BACTERIOFAGIA

Autor: GARCÍA ALJARO CRISTINA.
Año: 2003.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Las cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga han emergido recientemente como patógenos humanos, provocando graves enfermedades como la colitis hemorrágica y el síndrome urémico hemolítico. Los principales factores de virulencia de estas cepas lo constituyen unas potentes citotoxinas conocidas como toxinas Shiga (codificadas por genes stx en el genoma de bacteriófagos atemperados), una proteína de membrana externa (intimina), responsable de la adhesión de la bacteria al epitelio intestinal y una enterohemosilina. La transmisión horizontal de los genes stx mediada por bacteriófagos, podría explicar la elevada diversidad de serotipos de E.coli portadores de estos genes. El objetivo de la tesis doctoral fue el análisis de la prevalencia del gen stx2 en ambientes acuáticos y la detección, el aislamiento y la caracterización de las bacterias portadoras del gen, así como el estudio de los bacteriófagos portadores del gen stx2 integrados en estas bacterias. Se diseñó un método basado en la combinación del NMP y la PCR anidada utilizando cebadores específicos para la subunidad A del gen stx2 para el estudio de prevalencia. Se analizaron aguas residuales crudas municipales y de mataderos. El gen stx2 fue detectado en todas las muestras, observándose una relación constante entre el número estimado de cepas stx2 estimado independientemente del origen de la muestra. Se caracterizaron 114 cepas portadoras del gen stx2 aisladas mediante el métodos de la hibridación colonial utilizando agar chromocult y una sonda específica el gen stx2. Asímismo, se aislaron 72 cepas de E.coli O157 utilizando la técnica de la separación inmunomagnética, la siembra en el medio selectivo CT-SMAC y la detección inmunológica del antígeno O157. También se analizó el patrón de digestión del lipopolisacárido. Se seleccionaron un total de 65 cepas portadoras del gen stx2 y 28 cepas O157, como representantes. Todas las cepas fueron clasificadas como E.coli mediante la galeria API 20E o secuenciación del 16S rDNA. Estas cepas fueron serotipadas detectándose 36 serotipos, algunos de los cuales no habían sido identificados previamente como portadores del gen stx2. Posteriormente, se analizó la resistencia a diferentes antibióticos siendo las sulfonamida, tetraciclina, cloramfenicol, trimetroprim y esterptomicina los antibióticos que presentaron mayor número de resistencias. Todas las cepas era portadoras de una o dos de las variantes del gen stx2 descritas (c, d, e y g). Respecto a otros factores de virulencia se detectó el gen stx1 en el 28% y 20% de las cepas aisladas de agua residual urbana y agua residual de matadero bovino respectivamente. El fen eae fue detectado en las cepas E.coli O157:H7 mientras que el gen codificante para la enterohemolisina fue detectado en el 7%, 46% y el 11% de agua residual urbana, matadero bovino, y agua residual de origen mixto, respectivamente. El gen saa fue detectado en 5 cepas. Se detectó la producción de proteían Stx2 en algunas de las cepas aisladas, mayoritariamente aquellas de origen bovino. En el caso de la Stx1 un mayor porcentaje de cepas que expresaban el gen. La mayoría de las cepas aisladas presentaron bacteriófagos inducibles algunos de los cuales eran portadores del gen stx2 (mayoritariamente cepas aisladas de agua residual de matadero bovino). Los bacteriófagos portadores de distintas variantes del gen stx2 presentaron variabilidad en cuanto a su capaciedad de infectar a diferentes cepas huésped. Además presentaron variabilidad en los patrones RFLP y sitio de integración. Estos bacteriófagos presentaron dos morfologías diferentes; cápsides icosaédricas hexagonales con colas cortas y cápsides alargadas con colas largas. La diversidad de bacteriófagos portadores del gen stx2 observada podría contribuir a la dispersión del gen stx2 entre las diferentes poblaciones bacterianas.

Autor: RODRIGUEZ LAZARO A. DAVID.
Año: 2003.
Universidad: GIRONA.
Centro de lectura: ESCUELA POLITECNICA SUPERIOR.
Centro de realización: ESCUELA POLITECNICA SUPERIOR (UNIVERSIDAD DE GIRONA).

Resumen: La presencia de microorganismos patógenos en alimentos es uno de los problemas esenciales en salud pública, y las enfermedades producidas por los mismos es una de las causas más importantes de enfermedad. Por tanto, la aplicación de controles microbiológicos dentro de los programas de aseguramiento de la calidad es una premisa para minimizar el riesgo de infección de los consumidores. Los métodos microbiológicos clásicos requieren, en general, el uso de pre-enriquecimientos no-selectivos, enriquecimientos selectivos, aislamiento en medios selectivos y la confirmación posterior usando pruebas basadas en la morfología, bioquímica y serología propias de cada uno de los microorganismos objeto de estudio. Por lo tanto, estos métodos son laboriosos, requieren un largo proceso para obtener resultados definitivos y, además, no siempre pueden realizarse. Para solucionar estos inconvenientes se han desarrollado diversas metodologías alternativas para la detección identificación y cuantificación de microorganismos patógenos de origen alimentario, entre las que destacan los métodos inmunológicos y moleculares. En esta última categoría, la técnica basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se ha convertido en la técnica diagnóstica más popular en microbiología, y recientemente, la introducción de una mejora de ésta, la PCR a tiempo real, ha producido una segunda revolución en la metodología diagnóstica molecular, como pude observarse por el número creciente de publicaciones científicas y la aparición continua de nuevos kits comerciales. La PCR a tiempo real es una técnica altamente sensible -detección de hasta una molécula- que permite la cuantificación exacta de secuencias de ADN específicas de microorganismos patógenos de origen alimentario. Además, otras ventajas que favorecen su implantación potencial en laboratorios de análisis de alimentos son su rapidez, sencillez y el formato en tubo cerrado que puede evitar contaminaciones post-PCR y favorece la automatización y un alto rendimiento. En este trabajo se han desarrollado técnicas moleculares (PCR y NASBA) sensibles y fiables para la detección, identificación y cuantificación de bacterias patogénicas de origen alimentario (Listeria spp., Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis y Salmonella spp.). En concreto, se han diseñado y optimizado métodos basados en la técnica de PCR a tiempo real para cada uno de estos agentes: L. monocytogenes, L. innocua, Listeria spp. M. avium subsp. paratuberculosis, y también se ha optimizado y evaluado en diferentes centros un método previamente desarrollado para Salmonella spp. Además, se ha diseñado y optimizado un método basado en la técnica NASBA para la detección específica de M. avium subsp. paratuberculosis. También se evaluó la aplicación potencial de la técnica NASBA para la detección específica de formas viables de este microorganismo. Todos los métodos presentaron una especificidad del 100 % con una sensibilidad adecuada para su aplicación potencial a muestras reales de alimentos. Además, se han desarrollado y evaluado procedimientos de preparación de las muestras en productos cárnicos, productos pesqueros, leche y agua. De esta manera se han desarrollado métodos basados en la PCR a tiempo real totalmente específicos y altamente sensibles para la determinación cuantitativa de L. monocytogenes en productos cárnicos y en salmón y productos derivados como el salmón ahumado y de M. avium subsp. paratuberculosis en muestras de agua y leche. Además este último método ha sido también aplicado para evaluar la presencia de este microorganismo en el intestino de pacientes con la enfermedad de Crohn, a partir de biopsias obtenidas de colonoscopia de voluntarios afectados. En conclusión, este estudio presenta ensayos moleculares selectivos y sensibles para la detección de patógenos en alimentos (Listeria spp., Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis) y para una rápida e inequívoca identificación de Salmonella spp. La exactitud relativa de los ensayos ha sido excelente, si se comparan con los métodos microbiológicos de referencia y pueden ser usados para la cuantificación de tanto ADN genómico como de suspensiones celulares. Por otro lado, la combinación con tratamientos de preamplificación ha resultado ser de gran eficiencia para el análisis de las bacterias objeto de estudio. Por tanto, pueden constituir una estrategia útil para la detección rápida y sensible de patógenos en alimentos y deberían ser una herramienta adicional al rango de herramientas diagnósticas disponibles para el estudio de patógenos de origen alimentario.

Autor: MUNIAIN MUJIKA IDOIA .
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACUTLAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Este trabajo incluye un amplio estudio ambiental para evaluar el riesgo de presencia de virus patógenos humanos en moluscos bivalvos, observando la distribución y presencia de virus que pueden afectar a la salud humana (enterovirus, virus de la hepatitis A y adenovirus) en varios tipos de moluscos con diferentes grados de contaminación y estudiando la utilidad de bacteriófagos de bacterias entéricas (fagos de Bacteroides fragilis, fagos F-específicos de ARN y colifagos somáticos) como potenciales microorganismos modelo de contaminación fecal vírica en este tipo de alimentos. Con esta finalidad, en primer lugar, se evaluaron diferentes métodos de extracción y elución vírica en moluscos, considerando el más eficaz tanto para la recuperación de bacteriófagos como para virus humanos. Una vez fijada la metodología más adecuada, se analizó la distribución de los niveles de contaminación vírica y se determinaron los niveles de potenciales microorganismos índices de contaminación fecal vírica a lo largo de un ciclo biológico de muestras de mejillones y ostras recolectadas en áreas con distintos grados de contaminación. Finalmente, completando el estudio ecológico de estos virus y bacteriófagos, se estudiaron las cinéticas de depuración de los distintos grupos de microoorganismos en una planta depuradora con condiciones controladas para determinar cual era el mejor candidato para indicar la eficacia de un proceso de depuración.

Autor: DURÁN PINEDO ANA EMILIA SEGUNDA .
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: En la presente memoria se evaluó el comportamiento de tres grupos de bacteriófagos e indicadores clásicos de depuración y calidad de aguas. Por lo tanto ofrece una visión comparativa entre indicadores en iguales sistemas y muestras. El análisis ser realizó en procesos naturales y artificiales. En la primera sección se analiza su presencia y persistencia en aguas residuales, dado que son la base para los análisis posteriores. De esta sección se concluye que los niveles de bacteriófagos son constantes en las aguas residuales de Cataluña y que factores como la estación climática, el origen de la muestra y el tamaño de la población no influyen en el nivel de excreción de los mismos. Se analizan además sus niveles de reducción en cinco EDAR diferentes ellas son de tipo físico-químico, biológico por lodos activados y sistema de lagunaje. De esta sección se puede concluir que la tendencia a la inactivación en todos los sistemas es la misma: CF>ENT>SOM>F-RNA>BfRYC>CSR. En la secció 2 se analizan sistemas de fluviales que muestran que los F-RNA son muy sensibles a niveles altos de pH y aunque las tendencias de inactivación son mayores durante el verano, este orden de inactivación es el mismo durante el invierno. El análisis del sistema de embalses se realizó en sentido vertical para ubicar la posición de la termoclina, dado que en ella se presentan niveles inferiores de calidad en el agua. El análisis horizontal muestra que la existencia de cadenas de embalse mejora considerablemente la calidad final de las aguas embalsadas. El orden de inactivación de los indicadores es el siguiente: CF>F-RNA>SOM>BfRYC>ENT>CSR. El análisis de la inactivación integrada en todos los indicadores muestra que el orden de los tratamientos es el siguiente: T. Primario-Floculación con cloruro-Cal-Río invierno T. Secundario-Río invierno-Lagunaje-Embalses. Se analizó también el nivel de contaminación de aguas subterráneas en Colombia y Cataluña. En las primeras se encontró niveles altos de indicadores y esta información extrapolable a patógenos virales que pueden superar las barreras suelo-acuífero. Por último se realizaron experiencias in situ y e in vitro para analizar las reducciones frente a diferentes dosis de cloro. En todos los casos el orden fue el mismo, siendo mas sensibles los coliformes fecales y mas resistentes los BfRYC. En cuanto a la ozonización los bacteriófagos son mas resistentes que indicadores bacterianos, aunque las dianas de actuación entre cloro y ozono son diferentes. Del estudio anterior se desprende que los bacteriófagos muestran resistencias mas similares a la de los patógenos y frente a la falsa seguridad a la cual nos exponen el grupo de los coliformes fecales es deseable revisar este concepto para eliminar el riesgo potencial

Autor: SCHAPER MÉLANIE.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA DE BARCELONA.

Resumen: Este trabajo esta centrado en el estudio de los genotipos de bacteriófagos F-específicos de ARN y su utilidad potencial para discriminar el origen de la contaminación fecal (humano o no humano) en muestras ambientales. En primer lugar, se determinó el mejor método de detección tanto en lo que se refiere a la cepa huésped como al método de reconocimiento genómico para estudiar la diversidad de dichos genotipos en muestras contaminadas fecalmente. Así, se comparó la eficacia de las cepas Salmonella typhimurium WG49 y Escherichia coli HS(pFamp)R para detectar y cuantificar los diferentes genotipos de los bacteriófagos F-específicos de ARN por el método de hibridación de calvas. La sensibilidad de dicho método fue también comparada con la sensibilidad de la RT-PCR seguida por una transferencia del ADN amplificado y hibridación (Southern blot), para detectar los bacteriófagos de ARN que pertenecen al genotipo III. En segundo lugar queríamos estudiar la distribución de genotipos en muestras de ambos orígenes (humano y no humano). Por esta razón, se determinó la presencia de dichos bacteriófagos y sus genotipos de heces humanas y animales, en aguas residuales predominantemente contaminadas por excretas animales o bien humanas. Se encontraron mayoritariamente los genotipos II y III en aguas residuales de hospital y domésticas. Las aguas residuales de mataderos contuvieron mayoritariamente los genotipos I y IV. El predomiio de los genotipos II y III en aguas residuales tratadas, lo que sugiere una resistencia mayor de los genotipos I y II frente a condiciones ambientales desfavorables. Los cambios de genotipos predominantes observados en las aguas tratadas sugirieron la conveniencia de estudiar la persistencia y la resistencia de cada genotipo ante procesos de inactivación. Por ello, se comparó la resistencia a diferentes procesos de inactivación de miembros de los cuatro genotipos de baceteriófagos F-específicos de ARN aislados de muestras ambientales. Se evaluó el efecto de la inactivación natural en agua dulce, de la cloración, del amoniaco, de pHs extremos, de la temperatura y de la concentración en sal, sobre unas mezclas de bacteriófagos F-específicos de ARN pertenecientes a los cuatro genotipos. La inactivación natural en agua de río se estudió mediante incubación in situ de los bacteriófagos dentro de unos tubos de diálisis. Después de varios días, los bacteriófagos del genotipo I mostraron una mayor persistencia, la cual fue significadamente diferente a la persistencia de los genotipos II, IV y III. El patrón de resistencia de los bacteriófagos perteneciendo a los cuatro genotipos frente a diversos tratamientos fue similar sea cual sea el tipo de tratamiento. En todos los casos, los bacteriófagos del genotipo I experimentaron la mayor persistencia, seguidos por los genotipos II, III y IV. En la práctica, estas diferencias de resistencia podrían enmascarar el verdadero origen de aguas tratadas o que sufrieron una inactivación natural. Por consiguiente esta diferencia de comportamiento podría excluir los bacteriófagos F-específicos de ARN como candidatos para discriminar el origen de la contaminación fecal.

Autor: RODRIGUEZ CANO FRANCISCO JOSE.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD CORDOBA.

Resumen: El aumento del número de casos de tuberculosis a nivel mundial, el incremento de las resistencia, la aparición de fomras multirresisitentes así como el problema añadido de la coinfección VIH-Tuberculosis son todo ellos factores que justifican actuaciones periódicas que aporten una valoración de la situación actual de esta enfermedad. Para un mejor seguimiento de la tuberculosis, es importante conocer los mecanismos de acción de los fármacos antituberculos, así como de los mecanismos de resistencia que desarrollan las micobacterias ante estos. La determinación de la resistencia de los cultivos de M. Tuberculosis recibidos en Centro de Referencia (CR) de micobacterias de Córdoba durante los años 1993-1998 para los fármacos Estreptomicina, Rifampicina, Ethambutonol e Isoniazida; la valoración de estos resultados con los obtenidos en este mismo CR en el decenio previo; la determinación de la multirresistencia (MDR); así como la determinación de los resultados obtenidos en cultivos procedentes de portadores VIH positivo y su valoración con respecto a los datos obtenidos en la totalidad de la muestra constituyen los objetivos. Para la determinación del patrón de sensibilidad se empleó el sistema BACTEC 460 TB según protocolo estandarizado. Los resultados obtenidos son expuestos y valorados con referencias bibliografícas procedente de estudios nacionales, internacionales y de otros CR. Las conclusiones manifiestan, con la necesidad de la interpretación de los resultados con la precaución que debe suponer las características de un CR, un aresistencia algo superior a la obtenida en otros estudios; el ligero descenso en los valores de resistencia con relación al decenio previo; una MDR algo superior a la obtenida en otros estudios.Con relación a los resultados en VIH presentan valores de resistencia similares a los de la totalidad de la muestra.

Autor: PEREA-MILLA LOPEZ M. DEL CARMEN.
Año: 1999.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE CORDOBA.

Resumen: Helicobacter pylori está considerado como el principal agente etiológico en los cuadros de gastritis y úlcera peptica. El objetivo de la investigación es: 1) Estudio de la prevalencia de H. Pylori en población con patología gastroduodenal 2) Estudio de sensibilidad y resistencias mediante E-test de determinados antimicrobianos 3) comparación de sensiblidades con cepas de H.pylori aisladas de Antro y Cuerpo. Para conseguir dichos objetivos, se utilizaron muestras de biopsia gástica cultivadas en distintos medios y se realizó el antibiograma mediante E-test. sE realizó analisis estadistico comparación de sensibilidades mediante test de Wilcoxon. El crecimiento de flora normal intestinal es más habitual en Antro. El crecimiento de flora normal intestinal es más habitual en Antro. El crecimiento de H. Pylori adultos con respecto a los niños.Con respecto a la edad H. Pylorti se triplica en los adultos con respecto a los niños. Con respecto al género no hay diferencias estadísticamente significativas. De los nueve antimicrobianos estudiados, los bactalactámicos se muestran más activos inhibiendo a H. Pylori a CMI bajas. Entre los aminoglicósidos presentan cifras próximas a los niveles sericos. Las quinolonas presentan algunas cepas resistentes. Conclusiones: 1) La obtención microaerofilia 2) Las biopsias de Cuerpo son mas rentables que las de Antro pues se consigue mayor frecuencia de H. Pylori, obteniendose además en gran número de casos en cultivo puro 3) El porcentaje de casos positivos de H. Pylori aumenta casi el triple con la edad 4) Tanto en niños como en adultos no varía la frecuencia de aislamiento de H. Pylori en biopsias en razón de sexo 5) No se han detectado resistencias a los batalactámicos estudiados y si aunque en muy escasos número a las quinolonas ensayadas 6) Antimicrobianos habitualmente empleados en otras patologías pueden ser activos frente a H. Pylori por lo que dependiendo de su actividad y duración del tratamiento podrían afectar a la población de H. Pylori en el tracto gastrointestinal 7)Las sensibilidades de los aislamiento no difieren entre antro y cuerpo.

Autor: CARBONELL CODINA JAVIER.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En este trabajo se explora el uso de P22 como herramienta para la presentación de epítopos heterólogos. Como proteína "carrier" se ha utilizado la proteína de la cola de P22 a TSP, y como ejemplo de dominio heterólogo un péptido inmunodominante, de 23 aa de longitud, perteneciente al virus de la fiebre aftosa. Se han obtenido diferentes fusiones entre TSP y el péptido viral, las cuales fueron estudiadas desde el punto de vista de producción, degradación y acumulación en forma de cuerpos de inclusión en un sistema bacteriano. Además, también se ha estudiado la resistencia a desnaturalización por temperatura. Finalmente se llevaron a cabo estudios de antigenicidad de las proteínas obtenidas. Los resultados demuestran que la proteína TSP admite péptidos de hasta 23 aa de longitud fusionados en sus extremos amino- y carboxiterminal, sin detrimento de su actividad biológica. El péptido está, además, expuesto al solvente y es accesible a anticuerpos; no solo en TSP libre sino también cuando ésta se encuentra formando parte de la cápside del virus bacteriofago.

Autor: SANCHEZ SANCHEZ ROBERTO.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DE MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA. UNIVERSIDAD DE VALENCIA. PROGRAMA DE DOCTORADO: 275-A "MICROBIOLOGIA".

Resumen: Estudio retrospectivo de casos de infección (I) por Staphylococcus aureus aislados entre octubre 1993 y diciembre 1996 en el Hospital Dr. Peset Valencia. Diferenciación de origen nosocomial (N) o comunitario (C). Valoración de factores de riesgo de IN por SARM. Análisis fenotípico (antibiotipo) y genotípico (AP-PCR-OPA 11). Aplicación de marcadores para valorar I según Servicios y circulación intraH. Eficacia diagnóstica (ED) de métodos para detección de oxacilín-R. Se describe incremento progresivo de casos con mantenimiento de tasas anuales de incidencia. La relación global SARM/SASM fue de 3,8/1 aunque con descenso progresivo de casos SARM. Antibioterapia previa, IHQ, estancia prolongada y maniobras invasivas se consideran las variables principales en el perfil del paciente con riesgo. El sist. automatizado se considera no válido para detección de oxa-R (VPP 0.84) y difusión con disco ED 0,99. Todas las cepas fueron S a glucopéptidos (G) y SXT. El antibiotipo principal entre SASM presentó sólo R a penicilina y, entre SARM al inicio sólo S a G y SXT (R1 cambiando en el 2 periodo a S además a rifampicina y fosfomicina (R2). El clon C1 (fenotipo R1) fue mayoritario (64%) entre SARM, implantado en UCI con circulación intraH. desapareciendo en 1996, donde C2 circunscrito a Cirugía Vascular (fenotipo R2) predomina.

Autor: LASOBRAS GARCIA JULIO.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA.

Resumen: COMO MICROORGANISMOS MODELO DE VIRUS ENTERICOS HUMANOS SE HAN PROPUESTO TRES GRUPOS DE BACTERIOFAGOS: LOS COLIFAGOS SOMATICOS, LOS COLIFAGOS F-ESPECIFICOS (ARN) Y LOS FAGOS DE B. FRAGILIS. LOS NIVELES DE ESTOS TRES GRUPOS DE FAGOS SE DETERMINARON EN MUESTRAS AMBIENTALES DE TIPO SOLIDO: MEJILLONES RECOGIDOS EN AREAS CONTAMINADAS Y MEJILLONES DE MERCADO, SEDIMENTOS DE RIOS CONTAMINADOS Y LODOS DE PLANTAS DEPURADORAS DE AGUA RESIDUAL. ASIMISMO, SE LLEVO A CABO UN ESTUDIO DE LA MORFOLOGIA DE LOS TRES GRUPOS DE FAGOS EN AGUA RESIDUAL Y EN MUESTRAS QUE HABIAN SUFRIDO PROCESOS DE INACTIVACION NATURAL O DE TRATAMIENTOS DE AGUAS. SE COMPROBO QUE LOS FAGOS DE B. FRAGILIS PRESENTARON UNA MAYOR RESISTENCIA QUE LOS OTROS DOS GRUPOS DE FAGOS, ESPECIALMENTE CON RESPECTO A LOS FAGOS ARN F-ESPECIFICOS, FRENTE A LA INACTIVACION NATURAL Y FRENTE A PROCESOS DE TRATAMIENTO DE AGUAS. ASIMISMO LOS FAGOS DE BACTEROIDES FRAGILIS MOSTRARON UNA MAYOR HOMOGENEIDAD MORFOLOGICA QUE LOS OTROS DOS GRUPOS DE FAGOS.

Autor: MUNIESA PEREZ M. TERESA.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA.

Resumen: El estudio estuvo dirigido a la detección y enumeración de bacteriófagos portadores del gen de la Stx 2 en aguas residuales del área urbana de Barcelona. La metodología estuvo basada en la amplificación del gen de la Stx 2 por técnicas de PCR. El número de estos fagos se estimó entre 1-10 fagos infecciosos para E.coli 0157:H7 en aguas residuales de la zona de Barcelona. Adicionalmente se detectó la presencia de los fagos portadores del gen de la Stx 2 en aguas de diferentes orígenes geográficos, demostrándose que no se trataba de un hecho aislado. Los estudios de persistencia realizados, demostraron que estos fagos persisten mejor ante la inactivación natural y ante procesos de tratamiento (cloración y pasteurización) que E.coli 0157:H7. Asimismo, el estudio realizado sobre la inactivación diferencial de diferentes morfologías de colifagos somáticos demostró que los fagos Siphoviridae persisten mejor ante procesos de inactivación que otras morfologías de bacteriófagos. Los fagos portadores del gen de la Stx 2 pertenecen a la morfología Siphoviridae. La presencia de fagos-Stx2 en elevada cantidad en aguas residuales asi como su elevada persistencia sugiere que actúan como reservorio del gen Stx 2 en el medio ambiente.

Autor: HERRERO VAZQUEZ MONICA.
Año: 1995.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL (AREA DE MICROBIOLOGIA) PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: LAS BACTERIAS LACTICAS CONSTITUYEN UNA FAMILIA HETEROGENEA DE MICROORGANISMOS QUE COMPARTEN LA CAPACIDAD DE CONVERTIR LOS CARBOHIDRATOS FERMENTABLES EN ACIDO LACTICO. ESTUDIOS RECIENTES DEMOSTRARON QUE LAS BACTERIAS LACTICAS DOMINANTES EN QUESOS FRESCOS Y AZULES QUE SE PRODUCEN ARTESANALMENTE EN ASTURIAS SON LACTOBACILOS MESOFILOS, RAZON POR LA CUAL NOS PARECIO INTERESANTE EL AISLAMIENTO DE BACTERIOFAGOS PRESENTES EN ESTOS QUESOS, UTILIZANDO ESTOS MICROORGANISMOS COMO INDICADORES. ENTRE LOS FAGOS AISLADOS EN NUESTRO LABORATORIO SE ESCOGIO EL FAGO 393-A2 PARA PROFUNDIZAR EN EL ESTUDIO DE SU BIOLOGIA PORQUE ES TEMPERADO, INFECTA A LACTOBACILLUS CASEI ATCC 393, UNA CEPA RELEVANTE TECNOLOGICAMENTE POR SU CAPACIDAD DE PRODUCIR DIACETILO, QUE ADEMAS ES LA CEPA TIPO DE LA ESPECIE. ESTE OBJETIVO GENERAL SE CONCRETO EN LOS SIGUIENTES PUNTOS: I) ESTUDIO GENERAL DE LOS VIRIONES: OBSERVACION DE SU MORFOLOGIA POR MICROSCOPIA ELECTRONICA, ANALISIS DE LAS PROTEINAS ESTRUCTURALES DE LA CAPSIDA Y CARACTERIZACION DEL GENOMA FAGICO. II) ESTUDIOS FUNCIONALES (RANGO DE HUESPED, OBTENCION DE LISOGENOS Y CURVA DE DESARROLLO LITICO EN UN PASO). III) LOCALIZACION Y CARACTERIZACION DE GENES DE EXPRESION TEMPRANA Y TARDIA EN EL GENOMA VIRAL.

Autor: MENCIA CABALLERO MARIO.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA PROTEINA P4 ACTIVA EL PROMOTOR A3 DEL BACTERIOFAGO 0 29. EN LA REGION CARBOXILO DE P4 EXISTEN RESIDUOS CRITICOS PARA INTERACCIONAR CON LA RNA POLIMERASA DEL HUESPED Y ACTIVAR LA TRANCRIPCION, EL MAS IMPORTANTE DE ESTOS ES LA ARGININA 120. EN LA MISMA REGION DE P4 EXISTEN AMINOACIDOS QUE SON IMPORTANTES, COMO CONJUNTO, PARA EL MANTENIMIENTO DE LA CURVATURA INDUCIDA POR P4. ESTOS SERIAN R116, R118, R120 Y K122. EL EFECTO DE LA CURVATURA SE MANIFIESTA SOBRE LOS MUTANTES MULTIPLES. LA PROTEINA P4 SE ENCUENTRA EN FORMA DE TETRAMERO. LA PROTEINA P4 INTERACCIONA A TRAVES DE SU R120 CON EL DOMINIO CARBOXILO TERMINAL (CTD) DE LA SUBUNIDAD ALFA DE LA RNA POLIMERA DE BACILUS SUBTILIS.

Autor: LLARCH ALFONSO ANGELS.
Año: 1994.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENT DE MICROBIOLOGIA I PARASITOLOGIA SANITARIES. FACULTAT DE FARMACIA UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: EL ESTUDIO LLEVADO A CABO EN ESTA TESIS DOCTORAL SE HA DESARROLLADO A PARTIR DE LAS MUESTRAS DE AGUAS Y SEDIMENTOS CONTENIDAS EN VIALES PROCEDENTES DE TRES PUNTOS DE ISLA DECEPCION (SHETLAND DEL SUR, ANTARTIDA): CALETA BALLENEROS, BASE ARGENTINA Y CERRO CALIENTE.EL PRINCIPAL OBJETIVO DE ESTA TESIS DOCTORAL COMPRENDE EL ESTUDIO TAXONOMICO DE LAS MUESTRAS TOMADAS DURANTE LAS EXPEDICIONES CIENTIFICAS REALIZADAS EN LA AMTARTIDA, CORRESPONDIENTES AL VERANO AUSTRAL 1989-1990. EL PROCEDIMIENTO SEGUIDO DURANTE EL DESARROLLO DE ESTE ESTUDIO HA SIDO EL SIGUIENTE: 1 AISLAMIENTO Y OBTENCION DE CULTIVOS PUROS DE LOS DIFERENTES MICROORGANISMOS TERMOFILOS CONTENIDOS EN LAS MUESTRAS. 2 ESTUDIO Y CARACTERIZACION DE LA MORFOLOGIA, BIOQUIMICA, FISIOLOGIA Y ULTRAESTRUCTURA DE CADA BIOTIPO. A PARTIR DE LOS DATOS PRELIMINARES OBTENIDOS SE HAN REALIZADO LOS ESTUDIOS TAXONOMICOS ADECUADOS PARA LLEGAR A LA IDENTIFICACION COMPLETA DE CADA AISLAMIENTO. 3 DADA LA SINGULARIDAD DE ESTOS AISLAMIENTOS Y SU POSIBLE INTERES APLICADO EN EL CAMPO INDUSTRIAL, SE HA CREIDO OPORTUNO REALIZAR UN ESTUDIO PARALELO DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA PRESENTADA POR ESTOS AISLAMIENTOS. DEL TOTAL DE LAS MUESTRAS PROCESADAS PARA EL AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS TERMOFILOS SE HAN OBTENIDO 6 BIOTIPOS DIFERENTES: AL 1, AL 2, AL 3, AL 4, AL 5 Y AL 6 CON UNAS TEMPERATURAS OPTIMAS DE CRECIMIENTO DE 65 GRADOS C PARA LOS 3 PRIMEROS, DE 70 GRADOS C PARA AL 4 Y DE 60 GRADOS C PARA LOS DOS ULTIMOS. TODOS LOS AISLAMIENTOS SON BACILOS, GRAM POSITIVOS, AEROBICOS O ANAEROBICOS FACULTATIVOS, MOVILES Y FORMADORES DE ENDOSPORAS, CARACTERISTICAS QUE LOS INCLUYE DENTRO DEL GENERO BACILLUS. EL BIOTIPO AL 1 SE PRESENTA COMO UNA CEPA TERMOFILA AFIN AL GRUPO DE BACILLUS LICHENIFORMIS. EN EL DENDROGRAMA FORMA UN CLUSTER CON UN 85% DE SIMILARIDAD CON DOS REPRESENTANTES DE ESTE TAXON. LA BETA-GLUCANASA PURIFICADA DE AL 1 PRESENTA DOS TIPOS DE ACTIVIDADES ENZIMATICA (ENDO-BETA-1,4-GLUCANASA Y ENDO-BETA-1,3-1,4-GLUCANASA) INTERESANTES DESDE EL PUNTO DE VISTA APLICADO. LA ACTIVIDAD HIROLITICA FRENTE A LOS DOS TIPOS DE SUSTRATOS SUPONE UNA VENTAJA PORQUE PERMITIRIA UTILIZAR UN SOLO ENZIMA EN LUGAR DE DOS. EL BIOTIPO AL 6 QUEDA CLASIFICADO COMO UNA CEPA TERMOFILA DE BACILLUS MEGATERIUM CON EL QUE FORMA CLUSTER CON UN 86.5% DE SIMILARIDAD. LOS BIOTIPOS AL 3 Y AL 4 HAN FORMADO CLUSTER CON BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS ATCC 12980 CON UNOS PORCENTAJES DE SIMILARIDAD DE 59.6% Y 58.8% RESPECTIVAMENTE. DADO QUE ESTOS VALORES DE SIMILARIDAD SON BAJOS NO SE HA CREIDO OPORTUNO REALIZAR LAS CORRESPONDIENTES HIBRIDACIONES FRENTE A ESTA CEPA. ASIMISMO NO SE HAN ENCONTRADO ESPECIES DESCRITAS PROXIMAS A ESTOS AISLAMIENTOS. POR LO TANTO, SOLO SE PUEDE AFIRMAR QUE AL 3 Y AL 4 SON BACILOS QUE PERTENECEN AL GENERO BACILLUS. EL BIOTIPO AL 2 FORMA CLUSTER CON LAS ESPECIES BACILLUS FIRMUS ATCC 8247, BACILLUS FIRMUS ATCC 14575 Y BACILLUS FIRMUS DSM 474 A NIVEL DE 71%, 69.3% Y 70.8% RESPECTIVAMENTE. LAS HIBRIDACIONES FRENTE A ESTAS ESPECIES HAN DADO UNOS PORCENTAJES DE HOMOLOGIA DE 15, 6 Y 11 RESPECTIVAMENTE, DADO QUE ESTOS VALORES DE HOMOLOGIA NO SON SIGNIFICATIVOS, SE PRESENTA EL AISLAMIENTO AL 2 COMO UNA NUEVA ESPECIE TERMOFILA DEL GENERO BACILLUS. EL BIOTIPO AL 5 FORMA CLUSTER CON LAS ESPECIES DE BACILLUS LENTUS NRS 1569, BACILLUS LENTUS NRS 1570 Y BACILLUS LENTUS ATCC 10841 CON UNOS PORCENTAJES DE 77.2, 74.6 Y 72.9 RESPECTIVAMENTE. LAS HIBRIDACIONES DE AL 5 FRENTE A B. LENTUS NRS 1569 Y B. LENTUS NRS 1570 HAN RENDIDO UNAS HOMOLOGIAS DEL 11 Y 15% RESPECTIVAMENTE. CONSIDERANDO LOS VALORES CITADOS POCO SIGNIFICATIVOS SE PRESENTA A AL 5 COMO OTRA NUEVA ESPECIE TERMOFILA DEL GENERO BACILLUS.

Autor: MARTINEZ CAMPA CARLOS MANUEL.
Año: 1993.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA FUNCIONAL. AREA DE BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. BIENIO 91-92.

Resumen: EN SACCHAROMYCES-CEREVISIAE, LA DETENCION DE LA SINTESIS DE NUMEROSOS ENZIMAS EN RESPUESTA A LA PRESENCIA DE GLUCOSA EN EL MEDIO ES UN FENOMENO DENOMINADO REPRESION POR GLUCOSA. UNO DE LOS GENES QUE ACTUA EN PRIMER LUGAR EN EL PROCESO DE REPRESION ES EL GEN HXK2 QUE CODIFICA PARA LA HEXOQUINASA 2. NOSOTROS HEMOS ESTUDIADO EL PAPEL DE ESTE ENZIMA EN LA REPRESION. EN CONCRETO, HEMOS ANALIZADO LA POSIBLE IMPLICACION DE LA FOSFORILACION DE LA HEXOQUINASA 2 EN LA REPRESION POR GLUCOSA. HEMOS DETERMINADO ADEMAS QUE UNA PARTE DE LA PROTEINA SE ENCUENTRA ASOCIADA A LA FRACCION NUCLEAR, DONDE PARTICIPA DIRECTAMENTE EN LA DETENCION DE LA TRANSCRIPCION DE LOS GENES REPRIMIBLES POR GLUCOSA. ADEMAS HEMOS ESTUDIADO EL MECANISMO QUE CONTROLA LA EXPRESION DEL GEN HXK2. ESTA TRANSCRIPCION ESTA REGULADA POR LA FUENTE DE CARBONO, SIENDO ELEVADA EN GLUCOSA Y NO DETECTABLE EN ETANOL. HEMOS CLONADO Y SECUENCIADO EL PROMOTOR DEL GEN. A CONTINUACION, HEMOS INICIADO EL ESTUDIO PARA LA LOCALIZACION DE SECUENCIAS REGULADORAS MEDIANTE LA CONSTRUCCION DE DELECIONES SERIADAS, ANALIZANDO EL EFECTO QUE ESTAS DELECIONES PRODUCEN SOBRE LA EXPRESION DEL GEN DE LA BETA-GALACTOSIDASA. HEMOS IDENTIFICADO ASI VARIOS ELEMENTOS REGULADORES, ENTRE LOS QUE DESTACA UNA SECUENCIA REPRESORA SITUADA EN LA REGION CODIFICADORA DEL GEN.

Autor: ARBOL LINDE FRANCISCA.
Año: 1990.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: LA META PRINCIPAL DE ESTA TESIS ES REALIZAR UNA INVESTIGACION DE LA INFECCION NEUMOCOCICA BACTERIEMICA MEDIANTE LOS SIGUIENTES OBJETIVOS: - CLINICOS: REVISION RETROSPECTIVA DE PACIENTES CON INFECCION NEUMOCOCICA (1978-1990). - EPIDEMIOLOGICOS: ESTUDIO DE SENSIBILIDAD DEL NEUMOCOCO A DISTINTOS ANTIBIOTICOS. - TERAPEUTICOS: DESARROLLO DE UN MODELO EXPERIMENTAL DE ENDOCARDITIS AORTICA TRATANDOLES CON DISTINTOS ANTIBIOTICOS PARA VER LA EFICACIA DE LOS MISMOS. *** CONCLUSIONES: - LAS INFECCIONES NEUMOCOCICAS MANTIENEN UNAS ALTAS TASAS DE MORTALIDAD, INFLUENCIADA POR DIVERSAS ENFERMEDADES SUBYACENTES GRAVES. - A PARTIR DE 1982 EMPIEZAN A APARECER CEPAS RESISTENTES A PENICILINA Y OTROS ANTIBIOTICOS EN NUESTRO HOSPITAL. - EN EL MODELO EXPERIMENTAL: LOS ANIMALES TRATADOS CON DOSIS DE PENICILINA QUE CONSIGUIERON ALCANZAR NIVELES SERICOS PICO 3 O 4 VECES LA CMI CONSIGUIERON ERRADICAR LA INFECCION. LA CEFOTAXIMA Y LA TEICOPLANINA FUERON TAN EFICACES COMO LAS DOSIS ALTAS DE PENICILINA PARA CONSEGUIR LA ERRADICACION DE LA INFECCION.

Autor: CORNAX CASTILLO ROBERTO.
Año: 1990.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MED. PREV. SAL. PUB., MICROBIOLOGIA E HISTORIA DE LA CIENCIA PROGRAMA DE DOCTORADO: ANALISIS MEDIOAMBIENTAL Y ORDENACION DEL TERRITORIO.

Resumen: LOS BACTERIOFAGOS ESPECIFICOS DE ESCHERICHIA COLI, DADAS SUS CARACTERISTICAS ESPECIALES CONSTITUYEN UN INDICADOR ALTERNATIVO DE LOS INDICADORES BACTERIANOS Y, EN ESPECIAL DE COLIFORMES FECALES. SIENDO LAS PRINCIPALES RAZONES PARA PROPONER A ESTE GRUPO LAS SIGUIENTES: 1. LAS TECNICAS DE DETECCION Y CUANTIFICACION DE COLIFAGOS SON SENCILLAS Y ECONOMICAS. 2. LOS FAGOS DE E. COLI SE ENCUENTRAN CONSTANTEMENTE Y EN ELEVADA CONCENTRACION EN LAS HECES HUMANAS TANTO DE INDIVIDUOS SANOS COMO DE PACIENTES CON ANOMALIAS INTESTINALES DE ORIGEN INFECCIOSO. 3. LOS BACTERIOFAGOS BAJO CONDICIONES OPTIMAS PUEDEN MULTIPLICARSE EN EL MEDIO AMBIENTE. 4. LOS COLIFAGOS SON TAMBIEN EL GRUPO DE BACTERIOFAGOS QUE PRESENTA UNA MAYOR CONCENTRACION EN EL AGUA RESIDUAL, FACILITANDOSE POR TANTO SU DETECCION. 4. LOS COLIFAGOS SE ENCUENTRAN RELACIONADOS DON LOS COLIFORMES FECALES EN LAS AGUAS NATURALES POLUCIONADAS, AUNQUE Y DEBIDO A LA MAYOR SUPERVIVENCIA DE ESTE GRUPO DE VIRUS EN EL MEDIO ACUATICO, EN AGUAS CON POLUCION BAJA LA RELACION DESCIENDE, SIENDO POR TANTO INDICADORES MAS ADECUADOS DE CONTAMINACION FECAL REMOTA.

Autor: DOPEREIRO GOMEZ ROBERTO.
Año: 1989.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: HOSPITAL PROVINCIAL DE LA RIOJA..

Resumen: HEMOS REALIZADO UN ESTUDIO SOBRE 159 CEPAS DE PROTEUS MIRABILIS, AISLADAS DE MUESTRAS BIOLOGICAS DE DIFERENTES PACIENTES, PARA EL ESTUDIO DE LA BIOTIPIA, FAGOTIPIA, ANTIBIOTIPIA Y TEST DE DIENES, CON EL FIN DE OBSERVAR CUAL DE ESTAS TECNICAS PODRIA UTILIZARSE COMO MARCADOR EPIDEMIOLOGICO DE PROTEUS MIRABILIS. HEMOS CONCLUIDO QUE LA FAGOTIPIA DE PROTEUS MIRABILIS ES UNA TECNICA SENSIBLE QUE HA PERMITIDO CLASIFICAR EL 96'85% DE LAS CEPAS ESTUDIADAS, SIENDO ADEMAS EL MEJOR DE LOS MARCADORES EPIDEMIOLOGICOS PROBADOS. NO EXISTEN DIFERENCIAS ENTRE LOS FAGOTIPOS ENCONTRADOS EN LOS PACIENTES HOSPITALIZADOS Y LOS AMBULATORIOS. EL TEST DE DIENES UTILIZADO COMO MARCADOR UNICO TIENE LIMITACIONES, PERO ES UTIL SOBRE TODO SI SE EMPLEA CONJUNTAMENTE CON OTROS METODOS. DADA LA VARIABILIDAD ENCONTRADA EN ESTE TEST POR ALGUNAS CEPAS, HEMOS CONSIDERADO QUE CONSTITUYE EN SI MISMO UN CARACTER A VALORAR, SUGIRIENDO TRES CATEGORIAS PARA LA PRUEBA: POSITIVA, NEGATIVA Y VARIABLE. EL ANTIBIOTIPO PUEDE SER UTIL COMO COMPLEMENTO A OTRAS PRUEBAS PARA LA DIFERENCIACION DE CEPAS. LAS PRUEBAS BIOQUIMICAS NO SON UN MARCADOR EPIDEMIOLOGICO PARA DIFERENCIAR INTRAESPECIFICAMENTE LAS CEPAS DE PROTEUS MIRABILIS.

Autor: JIMENEZ NOTARIO MANUEL.
Año: 1989.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SALUD PUBLICA, MICROBIOLOGIA E M. DE LA CIENCIA. UNIVERSIDAD DE MALAGA..

Autor: CUADRADO CAPARROS M. ELENA.
Año: 1987.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO GENETICA Y MICROBIOLOGIA FACULTAD DE BIOLOGIA UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: SE AISLO UN MUTANTE ESPONTANEO DE RANGO DE HOSPEDADORES DEL BACTERIOFAGO MXL DENOMINADO MXLHVL. TAMBIEN SE AISLARON MUTANTES DE M. XANTHUS RESISTENTES A MXLHVL QUE SE CARACTERIZARON FENOTIPICAMENTE RESPECTO DE SU CAPACIDAD DE ABSORCION DEL FAGO DE SU MOVILIDAD Y DE SU COMPORTAMIENTO MORFOGENETICO. EL ANALISIS GENETICO DE LOS MUTANTES MEDIADO POR FAGOS TRANSDUCTORES E INSERCIONESCROMOSOMICAS DE LOS TRANSPOSONES TN5 Y TN5-132 QUE CONFIEREN RESISTENCIA A KANAMICINA Y A TETRACICLINA RESPECTIVAMENTE PERMITIO IDENTIFICAR 5 LOCI RELACIONADOS CON LA RESISTENCIA AL FAGO MXLHVL. EL ANALISIS GENETICO INCLUYO TAMBIEN LA CLONACION DE UNO DE LOS LOCI IDENTIFICADOS Y DE LAS SECUENCIAS ADYACENTES A UNA DE LAS INSERCIONES DEL TRANSPOSON TN5 QUE TIENE UN EFECTO SUPRESOR SOBRE EL FENOTIPO DE ALGUNAS DE LASESTIRPES MXLHVL ELEVADO A R.