LEVADURAS, 5

Autor: GUARINOS VIÑALS ESTHER.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El trabajo llevado a cabo en la tesis doctoral está centrado en el estudio del tallo ribosómico de la levadura Saccharomyces cerevisiae. Para llevar a cabo este estudio se han utilizado distintas aproximaciones. En primer lugar se han llevado a cabo experimentos de mutagénesis dirigida en el extremo carboxilo de proteína P0 que es uno de los componentes del tallo ribosómico. Por otro lado se ha procedido a obtener una serie de proteínas quiméricas que se han expresado en distintos fondos genéticos estudiándose el efecto de su expresión tanto en el tiempo de generación de las cepas como en la composición de los distintos tallos ribosómicos. De esta forma se han caracterizado las distintas interacciones entre las proteínas de los grupos P1 y P2. Por último, y mediante cromatografía de afinidad, se ha comprobado que la población de ribosomas de Saccharomyces cerevisiae es homogénea en la composición del tallo en el sentido de que cada uno de los ribosomas cuenta con una proteína de cada tipo siendo del tipo P1alfa.P1beta.P2alfa.P2beta. Los resultados obtenidos han aportado numerosos datos tanto sobre la estructura como sobre la función del tallo ribosómico en este organismo..

Autor: PEREZ CAMPO FLOR M..
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: El presente trabajo se ha centrado en la consecución de dos objetivos principales relacionados con el proceso dimórfico en Yarrowia liplytica. En primer lugar hemos descrito la importancia del suero como inductor de la transición dimórfica en este organismo, demostrando que el suero induce una transición más activa y más estable en presencia de glucosa que la inducida por N-acetilglucosamina. El segundo objetivo consistió en el aislamiento de genes implicados en el dimorfismo, para lo cual se siguieron dos aproximaciones experimentales diferentes. Por complementación de una cepa levaduriforme de Y.lipolytica con una librería génica se aisló el gen PEM1, que codifica una fosfatidiletanolamina-N-metiltransferasa, enzima implicada en la biosíntesis de fosfatidilcolina. Utilizando otra aproximación experimental diferente se aisló el gen MGF1 de Y.lipolytica, que codifica una proteína perteneciente a la familia APSES de proteínas de hongos. Como se ha comprobado en este trabajo, la expresión activada de esta proteína de localización nuclear se traduce en Y.lipolytica en la incapacidad para llevar a cabo la transición dimórfica..

Autor: TRILLA MATA JOSE ANGEL.
Año: 1998.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: El presente trabajo se ha centrado en la caracterización del proceso de síntesis de quitina en S. cerevisiae, tanto a nivel genético como a nivel bioquímico. Hemos aislado y caracterizado molecular y funcionalmente, un nuevo gen, CHS7, implicado en la síntesis de quitina en esta levadura. El gen CHS7 codifica una proteína del retículo endoplásmico requerida para la actividad QSIII, cuya expresión se induce en todos los momentos en los que se requiere síntesis de quitina. En ausencia de Chs7p, Chs3p, la subunidad catalítica de la actividad QSIII, queda retenida específicamente en el retículo endoplásmico no llegando a su lugar de actuación, lo que se traduce en un defecto in vivo e in vitro en la síntesis de quitina. También hemos profundizado en la caracterización molecular y funcional de otros genes implicados en la síntesis de quitina: CHS4 codifica una proteína con una doble función a) es un activador postraduccional de la actividad QSIII in vivo e in vitro y b) está implicada en el anclaje de Chs3p a la zona de la membrana plasmática donde ejerce su acción. Finalmente, el gen CHS6 codifica una proteína requerida para la actividad QSIII estando implicada en el transporte subcelular de Chs3p..

Autor: NADAL PENADES M. DOLORS.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Durante cuatro añadas consecutivas, desde 1993 hasta 1996, se tomaron muestras de cepas de levadura a partir de mostos del Penedés en fermentación espontánea. Estos muestreos se realizaron a partir de mostos provenientes de las tres vareiedades de uva autóctona del Penedés, és decir, Macabeu, Xarel-lo y Parellada. Las muestras se tomaron también a diferentes densidades de fermentación y de diferentes puntos de los dipósitos. Las depas de levadura aisladas de mostos del Penedés en fermentación espontánea pertenecen, en su mayoría, al género Saccharomyces y sus marcadors moleculares mostraron un nivel elevadod e variabilidad genética. La máxima variabilidad se presentó en el cariotipo, seguido del patrón de restricción del ADN mitocondrial (ADNmt) y por último del patrón de proteínas totales. El patrón de ADNmt mostró su máxima variabilidad usando el enzima de restricción HinA. El patrón de proteínas totales. El patrón de ADNmt de las cepas extraidas al azar del mosto respecto a las añadas, las variedades de uva y las densidades y puntos de muestreo mostró que la añada es el parámetro que genera más variabilidad de patrones de ADNmt y la densidad y el punto de muestreo dieron distribuciones muy similares. Se desarrollaron diferentes sistemas de selección de cepas de levadura válidas para realizar la segunda fermentación del cava. Entre los sistemas desarrollados, el que dió mejores resultados fué aquel que combinó el crecimiento, la viabilidad y la capacidad fermentativa en medios vínicos -naturales o sintéticos- en unas condiciones fisicoquímicas restrictivas para las levaduras y próximas a las de la segunda fermentación del cava. Los grupos de cepas obtenidos a partir de cada uno de estos sistemas de selección mostraron fenotipos y distribuciones de patrones de ADNmt específicos y diferentes de los de la población inicial extraida al azar del mosto. Este hecho hace pensar en la existencia de una correlación entre el patrón de ADNmt y el fenotipo. Además, las mejores cepas seleccionadas para la elaboración de cava forman una subpoblación muy especializada y minoritaria dentro de la microflora natural del mosto. Estas cepas comparten los patrones CF2 y CF3 de ADNmt y su fenotipo es adecuado para realizar la segunda fermentación. Para demostrar la validez de las cepas seleccionadas, se realizaron experimentos de tiraje a nivel semi-industrial en la emprsa con estas cepas. Estas pruebas dieron resultados comparables -en cuanto a la cinética de fermentación y a los análisis químicos y organolépticos- a los obtenidos con las cepas comerciales destinadas a la elaboración de vinos espumosos. La caracterización genética de estas cepas mostró que su frecuencia de esporulación y la viabilidad de sus esporas son muy bajas. Los análisis genético y de contenido total de ADN indicaron que son células diploides con un cierto grado de aneuploidia en algunos casos. El análisis del patrón de ADNmt de los cultivos monospóricos puso de manifiesto la estabilidad genética de ste marcador durante la meiosis y el análisis del cariotipo mostró que el grado de polimorfismo cromosómico de las cepas de cava es elevado. El estudio de la estabilidad genética en crecimiento vegetativo de las cepas de cava mostró diferente comportamiento del cariotipo respecto al patrón de ADNmt. Mientras que el patrón de ADNmt de estas cepas se mantuvo estable, el cariotipo mostró diferentes grados de inestabilidad dependiendo de la cepa de levadura y del medio de cultivo. El análisis de secuencias repetitivas de ADN de estas cepas mostró una gran presencia y ubicuidad de elementos transponibles Ty2 y una presencia mínima de elementos Ty1. La mobilización o recombinación de estos elemento transponibles no explican la totalidad de la inestabilidad genética detectada en el cariotipo durante el crecimiento vegetativo. A partir de mosto del Penedés se ha seleccionado una cepa del género Saccharomyces llamada NC5. Esta cepa es capaz de realizar la segunda fermentación a partir de vinos con características enológicas especialmente restrictivas para las levaduras y dar cavas con características organolépticas óptimas. El comportamiento de esta cepa es comparable, en todos los parámetros analizados, al de las cepas comerciales destinadas a la elaboración de vinos espumosos.

Autor: AGUADO MUÑOZ CARMEN.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: 275-A.

Resumen: En el proceso de crecimiento de la pared celular de los hongos, una vez se han secretado los diferentes componentes de la pared en una primera etapa se forma una estructura viscoelástica que se consolida posteriormente por la formación de enlaces covalentes. En base a estos datos y teniendo en cuenta las dos etapas de construcción de la pared se decidió estudiar a las proteínas a lo largo de todo el proceso, analizando su participación en cada una de las etapas para lo cuál se plantearon experimentos de interacción y ensamblaje, ya que las proteínas por su versatilidad serían las moléculas encargadas de dirigir el proceso de morfogénesis de la pared fúngica. El análisis de las interacciones no covalentes se realizó mediante la solubilización con altas concentraciones de urea, detectándose proteínas específicas que mostraban afinidad por los polímeros de la pared celular. En la segunda parte del trabajo se estudiaron los procesos de interacción y ensamblaje covalente, mediante el análisis de los protoplastos en regeneración y las paredes ya consolidadas.

Autor: BENITO ANDRES FRANCISCO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA, BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANA.

Resumen: En las levaduras de fisión el inhibidor de CDK's p25rum1 es un regulador clave en la progresión por la fase G1 del ciclo celular. En este trabajo nosotros mostramos que los niveles de la proteína p25rum1 son periódicos a lo largo del ciclo celular. p25rum1 comienza a acumularse en anafase, cuando la ciclina B cdc13 es muy inestable, estos niveles persisten durante G1 y es destruida durante la fase S. p25rum1 se encuentra estabilizada en un mutante que tiene afectado el proteosoma 26S, sugiriendo que su degradación normalmente ocurre a través de la ruta de degradación del proteosoma, previo un proceso de ubiquitinación. La fosforilación de p25rum1 por los complejos de cdc2/ciclinas en los residuos T58 y T62 es importante para marcar la proteína para su degradación. La mutación de uno o los dos residuos a alanina provoca la estabilización de p25rum1 e induce diploidización, debido a ocasionales reinicios de los procesos de replicación del DNA antes de que ocurra una mitosis. Los complejos CDK/ciclina cdc2/cig1, los cuales son insensibles a la inhibición por p25rum1, parece que posibilitan la fosforilación de p25rum1 al final de G1. Así, la acumulación y degradación periódica del inhibidor p25rum1 durante G1, desempeña un papel fundamental en la determinación de los niveles de ciclinas, lo cual determina la duración del periódo de pre-start en G1 y asegura el orden correcto de los sucesos del ciclo celular. (EMBO,J;17(2):482-497,1998)

Autor: BLANCO CAMBA PILAR.
Año: 1997.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: ECOLOXIA, PATOLOXIA E BIOTECNOLOXIA MICROBIANAS E PARASITARIAS. BIENIO 92-94..

Resumen: Saccharomyces cerevisiae produce endopoligalacturonasas exocelulares de forma constitutiva. La produccion de estos enzimas se reprime cuando se incuban los cultivos en agitación (alta disponibilidad de oxigeno) y está sometida a represión catabólica por la fuerte de carbono. El estudio de esta capacidad mediante técnicas de genética clásica demostró que la cepa diploide silvestre 1389 contiene dos genes estructurales que codifican para la producción de pectinasas y la cepa genética IM1-8b sólo uno. El análisis de mutantes obtenidos mediante tratamiento de S. cerevisiae IM1-8b con etilmetano sulfonato puso de manifiesto que en esta cepa existen al menos tres grupos de complementación implicados en la producción del fenotipo halo de hidrólisis en placas con ácido poligalacturónico. El gen responsable de la producción de poligalacturonasas en la cepa IM1-8b fue clonado utilizando la técnica de PCR Y SE denominó PGU1. La expresión de este gen bajo el control de distintos promotores mostró que la actividad depende del plásmido utilizado y del fondo genético de la cepa de S. cerevisiae transformada. Este gen se encuentra en todas las cepas analizadas independientemente de que sean positivas o negativas en placa. La secuencia de aminoácidos predicha en base a la secuencia de nucleótidos obtenida mostró que las poligalacturonasas (PG) de levaduras presentan una homología de un 54% con las PGs de hongos y solo de un 25% con las PG de bacterias y plantas. S. cerevisiae es capaz de expresar una proteina inhibidora de poligalacturonasas (PGIP) de frambuesa, pero este inhibidor no es activo contra la PG de la levadura. Algunas cepas seleccionadas de S. cerevisiae no reducen la viscosidad del mosto durante la fermentación para la elaboración del vino, pero disminuyen de forma notable el tiempo de filtración facilitando la clarificación del mismo.

Autor: CALZADA GARCIA JOSE ARTURO.
Año: 1997.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA, BIOQUIMICA Y GENETICA MICROBIANAS.

Resumen: En eucariotas, la entrada en fase S es un proceso altamente regulado por el ciclo celular. El genoma se replica una vez por ciclo comenzando la síntesis de DNA en los orígenes de replicación. El proceso de inicio es el principal y primer control de la duplicación del genoma. Trabajos recientes en Saccharomyces cerevisiae apoyan que en el inicio de la replicación del genoma confluyen dos pasos diferentes y consecutivos: deben de formarse complejos pre-replicativos multiproteicos en los orígenes de replicación para, después, ser activados por fosforilación dependiente de S-CDK y CDC7. La proteína Cdc6 de Saccharomyces cerevisiae es necesaria para la formación de los complejos pre-replicativos que se requieren para la replicación del DNA. Hemos mostrado que la sobreexpresión de CDC6 en cepas deficientes en CDC28 o de una proteína mutante que carece de sitios putativos de fosforilación por Cdc28 producen re-replicación del genoma en ausencia de división celular. Cdc6 se acumula en algunos mutantes cdc28ts, produce diploidización de uno de ellos (cdc28-4) y se estabiliza en cepas deficientes en la ruta de proteolisis dependiente de ubiquitinación, cdc4-1 y cdc34-2, mostrando que Cdc6 se degrada de una forma dependiente de Cdc4p/Cdc34p, tras ubiquitinación, en fase S. Proponemos que la degradación de Cdc6 es parte del mecanismo por el que las células de S. cerevisiae limitan la replicación a fase S, aunque deben existir mecanismos alternativos mediados por complejos quinasa Cdc28-Clb previniendo la re-replicación. CDC14 es una fosfatasa, con papel en el inicio de la replicación in vivo ya que limitando su actividad desciende el número de orígenes activos. Nuestros resultados apoyan la idea de Cdc14 es parte del control que determina este número. Mostramos que CDC14 interacciona genéticamente con CDC6 sugiriendo que ambos genes cooperan controlando la activación de los orígenes cromosómicos en S. cerevisiae.

Autor: COTANO OLIVERA CECILIO.
Año: 1997.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: Hemos utilizado la exoglucanasa mayoritaria de Saccharomyces cerevisiae para profundizar en los procesos de translocación, plegamiento y glicosilación en levaduras. Se ha demostrado que la translocación de EXG1P es postraduccional, dependiente de SEC62P y SEC63P. Se postula que EXG1P atraviesa la membrana del RE a través de un poro distinto al formado por el complejo SEC61P, formado por las proteinas SSH1P, SBH2P y SSS1P. Por otra parte, se ha demostrado que su plegamiento depende del potencial REDOX del RE, la chaperonina KAR2P, el propéptido y el carbohidrato. Por último; hemos demostrado que el mutante alg1 incubado a 37 grados c. es capaz de transferir quitobiosa desde el intermediario dolicol-pp-quitobiosa a los sitios potenciales de n-glicosilación de EXG1P; y por lo tanto que este intermediario puede ser sustrato de la posible translocasa y del complejo oligosacaridil-transferasa.

Autor: FERNANDEZ SALAZAR EVA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA CLINICA.

Resumen: En el presente trabajo se estudia, por una parte, la influencia que 5 antifungicos ejercen sobre algunas de las funciones defensivas de los leucocitos PMN, y por otro lado se valora el efecto que el suero humano normal ejerce sobre la actividad fungicida de dichos antifungicos. Sobre cryptococcus neoformans, una levadura patogena oportunista.

Autor: GIL NAVARRO INES.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FARMACOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: 135A FARMACOLOGIA.

Resumen: Mediante el rastreo de una genoteca de cDNA con sueros humanos con altos niveles de anticuerpos anti-Candida se llegó al aislamiento de un cDNA que codifica para la enzima glicolítica GAPDH de C.albicans, llegándose posteriormente al aislamiento del gen completo. Caracterizamos a nivel molecular este clon (secuenciación, Southern y Northern-blot). A continuación, se determinó la localización subcelular de esta proteína en C.albicans obteniéndose que se localizaba en la superficie externa de la pared celular. En esta situación superficial la enzima era activa enzimaticamente y presentaba capacidad de adhesión a fibronectina y laminina. Las células de ocho aislados clínicos de C.albicans también presentaron una forma de GAPDH asociada a la pared celular, activa enzimaticamente y capaz de interaccionar con fibronectina y laminina. Este fenómeno, además, parece exclusivo de C.albicans pues no detectamos la presencia de la proteína en la pared celular de otras especies del género Candida.

Autor: JIMENEZ JIMENEZ JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA II PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: El mutante lyt1 de Saccharomyces cerevisiae se caracteriza por presentar fenotipo autolítico termosensible. La mutación responsable del fenotipo es el cambio de la G 1228 por una A en el gen CDC15. Los mutantes en el gen CDC15 presentan una pérdida del patrón axial de polaridad, típico de las estirpes haploides de este organismo, desplazándose la nueva gemación hacia el polo distal de la célula hija, lugar por el que tiene lugar la lisis. Además muestran incapacidad para localizar el citoesqueleto de actina en la zona del septo, lo que les imposibilita realizar este proceso. Disponemos de resultados que indican que los mutantes en el gen CDC15 superan la parada del ciclo celular para ellos descrita, en la anafase mitótica, mostrando un significativo retraso en el ciclo celular. Estos resultados parecen indicar que el retraso en el ciclo celular observado es la manifestación de la presencia de un control del ciclo celular o "checkpoint", el cual, se activaría en presencia de anomalías en el proceso de septación. Además, nuestros resultados indican que este "checkpoint" es dependiente de la integridad del anillo de septinas.

Autor: POZUELO DE FELIPE M. JOSE.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA II PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: El objetivo del trabajo ha consistido en la identificación de nuevas dianas antifúngicas de Saccharomyces cerevisiae a partir del estudio de una colección de mutantes condicionales obtenidos en el laboratorio. Por este motivo en primer lugar se llevó a cabo la construcción de una colección de 297 mutantes incapaces de crecer en determinadas condiciones, mediante el tratamiento de una cepa silvestre con diferentes agentes mutagénicos. A continuación se realizó el estudio de los mutantes, caracterizando su fenotipo en medio líquido y sólido, analizando su crecimiento, viabilidad, reversión de la mutación, morfología, etc. Posteriormente se complementó el fenotipo termosensible de los mutantes condicionales con una genoteca de S. cerevisiae, y se identificaron los siguientes genes como responsables de la complementación: HSP30, CDC68, TAFIII45, PRP19, MTF1, MPS1 e YPL007C. El gen YPL007C no había sido caracterizado con anterioridad por lo que parte del trabajo posterior consistió en su estudio y en el de la proteína Yp1007cp que como hemos demostrado es una proteína esencial para S. cerevisiae. Además por los estudios realizados se puede concluir que parece probable que Yp1007cp posea una implicación directa o indirecta sobre la correcta funcionalidad de las membranas celulares.

Autor: RAMON ALBORS ANA M..
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y ECOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: 275A MICROBIOLOGIA .

Resumen: Mediante el inmunorastreo de genotecas de cDNA de la forma micelial de Y. lipolytica, se ha aislado un clon que es específico de la forma micelial y que codifica una proteína que se encuentra en la pared celular, Al gen correspondiente le denominamos YWP1 (Y. lipolytica cell Wall Protein 1) Este gen se encuentra en una sola copia en el genoma de Y. lipolytica y carece de homólogos en las especies Candida albicans y Saccharomyces cerevisiae. No es un gen esencial y su deleción no produce cambios morfológicos aparentes. Estudios de expresión de YWP1 en S. cerevisiae han puesto de manifiesto que aunque el procesamiento de Ywp1 es el mismo en los dos hongos microscópicos, su localización final en la pared es diferente.

Autor: VELASCO MARTINEZ JOSE JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA II PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: El fundamento de esta tesis doctoral es la determinación de las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMIs) a cinco sustancias antifúngicas (Anfotericina B, Fluorocitosina, Ketoconazol, Fluconazol e Itraconazol) en levaduras (Candida spp) aisladas de la cavidad orofaríngea de pacientes con Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y que estaban bajo tratamiento y/o profilaxis con antifúngicos. Las CMIs se determinaron mediante dos técnicas: microdilución y difusión en gradiente preformado. Se valoraron diferentes puntos de corte (o caídas relativas de Densidad Optica -D.O.-) que fueron las caídas 25%, 50% y 80%, y dos tiempos de incubación (24 y 48 horas) comparando también la correlación entre los valores de CMIs obtenidos por unos y otros criterios, fundamentalmente tomando como referencia los criterios del NCCLS (caída 80%, 48 horas de incubación). De igual forma se compararon los valores de CMIs respecto a las diferentes caídas en la D.O. entre los diferentes azoles, de manera que permitió detectar posibles selecciones de subpoblacionales de levaduras. También se determinaron los valores de sensibilidad, sensibilidad dosis dependiente y resistencia, establecidos para el fluconazol e itraconazol y las posibles resistencias cruzadas entre ambos antifúngicos.

Autor: FERNANDEZ VICENTE JUANA.
Año: 1996.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA MICROBIANA Y MICROBIOLOGIA MEDICA .

Resumen: EN LAS CELULAS DE SCHIZ. POMBE, LA TREHALOSA Y OTROS POLIOLES TIENEN LA CAPACIDAD DE ESTABILIZAR ENZIMAS CUANDO SON EXPUESTAS A TRATAMIENTO TERMICO. EN ESTA MISMA LEVADURA EXISTE UNA RUTA MEDIADA POR PROTEINA-KINASA A QUE CONFIERE SENSIBILIDAD A TRATAMIENTOS TERMICOS. SIN EMBARGO, LA VIA POR LA CUAL LAS CELULAS DESARROLLAN EL ESTADO DE TERMOTOLERANCIA ADQUIRIDA ES INDEPENDIENTE DEL PRODUCTO DEL GEN PKA1 Y DEPENDIENTE DEL CONTENIDO INTRACELULAR DE TREHALOSA. DURANTE EL TRATAMIENTO TERMICO SE PRODUCE UN AUMENTO EN LA TRANSCRIPCION DE LOS GENES QUE CODIFICAN LOS ENZIMAS IMPLICADOS EN EL METABOLISMO DE LA TREHALOSA, Y ADICIONALMENTE UNA ACTIVACION POSTRADUCCIONAL DE DICHOS ENZIMAS. LA EXPOSICION DE LAS CELULAS DE ESTA MISMA LEVADURA A STRESS OSMOTICO PROVOCA LA PUESTA EN MARCHA DE UNA VIA DE TRANSMISION DE SEÑALES MEDIADA POR LAS MAP-KINASAS WIS1- PHH1 QUE INDUCE LA TRANSCRIPCION DE LA TREHALASA ZYGOSACCH. ROUXII, LEVADURA CAPAZ DE RESISTIR CONDICIONES AMBIENTALES ADVERSAS, PRESENTA UNA TREHALASA REGULADORA ACTIVABLE POR GLUCOSA Y OTROS AZUCARES Y QUE ES DEPENDIENTE DE CAMBIOS EN LA CONCENTRACION DE AMPC. ESTA MISMA ACTIVIDAD ENZIMATICA TAMBIEN RESULTA ACTIVADA POR DNP O CHOQUE TERMICO POR UNA VIA QUE NO UTILIZA AMPC COMO SEGUNDO MENSAJERO. EL GLICEROL INHIBE LA ACTIVACION INDUCIDA POR TRATAMIENTO TERMICO EN ESTA LEVADURA.

Autor: GONZALEZ RAMOS FRANCISCO JAVIER.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOFISICOQUIMICA.

Resumen: LA LEVADURA YARROWIA LIPOLYTICA PRESENTA AL MENOS DOS ACTIVIDADES LIPASICAS CODIFICADAS POR GENES DIFERENTES. UNA DE ESTAS ACTIVIDADES ESTA CATALIZADA POR UNA PROTEINA DE EXPRESION CONSTITUTIVA CODIFICADA POR EL GEN YILIPI. EL RESTO DE LA ACTIVIDAD LIPASICA DETECTADA PROVIENE DE ENZIMAS CUYA EXPRESION ES REPRIMIBLE POR GLUCOSA. HEMOS AISLADO EL GEN YILIPI MEDIANTE TECNICAS DE PCR A PARTIR DE ADN GENOMICO. SE HA CONSTRUIDO UNA ESTIRPE DE Y. LIPOLYTICA CON YILIPI DELECCIONADO QUE PRESENTA SU ACTIVIDAD LIPASICA INFERIOR A LA DE LA ESTIRPE SILVESTRE. LA EXPRESION HETEROLOGA DE LA PROTEINA CODIFICADA POR EL GEN YILIPI EN SACCHAROMYCES CEREVISIAE Y KLUYVEROMYCES LACTIS DA LUGAR A UNA PROTEINA FUNCIONAL CON ACTIVIDAD LIPASICA. LA ACTIVIDAD D-AMINOACIDO OXIDASICA DE LA LEVADURA TRIGONOPSIS VARIABILIS ESTA CODIFICADA POR EL GEN TVDAOI, AISLADO POR NOSOTROS MEDIANTE TECNICAS DE PCR. LA EXPRESION DEL GEN TVDAOI ES CONSTITUTIVA, INDEPENDIENTE DE LA PRESENCIA DE D-AMINOACIDOS EN EL MEDIO DE CULTIVO. POSTULAMOS LA EXISTENCIA DE OTRO MODO DE REGULACION POSTRANSCRIPCIONAL, PUESTO QUE SE HABIA DETECTADO EL AUMENTO DE LA ACTIVIDAD D-AMINOACIDO OXIDASICA DE ESTA LEVADURA EN PRESENCIA DE SUSTRATOS TIPICOS DE ESTA ENZIMA. LA EXPRESION HETEROLOGA DE TVDAOIP EN S. CEREVISIAE Y K. LACTIS DA LUGAR A UNA PROTEINA FUNCIONAL CON ACTIVIDAD D-AMINOACIDO OXIDASICA, OBTENIENDOSE NIVELES DE ACTIVIDAD MAYORES A LOS REGISTRADOS EN T. VARIABILIS.

Autor: MAÑAS NUÑEZ PAULA INMACULADA.
Año: 1996.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA.

Resumen: SE HAN AISLADO 8 NUEVOS GRUPOS DE COMPLEMENTACION DE MUTANTES DE S. CEREVISIAE CON DEFECTOS EN EL PROCESO DE FOSFORILACION DE N-OLIGOSACARIDOS. TODOS ELLOS MUESTRAN UNA REDUCCION EN LA AFINIDAD POR EL COLORANTE "ALCIAN BLUE" Y POR ESTA RAZON SE HAN LLAMADO MUTANTES 1DB (LOW DYE BINDING). LOS MUTANTES SE SELECCIONARON POR SU INCAPACIDAD PARA UNIRSE A BOLAS DE QAE SEPHADEX, UNA RESINA DE INTERCAMBIO CATIONICO. SE HAN CARACTERIZADO LOS GRUPOS DE COMPLEMENTACION 1DB1 Y 1DB2. EL DEFECTO 1DB2 RESULTA EN LA NO INCORPORACION DE GRUPOS FOSFATOS A LOS N-OLIGOSACARIDOS, MIENTRAS QUE 1DB1 AFECTA A VARIAS FUNCIONES RELACIONADAS CON LA BIOSINTESIS DE N-OLIGOSACARIDOS: INCORPORACION DE GRUPOS FOSFATO, ALARGAMIENTO Y RAMIFICACION DE LA CADENA EXTERNA, PROCESAMIENTO POR LA PROTEASA KEX2, ALARGAMIENTO DE O-OLIGOSACARIDOS Y PROBABLEMENTE TAMBIEN ALGUNA FUNCION RELACIONADA CON EL R.E. SE HA DEMOSTRADO TAMBIEN QUE LA MUTACION MNN2 AFECTA A LA FOSFORILACION DEL NUCLEO INTERNO DE LOS N-OLIGOSACARIDOS.

Autor: POLANCO ALVAREZ ANA MELINDA.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: SANIDAD ALIMENTARIA .

Resumen: SE HA DISEÑADO UNA TECNICA DE DIAGNOSTICO DE FUNGEMIAS BASADA EN LA AMPLIFICACION DEL DNA FUNGICO MEDIANTE LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) EN MUESTRAS DE SANGRE COMPLETA. SE UTILIZARON INICIADORES DIRIGIDOS AL GEN DE LA SUBUNIDAD PEQUEÑA DEL RIBOSOMA (18S RDNA) CONFIRMANDOSE LOS AMPLIFICADOS POR HIBRIDACION CON UNA SONDA COMUN A LA MAYORIA DE LOS HONGOS. EL ANALISIS DE LOS PATRONES DE RESTRICCION DE LAS SECUENCIAS DEL 18S RDNA OBTENIDAS PERMITIO IDENTIFICAR LOS PRINCIPALES PATOGENOS FUNGICOS HUMANOS INCLUIDAS LEVADURAS Y HONGOS FILAMENTOSOS. SE LLEVO A CABO UN MODELO EXPERIMENTAL DE CANDIDIASIS DISEMINADA EN CONEJOS DE NUEVA ZELANDA. EL MODELO DE CANDIDEMIA MENCIONADO PERMITIO COMPARAR DOS TECNICAS DE PROCESAMIENTO DE HEMOCULTIVOS: LISIS-CENTRIFUGACION Y PCR, PARA LA DETECCION DE CANDIDA ALBICANS EN SANGRE, DEMOSTRANDO UNA MAYOR SENSIBILIDAD LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA. LA PCR PROMETE SER MAS SENSIBLE QUE EL HEMOCULTIVO, POR LO QUE PUEDE SER UNA TECNICA COMPLEMENTARIA MUY UTIL EN EL DIAGNOSTICO TEMPRANO Y SEGUIMIENTO DE LA CANDIDIASIS INVASORA.

Autor: SAINZ PASTOR LORETO.
Año: 1996.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOTECNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA AGRARIA Y FORESTAL.

Resumen: SE HA CLONADO UN GEN DE NEUROSPORA CRASSA, EL GEN NCTRK1, IMPLICADO EN LA ENTRADA DE K+ DE ALTA AFINIDAD. ESTE GEN SE AISLO COMPLEMENTANDO LA ENTRADA DEFECTUOSA DE K+ DE UN DOBLE MUTANTE DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE CON UNA GENOTECA GENOMICA DE N.CRASSA. EL GEN NCTRK1 DE N.CRASSA COMPLEMENTO LA ENTRADA DEFECTUOSA DE K+ DE LOS MUTANTES TRK1 TRK2 DE S.CEREVISIAE. LA SECUENCIA DE AMINOACIDOS TRADUCIDA DEL GEN NCTRK1 MOSTRO UN 63 Y UN 60% DE HOMOLOGIA CON LOS TRANSPORTADORES DE K+TRK1 Y TRK2 DE S.CEREVISIAE RESPECTIVAMENTE. ESTA HOMOLOGIA SE PRODUJO EN MAYOR MEDIDA EN LA REGION QUE CONTIENE LOS DOCE FRAGMENTOS INTERMEMBRANA. SIN EMBARGO, EN EL ALINEAMIENTO DE LAS SECUENCIAS SE OBSERVO UNA SIMILITUD SUPERIOR DE NCTRK1 CON TRK2 DE S.CEREVISIAE, SIENDO LA CARENCIA DE LA LARGA REGION HIDROFILICA SITUADA ENTRE LOS FRAGMENTOS M3 Y M4 PRESENTE EN TRK1 LA CARACTERISTICA MAS NOTABLE. ESTE GEN SE CARACTERIZO POR LA PRESENCIA DE UN INTRON DE 50 PB SITUADO EN EL EXTREMO 5' A 11,5 PB DEL PRIMER ATG DE LA FASE DE LECTURA ABIERTA. LA SUPRESION DE ESTE INTRON PERMITIO UNA MEJOR EXPRESION DEL GEN NCTRK1 EN MUTANTES DE LEVADURA EN CONDICIONES LIMITANTES DE K+. LOS MUTANTES DE S.CEREVISIAE TRANSFORMADOS CON NCTRK1 SE CARACTERIZARON POR UNAS CINETICAS DE ENTRADA DE RB+ DIFERENTES DE LAS OBSERVADAS EN N.CRASSA. EL SISTEMA DE ALTA AFINIDAD PRESENTE EN CELULAS AYUNADAS MOSTRO UNA KM DE 0,1 MM Y UNA VELOCIDAD MAXIMA DE 7 NMOL.MG-1.MIN-1. PARA CELULAS CRECIDAS A CONCENTRACIONES MILIMOLARES DE K+, SE OBSERVO UN SISTEMA DE BAJA AFINIDAD CON UNA KM DE 4 MM Y UNA VMAX DE 5 NMOL.MG-1.MIN-1. AMBAS CINETICAS PRESENTARON DOS COMPONTES: EL PRIMERO DE ELLOS CORRESPONDIA AL SISTEMA ENDOGENO DE LA LEVADURA TRK1 TRK2 Y EL SEGUNDO ERA PROPIO DE NCTRK1. ES DE DESTACAR TAMBIEN LA ALTA DISCRIMINACION EXISTENTE ENTRE K+ Y RB+, CON UNA KI PARA K+ DE 5 M EN CELULAS AYUNADAS. LOS ANALISIS DE NORTHEM ASI COMO LA OBTENCION DE CDNA SOLAMENTE EN CELULAS AYUNADAS DE K+ SUGIEREN QUE LA EXPRESION DE NCTRK1 TIENE LUGAR PRINCIPALMENTE CUANDO EL K+ ES LIMITANTE, Y PROBABLEMENTE CON UNA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL MUY BAJA.