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BACTERIOLOGIA



270 tesis en 14 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14
  • ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE ACEROS INOXIDABLES ALEADOS CON COBRE .
    Autor: BAENA GONZÁLEZ Mª ISABEL.
    Año: 2004.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: FACULTAD DE SEVILLA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: Los microorganismos tienen tendencia a crecer en las superficies y realizar en ellas sus actividadesa metabólicas, de manera que algunos de los productos causan un deterioro del sustrato. Cuando el sustrato es un metal, a dicho proceso se le denomina biocorrosión. La complejidad de este proceso es enorme teniendo en cuenta que normalmente se desarrolla una comunidad microbiana, a la que se denomina biofilm (biopelícula), constituida por una variedad de especies bacterianas que producen exopolisacáridos que impiden la difusión de solutos y gases favoreciéndose, por tanto, el desarrollo de los microorganismos. Por ello es evidente la necesidad de estudiar aquellos procesos que impidan la formación de dichos biofilms, entree los que se encuentra la adición a los sustratos de determinados compuestos que pudieran resultar tóxicos o inhibidores del desarrollo microbiano. Por otro lado, los estudios relativos al efecto de los microorganismos en los procesos de corrosión de los aceros inoxidables son muy escasos y requieren de una perspectiva pluridisciplinar. Uno de los principales problemas que existen es la necesidad de disponer de métodos estandarizados de determinación de la acción biocida de distintos elementos metálicos que forman parte de los aceros inoxidables sobre los microroganismos. Por ello, en este proyecto se planteó la obtención la obtención de aceros inoxidables clásicos (18Cr8Ni) modificados de modo que se comporten inhibiendo el desarrollo bacteriano sobre sus superficies, impidiendo además el fenómeno de la corrosión bacteriana. La principal modificación que se ha estudiado consiste en la aleación del inoxidable con una determinada cantidad de cobre, aprovechando el carácter biocida de este elemento. La investigación en el caso del cobre implica el estudio de los efectos de su aleación así como los tratamientos térmicos de precipitación de intermetálicos ricos en cobre en la matriz del acero inoxidable. La presencia de este cobre intermetálico permitiría la incorporación de cationes cobre a la capa pasiva del acero inoxidable y con dicha incorporación, una acción inhibidora del crecimiento bacteriano.
  • Influencia del estrés abiótico en el establecimiento de la simbiosis Phaseolus vulgaris-Rhizobium spp.
    Autor: Morón Flores Belén.
    Año: 2004.
    Universidad: SEVILLA.
    Centro de lectura: Facultad de Farmacia .
    Centro de realización: Facultad de Farmacia.
    Resumen: Las leguminosas constituyen cultivos de gran importancia no sólo por su uso habitual en la alimentación humana y animal, sino también por su capacidad para establecer una relación simbiótica con bacterias conocidas genéricamente como rizobios. Durante la simbiosis, dichas bacterias inducen la formación de unos órganos en la raíces de las plantas denominados nódulos, dentro de los cuales se produce la fijación de nitrógeno atmosférico. Gracias a este proceso, la planta se provee de las fuentes de nitrógeno adecuadas haciendo prescindible el uso de abonos artificiales para desarrollarse, evitándose así problemas de contaminación ambiental. El proceso de nodulación es complejo, y consiste en una serie de etapas en las que se necesita la expresión coordinada tanto de los genes de la planta como de la bacteria. Como respuesta a las señales excretadas por la planta, se induce en la bacteria la síntesis y transporte de una molécula lipoquitooligosacarídica, conocida como factor Nod o de nodulación. La presencia de dicha molécula desencadena una serie de cambios en las raíces de la planta, que culminarán con la formación del nódulo. El estado fisiológico tanto de la leguminosa hospedadora como de la bacteria determina el establecimiento de una simbiosis efectiva. Muchos son los factores medioambientales que pueden limitar el crecimiento y la actividad fijadora de nitrógeno en las leguminosas. De todos ellos, el que implica una mayor extensión de terreno afectado, aproximadamente el 30% del total de la superficie terrestre libre de hielo, es la acidez. Estudios previos han indicado que la acidez afecta a la planta hospedadora y a la población de rizobios, así como a su interacción simbiótica. En este sentido, se ha establecido en determinados sistemas simbióticos que el estrés ácido provoca reducción en la adhesión de los rizobios a los pelos radicales, así como en la posterior infección de los mismos. Sin embargo, la existencia de leguminosas nativas capaces de nodular en ambientes extremos, con una fijación de nitrógeno comparable a la observada en ausencia de estrés abiótico, indica la existencia tanto de plantas como de bacterias adaptadas satisfactoriamente a condiciones ambientales extremas. La judía (Phaseolus vulgaris) es la leguminosa más importante en la alimentación humana, participando en la nutrición de cerca de 500 millones de personas de América Latina y del este y sur de África. Esto unido a que la mayoría de las áreas productoras de judía localizadas en estas zonas se caracterizan por la elevada acidez de sus suelos, aumenta el interés del estudio de dicha simbiosis en condiciones ácidas. En base a los antecedentes comentados, en este trabajo nos propusimos analizar los efectos del estrés ácido sobre la producción de los factores de nodulación en R. tropici CIAT899, cepa simbionte de judía que muestra una alta tolerancia intrínseca a la acidez. Para ello, hemos analizado la expresión de los genes de nodulación, responsables de la síntesis y excreción de los factores Nod, de R. tropici CIAT899 en condiciones de acidez, encontrando una mayor expresión de los mismos conforme disminuye el pH del medio llegando a ser máxima a pH 4,5, el más bajo tolerado por la cepa analizada. Estos resultados fueron corroborados al analizar por las técnicas de CCF-R, HPLC y espectrometría de masas la estructura de los factores Nod, indicando que la acidez afecta tanto a la cantidad como a la estructura de los factores de nodulación sintetizados. Se observaron diferencias significativas entre las estructuras producidas a pH ácido y neutro, identificándose 52 moléculas diferentes a pH ácido, frente a las 29 producidas a pH neutro, estando sólo 15 de ellas presentes a ambos pHs. Resultados similares a los indicados para R. tropici CIAT899 fueron observados en otras cepas de Rhizobium capaces de nodular judía, indicando un efecto generalizado para las cepas ensayadas. Diversos estudios han demostrado que la salinidad y las bajas temperaturas pueden modificar la estructura de los factores Nod producidos por diferentes especies de Rhizobium. Sin embargo, ésta es la primera vez que se describe que la acidez incrementa la producción de factores Nod por parte de los rizobios, y que se realiza un estudio exhaustivo de la estructura de los factores de nodulación en presencia de estrés abiótico. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que el pH ácido, además de aumentar la biosíntesis de los factores de nodulación, modifica su estructura, incluyendo cambios en el extremo reductor y no reductor de la molécula, la cadena de ácido graso y el grado de polimerización. Dado que la actividad de estas moléculas viene determinada por los sustituyentes de la estructura básica común a todos los factores Nod descritos hasta la fecha, estos cambios podrían minimizar los efectos adversos de la acidez sobre las respuestas desencadenadas por los mismos en la planta, pudiendo contribuir también a aumentar su estabilidad. Los resultados de nodulación en P. vulgaris bajo condiciones ácidas avalan esta hipótesis, no observándose diferencias significativas ni en el número de nódulos ni en el peso seco de la parte aérea a pH 4,5 y 7,0. Sin embargo, ambos parámetros fueron significativamente superiores a valores moderados de acidez (pH 5,5), donde los efectos negativos del estrés ácido sobre el estado fisiológico de la planta no son tan acusados. Esto indica que efectivamente R. tropici CIAT899 es una cepa adaptada a condiciones de acidez en el suelo y, por lo tanto, es el inoculante ideal para el cultivo de P. vulgaris en suelos con pHs bajos. Por otra parte, Duzan et al. (2004. J Exp Bot. 55: 2641-6) han descrito que la acidez reduce drásticamente la respuesta de los pelos radicales a los factores Nod en la simbiosis Glycine max-Bradyrhizobium japonicum, efecto revertido al aumentar la concentración de dichas moléculas con una respuesta similar a la observada a pH neutro. Por lo tanto, el aumento en la producción de los factores Nod como consecuencia de la acidificación del medio detectado en las cepas de Rhizobium analizadas podría constituir una respuesta desarrollada por las bacterias para intentar aminorar, en la medida de lo posible, los efectos adversos provocados por el pH ácido sobre el establecimiento de la simbiosis y así ser efectivas en la nodulación en estas condiciones. Finalmente, cabe destacar que el estudio de los efectos del estrés sobre las cepas utilizadas como inoculantes puede ayudarnos a seleccionar las más apropiadas para cada estrés medioambiental, con el fin de optimizar el establecimiento de una simbiosis efectiva en condiciones adversas.
  • ESTUDI DE LA TRANSMISSIÓ DE LA TUBERCULOSI EN EL CONTEXT NOSOCOMIAL I POBLACIONAL. CARACTERITZACIÓ FENOTÍPICA I GENOTÍPICA DE SOQUES DE MYCO-BACTERIUS TUBERCULOSIS .
    Autor: TUDÓ VILANOVA GRISELDA.
    Año: 2003.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Resumen: Anualmente se producen 9 millones de casos de tuberculosis. La fuente de transmisión principal de la enfermedad son los bacilos que expulsan los enfermos al expectorar, inhalados por otras personas. EL OBJETIVO GENERAL El objetivo general de la tesis es el estudio de la transmisión de la tuberculosis en el contexto nosocomial y poblaconal. OBJETIVOS CONCRETOS 1,- Análisis de la transmisión nosocomial de la tuberculosis en pacientes ingresados en un hospital de tercer nivel durante un periodo de 4 años, utilizando la técnica de tipado molecular RFLP. 2,- Descripción de resistencias y factores de riesgo en pacientes tuberculosos de los distritos de Bata y Malabo (Guinea Ecuatorial). 3,- Caracterización y tipado molecular de las cepas de Mycobacterium tuberculosis aisladas en pacientes de los distritos de Bata y Malabo (Guinea Ecuatorial). RESULTADOS OBJETIVOS 1,- Se estudiaron cepas de 151 pacientes. Se hallaron 11 agrupaciones entre 37 pacientes. En el 5,4% de los pacientes se estableció un nexo epidemiológico en prisión, previo al ingreso en el hospital. No se halló relación entre los restantes pacientes que compartieron agrupación. Las variables historias previas de tuberculosis y estancia en prisión se asociaron a agrupación. Se realizó un seguimiento entre 18 y 60 meses a 109 pacientes que compartieron habitación con enfermos tuberculosos, no demostrándose ningún caso secundario de tuberculosis, aunque el 68,3% de los pacientes VIH+ y 26,4% de los VIH- murieron durante el seguimiento. 2,- Se estudiaron 240 pacientes. Las resistencias en casos nuevos fueron del 16,9% y del 41,6% en casos previamente tratados. La mono-resistencia más importante fue a la isoniacida (12,5% en casos nuevos). La multi-resistencia en casos nuevos fue del 1,7%. El sexo femenino se asoció a resistencia. El 80% de las cepas resistentes a isoniacida tenían mutaciones en el gen inhA, que les confería resistencia de bajo nivel. 3,- Se tiparon por RFLP las cepas de 185 pacientes. El 61,6% de los pacientes presentaron cepas asociadas a 21 agrupaciones. El 19% de las cepas eran resistentes a algún fármaco. En el análisis multi-variado, la resistencia a fármacos y la baciloscopia positiva se asociaron a pertenecer a agrupación. CONCLUSIONES 1,- No se demostró ningún caso secundario de tuberculosis. Sin embargo, no se pudo descartar transmisión nosocomial debido a la elevada mortalidad por otras causas en los pacientes que compartieron habitación con enfermos tuberculosos. 2,- Se detectó una frecuencia moderada de resistencia en casos nuevos, con predominio de resistencia a bajo nivel a isoniacida y mutaciones en el gen inhA. 3,- El elevado nivel de agrupación (61,6%) sugiere un predominio de cepas endémicas características de la región.
  • NUEVAS ESPECIES DE LOS ÓRDENES ACTINOMYCETALES Y BACILLALES PRODUCTORAS DE NUEVOS COMPUESTOS ANTITUMORALES. AISLAMIENTO DEL MAR, CLASIFICACIÓN Y ESTUDIOS DE FERMENTACIÓN.
    Autor: MALET CASCÓN LEYRE.
    Año: 2003.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LEÓN. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
    Resumen: El objetivo primordial de esta tesis ha sido la selección de cepas de actinomicetos aislados de mar par producir nuevos compuestos con actividad antitumoral. Esta selección se realizó a partir de 3 estrategias distintas. El desarrollo de la primera estrategia consistió en primer lugar en el aislamiento de estas bacterias a partir de muestras de marinas (fundamentalmente invertebrados marinos). A continuación, se eliminaron aquellas que fueron consideradas ideneticas a nivel de especie (mediante el análisis y comparación de sus ácidos grasos). Seleccionadas las cepas distintas entre sí, pasaron a ser fermentadas y sus caldos de fermentación fueron ensayados para comprobar si presentaban actividad antitumoral. Se agruparon las cepas activas y se seleccionaron aquellas que cumplieran dos condiciones: ser representativas de la biodiversidad aislada y distintas, taxanómicamente, de otras previamente estudiadas. De este modo se procesaron muestras procedentes de dos expediciones, una efectuada en el mar Cantábrico y otra en las costas de Méjico. En el caso del Cantábrico se logró descubrir una especie del género Actinomadura que producía una nueva estructura del tipo xantona policíclica con la actividad antitumoral. De la expedición a Méjico, se consiguió descubrir una nueva especie perteneciente al género Streptomyces y que producía dos nuevos compuestos activos derivados del indol. La segunda de las estrategias se basó en el supuesto de que cepas relacionadas taxonómicamente pero procedentes de distintos orígenes geográficos, producen compuestos distintos. Para ello se tomaron datos de un agrupamiento de más de 1000 cepas activas de la colección de aislados de Instituto Biomar, S.S. En dicho agrupamiento existía un grupo de bacterias muy relacionadas y mayoritariamente aisladas de un mismo origen (mar Cantábrico); sin embargo, también en dicho agrupamiento se encontraba otra bacteria aislada de muestras de Mozambique. Como se sabía que una de las del Cantábrico producía el compuesto ikarugamicina, ante la eventualidad de que le resto de las cepas del Cantábrico produjesen también este compuesto, se decidió estudiar la cepa de Mozambique. Se comprobó que ésta producía un nuevo compuesto derivado de la ikarugamicina. La tercera estrategia consistió en una revisión de las cepas de una expedición al Pacífico Sur en las que no se detectó la producción de compuestos con actividad antitumoral. En este caso, el planteamiento previo se basó sobre le conocimiento de que una misma bacteria fermentada en distintos medios de cultivo, puede producir distintos metabolitos secundarios. Se comenzó seleccionando de entre estas bacterias inactivas aquellas que presentaban tanto una taxonomía más inusual como otras representantes de típicos géneros de actinomicetos. A las cepas seleccionadas se las fermentó en un medio muy distinto al que se había empleado hasta ahora en la tesis y se descubrió que 5 de ellas producían compuestos con actividad antitumoral. Una de estas cepas, una bacteria relacionada con el género Thermoactinomyces, produjo un depsipéptido de estructura química novedosa y con una potente actividad antitumoral. Esta bacteria presenta unas características taxonómicas y filogenéticas distintivas que hace suponer que sea representante de un nuevo género.
  • ANÁLISIS DE TRES SISTEMAS REGULADORES DE DOS COMPONENTES DE MYXOCOCCUS XANTHUS: CARACTERIZACIÓN DE MUTANTES SENCILLOS Y MÚLTIPLES .
    Autor: CARRERO LÉRIDA JUANA.
    Año: 2003.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: Las mixobacterias, y concreto Myxococcus xanthus, llevan a cabo un complejo ciclo de vida que es único entre los procariotas. Para que el ciclo culmine con éxito es necesario que las células detectan una serie de cambios medioambientales y se comuniquen entre ís, lo que asegura que las células actúen de manera cooperativa y, finalmente, originen unas estructuras multicelulares macroscópicas denominadas cuerpos fructificantes. En los últimos años ha quedado demostrado que la fosforilación de determinadas proteínas desempeña un papel crucial en el ciclo de desarrollo de las mixobacterias. Además, deben existir proteínas fosfatasas capaces de desforsforilar las proteínas fosforiladas por las quinasa, revertiendo su acción, y garantizando que las quinasas/fosfatasas funcionen a modo de interruptores biológicos. Teniendo en cuenta la importancia del papel que desempeñan las quinasas durante el ciclo de desarrollo de M.xanthus, nuestro grupo de investigación se planteó la búsqueda de genes que codificasen proteínas con actividad fosfatasas en esta bacteria. Finalmente se encontraron tres sistemas reguladores de dos componentes que pareceína estar implicados en la expresión de fosfatasas en la bacteria denominados PhoR1-PhoP1, PhoR2-PhoP2 y PhoR3-PhoP3. El sistema no presenta un máximo de expresión, en medios pobres en nutrientes, coincidiendo con el momento en que la bactería produce agregados. Esto indica que está implicado en el proceso de agregación celular. Por el contrario, la expresión de este sistema no experimenta cambios significativos durante el crecimiento vegetativo. Debido a que los tres sistemas podían llevar a cabo funciones comunes o muy similares, para determinar el papel que éstos juegan en el ciclo de vida de la mixobacteria era necesario la obtención de mutantes múltiples. Se obtuvo el mutante de delección sencillo para el sistema 1 y los mutantes de delección dobles para los sistemas 1-3 y 2-3. La imposibilidad de obtener el mutante de deleción doble para los sistemas 1-2 y el mutante de delección triple podía deberse al efecto letal de tales mutaciones en la bacteria. Ninguno de estos tres sistemas es esencial en el crecimiento vegetativo de M.xanthus. Durante el ciclo de desarrollo los mutantes presentan diferentes defectos en la formación de cuerpos fructificantes como la formación de cuerpos poco elevados sobre el sustrato, en el caso del mutante que carece de los sistemas 2 y 3 ó el retraso en la formación de los mismos, como en el mutante de deleción del sistema 1. Además este último producía un 50% de las esporas que produce la cepa silvestre. La actividad fosfatasa alcalina no se encuentra bajo el control de ninguno de los tres sistemas mientras que la actividad fosfatasa neutra está bajo el control de los tres y la expresión de la fosfatasa ácida depende fundamentalmente del sistema 1. Mediante la realización de geles bidimensionales se ha determinado que estos sistemas están implicados en la expresión de genes que codifican proteínas que intervienen en el metabolismo energético y en la síntesis de proteínas. La importancia de este descubrimiento se discute en la Tesis. Justo a continuación del gen phoR1 se localiza un gen que codifica para la segunda serina/treonina fosfatasa de M.xanthus a la que se ha denominado Pph2. Se ha comprobado que esta proteína está implicada en el proceso de agregación celular. Por debajo del gen que codifica la fosfatasa Pph2 se ha encontrado un gen que codifica para una fosfohistidina fosfatasa SixA. Se ha comprobado que los genes que codifican PhoP1, PhoR1, Pph2 y SixA forman parte del mismo operón.
  • ESTUDIO DE LA INTERACCIÓN DE PATOGENOS PISCICOLAS Y POTENCIALES BACTERIAS PROBIOTICAS CON LAS SUPERFICIES MUCOSAS DE DORADA (SPARUS AURATA, L.) .
    Autor: CHABRILLON POPELKA MARIANA .
    Año: 2003.
    Universidad: MALAGA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS UNIVERSIDAD DE MÁLAGA.
    Resumen: La interacción de patógenos bacterianos con las superficies mucosas de las doradas cultivadas es uno de los procesos que puede determinar el establecimiento de enfermedades como la vibriosis y la pasteurelosis. Entre los patógenos bacterianos que afectan a las doradas cultivadas destacan por su virulencia L. Anguillarum, V. Alginolyticus y P. Damselae subsp. Piscicida. Se han constatado diferencias entre las cinéticas de crecimiento, siendo Vibrio alginolyticus el patógeno que prolifera más rápidamente con bajas concentraciones de mucus. Photobacterium damselae subsp. Piscicida no prolifera en el mucus intestinal de dorada, aunque sí se ha constatado su crecimiento en el mucus de piel de branquias, para lo que requiere concentraciones de mucus mayores que las descritas para L. Anguillarum y V. Alginolyticus. La capacidad de proliferación en el mucus de dorada no es un factor determinante en la virulencia de los patógenos estudiados. El crecimiento de L.anguillarum, V. Alginolyticus y P. Damselae subsp. Piscicida en el mucus de dorada, provocó un icremento cualitativo y cuantitativo de actividades enzimáticas extracelulares, así como de proteínas de membrana externa. La adhesión de los patógenos estudiados al mucus de dorada está mediada por componentes superficiales de naturaleza glicoproteica. Además, el calcio interviene de forma sifnificativa en el proceso de adhesión al mucus de L. Anguillarum y V. Alginolyticus, pero no de P. Damselae subsp. Piscicida. La adhesión al mucus de dorada, se ha demostrado que es un criterio a considerar en la selección de bacterias potencialmente probióticas, obtenidas de la microbiota de dorada y de lenguado. Se ha constatado que los probióticos empleados rutinariamente para humanos y animales inhiben el crecimiento de patógenos piscícolas y se adhieren al mucus de peces cultivados. La adhesión de bacterias potencialmente probióticas al mucus de dorada y de lenguado no es una característica que implique especificidad por el hospedador, sino que es dependiente del aislado ensayado. En base a los criterios establecidos se dispone de un aislado para su uso como probiótico en el cultivo de dorada.
  • CARACTERIZACIÓN DE UNA NUEVA TÓXIMA PRODUCIDA POR PSEUDOMONAS SYRINGAE PV. SYRINGAE: MANGOTOXINA. BIOSINTESIS Y PAPEL EN LA PATOGÉNESIS .
    Autor: ARREBOLA DÍEZ EVA M..
    Año: 2003.
    Universidad: MALAGA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS (UNIVERSIDAD DE MÁLAGA).
    Resumen: Pseudomonas syringae pv. Syringae es una bacteria frecuentemente aislada de numerosas plantas y el agente causal de la necrosis apical del mango. La toxina antimetabolito producida por cepas de P. Syringae pv. Syringae y denominada mangotoxina, se detectó mediante el ensayo de inhibición del crecimiento de Escherichia coli, inhibición que revertía en presencia de L-ornitina, pero no de N-acetil ornitina, por lo que se podía deducir que afectaba a la ruta de síntesis de ornitina/arginina. Filtrados libres de células de cepas productoras de mangotoxina provocan una fuerte disminución de la actividad ornitina acetiltransferasa (OAT) en extractos proteicos de foliolos de tomate, lo que confirma a dicha enzima como diana de esta toxina. Diferentes tratamientos fisico-químicos sugieren la mangotoxina es un oligopéptido hidrofilico sin una estructura secundaria compleja (sensible a proteasas, pero estable a altas temperaturas y pH estremos) como otras toxinas antimetabolito, tales como tabtoxina y faselotoxina. Mediante HPLC, la actividad de la mangotoxina se asoció a un único pico presente en filtrados libres de células de una cepa productora, y que no se detecta en los de una cepa mutante defectiva en la producción de la toxina. Para el análisis de los genes implicados en producción de mangotoxina en la cepa UMAF0158 de Pseudomonas syringgae pv, syringae se construyeron mutantes defectivos en la producción de esta toxina. El estudio de las secuencias nucleotídicas de los genes mutagenizados mostraron, en un primer acercamiento, homologías con genes de regulación bacteriana como gacA y lemA, con una péptidosintasa no ribosomal, con una acetiltransferasa y con una tiorredoxina/lipoproteína, entre otros. Un análisis más exhaustivo de la región genómica clonada en pCG2-6 y que restauraba la producción de mangotoxina en el mutante defectivo en la producción de mangotoxina UMAF0158-6yF6, mostró que una péptidosintasa no ribisomal localizada en una región con características de isla genómica, podría participar activamente en la biosíntesis de mangotoxina. Por último se quiso establecer el papel biológico de la mangotoxina. Para ello se ha establecido la relación existente entre la producción de mangotoxina y la patogénesis sobre una planta modelo (tomate). Los resultados muestras una relación entre la producción de la mangotoxina por las cepas de P.syringae pv. Syringae y el incremento en los síntomas necróticos que produce la bacteria sobre foliolos de tomate. De hecho, las fitotoxinas incrementan la virulencia de los patovares de P. Syringae, y su síntesis puede incrementar sustancialmente la gravedad de la enfermedad, siendo éstas en gran parte responsables de la manifestación en un grado mayor de síntomas necróticos y cloróticos.
  • DESARROLLO Y APLICACIÓN DE UN NUEVO MARCADOR MOLECULAR PARA LISTERIA MONOCYTOGENES: "MULTILOCUS SEQUENCE TYPING". ANÁLISIS DE LA ESTRUCTURA POBLACIONAL DE LA ESPECIE .
    Autor: SALCEDO PELÁEZ CELIA.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.
    Resumen: "Multilocus sequence typing" (MLST) constituye un nuevo marcador molecular recientemente desarrollado para varias especies bacterianas. Este método genotípico de aislados bacterianos hace uso de la secuenciación genética para caracterizar a los alelos presentes en diferentes genes no sometidos a presión selectiva, implicados en el metabolismo bacteriano (genes housekeeping). La acumulación de cambios de nucleótidos en estos de genes es un proceso relativamente lento y por lo tanto el perfil alélico estable a lo largo del tiempo. Por otra parte el análisis de secuencias genéticas tiene un alto poder de discriminación y permite el intercambio y la comparación objetiva de resultados entre distintos laboratorios vía Internet. Estas características hacen este método especialmente adecuado para realizar estudios epidemiológicos a largo plazo así como para analizar la estructura poblacional de las poblaciones bacterianas. El desarrollo de MLST para Listeria monocytogenes se llevó a cabo empleando una muestra genéticamente heterogénea de 84 aislados en la que los serotipos 4b, 1/2a, 1/2b y 1/2c estuvieron representados. Esta muestra fue elegida a partir de 360 aislados de origen clínico y alimentario previamente caracterizados mediante electroforesis en campo pulsado (PFGE). Así mismo este análisis permitió identificar los diferentes clones que circulan y producen casos de listeriosis en nuestro país. La congruencia en las relaciones filogenéticas establecidas a partir de ambos tipos de análisis validó el esquema de MLST desarrollado. Los resultados de MLST confirmaron la existencia de dos divisiones genéticas principales y mostraron una población con una estructura básicamente clonal. No obstante, los índices de asociación alélica y las secuencias genéticas obtenidas, indicaron la existencia de procesos de intercambio genético a lo largo de la evolución de la especie. Estos datos sugieren que L.monocytogenes no debe ser considerada una especie estrictamente clonal.
  • APLICACIÓN DE MÉTODOS BASADOS EN LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA A LA DETECCIÓN Y TIPIFICACIÓN DE BACTERIAS PATÓGENAS .
    Autor: CERRO ARRIETA ANA DEL.
    Año: 2003.
    Universidad: OVIEDO.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DEL PAÍS VASCO.
    Resumen: Esta Tesis se ha centrado en el desarrollo, optimización y aplicación de técnicas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección y caracterización de bacterias patógenas humanas y animales. Se presentan dos métodos de detección, el primero es un sistema de PCR múltiple que permite la detección simultánea de tres de los patógenos más relevantes en la acuicultura continental: Aeromonas salmonicida, Yersinia ruckeri y Flavobacterium psychrophilum. El segundo es un sistema de TaqMan PCR para detectar F. Psychrphilum. En este tipo de PCR, la visualización de los amplicones se realizó midiendo la fluorescencia emitida durante la reacción, de manera que se ahorra tiempo y se evita utilizar sustancias tóxicas como el bromuro de etidio. Estos dos protocolos fueron validados en el diagnóstico de brotes infecciosos ocurridos en diferentes piscifactorías del Principado de Asturias. Para la detección de Salmonella en muestras de origen animal se evaluaron los siguientes parámetros: i) dos protocolos para concentrar el número de células patógenas presentes en al muestra (centrifugación a 13.000 rpm y separación inmunomagnética, IMS); ii) diez sets de iniciadores; y iii) diferentes condiciones de la reacción de amplificación. El protocolo de IMS-PCR utilizando los iniciadores stn fue seleccionado para el trabajo de campo. De las 117 muestras analizadas, 38.5% fueron positivas para Salmonella mediante IMS-cultivo y 36.6% por IMS-PCR. Variantes de métodos de PCR se aplicaron a la caracterización de las cepas de Salmonella aisladas en el trabajo de campo: amplificación de secuencias aleatorias de ADN o RAPD, PCR-ribotipificación, perfil de genes de virulencia y perfil de genes de resistencia. Son técnicas eficaces y rápidas; en ellas pueden utilizarse directamente alicuotas de cultivo como ADN molde; los resultados obtenidos son de fácil interpretación; y se utiliza el mismo equipamiento básico.
  • TIPIFICACIÓN DE CEPAS DE BRUCELLA.
    Autor: OCAMPO SOSA ALAIN ANTONIO.
    Año: 2003.
    Universidad: CANTABRIA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: Brucella es un género de bacterias Gram-negativas, intracelulares facultativas que infectan un gran número de aimales incluyendo al hombre. Está compuesto por seis especies: Brucella abortus, B. Melitensis, B. Suis, B. Ovis, B. Canis y B. Neotomae, de acuerdo con diferencias en patogenicidad y la preferencia por el huésped. La distinción entre especies y biovares se lleva a cabo mediante pruebas diferenciales basadas en caracterización fenotípica. Los métodos de tipificación para la diferenciación de cepas de Brucella han mejorado en esta última década, debido fundamentalmente a la introducción de la tecnología molecular, aunque aún no se ha establecido un método definitivo de tipado molecular, debido principalmente al bajo grando de variabilidad genética de este género. Entre las distintas técnicas de tipado molecular, el RFLP utilizando como sonda la secuencia de inserción IS711, constituye un método fácil y reproducible. En este trabajo se describe la caracterización de un amplio número de aislamientos de Brucella en Cantabria, basado en este método. Se determinó especie y biovar de los diferentes aislamientos, presentando la mayoría un patrón de hibridación idéntico al de las cepas de referencia de los biovares 5,6 y 9 de B. Abortus. Si embargo el tipado convencional de dichas cepas de campo se correspondía con el del biotipo 3 de B. Abortus. Hemos detectado una mutación por pérdida de 5,4 Kb en el cromosoma de las cepas de campo tipificadas como B, abortus, que nos ha permitido el sistema de identificación de cepas mediante PCR ya existente. Se describe por primera vez la transposición de IS711 en una cepa de B, ovis y en la cepa B2/94, aislada de pinnípedos, empleando el plásmido pGBG1 que funciona como trampa de transposones.
  • DETECCIÓN DE CARBAPENEMASAS E IDENTIFICACIÓN DEL NUEVO ENZIMA OXA-40 EN CLONES DE ACINETOBACTER BAUMANNII RESISTENTES A IMIPENEM.
    Autor: LOPITZ OTSOA FERNANDO.
    Año: 2003.
    Universidad: PAIS VASCO.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.
    Resumen: Durante los últimos años se ha observado un incremento, tanto en el detección de aislamientos de Acinetobacter baumannii implicados en infecciones nosocomiales, como en la resistencia antibiótica mostrada por estos aislamientos. Esta resistencia se da incluso frente a imipenem, que es el antibiótico de elección, de manera que las infecciones producidas por estos microorganismos resultan muy difíciles de tratrar. Entre los diferentes mecanismos de resistencia a los carbapenemas, uno de los más importantes sería la producción de carbapenemasas, cuya diseminación puede esta asociada a la presencia de estructuras genéticas móviles, denominadas integrones. En este trabajo se ha estudiado la población de Acinetobacter baumannil resitente a imipenem, del Hospital de Santa Marina en Bilbao. Se ha desarrollado una metodología basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), para caracterizar genéticamente las agrupaciones clonales presentes en el Hospital de Santa Marina, seleccionándose los iniciadores AP3 y ERIC2, como los más apropiados, que permitió identificar once agrupaciones clonales, detectando cuatro genotipos predominantes, siendo mayoritario el denominado clon II, que agrupaba el 61% de los aislamientos resistentes a imipenem. El 32,89% de los aislamientos resistentes a imipenem portaba plásmidos, en un rango que iba desde 180 a 1,3 Kb. Se ha constatado la elevada presencia de integrones de clase I. Se ha detectado a nivel fenotípico la presencia de carbapenemasas en el 75% de los aislamientos analizados distribuyéndose estos, en todos los genotipos detectados, lo que implicaría una amplia presencia de este tipo de enzimas en los clones analizados. Se ha identificado una nueva carbapenemasa, denominada OXA-40, que es una b-lactamasa de clase D relacionada con una similutud del 98%, con la familia OXA-24, OXA-25 y OXA-26 descritas en Madrid, Murcia y Gante (Bélgica) y que está presente en dos de los clones mayoritarios resistentes a imipenem. También se ha detectado a nivel fenotípico la presencia de metalo-b-lactamasas.
  • EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE LA RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS MACRÓLIDOS, LINCOSAMIDAS Y ESTREPTOGRAMINAS EN STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE .
    Autor: CANALES ERAZO ENA MELISA.
    Año: 2003.
    Universidad: ZARAGOZA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA.
    Resumen: El objetivo principal de este trabajo fue la detección y caracterización en S.pneumoniae de los fenotipos y los genes de resitencia a macrólidos y telitromicina (TI) así como la asociación de determinantes de resistencia a antibióticos MLSBc [erm(B) y mef] con los determinantes tet(M) (resistencia a tetraciclina y minocilina), catpC194 (resistencia a cloranfenicol), aph(3')-III (resistencia a kanamicina), aadE (resistencia a estreptomicina). El estudio de la diseminación de los genes de resistencia ha requerido el análisis epidemiológico de las cepas por tipificación molecular. Se aislaron 137 cepas de S.pneumoniae y 2 estreptococos del grupo viridans (EGV) (124 resistentes a eritromicina y 15 sensibles a este antibiótico) de muestras respiratorias en el Servicio de Microbiología del Hospital Clínico Universitario "Lozano Blesa" de Zaragoza, entre 1999-2002. Se estudió la susceptibilidad frente a diferentes antimicrobianos; penicilina (Pen), eritromicina (Em), azitromicina (Az), clindamicina (Cd), miocamicina (Mom), quinupristin/dalfopristin(Q/D), tetraciclina (Tc), minocilcina (Mimo), cloranfenicol (Cm), kanamicina (Km), estreptomicina (Sm), gentamicina (Gm) y tettlitromicina, utilizando el método de difusión en agar con disco y la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) siguiendo las recomendaciones del NCCLS, 2000. La determinación de los fenotipos de resistencia se llevó a cabo por medio de la técnica de triple difusión en agar. La detección de los genes de resistencia [erm(B), aph (3')-III, aadE, tet(M), catpC194 y el fen int(Tn)] se hizo mediante amplicación por PCR con iniciadores específicos para cada gen. Se diferenciaron las subclases del gen mef[mef(A) y mef(E)] por digestión con BamH1. El estudio epidemiológico se realizó por la técnica BOX PCR. De las cepas estudiadas, el 79% presentaban el fenotipo MLSBc, 21% de las cepas expresaron fenotipo M, en ninguna de las cepas estudiadas expresó el fenotipo MLSBi, 15 cepas fueron sensibles a eritromicina de las cuales un 5 presentaban resistencia a otros antibióticos (Tc, Mino, Cm, Sm). De las cepas que presentaban en el fenotipo M el 100% fueron clasificadas como mef(E). El gen erm(B) fue encontrado en todas las cepas con fenotipo MLSBc. En ninguna de las cepas aisladas detectamos la presencia de los genes, erm(A), erm(C), erm(TR). La resistencia a penicilina fue de un 64,5%, asociada al fenotipo MLSBc y M en más del 50% de las cepas, presentando resistencia a penicilina de alto nivel menor 8mcg/ml. La resistencia a tetraciclina fue de un 71%, con un rango de CIM de 8-64mcg/ml, asociada a los fenotipos MLSB en un 82,7%. El gen tet(M) fue encontrado en 62 cepas (70,5%) que tenían resistencia a Tc. En cuanto al cloranfenicol la resistencia fue de un 42,7%(53 cepas) y asociada al fenotipo MLSBc en un 50%; el catpc194 fue encontrado en 46,9% (46 cepas) de las cepas cloranfenicol resistentes. Dos cepas, una de EGV y una de S.pneumoniae tenían resistencia a alto nivel a kanamicina con un rango de CIM de 512 menor 1024 mcg/ml, el gen aph(3')-III fue detectado en una de ellas. Los genes tet(M) y catpC194 se encontraron asociados al gen de resistencia erm(B) en el 36,73% (36 cepas). Todos los aislamientos con los genes erm (B), aph (3')-III, tet(M), catpC194 amplificaron con el gen de la integrasa int(Tn). El ant(6) se encontró en 10 de las 25 cepas con resistencia a Sm. No encontramos ningún aislamiento con resistencia a Gm ni espectinomicina. Una cepa de EGV era resistente a TI (8mcg/ml), 11 cepas tenían resistencia a Q/D (2-16 mg/ml) 9 cepas presentaron fenotipo MLSBc y 2 fenotipo M. La tipificación por medio de BOX PCR dio como resultado una gran heterogeneidad. Esta diversidad genética nos permite descartar la diseminación clonal, por lo que podemos pensar que la diseminación de los genes de resistencia ha tenido lugar por conjugación o transformación, lo que que se ha logrado demostrar en algunas de nuestras cepas.
  • CARACTERIZACIÓN DEL SISTEMA REGULADOR DE DOS COMPONENTES BVRR/BVRS DE BRUCELLA ABORTUS .
    Autor: MANTEROLA KAREAGA LOREA.
    Año: 2003.
    Universidad: NAVARRA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: El análisis mediante 2-DGE reveló que los mutantes en el sistema BvrR/BvrS no expresaban ciertas proteínas de membrana externa (Omp) y expresaban otras no presentes en la cepa parental. Mediante Western-blot con anticuerpos monoclonales se identificó que una de las proteínas ausentes en los mutantes era la Omp25. La microsecuenciación de las proteínas extraídas de los geles de 2-DGE mediante MALDI-MS permitió identificar otra de las Omps no descrita hasta la fecha, la Omp22. El control de la expresión de la Omp25 y Omp22 por parte del sistema regulador de dos componentes tenía lugar a nivel transcripcional, ya que la actividad de los promotores P omp25 y P omp22 estaba reducida en los mutantes bvrR/bvrS. Se identificó el estrés nutricional como factor que modula la expresión de ambas Omps. No fue posible identificar las Omps cuya expresión parecía estar reprimida por el sistema BvrR/BvrS en condiciones de cultivo de laboratorio. A diferencia de lo que ocurría con los mutantes bvrR/bvrS, la mutación en las proteínas Omp25 y Omp22 no afectó a la sensibilidad a la polimixina B, a la sensibilidad a la acción bactericida del suero normal de vaca y humano, a la virulencia en el modelo de ratón, a la multiplicación intracelular en macrófagos y células HeLa, ni a la internalización en las células HeLa. Estos resultados indicaban que además de controlar la expresión de la Omp25 y Omp22, el sistema BvrR/BvrS debía regular otros factores implicados en la virulencia de Brucella, por lo que se analizó la composición del LPS. Las técnicas empleadas, SDS-PAGe e inmunoblot con anticuerpos específicos, no permitieron detectar alteraciones en el núcleo de un doble mutante rugosos bvrR::Tn5 Aper. Sin embargo, se detectó un mayor grado de acilación del lípido A y una mayor fluidez de las cadenas acilo en el LPS de los mutantes bvrR/bvrS. Por otro lado, el mutante bvrR pero no el bvrS presentó problemas de crecimiento en medios con glucosa y nitrógeno orgánico. Estos problemas desaparecieron al añadir además nitrógeno inorgánico lo que sugería que el BvrR estaba implicado en el metabolismo del carbono y del nitrógeno. Esta implicación podría tener lugar a través del sistema fosfotransferasa (PTS) que interviene en dicha regulación, ya que el gen bvrR se encuentra formando lo que parece un operón junto con los genes que codifican el PTS., Por último, se analizó el poder vacunal de los mutantes bvrR/bvrS. La protección conferida por los mutantes en el sistema BvrR/BvrS frente a la cepa virulenta B.abortus 2308 en el modelo de ratón fue similar a la obtenida con la cepa vacunal S19.
  • ANÁLISIS GENÉTICO, INMUNOQUÍMICO Y BIOLÓGICO DE MUTANTES RUGOSOS DE BRUCELLA MELITENSIS .
    Autor: GONZÁLEZ FERNÁNDEZ DAVID.
    Año: 2003.
    Universidad: NAVARRA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.
    Resumen: Mediante mutagénesis con transposón se obtuvieron mutantes rugosos (R) de Brucella melitensis 16M y H38. Los análisis electroforéticos y del ácido 3-deoxi-D-manno-2-octulosónico (kdo) y los "immunoblots" con anticuerpos monoclonales demostraron la falta de la cadena O (O-PS) en lso lipopolisacáridos (LPS) de estos mutantes. La caracterización de las regiones mutadas confirmó el papel de varios genes wbk (wbkA, gmd, per, wzm, wecA) en la síntesis de la cadena O y permitió identificar tres genes nuevos en esta misma región que codifican, putativamente, una glicosil transferasa (wbkE), la primasa que liga un aminoazúcar al bactoprenolpirofosfato (wecA) y una epimerasa-deshidrogenasa (wbkD). Además, se identificó un nuevo gen (wboB) en la región wbo, también implicado en la síntesis de la cadena O. Dos genes más, wa**, manBnúcleo, se relacionaron con la síntesis del núcleo del LPS y otro, pgm, con la de precursores. Los mutantes en las ORF BMEII0682, ORF BMEII0053 y ORF BMEII1134, presentaron fenotipo R, pero no se les pudo asignar un papel en la síntesis del LPS. Los perfiles electroforéticos y el contenido en kdo de los LPSs fueron coherentes con los datos genómicos y permitieron clasificar los LPS-R en tres tipos: R1, con el núcleo del LPS aparentemente completo, y R2 y R3 con carencias progresivas en el mismo. El análisis con anticuerpos monoclonales demostró que el núcleo del LPS de B.melitensis es distinto del de B.abortus. Los mutantes R de B.melitensis mostraron una superficie más hidrófoba que las cepas parentales, y también que mutantes homólogos R de B.abortus. Otras diferencias entre los mutantes R y las cepas parentales fueron su mayor sensibilidad a la penicilina y resistencia a la oxacilina, su marcada carga de superficie, su sensibilidad a la polimixina B y al fago R/C y la accesibilidad de proteínas de membrana externa a los anticuerpos. Los mutantes R de B.melitensis fueron más sensibles a la acción bacetericida del complemento ovino y humano en ausencia de anticuerpos que las cepas parentales. Los mutantes R de B.melitensis fueron, a su vez, más resistentes que los de B.abortus. Con respecto de la atenuación, todos lo fueron en ratones BALB/c, de forma más marcada en los fenotipos R3 y variaron en su capacidad de multiplicarse en el bazo del ratón. Únicamente los mutantes en wbkD, wecA y per (procedentes de B.melitensis H38), todos de la región wbk-wec, fueron capaces de multiplicarse en el bazo hasta los niveles de la cepa parental. En ratón, ninguno indujo anticuerpos frente a la cadena I y solamente confirieron protección similiar a la vacuna lisa Rev1 y los mutantes de H38 per, wecA, wbkD y de 16M, wa** y wzm.
  • ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA GENÉTICA DE POBLACIONES DE VIBRIO CHOLERAE .
    Autor: FARFAN SELLARES M. ISABEL.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.
    Resumen: Se ha estudiado la variabilidad genética de poblaciones de V.cholerae procedentes de distintas fuentes y orígenes geográficos, que agrupan diferentes serogrupos y biotipos de esta especie. Se ha analizado la variabilidad genética a dos niveles: a un nivel proteico, aplicando la técnica de elctroforesis de aloenzimas multilocus (MLEE), y a un nivel génico, realizando el análisis de secuencias multilocus (MLST). Con ello, se ha intentando determinar la relación genética existente entre las distintas cepas estudiadas, considerando los datos obtenidos globalmente y por subrupos de poblaciones, para establcer la estructura poblacional y la diversidad génica que presenta V.cholerae. Un total de 107 cepas de V.cholerae, incluyendo 29 cepas pertenecientes al serogrupo 0139, fueron estudiadas aplicando la técnica de electroforesis de aloenzimas multilocus (MLEE) para determinar la variación alélica de 12 enzimas "housekeeping". Todos los loci fueron polimórficos y se identificaron 99 ETs para el total de la muestra. No se detectó una asociación significativa de las cepas en función de su serogrupo u origen geográfico. Se obtuvo el valor de diversidad génica media (H=0,50) más alto descrito para esta especie. El análisis del desequilibrio de ligamiento mostró una estructura clonal para el conjunto de la población, pero cuando se estudiaron subgrupos de esta población hubo excepciones, que hacen pensar en la existencia de un cierto grado de recombinación. Estos resultados sugieren que la población estudiada presenta una estructura poblacional epidémica. Para una colección de 29 cepas de serogrupo 0139 se ha realizado el análisis comparativo de fragmentos internos de 6 genes "housekeeping", aplicando la metodología de análisis de secuencias multilocus (MLST). Los resultados obtenidos muestran la existencia de al menos 3 clones distintos entre las cepas analizadas, contradiciendo la actual hipótesis monoclonal de este serogrupo. También se detectaron dos grupos muy distintos de cepas del serogrupo 0139, ST1 y ST4, que exhibieron diferencias en el perfil alélico para los 6 loci analizados.
  • DESARROLLO DE SISTEMAS EFICACES PARA EL CULTIVO Y LA IDENTIFICACIÓN DE FLAVOBACTERIUM PSYCHROPHILUM Y TENACIBACULUM MARITIMUM .
    Autor: CEPEDA PEREIRA CATALINA.
    Año: 2002.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: En este trabajo de desarrollaron métodos eficaces, rápidos y no tóxicos para el dianóstico de las enfermedades del "síndrome del alevín de trucha arcoris" y "enfermedad del agua fría" causadas por el patógeno de peces Flavobacterium psychrophilum y de la "flexibacteriosis marina" producida por Tenacibacubum maritimum. Se diseñaron sistemas de identificación para ambos patógenos basados en la Reacción en Cadena de la Polímerasa (PCR). Para ello se crearon programas de amplificación cortos y se desarrolló un nuevo método de análisis de los productos de PCR que emplea como colorante el azul de metileno, producto de muy baja toxicidad que sustituye el bromuro de etidio, colorante cancerígeno de uso común. Estos sistemas permiten el diagnóstico directo a partir de tejidos de pez en aproximadamente cuatro horas y la identificación de Flavobacterium psychrophilum y Tenacibaculum maritimum a partir de cultivos bacterianos puros o mixtos en tan sólo dos horas y media. Los sistemas resultaron ser altamente específicos y sensibles, con límites de detección que permiten la detección de los patógenos a partir de peces enfermos y de peces portadores con enfermedad subclínica. Los sistemas se validaron mediante la realización de ensayos de campo y la comparación con otros sistemas de identificación bacteriana. También se diseñaron medios para el aislamiento y cutlivo de F.psychrophilum y T.maritimum. Los nuevos medios Agar Flavobacteriumpsychorophilum (FLPA) y Agar Tenacibaculum maritimum (TMA) fueron los que permitieron un mejor crecimiento y recuperación de los patógenos a partir de peces enfermos en comparación con otros medios evaluados. Además, se demostró que el medio Caldo Flavobacterium psychrophilum (FLPB) es el óptimo para la obtención de antígenos destinados a la producción de vacunas. Los métodos desarrollados durante el trabajo de esta Tesis Doctoral no requieren el uso de productos tóxicos y son de bajo coste, siendo por lo tanto útiles en pequeños laboratorios con reducidos medios económicos.
  • CARACTERIZACIÓN GENÉTICA Y FENOTÍPICA DEL FLAGELO DE AEROMONAS .
    Autor: GAVÍN MARÍN ROSALINA.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Aeromonas spp., están implicadas en diversos procesos infecciosos, que afectan desde animales poiquilotermos a humanos. El género cuenta con distintos determinantes patogénicos que interactúan a diferente nivel para producir la enfermedad, siendo uno de estos el flagelo. En este trabajo describimos cinco genes de A.caviae Sch3N, implicados en el proceso de adhesión a células eucariotas Hep-2 a través del esamblaje del fagelo, así como de la biosíntesis del antígeno O de lipopolisacárido, y estudiamos su distribución en el género. Paralelamente constatamos la existencia de dos sistemas independientes de flagelación en aeromonas, polar y lateral respectivamente. Así mismo caracterizamos genética y fenotípicamente los loci de las flagelinas laterales de A.hydrophila AH-3 (una flagelina) y A.caviae Sch3N (dos flagelinas), así como los genes acompañantes que constituyen el locus laf de la primera cepa mencionada. Estudiamos el papel del flagelo lateral en los procesos de adhesión celular y formación de biofilm in vitro, viéndose ambos potenciados por la expresión de la flagelación peritrica, al igual que la invasión de células Hep-2. Diseñamos un método mediante PCR para la detección de la flagelinas laterales en el género, que nos permite establecer que el 60% de la población de aeromonas mesófilas expresan la proteína. Por último, detectamos el locus laf completo en la especie inmóvil y psicrófila Aeromonas salmonicida, que no produce flagelación lateral por la inserción de una putativa transposasa en su único gen que codifica para la flagelina lateral, siendo un caso bien documentado genéticamente de la abolición de un carácter patogénico altamente especializado.
  • EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE LAS SALMONELOSIS MULTIRRESISTENTE EN CASTILLA Y LEÓN .
    Autor: DELGADO RONDA NURIA.
    Año: 2002.
    Universidad: SALAMANCA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: La Salmonelosis es uno de los principales cuadros gastroentéricos en nuestro medio. En los últimos años se ha producido un incremento de resistencia a determinados antimicrobianos. El conocimiento de la resistencia y la epidemiología de las cepas es decisiva para determinar los antimicrobianos má sadecuados y conocer los mecanismos más probables de difusión de la resistencia. Se estudiaron 309 aislamientos de Salmonella aislados en 3 hospitales de Castilla y León para conocer los perfiles de sensibilidad de estos microorganismos, determinar los mecanismos de resistencia implicados en las cepas resistentes y por último realizar un estudio epidemiológico molecular mediante PFGE (PULSED FIELD GEL ELECTROPHORESIS) Y RAPD (RANDOMLY Y AMPLIFIED POLIMORPHIC DNA), para conocer la relación epidemiológica entre las cepas obtenidas, fundamentalmente entre las cepas multirresistentes.
  • TAXONOMÍA POLIFÁSICA DE POBLACIONES DE MICROORGANISMOS QUE ESTABLECEN SIMBIOSÍS CON PHASEOLUS VULGARIS .
    Autor: VALVERDE PORTAL ANGEL.
    Año: 2002.
    Universidad: SALAMANCA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: EDIFICIO DEPARTAMENTAL DE BIOLOGÍA.
    Resumen: La alubia, Phaseolus vulgaris, es un cultivo de gran importancia en la Península Ibérica, lo que la convierte en un modelo muy adecuado para el estudio de poblaciones endófitas en distintos suelos. En este estudio se han elegido una serie de suelos en el Noroeste de Portugal, que presentan la particularidad de ser suelos de montaña que han sido sometidos a técnicas de cultivo tradicional, sin abonos químicos, durante muchísimos años, y sobre los que se ha cultivado alubias de una variedad local de generación en generación. Se han aislado microorganismos endosimbiontes a partir de nódulos de plantas de Phaseolus vulgaris, y se ha realizado la caracterización polifásica de las cepas aisladas mediante la utilización de métodos fenotípicos y moleculares. Los resultados más sobresalientes fueron: Se aislaron 186 cepas de microorganismos endófitos de Phaseolus vulgaris, de las cuales 180 fueron capaces de producir nódulos efectivos y el resto fueron capaces de penetrar en sus raíces sin originar estructuras diferenciadas. La caracterización genotípica y fenotípica permitió la identificación de todas las cepas aisladas a nivel de especie y/o subespecie. De acuerdo con los resultados obtenidos, el 82% de las cepas fueron identificadas como Rhizobium rhizogenes, el 15% como Rhizobium tropici tipo A y el 3% como cepas del género Herbaspirillum. Por primera vez se aislaron cepas de R.rhizogenes (Agrobacterium rhizogenes) capaces de formar nódulos en plantas de Phaseolus vulgaris. De acuerdo con los resultados de los perfiles de TP-RAPD dentro de la especie Rhizobium rhizogenes puede haber más de una subespecie, hecho que será necesario comprobar en posteriores estudios. Se ha demostrado que existen cepas de Rhizobium tropici tipo A en la península Ibérica y que, además, estas cepas portan en el gen 16S elmismo "inserto" que las cepas americanas. Se ha caracterizado e identificado una nueva especie del género Herbaspirillum que se ha denominado Herbaspirillum lusitanum. La especie Herbaspirillum lusitanum es la primera que se describe como endófito de leguminosas.
  • ZONAS ENDÉMICAS DE ENFERMEDAD DE LYME EN LA COMUNIDAD AUTÓNOMA DEL PAÍS VASCO: ESTUDIO DEL PAPEL DE LOS MICROMAMÍFEROS EN EL MANTENIMIENTO DE B.BURGDORFERI SENSU LATO EN EL MEDIO NATURAL .
    Autor: GIL GIL HORACIO.
    Año: 2002.
    Universidad: ZARAGOZA.
    Centro de lectura: VETERINARIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.
    Resumen: La enfermedad de Lyme (EL) es un proceso multisistémico zoonótico producido por borrelia burgdorferi sensu lato y transmitido por la picadura de garrapata. Para el mejor conocimiento del ciclo biológico de este agente en zonas endémicas de EL en el País Vasco, se valoró el papel de los micromamíferos (roedores e insectívoros) como reservorios de este agente. Así mismo se estudió la presencia del agente en garrapatas de la vegetación y se caracterizaron los diveros aislamientos obtenidos mediante cultivo de tejidos de los micromamíferos y garrapatas. El estudio mediante PCR de 184 micromamíferos (7 especies) capturados en 6 zonas diferentes detectó una baja prevalencia de B.burgdorferi s.l., entre estos animales (0,54%, 1/184), posiblemente asociada a la baja parasitación encontrada por ninfas de l.ricinus. Este dato, junto a la ausencia de transmisión del agente de los micromamíferos a las larvas alimentadas sobre ellos, fue indicativo del escaso papel como reservorio de estos animales en nuestro medio, a diferencia de la situación existente en otros países europeos. La caracterización del único aislamiento (R57) obtenido a partir del cultivo de tejidos de los micromamíferos, sugirió que esta cepa podría corresponder a una nueva especie de espiroqueta, no descrita, próxima al género Borrelia pero diferente del resto de especies de este género. Además, se encontró una prevalencia en los micromamíferos de espiroquetas similares a R57 de hasta un 12%, lo que junto a la casi ausencia de B.burgodorferi s.l., en estos animales, nos sugiere que esta espiroqueta pueda ser responsable de la reactividad serológica en los micromamíferos observada en este estudio (13,75%). A diferencia de la situación encontrada en los micromamíferos, en las garrapatas de la vegetación (l.ricinus) se encontraron unos porcentajes mínimos de infección por B.burgdorferi s.l. De 1,85% para loas ninfas y 4,08% para los adultos. La genoespecie predominante fue B.burgdorferi sensu stricto. Además se observaron diferencias, en la presencia de genoespecies, porcentajes de infección en las garrapatas y en el consiguiente riesgo de infectarse en las diferentes zonas estudiadas. Finalmente, los 20 aislamientos obtenidos de garrapatas de la vegetación presentaron una gran variabilidad, de las que destacaron 2 cepas con similitudes con cepas atípicas americanas y una cepa de B.afzelii que corresponde al primer aislamiento de esta genoespecie en España.
270 tesis en 14 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14
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