BACTERIOFAGOS

Autor: POUS RAMOS JOAN.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Autor: GONZALEZ HUICI VICTOR.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS-UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MADRID.

Resumen: 1.El reconocimiento especifico del origen de replicación del DNA de O29 tiene lugar a través de una interacción entre la DNA polimerasa y a proteina terminal paterna. Esta interacción es necesaria para una iniciación y transición a la elongación eficientes. 2. No hay una secuencia nucleotidica especifica que sea reconocida como origen de replicación en O29, lo que confirma que lo que es reconocido como origen de replicación es la TP paterna. 3. El nucleótido 3´-terminal del DNA de O29, aunque no actua como molde para la replicación, es necesario para una iniciación eficiente. Este requerimiento conformaría un mecanismo de seguridad destinado a impedir la fijación de mutaciones terminales en el DNA de O29. 4. La iniciación de la replicación está dirigida no sólo por el segundo nucleotido del molde sino tambien, y a un nivel significativo, por el tercero. Aunque en menor medida que el nucleotido terminal la mutación de uno de ellos afecta a la iniciacion dirigida por el otro. 5. La elongación del complejo de iniciación requiere un sliding-back previo, lo que implica una repitición terminal de dos nucleotidos. Origenes mutados que no permiten el sliding-back presentan una elongacion residual, bien directamente desde la segunda posicion, bien desde la tercera tras un jumping-back a la terminal. 6. La proteina p6 de O29 se une in vivo al DNA de O29, en ambos origenes de replicacion, en la region de control de la transcripcion tardia y en una region del gen 12. Este resultado esta de acuerdo con la hipotesis de que la proteina p6 organiza y empaqueta el genoma virico. 7. La afinidad de la proteina p6 in vivo por los extremos del DNA de O29 es superior a la observada por las dos secuencias internas indicadas en (6). Esto se podria relacionar con el hecho de que la replicación del DNA de O29, para lo cual p6 es imprescindible, comienza por los extremos de su DNA.

Autor: LADERO LOSADA VICTOR MANUEL.
Año: 1999.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: En esta Tesis se ha abordado el estudio de dos regiones del genoma del fago A2, con la intención de diseñar estrategias de defensa frente a la infección de bacterias que se usan como iniciadores industriales. En la primera región genímica, se ha localizado el conmutador de ciclo, que regula la decisión de seguir un desarrollo lítico o lisogénico. En ella se han caracterizado sus principales elementos, dos promotores divergentes, tres operadores y los dos genes que codifican las proteínas efectoras primarias. Después de purificarlas, se han caracterizado las interacciones que ejercen con el segmento de DNA correspondiente al conmutador, lo que nos ha permitido determinar su acción antagonista como reguladoras del ciclo. El gen correspondiente a una de estas proteínas, el represor del ciclo lítico, se ha insertado en el genoma de Lactobacillus casei, permitiendo obtener cepas totalmente resistentes a la infección, lo que las dota de un valor tecnológico añadido. En la segunda de las regiones analizadas se han localizado 17 genes que están implicados en la morfogénesis viral, habiéndose determinado que forman un operón inducible que da lugar a una molécula de RNAm de unas 20 Kb. Asimismo, se han correlacionado varios de estos genes con su función y/o localización en virión y se ha comprobado que algunas de las proteínas codificadas por estos sufren un proceso de maduración por corte proteolítico. Finalmente, se ha determinado que la proteína mayoritaria de la cabeza forma multimeros unidos covalentemente que estabilizan la cápsida del fago.

Autor: ABRIL GALLEGO ANA M..
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGIA MOLECULAR "SEVERO OCHOA".

Resumen: En este trabajo se ha estudiado la autoasociación de la proteina p6 del bateriófago 029 de Bacillus subtilis desde dos puntos de vista, estructural y funcional. A nivel estructural hemos descrito que la proteina p6 en solucion y en el intervalo de concentracion entre 1 y 100 uM, se encuentra en un equilibrio monomero-dimero con una constante de dimerización de 2,0x10 5 M-1. Sin embargo, a concentraciones cercanas a las encontradas in vivo(1 mM), los dímeros pueden autoasociar para formar oligomeros, con una constante de unión de 0,95 x 10 3 M-1. A menor temperatura y a mayor fuerza iónica la proteína p6 autoasocia mejor, lo que indica que las fuerzas predominantes que intervienen en la autoasociación son, probablemente,puentes de hidrogeno y/o fuerzas de van der Waals. Los oligómeros que forma la proteína p6 se observan al microscopio electrónico de transmisión de forma alargada y curva, y sus medidas son comparables a las del DNA en el complejo previamente descrito. Se sugiere que estos agregados sean la unidad minima de estabilización del complejo proteina p6-DNA, y que esten formados por 7 u 8 dimeros de proteina. En ausencia de DNA, la proteina p6 puede formar filamentos a derechos, probablemente mediante un proceso de nucleación a partir de los agregados alargados y curvos. Desde el punto de vista estructural hemos descrito regiones de la proteina implicadas tanto positiva como negativamente en la dimerización. El extremo carboxilo terminal de la proteina dificulta la autoasociación de la proteína p6 in vitro, por lo que se ha propuesto como modulador de este mecanismo. La proteina p6 autoasocia in vivo; parecen existir dos regiones implicadas, el extremo amino y una region central. La caracterización de mutantes puntales en cada una de las regiones implicadas en la autoasociación de la proteina p6 in vivo,ha permitido determinar que la isoleucina en posición 8 es critica para la dimerización de la proteina p6, y, en menor medida, la alanina en posición 44. Este ultimo residuo, además parece implicado en el posicionamiento de las moleculas de p6 al unirse al DNA para formar el complejo nucleoproteíco.

Autor: VEGA JOSE MIGUEL DE.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .

Resumen: En este trabajo se ha podido relacionar la conservación evolutiva de varios residuos de aminoácidos con su importancia funcional como ligandos de DNA de cadena sencilla como sustrato de la actividad exonucleasa 3'-5'. Quizás, más importante aún, ha sido la identificación y caracterización funcional de un residuo de lisina específicamente implicado en la catálisis de la reacción, y que es invariante en las DNA polimerasas de tipo ecuariótico. Gracias al análisis bioquímico de mutantes puntuales en los residuos anteriormente comentados, hemos podido definir con precisión la implicación de éstos en conferir a la DNA polimerasa la óptima capacidad correctora de errores, garantizando la fidelidad de síntesis. Por otra parte, hemos demostrado el papel dual de alguno de los residuos anteriores de la DNA polimerasa de 029, como ligandos del iniciador específico de ésta, la proteína terminal, permitiéndose proponer un modelo de interacción entre ambas proteínas en las primeras etapas de la replicación. Finalmente, hemos demostrado que la DNA polimerasa de 029 transfiere el extremo 3' de la cadena iniciadora de DNA entre sus centros activos de polimerización y exonucleolisis de manera intramolecular, suponiendo una solución óptima para la coordinación necesaria que ha de existir entre ambas actividades cuando se lleva a cabo la replicación del DNA de manera procesiva.

Autor: SATURNO DE LA VILLA JAVIER.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: En esta tesis doctoral he desarrollado y puesto a punto un nuevo método bioquímico que permite calcular los parámetros cinéticos de selección de nucleótidos correctos e incorrectos para DNA polimerasa con actividad exonucleasa 3'-5'. Hemos aplicado este método para calcular la constante de Michaelis de la DNA polimerasa de 029 por el nucleótido correcto e incorrecto, y hemos estudiado los parámetros de discriminación de DNA polimerasas mutantes puntuales en residuos críticos de motivos altamente conservados entre las distintas familias de polimerasas. Mediante estudio de mutagénesis dirigida hemos podido caracterizar la implicación bioquímica del residuo de Lisina del motivo conservado B, absolutamente invariante en polimerasas DNA dependientes, en la unión y estabilización del dNTP en el centro activo de la DNA polimerasa de 029, y también la implicación del primer residuo de ácido aspartico del motivo conservado C en la catálisis y la traslocación de la DNA polimerasa de 029.

Autor: ABAD MOREJON DE GIRON FRANCESC XAVIER.
Año: 1993.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL Y BIOTECNOLOGIA .

Resumen: SE HA EVALUADO LA SUPERVIVENCIA DE DIFERENTES VIRUS ENTERICOS Y EL FAGO B40-8 DE BACTEROIDES FRAGILIS SOBRE DIFERENTES AMBIENTES (AGUAS, SUPERFICIES, MEJILLONES). EN TODOS LOS AMBIENTES, BAJO DIFERENTES TEMPERATURAS Y HUMEDAD RELATIVA, EL VIRUS DE LA HEPATITIS A (HAV) DEMOSTRO UNA ALTA PERSISTENCIA, SUPERIOR EN MUCHOS CASOS A LA PRESENTADA POR ROTAVIRUS HUMANOS (HRV). AMBOS VIRUS PERSISTEN CONCENTRACIONES DE CLORO LIBRE DURANTE 120 MIN, QUE EXCEDEN A LAS PRESENTES EN LA RED DE DISTRIBUCION Y SON CAPACES DE RETENER APRECIABLEMENTE SU INFECTIVIDAD A LOS 30 O 60 DIAS DE SER DESECADOS SOBRE DIFERENTES SUPERFICIES AMBIENTALES. AMBOS VIRUS HAN RESULTADO MUCHO MAS RESISTENTES A LA ACCION DE DIFERENTES DESINFECTANTES, TANTO EN ENSAYOS EN SUSPENSION COMO EN ENSAYOS SOBRE SUPERFICIES, QUE EL VIRUS DE LA POLIOMELITIS (PV). ESTE VIRUS, PV, PRESENTA TASAS DE SUPERVIVENCIA SENSIBLEMENTE MENORES QUE HAV Y HRV, Y SU UTILIDAD COMO VIRUS MODELO EN LAS CONDICIONES EXPERIMENTALES ENSAYADAS ES BASTANTE DISCUTIBLE. POR CONTRA, EL FAGO B40-8 ES UN BUEN INDICADOR DE VIRUS DE TRANSCENDENCIA SANITARIA COMO HAV Y HRV, EN AGUAS, SOBRE SUPERFICIES, EN LA EVALUACION DE LA ACCION DESINFECTANTE DESARROLLADA EN ENSAYOS SOBRE SUPERFICIES, Y EN EL PROCESO DE DEPURACION DE LOS MEJILLONES.

Autor: RIBAS SOLER FERRAN.
Año: 1991.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MICROBIOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO:.

Autor: PRIETO BRAVO JUAN IGNACIO.
Año: 1985.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGIA MOLECULAR. DEPARTAMENTO DE VIROLOGIA Y GENETICA MOLECULAR..

Resumen: EL OBJETIVO DE ESTA TESIS HA SIDO LA REPLICACION DEL DNA DEL BACTERIOFAGO 029 PURIFICANDO Y ESTUDIANDO LAS PROPIEDADES DE LA PROTEINA P3 DEL VIRUS. ESTA PROTEINA UTILIZADA COMO INICIADOR EN LA REPLICACION MEDIANTE LA FORMACION DE UN COMPLEJO COVALENTE CON DAMP INTERACCIONA CON DNA Y CON LA DNA POLIMERASA VIRAL. ASIMISMO SE EMPLEA UNIDA AL DNA VIRAL COMO MOLDE P3-DNA PARA LA REPLICACION PRESENTANDO PROPIEDADES DISTINTAS A LAS DE LA MOLECULA P3 LIBRE TALES COMO LA POSIBILIDAD DE FORMAR DIMEROS. TAMBIEN SE HA ESTUDIADO LA PROTEINA P6 DE 029 ENCONTRANDO UNA AFINIDAD POR EL DNA QUE PODRIA ENROLLAR ESTE ALREDEDOR DE LA PROTEINA Y MODIFICAR ASI EL MOLDE P3-DNA DE 029 ESTIMULANDO SU REPLICACION.

Autor: FRAGOSO JEREZ ROSARIO.
Año: 1976.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA LAGUNA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y GENETICA.

Resumen: SE REALIZA UN ESTUDIO INMUNOLOGICO DEL CICLO DEL DESARROLLO DEL BACTERIOGRAFO PHI-29 QUE PERMITE SEGUIR LA EVOLUCION DE DICHO CICLO Y DISCRIMINAR ENTRE COMPUESTOS BACTERIANOS ESTRUCTURALES DEL VIRUS Y NO ESTRUCTURALES PERO INDUCIDOS POR LA INTERACCION VIRUS-BACTERIA. ESTE ESTUDIO SE REALIZA EMPLEANDO LAS TECNICAS DE INMUNO DIFUSION E INMUNOELECTROFORESIS SIENDO LOS RESULTADOS MAS IMPORTANTES LOS SIGUIENTES: 1) QUE EN LA BACTERIA HUESPED DE 16 ANTIGENOS PRESENTES EN LA FASE RESTACIONARIA SOLO 6 LO ESTAN EN LA LOGARITMICA. 2) QUE LA SINTESIS DE COMPUESTOS PROPIOS DE LA CELULA HUESPED NO ESTA TOTALMENTE INHIBIDA POR LA INFECCION CON PHI-29. 3) LA PARTICULA DE FAGO PHI-29 POSEE COMO MINIMO 5 COMPONENTES INMUNDOGICAMENTE DISTINTOS. 4) SE MUESTRA LA EXISTENCIA DE 7 ANTIGENOS INDUCCIDOS POR LA INTERACCION VIRUS-BACTERIA Y NO PERTENECIENTES A LA PARTICULA DEL BACTERIOGRAFO

Autor: LOREN EGEA JOSE GASPAR.
Año: 1976.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA. - FACULTAD DE BIOLOGIA. - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA -.

Resumen: COMPRENDE EL ESTUDIO DE LA VARIABILIDADFENOTIPICA DE LA PRODUCCION POR SERRATIA MARCESCENS S10 (ENTEROBACTERIACEAE) DEL PIGMENTO DENOMINADO PRODIGIOSINA. SE VERIFICA UN ESTUDIO DEL ANALISIS CLONAL DE LA DESCENDENCIA EN POBLACIONES DERIVADAS DE COLONIAS PIGMENTADAS Y COLONIAS CON PIGMENTACION EN SECTORES Y SU POSIBLE CONCORDANCIA CON MODELOS GENETICOS ESTABLECIDOS EN BACTERIAS. UN SEGUNDO ASPECTO LO CONSTITUYE EL ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE DISTINTOS FACTORES MEDIALES SOBRE LA EXPRESION FENOTIPICA DE LA PIGMENTACION EN ESTA BACTERIA ASI COMO EL EFECTO DE DIVERSAS FUENTES DE NITROGENO. SE COMPRUEBA EL EFECTO INHIBIDOR DE CONCENTRACIONES DE GLUCOSA SUPERIORES A 10 G/1 EN EL MEDIO DE CULTIVO RESPECTO A LA PIGMENTACION DE SERRATIA MARCESCENS S10. SE ESTUDIA LA CINETICA DE LA PRODUCCION DE PRODIGIOSINA RESPECTO AL CONSUMO DE LA GLUCOSA DEL MEDIO. FINALMENTE SE AISLA Y CARACTERIZA UN FAGO ESPECIFICO DE SERRATIA MARCESCENS S10 CON CAPACIDAD DE TRANSDUCCION DEL LOCUS TRP. SE ESTUDIA LA COTRANSDUCCION DE ESTE GENE CON POSIBLES FACTORES GENETICOS RESPONSABLES DE LA PIGMENTACION EN SERRATIA MARCESCENS S10.