NEUROCIENCIAS, 3

Autor: RODRIGUEZ CASTAÑEDA TAMARA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En la presente tesis doctoral se ha investigado la posible presencia de ritmos circadianos en las concentraciones extacelulares de los neurotransmisores dopamina, acido glutamico y GABA, en el estriado y nucleo accumbens utilizando la tecnica de microdialisis. Se ha investigado tambien la influencia del factor ambiental luz (presencia o ausencia) sobre dichos ritmos. Para ello se ha seguido el siguiente protocolo experimental. Diez-diecisiete dias tras la implantación esterotáxica de cánulas-guia, se llevan a cabo experimentos de microdiálisis en ratas Wistar macho despiertas, durante un ciclo oscuridad: luz: oscuridad (6h:12h:12h), un ciclo oscuridad: luz continua (6h:24h) y un ciclo oscuridad: oscuridad continua(6h:24h). El procedimiento de microdiálisis consiste en una perfusión continua de líquido cefalorraquideo sintético, a un flujo de 1.25 ul/min a traves de una sonda de diseño concéntrico con una pequeña membrana dialítica que entra en contacto con el area a perfundir. La membrana es de una longitud de 4 mm en el caso del estriado y de 2 m en el caso del núcleo accumbens. Este procedimiento permite la recogida de aminoácidos y catecolaminas presentes en el líquido extracelular. Las muestras se recogen cada 30 minutos, a lo largo de un periodo de 30 horas. El contenido en aminoácidos y catecolaminas de las muestras se analiza mediante cromatografia liquida de alta resolución (HPLC) de fase reversa acopado a detección fluorométrica y electroquimica respectivamente. Para el analisis estadistico de las variaciones de las concentraciones en el dializado en las transiciones de luz a oscuridad se utiliza un auste a un modelo sinusoidal junto con un analisis de regresion lineal.

Autor: MUÑOZ GARCIA JOSÉ ESTEBAN.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL CLÍNIC DE BARCELONA.

Resumen: HIPOTESIS 1,- Los factores genéticos juegan un papel importante en el desarrollo de la enfermedad de Parkinson. (EP) 2,- Es posible identificar rasgos clínicos diferenciadores entre los casos familiares y los casos esporádicos de EP. OBJETIVOS OBJETIVOS PRINCIPALES 1,- Analizar si los polimorfismos del gen de la alfa1-antiquimotripsina y del gen del receptor D2 de la dopamina podrían inducir una susceptibilidad genética para el desarrollo de la EP. 2,- Investigar la presencia de la mutaciones en el gen de la alfa-sinucleína y del gen parkin en nuestra población de pacientes con EP. OBJETIVOS SECUNDARIOS 1,- Comparar las características clínicas de los casos familiar con los esporádicos de EP para determinar la posible presencia de rasgos clínicos diferenciadores. 2,- Determinar si en los casos de EP familiar existe un fenómeno de anticipación genética. METODOLOGIA Se incluyeron sujetos mayores de edad afectos por la EP y sujetos controles sanos. Se investigó la existencia de familiares afectos y se realizó una evaluación clínica mediante la escala unificada de la EP (UPDRS). Se obtuvo una muestra de sangre para estudio genético tras la firma del consentimiento informado. Mediante amplificación por PCR, digestión enzimática, SSCP y secuenciación se estudiaron diversas regiones correspondientes a los genes de la alfa-1-antiquimotripsina, el receptor D2 de la dopamina, la alfa-sinucleína y el gen parkin. Para el procesamiento de los diferentes datos se utilizó un test de ANOVA y un t-test para las pruebas paramétricas y un test de Chi-cuadrado y una U de Mann-Whitmey para las no paramétricas. APORTACIONES MÁS RELEVANTES 1,-Los polimorfismos de la alfa1-antiqumiotripsina y del gen del receptor D2 de la dopamina no condiciona una susceptibilidad para el desarrollo de EP en nuestra población. 2,- Las mutaciones de la alfa-sinucleína son una causa rara de EP familiar. 3,- Las mutaciones del gen parkin son relativamente frecuentes en casos de EP de inicio precoz (

Autor: MUNERA GALARZA FRANCISCO ALEJANDRO.
Año: 2001.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE.
Centro de realización: UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE.

Resumen: Con el objeto de estudiar la participación del hipocampo en procesos de aprendizaje motor se realizaron experimentos en los cuales se registró la actividad eléctrica poblacional y unitaria de neuronas piramidales identificadas de la región CA1 del hipocampo durante el condicionamiento clásico del parpadeo en el gato. Los principales hallazgos fueron: 1,- Al contrario de lo que sucede durante la prestación emparejada de los estímulos condicionado e incondicionado las células piramidales responden preferentemente al estímulo condicionado. 2,- Esta respuesta diferencial se presenta en relación con la aparición de actividad oscilatoria rápida y de un aumento de la excitabilidad en la de oscilaciones rápidas y el aumento de la excitabilidad en la capa piramidal. 3,- La respuesta preferente ante el estímulo condicionado, la aparición de oscilaciones rápidas y el aumento de la excitabilidad en la capa piramidal depende de mecanismos colinérgicos mediados por receptores muscarínicos. 4,- La respuesta de las células piramidales ante el estímulo condicionado no se correlaciona con las propiedades sensoriales de este estímulo, ni con el paradigma de condicionamiento utilizado. 5,- La actividad de las células no se correlaciona con las características cinéticas de los movimientos palpebrales espontáneos, reflejos o condicionados. 6,- El tamaño de la respuesta de las células piramidales al estímulo condicionado es directamente proporcional al número de presentaciones emparejadas del mismo, lo que indica que señala su valor predictivo. Se concluye que el hipocampo participa en la detención de la relevancia y el valor predictivo de los estímulos sensoriales.

Autor: AGUILAR MENDOZA LUIS ANGEL.
Año: 2001.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE.
Centro de realización: UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE.

Resumen: En este trabajo se estudia, utilizando procedimientos cuantitativos y análisis estadístico aplicados sobre secciones seriadas semifinas, el colículo inferior (CI) de la rata desde un punto de vista inmunocitoquímico, explorando la reactividad de sus neuronas para GABA y de las aposiciones inmunoreeactivas frente a los aminoácidos inhibidores GABA y Glicina. Además, se analiza la presencia de neuropéptidos tanto en el núcleo en su conjunto como en sus neuronas. La aplicación de un nuevo método densitométrico permitió concluir la existencia de dos tipos de neuronas (con altos y bajos valores sistólicos de GABA) diferentes para cada una de las tres subdivisiones del núcleo. Estas neuronas además mostraron diferencias en otros parámetros analizados tales como el perímetro, el número de aposiciones inmunoreactivas para GABA o el número de aposiciones inmunoreactivas para glicina. Se demostró además la existencia de variaciones topográficas graduales (gradientes) en las neuronas con baja reserva citosólica, relacionadas con la organización laminar del núcleo. También, se encontraron diferencias en el número de aposiciones inmunorreactivas y en los valores densitométricos de GABA citosólicos en las neuronas localizadas en las zonas de procesado de las frecuencias mas bajas del núcleo central del colículo inferior. Se determinó la existencia en el CI mediante densitometría de campo amplio, de inmunoreactividad suficiente (en comparación con núcleos controles positivos y negativos analizados en otros estudios por RIA) como para considerar que ACTH y metencefalina 5 deben ser sustancias neuroactivas frente a metencefalina 5, metencefalina 8, neurokinina A y leuencefalina 5.

Autor: JIMÉNEZ GARCÍA DAVID.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO CAJAL C.S.I.C.

Resumen: Existen dos tipos de migración tangencial en el desarrollo de la corteza cerebral de los mamíferos que condiciona el normal desarrollo de la misma: la Migración Radial y la Migración Tangencial. La mayoría de esta células se generan en dos estructuras transitorias del telencéfalo basal: la Eminencia Ganglionar Lateral (EGL) y la Eminencia Ganglionar Medial (EGM). El estudio del desarrollo de estas estructuras revela que es la EGM la primera en aparecer (E12 en la rata) en una zona medial y ventral del telencéfalo basal. La EGL aparece poco después (E12.5 en la rata) y se localiza en la zona más lateral del telecéfalo basal. En su momento de máximo desarrollo, la EGL ocupa el área más lateral del Tellencéfalo Basal y una extensión que abarca desde la zona retro-bulbar (rostralmente) hasta los niveles más caudales de la vesícula telencefálica. La EGM ocupa una extensión menor, ya que su volumen final supone dos tercios del volumen de la EGL apareciendo su extremo frontal 1/3 por detrás de la EGL. Entre ambas eminencias se genera un surco profundo a niveles rostrales y que se suaviza según avanzamos hacia caudal. Es el Surco Inter-Eminencias, que condicionará el establecimiento de la rutas de migración. La generación de estas células es secuencial. Comienza en E12 (en la rata) y se extiende hasta el final del desarrollo embrionario. Las células que cursan por la Preplaca son generadas mayoritariamente entre E12 y E14. Las células que cursan por la Zona Intermedia son generadas entre E13 y el final del periodo gestacional, con un pico de generación entre E15 y E16. Ambas Eminencias Ganglionares son fuentes independientes de células para la corteza cerebral, siendo la aportación de cada una de ellas de proporción semejante. Se han encontrado tres trayectorias de migración tangencial, dos de ellas ascendentes desde el Telencéfalo Basal. Una cursa por la Preplaca y otra por la Zona Intermedia. La tercera tiene su origen en el neuroepitelio cortical y descienden ventralmente hasta el tracto olfatorio lateraol. La morfología de las células de migración tangencial se caracteriza por un soma fusioforme, un proceso delantero de mayor calibre, frecuentemente ramificado y que puede presentar cono de crecimiento, y un proceso trasero más corto y de menor calibre. El proceso delantero indica la dirección de la migración. Se trata de una población de células de naturaleza heterogénea que expresan distintos marcadores de forma secuencial: GABA, desde E14; Calbindina, desde E16; Calretinina, desde E17. La molécula de adhesión celular PSA-NCAM; y el gen Robo2 están implicados en el establecimiento de las rutas de migración. El defecto de expresión de estos factores revela fallos en el normal proceso de migración tangencial, y por tanto afectarán a el normal establecimiento de la corteza cerebral.

Autor: BREVA SANCHIS JOSE M..
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE VALENCIA.

Resumen: El pinealocito es la célula principal de la glándula pineal, secreta melatonina y aparecen los distintos cuerpos sinápticos cintas -esferas - ovoideas - triangulares - rectangulares. Presentan aumento por la noche y sobre todo en la estación de invierno, pues varían según el factor lumínico (luz-oscuridad). Se plantean en este estudio las diferencias morfológico - funcionales de los cuerpos sinápticos en el día/noche y en las cuatro estaciones. Se utilizan 72 conejos macho con las mismas condiciones ambientales, se sacrifican, se realizan técnicas histológicas y posterior observación con ME realizándose estudios estadísticos comparativos para su medición. Los resultados y conclusiones dan una población heterogénea de cuerpos sinápticos con mayor número de cintas seguido de las esferas y de las formas triangulares --ovoideas y rectangulares con predominio durante la noche respecto al día y predominio en invierno y otoño respecto a primavera y verano.

Autor: ANEZARY LYAZED.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FISIOLOGÍA HUMANA.

Resumen: Hemos estudiado la diferenciación postnatal de la célula de Müller de la retina de pollo mediante un método de disgregación celular puesto a punto en el laboratorio en el que se ha realizado este trabajo de tesis doctoral. Nuestros resultados muestran que las prolongaciones de las cepas plexifome externa e interna de esta célula se diferencian postnatalmente, y que la prolongación ventricular o apical se ramifica a lo largo del desarrollo postnatal. Esta ramificación se lleva a cabo sin mediación de conos de crecimiento, muy probablemente inducida por los fotorreceptores adyacentes. Mediante técnicas de inmunoblot, inmuhistoquímica y inmunocitoquímica, también hemos estudiado la expresión y distribución de las principales moléculas del citoesqueleto en la célula de Müller durante el primer mes de vida, con el objeto de estudiar la participación del citoesqueleto en su morfogénesis. Nuestros resultados muestran que no todas las moléculas del citoesqueleto se expresan con la misma intensidad, ni se distribuyen de la misma forma en las células de Müller. Mostramos que hay un patrón de distribución homogéneo y otro heterogéneo para la mayoría de las moléculas, pero que algunas de ellas presentan un patrón homogéneo y otro en gradiente, desde el extremo apical al vítreo, lo cual pone de manifiesto: 1,- Heterogeneidad molecular entre las células de Müller. 2,- Que las moléculas del citoesqueleto se distribuyen diferentemente por los distintos dominios morfológicos y funcionales de la célula, lo cual sugiere participación de estas moléculas en las funciones específicas de cada dominio. También hemos encontrado, que tubulina alfa y beta, actina alfa y beta y desmina, se expresan desde el primer día de vida y se mantienen relativamente constantes a lo largo del desarrollo postnatal, mientras GFPA y vimentina incrementan porgresivamente su expresión durante los primeros estadíos, indicando que estos filamentos intermedios podrían jugar un papel específico en la morfogénesis de la porción ventricular de la célula.

Autor: GALINDO ANAYA M. FRANCISCA.
Año: 2001.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Autor: REYES RODRÍGUEZ RICARDO.
Año: 2001.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En la presente tesis doctoral se realiza un estudio comparado detallado de diferentes aspectos del desarrollo hipofisario en vertebrados. Tomando como modelo especies pertenecientes a dos grupos de vertebrados que presentan patrones de distribución celular diferentes (mamíferos y aves), se realiza un estudio comparado sobre el origen de la adenohipófisis, el desarrollo de los distintos lóbulos y la diferenciación hormonal. Este estudio ha permitido mapear en el esbozo inicial de la adenohipófisis (bolsa de Rathke) diferentes regiones proliferativas, a partir de las cuales se desarrolla cada uno de los lóbulos de la adenohipófisis y se van a diferenciar los distintos tipos de células secretoras. El estudio del desarrollo de los lóbulos así como de los distintos tipos celulares, nos ha permitido explicar las diferencias tanto morfológicas como de distribución celular que se observan en la hipófisis adulta en cada uno de los grupos. Paralelamente se estudia la proliferación celular y su relación con la diferenciación de las células secretoras, lo cual muestra que las células secretoras de la adehohipofisis retienen la capacidad de división incluso despues de diferenciadas, lo cual contribuye a la formación de las distintas poblaciones durante el desarrollo y a su renovación en el estado adulto. Por otro lado se estudia la expresión de distintos factores y su relación con el desarrollo y la diferenciación hormonal. Así, se estudia la expresión de distintas proteínas ligantes de calcio, como indicadores de actividad celular, las cuales parecen estar modulando diferentes acciones dependientes del calcio en distintos tipos celulares, tanto durante el desarrollo como en la edad adulta. Se estudia igualmente la expresión durante el desarrollo de distintos factores hipotalámicos e hipofisarios, conocidos como reguladores de la funcionalidad de las células diferenciadas en la edad adulta, y su relación con la diferenciación hormonal. Finalmente se estudia la expresión de un factor de transcripción, Pitx2 y su relación con la diferenciación hormonal de dos tipos de células secretoras, las células corticotropas y las células somatotropas, para las cuales queda establecido que el comienzo de la síntesis de la hormona está en relación con el cese de la expresión de dicho factor. De los diferentes resultados obtenidos, se concluye que durante el desarrollo hipofisario, la organogénesis así como la diferenciación hormonal, se produce como consecuencia de la acción secuencial y coordinada de múltiples factores de distinta naturaleza.

Autor: CLEMENT SERRANO JOSÉ.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID .
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La matriz extracelular en sistema nervioso central era desconocida hasta hace muy pocos años. No es muy abundante y está poco estudiada. Existen muchos componentes detectados con funciones diversas y heterogéneos desde el punto de vista químico. Dentro de estas sustancias las más abundantes son los glucosaminoglucanos y los proteoglucanos, sobre todo estos últimos. Alrededor de determinadas neuronas y en ciertas zonas aparece alrededor de su superficie una fuerte concentración de componentes de matriz extracelular. Estas estructuras morfológicamente se las conoce hace más de 100 años con el nombre de redes perineuronales. Por su aspecto se las divide en dos tipos: una de tipo clásico, con forma de red y otra, de tipo difuso, donde no se distingue red. El objetivo principal de este trabajo consiste en estudiar la matriz extracelular en los núcleos magnocelulares (supraóptico, praventricular y preóptico) hipotalámicos de rata en relación a varios marcadores de matriz extracelular. Dado su gran número, hemos limitado el estudio según nuestras posibilidades lo permitieron: proteoglucanos condrotitín sulfato, queratán sulfato y tenascina. Se pretendía: A,- Determinar las posibles variaciones en la distribución de componentes de matriz extracelular en los núcleos magnocelulares a lo largo del desarrollo postnatal, madurez y envejecimiento. B,- Delimitar temporalmente la aparición de redes perineuronales de tipo clásico en los núcleos magnocelulares de la zona hipotalámica. C,- Establecer el carácter temporal o permanente de la aparición de redes perineuronales maduras estudiadas. D,- Contribuir si es posible, al conocimiento de la participación de la matriz extracelular hipotalámica en la delimitación de zonas funcionales. E,- Estudiar si los núcleos magnocelulares con fuerte plasticidad neuronal presentan una matriz extracelular diferenciada del resto. F,- Contrastar si neuronas magnocelulares con redes perineuronales obedecen al perfil que parecen presentar la mayoría de estas neuronas en otras zonas del cerebro como en corteza. G,- Contribuir a saber si el envejecimiento de la neurona está asociado a cambios significativos en la matriz extracelular. H,- Comparar algunos marcadores de matriz extracelular en rata adulta para encontrar alguna función asociada con la aparición de redes perineuronales. I,- Determinar el origen celular neuronal o glial, si fuera posible, de los distintos componentes de matriz extracelular. En esta Tesis se ha detectado la existencia de distintos componentes de matriz extracelular en los núcleos supraóptico, paraventricular y magnocelular preóptico en el hipotálamo de la rata, tales como: proteoglucanos condroitín, 0, 4 y 6 sulfato, proteoglucano queratán sulfato, tenascina, y otras sustancias como radicales sulfato, terminales alfa-D-manosil y alfa-D-glucosil, así como terminales N-acetil D-galactosamina. Estos componentes de matriz extracelular aparecen en gran cantidad en los primeros estadios postnatales. Los componentes estudiados de matriz extracelular decrecen drásticamente en los primeros veintiún días postnatales. Los componentes estudiados de matriz extracelular decrecen drásticamente en los primeros veintiún días postnatales en el neuropilo y después más lentamente en el resto de la vida del animal. Sin embargo, se conserva el marcaje observado en las neuronas de los núcleos supraópticos magnocelulares. No existen redes perineuronales de tipo clásico en los núcleos supraóptico y paraventricular, aunque sí de tipo difuso. La aparición de redes perineuronales de tipo clásico ocurre alrededor del día 21 postnatal únicamente en el núcleo magnocelular preóptico, y sólo con algunos componentes de matriz extracelular como con aglutinina de la Wisteria floribunda y proteoglucano 0 y 6 sulfato. Las redes perineuronales, tanto clásicas, como difusas, toman aspectos maduro aproximadamente desde los treinta días postnatales. Se apunta a una participación de la matriza extracelular en la funcionalidad diferenciada de estos núcleos. Las neuronas magnocelulares están rodeadas de gran cantidad de matriz extracelular, más que en el resto del neuropilo, lo que posibilita un alto grado de plasticidad. Existe pérdida de componentes de matriz extracelular en el hipotálamo de la rata con la vejez. Esta pérdida es más acusada en el neuropilo, pero también es muy patente en espacios perineuronales de los núcleos supraóptico, paraventricular y magnocelular preóptico. Se detecta la existencia de plasticidad en componentes de matriz extracelular por activación fisiológica de los núcleos supraóptico y paraventricular en ratas lactantes al aparecer mayor cantidad de tenascina que en situación no lactante. No aparece este fenómeno con el resto de componentes de matriz extracelular estudiados. Aparece colonización incompleta de neuronas con redes perineuronales de tipo clásicas en el núcleo magnocelular preóptico y su contenido positivo en parvalbúmina. No aparece especificidad en la síntesis de proteoglucanos por parte de neuronas o astrocitos. Todos los tipos de proteoglucanos condroitín sulfato estudiados han sido localizados ultraestructuralmente tanto en neuronas como en astrocitos. Si bien aparece más cantidad de proteglucano condroitín 4 sulfato en astrocitos que en neuronas.

Autor: FERNÁNDEZ GARRE PEDRO.
Año: 2001.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Detallado mapa de destino de la placa neural de pollo, en estadio HH3d/4 (Hamburger y Hamilton 1951) obtenido por la realización de numerosos trasplantes homoespecíficos, homotópicos e isocrónicos realizados en embriones de pollo cultivados con la técnica de New, y usando para marcar el tejido del embrión donante, una mezcla de colorantes vitales fluorescentes (CFSE y Rhodamina). Los embriones experimentales, cuando habían alcanzado un desarrollo entre HH9-11 (tubo neural temprano), eran fijados y visualizado su marcaje por inmunodetección con un anticuerpo antifluoresceina. Los embriones eran a continuación seccionados transversalmente en secuencia rostro-caudal, permitiendo la localización de las células marcadas que derivaban del trasplante. La clasificación en conjuntos de trasplantes puramente neurales, puramente no neurales y mixtos, permitió, por comparación entre estos conjuntos, establecer la frontera neural/no neural en estadio HH3d/4. El análisis adicional de todos los datos permitió determinar las subdivisiones antero-posteriores y dorso-ventrales de la placa neural temprana, incluso la localización de la placa del suelo, la vesícula óptica y la placoda óptica prospectivas. Es de destacar en este mapa de destino las reducidas dimensiones de la placa neural en la que aparece una escotadura medio-rostral, que las líneas divisorias, y de las áreas rostro-caudales, no son rectas, sino que presentan una ligera incurvación en sentido rostral y que la placa del suelo se sitúa no solo a nivel rostral del nódulo, como se postulaba hasta ahora, sino también lateral al nódulo y a la línea primitiva rostral. La obtención de estos novedosos datos nos permitió contrastar y discutir esta disposición topológica con algunos dominios de expresión génica, con la intención de verificar las interpretaciones previas respecto al carácter neural o no neural de dichos genes. Estos resultados confirman que el límite prenodal de la placa neural, en la línea media, se sitúa dentro del dominio de expresión del gen Ganf, que es un marcador neural rostral; en el caso de Sox2, Sox3 y Otx-2, catalogados previamente como neurales, se superponen al territorio prospectivo neural, pero se extienden en su expresión variablemente a regiones no neurales circundantes. Adicionalmente hemos realizado un detallado estudio bibliográfico comparando otros dominios de expresión génica publicados con nuestro modelo de placa neural, con la intención de contrastar las interpretaciones previas respecto al carácter neural o no neural del territorio de expresión de dichos genes y sobre todo como introducción a comparaciones experimentales más amplias, que nos gustaría realizar en un futuro próximo.

Autor: MONCADA IBAÑEZ ANA M..
Año: 2000.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DPTO. FARMACOLOGÍA. FACULTAD MEDICINA.

Resumen: En este trabajo experimental evaluamos el efecto de dos inhibidores de las serina/treonina proteínfosfatasas, el ácido okadaico y la cantaridiana, y de un análogo inactivo del ácido okadaico, la norokadaona, en la actividad analgésica de diferentes fármacos que tienen en común el que actúan a través de receptores acoplados a proteínas G i/o dichos fármacos son agonistas de receptores opioides u (morfina, buprenorfina, fentanilo, metadona y levorfanol), k(U-50,488H), de receptores adrenérgicos a2(clonidina) y de receptores GABA B(baclofeno). En primer lugar comprobamos que, tal y como era de esperar, todos los agonistas de receptores acoplados a las proteínas Gi/o utilizados, administratos pro vía subcutánea, producían analgesia cuando sus efectos se evaluaban a lo largo del tiempo en el test de retirada de la cola de un foco calorífico en ratones. En segundo lugar, se pudo comprobar que los efectos analgésicos de los agonistas de receptores opioides u morfina, buprenorfina y metadona; del agonista de receptores adrenérgicos a2 clonidina y del GABA B baclofeno, revertían de una manera dosis-dependiente, con la administración intracerebroventricular de los inhibidores de las fosfatas, el ácido okadaico y la cantaridina; el orden de potencia de estas dos sustancias para inhibir los efectos antinociceptivos in vivo concuerdan con los datos de inhibición de estas enzimas "in vitro" descritos en la literatura. Sin embargo, la 1-norokadaona, un análogo del ácido okadaico desprovisto de capacidad para inhibir las fosfatasas no modificó la actividad antinociceptiva de ninguno de los agonistas de receptores acoplados a proteínas Gi/o estudiados, aunque se utilizó en un rango de dosis suficientemente amplio. Por último, el efecto que produjeron los inhibidores de las enzimas serina/treonina proteínfosfatasas fue diferencial, dado que inhibieron los efectos de los agonistas de receptores acoplados a las proteínas Gi/o anteriormente referidos, pero ni el ácido okadaico, ni la cantaridina, a ninguna de la dosis utilizadas, modificaron la analgesia inducida con fentanilo, ni la del levorfano, ni la del U-50,488H. Estos datos sugieren fuertemente que la activación serina/treonina proteínfosfatasas está implicada diferencialmente en lo efectos analgésicos de diversos agonistas de receptores acoplados a las proteínas Gi/o.

Autor: FERNÁNDEZ-FERNÁNDEZ ANA PATRICIA.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA (UCM).

Resumen: La hipoxia-isquemia perinatal es una de las causas mas comunes de daño cerebral que origina falta de crecimiento, retraso mental y parálisis cerebral.El óxido nítrico tiene un papel doble en los procesos de hipoxia-isquemia cerebral, neuroprotector porque produce una vasodilatación compensadora y neurotóxico porque es mediados de daño tisular por la formación de peroxinitritos que nitranlos residuos tirosina de las proteinas. El óxidonítrico se sintetiza desde la L-Arginina por las enzimas óxido nítrico sintasas de las que se conocen tres isoformas: neuronal (nNOS), inducible (iNOS) y endotelial (eNOS). Para estudiar los efectos de los procesos de hipoxia-isquemia en el desarrollo postnatal de la corteza cerebral de la rata, hemos utilizado un modelo experimental de isquemia intrauterina. Una hembra gestante a término es decapitada y su fetos permanecen durante veinticinco minutos en el interior del úteromaterno a temperatura de 37ºC. Las crias se obtienen por cesárea y se mantienen con una hembra nodriza durante los dias postnatales P0,P1,P2,P3,P4,P7,P10,P15 y P20. El grupo control procede de crias nacidas normalmente y mantenidas con su madre natural durante las edades postnatales citadas anteriormente. Los cerebros objeto de estudio se obtienen mediante fijación transcardiaca con para formaldehido para la determinación inmunocitoquimica y sin fijar para realizar las determinaciones de Western blotting y de actividad de calcio. La expresión de las isoformas nNOS, iNOS y de la nitrotirosina como marcador de nitración de las proteinas por la acción del peroxinitrito, se determinó con el uso de anticuerpos policlonales espcíficos contra nNOS, iNOS y nitrotirosina. La medida de la actividad de calcio se realizó con la determinación de citrulina marcada como compuesto que se produce quimolarmente al óxidonítrico cuando este es sintetizado por las óxido nítrico sintasas. Al comparar las cortezas cerebrales del grupo hipóxico con el control observamos que el primero muestran un incremento en la expresión de nNOS e iNOs entre los estadios psotantales P0 y P5 y posteriormente desciende paulatinamente hasta alcanzar una situación similar a la de la rata adulta en el estadio P20. La formación de nitrotirosina es paralela a la de ambas isoformas de la óxido nírico sintasa. Estos resultados sugieren que la hipoxia en el momento del parto produce un incremento en nNOS, iNOS y nitrorirosina durante el desarrollo postanatal temprano. La exprsión de ambas isoformas es máxima en P5 para ambos grupos lo que indica un posible papel del NO en la laminación cortical y en otros fenómenos que tienen lugar durante la etapa postantal de la rata.

Autor: DUALDE BELTRAN DIEGO.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La presente tesis doctoral es un estudio fotofasico de la glandula pineal ovina. Esta especie es un mamifero superior con grandes semejanzas con la especie humana(ambas tienen una pineal de tipo A y hacen un genero de vida similar). Para dicho estudio se ha extraido la glandula pineal de 60 animales sanos, de varias razas, edades(jovenes de 2,5 a 4 meses y adultos de 2 a 10 años) y sexos (61,6 % machos y 38,4% hembras), sacrificados en matadero durante otoño e invierno de dia (entre las 12 y 17 horas) y de noche (entre las 20 y 1 horas). Se ha realizado estudio a microscopia optica con tecnicas de hematoxilina-eosina, tricromico de Masson y plata metenamina y estudio inmunocitoquimico con la tecnica de estreptoavidina-biotina. Asi mismo se ha realizado un estudio cariometrico de los nucleos de los pinealocitos según el fotoperiodo (dia y noche), y la zona de la glandula (cortical y medular), asi como un estudio a microscopia electronica de transmision para investigar las variaciones fotoperiodicas de los cuerpos sinapticos. El parenquima de la pineal ovina presenta dos zonas claramente diferenciadas, la cortical y la medular, en la que es frecuente la observacion de pequeñas cavidades. Asi mismo es de destacar el hallazgo de cavidades quisticas. La vascularizacion esta mas desarrollada en la zona medular. Mediante inmunocitoquimica se han observado astrocitos astrocitos maduros por toda la glandula, tanto en animales jovenes, como en adultos. En los animales adultos hay mas tendencia a la formacion de quistes, mayor cantidad de tejido conjuntivo y de celulas positivas a vimentina y a GFAP. Los nucleos de los pinealocitos en la especie ovina son de mayor tamaño en el dia que durante la noche (p

Autor: BENITEZ RUIZ ROCIO.
Año: 2000.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGIA.

Resumen: El sistema olfatorio capacita a los individuos para discriminar una gran cantidad de sustancias volátiles a traves de las cuales obtiene información del medio. Además, en mamiferos macrosmáticos, el olfato desempeña un papel muy importante en la actividad reproductora y de conducta. Los olores son captados en el epitelio olfatorio, para pasar despues al bulbo olfatorio donde se produce parte del procesamiento y refinamiento de la informacion. Un componente muy importante de este procesamiento tiene lugar en la sinapsis dendrodendriticas reciprocas que se establecen entre las celulas mitrales y las granulares en la capa plexiforme externa. El siguiente nivel de procesamiento ocurre en la corteza olfatoria primaria a la que llega la informacion olfatoria a traves de las terminales axónicos de las celulas mitrales/penachadas. En esta, y principalmente en la corteza piriforme, presentan un especial interes la sinapsis que estos terminales establecen sobre dendritas de las celulas piramidales a nivel de la capa Ia. Los receptores metabotrópicos del glutamato (ligados a proteinas G) son de gran importancia en la neurotransmision excitatoria que tiene lugar en estos tipos de sinapsis. Hasta la fecha se conocen 8 subtipos diferentes clasificados en tres grupos distintos, los cuales median en la acción del glutamato a nivel presinaptico, postsinaptico y glial. En la presente Tesis Doctoral hemos localizado inmunocitoquimicamente el subtipo mGluR4a a nivel presinaptico en las sinapsis inhibitorias que establece la celula granular sobre la mitral. La localizacion de este tipo de receptores en celulas inhibitorias ha sido descrita para diferentes subtipos de mGluRs, y enconcreto, mGluR2 en las celulas granulares del bulbo olfatorio accesorio (Hayashi y cols., 1993; Kaba y cols., 1994). En la capa la de la corteza piriforme, mGluR4a se encuentra a lo largo de la zona activa de terminales axónicos presinapticos de celulas mitrales/penachadas, disposición que tambien se ha observado en estas mismas sinaptsis para mGluR7a y mGluR8 (Wada y cols.,1998). Estos terminales, de carácter excitatorio, establecen sinapsis asimétricas con perfiles dendríticos, mayoritariamente espinas, de las celulas piramidales localizadas en las capas II y III. A modo comparativo, realizamos el mismo tipo de experimentos con un antisuero que reconoce indistintamente mGluR2 y mGluR3. En la capa Ia de la corteza piriforme, estos receptores ocupan posiciones extrasinapticos en dendritas y en envoltorios gliales, lo cual coincide con lo observado en otras regiones cerebrales (Petralia y cols.,1996). Nuestros resultados añaden un nivel mas de complejidad al conocimiento de la neurotransmisión excitatoria en el sistema olfatorio.

Autor: CALVALCANTI DE GOES NAKANO LINA.
Año: 2000.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En este trabajo se describe la distribución de la subunidad beta 2 del complejo receptor de GABA A en el encéfalo de pollo. Para realizar este trabajo se han utilizado técnicas inmunocitoquímicas utilizando dos anticuerpos diferentes contra la subunidad beta 2 de rata. Uno de ellos Abeta2 es un anticuerpo policlonal obtenido en nuestro laboratorio, mientras que el otro bd17 es un anticuerpo monoclonal comercial. Para comprobar la eficiencia del anticuerpo Abeta2 se realizaron experimentos de western blot e inmunoprecipitación. También se han realizado estudios de autorradiodrafía utilizando el radioligando (3H)muscimol. La discrepancias existentes en la distribución de esta subunidad según los resultados obtenidos en ensayos inmunocitoquímicos y autorradiográficos indican que la presencia de la subunidad b2 e el receptor de GABAA no es suficiente para explicar la fijación de (3H)muscimol en el encéfalo de pollo.

Autor: TOMAZ GIMENES CIELA CARLA.
Año: 2000.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: En este trabajo se describe la distribución de los receptores muscaríncios en el encéfalo de individuos macho y hembra de la especie Melopsittacus undulatus en periodos no reproductor y reproductor, como modelo en la búsqueda del enagrama del aprendizaje y de la memoria del canto, teniendo como objetivo la valoración del posible papel de los receptores muscarínicos, y en particular del subtipo M2, en los núcleos del canto. Para este trabajo se han utilizado técnicas de marcado con radioligando y anticuerpos. Los estudios de autorradiografía cuantitativa se han realizado mediante la fijación del radioligando (3HY)N-metil-escopolamina y el desplazamiento del receptor M2/M4 se ha llevado a cabo con el antagonista AF-DX 116. La autorradiografía funcional de GTP (y-35S) fue estimulada mediante la adición del agonista M2, oxotremorina. También se ha desarrollado un anticuerpo anti-M2 obtenido por inmunización de conejos mediante un péptido sintético de la secuencia de polo correspondiente a los aminoácidos de inmunocitoquímica y su especificidad fue analizada mediante estudios de Western blot. Los resultados obtenidos mostraron la existencia de una regulación estacional de los receptores muscarínicos no ligada a dimorfismo sexual en estructuras no pertenecientes al sistema del canto; la presencia, de dimorfismo sexual en la distribución de receptores muscaríncios asociados a los núcleos del canto, sin embargo no se observaron modulaciones estacionales de estos receptroes asociados al aprendizaje del mismo. Los datos de autorradiografía cuantitativa, autorradiografía funcional e inmunocitoquímica ponen de manifiesto la existencia del subtipo muscarínico M2 en los núcleos del canto, existiendo un patrón de marcado inmunocitoquímico de este sutipo muscarínico en los núcleos del canto. La respuesta del sutipo M2 difiere en los distintos núcleos del canto y está relacionada con dimorfismo sexual y periodos estacionales. Estas modificaciones no se corresponden con las vías del canto, sino que aparecen en núcleos discretos de las mismas. Además, algunos núcleos del canto presentan diferencias en la fijación de GTP /y 35 S) bien asociadas a dimorfismo sexual o bien asociadas a periodos estacionales.

Autor: AYALA JOVE M. VICTORIA.
Año: 2000.
Universidad: LLEIDA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se ha estudiado la posible vinculación de c-Jun con la muerte celular programada de las motoneuronas que tiene lugar de manera natural o inducida en la médula espinal durante el desarrollo del sistema neuromuscular del embrión de pollo. Los niveles de c-Jun y su expresión se han analizado mediante diferentes anticuerpos comerciales dirigidos contra distintos epítopos (c-Jun/mAB, c-Jun/sc45 y AB2) y robosondas de c-Jun. De todos los anticuerpos utilizados, el monoclonal (c-Jun/mAB) fue el más específico para c-Jun ya que identificaba con mucha afinidad una sola proteína de 39kD en la fracción nuclear mientras que otros anticuerpos (c-Jun/sc 45, y AB2) reconocían una gran variedad de proteínas citoplasmáticas y nculeares de diferentes pesos moleculares. Además, estos anticuerpos mostraban muy poca afinidad por c-Jun. El anticuerpo c-Jun/mAB marca con diferente intensidad los núcleos grandes y con cromática laxa de neuronas, probablemente motoneuronas, ubicadas en la LMC de la médula espinal de pollo durante el desarrollo.Además, nos permitió detectar un incremento de la inmunoreactividad nuclear antes de la muerte celular programada natural o inducida de las MNs. Este incremento de c-Jun que tenía lugar antes de la muerte estaba asociado a un incremento de su mRNA, y de su fosforilación a nivel de la serina 63 que podría ser mediada por la JNK-1 ya que, en paralelo, también se observó un incremento de los niveles de la JNK1 en el núcleo de las motoneuronas. Debido a que el incremento de los niveles de c-Jun se produce antes de la PCD, c-Jun podría intervenir en los mecanismos moleculares de la fase de inducción y no en los mecanismos relacionados con la ejecución de la apoptosis en las MNs espinales. Además, también se ha observado una segunda fase de inducción de c-Jun después del período de muerte natural o inducida de las MNs que afectaba a la población de motoneuronas que seguían variables después del proceso de muerte. Esta segunda inducción de c-Jun no comporta su fosforilación a nivel de la serina 63 por la JNK y podría estas asociada al incremento de la actividad neuronal. Por otro lado, los anticuerpos policlonales c-Jun/sc45 y AB2 reconocen antígenos básicamente citoplasmáticos que aparecen durante la fase de ejecucción de apotosis y que no están presentes en las células normales ni en células normales ni en células necróticas. Este patrón de inmunoreactividad citoplasmática se ha observado tanto en las poblaciones celulares neuronales como en las no neuronales que sufren muerte celular programada o inducida, incluyendo: las celulas de Schwann, las células musculares, las células del mesénquima interdigital y las de ls creta y el tubo neural durante los primeros estudios del desarrollo. Nuestros resultados indican que los determinantes antigénicos reconocidos por estos anticuerpos aparecen como consecuencia de la activación de la caspasa-3 durante la fase de ejecución de la apoptosis. Así, los anticuerpos c-Jun/sc45 y AB-2 reconcoen neoepítopos generados por la caspasa-3 en cortes histológicos. Siendo estos anticuerpos más fiables que la técnica del TUNEL para discriminar las células con muerte apoptótica respecto a las células con muerte necrótica en secciones histológicas.

Autor: LOPEZ BENDITO GUILLERMINA.
Año: 2000.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES .
Centro de realización: INSTITUTO DE NEUROCIENCIAS.

Resumen: Este estudio esta dedicado a caracterizar las poblaciones neuronales que durante el desarrollo de la corteza cerebral y del hipocampo expresan receptores para glutamato y GABA, a sistematizar los patrones temporales de expresion, y a determinar su funcionalidad cuando ello ha sido posible. En base a la literatura, se han elegido aquellos receptores cuya expresión durante el desarrollo es intensa, lo que sugiere que puedan ejercer una funcion importante en el correcto desarrollo del SNC. En concreto, se han estudiado los receptores ionotropicos de glutamato tipo AMPA y los receptores de glutamato metabotropicos mGluR1 y mGluR5, asi como el receptor metabotropico GABA-B. Los resultados indican que los receptores estudiados se expresan muy tempranamente y de forma diferencial durante el desarrollo de la corteza cerebral e hipocampo. Los receptores GluR1 y GABA-BR1 se expresan de manera muy intensa en las celulas migratorias GABAérgicas de la zona intermedia. La mayor parte de las celulas que surgen desde la eminencia ganglionar y se marcan con el trazador CMFDA expresan la subunidad GluR1 el receptor AMPA. El receptor GluR1 parece ser un marcador permanente de interneuronas durante el desarrollo de la corteza cerebral. Las subunidades GluR2/3 del receptor AMPA se expresan muy intensamente en toda la corteza cerebral, distinguiendose cambios de expresion con la edad. Los receptores mGluR5 y GABA-BR1 se expresan en las celulas pioneras de la zona marginal. La expresion de los receptores mGluR5 y mGluR1-alfa en las celulas de Cajal-Retzius ocurre de manera secuencial a lo largo del desarrollo. El receptor metabotrópico mGluR1-alfa se expresa casi en el 100% de las celulas de Caja-Retzuius del hipocampo. Los receptores metabotropicos de glutamato y GABA se localiza extrasinapticamente durante todo el desarrollo postnatal sin variacion dependiente del tipo neuronal considerado exactamente como ocurre en el adulto. Finalmente, el rerceptor de GABA-B se expresa en celulas de Cajal-Retzius, pero este receptor no parece ser funcional en la mayoria de los casos.

Autor: MORCUENDE FERNÁNDEZ SARA ROSALIA.
Año: 2000.
Universidad: PABLO DE OLAVIDE.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA (EXPENDIENTE TRASLADADO).

Resumen: El párpado se encarga de proteger al ojo de agresiones, además de mantener su hidratación e intervenir en la expresión emocional del individuo. El cierre del párpado está controlado de una forma muy precisa, para no obstaculizar la visión, por lo que tiene que estar coordinado con el movimiento de los ojos y de la cabeza. El condicionamiento clásico del reflejo palpebral es un excelente modelo para estudiar los cambios que ocurren en el sistema nervioso central de los vertebrados durante la adquisición de una respuesta motora. En el subnúcleo dorsolateral del núcleo facial se localizan las motoneuronas que invervan el músculo que cierrael párpado: el orbicularis oculi. Existe una segregación en la localización de las motoneuronas que inervan las distintas porciones del músculo. Con el marcaje retrógrado con el virus de la rabia, se demostró que las motoneuronas del orbicularis oculi reciben proyecciones de grupos neuronales del bulbo raquídeo, de forma bilateral, de la protuberancia y cerebelo, principalmente de forma homolateral, y del mesencéfalo, diencéfalo y corteza cerebral, preferentemente de forma contralateral. Se utilizó la expresión de la proteina Fos como indicador de cambios en los procesos intracelulares de las neuronas relacionados con el aprendizaje. Tras el condicionamiento clásico del reflejo palpebral, la expresión de la proteína Fos incrementó significativamente en las cortezas parietal, temporal y piriforme, y en el hipocampo, contralaterales. La adquisición de la respuesta condicionada parece ser de naturaleza distribuida, con la participación de numerosas estructurales troncoencefálicas, cerebelosas, y también con la contribución de estructuras corticales y subcorticales.