LEVADURAS, 4

Autor: GOMEZ LORENZO M. DE GRACIA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: GLAXOWELLCOME, S.A..

Resumen: Las sordarinas son unos compuestos antifúngicos descritos recientemente que inhiben la síntesis de proteínas de levadura. Para conocer el mecanismo de acción de estos compuestos se obtuvieron mutantes espontáneos de Saccharomyces cerevisiae resistentes a GN193663, un derivado sintético de sordarina. Estos mutantes segregaron en dos grupos de complementación, FPR1 y FPR2. El análisis previo del grupo FPR1 demostró que existían mutaciones de resistencia en el factor de elongación 2 (EF2). En esta memoria se recogen los datos obtenidos en el análisis y la caracterización del grupo de mutantes FPR2. Se comprobó que en este grupo el gen que codifica la proteína ribosomal rpPO era el responsable de la resistencia a sordarinas. Se analizaron los cambios en la secuencia codificante del gen, y las interacciones entre rpPO, EF2 y otros componentes celulares por técnicas genéticas y bioquímicas clásicas. Además, las sordarinas se usaron como herramientas para conocer la estructura tridimensional por criomicroscopía electrónica de complejos ribosoma*EF2*sordarina.

Autor: OROZCO ELORZA IRANZU.
Año: 1999.
Universidad: VALENCIA .
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: Como aproximación al estudio del dimorfismo se utilizó el despliegue diferencial de fragmentos de cDNA (differential display) aislandose cinco fragmentos de los cuales solamente tres: Frag 24, Frag 53 y Frag 127 eran dependientes de las condiciones inductoras de la miceliación, si bien el resto: Frag 16 y Frag 59 se expresaba mayoritariamente bajo tales condiciones. Solo uno de los clones originados, el DD53 (procedente del cDNA Frag 53) presentó una homología significativa con proteínas existentes en la base de datos, siendo de un 84% de similitud (65% de identidad) con determinadas zonas del gen PRB1 que codifica la proteasa B vacuolar de S. Cerevisiae. El inserto de cDNA fue liberado mediante digestión enzimática con EcoRI y se utilizó como sonda en el rastreo de la genoteca genómica C9, con el propósito de aislar un clon que contuviese el gen entero. El fragmento Hindlll-Xbal del clon 5b que contenía el gen completo fue secuenciado y su secuencia nucleotídica reveló la existencia de una única pauta abierta de lectura de 1395 pb que codificaba una proteína de 465 aa, homóloga a la proteasa B de S. Cerevisae y similar a miembros de la superfamilia de las subtilisín-serín-proteasas, concretamente de la familia de las proteinasas K. Estudios sobre la regulación del gen evidenciaron que CaPRB1 está sujeto a represión catabólica por nitrógeno pero no por glucosa y que no está implicado en morfología ni en la transición dimórfica, al menos bajo las condiciones estudiadas. Los resultados obtenidos sugieren que su expresión está relacionada con el estrés nutricional por NAGA, potenciado por el estrés térmico. Estudios de localización cromosómica en las cepas CA/4 y SC5314 revelaron la presencia del gen en el cromosoma 2. La interrupción génica utilizando la técnica "ura-blaster" permitió la obtención secuencial de los mutantes mono y dialélicos en su versión auxótrofa y protótrofa, sin que se les halla podido atribuir un fenotipo aberrante, ni en cuanto al crecimiento y morfología en condiciones normales o de estrés nutricional y/o térmico, ni en la capacidad de miceliación. La complementación funcional de la mutación prb1 en S.cerevisae con el gen CaPRB1 fue negativa a pesar de detectarse niveles adecuados de transcrito. Estudio de localización con el epítopo FLAG no han permitido la localización de la proteína en C.albicans y en S.cerevisae se detecta un precursor inactivo.

Autor: SANSINFORIANO HERNANDEZ M. ESTHER.
Año: 1999.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE BETRINARIA DE CACERES.

Resumen: En el presente trabajo se ha optimizado el proceso de extraccion de ADN a partir de Cryptococcus neoformans y otras levaduras relacionadas, y se ha descrito un nuevo método de extracción que permite lisar con gacilidad la gruesa cápsula mucopolisacarídica de estas levaduras y con ello mejorar los rendimientos respecto a los protoclols tradicionales con un menor coste. A continuación, mediante amplificaciones RAPD, hemos estimado las relaciones genéticas existentes entre las distintas categorías taxonómicas (género, especie, variedad y serotipo) de las cepas tipo de las especies etudiadas de Cryptococcus spp. Y Candida spp. Para ello hemos realizado la ampliación al azar del ADN polimórfico tanto de las mezclas de ADNs representativas de cada nivel taxonómico, como de los ADNs individuales que constituían dichas mezclas. Los resultado obtenidos ponen de manifiesto una alta diversidad genética entre las especie estudiadas, e incluso entre las variedades y serotipos de Cryptococcus neoformans, sugiriendo que Cr. Neoformans var. Noformans y Cr. Neoformans var. Gattii son muy distintas desde el punto de vista genético y podrían considerarse dos especies diferentes. Posteriormente, se ha determinado qué gragmentos de ADN de los obtenidos en los distintos patrones de amplificación son característicos de cada nivel taxonómico estudiado, obteniendo maracadores molulculares RAPD diferenciales para género, especie, variedad, serotipo y tipo de "mating". Basándonos en estos fragmentos RAPD, y en los patrones de amplificación obtenidos de los ADNs de las cepas de campo, hemos realizado la identificación de los aislamientos clínicos obtenidos brotes de criptococosis en ganado caprino, paloma y humano. Entre los brotes detectados en ganado caprino en la provincia se ha establecido su relación tanto temporal como espacial, determinando su distribución geográfica, su evolución a lo largo del tiempo y las relaciones genéticas entre las distintas muestras de los brotes. Por último se ha definido un grupo de cebadores que amplifican específicamente los fragmentos marcadores de cada nivel taxonómico, de tal manera que estamos en condiciones de identificar y por tanto diagnosticar una muestra problema, con tan sólo ocho amplificaciones. Todos los resultados obtenidos nos llevan a plantearnos nuevos etudios epidermiológicos que nos pongan de manifiesto la distribución de Cryptococcus neoformans en el medio ambiente y nos ayuden a establecer la correcta epidemiología de la criptococosis en nuestra región.

Autor: RODRIGUEZ GONZALEZ JAVIER.
Año: 1999.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: MICROBIOLOGIA.

Resumen: El tema de estudio de la tesis doctoral consistió en ampliar los conocimientos sobre el funcionamiento del sistema de glicosilación en las levaduras del genero Pichia. Para esto se plantearon dos objetivos iniciales: -Purificar y caracterizar la invertasa de Pichia anomala para deducir, de los datos que se obtengan, como opera el sistema de glicosilación en las de dicho genero. -Expresar el gen SUB2 que codifica para la invertasa de Sccharamyces cerevisiae, en la levadura Pichia anomala, para profundizar en el conocimiento de la estructura de los glicoproteinas heterologas producidas por especies del genero Pichia. Para conseguir el primer objetivo se purificó la invertasa de Pichia anomala y se estudiaron caracteristicas de la misma, tanto de tipo fisico-quimico, como por ejemplo el efecto del ph. De la temperatura y de concentración de algunos sustratos(sacaros y rafinosa) sobre la actividad, estabilidad de la enzima, como referidos a la composición y estructura del carbohidrato de la invertasa. En referencia al segundo de los objetivos, se expresó en Pichia anomala, el gen SUC2 de Saccharomyces cerevisiae determinandose algunas caracteristicas. Estructurales de la invertasa heteróloga producida por Pichia anomala.

Autor: CABELLO PARDOS JUAN.
Año: 1999.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FAC DE BIOLOGIA.

Autor: SANCHEZ DIAZ ALBERTO.
Año: 1999.
Universidad: SALAMANCA .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.

Resumen: Rum1 y Sic1 son proteínas capaces de regular la fase G1 del ciclo celular, ya que son inhibidores de los complejos que forma la quinasa p34(Cdc2/Cdc28) con las ciclinas de tipo B. En esta tesis doctoral se demuestra que bajos niveles de expresión de SIC1 en Schizosaccharomyces pombe rescatan todos los fenotipos asociados a las células que carecen del gen rum 1+. Además, altos niveles del inhibidor SIC1 en S.pombe inducen rondas extras de replicación del ADN sin llevar a cabo la mitosis; este fenotipo es muy similar a la sobreexpresión de rum1+. Tambien, la expresión moderada de rum1+ en Sccharomyces cerevisiae recupera la parada en G1 característica de las células cdc4 sic1Delta. La sobreexpresión de rum1+ en S. Crevisiae provoca un bloqueo en la fase G1 del ciclo celular, cuyo fenotipo es consistente con la inactivación de la actividad quinasa asociada a todas las ciclinas de tipo B. Finalmente, hemos estudiado el dominio de rum1+ que interacciona con la ciclina cdc13+e inhibe la acticidad quinasa de los complejos cdk/ciclina. Este dominio está formado por 80 aminoácidos que presentan homología con el dominio inhibidor de Sic1. Todas estas observaciones sugieren que la proteína Rum1 de S.pombe y la proteína Sic1 de S.cerevisiae definen una familia de inhibidores de Cdk que regula e forma negativa los complejos Ciclinas B/Ckd1 durante la fase G1 del ciclo celular. Cdc10 es un factor de transcripción de S. Pombe que regula la expresión de genes importantes para llevar a cabo la fase S.Hemos clonado un nuevo gen de mamíferos (ratón y humano), denominado HBP2, que complementa los mutantes de cdc10. Este nuevo gen codifica una proteína del tipo HMG que regula de forma positiva la transcripción de algunos genes que dependen de Cdc10. Dada la importancia de las proteínas HMG en procesos de diferenciación gracias a su capacidad de transcribir genes específicos de tejido, proponemos que HBP2 es un nuevo factor de transcripción de mamíferos.

Autor: MALAGON BAUTISTA FRANCISCO.
Año: 1999.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA.

Resumen: En esta tesis hemos estudiado el efecto de las alteraciones estructurales del ADN en recombinación homologada mitótica en Sacchaomyces cerevisiae. Para ello analizamos el fenotipo en recombinación de diversos mutantes afectados en transcripcion y en estructura de la cromatina, y de secuencias de ADN que forman estructuras secundarias in vivo. Los resultados más relevantes han sido el descubrimiento de que: Las alteraciones estructurales en el ADN tienen un efecto directo en la incidencia y en los mecanismos de recombinación, como se deduce del hecho de que las mutaciones afectadas en transcripción y estructura del ADN spt4-3,spt6-140,spt2 y hta1-htb1 , causan diferentes grados de hiperrecombinacion entre repeticiones directas e invertidas y un aumento en la proporción de tramos largos de conversión genica y de la asociación a inversiones respecto al silvestre. La recombinación entre repeticiones invertidas puede producirse tanto por un mecanismo de conversión génica dependiente de los genes RAD51,RAD52,RAD54,RAD55,RAD57, como por un mecanismo dependiente de los genes RAD1,RAD52,RAD59. La transcripción y las mutaciones spt estimulan la recombinación independiente de Rad51p. Los mutantes hipo-rec en fondo rad51 spt6-140 aislados en esta tesis confirman la asociación de los fenotipos de hiperrecombinación, aumento de la proporción de conversión de tramo largo y disminución de la dependencia de Rad51p de los mutantes spt6-140. La estimulación de la recombinación en los mutantes spt6-140 es producida por defectos en elongación de la transcripción de la secuencia donadora, un fenómeno que también se observa en los mutantes ppr2 ,afectados en elongación de la transcripción. Las inversiones no requieren la formación de estructuras de Holliday, sino que se producen mayoritariamente mediante un mecanismo de replicación inducida por corte(BIR) seguido por reasociación de cadenas sencillas(SSA) independiente de RAD51, lo que explica la alta proporción de consersiones de tramo largo. Proponemos que la proteína Rad51p inhibe la formación de horquillas de replicación durante la recombinación y que la proteína Rad59p juega un papel esencial en la recombinación independiente de RAd51p facilitando la reasociación de cadenas sencillas conjuntamente con Rad5p. Los nucleosomas inhiben la formación de estructuras secundarias de ADN, inhibición que se puede liberar mediante la reducción de los niveles de la historia H4. Los palíndromes largos forman estructuras secundarias in vivo en E.coli que se resuelven por una vía independiente de RuvC.

Autor: CRESPO DOMINGUEZ M. JESUS.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: ESCUELA DEL DOCTORADO Y DE FORMACION CONTINUADA.

Resumen: El género Malassezia esta formado por levaduras lipofilas que constituyen una parte importante de la microbiota saprofita fungica de la piel del hombre y de los animales. Estas levaduras se asocian con patologias crónicas y superficiales de la piel del hombre y de los animales y con septicemias en pacientes inmunodeprimidos y neonatos que reciben nutrición parenteral rica en emulsiones lipidicas. Recientemente el genero ha sido revisado y ampliado a siete especies: M: furfur, M.pachydermatis, M. Sympodialis, M.globosa, M.obtusa,M.restricta y M.slooffiae. En la presente Memoria de Tesis Doctoral se ha estudiado la incidencia de las levaduras del genero Malassezia en el conducto auditivo externo de perros y gatos, asi como en distintas zonas corporales de los caballos y rumiantes domesticos. Para ello se han analizado 444 animales procedentes del Hospital Clinic Veterinari y del Servei de Granges i Camps Experimentals de la Universitat Autonoma de Barcelona, y de diversas clinicas veterinarias de la provincia de Barcelona. Se tomaron muestras de los conductos auditivos externos de 188 perros y 17 gatos que se les diagnosticó clinicamente una otitis externa, y de 76 perros y 51 gatos que no presentaban esta patologia. Asimismo, se tomaron muestras de distintas zonas corporales tales como axilas, ingles, dorso, mama, ano y conductos auditivos externos de 50 caballos, 25 cabras, 25 ovejas y 12 vacas. Ninguno de estos animales presentaba algun tipo de patologia dermica. Por otro lado, con la finalidad de hallar un buen metodo que permitiera un mantenimiento prolongado y adecuado de las levaduras del genero Malassezia, se estudiaron distintos metodos de conservación. La congelacion a 80º c, la liofilización, el mantenimiento en agua destilada y el mantenimiento en diferentes medios de cultivo a tres temperaturas diferentes(4ºC,temperatura ambiente y 28ºC), se ensayaron con 24 cepasde M.pachydermatis aisladas de animales y 11 cepas pertenecientes a especies lipodependientes, entre ellas 6 cepas de colección y 5 cepas aisladas de animales. Entre los resultados obtenidos con respecto al estudio de la incidencia de Malassezia en los perros, la frecuencia de aislamiento de esta levadura fue del 62,2% en los animales con otitis y del 50% en los animales sin otitis. Sin embargo, esta levadura se aisló en el 41,2% de los gatos con otitis y en el 17,6% de los gatos sin otitis. En el grupo de animales en que se estudió la incidencia de especies lipodependientes, dichas levaduras se aislaron en el 4,5% de los perros con otitis, 17,6% de los gatos con otitis y 7,8% de los gatos sin otitis. Malassezia furfur y M.obtusa fueron las especies lipodependientes del genero Malassezia en casos de otitis externa, correspondiendo dichos asislamientos a las primeras descripciones de especies lipodependientes del genero Malassezia en casos de otitis externas caninas. Malassezia sympodialis se aisló enlos dos grupos de gatos y M.futur unicamente en los gatos sin otitis externa. El aislamiento de M.sympodialis en cultivo puro en casos de otitis externas en gatos, corresponde a la primera cita bibliografica acerca de la implicación de especies lipodependientes en un proceso patológico en gatos. Asimismo, el aislamiento de M.furfur en el conducto auditivo externo felino, es también la primera descripcion de esta especie en esta habitat. Entre los resultados obtenidos con respecto al estudio de la incidencia de Malassezia en los caballos y rumiantes domesticos, destacaremos que Malassezia spp. Se aisló en el 60% de los caballos, 28% de las ovejas, 44% de las cabras y 58% de las vacas. En estos animales, la frecuencia de aislamiento de las especies lipodependientes(42%) fue mucho mayor que la frecuencia de aislamiento observada para M.pachydermatis(3%). Entre las distintas aisladas, cabe destacar los primeros aislamientos bibliograficos de las siguientes:M.sympodialis, M.globosa y M.restricta en las ovejas, M.pachydermatis,M.furfur,M.sympodialis, M.obtus, M.globosa y M.restricta en las cabras y M.furfur, M.slooffiae, M.obtusa, m: globosa y M.restrica en los caballos. El aislamiento de M.restrica corresponde a la primera descripción de la presencia de esta especie en la piel de los animales. En cuanto a los resultados obtenidos en el ensayo de diferentes metodos de conservacion ,proponemos el metodo de la congelacion a 80ºC, como el unico metodo capaz de mantener viables todas las especies descritas del genero Malassezia. La liofilización solo resulto ser un metodo adecuado cuando los liofilos se conservaron a-80ºC , como el único metodo capaz de mantener viables todas las especies descritas del genero Malassezia, La liofilización sólo resulto ser un metodo adecuado cuando los liofilos se conservaron a -80ºC, siendo totalmente ineficaz cuando los liofilos se mantuvieron a temperatura ambiente. El mantenimiento en agua destilada y en diferentes medios de cultivo utilizando diferentes temperaturas, fueron metodos totalmente inadecuados para conservar las levaduras de este genero.

Autor: PEÑALVER RODRÍGUEZ ELIDA.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS "ALBERTO SOLS" CSIC.

Resumen: El transportador de maltosa en levadura es una proteína de membrana plasmática con doce segmentos transmembrana (12-TMS), que es inactivada durante el ayuno de fuente de nitrógeno cuando se halla presente uan fuente de carbono fermentable. Esta inactivación, conocida como "inactivación catabólica", es un proceso irreversible que ocurre como consecuencia de la degradación del transportador en la vacuola tras su internalización por endocitosis, en un proceso que requiere ubicutina. En este trabajo se ha investigado el papel de otros factores en la endocitosis de esta proteína. Las proteínas de membrana que llevan señales de endocitosis se concentran en ciertas regiones de la membrana de las que emergen vesículas. La formación de vesículas, tanto de secreción como de endocitiosis, requiere la participación de una serie de proteínas de revestimiento. En levadura se han identificado tres tipos de vesículas que se diferencian tanto por su función como por los componentes que forman su revestimiento. En levadura se han identificado tres tipos de vesículas que se diferencian tanto por su función como por los componentes que forman su revestimiento: vesículas revestidas de clatrina y vesiculas revestidas del complejo COPI o del complejo COPII. Utilizando mutantes deficientes en la cadnea pesada en la clatrina, así como en varias de las subunidades de los complejos COPI yCOPI II, hemos demostrado que la clatrina y las proteínas Sec23 y Sec24 del complejo COPII participan en la endocitosis del transportador de maltosa. Estos resultados difieren de los obtendiso en el caso de la endocitosis del receptor del factor-a, que no precisa los componentes del COPII. Se ha investigado también el papel del citoesqueleto de actina y de tubulina en la endocitosis. Para ello se han usado mutantes deficientes enactina y en las proteínas Sac6 y Abp85, que forman parte de los microfilamentos. También se han usado mutantes en b-tubulina, que forman parte de los microtúbulos, y nocodazol que es un inhibidor de la formación de estas estructuras. Los resultados muestran que los microfilamentos de actina participan en la endocitosis del transportador de matosa, mientras que los microtúbulos no participan. Los resultados también muestran diferencias cuantitativs entre la endocitosis del receptor del factor-a y del transportador de matosa en lo que se refiere a la función del citoesqueleto. También se ha visto que el etanol inhibe la primera etapa de la endocitosis del transportador , es decir, su internalizacion. Nuestros resultados indican que esta inhibición es debida a alteraciones producidas pro eletanol en la organización de la membrana plasmática que afectan también a la endocitosis de otras proteínas. Aparentemente, la endocitosis es particularmente sensible a estas alteraciones si se compara con otros procesos que también ocurren en la membrana plasmática. Los resultados mostrados en este trabajo sugieren que la endocitosis del transportador de maltosa, con 12-TMS, y la del receptor del factor-a, con 7-TMS, podrían tener distintos requerimientos.

Autor: BELLI MARTINEZ GEMMA.
Año: 1999.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE LLEIDA.

Resumen: En Saccharomyces cerevisiae, diversas condiciones de estrés moderado, como el estrés termico y el oxidativo, causa una parada transitoria en la fase G1 del ciclo celular. En este trabajo se muestra que el estrés hiperosmotico moderado, en condiciones en las que la velocidad de crecimiento no resulta afectada a largo plazo, produce una parada transitoria en G1, acompañada de una reduccion de los transcritos de CLN1,CLN2 y CLB5, pero no de CLN3. Esta reduccion se produce en paralelo a la acumulacion temporal de la proteina Cln3, pues resulta estabilizada despues de estrés. El estrés osmotico moderado provoca un retrase en la entrada en ciclo en cultivos sincronizados en G1. El hecho que este retraso se produzca en condiciones en las que Cln3 es la unica ciclina presente indica que este podria ser la proteina diana de los efectos del estrés sobre el ciclo celular. Los experimentos in vitro muestran que el estrés osmotico moderado produce alteraciones reversibles sobre la interaccion entre Cln3 y Cdc28 y, en consecuencia, una reduccion de la actividad quinasa asociada a los complejos. El alelo hiperestable CLN3-1 no suprime los efectos en G1 causados por el esres osmotico moderado, resultando poco probable la intervencion de una CKI. Estos efectos sobre los complejos Cln3-Cdc28, asi como la estabilizacion transitoria de la proteina Cln3 son extrapolables a los efectos causados por el estrés termico, hecho que sugiria la existencia de mecanismos similares que provocarian la alteracion sobre los complejos Cdc28-Cln3 despues del estrés termico y osmótico.

Autor: MIGUEL BOUZAS TRINIDAD DE.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Los carotenoides constituyen el grupo de pigmentos naturales más ampliamente distribuido y estructuralmente variado con importantes funciones en la fotosíntesis, la nutrición y la protección frente a daños oxidativos. Tienen gran importancia en avicultura y acuicultura para la pigmentación de la carne del pollo, la yema del huevo y el músculo del salmón y la trucha salmonada. La mayoría de los pigmentos utilizados hoy en día en la industria alimentaria se obtienen por síntesis química, sin embargo las leyes restringen cada vez más este modo de obtención debido a posibles riesgos tóxicos. Este trabajo consiste en la búsqueda de microorganismos productores de carotenoides que sean susceptibles de ser utilizados a nivel industrial. Los análisis por HPLC revelaron la presencia de beta-caroteno en cuatro cepas de la levadura Rhodosporidium estudiadas. Determinadas características de cultivo de la levadura Rhodosporidium hacen que éste pudiera ser rentable desde el punto de vista industrial. Asimismo se encontró presencia de astaxantina, beta-caroteno y 3-hidroxiequinenona en una colección de halobacterias. La bacteria Gordonia jacobaea, a la que inicialmente se llamó cepa MV-1 fue aislada durante esta búsqueda de microorganismos productores de colonias pigmentadas. El estudio realizado a esta bacteria incluye las pruebas taxonómicas que llevaron a la descripción de la nueva especie (índice GC, pruebas bioquímicas y secuenciación del gen 16S RNAr). Los estudios de HPLC y espectrometría de masas revelaron la existencia de grandes cantidades de cantaxantina en esta cepa. También se obtuvieron mutantes de la cepa silvestre con EMS y se llevaron a cabo estudios de pigmentación de ejemplares de la trucha arco iris cuando se añadía al pienso de estos animales el extracto del mutante 26 de Gordonia jacobaea. Los resultados fueron muy positivos y prueban la efectividad de dichos extractos en la pigmentación del músculo de la trucha, y por tanto, su posible utilización industrial.

Autor: DIAZ PEREIRA ALMUDENA.
Año: 1999.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Phaffa rhodozyma es una levadura basidiomicética que crece a una temperatura óptima de 21-22 grados C. Entre las características diferenciales de esta levadura destacan su color naranja debido a la producción de pigmento astaxantina y su metabolismo hetetrófico. Hoy en día es la fuente por excelencia para la producción de astaxantina a partir de una fuente natural por múltiples razones: crecimiento relativamente rápido, calidad nutricional y su seguridad como aditivo alimentario. En el presente trabajo hemos tratado de incrementar la producción del pigmento astaxantina, así como de abaratar los costes de producción. Para ello hemos empleado distintas técnicas: . Manipulación genética de la ruta de síntesis de la astaxantina mediante el uso de distintos vectores de transformación con el gen crtYB. . Adición al medio de cultivo de distintas sustancias estructuralmente relacionados con los carotenoides. . Búsqueda de distintas actividades enzimáticas extracelulares que nos permitiesen crecer a la levadura en una fuente de carbono económica para la producción industrial. Los resultados obtenidos, demostraron que la manipulación genética se presenta como la estrategia más adecuada para la obtención de cepas hiperproductoras estables y que es posible también obtener mutantes bloqueados en un punto concreto de la ruta. La adición de distintas sustancias estructuralmente relacionadas con los carotenoides como el colesterol, el lanosterol o el escualeno no afectó a la producción del pigmento astaxantina. Por último, se caracterizó una beta-amilasa extracelular producida por la cepa C.E.C.T. 1690 con un Pm de 240 kDa, pH óptimo de 5.5, Km para el almidón de 1.35 mg/mL y un pI de 8.6. Inducible por alda-1,4-glucanos y reprimible por glucosa. La cantidad de enzima secretada al medio por esta cepa, hace todavía inviable el uso de residuos de almidón como única fuente de carbono para el crecimiento industrial de esta levadura.

Autor: HERRERO MOLINA CARMEN.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Es conocido que durante el envejecimiento se produce un declive en las respuestas del sistema inmunológico. Dado el importante papel que juega el macrófago en el desarrollo e inicio de una respuesta inmunológica, el objetivo de esta tesis ha sido el estudio del efecto del envejecimiento en las distintas actividades funcionales de esta celula. En el estudio del efecto de la edad en los mecanismos de proliferacion, se ha detectado una falta de proliferacion en respuesta a GM CSF que se correlaciona con la falta de expresion de STAT5A detectada. Por otro lado, en lo que a los mecanismos de activacion se refiere, en esta tesis se muestra como la expresion de MHC II inducida por IFN g, es menor en el caso de los macrofagos de ratones viejos. Esta peor expresión de las moleculas de clase II puede ser debida por una menor cantidad de factores de transcripcion que se unen al promotor de los genes de clase II. Otros parametros analizados como la proliferacion en respuesta a M CSF o la activación por LPS parecen no estar alterados con la edad.

Autor: BELLOCH TRINIDAD CARMEN.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Las relaciones filogenéticas entre las especies del género Kluyveromyces deducidas tanto de las secuencias del gen mitocondrial COII y de los análisis de restricción de la región ITS-5.8S rRNA nos presentan al género Kluyveromyces como un taxón polifilético. Los resultados presentados han demostrado la utilidad de los RFLPs de la región ITS-5.8S rRNA como método rápido para la identificación de cepas pertenecientes a las especies del género Kluyveromyces. La heterogeneidad presente en las especies K. dobzhanskii, K. lactis y K. marxianus ha dificultado el establecimiento de límites claros entre ellas. Los árboles obtenidos de las secuencias ITS:5.8S rRNA nos presentan a estas tres especies en grupos claramente diferentes. Esta separación entre las tres especies también ha sido confirmada con otros marcadores moleculares, como los RFLPs de mtDNA y los cariotipos. A la vista de la reconstrucción filogenética de la especie K. lactis basada en las secuencias ITS-5.8S rRNA, hemos desestimado la diferenciación de las dos variedades existentes en base a la utilización de lactosa...

Autor: PAVIA SEGARRA JAVIER.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: La primera parte del trabajo se centra en el estudio de una fracción que presenta la capacidad de precipitar adoptando morfologías regulares que recuerdan las morfologías que presenta el hongo CANDIDA ALBICANS. El estudio de este estracto revela que solamente se encuentra compuesto por los polisacáridos B (1,6)-glucano, guitina y proteínas. Los cuales forman módulos que interaccionan entre sí para dar lugar a la formación de estos precipitados. Dentro de estos módulos se han encontrado proteínas unidas tanto de manera independiente a cada uno de los polisacáridos y a ambos a la vez. Posteriormente en la segunda parte del trabajo se realizó el seguimiento mediante un anticuerpo monoclonal, denominado 3A10 de la ruta de incorporación, que sigue una proteína en su unión a la pared celular de manera covalente. Donde se encontró que el antígeno reconocido por el anticuerpo era de naturaleza O-glicosídica. Para su unión covalente a la pared parece ser necesaria la participación de una segunda proteína de naturaleza N-glicosídica. Además también se apreció que parece tener importancia también, la unión del antígeno desde las primeras etapas de su síntesis a pequeñas cadenas de N-acetilglucosamina.

Autor: MOUKADIRI ISMAIL.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: El trabajo que se presenta consiste en la caracterización de dos proteínas de la pared celular de la levadura de la cerveza del pan y del vino Saccharomyces cerevisiae. Además de la caracterización estas proteínas se presenta la identificación de los genes que las codifican y un estudio del fenotipo que confieren a las células. El gen ICWP (Inner Cell Wall Protein) codifica Icwp, una proteínas que se une covalentemente al glucano, un polímero fibrilar que confiere rigidez y forma a la pared celular. Iowp está localizada en la capa más interna de la pared celular y parece desarrollar un papel estructural en íntima asociación con el glucano. El segundo gen identificado, DBCWP1 (Disulphide Bound Cell Wall Protein) codifica una proteína que se extrae de las paredes por el efecto de agentes reductores. Dbcwp1 se localiza en la superficie de las yemas en crecimiento y parece contribuir a limitar la permeabilidad de la pared. Finalmente, se ha demostrado la viabilidad de utilizar Dbcwp1 para determinar la localización de proteínas de fusión de interés biotecnológico en la pared celular de S.cerevisiae.

Autor: TOUFANI SALAH.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Con el fin de mejorar los estudios en la Biotecnología de producción de aceitunas verdes en la cuenca mediterránea y estudiar el fenómeno Killer en estos ambientes salinos moderados, puesto que el estudio de éste carácter puede aportar numerosas ventajas a la hora de desarrollar nuevas tecnologías para los procedimientos de fabricación de productos alimenticios como es el caso de los alimentos fermentados, se desarrolló una nueva línea de investigación en el Departamento de Microbiología III, por ello se estudió con anterioridad la microbiota de levaduras presentes en las salmueras de aceitunas verdes españolas y portuguesas, y con esta perspectiva completando de ese modo el estudio en la área mediterránea, la presente tesis describe las levaduras presentes en las salmueras de aceitunas verdes de distintas zonas de Marruecos. En este sentido, al incorporar levaduras aisladas de las salmueras marroquíes a los aislamientos realizados de las salmueras de España y Portugal, implica dos tipos de ventajas: 1) Permite generalizar los resultados a un ámbito mediterráneo dando mayor consistencia y validez a los resultados obtenidos; 2) Estudiadas las características comunes y específicas de las salmueras de cada país, la aplicación de los resultados concretas y las nuevas tecnologías que de ellos puedan derivarse, será más fácil, fiable y efectiva.

Autor: MARTINEZ DIAZ GUERRA TERESA.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: El primer objetivo de esta tesis fue comparar el poder de discriminación y la reproducibilidad de cuatro métodos de caracterización subespecífica. De los métodos comparados, el de hibridación con una sonda específica resultó ser el más adecuado y, por tanto, se seleccionó para las siguientes fases de la tesis. A continuación se estudió la diversidad genética entre los aislamientos de C. albicans sensibles al fluconazol y entre los aislamientos resistentes, llegándose a la conclusión de que no existe un origen clonal común para las cepas resistentes. Posteriormente, se hizo un estudio prospectivo de pacientes VIH- positivos con candidosis oral recidivante que presentaron un cambio en la sensibilidad de sus cepas al fluconazol aisladas de un mismo paciente y se ha demostrado que la aparición de resistencia a este antifúngico se produce por el desarrollo de resistencia secundaria, tras el tratamiento prolongado con fluconazol, en cepas que previamente eran sensibles.

Autor: GOMEZ LOBO NAVARRO M. DOLORES.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: Candida Albicans es un hongo capaz de provocar infecciones en el hombre conocidas como candidiasis. Cuando el sistema inmunológico del hospedador está comprometido, estas infecciones puede causar la muerte. La incidencia de las candidiasis ha aumentado en los últimos años como consecuencia de los tratamientos fuertemente inmunosupresivos, así como por la proliferación de enfermedades como el SIDA. Para profundizar en el estudio molecular de Candida Albicans, rastreamos dos genotecas de expresión de Candida albicans con anticuerpos frente a dominios SH2 y SH3 de dos proteinas adaptadoras implicadas en la ruta de trasmisión de señales en eucariotas superiores. Como fruto del escrutinio, clonamos y posteriormente caracterizamos los genes CaFrs1 y CaSSM1. El producto del gen CaFRS1 es semejante a la subunidad b de la sintetasa del tRNA de la fenilalanina (PheRS) de Saccharomyces cerevisiae y no parece estar directamente relacionada con la transmisión, digo transición, dimórfica del hongo. El producto del gen CaSSM1 es muy homólogo (86,6%) a la proteína ribosomal Ssm1 de S.cerevisiae, componente estructural de la subunidad 60S de los ribosomas y su expresión sufre modificaciones en función de las condiciones de cultivo (pH, temperatura) pero no puede asociarse una mayor expresión con una determinada morfología. Anticuerpos frente a la proteína de S. Cerevisiae reconocieron una proteína idéntica movilidad electroforética en la fracción ribosomal y de membranas de C.albicans.

Autor: MANEV FLORES VICTORIA EUGENIA.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: En el presente trabajo se han aislado y caracterizado dos genes de Candida Albicans, especie fúngica que actúa como patógeno oportunista. Uno de los genes (EFB1) codifica para el factor de elongación EF-1Beta; en su secuencia presenta dos exones separados por un intrón; el gen se expresa en ambas morfologías del hongo y su funcionalidad se ha demostrado mediante complementación en un mutante de S.cerevisiae defectivo en dicho gen. Oligonucleótidos sintéticos deducidos de la secuencia del gen EFB1 se han utilizado para identificar específicamente cepas de C.Albicans, tanto de laboratorio como aislados clínicos. El segundo gen caracterizado (SSB1) codifica para una proteína de choque térmico (ssb1) de la familia Hsp70. Dicho gen presenta una elevada similitud con sus homólogos de distintas especies. La función del producto génico se ha demostrado también por complementación en mutantes de S.cerevisiae. La expresión de dicho gen está controlada por temperaturas como demuestran experimentos de choque térmico y la expresión de invertasa bajo el control del promotor SSB1.