAMBIEN SE HA ESTUDIADO EL MECANISMO POR EL CUAL EL PLASMIDO PKM101 PROMUEVE LA RESISTENCIA A LA CIPROFLOXACINA EN LA CEPA DE E.COLI AB1157 CUANDO ESTA CRECIENDO EN MEDIO MINIMO. EL FRAGMENTO ASNI-NDEI DE PKM101 QUE CONTIENE LOS GENES KORB, TRAL, KORA Y TRAM ES SUFICIENTE PARA CONFERIR RESISTENCIA. ADEMAS, ESTA REGION PLASMIDICA PRODUCE UNA ACUSADA DISMINUCION DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE AB1157 EN MEDIO MINIMO (FENOTIPO S10) Y SE HA DEMOSTRADO QUE ELLO ES LA CAUSA DE LA RESISTENCIA A LA CIPROFLOXACINA.

Autor: FIERRO FIERRO FRANCISCO .
Año: 1995.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ECOLOGIA, GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA DE MICROORGANISMOS Y DE PLANTAS.

Resumen: LOS TRES GENES RESPONSABLES DE LA BIOSINTESIS DE PENICILINA EN PENICILLIUM CHRYSOGENUM SON EL PCBAB, PCBC Y PENDE. EN CEPAS DE ELEVADA PRODUCCION DE PENICILINA ESTOS GENES SE ENCUENTRAN REPETIDOS EN VARIAS COPIAS. EN ESTAS TESIS DOCTORAL HEMOS LOCALIZADO LOS GENES BIOSINTETICOS EN EL CROMOSOMA I DE P. CHRYSOGENUM Y EN EL CROMOSOMA II DE P. NOTATUM. ASI MISMO HEMOS CARACTERIZADO LA REGION DEL GENOMA DONDE LOS TRES GENES SE ENCUENTRAN LOCALIZADOS DEMOSTRANDO QUE TODAS LAS COPIAS REPETIDAS DE DICHA REGION SE ENCUENTRAN EN UNA DISPOSICION DE REPETICIONES EN TANDEM. EN LOS EXTREMOS DE ESTA REGION DE DNA AMPLIFICADA APARECE UNA SECUENCIA REPETIDA DE SEIS NUCLEOTIDOS: TTTACA, SOBRE LA QUE SE PRODUCE UN FENOMENO DE RECOMBINACION QUE ORIGINA LA AMPLIFICACION. VARIOS MUTANTES QUE CARECEN DE LOS TRES GENES BIOSINTETICOS FUERON TAMBIEN ESTUDIADOS. EN LOS EXTREMOS DE LA REGION DELECIONADA DE DICHOS MUTANTES APARECE UNA SECUENCIA QUE ES LA COMPLEMENTARIA REVERSA DE LA MENCIONADA TTTACA.