METABOLISMO MICROBIANO

Autor: SILVA MOURA RUTE CARINA.
Año: 2004.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.

Resumen: El fosfato inorgánico es uno de los componentes esenciales para los organismos vivos y está involucrado en un gran número de funciones celulares. A pesar de su relativa abundancia en la naturaleza, el fosfato es un factor limitante para el crecimiento. Para superar la escasez de fosfato en el medio los microorganismos producen fosfatasas extracelulares que rescatan el fosfato del medio. Además se sabe que el fosfato regula negarivamente la biosíntesis de antibióticos y otros metabolitos secundarios. Un ejemplo es la producción de candicidina por Streptomyces griseus IMRU 3570, la cual ha sido ampliamente estudiada. Esta cepa produce grandes cantidades de fosfatasa alcalina extracelular paralelamente a la producción de candicidina. Evidencias preliminares indican que el fosfato reprime la transcripción de los genes biosintéticos de candicina por un mecanismo similar a la represión de la biosíntesis de la fosfatasa alcalina. A partir del ADN genómico de Streptomyces griseus IMRU 3570 y en base la secuencia del extremo amino terminal de la proteína PhoA, se clonó el gen codificante de la fosfatasa alcalina (phoA). El gen phoA posee 1695 nucleóticos, presenta un contenido G+C del 74.22% y codifica una proteína de 564 aminoácidos con una masa molecular deducida de 62678 Da y un punto isoeléctrico deducido de 7.1. La proteína PhoA de S. griseus presenta un grado de identidad significativo cuando se compara con otras proteínas PhoA descritas en la base de datos, como por ejemplo la de S. avermitilis, S. tendae, S. coelicolor y B. subtilis. El gen phoA se transcribe como un transcrito monocistrónico; su expresión está controlada por un promotor localizado inmediatamente corriente arriba de su secuencia codificante (PphoA) y está regulada negativamente por fosfato. La expresión del gen phoA está bajo el control del sistema de dos componentes PhoR-PhoP, como ocurre en otros microorganismos como E. coli y B. subtilis. Se ha determinado el inicio de la transcripción del gen (+1) y se ha localizado a 7 nucleótidos del +1 una supuesta caja-10, TCCAAT. En la zona corriente arriba del codón de iniciación no se encontró ninguna secuencia semejante a la caja pho presente en el gen phoA que codifica la fosfatasa alcalina de E. coli, ni a la caja pho descrita para los genes que pertenecen al regulón Pho de B. subtilis. El péptido señal de PhoA de S. griseus presenta dos características especiales de las proteínas secretadas por el sistema de secreción Tat: el motivo conservado RRXoo (RRLRR), y una región H más larga y menos hidrógoba que los péptidos Sec dependientes. Esta característica se observa también en las fosfatasas alcalinas identificadas en el genoma de S. avermitilis y S. coelicolor y el la fosfatasa D de B. subtilis. La secreción de fosfatasa alcalina en las cepas TK24tatCphoA y TK24tatBphoA de S. lividans (mutantes deficientes en el sistema de secreción Tat transformados con un plásmido multicopia con el gen phoA de S. griseus) está bloqueada. la actividad fosfatasa alcalina es drásticamente más baja que en la cepa silvestre TK24phoA. Se concluye por lo tanto que la secreción de PhoA es Tat dependiente.

Autor: BARREIRO MÉNDEZ CARLOS.
Año: 2004.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AMBIENTALES .

Resumen: Corynebacterium glutamicum es un microorganismo Gram positivo del suelo con gran capacidad para producir aminoácidos, en el cual no existe un preciso conocimiento genético de los promotores regulados por estrés, y más concretamente por estrés térmico. Para poner a punto las condiciones de análisis de la respuesta al estrés térmico se estudió el crecimiento de C. glutamicum a diferentes temperaturas; además de utilizar como testigo de esta respuesta los genes dnaK y groEL a diferentes tiempos de inducción mediante hibridaciones tipo Northern. Así se caracterizó el patrón transcripcional de estos genes y se definieron las condiciones en las que se alcanza el máximo de expresión a nivel transcripcional (40 minutos a 40ºC). Para observar el efecto de la temperatura a nivel tranduccional se obtuvieron extractos proteicos de C. glutamicum a distintos tiempos de inducción, en los que se observaron tres bandas (95 kDa, 70 kDa y 60 kDa) que incrementan su intensidad con el transcurso de la inducción térmica. Mediante anticuerpos policlonales anti-DnaK y anti-GroEL se identificaron las bandas de 70 y 60 kDa como DnaK y GroEL respectivamente. Así mismo, se constató que en ambos casos tras 60 minutos de inducción estas proteínas alcanzaban su máximo nivel de expresión. Utilizando 40ºC y 60 minutos como condiciones de inducción, se localizaron nuevos genes inducibles por calor a través del análisis del proteoma de C. glutamicum. Así, mediante el uso de elcectroforesis bidimensional se identificaron como inducidas las proteínas: GroEL1, GroEL2, DnaK, ClpB y GrpE las cuales son chaperones moleculares, y PoxB que es una piruvato deshidrogenasa. También se observó como una peptidil-prolil cis-trans isomerasa (PpiA) era reprimida por el aumento de temperatura. En este análisis del proteoma se utilizó la cepa de C. glutamicum ATCC 13032 existente en INBIOTEC y la cepa cuyo genoma fue secuenciado por la compañía DEGUSSA (Alemania), observándose la carencia de la proteína GroEL1 en esta segunda cepa. La falta de la proteína GroEL1 se debía a la presencia de un elementeo de inservión (ISCg1) en el extremo 5' del gen groEL1. El análisis del patrón transcripcional de esta cepa mutada reveló la presencia de un transcrito truncado que responde perfectamente al choque térmico, sin que se vea afectado el fenotipo de la cepa. Esto sugiere que la interrupción dle gen groEL1 no afecta a C. glutamicum de una forma apreciable. Para concluir, se profundizó en la caracterización de los promotores de los genes dnaK, groES-groEL1 y groEL2. Esta caracterización se llevó a cabo mediante reacciónes de primer extensión que permitieron localizar sus inicios de transcripción y consecuentemente sus cajas -10 y -35; así como la presencia de cajas de regularización HAIR o CIRCE, gracias a lo cual se definió la secuencia consenso de las cajas HAIR y CIRCE del género Corynebacterium. La funcionalidad de estas cajas quedó demostrada tras delecionar sus genes reguladores (hspR y hrcA).

Autor: GARCIA ALONSO BELEN .
Año: 2003.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: FACULTAD DE VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Pseudomonas putida U es un microorganismo capaz de degradar compuestos de muy diversa naturaleza, lo que le confiere una gran ventaja a la hora de sobrevivir en medios donde otros microorganismos no son capaces de hacerlo. Dentro de los compuestos capaces de ser metabolizados por esta bacteria se encuentran diferentes ácidos n-fenilalconoicos. Cuando Pseudomonas putida U crece en medios mínimos suplementados con estos compuestos, acumula en su interior polihidroxifenilalcanoatos formados por ésteres de 3-hidroxiácidos, siendo ésta la primera vez que se describen polímeros de naturaleza aromática con longitud de cadena alifática par. En esta Tesis se ha abordado el estudio del sistema encargado de la síntesis y degradación de estos compuestos. - Se ha identificado, secuenciado y caracterizado la enzima encargada de la activación de los ácidos n-alcanoicos y n-fenilalcanoicos con longitud de cadena alifática comprendida entre 5 y 10 átomos de carbono. - El sistema enzimático encargado de la polimerización de los monómeros y de us liberación a partir del polímero está codificado en tres genes ( phaC1, phaZ y phaC2) que están organizados en un operón, cuya expresión se encuentra controlada por un promotor localizado corriente arriba del gen phaC1. Las dos enzimas encargadas de la polimerización (PhaC1 y PhaC2), poseen idénticas especificidades de substrato y contribuyen en igual medida a la síntesis de polímero plástico. La velocidad de síntesis de polímero es el triple que la despolimerización, de manera que en condiciones de exceso de fuente de carbono el balance neto es de polimerización, mientras que, cuando estas condiciones desaparecen se moviliza el polímero acumulado. - Se han obtenido mutantes defectivos en la ruta de B-oxidación de ácidos grasos de esta cepa bacteriana, comprobándose que producen polihidroxifenilalcanoatos a unos niveles muy superiores (6 veces más) que los acumulados por la cepa silvestre. Con estos mutantes, además, hemos sido capaces de obtener polímeros, a la carta, simplemente con pequeñas modificaciones en el ripo y concentración de los precursores añadidos a los medios de cultivo. - Se han evaluado algunas propiedades físico-químicas de varios polímeros y se elaboraron microesferas a partir de un homopolímero de 3-hidroxifenilhexanoico. Estas microcápsulas podrán ser empleadas con fines terapéuticos, para tratar diferentes patologías, ya que, al degradarse en el organismo permitirán la liberación del principio activo encerrado en ellas. Por otro lado, al hidrolizarse, generan monómeros que al metabolizarse en el organismo producen compuestos, tales como el ácido 4-fenilbutírico y ácido fenilacético, que poseen actividades farmacológicas, per se, aumentando las posibilidades de aplicación de estos compuestos.

Autor: JROUNDI FADWA.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El nivel de toxicidad de los metales ensayados frente a M. xanthus está dentro de los márgenes considerados como de elevada resistencia para otros microorganismos. Las concentraciones inhibitorias en medio sólido fueron más altas que las que ejercían este efecto en medio líquido. Este hecho puede poner de manifiesto que el agar-agar utilizado para la gelificación de los medios sólidos secuestra parte de los metales presentes. Un caso en el que esta mixobacteria se comporta de forma diferente es frente al uranio, presentando mayor resistencia en medios líquidos que sólidos. Esto podría deberse a la mayor cantidad de polisacárido extracelular que produce en los primeros medios y la gran cantidad de uranio que se fija en estos polisacáridos, dejando disponible un bajo porcentaje del radionucleido. Los metales pesados tienen importantes efectos sobre M. xanthus disminuyendo su crecimiento, e inhibiendo la movilidad, en la mayoría de las cepas ensayadas. No obstante, las cepas mutantes dsp y frz recuperan la capacidad de formación de cuerpos fructificantes en presencia de manganeso, lo que también ocurre a la cepa dsp en presencia de cobalto y cromo. Estos hechos permiten suponer que, en el caso de la cepa frz, el manganeso tiene algún efecto que ayuda a las células a moverse de forma organizada llevándolas a formar cuerpos fructificantes en lugar de filamentos desorganizados. En el caso de la cepa dsp, los metales podrían pasar a ocupar los receptores de las fibrillas dando así una señal "falsa" entre las células y permitiendo, por tanto, que la cepa mutante se comporte como una cepa salvaje. La presencia de plomo, lantano, uranio, cobre y manganeso, induce la producción de pigmentos por M. xanthus, algunos de ellos difusibles. La producción de estos pigmentos podría suponer un mecanismo de defensa de este microorganismo frente a estos metales. En el caso de la plata, es posible conseguir una adaptación de las células de M. xanthus, en fase vegetativa, a concentraciones crecientes del metal. La plata bioadsorbida por estas células, se encuentra en la pared celular y en el citoplasma, o bien se fija al polisacárido extracelular, según se usen medios sólidos o líquidos, respectivamente. Esto indicaría la existencia de al menos dos mecanismos diferentes utilizados por esta bacteria para reducir el efecto tóxico del metal. El estudio, mediante espectroscopía por infrarrojos y espectroscopía por absorción de rayos X para estructuras finas, de los complejos formados por la interacción del uranio con la biomasa no proliferante de M. xanthus ha puesto de manifiesto que los grupos funcionales implicados en los mismos son grupos fosfato orgánico e inorgánico a pH 2 y 4,5 respectivamente, dando lugar a la formación de meta-autunita en el segundo caso. Cuando M. xanthus 422 crece en presencia de cobalto, cromo, cobre, y manganeso, únicamente el manganeso es capaz de incorporarse a minerales como la estruvita y la calcita. El hecho de que sea este el único metal incorporado se interpreta como consecuencia de su radio iónico. Además, la producción de weddelita en presencia de manganeso en los medios de carbonatogénesis, parece indicar la inducción del ciclo del glioxilato y la consiguiente producción de oxalato, probablemente por la participación del manganeso como cofactor para la actuación de enzimas implicadas en las reacciones correspondientes. Myxococcus xanthus es capaz de desarrollar biopelícula sobre soportes inorgánicos porosos. Esta biopelícula tiene la habilidad de fijar cromo y manganeso, eliminando dos tercios del metal presente en la solución. Así mismo, la biopelícula formada muestra una notable capacidad biomineralizadora.

Autor: CAMPOY SÁNCHEZ SUSANA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: El eje central de la presente Tesis Doctoral ha sido la conexión existente entre la capacidad infectiva de Salmonella typhimurium y el mantenimiento de sus concentraciones intracelulares óptimas de hierro y zinc. El estucio de la relación entre el hierro y la virulencia se realizó mediante la construcción y caracterización de un mutante fur. La proteína Fur es el regulador de los sistemas vinculados con la captación, transporte y almacenamiento de este elemento. La desregulación de estos sistemas en la cepa mutante provoca el aumento de la concentración intracelular de Fe2+ libre, lo que incrementa la actividad de algunas enzimas como la 3',5'-cAMP fosfodiesterasa codificada por el gen cpdA. Este hecho determina una disminución de la concentración de cAMP intracelular y, por consiguiente, una reducción de aquellos genes y regulones que están bajo el control del complejo CRP-cAMP, entre los que se encuentra el sistema de síntesis y ensamblaje de flagelos. Así mismo, se ha demostrado que existe una vinculación adicional entre la proteína Fur y la síntesis flagelar a través del control por parte de ésta del promotor flhDC, conocido también como master operon, y que se encuentra en la cúspide de la cascada de activación de todo el regulón. La reducción de la concentración intracelular de cAMP puede ser la causa de la menor virulencia de los mutantes fur cuando son inoculados intraperitonealmente en ratones BALB/c o Swiss. La vinculación entre el zinc y la capacidad infectiva de S.typhimurium se abordó mediante la construcción de mutantes que tuvieran afectado el gen zur, que codifica el regulador transcripcional relacionado con este elemento, el gen znuC, que forma parte de un sistema de transporte de alta afinidad. En el primer caso, cuando los sistemas de transporte de zinc de la cepa mutante están desregulados, se observa un ligero descenso de la capacidad infectiva cuando se inocula por vía intraperitoneal dicho mutante en ratones BALB/c. Sin embargo, es la inactivación del sistema de alta afinidad la que comporta una reducción más drástica de la virulencia de la cepa cuando se inocula ya sea por vía oral o intraperitoneal en el huésped. De acuerdo con estos datos, la cepa ZnuC- es excluida por la salvaje a lo largo del proceso infectivo cuando se lleva a cabo una inoculación conjunta con ambas. Finalmente, y mediante la construcción de una cepa mutS de S.typhimurium así como de otra portadora de un plásmido con los genes umuDC de Escherichia coli, se ha comprobado que el incremento de la frecuencia de mutagénesis, tanto espontáneamente como inducida, no confiere una ventaja selectiva a lo largo del proceso infectivo. En concordancia con ello, también se ha podido constatar que el DNA de las células de S.typhimurium no sufre un nivel de lesiones lo suficientemente elevado como para inducir el sistema de reparación de emergencia durante la infección.

Autor: ESCUDERO GÓMEZ JUAN CARLOS.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.

Resumen: Cercano al origen de replicación del cromosoma de la bacteria Escherichia coli, se encuentra situado el agrupamiento génico rpmH formado por los genes rpmH, mpA, orf9k, yidc y mnmE. El gen yidc codifica la proteína YidC de 60 kDa, conservada a lo largo de la evolución. Su homóloga en la levadura Saccharomyces cervisiae se denomina OXA1, una proteína de membrana interna mitocondrial codificada en el núcleo de la levadura y que está implicada en la inserción/ensamblaje de los complejos IV y V de la cadena respiratoria y la de otras proteínas, incluída ella misma. En la presente tesis doctoral se evidencia la ubicación de la proteína YidC en la membrana interna bacteriana y su topología caracterizada por la presencia de seis segmentos transmembrana y los extremos amino y carboxi situados en el citoplasma. También se determinó la esencialidad de la proteína para la viabilidad de la bacteria. En cuanto a su función, se observa que interviene en la biogénesis de la proteína de membrana CyoA, integrante del complejo citocromo o oxidasa bacteriano. También se sugiere un posible papel para YidC como protectora frente a la degradación de otras proteínas de membrana, incluida ella misma. Por otra parte, se observó la dependencia de YidC respecto del sistema de translocación Sec bacteriano para su inserción en membrana interna bacteriana. Al respecto se observó que, tras la inactivación del complejo Sec, YidC no se insertó correctamente en membrana y fue más rápidamente degradada. Se concluye con la hipótesis de un posible papel para YidC y sus homólogas protector de proteínas integrales de membrana frente a la degradación, hasta la adquisicón de us correcto plegamiento.

Autor: GARCÍA PEÑALVER LAURA.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA E INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS ALIMENTARIOS.

Resumen: El objetivo principal de este estudio consistió en el desarrollo de un nuevo método de análisis de actividad mutagénica basado en el test de Ames,utilizando para ello distintas cepas de Salmonella typhimurium y métodos impedimétricos, en los que se detectará actividad microbina mediante mediciones de la impedancia eléctrica. A lo largo de este trabajo se analizarán distintos aspectos fundamentales para una adecuada puesta a punto del nuevo método de mutagenicidad propuesto. Entre estos aspectos se contempla la obtención y optimización del medio de cultivo a emplear, el protocolo de análisis, la realización posterior de análisis frente a distintos compuestos mutagénicos directos, mutágenos indirectos, así como frente a compuestos tóxicos e inocuos. Como método de comparación y poder así determinar la sensibilidad y precisión de este nuevo método, se realizarán también ensayos empleando el método tradicional de vertido en placa o test de Ames. El test de Ames permite la detección de actividad mutagénica de un compuesto por reversión en placa de cepas derivadas de Salmonella typhimurium y su empleo está recomendado por la Unión Europea y la Organización para la Cooperación y Desarrollo Económico. A partir de este estudio se ha logrado desarrollar un medio de cultivo así como un protocolo de análisis adecuado para la realizacion del test de mutagenicidad para la cepa de S. Typhimurium TA 100, empleando como unidad de medida la impedancia eléctrica y como instrumento de medición el Bactometer. Este nuevo método de detección de actividad mutagéncia propuesto, permitió clasificar adecudamente los mutágenos directos analizados: azida sódica, nitrito sódico, metanosulfonato de metilo, 2-nitrofluoreno, 4-nitro-1,2-fenilendiamina, 4-nitroquinoleín-N-óxido, mostrando la misma sensibilidad y una mayor precisión (reflejada en la obtención de menores coeficientes de variación puntual) que el perfectamente validado test de Ames. Adicionalmente, presentó una mayor sensibilidad que el test de Ames en la detección de actividad mutagéncia del monómero Bisfenol-A-Diglicidil Eter BADGE en ausencia de activación metabólica. En relación a los 3 promutágenos analizados (2-aminofluoreno (2-AF), benzo(a) pireno (BP) y 2-aminoantraceno (2AA) y como era de esperar, se ha demostrado que la actividad mutagéncia de estos compuestos sólo se manifestó al incorporar en el análisis la fracción S9, verificando así que este nuevo método responde adecuadamente frente, a compuestos que requieren una activación metabólica previa para mostrar su carácter mutagéncio. Adicionalmente, presenta una mayor sensibilidad frente a los promutágneos 2AA y BP que el test de Ames, pero no frente a 2AF. El nuevo método de mutagenicidad basado en la impedancia eléctrica, también es válido para clasificar adecuadamente la glucosa como compuesto inocuo, así como el cristal violeta (Cv), xileno y hexano como compuestos tóxicos. Mediante el análisis realizado empleando la impedancia eléctrica se obtuvo una mayor sensibildiad en la detección del carácter tóxico del Cv aunque fue menor para el xileno y el hexano; en cuanto a la precisión, esta fue mayor que la determinada en el test de Ames. Este análisis de mutagenicidad impedimétrico muestra un gran potencial de aplicación. Entre sus grandes ventajas respecto al test de Ames cabe destacar el menor tiempo requerido para su realización, desde la recepción de la muestra hasta la obtención de resultados. Aunque la inversión inicial es menor en Ames, el consumo tanto en medios como en material es mucho menor, en el Bactometer, diminuyendo por tanto la laboriosidad del análisis de mutagenicidad. Adicionalmente, se pueden analizar de forma simultánea un elevado número de muestras y se genera un volumen muy inferior de residuos.

Autor: RODRÍGUEZ GRANGER JAVIER.
Año: 2001.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Desde hace más de 30 años se conoce que EGB en ausencia de medidas de prevención es la principal causa de infección bacteriana del recién nacido. La identificación de EGB puede realizarse por demostración de su antígeno específico de grupo, por el test CAMP o de manera muy fácil por detección del pigmento rojo característico en medio Granada. A pesar de que esta característica es patognomónica de S.agalactiae y esta ligada a la producción de hemolisina y a la patogenicidad existe un total desconocimiento de la naturaleza del pigmento de EGB. La única hipótesis propuesta es que se trate de caroteno habiéndose incluso postulado la presencia de dos pigmentos distintos. El único fundamento de esta hipótesis es la práctica identidad del espectro UV-visible de este pigmento con el del beta coroteno, llegando incluso a observarse un pico de absorción cis a 380 nm. El desconocimiento de la naturaleza del pigmento de EGB es debido a la dificultad de conseguirlo en forma pura para poder estudiarlo. Y la dificultad de obtener el producto puro está ligada a su insolubilidad en los disolventes de manejo fácil en el laboratorio. El único disolvente útil que hemos encontrado capaz de extraer y disolver el pigmento de S.agalactiae es el DMSO ácido. Pero obviamente sus características de disolvente universal hacen que codisuelva muchas otras sustancias dificultando la purificación del pigmento. Así mismo las separaciones utilizando este disolvente están dificultades por su acción corrosiva sobre el instrumento p.ej.cromatografos, liofilizadores (columnas, juntas, tubos, etc.). Otra característica que dificulta la purificación del pigmento es su unión en forma de complejo con maltopolisacáridos al que permanece unido cuando se consigue extraer. En base a este estudio podemos aportar los siguientes datos: 1,- Solo existe un único pigmento en EGB que puede adoptar dos conformaciones en las bacterias y en los sobrenadantes de medios de cultivo (forma * y forma *), dependiendo de si esta unido (forma *) o no (forma *) a un maltopolilsacárido y estas conformaciones presentan espectros UV-visible completamente diferentes. 2,- La unión pigmento-maltopolisacárido es no covalente pues es destruida por la simple ebullición. 3,- El pigmento se localiza en la bacteria en zonas externas atacables por enzimas amilolíticas, como lo demuestra el cambio de conformación de la forma * a la forma * por acción de estas enzimas sobre bacterias íntegras. 4,- La conformación (*/*), también depende del tipo de disolvente y de la protonación comportándose de hecho el pigmento de EGB como un indicador ácido-base existiendo dos formas tautoméricas dependiendo de la protonación (la forma * es la forma protonada) cuando esta disuelto en DMSO. 5,- Muy probablemente el pigmento no es de naturaleza carotenoide pues sus características de solubilidad, procedimiento de extracción y purificación y cambios en espectro UV-visible dependiendo del pH y los espectros RMN no muestran semejanza con estos productos. Pero si debe tener un alto número de dobles enlaces conjugados que expliquen la existencia de tres máximos de absorción completamente análogos a los que presenta una estructura carotenoide con un sistema de 12 dobles enlaces conjugados.

Autor: BÁSCONES MERINO M. ELENA.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOSº.
Centro de realización: E.T.S. DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: Las leguminosas son capaces de utilizar el N2 atmosférico en simbiosis con bacterias del suelo de la familia Rhizobiaceae. En el proceso de fijación de N2 se desprende H2. La producción de H2 por los nódulos de las leguminosas supone una pérdida de energía y constituye la principal fuente de ineficiencia de la simbiosis. La introducción de la capacidad de reciclado de H2 en cepa carentes de ella es un medio potencial de mejora de la productividad de las correspondientes legumiosas hospedadoras. Con el fin de incorporar los genes de oxidación de H2 se construyó un minitransposón que permitió la incorporación de las 19kb de la agrupación génica de la hidrogenasa de Rhizobium leguminosarum bv.viciae UPM791 en el genoma de diversas especies de Rhizobiaceae. Este transposón resultó ser un vehículo muy eficaz para la incorporación de forma estable del sistema hidrogenasa. La expresión de dicho sistema fue dependiente del fondo genético, siendo las asociaciones B.japonicum/soja. R.etli/judías, R.leguminosarum bv.viciae PRE/guisantes y M.loti/lotus las más permisivas para actividad hidrogenasa. Esta dependencia se produjo tanto a nivel de especie de rhizobio como a nivel de cepa. En las asociaciones simbióticas en las que el sistema hidrogenasa se expresó eficientemente, la presencia de una sola copia del sistema fue suficiente para reciclar la totalidad del H2 generado por la nitrogenasa. El acoplamiento del sistema hidrogenasa a la generación de ATP también fue dependiente del fondo genético, estando acoplado en el caso de la simbiosis B.japonicum/soja. Para poder utilizar los inoculantes construidos en ensayos de campo es necesario eliminar el gen de resistencia a espectinomicina que acompaña a los genes de oxidación de H2. Para ello se desarrolló una estrategia que además permitió caracterizar fácilmente el lugar en el que se ha producido la inserción del transposón. La actividad hidrogenasa en R.leguminosarum está limitada por la disponibilidad de Ni en la solución nutritiva del suelo. Con el objeto de analizar los pasos limitantes en la provisión de Ni para la síntesis de metaloenzimas en bacteroides se analizó el transporte de este elemento en células vegetativas y simbióticas de la cepa UPM791. Las células vegetativas incorporaron Ni a través de los canales de Mg, mientras que los bacteroides de esta cepa indujeron en simbiosis un transportador de Ni que presenta una afinidad media y una elevada capacidad de transporte y que es específico de Ni. Así mismo se ha demostrado que en la membrana peribacteroidal también existe un transportador independiente de Mg y que dicha membrana no supone una limitación del aporte de Ni al bacteroide. El sistema de transporte de Ni no está ligado al sistema hidrogenasa en R.leguminosarum.

Autor: FABREGAS FERNÁNDEZ ANTONIA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA .

Resumen: El género Alternaria se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza y muchas de sus especies son fitopatógenas, desempeñando un papel fundamental en el deterioro de vegetales y frutas, incluso a temperatura de refrigeración. Las cepas pertenecientes a este género se aíslan con frecuencia a partir de alimentos destinados al consumo humano y animal. Alternaria ha sido incluso descrita como agente etiológico de intoxicaciones a partir del consumo de alimentos contaminados por especies tóxicas. Alternaria produce metabolitos secundarios que incluye micotoxinas que poseen una elevada toxicidad. En la realización del presente estudio se han empleados cepas de las especis Alteranria alternata y Alternaria triticina. Los objetivos establecidos en esta tesis han sido: * La caracterización taxonómica y estudio de la influencia de las codniciones de cultivo en el desarrollo fúngico. * El estudio de las actividades enzimáticas y su variabilidad frente a diferentes condiciones de cultivo. * El desarrollo de un método sencillo para la detección de las principales micotoxinas producidas por el género Alternaria (alternariol, alternariol monometil éter, altenueno, altertoxina I y tentoxina) por TLC y la variabilidad en su producción al crecer bajo diferentes condiciones de cultivo. Los resultados obtenidos determinan que los cultivos de Alternaria alterna presenta un crecimiento más rápido que los de Alternaria triticina al ser sometidos a diferentes condiciones de luz-oscuridad. La composición del medio de cultivo influye de forma notable en la actividad enzimática de las cepas ensayadas. La micotoxigénesis varía en función del medio de cultivo empleado y delperiodo de incubación excepto para la cepa Alternaria triticina IMI 289962 que sólo produce tentoxina.

Autor: CAPDEVILLA MONTES SILVIA .
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE MADRID.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: E.T.S. DE INGENIEROS AGRÓNOMOS.

Resumen: La quimiotaxis se puede definir como la capacidad de los microorganismos de detectar las variaciones en el entorno y de ajustar su movimiento en respuesta a los estímulos externos a los que estan expuestos dichos microorganismos. El proceso quimiotáctico se puede abordar a tres niveles: el sistema motor o flagelo, el proceso citoplasmático de detección de señal y el mecanismo de detección de señal externa. El estudio del movimiento de la bacteria Rhizobium leguminosarum bv.viciae UPM791 indicó que esta cepa, de flagelación peritrica, presenta distintos patrones de movimiento en función de los medios de incubación. Además se ha propuesto un modelo de movimiento para esta cepa, que propone que cuando la bacteria se mueve en forma de carrera, los flagelos se agrupan formando un ramo y giran de forma sincronizada, mientras que un cambio en la velocidad de rotación de los filamentos flagelares produciría que el ramo se abriera y que la bacteria diera un giro. En el plásmido simbiótico de la bacteria R.leguminosarum bv.viciae UPM791 se había detectado la presencia del gen mcpA, que codifica para una proteína quimiotáctica aceptora de metilo. Esta proteína McpA está implicada en la detección de determinados compuetos presentes en los exudados radicales de guisante y también en el aminoazúcar N-acetil-D-glucosamina (NAG1c). No se ha conseguido demostrar la implicación de esta proteína quimiorreceptora McpA en la competitividad para nodulación de esta cepa en estas condiciones de ensayo, quizá debido a la presencia en el genoma de esta cepa de un alto número de genes tipo mcp, cuyos productos podrían enmascarar el papel del quimiorreceptor McpA. El análisis de la región de DNA localizada cadena arriba del gen mcpA indicó la presencia de un operón que codifica para un sistema de transporte de tipo ABC. Además de los genes que codifican para los componentes básicos de estos sistemas de transporte (una proteína periplásmica de unión a sustrato StmA, dos permeasas StmB y C y una proteína de unión a ATP StmE), también se encontró un gen cuyo producto StmD era homólogo a deshidrogenasas de azúcares y otro cuyo producto deducido StmR presentaban homología con reguladores transcripcionales de tipo XylR. Este sistema de transporte Stm no parece estar implicado en el proceso simbiótico. El análisis de expresión de este sistema Stm revela que la proteína StmR es un represor de dicho sistema de transporte Stm. La inactivación del represor StmR provoca un incremento en la velocidad de utilización de la NAGlc, y el mutante desreprimido en el sistema de transporte es capaz de acumular más cantidad de NAGlc que la cepa silvestre.

Autor: AMOR BODEGA CRISTINA.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha purificado hasta homogeneidad la enzima isocitrato liassa de Aspergillus nidulans. Esta enzima es un terámeroformado de 4 subundiades idénticas de 59 kDa y un peso molecular en condiciones nativas de 240 kDa.el pH óptimo es 7 y su temperatura óptima se da entre 37-40ºC. El valor de Km es de 0,050 mM y el de Vmax de 11,1 U/mg proteína. Necesita Mg2+ y la adición de DTT o EDTA para presentar máxima actividad. Succinato e itaconato inhbien no-competitivamente a isocitratoliasa. Malonato y oxalato son ihibidores ocmpetitivos y la fructosa 1,6-bifosfato es un inhibidor de tipo mezcla no-competitivo. Empleando la enzima isocitrato liasa purificada se han obtenido anticuerpos policlonales espcíficos frente a dicha enzima, los cuales se han empleado para inmunolocaliza la enzima en el interior de peroxisomas, asi como para el seguimiento del proceso de inactivación catabólica de isocitrato liasa a nivel bioquímio y celular. Con estos estudios se ha podido demostrar que durante la inactivación catabólica de isocitratoliasa de Aspergillus nidulans ocurre la proteolisis de la enzima, debido a un proceso autofágico (microautofagia) de degradación espcífica de peroxisomas que contienen dicha enzima.

Autor: VELAYOS BAEZA ANTONIO.
Año: 1999.
Universidad: SALAMANCA .
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGIA, UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.

Resumen: Mutantes alterados en la carotenogénesis en Mucor circinelloides han sido caracterizados fenotipica y genotipicamente, y pueden distribuirse en diferentes grupos de complementacion. Han sido detectados dos compuestos con propiedades de B-criptoxantina y zeaxantina, aunque el B-caroteno es el principal producto acumulado no es el producto final de la ruta. Han sido aislados cinco genes de la ruta de biosíntesis de isoprenoides: cuatro de ellos (isoA, carG,carB, y carRP) controlan la producción de B-caronteno desde el precursor dimetilalil pirofosfato, y el quinto (isoB) estaria implicado en la formacion de prenil pirofosfatos (prenilPP) de cadena media, precursores de las quinosas. Los genes carB y carRP estan estrechamente ligados, orientados en direcciones opuestas, y con una zona intergenica de 446 pb. El gen isoA codifica una proteina deducida similar a farnesil pirofosfato sintasas tipo I. La proteina deducida del gen isoB es similar a prenilPP sintasas de cadena media. El gen carG codifica una proteina con funcion geranilgeranil pirofosfato sintasa. El car carB codifica la enzima fitoeno deshidrogenasa. En este gen estan alterados los mutantes carB. El gen carRP constituye un nuevo tipo de gen implicado en cartenogenesis, bifuncional, que codifica una proteína con funciones licopeno ciclasa y fitoeno sintasa. La proteina carRP necesita la presencia de la proteina carB para obtener una elevada actividad licopeno ciclasa. En ete gen están alterados los mutantes carR, carP y carRP de M. Circinelloides. La función licopeno ciclasa sólo requiere la presencia del dominio amino terminal, la función fitoeno sintasa es desempeñada por el dominio carboxilo terminal, pero requiere la integridad estructural de toda la proteina. Los genes carG, carB y carRP son genes fotoinducibles por luz azul. Existe un rapido incremento en la acumulación de los trascritos respectivos tras la irradiación con diferentes pulsos de luz azul, con un máximo a los 20 minutos tras la irradiación. En la zona promotora de los genes carG y carB se han encontrado varias secuencias posiblemente implicadas en la regulación por luz azul de la transcripción, similares a los elementos APE descritos en Neurospora crassa. Una posible actuación de modo bidireccional de estos elementos en la zona intergenica de los genes carB y carRP podria explicar la regulación tan similar por la luz azul de la expresión de ambos genes.

Autor: ESPLUGUES SANCHEZ JULIA.
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La determinación de etanol es uno de los análisis más solicitados en toxicología forense y las cifras de alcoholemia las que con mayor frecuencia deben ser interpretadas, debido a los diversos campos del Derecho donde se contempla el grado de impregnación alcohólica. Esta determinación presenta en el cadáver una serie de limitaciones tanto en las posibles muestras presentes en el cadáver como por la existencia de parámetros modificadores de la alcoholemia postmortem. Entre los factores posiblemente implicados se encuentran los fenómenos de neoformación debida a la síntesis de etanol por la actividad microbiana en el cadáver. En este estudio se han analizado 103 muestras de sangre de ventrículo derecho cardíaco procedentes de cadáveres cuya muerte se ha producido de forma natural o violenta en la ciudad de Valencia y cuya autopsia se ha practicado en el I.A. Forense de dicha capital. Se realizó la determinación de la tasa de alcoholemia mediante cromatografía gaseosa-espacio de cabeza, y el estudio microbiológico se llevó a cabo en el Departamento de microbiología del Hospital Clínico Universitario de Valencia, donde se aislaron e identificaron todos los microorganismos presentes en las muestras. Además se procedió al estudio cromatográfico de los metabolitos producidos por los microorganismos aislados a fin de confirmar, e incluso en algunos casos identificar los microorganismos anaerobios y, por otra parte, valorar el posible metabolismo fermentativo de todos los microorganismos aislados. Las conclusiones obtenidas en este trabajo permiten afirmar que la tasa de alcoholemia es un parámetro intrínseco del individuo, ya que no depende del estado del cadáver, su conservación u horas de muerte. Sin embargo, si que existe influencia significativa entre determinadas causas de muerte y el tipo de flora microbiana aislada. Por otra parte, no se ha podido identificar una flora característica de la putrefacción ni una secuencia en la aparición de la misma. En último término, no se ha detectado una influencia significativa entre la presencia de flora microbiana productora de etanol y la tasa de alcoholemia detectada en el cadáver.

Autor: AHRAZEM OUSSAMA.
Año: 1997.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA III.

Resumen: En este trabajo se ha purificado y caracterizado el polisacárido mayoritario de una fracción soluble en agua (FIS) obtenida mediante tratamiento con álcali de la pared celular de especies de Fusarium y otros géneros relacionados. Las diferencias químicas y estructurales de estos polisacáridos son de gran utilidad para su utilización como caracteres quimiotaxonómicos que permiten: delimitar géneros; establecer grupos dentro de un género; relacionar anamorfos con sus correspondientes teleomorfos o detectartaxones incorrectamente clasificados por ejemplo Penicillium vermoesenii y Myrothecium penicillioides. Los anticuerpos producidos frente a estos polisacáridos pueden utilizarse para la identificación de especies o grupos de especies afines mediante técnicas inmunológicas.

Autor: MARTINEZ ALONSO M. RAMOS.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA MICROBIANA.

Resumen: El estudio realizado se ha enfocado en la caracterización de los tapetes microbianos que se localizan a lo largo del litoral mediterráneo de la Península Ibérica, aunque el interés se ha centrado en las comunidades multilaminadas que se desarrollan en el Delta del Ebro. En primer lugar, se ha realizado una comparación a nivel estructural de los tapetes microbianos situados en las Salinas de San Rafael y Cabo de Gata (Almería), en las Salinas de Santa Pola (Alicante), y en los sedimentos litorales del Delta del Ebro (Tarragona). Posteriormente, se ha investigado la diversidad estructural que presentan los tapetes microbianos localizados en la Península de los Alfaques, brazo sur del Delta del Ebro. De las diferentes morfologías descritas, los tapetes lisos bien desarrollados que se localizan en una plana arenosa próxima a las Salinas de la Trinitat, han sido objeto de un exhaustivo análisis tanto a nivel de parámetros abióticos y bióticos que caracterizan el ecosistema, como respecto a la dinámica poblacional y los procesos de producción y consumo que tienen lugar. Finalmente, se ha llevado a cabo el aislamiento y caracterización de las bacterias fototróficas anoxigénicas que integran los ambientes deposicionales estudiados.

Autor: MIR PUYUELO JOAN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: GENETICA Y MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA MICROBIANA.

Resumen: El principal objetivo del trabajo ha sido estudiar la presencia de compuestos inorgánicos de azufre (S2-, S2O3 2-, SnO6 2-, Sx) que pueden ser utilizados como dadores o aceptores de electrones por los microorganismos que se desarrollan en las inerfases O2-H2S de distintos sistemas estratificados tanto planctónicos (Rio Ebro, Massona, Vilar, Banyoles (clll), Cisó, Estanya) como bentónicos (tapetes microbianos del Delta del Ebro). En los sistemas bentónicos estratificados también se analizaron las tasas de producción y consumo de H2S, así cómo la tasa de consumo biológico de tiosulfato. De todas maneras, no sólo se evaluaron los compuestos inorgánicos de azufre solubles en el agua intersticial, sinó que también se estudió la presencia de minerales de azufre en los sedimentos deltaicos. Previamente al estudio de dichos compuestos inorgánicos de azufre en los tapetes microbianos, se realizó una caracterización de la comunidad microbiana que compone el sistema mediante microscopía electrónica de barrido (SEM) y de transmisión (TEM) con el objetivo de conocer los microorganismos que pueden estar implicados en los procesos estudiados. La aplicación de dichas técnicas (SEM y TEM) permitió estudiar la comunidad entera preservando la estratificación vertical del ecosistema. De esta manera, además de estudiar la comunidad se puedieron analizar los procesos de deposición que caracterizan este tipo de sistemas analizando la situación, la orientación y el tamaño de los granos de arena, tanto de la matriz orgánica como de la parte inorgánica del tapete.

Autor: TORRALBA DIAZ SARA.
Año: 1997.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA.

Resumen: En este trabajo se ha analizado el efecto del compuesto antimicrotubular metilbenzimidazol carbamato (MBC) y del compuesto actiactínico citocalasina A (CA) sobre el crecimiento y la secreción de enzimas en el hongo filamentoso Aspergillus nidulans, con el fin de determinar el posible papel que desempeñan los microtúbulos y microfilamentos de actina en estos procesos. Los resultados obtenidos parecen indicar que ambos componentes del citoesqueleto estarían implicados en la secreción polarizada de enzimas que tiene lugar en el micelio del hongo. De igual forma, los microtúbulos y la actina parecen estar implicados en el crecimiento apical del microorganismo. Así, mediante estudios de microscopía, se comprueba que el tratamiento con MBC y CA produce alteraciones de la disposición del citoesqueleto y de la ultraestructura normal del A. nidulans, que se correlacionarían con las alteraciones inducidas por las drogas en el crecimiento del hongo.

Autor: CASELLAS CAMPRUBI M. MERCE.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL.

Resumen: SE DISPONE DE UNA CEPA BACTERIANA F101, AISLADA PREVIAMENTE, CAPAZ DE UTILIZAR EL FLUORENO COMO UNICA FUENTE DE CARBONO Y ENERGIA, Y QUE SE HA CLASIFICADO COMO BREVIBACTERIUM SP. LA IDENTIFICACION DE UNA SERIE DE METABOLITOS DE DEGRADACION DEL FLUORENO POR LA CEPA F101 COMO SON: 9-FLUORENOL, 9-FLUORENONA, 3,4-DIHIDROCUMARINA, 3-HIDROXI-1-INDANONA, 1-INDANONA, 2-INDANONA, FORMIL-INDANONA, 4-HIDROXI-9- FLUORENONA, ACIDO 3 (2-HIDROXIFENIL) PROPIONICO, 3-ISOCROMANONA Y ACIDO SALICILICO, HAN PERMITIDO LA DESCRIPCION DE 3 VIAS METABOLICAS DIFERENTES PARA LA DEGRADACION DEL FLUORENO, 2 DE LAS CUALES SOPORTAN EL CRECIMIENTO CELULAR Y UNA TERCERA DE NO PRODUCTIVA. LA ACUMULACION DE 9-FLUORENONA, METABOLITO PRODUCIDO EN ESTA TERCERA VIA. IMPIDE A LA CEPA F101 DE UTILIZAR CONCENTRACIONES ELEVADAS DE FLUORENO (DEL 0.1%). EL AISLAMIENTO DE UNA CEPA BACTERIANA, MC2, CLASIFICADA COMO PSEUDOMONAS MENDOCINA Y QUE ES CAPAZ DE UTILIZAR LA 9-FLUORENONA COMO UNICA FUENTE DE CARBONO Y ENERGIA, HA PERMITIDO LA UTILIZACION EN COCULTIVO DE LAS DOS CEPAS (F101 Y MC2) PARA LA DEGRADACION DEL 0,1% DE FLUORENO, SIN QUE SE ACUMULEN METABOLITOS INTERMEDIARIOS EN EL MEDIO DE CULTIVO.

Autor: CRUZ VIOLERO ROSARIO.
Año: 1995.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA.

Resumen: DADO QUE LOS ANTIBIOTICOS PIRAZOLOISOQUINOLINICOS PRODUCIDOS POR STREPTOVERTICILLIUM GRISEOCARNEUM, DESCRITOS HASTA EL MOMENTO, PRODUCEN SIMULTANEAMENTE A OTROS SIN CARACTERIZAR Y DADA LA POTENCIAL IMPORTANCIA DE ESTOS COMPUESTOS, CUYA ESTRUCTURA NO HABIA SIDO DESCRITA PREVIAMENTE ENTRE LAS SUSTANCIAS BIOACTIVAS DE ORIGEN NATURAL, NOS PROPUSIMOS EN EL PRESENTE TRABAJO EL AISLAMIENTO Y LA CARACTERIZACION DE NUEVOS ANTIBIOTICOS PIRAZOLOISQUINOLINICOS CON OBJETO DE PODER ESTABLECER ANALOGIAS O DIFERENCIAS ENTRE ELLOS, EN BASE A SU ESTRUCTURA Y ACTIVIDAD BIOLOGICA.POR OTRA PARTE, Y CONSIDERANDO QUE EL CONOCIMIENTO DE LAS CONDICIONES OPTIMAS DE PRODUCCION DE CUALQUIER ANTIBIOTICO PROPORCIONA INFORMACION ACERCA DE SU REGULACION METABOLICA, SE HA PLANTEADO EL ESTABLECIMIENTO DE ESTAS CONDICIONES EN DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO. ESTA INFORMACION RESULTA UTIL TANTO PARA LOGRAR UN INCREMENTO EN LOS NIVELES DE PRODUCCION DE LOS ANTIBIOTICOS EN ESTUDIO COMO PARA OBTENER DATOS ACERCA DE SU RUTA BIOSINTETICA. ASI MISMO, SE HA PLANTEADO EL ESTUDIO DE OTRAS ANTIVIDADES PRODUCIDAS POR EL MICROORGANISMO, CUYO ESPECTRO DE ACCION PRESENTA DIFERENCIAS RESPECTO DE LOS OTROS GRUPOS YA DESCRITOS, SEGUN SE DESPRENDE DE ENSAYOS PRELIMINARES.