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PROCESOS MICROBIANOS



104 tesis en 6 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6
  • CARACTERIZACIÓN QUÍMICA Y BIOLÓGICA DEL INDUCTOR DE LA PRODUCCIÓN DEL ANTIFÚNGICO PIMARICINA EN Streptomyces natalensis .
    Autor: RECIO PÉREZ ELISEO.
    Año: 2004.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: FACULTAD DE BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA E INBIOTEC.
    Resumen: La pimaricina es un antifúngico muy interesante, desde el punto de vista industrial y comercial, por lo que estudiar la regulación de su producción es muy importante para obtener mayores rendimientos con las cepas de las que se disponen. Si a los estudios de biología molecular se les unen los estudios bioquímicos se puede avanzar más rápidamente en el conocimiento de la regulación y, por lo tanto, incrementar la producción. Se seleccionó un mutante tras realizar mutagénesis con luz UV qu teniendo intactos los genes biosintéticos del antibiótico no producía pimaricina, pero que al complementar con otros mutantes recuperaba la capacidad de producción del mismo. La mutación debía afectar a algún gen implicado en la biosíntesis de alguna molécula inductora, identificándose una molécula termoestable, de 3estructura y naturaleza química diferente a las moléculas reguladoras conocidas hasta el momento, al que s se ha denominado IP, cuyo nombre químico es 2,3-diamino-2,3-bis (hidroximetil)-1,4-butanodiol. El IP adicionado de forma exógena al cultivo inducía la producción de pimaricina. El IP se comporta como un regulador típico de los procesos de "quórum sensing". La producción de IP depende del crecimiento del organismo, coincidiendo su biosíntesis con la fase expnencial de crecimiento disparando la produciión del antifúngico, al que siempre precede en el tiempo. El IP regula la producción de pimaricina, y además aumenta la producción de otros antifúngicos producidos por diferentes cepas de Streptomyces, pudiendo ser una señal común entre estas cepas; sin embargo, éstas no lo producen, lo que puede apuntar a que el IP podría pertenecer a una familia de compuestos estructuralmente semejantes, El factor A ejerce una regulación positiva sobre la producción de pimaricina en S. natalensis, seguramente por un mecanismo diferente al que utiliza el IP. Además se aisló otro compuesto, el glicerol, que activa la producción de pimaricina, El rango de concentración necesario para activar la producción de pimaricina oscilaba entre una concentración umbral y una concentración de saturación. Las altas concentraciones yu la existencia de un efecto umbral nos hizo pensar que podía ser un precursor del IP, sin embargo, lso estudios realizados mostraron que la adición de glicerol no provocaba un aumento en la producción de IP, además en un sistema saturado de IP el glicerol producjo un incremento en la producción de otros antifúngicos, pudiendo ser una señal común entre estas cepas de Streptomyces. Como el glicerol es producido por levaduras y otros organismos, podría ser una señal que desencadena un mecanismo de defensa (producción del antifúngico) cuando coinciden en el mismo nicho ecológico estos microorganismos. Hay que destacar que con la adición de glicerol exógeno se logra aumentar la producción más del 100%. Por último, se estudió el efecto del fosfato sobre la producción de pimaricina estrptomicina y factor A, que disminuyen drásticamente, y sobre el IP que aumenta.
  • CARACTERIZACION DE LA AGRUPACION DE GENES DE BIOSINTESIS DE ARGININA Y SU RELACION CON LA PRODUCCION DE ACIDO CLAVULANICO EN STREPTOMYCES CLAVULIGERUS .
    Autor: FUENTE BARRIENTOS ALVARO DE LA.
    Año: 2003.
    Universidad: LEON.
    Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AMBIENTALES.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y AMBIENTALES.
    Resumen: El ácido clavulánico es un potente inhibidor de beta-lactamasas que se produce industrialmente por Streptomyces calvuligerus. Se sintetiza a partir de gliceraldehído 3 fosfato y arginina, aminoácido que resulta limitante para la producción. Por tanto, el conocimiento de la ruta de biosíntesis de arginina, su regulación y los flujos metabólicos en diferentes condiciones de cultivo, así como su relación con la producción de ácido clavulánico, son de gran importancia para entender los mecanismos de producción de ácido clavulánico y para el diseño racional de estrategias que permitan la superproducción de dicho compuesto. En el presente trabajo se ha clonado y secuenciado un fragmento de 2115 nucleótidos del genoma de S. clavuligerus en el que se han localizado los genes de biosíntesis de arginina argJ y argB. Estos genes forman parte de la agrupación de genes de biosíntesis de arginina argCJBDRGH y se expresan en un transcrito policistrónico argCJBDR. Debido a la elevada similitud entre los genes argJ y el marco de lectura abierto orf6, localizado en la agrupación de genes de biosíntesis de ácido clavulánico y cuya función es desconocida, se estudió la función de ambos genes, demostrándose que se comportaban como Ornitina Acetil Transferasas monofuncionales, capaces de complementar mutantes de E. coli argE. Estudios más detallados utilizando ambas proteínas purificadas de forma heteróloga desde E. coli mostraron que se autoprocesan en una treonina situada en la posición 179 de ArgJ y 181 de ORF6, generando una subunidad alfa de 19 kDa, correspondiente a la región aminoterminal y una subnidad beta de 22 kDa, correspondiente a la región carboxilo terminal de las proteínas, siendo la forma funcional de las proteínas el heterotetrámero (alfa2beta2). Los estudios ezimáticos realizados mostraron que ambas proteínas presentan un mecanismo de reacción de tipo ping-pong BiBi con unos valores de las constantes cinéticas (Km y Vmax) similares, al igual que las constantes de inhibición (Ki) por ornitina, no demostrándose inhibición por arginina en ninguna de las enzimas. Se purificó la proteína nativa ArgR de S. clavuligerus y se demostró mediante ensayos de retraso en gel que podía controlar la expresión de ambos genes mediante la unión a unas secuencias denominadas cajas de arginina que se localizan en la región promotora del gen orf6 y del gen argC. Finalmente, se purificó e identificó como Holomicina un compuesto con actividad antibacteriana de amplio espectro producido por la cepa mutante S. clavuligerus ccaR::aph, estudiándose la producción de holomicina en varias cepas mutantes en genes relacionados con la biosíntesis de ácido clavulánico. Se ha puesto a punto un ensayo enzimático para la Holomicina Sintasa, correlacionándose esta actividad, en los mutantes en genes relacionados con la biosíntesis de ácido clavulánico, con la producción de holomicina de la cepa.
  • CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA Y MOLECULAR DEL PROCESO DE DECOLORACIÓN DE UN EFLUENTE INDUSTRIAL CON EL BASIDIOMICETO CORIOLOPSIS GALLICA.
    Autor: YAGÜE PLAZA SUSANA.
    Año: 2003.
    Universidad: ALCALA.
    Centro de lectura: UNIVERSIDAD DE ALCALÁ.
    Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS (CSIC).
    Resumen: El trabajo de investigación titulado "Caracterización fisiológica y molecular del proceso de decoloración de un efluente industrial con el basidiomiceto Coriolopsis gallica" constó de tres partes fundamentales. En la primera, se realizó una caracterización del efluente procedente de la industria cervecera y se analizó la capacidad de crecimiento y degradación de C. gallica sobre el mismo, con el objetivo final de aplicar este hongo in vitro en el tratamiento de este tipo de efluentes, o de aquellos que muestren características similares. En la segunda parte, se optimizaron las condiciones de cultivo para la degradación del efluente y se estudiaron los mecanismos involucrados en el proceso degradativo con especial énfasis en la maquinaria enzimática responsable del mismo, así como el aspecto molecular de la producción de lacasa por este basidiomiceto. De esta forma se estudió la expresión génica del gen de lacasa en condiciones de alta decoloración y la capacidad de esta enzima de decolorar el efluente in vitro, utilizando caldos enzimáticos con alta actividad lacasa. La tercera etapa del trabajo consistió en la puesta a punto de un sistema de expresión heterólogo del gen de lacasa de C. gallica en la levadura Saccharomyces cerevisiae como una herramienta necesaria para expresar el gen de interés en forma heteróloga, obteniendo proteínas activas con gran potencial en usos industriales.
  • DETECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE MICOPLASMAS PORCINOS. APLICACIÓN DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO AL ESTUDIO DE MYCOPLASMA HYPOPNEUMONIAE.
    Autor: CLEMENTE JANEIRO DE ASSUNÇAO PATRICIA ALEXANDRA.
    Año: 2003.
    Universidad: LAS PALMAS DE GRAN CANARIA.
    Centro de lectura: VETERINARIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.
    Resumen: Para la ampliación del conocimiento de la enfermedad, y debido a la escasez de cepas de M. Hyopneumoniae aisladas en el territorio español y con la finalidad de poder continuar con nuestros estudios, en el segundo capítulo, nuestro capital objetivo ha sido la obtención de cepas de campo de M. Hyopneumoniae. Para ello hemos trabajado sobre un total de 142 muestras de 54 pulmones con lesiones características de la NEP. La identificación de los aislamientos fue realizada en dos fases. Primero se utilizaron pruebas orientativas, como son las caracteristicas de cultivos y las pruebas bioquímicas y enzimáticas. A continuación, para confirmar los resultados obtenidos se empleó como prueba definitiva la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). El tercer capítulo de esta tesis consistió en la caracterización de las cepas de M. Hyopneumoniae aisladas, por las técnicas de SDS-PAGE e Immunoblot. Para el Immunoblot se utilizó un antisuero policional producido frente a la cepa de referencia de M. Hyopneumoniae (cepa J), un antisuero policional purificado producido uno frente a la proteína de membrana p46 y el otro frente a la adhesina p97. Finalmnete, en el cuarto capítulo, se estudió el crecimiento de M. Hyponeumoniae a través de la técnica de citometría de flujo y se comparó los resultados de esta técnica con otras técnicas tradicionales, las Unidades Cambiadoras de Color50 y la medición del pH.
  • UTILITZACIÒ DE L'ÀCID OLEIC PER PSEUDOMONAS SP.42 A2 .
    Autor: CULLERÉ LUENGO JORDI.
    Año: 2002.
    Universidad: BARCELONA .
    Centro de lectura: FARMACIA.
  • ESTUDIO DEL EXOPOLISACÁRIDO PRODUCIDO POR HALOMONAS MAURA, UN NUEVO MICROORGANISMO HALÓFILO MODERADO .
    Autor: ARIAS MONTES M. SOLEDAD.
    Año: 2002.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: FARMACIA .
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: En la presente Tesis Doctoral se describe el maurano, un exopolisacárido (EPS) sintetizado por la cepa S-30 de Halomonas maura. El microorganismo productor es una bacteria halófila moderada descrita por nuestro equipo de investigación y procedente de una salina situada en Asilah (Marruecos). La primera etapa del trabajo fue optimizar los métodos de producción y extracción del polímero, considerando dos parámetros, el rendimiento y la calidad del producto obtenido, la cual se evaluó de acuerdo a su pureza y propiedades funcionales. Tras la puesta a punto de tales condiciones, Halomonas maura S-30 produjo en fermentador 4,3 gramos de maurano por litro de medio MY, con una conversión de sustrato carbonado (glucosa) del 78%. Dicha productividad, sin embargo, se ha superado al obtener mediante mutagénesis insercional una cepa mejorada (mutante TK26) que sintetiza el polímero con mayor rendimiento. La caracterización química del maurano puso de manifiesto qu era un heteropolisacárido compuesto por manosa, galactosa, glucosa y ácido glucurónico. Entre sus sustituyentes se hallaron componentes orgánicos (acetilos y piruvatos) e inorgánicos (fosfatos y sulfatos). El carácter ácido del polímero se debe a la presencia de los ácidos urónicos, grupos fosfato, piruvato y a los inusuales restos sulfato, componentes característicos de los EPS de Halomonas maura y Halomonas eurihalina. La masa molecular del amurano se estima en 4,7 x 10(6) Da y los estudios de microscopía revelan que las moléculas se asocian formando una estructura en doble hélice. En relación con sus propiedades funcionales, el maurano ha demostrado ser un poderoso agente viscosizante. Este hecho, junto con su comportamiento pseudoplástico, tixotrópico y viscoelástico lo hace comparable al xantano. Por otra parte se muestra como un buen emulgente de mezclas óleo-acuosas mediante un mecanismo de acción de tipo estabilizador basado en su comportamiento reológico. Por último, nuestro polímero es capaz de secuestrar cationes metálicos debido a su carácter aniónico, lo cual es de gran interés en procesos de biorremediación. Durante la última fase del estudio se han realizado ensayos destinados a desarrollar las aplicaciones industriales del maurano en el sector alimentario y cosmético. Para ello hemos hemos contado con la colaboración de las empresas SANAVí S.A. Y GLEY DE BRECH, S.A. Dichos estudios han demostrado la viabilidad de algunos de los usos específicos del maurano.
  • SELECCIÓN DE CEPAS EXTREMÓFILAS PRODUCTORAS DE EXOPOLÍMEROS DE INTERÉS BIOTECNOLÓGICO. ESTUDIO TAXONÓMICO DE LOS MICROORGANISMOS AISLADOS Y ESTUDIO DE SUS EXOPOLISACÁRIDOS .
    Autor: MARTÍNEZ CÁNOVAS M. JOSEFA.
    Año: 2002.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.
    Resumen: Este trabajo pretende el hallazgo de nuevos microorganismos halófilos productores de exopolisacárido (EPS), con el fin de encontrar polímeros con propiedades químicas y/o funcionales de interés tecnológico y comprobar si existen nuevos grupos taxonómicos entre las bacterias que presentan esta propiedad. De esta forma, se ha realizado una selección de 142 microorganismos halófilos productores de EPS, a partir de numerosos hábitats hipersalinos con parámetros físicos y químicos diferentes. Después de comprobar que todas las cepas aisladas era bacilos Gram negativos quimioheterótrofos, relacionados con el género Halomonas, se ha realizado un estudio taxonómico exhaustivo, analizando aspectos fenotípicos, genotípicos, y filogenéticos. Entre los microorganismos objeto de estudio destaca la presencia de las especies Halomonas maura y Halomonas eurihalina, ya que más del 50% de las cepas pertenecen a dichas especies. También se ha comprobado la existencia de cuatro nuevos grupos taxonómicos. Estos taxa son: Halomonas ventosaii sp.nov., una bacteria desnitrificante de elevado contenido en G+C, que produce un EPS de actividad emulgente; Halomonas mucosus sp.nov., aislada de Fuente de Piedra (Málaga), que posee un marcado carácter eurihalino; Salipiger mucescens gen.nov., sp., nov., un microorganismo que presenta una baja versatilidad nutricional e incapacidad de hidrolizar polisacáridos, lípidos y proteínas; y Halomucus desgradans gen.nov., sp.nov., una bacteria con actividad lipolítica y productora de una exopolisacárido con poder emulgente.
  • ESTUDIO DE COMPUESTOS SURFACTANTES PRODUCIDOS POR BACTERIAS GRAM POSITIVAS HALOTOLERANTES .
    Autor: RUIZ GARCÍA CRISTINA.
    Año: 2002.
    Universidad: GRANADA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: En este trabajo se han investigado 29 cepas bacterianas y los compuestos tensioactivos que producen. Los microorganismos proceden de medios salinos y fueron seleccionados de acuerdo a la actividad surfactante de sus colonias. Todos ellos son bacterias Gram positivas formadoras de endosporas y halotolerantes. Para caracterizar las cepas se ha hecho un estudio de taxonomía polifásica incluyendo técnicas fenotípicas, genotípicas (determinación del contenido en G+C mol%; hibridación DNA-DNA y RAPD) y filogenéticas (secuenciación del gen del RNAr 16S). Los resultados de dicho estudio indican que nuestros microorganismos están relacionados con el género Bacillus aunque entre ellos se pueden distinguir 4 grupos fenotípicos y genotípicos de los cuales dos podrían asignarse a la especie Bacillus subtillis; los dos restantes posiblemente constituyan nuevos taxa de bacterias esporuladas. Todas las bacterias de este estudio sintetizan surfactantes de potente actividad (Semejante a la de la surfactina comercializada). Las cepas identificadas como Bacillus subtilis los producen con mayor rendimiento que la cepa control. La mayoría de estos tensioactivos son polipéptidos cíclicos de la familia de la surfactina; las distintas cepas sintetizan mezclas con distintos porcentajes de surfactinas homólogas que teniendo la misma composición de aminoácidos varían en la longitud del ácido graso unido al péptido cíclico. Sin embargo uno de los grupos taxonómicos sintetizan un surfactante parcialmente relacionado con la surfactina y la fengicina, según se desprende del estudio de los genes NRPS (non-ribosomal peptide y synthetase). En este estudio se ha comprobado que el análisis de las regiones génicas correspondientes a los dominios de adenilación y tiolación de las péptidos sintetasas (genes NRPS) puede ser utilizado como técnica de tipado molecular de estas bacterias y, por tanto, su utilidad taxonómica.
  • EFECTOS DE LOS PRODUCTOS DE DEGRADACIÓN ORIGINADOS EN LA EXPLOSIÓN POR VAPOR DE BIOMASA DE CHOPO SOBRE KLUVEROMYCES MARXIANUS .
    Autor: OLIVA DOMÍNGUEZ JOSÉ MIGUEL.
    Año: 2002.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA.
    Centro de realización: CIEMAT.
    Resumen: La obtención de etanol a partir de biomasa lignocelulósica mediante un proceso de Sacarificación y Fermentación Simultáneas (SFS), requiere un pretratamiento previo de la biomasa que altere su estructura, facilitando la acción de los enzimas. Durante el pretratamiento se forman una serie de productos de degradación que pueden afectar al microorganismo, actuando como potenciales inhibidores de la fermentación. Estos productos (ácidos alifáticos, productos de degradación de azúcares y compuestos aromáticos de degradación de la lignina) no solubilizados y recuperación en la fracción líquida obtenida tras el pretratamiento. En este trabajo se han identificado los productos de degradación generados en el pretratamiento por explosión por vapor de madera de chopo, estudiándose el efecto de estos compuestos sobre la producción de biomasa y etanol de la levadura termotolerante Kluveromyces marxianus, tanto individualmente como en combinaciones binarias y ternarias. Se ha estudiado la influencia del pH del medio de fermentación sobre la toxicidad de los ácidos y la asimilación de estos productos tóxicos por el microorganismo. Finalmente, se ha estudiado el aprovechamiento de la fracción líquida como medio de fermentación para producir etanol a partir de biomasa mediante un proceso de Sacarificación y Fermentación Simultáneas (SFS). El objetivo es reducir la cantidad de agua residual generada en el pretratamiento y disminuir la necesidad de agua en el proceso. Para ello se ha sometido a la fracción líquida generada en el pretratamiento a distintos tratamientos de destoxificación (neutralización, evaporación, procesos de oxidación avanzada y aplicación de zeolitas) con objeto de aumentar su fermentabilidad. La aplicación de un tratamiento de destoxificación, hace posible utilizar esta fracción líquida como medio para producir etanol en un proceso de SFS, permitiendo un ahorro de entre el 30 y 60% del agua utilziada en el proceso.
  • TAXONOMÍA POLIFÁSICA DE POBLACIONES DE MICROORGANISMOS QUE ESTABLECEN SIMBIOSIS CON CICER ARIETINUM .
    Autor: RIVAS GONZÁLEZ RAÚL.
    Año: 2002.
    Universidad: SALAMANCA.
    Centro de lectura: BIOLOGÍA .
    Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.
    Resumen: Se han aislado de diferentes suelos de las Península Ibérica e Islas Canarias 38 cepas de microorganismos que producen simbiosis con Cicer arietinum. La secuenciación del gen ribosómico 16S de estas cepas nos ha permitido encuadrar a nuestros aislados en el género Mesorhizobium. Posteriormente la aplicación de la técnica LMW RNA ha identificado nuestros aislados como las especies Mesorhizobium amorpha, Mesorhizobium ciceri, Mesorhizobim mediterraneum y Mesorhizobium tianshanense. A continuación, gracias a la utilización de diferentes técnicas moleculares como los TP-RAPD, 5STP-RAPD y 23STP-RAPD observamos que nuestros aislados constituían 10 subespecies bien definidas dentro de las cuatro especies de género Mesorhizobium. Una vez identificadas las subespecies, procedimos a estudiar la diversidad existente dentro de ellas y a realizar una identificación fenotipica. Por último realizamos un estudio sobre los genes implicados en la nodulación y fijación del nitrógeno ya que no se conocía que las especies Mesorhizobium amorpha y Mesorhizobium tianshanense fueran capaces de nodular y fijar nitrógeno en simbiosis con Cicer arietinum. Los resultados obtenidos en este último estudio, nos permitieron observar que Mesorhizobium amorpha y Mesorhizobium tianshanense eran capaces de nodular y fijar nitrógeno en simbiosis con Cicer arietinum porque habían adquirido por transferencia horizontal los genes simbióticos de Mesorhizobium ciceri.
  • CARACTERIZACIÓN DE LAS ISOENZIMAS LACASAS PRODUCIDAS POR FUSARIUM PROLIFERATUM. APLICACIÓN EN LA BIOTRANSFORMACIÓN DE LIGNINA .
    Autor: HERNÁNDEZ FERNAUD JUAN RAMÓN.
    Año: 2002.
    Universidad: LA LAGUNA.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LA LAGUNA.
    Resumen: La tesis se estructura en 4 objetivos claramente diferenciados. En primer lugar se procedió a la purificación y caracterización de una lignina técnica empleando para ello técnicas espectrofotométricas, cromatograficas y BC-RMN, entre otras. Este sustrato fue incubado en presencia de Fusarium proliferatum a fin de estudiar su biotransformación y los elementos del sistema ligninolitico del hongo implicado en tal evento. Este ensayo permitió identificar la enzima presumiblemente responsable del proceso ligninolítico procediendose entonces a su purificación y caracterización físico química y cinética. Cabe destacar en este apartado la identificación de dos isoenzimas lacasas confirmado por espectrometría de masas Malditof y trampa iónica. Por último diseñamos varios sistemas de bioconversión in vitro, en medios acuosos, de alto rendimiento a fin de transformar el sustrato contenido como principales componentes la lignina industrial de celesa y la actividad lacasa simipurificada. Estos sistemas resultaron ser de gran interés por su posible aplicación industrial en diversos campos tales como la producción de copolímeros o de adhesivos en la industria maderera.
  • AGREGACIÓ I DESAGREGACIÓ PROTEICA EN ESCHERICHIA COLI: BIOLOGIA DELS COSSOS D'INCLUSIÓ .
    Autor: CARRIÓ LLACH M.MAR.
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÒNOMA DE BARCELONA.
  • CARACTERIZACIÓN DE LAS PROPIEDADES QUE HACEN DE LACTOBACILLUS EL REGULADOR DEL ECOSISTEMA VAGINAL Y EL PROTECTOR CONTRA LOS PATÓGENOS GENITO-URINARIOS .
    Autor: OSSET LLADONOSA JORDI .
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.
    Resumen: La vagina humana alberga un ecosistema que debe estar en equilibrio, para protegerla de las colonizaciones e infecciones. En este ecosistema, el microorganismo más importante por su número y por su actividad es Lactobacillus. La infección del tracto urinario y la vulvoganitis candidiásica son dos patologías de alta prevalencia en la población femenina. En ellas Lactobacillus ha demostrado jugar un papel importante: evitar la colonización y la posterior infección. Los mecanismos básicos por los cuales Lactobacillus ejerce un papel regulador en la microflora vaginal, son dos: bloqueo de la adherencia de los patógenos al epitelio vaginal e inhibición de su crecimiento. Para utilizar cepas de Lactobacillus como agentes probióticos, es necesaria la correcta caracterización de las propiedades anteriores. El objetivo general de este trabajo es seleccionar las cepas de Lactobacillus mejor dotadas para ser utilizadas como agentes bioterapéuticos. Los objetivos concretos son: 1,- Averiguar que cepas son las más adherentes a las células epiteliales vaginales (CEV). 2,- Determinar que cepas son las más bloqueadoras de la adherencia de microorganismo a las CEV. 3,- Comprobar si la capacidad de bloqueo de la adherencia se correlaciona con otras capacidades. 4,- Averiguar que cepas son más inhibidoras del crecimiento de otras microorganismos. 5,- Comprobar si los factores inhibidores del crecimiento son excretados. 6,- Comprobar si es factible concentrar factores inhibidores del crecimiento. 7,- Caracterizar los factores inhibidores del crecimiento. 8,- Comprobar si la capacidad de inhibición del crecimiento se correlaciona con otras capacidades. Se escogieron 15 cepas de Lactobacillus de una colección previamente estudiada y caracterizada por nuestro equipo y 25 cepas de patógenos genitourinarios. Con ellas se realizaron ensayos de adherencia, bloqueo de la adherencia de los patógenos al epitelio vaginal y inhibición del crecimiento de los patógenos, tanto en medio sólido como en líquido. De las cepas más capacitadas, se caracterizó la actividad inhibidora del crecimiento, mediante ensayos de difusión en agar desde pozos, tratamientos físicos y químicos, SDS-PAGE y cromatografía. De los resultados obtenidos, se concluye: Los Lactobacillus más adherentes a las CEV son Lactobacillus LB35, seguido de LB25 y LB56. Por Grupos de Hemaglutinación es el Grupo III, seguidos del II y I. Los Lactobacillus más bloqueadores por exclusión son Lactobacillus LB35, seguido de LB30 y LB39. Por Grupos es el Grupo III, seguidos del I y II. Existen diferencias en la capacidad de bloqueo a un determinado patógeno entre cepas de Lactobacillus y entre una misma cepa a distintos uropatógenos. LB35 ha mostrado ser capaz de bloquear por competición y desplazamiento la adherencia de E.coli EC26 a las células del epitelio vaginal. Los Lactobacillus más inhibidores del crecimiento en medio sólido son Lactobacillus LB35, seguido de LB11 y LB65. En líquido son LB55, seguido de LB5 y LB21. El más inhibidor de E.coli en medio sólido es LB35 y en líquido es LB38, siendo LB35 la cuarta mejor cepa. Los factores inhibidores del crecimiento son excretados por Lactobacillus, ya que los sobrenadantes filtrados, y por tanto libres de Lactobacillus, mantienen la actividad, y esta se conserva cuando se concentran por ultrafiltración, liofilización y cromatografía. La sustancia inhibidora excretada por Lactobacillus se ha caracterizado como termoestable, baroestable, crioestable, cronoestable e hidrofílica. Su peso molecular estimado por ultrafiltración es < a 5kDa. La actividad de la sustancia inhibidora depende de la cepa de Lactobacillus. En SDS-PAGE parece que la estructura química de la sustancia inhibidora podría ser una proteína, mientras que en ensayos de difusión en agar se detecta resistencia a las proteinasas. Estos resultados sugieren que podría tratarse de un péptido pequeño. La capacidad de adherencia de ciertos Lactobacillus a las CEV se correlaciona con la capacidad de bloqueo de la adherencia de los patógenos y con la capacidad inhibidora del crecimiento. Se han seleccionado los Lactobacillus LB35, LB39, LB59, LB65 y LB86 como candidatos a producto bioterapéutico, ya que son los que mejor cumplen los requisitos exigidos. Estos Lactobacillus solos o combinados entre sí, pueden tener un papel importante en la regulación y el equilibrio del ecosistema vaginal. Las indicaciones preventivas y/o terapéuticas más inmediatas podrían ser las infecciones del tracto urinario y las vulvovaginitis candidiásicas.
  • SELECCION DE LEVADURAS AUTOCTONAS DE LA DENOMINACION DE ORIGEN VINOS DE MADRID PARA VINIFICACION EN BLANCO.
    Autor: FERNANDEZ OLIVA KORO.
    Año: 2002.
    Universidad: ALCALA.
    Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA .
    Centro de realización: INSTITUTO MADRILEÑO DE INVESTIGACION AGRARIA Y ALIMENTARIA (IMIA) DE LA COMUNIDAD DE MADRID..
    Resumen: Se ha diseñado y desarrollado un sistema secuencial de selección a partir de 300 cepas de Saccharomyces cerevisiae autóctonas de la D.O "Vinos de Madrid" en siete fases, en cada una de las cuales y de forma gradual, se han ido eligiendo aquellas cepas que presentasen las características enológicas más idóneas para la realización de vinificaciones en blanco, en base a los parámetros tecnológicos y de calidad estudiados. Los resultados obtenidos a lo largo de este sistema secuencial de selección establecido, han permitido seleccionar definitivamente la cepa S. cerevisiae raza fisiológica cerevisiae 79 (IMIA 103) y la cepa S. cerevisiae raza fisiológica bayanus 173 (IMIA 277) para poder ser utilizadas a escala industrial. La técnica basada en la amplificación de microsatélites mediante PCR, utilizando el microsatélite ScTAT1 como marcador molecular, ha resultado de gran utilidad para caracterizar y diferenciar genéticamente estas cepas, evidenciando además su excelente implantación durante dos vendimias sucesivas y partiendo de variedades blancas diferentes autorizadas en la D.O "Vinos de Madrid".
  • ESTUDIO DE LA CALIDAD MICROBIOLÓGICA EN RESIDUOS BIOSANITARIOS GENERADOS POR PEQUEÑOS PRODUCTORES .
    Autor: BLANCO NAVAS BEATRIZ.
    Año: 2002.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: VETERINARIA .
    Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.
    Resumen: Al objeto de contribuir a una armonización normativa, con criterios científicos tendentes a clarificar y simplificar la gestión de los residuos sanitarios, hemos procedio a la catalogación y análisis microbiológico, respectivamente, de dos series de muestras de residuos sanitarios, depositados en contenedores para recogida selectiva de Residuos Biosanitarios Especiales (RBE), procedentes de pequeños productores, concretamente de 98 centros médicos de diferentes especialidades. Para la catalogación de los residuos de 239 contenedores, procedimos a su segregación de dos grupos: A.- Residuos Biosanitarios Especiales, según la definición de RBE más consensuada, esto es, la que aparece en el Proyecto CLINHOS (Feliu et al., 1993). En nuestro caso básicamente, estos residuos estaban constituidos por material punzante o cortante o por líquidos corporales en volumen superior a 100 ml, fundamentalmente sangre. B.- Residuos inespecíficos, considerando a todos aquellos que no se acogen a la definición de RBE, es decir, vendas, gasas, torundas, algodón, guantes de látex, papel, plásticos, envoltorios, cubrecabezas, etc. Los resultados de esta catalogación han revelado la existencia de un porcentaje significativo de residuos que no se encuadran en la definición de RBE. Este porcentaje varía en función del tipo de centro generador, así como el volumen del contenedor del que proceden, encontrando centros que generan hasta un 90% de residuos que no se corresponden con la definición de RBE. Estos resultados ponen de manifiesto la incorrecta segregación de estos desechos, dando lugar a un incremento innecesario en los costes de gestión. El análisis microbiológico -bacteriológico y fúngico- se realizó sobre 293 muestras procedentes de 146 contenedores de RBE. Se utilizaron medios de cultivo ordinarios, enriquecidos y/o selectivos, para el recuento y aislamiento de los microorganismos existentes, realizando su posterior identificación mediante sistemas rápidos multipruebas API, así como pruebas tradicionales estándar. EL promedio de los recuentos totales de bacterias viables fue de 7.71 log10 u.f.c/gr residuo analizado, aunque destaca una gran variabilidad y dispersión en los resultados, siendo los residuos de los laboratorios de análisis clínicos los que presentan las mayores cargas microbianas y los de las clínicas oftalmológicas los menos contaminados. El promedio de los recuentos de hongos y levaduras obtenidos fue de 3,35 log10 (en 3 centros no hubo crecimiento fúngico). Globalmente, estos recuentos han sido inferiores a los obtenidos por otros autores consultados, trabajando tanto sobre residuos procedentes de hospitales, como de pequeños productores así como residuos sólidos urbanos (RSU). Se ha investigado la presencia en estos residuos de grupos de microorganismos potencialmente patógenos tales como Staphylococcusaures aureus (presente en el 16% de las muestras analizadas), Pseudomonas aeruginosa (3%), enterococos (34,1%), enterobacterias (23.2%), clostridios sulfito reductores (ausencia) o Listeria monocytogenes (ausencia), no aislándose en ningún caso concentraciones de estos microorganismos superiores a las descritas por otros autores en RSU. Encontramos además un porcentaje considerable (22%) de muestras de residuos sanitarios sin crecimiento microbiano. Nuestros datos rebaten la percepción generalizada de que los residuos sanitarios albergan una gran cantidad de microorganismos patógenos. Por tanto, y según nuestro estudio, caracteriza a estos residuos una gran variabilidad tanto en su composición -sobre todo por una inadecuada segregación- como en su calidad microbiológica, demostrándose que se trata de un material con menor carga microbiana que los RSU. Se ponde de manifiesto a la necesidad de optimizar la utilización de estos contenedores y aplicar tratamientos de esterilización sólo a los residuos en los que esté justificado, con el fin de evitar sobrecostes de gestión, para lo cual resulta imprescindible una armonización normativa al respecto.
  • LACTOBACTERIAS COMO PROBIONTES E PRODUTORAS DE BACTERIOCINAS, MODELOS DE CRECEMETO E ACTIVIDADE. APLICACIONS A ACUICULTURA .
    Autor: VAZQUEZ ALVAREZ JOSE ANTONIO.
    Año: 2001.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: QUIMICA.
    Centro de realización: FACULTADE DE QUIMICAS.
    Resumen: El objetivo central de la presente memoria, consistio en el estudio de los principales problemas asociados a la produccion de lactobacterias y bacteriocinas, asi como su aplicación probiotica en los diferentes escalones del cultivo de larvas de rodaballo. Por un lado se optimizo la produccion de bacterias lacticas y bacteriocinas con el estudio del efecto de la aireacion, la respuesta al gradiente del pH con el correspondiente modelado matematico de esta variable y los aminoacidos sobre la biosintesis de bacteriocinas. Se utilizaron tambien medios residuales (EMP´s-efluyentes del procesado de mejillon) para la produccion de pediocina empleando cultivos en estado solido. Se formalizó un modelo generativo estadistico partiendo de supuestos basicos para el estudio y descripcion de las curvas dosis-respuesta (metodo empleado en la cuantificacion de la actividad biologica de las bacteriocinas) y el consiguiente ajuste a modelos descriptivos con significado biologico. Finalmente en cuanto a la parte de aplicación, el empleo de lactobacterias mejoraron los crecimientos poblacionales de Isochrysis galbana y Brachionus plicatilis, asi como la inhibicion "in vitro" de los acidos lactico y acetico sobre bacterias potencialmente patogenas de los cultivos marinos. Se propusieron herramientas de analisis matematico para la cuantificacion y caracterizacion de estos efectos.
  • ECOLOGÍA MOLECULAR DE LA COMUNIDAD MICROBIANA DE UN AMBIENTE EXTREMO: EL RÍO TINTO .
    Autor: GONZÁLEZ TORIL ELENA.
    Año: 2001.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: BIOLOGÍA MOLECULAR SEVERO OCHOA.
    Resumen: En los últimos años se han venido aplicando distintas técnicas de biología molecular al estudio de la ecología microbiana, desarrollándose los que se ha denominado como Ecología Molecular. Con la utilización de estas nuevas metodologías se subsanan algunas de las limitaciones de las técnicas convencionales de ecología microbiana, así, por ejemplo, se pueden identificar microorganismos sin necesidad de cultivarlos. En esta tesis nos planteamos la puesta a punto y aplicación de técnicas de ecología molecular al estudio de la comunidad procariota de un ambiente extremo: el río Tinto. El río Tinto es un ambiente extremo dado el bajo pH y la alta concentración de metales pesados que presentan sus aguas. El bajo pH (2,3 de media) es consecuencia del metabolismo de las bacterias quimilitoautótrofas de hierro y azufre presentes en este hábitat. Por otro lado, la alta concentración de hierro en solución tampona el pH, lo que hace que sea constante a lo largo de gran parte del cauce. Para el estudio de la comunidad procariota de sus aguas se pusieron a punto tres técnicas de ecología molecular: electroforesis en geles de gradiente de desnaturalización (DGGE), fluorescencia de hibridación in situ (FISH) y clonaje del gen del RNA ribosómico 16S. Los datos obtenidos mostraron una baja diversidad de procariotas, siendo los más representativos Acidithiobacillus ferrooxidans, Leptospirillum ferrooxidans y distintas especies del género Acidiphilium. También se identificaron otros microorganismos característicos de aguas ácidas de minas, como "Ferromicrobium" y las arqueas Thermoplasma acidophilum y Ferroplasma acidiphilum. Estos resultados fueron comparados con los obtenidos en trabajos anteriores, realizados por nuestro grupo de investigación, utilizando técnicas convencionales de ecología microbiana y se obtuvo una buena correlación. Por último, todos los datos de los que disponíamos fueron integrados en un modelo que explica el funcionamiento de la ecología microbiana del río Tinto basándose en las altas concentraciones de hierro presentes en sus aguas.
  • ESTUDIO FENOTÍPICO, GENÉTICO Y ECOLÓGICO DE PSEUDOMONAS SAVASTANOI PV. RETACARPA. AGENTE ETIOLÓGICO DE LA TUBERCULOSIS DE LA RETAMA (RETAMA SPHAEROCARPA BSS.) .
    Autor: ÁLVAREZ DÁVILA FRANCISCO.
    Año: 2000.
    Universidad: SAN PABLO CEU.
    Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES Y TÉCNICAS.
    Centro de realización: UNIVERSIDAD SAN PABLO-CEU CEU. FAC. CC. EXPERIMENTALES Y T..
    Resumen: Pseudomonas savastanoi es una bactería fitopatógena que afecta principalmente al olivo, adelfa fresno y retama. La bacteria induce un crecimiento desdiferenciado en los tejidos de la planta dando lugar a tumores. La formación de éstos está inducida por la síntesis, por parte de la bacteria, de ácido indol 3-acético. El estudio realizado se basa fundamentalmente en los siguientes apartados: - Análisis cualitativo de la microbiotica existente en los tumores. - Análisis de la dinámica de las comunidades epifíticas y endofíticas. En este apartado se estudia la influencia de los factores abióticos sobre las bacterias y la capacidad de éstas para formar núcleos de hielo. - Caracterización fenotípica de la patovariedad que afecta a la retama y estudio de la variabilidad de cepas que afectan a otras plantas. - Análisis de la variabilidad genotípica mediante secuencias repetitivas ERIC, BOX y REP y de ribotipaje.
  • ECOLOGIA Y CARACTERIZACIÓN PIGMENTARIA DE BACTERIAS FOTOSINTETICAS .
    Autor: GICH BATLLE FREDERIC.
    Año: 2000.
    Universidad: GIRONA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD DE GIRONA.
    Resumen: La finalidad principal del presente trabajo es la contribución al conocimiento de la ecología y composición pigmentaria de la bacteria verde del azufre Pelodictyon (Pld) clathratiforme y de la bacteria verde filamentosa Chloronema sp. En primer lugar se estudió la adaptación a baja intensidad de luz de Pld., clathratiforme. Los espectros de emisión de fluorescencia demostraron en esta especie la presencia de BCl c y BCl d en el mismo clorosoma. Pld clathratiforme mostró dos tipos de respuestas al crecimiento a bja intensidad de luz. En primer lugar incrementó selectivamente el contenido específico de BCl d (95%) mientras que el contenido específico de BCl c sólo se incrementó en un 32%. En segundo lugar aumento el tamaño de los clorosomas así como su número. A continuación se realizó un estudio de la dinámica espaciotemporal de Chloronema sp., en lagos de los estados de Michigan y Wisconsin (USA) para determinar sus diferentes morfotipos. Se identificaron cinco morfotipos que se diferenciaban por el diámetro de los filamentos. Posteriormente, el estudio de la diversidad del 16S rRNA de bacterias verdes filamentosas (BVF) en los lagos americanos realizado por DGGE reveló un gran número de secuencias correspondientes a especies aún no descubiertas sugiriendo que la diversidad en los lagos es superior a la inicialmente estimada. Fu posible enriquecer en el laboratorio el morfotipo de diámetro más pequeño a partir de muestras naturales y se caracterizó su composición pigmentaria y la composición de la antena fotosintética. Chloronema sp., contenía BCl c y BCl d, localizándose ambos pigmentos en el mismo clorosoma en forma de una mezcla de homólogos muy heterogénea, donde aparecían moléculas de BCl esterificadas con una gran variedad de alcoholes (geranilgeraniol, hexadecanol, cis-9-octadecanol). El análisis estructural de los complejos antena de Chlorenema mostró la elevada similitud de estos con los de otras especies de BVF. Finalmente la secuenciación del 16S rRNA de Chloronema sp., demostró su afiliación filogenética con el grupo de las bacterias verdes filamentosas. La diversidad de homólogos de BCl presente en las BVF planteó la necesidad de estudiar la diversidad del gen bchG, responsable de la esterificación de los alcoholes de cadena larga al tetrapirrol de la molécula de bacterioclorofilida. Mediante el diseño de cebadores degenerados para el gen bchG se consiguió amplificar su secuencias en diversas especies de BVF y de bacterias verdes del azufre (BVA). La secuenciación y posterior tradución de las secuencias de nucleótidos permitió realizar un análisis de similitud entre las secuencias de proteínas que mostró dos agrupaciones en el dendograma correspondientes a las sBVF y a las BVA.
  • ENFERMEDADES INFECCIOSAS IMPORTADAS POR VIAJEROS INTERCONTINENTALES ESPAÑOLES. EXPERIENCIA DE UNA DÉCADA EN UNA UNIDAD DE MEDICINA TROPICAL .
    Autor: PORTERO NAVIO JOSE LUIS.
    Año: 2000.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: Los viajes internacionales han sido identificados por la Organización Mundial de la Salud como una de las seis principales causas del resurgir de las enfermedades infecciosas en el mundo. En esta conyuntura, tanto en nuestro país como en el resto de los países desarrollados, la patología infecciosa importada desde otras regiones del planeta por todo tipo de viajeros constituye un importante problema de Salud Pública. Este trabajo proporciona una visión holística de los problemas de salud y las características epidemiológicas de los viajeros intercontinentales españoles a través del estudio de 1.399 casos clínicos observados a lo largo de diez años en un centro de referencia nacional para las enfermedades importadas como es la Unidad de Medicina Tropical y Parasitología Clínica del Hospital Ramon y Cajal. Así, se ha objetivado que el perfil del viajero español que consulta a una unidad especializada es el de un varón o una mujer alrededor de los 32 años de edad, que viaja como turista por primera vez a un país en desarrollo (sub()tropical y consulta por iniciativa propias tras enfermar duante el viaje o a su regreso. Los viajeros que enferman incumplen principalmente las actitudes preventivas y la quimioprofilaxis antipalúdica y en menor medida las inmunizaciones frente a las enfermedades relacionadas con los viajes. Las enfermedades infecciosas importadas con mayor frecuencia son las diarreicas seguidas del paludismo, las enfermedades cutáneas tropicales, las filariosis, las hepatitis virales, las rickettisiosis, las arboviriosis, la schistosomosis y el absceso hepático amebiano.
104 tesis en 6 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6
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