LEVADURAS

Autor: ALLER ARRANZ ELENA.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: INSTITUTO DE AGROQUÍMICA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENT.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: No sólo Saccharomyces cerevisiae es capaz de fermentar una masa panaría. Algunas cepas de Torulaspora delbrueckii también lo son. Además es una levadura con una gran resistencia a diferentes tipos de estrés. En este trabajo la hemos utilizado como modelo de estudio del estrés por NaCL para posteriormente poder crear estrategias de mejora de levaduras comerciales de panadería. Hemos conseguido clonar dos genes que se utilizan frecuentemente como marcadores auxotróficos y también la obtención de un mutante auxotrófico. También hemos aislado genes de T. delbrueckii cuya sobreexpresión confiere resistencia a NaCL a S. cerevisiae. En el análisis de las bases moleculares de estos fenotipos hemos conseguido interrelacionar la ruta de la calcineurina que juega un papel fundamental en respuesta a estrés salino, y la protéina quinasa Snf1 que fue caracterizada en represión por catabolito.

Autor: SOLÉ OLLÉ MARIA.
Año: 2004.
Universidad: ROVIRA I VIRGILI.
Centro de lectura: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA I CIÈNCIES DE LA SALUT.

Resumen: Los Onygenales son uno de los grupos de hongos más fascinantes que existen. Pertenecen a los ascomycetes y agrupan a una gran cantidad de especies. Muchos de ellos presentan la rara habilidad de degradar la queratina, característica poco común dentro de los hongos, lo que les hace indispensables para el ciclo biológico de estas sustancias y su descomposición en la naturaleza (escamas, pelos, uñas, cuernos, etc.). Pero también pueden atacar, algunos de estos hongos, al hombre causándole importantes infecciones superficiales, las dermatofitosis. La necesidad de este estudio, parte de las discrepancias existentes en la clasificación taxonómica de este orden, tradicionalmente las clasificaciones de los hongos se basaban en las características morfológicas, proponiéndose clasificaciones claramente artificiales y existía discrepancia entre los autores que las proponían. En la actualidad se dispone de herramientas mucho más objetivas como son las moleculares, concretamente la secuenciación del ADN ribosomal. Basándonos tanto en las características morfológicas como en las moleculares, se ha realizado un estudio de caracterización de este grupo de hongos, centrándonos en aquellos géneros y especies donde existía una mayor controversia. Para la realización de estos estudios se han utilizado cepas y cultivos procedentes de colecciones internacionales. También se han estudiado muestras de suelo de diferentes orígenes. En los aislamientos se ha utilizado la técnica del anzuelo de queratina descrita por Vanbreuseghem 1952. Como resultado de nuestros estudios se han podido reportar nuevos géneros y especies del orden Onygenales. Nuestros estudios nos han permitido proponer las siguientes nuevas combinaciones: - Auxarthron kuehnii (Arx) Solé, Cano y Guarro - Auxarthron pseudoreticulatum (Currah) Solé, Cano y Guarro - Amauroascus queslandicus (Apinis y R.G.Rees) Solé, Cano y Guarro - Mallochia reticulata (Kuehn y Goos) Solé, Cano y Guarro - Gymnoascus hyalinosporus (Kuehn, Orr y Ghosh) Solé, Cano y Guarro - Gymnoascus japonicus (Uchiyama, Kamiya y Udagawa) Solé, Cano y Guarro Así como las nuevas especies para la ciencia: - Auxarthron concentricum Solé, Cano y Guarro - Auxarthron chlamydosporum Solé, Cano y Guarro - Gymnoascus armeniacus Solé, Cano y Guarro También se han podido reportar los siguientes nuevos géneros y especies para la ciencia: - Testudomyces con T. verrucosus como especie tipo. - Castanedomyces con C. australiensis como especie tipo. - Pseudoamauroascus con P. australiensis como especie tipo. Tras el estudio exhaustivo del género Gymnoascus se propone la sinonimización de los géneros Arachniotus, Gymnascella, Gymnoascoideus y Narasimhella con Gymnoascus. La presente tesis ha generado los siguientes artículos publicados en dos importantes revistas internacionales especialistas en el estudio de la micología. Mycological Research con un índice de impacto de 1,306 y Studies in Mycology con un índice de impacto de 1,667. 1. Molecular phylogeny of Amauroascus, Auxarthron and morphologically similar onygenalean fungi. Solé M., Cano J. & Guarro J. Mycological Research 106 (4): 388-396 (2002). 2. Two new species of Auxarthron mophologically and genetically close to Auxarthron kuehnii. Solé M., Cano J., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:97-102 (2002). 3. Molecular phylogeny of Gymnoascus and related genera. Solé M., Cano J., Pitarch L.B., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:141-152 (2002). 4. Pseudoamauroascus a new genus of the Onygenales (Ascomycota) Cano J., Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:173-180 (2002). 5. Castanedomyces australiensis gen. nov., sp. nov. a keratinophilic fungus from Australian soil. Cano J, Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:165-172 (2002).

Autor: VILLAMÓN RIBATE EVA.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAT DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Candida albicans es un hongo patógeno oportunista, capaz de producir en el hombre una gran variedad de infecciones, que abarcan desde candidiasis superficiales en piel y mucosas, a graves infecciones sistémicas o invasivas que afectan a los órganos internos. La respuesta inmune frente a los microorganismos patógenos consta en primer lugar de una respuesta innata para posteriormente desencadenarse una respuesta específica. La respuesta innata está mediada fundamentalmente por neutrófilos y macrófagos. Estas células a través de sus receptores reconocen al agente patógeno, lo fagocitan, lo destruyen y sintetizan mediadores de la inflamación y citocinas. El tipo de estos receptores más importante, recientemente descrito, es la familia TLR (Toll like receptors). Los TLRs son receptores transmembrana, con un dominio extracelular que participa en la interacción con los ligandos, y un dominio intracitoplasmático conservado, denominado TIR, responsable de la transducción de señal. Una vez que el TLR reconoce al agente patógeno, el dominio TIR del TLR interacciona con el dominio TIR de una molécula adaptadora. La primera molécula adaptadora que se describió fue MyD88 y posteriormente se demostró que existía una vía de transducción de señal dependiente de MyD88, común a todos los TLR y esencial para la inducción de citocinas inflamatorias, y una vía independiente de MyD88, que se ha descrito que es específica para TLR3 y TLR4 y que utiliza la molécula adaptadora TRIF.El objetivo general de esta tesis doctoral ha sido el estudio de la participación de estos receptores en la respuesta inmune frente a C. albicans, para ello, se han utilizado ratones deficientes en TLR2, TLR4 o MyD88 con base genética C57/BL6. Las conclusiones del trabajo son las siguientes: 1.-El receptor TLR2 es esencial para la resistencia del ratón frente a la candidiasis sistémica. Este receptor participa en la respuesta inmune innata mediando la producción de citocinas proinflamatorias (TNF-a) y quimiocinas atrayentes de neutrófilos (MIP-2) por los macrófagos en respuesta a C. albicans. Aunque los ratones deficientes en TLR2 tienen disminuida la producción de citocinas Th1 (IL-12 e IFN-g) son capaces de generar una respuesta inmune protectora y una respuesta serológica normal, por lo que el TLR2 no es imprescindible en la respuesta inmune adquirida frente a C. albicans.2.- La molécula adaptadora MyD88 es esencial para la resistencia del ratón frente a la candidiasis sistémica. Ratones deficientes en esta molécula son incapaces de secretar citocinas (TNF-a, IL-12 e IFN-g) y de desarrollar una respuesta protectora Th1 frente a C. albicans y, aunque son capaces de generar anticuerpos específicos frente al hongo, los títulos son menores que en los ratones control. Por lo tanto, MyD88 es esencial tanto en la respuesta inmune innata como en la respuesta específica frente a C. albicans.3.- El receptor TLR2 es la molécula responsable de la inducción de la producción de PGE2 por macrófagos y esplenocitos de ratón en respuesta a C. albicans.

Autor: LOPES RODRIGUES DA SILVA LUIS MANUEL.
Año: 2003.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: El deterioro por fenoles volátiles es uno de los más importantes que afectan a los vinos tintos produciendo grandes pérdidas económicas a nivel mundial. En la región del Dao, en Portugal, la producción de vinos de crianza biológica se lleva a cabo de una manera tradicional en barricas de madera, que pueden ser las responsables de la presencia de Dekkera bruxellensis en el vino. Esta levadura es uno de los microorganismos capaces de originar fenoles volátiles a partir de algunos ácidos presentes en los vinos. Por lo tanto, los objetivos de este trabajo fueron la caracterización e identificación de los microorganismos presentes en vinos tintos deteriorados por fenoles volátiles procedentes de la Región del Dao, la identificación de los microorganismos productores de los mismos en el vino y el diseño de un medio de cultivo selectivo y diferencial para el aislamiento de Dekkera bruxellensis. La caracterización e identificación se llevó a cabo por métodos fenotípicos y moleculares, que revelaron la presencia de seis especies de levaduras (Dekkera bruxellensis, Pichia fluxuum, Debaryomyces hansenii, Pichia membranifaciens, Saccharomyces cerevisiae) y de cinco especies de bacterias (Acetobacter oeni sp. nov., Acetobacter pasteurianus, Gluconobacter oxydans, Oenococcus oeni, Staphylococcus warneri) en los vinos analizados. La identificación de levaduras se llevó a cabo, previa agrupación de las mismas utilizando el tamaño de los fragmentos de ITS junto con su perfil de RFLP utilizando la enzima de restricción Hae III, utilizando la secuenciación tanto de este fragmento como del dominio D1/D2 del gen ribosómico 18S. Las bacterias se agruparon utilizando los perfiles de TP-RAPD, se clasificaron en diferentes géneros utilizando la secuencia completa del gen ribosómico 16S y se identificaron utilizando los perfiles electroforéticos de LMW RNA. En uno de los grupos obtenidos se analizó la hibridación del DNA total para confirmar la existencia de una nueva especie bacteriana para la que se ha propuesto el nombre Acetobacter oeni sp. nov. Todas las cepas aisladas en este estudio se inocularon en vino para estudiar la producción de fenoles volátiles y los resultados obtenidos mostraron que las únicas cepas capaces de producir estos compuestos pertenecían a la especie Dekkera bruxellensis. Por tanto, se diseñó un medio de cultivo selectivo y diferencial para esta especie que se ha denominado DSM (Dekkera Selective Medium) que contiene glucosa como fuente de carbono, carbonato cálcico como agente tamponante, cloranfenicol, cicloheximida y etanol como agentes inhibidores del crecimiento de bacterias y levaduras que pueden interferir en el aislamiento de Dekkera bruxellensis.

Autor: PÉREZ JIMÉNEZ Mª ÁNGELES.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: INSTITUTO MADRILEÑO DE INVESTIGACIÓN AGRARIA Y ALIMENTARIA (IMIA).

Resumen: En el presente trabajo se ha desarrollado la selección y caracterización de un panel de seis loci microsatélites polimórficos, con un elevado poder de discriminación, así como sus condiciones de amplificación múltiple, gracias a lo cual se dispone de unos nuevos marcadores moleculares efectivos para la identificación, tipificación y diferenciación genética de cepas de S. cerevisiae. Paralelamente, se ha evaluado la aplicación de diversos tipos de marcadores moleculares basados en la PCR (RAPDs, CAPS, AFLPs y SSRs), para la aplicación y caracterización genética de cepas de S. cerevisiae, poniéndose de manifiesto que las técnicas empleadas poseen un poder de discriminación y resolución suficiente para diferenciar de forma clara cepas de esta especie, superando las limitaciones existentes con los métodos de taxonomía clásica, aunque el grado de polimorfismo, el poder resolutivo, la efectividad y la rapidez de la técnica varían de unos métodos a otros. Tras una evaluación comparativa de los marcadores moleculares citados, el panel de los loci microsatélites seleccionados se revela como la técnica más eficiente, presentando un elevado grado de polimorfismo y poder de discriminación, y generando un mayor número de alelos efectivos por unidad de ensayo. Este sistema, cuenta además con la ventaja de la sencillez y agilidad del método e interpretación de los resultados, presentando una excelente reproducibilidad. Posteriormente, se ha aplicado el análisis de microsatélites (SSRs) al estudio de la ecología fermentativa de poblaciones de S. cerevisiae autóctonas de la D.O. Vinos de Madrid. Se ha puesto de manifiesto la elevada biodiversidad genética de la microbiota de esta especie, responsable de la fermentación espontánea de los mostos de dicha D.O., sin llegar a identificarse cepas dominantes y marcadamente representativas. Se ha observado que en cada subzona, y dentro de ésta en cada bodega, existe una tendencia a presentar su propia microbiota de aislados de esta especie. Asimismo se ha puesto en evidencia que la fermentación espontánea de mostos representativos de la D.O. Vinos de Madrid, ha sido llevada a cabo mayoritariamente por diferentes cepas de S. cerevisiae, existiendo una sustitución secuencial de cepas de esta especie durante las diferentes etapas de la fermentación. Se ha generado una Base de Datos fiable con los genotipos (loci microsatélites) de cepas de S. cerevisiae, que permite tener tipificados inequívocamente los aislados de esta especie. Debido a la robustez de la técnica, esta Base de Datos puede ser intercambiable entre laboratorios, sirviendo para identificar y contrastar de forma rápida nuevas cepas, constituyendo un recurso fundamental para el estudio y control de aislados de S. cerevisiae.

Autor: GARAU COLOM MARGARITA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA .
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO 12 DE OCTUBRE (MADRID)..

Resumen: El género Malassezia comprende levaduras lipofílicas que forman parte de la flora saprofita cutánea del hombre y animales de sangre caliente. Sin embargo, estas levaduras han sido también implicadas en diversas enfermedades cutáneas e infecciones sistémicas. En este estudio determinamos la concentración mínima inhibitoria de ocho antifúngicos (5-fluorocitosina, fluconazol, ketoconazol, itraconazol, voriconazol, albaconazol, anfotericina B y terbinafina frente a las diferentes especies de Malassezia, mediante una técnica de microdilución colorimétrica en el medio líquido de Leeming-Notmann. Observamos que la droga menos activa in vitro fue la 5-fluorocitosina (Media Geométrica-MG 128 mg/ml), seguida por el fluconazol (MG 2.499 mg/ml), anfotericina B (MG 1.661 mg/ml), terbinafina (MG 0.281 mg/ml), voriconazol (MG 0.037 mg/ml), albaconazol (MG 0.03 mg/ml), itraconazol (MG 0.018 mg/ml), y ketoconazol (MG 0.016 mg/ml). Concluimos a su vez que el género Malassezia comprende un grupo heterogéneo de especies que difieren en su comportamienrto frente a los diferentes antifúngicos ensayados.

Autor: VIEJO DIAZ MONICA.
Año: 2003.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: ESCUELA DE ESTOMATOLOGIA.

Resumen: La lactoferrina es una proteína abundante en las secrecciones mucosas y en la leche. Entre sus funciones biológicas destaca su actividad antimicrobiana, motivo por el que es incluida en el grupo de las proteínas de la inmunidad innata. El mecanismo de su acción antimicrobiana no ha sido esclarecido totalmente, y se admite que este efecto podría se debio a: 1) su alta capacidad para competir con los microorganismos por el hierro en estado libre. 2) Una acción directa sobre la membrana externa de bacterias Gram negativas o sobre la pared celular delevaduras. En este estudio se muestra que lactoferrina humana es capaz de interaccionar con la membrana citoplasmática de Candida albicans, induciendo un eflujo ligero de potasio, cambio en el potencial eléctrico de la membrana plasmática y acidificación intracelular. La proteína desencadena en esta levadura un proceso de muerte similar a la apoptosis, como se demuestra utilizando distintos marcadores celulares. Por vez primera se muestra que el efecto fungicida y bactericida "in vitro" de las trasnferrinas (lactoferrina, transferrina y ovotransferrina) es dependiente de la concentración de sal. Por otra parte, la comparación de las secuencias aminoacídicas de todas las proteínas de las transferrinas permitió identificar una secuenca común. El péptido sintético correspondiente a dicha estructura primaria, fue denominado kaliocina-1 (Lat. Kalium=potasio) debido a su capacidad para causar una ligera liberación del potasio intracelular y constaba de la secuencia: NH2-FFSASCVPGADKGQFPNLCRLCAGTGENKCA-COOH. Este péptido presentó una actividad microbicida (bactericida y candidacida) y solamente bajo las mismas condiciones que la molécula completa de lactoferrina, causando cambios intracelulares semejantes a los inducidos por lactoferrina. Sin embargo, aunque el modo de acción sobre células completas fue similar al observado para lactoferrina, las diferencias de comportamiento sobre membranas artificiales de kaliocina-1 (permeabilización inespecífica) y lactoferrina sugieren que sus efectos no son debidos a una acción permeabilizadora selectiva de potasio sino que tanto el péptido como la proteína parecen interaccionar con un componente de la membrana plasmática al que consideramos inductor de los cambios intracelulares observados y de la muerte celular.

Autor: GALÁN ALEJO LUIS CUAUHTÉMOC.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Los datos epidemiológicos que poseemos en nuestro país señalan que la mayor parte de los brotes de toxiinfecciones alimentaria se desencadenan en el ámbito doméstico. Debido a ello, cada vez más se están desarrollando formulaciones químicas con actividad desinfectante para ser utilizadas en el hogar. La mayoría de los productos desarrollados tienen como objetivo el actuar como bactericidas. Sin embargo, poco se estudia respecto a su posible actividad fungicida (tanto destrucción de mohos como levaduras). Hay que destacar que en este grupo nos encontramos a microorganismos patógenos, como Candida albicans y otros alterantes, que pueden crecer en superficies como paredes, suelos y lugares de difícil acceso. Por este motivo, nuestro trabajo pretende comparar la actividad fungicida de los desinfectantes utilizados en el ámbito doméstico, para conocer su eficacia real y su aplicabilidad. Al mismo tiempo, pretende evaluar el empleo de las técnicas impedanciométricas, ya que se trata de una metodología particularmente adecuada a pruebas de desinfectantes en su superficies. El protocolo deja la adherencia en el mismo estado morfológico y no los enfrenta a un estrés por remoción y por lo tanto no influye en la eficacia del desinfectante (Gibson y col., 1995). OBJETIVOS Evaluar la eficacia funguicida de los productos comerciales de uso domestico, aplicando las normas internacionales de evaluación UNE EN-1275 y 1650. Desarrollar una técnica rápida de evaluación de estos mismos productos comerciales. Desarrollar sistemas que simulen situaciones reales de uso. Verificar su eficacia, una vez adaptada la metodología, ensayar y comparar la eficacia de los diferentes desinfectantes en condiciones reales de uso. RESULTADOS Nuestros resultados señalan que el producto con hipoclorito sódico presenta la mayor actividad fungicida, tanto para las levaduras como para esporas de mohos, así como el glutaraldehído, que también supero las 2 normas UNE EN-1275 y 1650. Al mismo tiempo, hemos constatado la aplicabilidad de la impedancia como sistema para evaluar el recuento de estos microorganismos y poder evaluar la eficacia fungicida de diversas sustancias en un menor tiempo y en una mayor eficacia. CONCLUSIONES Es posible la adaptación de la metodología estándar a otra rápida, con una reducción en el tiempo de incubación y una simplificación de las pruebas a realizar. La adaptación del protocolo normalizado a un método de screening se debería realizar seleccionando dos concentraciones de los productos a emplear (80% y 20%) a dos tiempos de contacto (15 y 60 minutos). Los resultados obtenidos permiten clasificar los productos por diferentes niveles de eficacia. El producto con más amplio espectro fungicida en el hipoclorito sódico (lejía), tanto para levaduras como para esporas de mohos. Con este producto se consigue una reducción de más de 5 unidades logarítmicas de recuento con la menor concentración en menos de 5 minutos de contacto con gran diferencia respecto al resto. El producto que manifestaba una menor actividad contra Candida albicans fue el peróxido de hidrógeno, probablemente debido a su potente actividad catalasa. El peróxido no debería ser empleado para la desinfección de elementos contaminados con Candida. Los productos estudiados poseen una actividad desigual, dependiendo de las condiciones del ensayo (concentración, el tiempo de exposición y el microorganismo utilizado). Del ensayo (concentración, el tiempo de exposición y el microorganismo utilizado).

Autor: BENITO SÁNCHEZ M. ROCÍO.
Año: 2003.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO MICROBIOLOGÍA Y GENÉTICA.

Resumen: En el proyecto desarrollado en esta tesis doctoral se ha llevado a cabo la deleción y etiquetado de manera sistemática de los ORFs del brazo izquierdo del cromosoma II, contribuyendo así a la construcción de cuatro colecciones completas de mutantes nulos de Saccharomyces cerevisiae, disruptoma, que se han puesto a disposición de toda la comunidad científica. Una de estas colecciones, en concreto la colección de deletantes heterocigotos se ha utilizado para abordar un análisis fenotípico cuantitativo en paralelo de estas cepas mediante la tecnología de los microarrays de ADN. Se estudia el comportamiento de estos mutantes heterocigotos etiquetados molecularmente en presencia de wortmanina, cuya diana principal, ampliamente descrita en mamíferos, es la fosfatidil inositol 3-quinasa. El descrubrimiento de dianas moleculares secundarias permite conocer mejor la acción de la droga a nivel de la célula global. Este análisis fenotípico de 1546 cepas heterozigotas de Saccharomyces en respuesta al tratamiento con wortmanina ha permitido identificar 30 mutantes heterozigotos resistentes y 60 cepas haploinsucientes a wortmanina; algunos de estos mutantes se hallan afectados en genes esenciales para la levadura, demostrando la gran utilidad de este estudio en el análisis de mutantes en genes cuya deleción es letal. Este estudio ha permitido además determinar una serie de procesos biológicos afectados en el tratamiento con wortmanina y plantear una serie de hipótesis en cuanto a la resistencia o sensibilidad de determinados mutantes que ayudarán a profundizar en un futuro al desarrollo de compuestos antitumorales con mayor especificidad.

Autor: RUIZ PAVON LORENA BEATRIZ.
Año: 2003.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.

Resumen: En levaduras existen al menos dos vías de transporte de las proteínas de secreción a través del retículo endoplásmico. En la vía contraduccional dependiente de la SRP, ésta se une a la secuencia señal cuando emerge la proteína que se está sintetizando en el ribosoma. Esta interacción provoca una pausa en la elongación y en la traducción de la proteína. Una vez que el complejo SRP-ribosoma-proteína naciente llegan a la membrana del retículo endoplásmico, la proteína es translocada al lumen a la vez que continúa su síntesis. Los eventos de translocación son llevados a cabo por un complejo proteico de la membrana del RE, el translocón. La partícula del reconocimiento de la señal se compone de un 7SLRNA y seis polipéptidos. El aislamiento de los componentes de la SRP en Yarrowia lipolytica es el primer paso para el estudio de su función. La maquinaria de translocación de Yarrowia lipolytica presenta nuevas características frente a las de Saccharomyces cerevisiae. El gen YISRP72 codifica una proteína putativa de 538 animo ácidos (MW, 59,5 kDa). El análisis de Northern blot mostró un transcritó único de YISRP72 de 1.8 kb. Así mismo se encontró que la secuencia de aminoácidos de la proteína YISrp72p presenta identidad con la proteína Srp72p de otras levaduras (Saccharomyces cerevisiae y Schizosaccharomyces pombe). La interrupción del gen YISRP72, se llevó a cabo por el método de pop out y se encontró que la deleción del gen YISRP72 es letal para el microorganismo. Esto concuerda con el obtenido en los resultados para otro componente de la SRP, el gen YISEC652. La microscopia fluorescente nos mostró que la fusión YISrp72-GFPp se localiza en el citoplasma las mutaciones en la posición -1 de un péptido señal sintético par Y. Lipolytica produjeron cambios en la secreción de la enzima invertasa obtenida de S. Cerevisiae. La sustitución de alanina por fenilalanina produjo un incremento en la secreción de la invertasa en Y. Lipolytica.

Autor: RINCÓN ROMERO ANA M..
Año: 2003.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: Aproximadamente la mitad de las pérdidas agrícolas son debidas a las enfermedades de las plantas. Entre estas, más de la tercera parte son producidas por hongos filamentosos. El método que se emplea tradicionalmente contra estas enfermedades es el uso de fungicidas químicos que, a pesar de resultar rápidos y poco costosos, conllevan una serie de riesgos ecológicos como la contaminación y la aparición de cepas del patógeno resistentes. Una alternativa al uso de estos compuestos lo supone el control biológico, que se basa en el empleo de organismos distintos del hombre con capacidad para reducir al patógeno o minimizar el efecto que estos producen. En este trabajo nos hemos propuestos el desarrollo de nuevas herramientas de control biológico a partir del hongo filamentoso Trichoderma harzianum, unos de los organismos más empleados para tal fin. Para ello hemos elegido la cepa T. Harzianum, CECT 2413, cuya capacidad antagonista en el laboratorio ha isdo ampliamente demostrada. En primer lugar hemos comprobado la capacidad antagonista de esta cepa en condiciones tan variables como las que supone un experimento de campo, demostrando su eficiencia en un ensayo de protección de vid contra el patógeno Botrytis cinerea. Posteriormente se ha intentado la mejora de esta cepa proporcionándole mayor agresividad mediante la sobreexpresión de una enzima hidrolítica de pared celular, la b-1,3-glucanasa BGN13.1, una enzima con gran capacidad antifúngica in vitro. Como resultado hemos obtenido cepas con mayor capacidad antagonista contra distintos hongos fitopatógenos. La combinación de estas cepas con otras que sobreexpresan enzimas hidrolíticas con distinto modo de acción, como quitinasas y b-1,6-glucanasas, ha permitido mejorar aún más el potencial de control biológico de estos agentes. Por otra parte se ha procedido a sobreexpresar el gen bgn13.1 en Nicotiana tabacum, obteniéndose plantas con niveles detectables de la proteína exógena y con mayor actividad b-1,3-glucanasa que son además más resistentes al ataque por el hongo Rhizoctonia meloni. La resistencia parece estar relacionada directamente con la actividad b-1,3-glucanasa que presentan las líneas transgénicas y no patrece ser debida a una inducción de los mecanismos de defensa de la planta por la presencia de la enzima. Para finalizar se ha llevado a cabo un análisis de la expresión del gen bgn13.1 cultivando la cepa T. Harzianum en las distintas condiciones que suelen influir en la regulación de las hidrolasas extracelulares de hongos filamentosos. Así se ha comprobado que este gen se induce fuertemente en presencia de micelios de otros hongos y de polímeros que componen su pared, como la quitina, y se reprime en presencia de latas concentraciones de glucosa o de otras fuentes de carbono fácilmente asimilables como el sorbitol y el glicerol. No se induce en ausencia de fuente de nitrógeno pero sí se desreprime cuando no hay presente ninguna fuente de carbono. La expresión de este gen está modulada por las condiciones de pH ambiental, limitándose a valores cercanos a 5.5. Además, el gen bgn13.1 se experesa rápidamente en presencia de elementos de estrés como el H2O2 y el cadmio.

Autor: MARTÍNEZ PÉREZ-ROMERO ANA ISABEL.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La pared celular es una diana de elección para el desarrollo de fármacos antifúngicos. Un 35% del peso seco de la pared celular de C.albicans está constituido por las manoproteínas. Entre las proteínas unidas covalentemente a la pared celular podemos encontrar dos tipos: las proteínas GPI (glucosilfosfatidilinositol) y las proteínas Pir (proteínas con repeticiones internas). Una búsqueda de homólogos de proteínas de la familia Pir de Saccharomyces cerevisiae en una base de datos de C.albicans mostró la existencia de un único gen con características típicas de los miembros de esa familia. El gen CaPIR1 de C.albicans presenta dos alelos de desigual tamaño, que se diferencian en el número de repeticiones internas en su secuencia. El marcaje de la proteína con el epitopo V5 muestra que CaPir1 se encuentra unida covalentemente a la pared celular de C.albicans mediante enlace sensible al álcali y es secretada al medio durante su cultivo. Los mutantes heterocigóticos en cada uno de los alelos mostraron un fenotipo idéntico, sin embargo ambos mutantes resultaron ser fenotípicamente diferentes a su cepa parental. Los mutantes presentaron una velocidad de crecimiento más lenta y morfología alterada con respecto a células de la cepa parental CAI4 así como una mayor sensibilidad a sustancias que afectan el correcto ensamblaje de los componentes de la pared celular (calcofluor white y rojo Congo); además mostraron una disminución en la filamentación en medio sólido. La imposibilidad de obtener el mutante homocigótico, así como el elevado efecto fenotípico de la interrupción de un solo alelo abre la posibilidad de que CaPIR1 sea un gen esencial en C.albicans. Además, se ha estudiado otro gen de C.albicans, CaPLP1, que presenta cierta homología con miembros de la familia Pir pero no codifica una proteína Pir típica. Su interrupción produce una mayor sensibilidad a rojo Congo y calcofluor white.

Autor: PEDROS MARI BEATRIZ.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FARMACIA.

Resumen: Las hidrofobinas son una familia de proteínas fúngicas hidrofóbicas de secreción, de pequeño tamaño molecular, que exhiben capacidad para autoensamblarse y para unirse a una interfase hidrofílica, hidrofóbica en una película anfipática, además se encuentran entre las moléculas de superficie más activas conocidas hasta el momento, y son proteinas que se dan exclusivamente en hongos miceliares. Las hidrofobinas se caracterizan por presentar ocho residuos de cisteina conservados en sus secuencias que forman puentes disulfuro intramoleculares, y están implicadas en la formación de estructuras aéreas y en la unión de las hilas a estructuras hidrofóbicas formando agregados. Este trabajo describe por primera en el hongo dimórfico, patógeno oportunista, Candida albicans, la caracterización de una especie de 250 aminoácidos (CaHPB) perteneciente a esta familia de proteinas. A partir del inmunorrastreo de una genoteca de cDNA de C.albicans con un anticuerpo policlonal que reconoce específicamente componentes proteicos de la pared celular de la forma micelial del hongo, se aisló el gen (CaHPB) que codifica para la hidrofobina, el cual fue secuenciado y clonado. A partir de la secuencia de aminoácidos se procedió a sintetizar un oligopéptido perteneciente a una región altamente antigénica, que se utilizó para generar anticuerpos policlonales. Estos anticuerpos fueron utilizados como sonda para llevar a cabo una caracterización fisiológica de proteina. Los resultados obtenidos han permitido identificar la proteina como una hidrofobina de clase II.

Autor: ELGUEZABAL VEGA NATALIA M..
Año: 2003.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGÍA.

Resumen: Candida albicans es la especie más representativa y ampliamente estudiada del género Candida. Se trata de un hongo dimórfico, patógeno oportunista, comensal común de mucosas oral, gastrointestinal y genital de individuos sanos. Su transición de comensal a patógeno se ve facilitada en el caso de pacientes que reciben terapias inmunosupresoras, presentan inmunodeficiencias o en individuos muy jóvenes o ancianos. Para efectuar dicha transición C. Albicans dispone de diferentes factores virulencia, como son, la transición blastospora-micelio, la variabilidad antigénica, al cambio fenotípico, la adhesión, la hidrofobicidad superficial, el mimetismo molecular y la producción de enzimas extracelulares. Entre estos factores, la adhesión representa un papel crítico pues el paso inicial y esencial previo a la colonización. La candidiasis oral es de especial importancia en individuos VIH+ y en portadores de prótesis dentales. Debido a que la adhesión se considera la primera etapa en la colonización por C. Albicans resulta interesante el desarrollo de fármacos que puedan bloquear este proceso. La administración de anticuerpos monoclonales que imiten las actividades anti-Candida que posee la IgA secretora de la saliva podría ser utilizada como medida terapéutica para prevenir el desarrollo de la candidiasis oral. En este trabajo se ha estudiado el efecto la saliva y de diversos anticuerpos monoclonales dirigidos contra moléculas de la superficie de Candida sobre la adhesión de C. Albicans a células epiteliales orales, resinas restauradoras dentales y resinas empleadas para la fabricación de prótesis dentales. Se ha observado que mediante las distintas actividades que presentan los anticuerpos monoclonales y que son compartidas por algunos componentes de la saliva, como la aglutinación, la inhibición de la adhesión, inhibición de la filamentación o incluso la muerte celular directa, se puede disminuir y de alguna manera, controlar la colonización por Candida. En el caso de la inhibición de la adhesión hemos observado la importancia de que exista un reconocimiento específico entre los anticuerpos monoclonales y los componentes superficiales de Candida aunque resaltamos que el reconocimiento no garantiza que se produzca un bloqueo en la adhesión, ya que existen anticuerpos monoclonales que reconocen componentes de Candida y no inhibien su adhesión o incluso la aumentan. El anticuerpo monoclonal C7 producido contra una manoproteína de estrés reconocida por la IgAs de la saliva mostró tres actividades biológicas: inhibición de la adhesión, inhibición de la filamentación e inhibición del crecimiento.

Autor: ROSARIO MEDINA M. INMACULADA.
Año: 2003.
Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El papel que desempeñan las palomas como portadoras de hongos levaduriformes en Gran Canaria, ha sido la incógnita que ha movido el desarrollo del presente trabajo, máxime si tenemos en cuenta que Canarias es una de las Comunidades Autónomas con mayor número de palomas mensajeras de España. Para la realización del presente trabajo nos hemos planteado estudiar el papel que juega la paloma como portadora de levaduras con impacto en la salud pública: Cryptococcus neoformans, Cryptococcus albidus, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus uniguttulatus, Cryptococcus humicolus, Cryptococcus curvatus y Candida albicans. Para ello hemos trabajado con palomas en libertad y en cautiverio recolectado muestras de excementos localizados en plazas públicas y muestras de excretas, buche y cloaca de palomas localizadas en palomares privados. Hemos observado que el clima de Gran Canaria es excelente para el desarrollo de distintas especies de criptococos y otras levaduras patógeneas para el hombre y los animales, obteniendo que tanto en plazas públicas como en palomares privados se encuentran presenten Cryptococcus neoformans, Cryptococcus albidus, Cryptococcus laurentii, Cryptococcus uniguttulatus y Candida albicans, no aislándose Cryptococcus humicolusni Cryptococcus curvatus. La prevalencia de infección en buche que hemos obtenido ha sido para Cruyptococcus neoformans de 9.66% y la prevalencia de infección en cloaca de esta misma especie levaduriforme ha sido de 1.81%. De las muestras de excretas analizadas en las 17 plazas públicas muestreadas en nuestra isla, hemos obtenido que le criptococo que mayor porcentaje de aislamiento presentó fue C. Laurentii con un 23.52% y el de menor frecuencia de aislamiento fue C. Aniguttulatus. Sin embargo, la levadura aislada con mayor frecuencia ha sido C. Albicans, la cual se detectó en 5 de las plazas muestreadas (29%). De los aislados aviares el auxanotipo de C. Neoformans que con mayor frecuencia hemos obtenido en nuestro estudio ha sido el 001101111, el mismo que con mayor frecuencia se obtuvo de las cepas de origen humano cedidas por el Hospital Dr. Negrín de Las Palmas de Gran Canaria.

Autor: RUIZ ROMERO CRISTINA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La pared celular de la levadura Saccharomyces cerevisiae es una estructura esencial para el mantenimiento de la integridad celular, cuya dinámica está regulada por procesos de síntesis, ensamblaje y degradación de los componentes que la forman. Entre los importantes mecanismos que contribuyen al mantenimiento de esta estructura se encuentran las rutas de transducción de señales, encargadas de desencadenar la respuesta celular adecuada frente a diversos estímulos. En concreto, la ruta mediada por la MAPK Slt2 en S.cerevisiae, también denominada "ruta de integridad celular", está implicada en la señalización ante situaciones de estrés generadas en la pared celular, resultando su regulación imprescindible para que la célula mantenga la integridad de esta estructura, y con ello la viabilidad celular en dichas condiciones. En el presente trabajo se ha llevado a cabo un estudio de los mecanismos que intervienen en la regulación de la ruta de integridad celular, modulando positiva o negativamente la señalización a través de la misma, y se ha analizado la importancia de esta ruta para el mantenimiento de una pared celular estable. La ruta medidad por Stl2 resulta ser esencial para el desencadenamiento del mecanismo compensatorio, proceso que se origina en las células afectadas por un daño en la pared y cuyo fin es llevar a cabo una serie de cambios que compensen el daño producido y mantengan funcional esta estructura. Además, se ha realizado una aproximación genómica al estudio de genes relacionados con estas funciones, en el marco de un proyecto europeo de análisis funcional del genoma de la levadura, llevando a cabo la caracterización de genes posiblemente implicados con la dinámica de la parede celular y la morfogénesis a partir de una colección de 620 mutantes nulos. El empleo de ensayos dirigidos a poner de manifiesto defectos en la pared ha conducido a la identificación de un grupo de proteínas cuya ausencia provoca una señalización constitutiva a través de la ruta de integridad celular, lo que indica que pueden ejercer un papel en el mantenimiento de una pared celular estable. Por último, en este trabajo se describe la función de una de estas proteínas, denomindad Itcl, en la represión de genes específicos de células de tipo sexual MATa, y se sugiere su posible implicación en la modulación de la expresión de genes relacionados con la pared celular.

Autor: CIUDAD SÁNCHEZ ANTONIA.
Año: 2002.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DPTO. MICROBIOLOGIA FAC. DE CIENCIAS.

Resumen: La levadura Candida albicans es un hongo patógeno que causa infecciones sistémicas en enfermos de SIDA y pacientes sometidos a tratamientos del sistema inmune. Se ha identificado en este hongo un homólogo de la proteína Rad52 de Sacchatomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe y humanos. La ausencia de CaRad52p en la célula se traduce en defectos en los mecanismos de recombinación homóloga, reflejados en procesos genéticos como la integración de fragmentos líneales de DNA, el mantenimiento de plásmidos, así como en una mayor inestabilidad genómica, manifestada por ejemplo en la pérdida de cromosomas con elevada frecuencia. La ausencia de CaRad52p en la célula provoca también el crecimiento pseudofilamentoso del hongo en condiciones en las que no está inducido el crecimiento hifal. Finalmente, las células que carecen de CaRad52p son más invasivas y menos virulentas.

Autor: BARÓ TOMÁS M. TERESA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT.

Resumen: La criptococosis es una micosis profunda que afecta a personas y animales, su agente etiológico es una levadura capsulada llamada Cryptococcus neoformans. Se inicia por inhalación de las levaduras y se disemina por vía hematógena al SNC. Se ha realizado un estudio de la criptococosis en nuestro país en el que se han caracterizado 154 cepas de orígen clínico humano y animal y de muestras ambientales.- El estudio ambiental de muestras de polvo doméstico de pacientes con criptococosis ha resultado negativo. Este sustrato no es un reservorio saprofítico de C.neoformans en nuestro medio ambiente. - Se ha demostrado por primera vez que la variedad gattii de C.neoformans existe en nuestro país y que ha producido brotes epidémicos de criptococosis en un número elevado de cabras de la provincia de Cáceres. - La distribución de los serotipos en un número elevado de cabras de la provincia de Cáceres. - La distribución de los serotipos no es homogénea en España. El serotipo A es predominante en las muestras clínicas y ambientales. Se ha encontrado una elevada tasa del serotipo D. Todas las cepas aisladas de cabras son del serotipo B. - No se ha encontrado ninguna cepa resistente a la anfotericina B. Las cepas del serotipo A son las que mostraron menor sensibilidad. La 5- flurocitosina es la menos activa sobre esta levadura. El fluconazol muestra menor actividad in vitro que itraconazol, 3 cepas tenían una CIM > 64 ug/ml. El seropito D muestra menor sensibilidad que el resto de los serotipos a los dos triazoles (P

Autor: CHARRIEL RODRÍGUEZ GUADALUPE.
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El incremento de las micosis invasoras junto al aumento de resistencias a los antifúngicos clásicos crea la necesidad de usar nuevos antifúngicos como el voriconazol que suponen una mejora de la eficacia clínica y paralelamente una reducción de la toxicidad. El NCCLS publicó el documento M27-A, posteriormente M27-A2, y el documento M38-P como un protocolo para el estudio de la sensibilidad frente a hongos levaduriformes y filamentosos. Se trata de métodos poco prácticos, de ahí la necesidad de alternativas más accesibles como el método Sensitre Yeast One. Los objetivos de este estudio han sido investigar la sensibilidad de distintas especies de hongos levaduriformes y filamentosos al voriconazol comparándola con la sensibilidad de fluconazol, así como conocer la sensibilidad a distintos antifúngicos de los hongos filamentosos testados mediante el método Sensitre Yeast One. Se llevaron a cabo varios estudios en paralelo. En el primero se comparó la sensibilidad al fluconazol de hongos levaduriformes por el medio CHROMAgar Candida más fluconazol con dos técnicas de microdilución: Sensititre Yeast One y el método de referencia M27-A2. Se incluyeron 156 cepas: 109 Candida albicans, 19 C.parapsilosis, 12 C.glabrata, 11 C.tropicalis, 2 C.krusei, 1 C.pelliculosa, 1 C.lambica, 1 Saccharomyces cervisiae. En el segundo estudio se comparó la sensibilidad de Candida spp., al voriconazol mediante dos métodos de microdilución: Sensititre Yeast One y el Método de Referencia M27-A2. Englobó un total de 272 cepas que incluían 132 Candida albicans, 62 C.parapsilosis, 33 C.glabrata, 21 C.krusei, 15 C.tropicalis y 9 C.lusitani. En el tercer estudio se obtuvo la sensibilidad a seis antifúngicos, entre ellos el voriconazol, de hongos filamentosos mediante una técnica de microdilución; Sensititre Yeast One. Para ello se estudiaron 86 cepas, de las cuales 79 fueron Aspergillus, 4 Fusarium, 2 Scedosporium apiospermum y 1 Rhizomucor pusillus. Destacó el alto porcentaje de resistencia al fluconazol de C.albicans. El medio CHROMAgar Candida más 8 ug/ml de fluconazol, puede ser utilizado para determinar sensibilidad al fluconazol o sensibilidad disminuida al fluconazol. Sin embargo, para poder determinar si el crecimiento en el medio representa realmente una cepa resistencia (CMI > 64 ug/ml) o si se trata de cepas con sensibilidad dependiente de la dosis (CMI entre 16-32 ug/ml), debe realizarse un estudio mediante otras técnicas, como los métodos de microdilución. La utilidad del medio CHROM-FZ dependerá de la procedencia de la muestra y de la especie estudiada. La concordancia establecida entre el Método de Referencia del NCCLS y el Sistema Sensititre Yeast One para hongos levaduriformes fue superior al 90%. Voriconazol presentó actividad in vitro (CMI < 1 ug/ml) frente a todas las especies estudiadas de hongos levaduriformes: C.albicans, C.glabrata, C.krusei, C.tropicalis, C.lusitaniae y C.parpasilosis. Frente a algunas de las cepas de C.albicans resistentes al fluconazol, el voriconazol mostró menor actividad, (CMI > 1 ugr/ml), ello podría ser explicado por la posible existencia de resistencias cruzadas a los azoles. Señalar la alta sensibilidad al voriconazol de los hongos filamentosos estudiados, sobre todo del género Aspergillus así como el género Fusarium y la especie Scedosporium apiospermum resistentes a otros azoles. Los hongos filamentosos mediante el sistema Sensitre Yeast One mostraron alta sensibilidad al voriconazol y a la anfotericina B, sensibilidad intermedia frente a itraconazol y resistencia ante 5-fluorcitosina, ketoconazol y fluconazol. Sensitre Yeast One constituye un método rápido y eficiente para concoer la sensibilidad al voriconazol y a otros antifúngicos tanto de hongos levaduriformes como filamentosos.

Autor: FRANCO SÁNCHEZ ALEJANDRO.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La trehalosa se caracteriza por ser un disacárido no reductor, formado por dos moléculas de glucosa que en levaduras desempeña funciones vitales, no solo como metabolito energético sino también como metabolito de respuesta a estrés, acumulándose en tales circunstancias. En la levadura con fisión Schizosaccharomyces pombe, la trehalosa esta sometida a una estricta regulación tanto en su biosíntesis como en su hidrólisis a través de vías de señalización intracelular (MAP Kinasas y PKA1/SCK1), dichas vías actúan a nivel transcripcional y postraduccional. Hasta el presente trabajo se conocían los genes responsables de la síntesis de trehalosa-6-P (metabolito intermediario) tps1+ (trehalosa-6-P sintetasa) y de la hidrólisis de trehalosa ntp1+ (trehalasa neutra). En este trabajo hemos clonado y caracterizado el gen responsable de la actividad trehalosa-6-P fosfatasa principal de la levadura con fisión (tpp1+). Cuando se interrumpió el gen observamos acumulación de trehalosa-6-P detectable mediante TLC, además de igual manera que ocurre en Saccharomyces cerevisiae, las células mutadas manifestaron crecimiento termosensible, mostrando un estacionamiento prematuro de su crecimiento. A nivel de regulación transcripcional mostró una clara inducción de la expresión en respuesta a choque térmico y osmótico estando en este último caso regulada por la ruta de MAP kinasas cuyo elemento principal en la MAP kinasa Sty1p. El conjunto de resultados muestran un estricto mecanismo de regulación no solo a nivel transcripcional sino también postrancripcional y/o traduccional, así como mecanismos compartidos con los genes tps1+ y ntp1+. Otro aspecto que se abordó fue la descripción de interacciones entre las proteínas responsables de la síntesis e hidrólisis de trehalosa existiendo un complejo multienzimático en el que participan Tps1p, Tpp1p y Ntp1p, aunque la forma activada de trehalasa neutra (Ntp 1p) no interviene en dicho complejo. La trehalasa neutra activada debe existir en una conformaicón homomérica (trimérica o dimérica) según los resultados obtenidos mediante FPLC aunque es activada por diferentes vías en función del estrés. En el caso de estrés oxidativo, las células de S.pombe mostraron una activación del enzima a través de un proceso dependiente de fosforilación y practicamente postraduccional, además la viabilidad de las células de se veía claramente comprometida en las cepas interrumpidas en los genes tps1+ y ntp1+. Actualmente se propone de la trehalosa podría actuar como agente eliminador de formas tóxicas del oxígeno además de metabolito energético. La activación de la trehalasa neutra de S.pombe tiene lugar por procesos de fosforilación a través de PKA1 que fosforila en residuos de serina ó treonina. Mediante mutagénesis dirigida hemos descrito residuos de serina (6,51,71) críticos para la activación del enzima pero además los contenidos de trehalosa intracelular en cepas portadoras de mutaciones S6A, S41A y S71A revelan un papel regulador por parte de Ntp1p sobre la síntesis de trehalosa. También se caracterizó una secuencia de susceptible de unión a Ca que presentaba alta identidad con un motivo "EF-Hand", al realizar mutagénesis dirigida en los residuos D97, R100, I104 y D108, observamos que los residuos de ác.aspártico fueron críticos para la activación de la trehalasa neutra así como se vió afectada la sítesis de trehalosa reflejando la existencia de un complejo mecanismo implicado en la regulación del metabolismo de la trehalosa en S.pombe.