RETROVIRUS

Autor: GARCÍA ALBERT LUIS.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD COMPLUTENSE. QUÍMICAS.

Resumen: En este estudio se ha evaluado la prevalencia de subtipos de VIH-1 en España mediante el desarrollo, validación y aplicación de un inmunoensayo enzimático para discriminar entre subtipos B y no-B. Las muestras se han obtenido de pacientes diagnosticados por primera vez en clínicas de medicina interna entre Octubre de 1997 y Octubre de 1998. La discriminación entre subtipos B y no-B se ha realizado mediante la aplicación de un algoritmo a los resultados obtenidos mediante el inmunoensayo enzimáticos con péptidos sintéticos específicos de cada subtipo. Las muestras asignadas como de serotipo no-B se caracterizaron genéticamente en la región gp41 a partir de las muestras de suero originales. En 885 casos fue posible el serotipado de los que 791 muestras se asignaron como serotipo B (89,38%), 70 no reaccionaron frente a ninguno de los péptidos (7,9º1%) y las restantes muestras mostraron otros patrones de reactividad (2,75%). De las 94 muestras asignadas como no-B, 65 se caracterizaron genéticamente en la región gp41 del gen env. 55 se asignaron como subtipo B, 5 como subtipo A, 3 como subtipo C y 2 como subtipo G. La prevalencia de subtipos no-B en España se establece como 1.13% (95% CI, 0,59-2,21). Aunque el subtipo B es predominante en la población española, se han detectado otros subtipos. Aplicando los mismos protocolos y reactivos que los desarrollados para el inmunoensayo enzimático, se ha desarrollado y validado una metodología de microarray para su aplicación al estudio de interacción entre proteínas, y principalmente al estudio de la interacción antígeno-anticuerpo.

Autor: BONACHE DE MARCOS M. CRUZ.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: QUIMICA ORGANICA "MANUEL LORA-TAMAYO".

Resumen: Desde que se indentificó el virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) como agente etiológico del SIDA, la inhibición de la Transcriptasa Inversa (TI) se ha convertido en uno de los objetivos más atractivos para el desarrollo de nuevas terapias para el tratamiento de dicha enfermedad. Se han descrito numerosos inhibidores de la TI, entre ellos los inhibidores específicos no nucleósidos (IENN) que representan un grupo de inhibidores potentes y altamente específicos de la TI de VIH-1 sin afectar a la TI de VIH-2. Dentro de este grupo de inhibidores específicos de la TI de VIH-1, los derivados TSAO representan una familia peculiar y única de compuestos descubierta en nuestro grupo de investigación. Los derivados TSAO se sitúan en la interfaz de la subunidades p66/p51 de la TI, en la proximidad del bolsillo en el que se sitúa los IENN pero no haciendo uso de él, siendo hasta el momento los derivados TSAO los únicos inhibidores específicos de la TI de VIH-1 que se comportan de este modo. Los IENN se caracterizan por su baja toxicidad, su alta hidrofobicidad y su elevada potencia antiviral, lo que les convierte en atractivos agentes anti-SIDA. Sin embargo, inducen el rápido desarrollo de cepas de virus resistentes lo que hace necesario la síntesis de nuevos inhibidores específicos de la replicación del VIH-1 con un perfil de actividad/resistencias distinto al de los compuestos descritos hasta el momento. De este modo se podría aumentar el "armamentarium" de fármacos para el diseño de futuras terapias frente al SIDA. Con el fin de obtener nuevos inhibidores específicos de la replicación del VIH-1 en la presente Tesis Doctoral se han abordado dos aproximaciones diferentes. Por un lado, se han llevado a cabo modificaciones estructurales, en dos nuevas familias de compuestos (ribofuranosil nucleósidos de timina sustituidos en la posición N-3 de la base con un grupo carboximetilo y policiclonucleósidos) descubiertas recientemente en nuestro grupo de trabajo que habían mostrado inhibidor de manera moderada pero significativa la replicación del VIH-1 sin afectar a la replicación del VIH-1. Por otro lado se han preparado nuevos derivados de TSAO-T sustituidos en posición N-3 con grupos funcionales que establezcan interacciones adicionales con los aminoácidos de la interfaz p66/p51 de la TI próximos a la zona de interacción de los derivados TSAO y de este modo dificultar el proceso de dimerización de dicha enzima y disminuir su actividad catalítica.

Autor: CUEVAS GONZÁLEZ-NICOLÁS M. TERESA.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La variabilidad genética del VIH ha permitido su clasificación en tres grupos; M, O y N. Dentro del grupo M se han descrito diferentes subtipos (A, B, C, D, F, G, H, J, K), que por el fenómeno de recombinación han dado lugar a las formas circulantes recombinantes (CRF), de las que hasta hoy se han descrito 15. A excepción de África, donde se han encontrado todos los subtipos descritos, en el resto de países suele predominar un determinado subtipo viral, así en América y Europa occidental el subtipo mayoritario es el B. En Cuba la prevalencia de la infección por VIH es una de las más bajas a nivel mundial, inferior al 0,1%, lo que corresponde a unos 3.200 afectados. Estudios previos habían demostrado que la infección se debía a virus de subtipo B, pero las características especiales de este país, tanto geográficas como políticas, que han permitido la movilidad de personal militar a países de África, hacían sospechar que este panorama hubiera cambiado. En este trabajo se analizan un total de 105 muestras recogidas en el año 1999, cuando se habían descrito 1950 casos de infección por VIH, por lo que el número de muestras suponían aproximadamente un 5% del total de afectados. Hay que destacar que el 93% de los contagios se produjo dentro del país. El estudio filogenético de las cepas virales se realizó mediante la secuenciación de dos segmentos del genoma viral, parcialmente pol (proteasa y parte de la transcriptasa inversa) y env (el segmento C2-V3-C3). Se realizaron los árboles filogenéticos y las cepas recombinantes se estudiaron por bootscanning, utilizando el programa Simplot. Este análisis demostró la presencia de virus de subtipo B en 50 muestras, mientras que las 55 restantes presentaron virus de subtipo no B. Dentro de estos últimos, encontramos un 22% de virus no recombinantes (D, H, J, C, F1 y G) y un 78% de virus recombinantes, representados por 14 formas genéticas, en las que participan tanto subtipos conocidos, como desconocidos, que denominamos U (unknow, unclassifiable), que son las siguientes (po1/env): BD/A, DB/B, DUD/H, D/H, GBGB/G, GD/H, GD/A, U/CRF_01AE, UB/B, U/B, D/A, U/H, UK/A. El análisis de estas secuencias y su comparación con las secuencias de la Base de Datos de los Álomos (http://hiv-wev.lanl.gov), demostró la dualidad en el origen de la infección por VIH en Cuba, por un lado africano y por otro debido a subtipos occidentales. El estudio de las mutaciones de resistencia a antirretrovirales utilizando la Base de Datos de la Universidad de Stanford (http://hivdb.stanfrof.edu), mostró una baja prevalencia en cuanto a mutaciones de resistencia, probablemente debido al bajo nivel de acceso a los fármacos. El número de mutaciones de resistencia fue especialmente bajo frente a inhibidores de la proteasa e inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa, por lo que este tipo de medicamentos se puede considerar una buena opción terapéutica.

Autor: BELLO BENTANCOR GONZALO JOSÉ.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CNM. INSTITUTO DE SALUD CARLOS III.

Autor: GALLEGO DONOSO OSCAR MANUEL.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: HOSPITAL CARLOS III.

Resumen: La finalidad del tratamiento antirretroviral es suprimir la replicación del VIH tanto tiempo como sea posible. Aunque, el fracaso virológico de la terapia se da en una proporción importante de pacientes infectados. Este hecho, se ha atribuido a diversos factores: baja potencia de la combinación de antirretrovirales, mala adherencia al tratamiento, interacciones farmacocinéticas, aumento del número de linfocitos CD4+, lo cual aumenta el número de células dianas en las que el virus puede replicar y la selección de cepas virales con mutaciones de resistencia. Diversos estudios prospectivos han demostrado que la presencia de variantes virales con mutaciones de resistencia antes de iniciar el tratamiento es un factor que predice independientemente la respuesta a la terapia. Los clínicos que han tenido acceso a los resultados genotípicos de los virus del paciente han prescrito regímenes que han controlado la replicaicón viral de una forma más eficaz que aquellos que se basaban en su experiencia. En nuestro estudio, las pruebas de resistencia genotípica han demostrado su utilidad clínica. La presencia de mutaciones de resistencia en los virus que porta un paciente que toma correctamente la medicación determina el cambio de tratamiento tan pronto como se confirme el fracaso virológico. La potenciación de la terapia (con bajas dosis de ritonavir) esta indicada en aquellos pacientes que no porten virus con mutaciones de resistencia. Otra estrategia sería sustituir de forma selectiva aquellos fármacos que se vean afectados por la presencia de mutaciones de resistencia y dejar los demás, ya que el arsenal terapéutico es limitado. Las pruebas genotípicas también ayudan a realizar estudios epidemiológicos que nos informan de la prevalencia de mutaciones de resistencia. Estos estudios nos sirven para diseñar las terapias que van a tener mayor eficacia en el control de la aplicación viral y cuando la prevalencia de una mutación de resistencia que afecta a un fármaco en concreto alcance niveles muy elevados, podría estar indicando evitar el uso de ese antirretroviral.

Autor: GALAN CARRILLO ISABEL.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En el aspecto científico, el trabajo supone un importante avance en el entendimiento de cómo funcionan las nuevas terapias antirretrovirales, produciendo, a nivel virológico, una caída de la carga viral hasta niveles indetectables, y más importante, por primera vez se demuestra que actúan a nivel cualitativo produciendo un cambio en el fenotipo de las cepas de más citopático o SI/X4, a menos citopático o NSI/R5. A nivel inmunológico se observa una recuperación de los linfocitos T, recuperación que en los niños es, principalmente, a través del timo y no de una expansión periférica, jugando un papel importante en la homeostasia del sistema inmune la IL-7. Tanto la recuperación del sistema inmune como los cambios observados a nivel virológico tras el tratamiento antirretroviral se reflejan en un beneficio clínico del niño, no progresando a estadios avanzados de la enfermedad.

Autor: GÓMEZ RODRÍGUEZ CARMEN ELENA.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (CSIC).

Resumen: La pandemia del SIDA se ha convertido en una de las enfermedades infecciosas que mayor impacto ha tenido sobre la salud humana. La OMSestima que existen en la actualidad más de 42 millones de personas infectadas con el virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH), y sólo un 10% de ellos tienen acceso a las terapias antiretrovirales disponibles para contener la infección, lo que hace imperativo el desarrollo de una vacuna profiláctica para prevenir la diseminación de la enfermedad. En este estudio hemos analizado la respuesta inmune antígeno específica potenciada en el modelo murino por diferentes combinaciones de candidatos vacunales que expresan la proteína multiepitópica TAB13. Esta construcción artificial, que contiene la región central del lazo V3 de la gp 120 procedente de 8 aislados diferentes de VIH-1, fue expresada eficientemente por un vector recombinante de ADN (ADN-TAB), y por recombinantes de Vaccinia basados tanto en la cepa parental WR(VV-TAB), como en la cepa atenuada MVA (MVA-TAB). Primeramente comparamos la respuesta inmune celular potenciada en animales inmunizados con una única dosis de MVA-TAB o VV-TAB. Ambos vectores virales fueron capaces de inducir una respuesta de células T CD8+ específica frente a los péptidos de V3 representativos de los aislados LR150, MN, y IIIB, siendo significativamente superior en el grupo inoculado con MVA-TAB. Cuando usamos el vector ADN-TAB seguido o de VV-TAB o de MVA-TAB se produjo un incremento de la respuesta inmune celular y humoral en comparación con el grupo de animales inmunizados con dos dosis de ADN-TAB. La inclusión de un vector de ADN que expresala citoquina IFN-gamma junto con ADN-TAB en la primera dosis, seguido de una dosis de MVA-TAB, potenció los mayores valores de células T CD8+ específicas. La respuesta inmune inducida por todas estas estrategias era predominantemente de tipo Th1. Finalmente, con el objetivo de potenciar la respuesta inmune humoral, ensayamos la combinación de proteína TAB13 purificada seguido de cada uno de los recombinantes. La segunda inmunización con MVA-TAB potenció una mayor respuesta de células T CD8+ específica en comparación con el grupo de animales que recibió VV-TAB o dos dosis de TAB13. Este protocolo potenció los mayores niveles de anticuerpos frente a TAB13 y estimuló ambos tipos de respuesta (Th1 y Th2). Este estudio establece procedimientos de inmunización capacies de activar diferencialmente ambas ramas del sistema inmune contra antígenos de VIH-1 en el modelo murino que pudiera contribuir de forma favorable en el diseño de una vacuna efectiva contra el SIDA.

Autor: IGLESIAS SÁNCHEZ M. JOSÉ.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID .
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: C.N. MICROBIOLOGÍA (INSTITUTO DE SALUD CARLOS III).

Resumen: Este trabajo se ha centrado en el estudio de la influencia que ejerce la recombinación en la evolución de virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), ya que se trata del principal mecanismo de variaciones este virus. En primer lugar se realizaron una serie de infecciones dobles con diferencias combinaciones de dos cepas del VIH-1, en células MT4 (línea linfocítica humana), que se mantuvieron en cultivo durante 22 días. Los ADNs procedentes de varios días a lo largo de los cultivos se analizaron mediante vrios técnicas puestas a punto previamente. Los resultados pusieron de manifiesto la influencia de varios factores como el tiempo, la multiplicidad de infección y la distancia genética sobre la proporción de recombinantes en las progenies virales obtenidas. La utilización de una PCR cuantitativa específica para la determinación de la proporción de recombinantes en los ADNs resultantes de las infecciones dobles, permitió determinar una relación inversamente proporcional entre la distancia genética entre los virus parentales y la proporción de virus recombinantes que origienan. Al mismo tiempo se observó un aumento progresivo de esta proporción a lo largo del tiempo, en dos de estas infecciones. Por otro lado, se llevó a cabo un estudio filogenético sobre una serie de clones biológicos recombinantes aislados a partir de los sobrenadantes de dos días diferentes de un cultivo. Los resultados de este estudio ponen de manifiesto las consecuencias evolutivas que introduce la recombinación en una población dada: selección de la combinación de proteínas más favorables, numerosos eventos de recombinación independientes, y selección positiva de algunos clones. La población viral obtenida tras 22 días de cultivo, se caracterizó por ser más heterogénea y disminuyó la distancia genética del conjunto. Por último, se realizó un estudio sobre la naturaleza diploide o pseudodiploide del VIH, o sobre el origen de algunas placas de infección que aparecieron a lo largo del estudio de recombinación, y que presentaban dos secuencias diferentes para un fragmento del genoma viral.

Autor: ÁLVAREZ CALDERÓN CARMEN PILAR.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En este trabajo se describe el diseño de un sistema de expresión de genes del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) basado en la producción de retrovirus recombinantes de un único ciclo de infección. Los retrovirus recombinantes incorporan la mayor parte de la secuencia gagpol procedente de aislados de pacientes, obtenida a partir de plasma mediante transcripción inversa y reacción en cadena de la polimerasa, y el gen de la luciferasa. Para su producción se ha empleado un nuevo vector de expresión basado en VIH, envolturas heterólogas y sistemas de transfección transitoria optimizados. El sistema ha sido adaptado y aplicado para el estudio de la sensibilidad de cepas de VIH a los fármacos antirretrovirales inhibidores de la proteasa y de la trancriptasa inversa, y podría ser aplicado al estudio de la sensibilidad a los inhibidores de la integrasa. La utilización clínica del ensayo ha sido evaluada con cepas de VIH control y procedentes de pacientes, analizando la sensibilidad frente a compuestos con patrones de mutaciones de resistencia bien definidos, siendo compatibles los resultados con el estudio genotípico y la evolución clínica. Se ha evaluado la capacidad del ensayo para predecir la respuesta al tratamiento con lopinavir, un fármaco de reciente incorporación en la clínica, encontrándose que los pacientes con un incremento de la concentración inhibitoria 50 menor de cuatro veces la de un virus de referencia sensible tienen significativamente más probabilidad de alcanzar carga viral indetectable. El sistema puede ser adaptado para el estudio de la sensibilidad a fármacos antirretrovirales en laboratorios clínicos y para el estudio de otros aspectos de la infección VIH, como el tropismo.

Autor: SUÁREZ LÓPEZ SONIA.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Evaluamos la aparición en Andalucía Oriental de nuevos subtipos Formas Circulantes Recombinantes del VIH-1, así como estudiar las mutaciones de resistencia que desarrolla el virus para proteasa y transcriptasa inversa, correlacionar las mismas con el tipo de fracaso terapéutico que presenta el paciente y ver si existen diferencias entre subtipos B y no-B en la selección de esas mutaciones. Asimismo, evaluamos la utilidad de la realización de un test de resistencia genotípico (secuenciación), para realizar cambio de tratamiento antirretroviral en pacientes con fracaso terapéutico y compararlo con otro grupo en el que el cambio de tratamiento se realiza según criterios de historia de tratamiento antirretroviral. Se obtienen mejores resultados de respuesta virológica en el grupo en que se realiza el test de resistencias. Hemos comparado distintos algoritmos de interpretación de las mutaciones de resistencia para ver qué grado de concordancia presentan entre ellos a la hora de informar las resistencias a los antirretroviales, observando, que esta concordancia es menor para la familia de los inhibidores de la trasncriptasa inversa análogos de nucleósidos (ddC, ddI, d4T y ABC). Comparamos además, la concordancia entre la información genotípica de las resistencias junto con el informe del fenotipo virtual y obtenemos como resultado que disminuye la concordancia para análogos de nucleósidos y las discordancias aparecen sobre todo cuando el genotipo informa más resitencia que el Fenotipo virtual.

Autor: RODRÍGUEZ MARTÍN CARMEN.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA UCM.

Resumen: El objetivo de esta tesis fue estudiar la prevalencia de los distintos marcadores serológicos del virus de la hepatitis B (VHB) y del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en personas que habían tenido exposiciones de riesgo parenteral o sexual, así como la frecuencia de coinfección por ambos virus. Se incluyeron las 29.136 personas que se habían realizado el estudio serológico en el Centro Sanitario Sandoval de Madrid entre 1988 y 2001. Se analizó la tendencia de cada patrón serológico entre 1988 y 2001, y se describió de forma más detallada el periodo 2000-2001. En relación con el VHB se valoraron las siguientes situaciones; vacunado, infección activa, infección pasada y susceptible. Entre las personas con infección activa se evaluó el patrón de infección reciente, la presencia del antígeno e y la infección por el virus delta. Tras realizar estos estudios hemos observado un descenso pronunciado en las prevalencias de infección por el VIH y el VHB en todos los grupos de población durante el periodo de estudio, así como en la prevalencia de coinfección por ambos virus. Los niveles de cobertura de la vacuna frente al VHB han experimentado un ligero aumento, pero todavía siguen siendo bajos. En 2001 el 77% de las personas analizadas permanecían susceptibles a esta infección. Los pacientes infectados por el VIH presentaron con mayor frecuencia el patrón de anticore aislado, así como la presencia del antígeno e, indicativo de replicación del VHB. La infección por el virus delta también ha disminuido durante el periodo de estudio, y se ha mostrado fuertemente asociada al consumo de drogas inyectadas.

Autor: THOMSON OKATSU MIGUEL.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se describen dos nuevas formas recombinantes circulantes (CRFs) del Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipo 1 (VIH-1), la CRF12-BF y la CRF14-BG, identificadas, respectivamente, en Argentina y Galicia, analizadas mediante amplificación del genoma completo. Además de las formas circulantes se analizan los genomas completos de recombinantes únicos relacionados con dichas CRFs y, en Galicia, de virus de subtipo G no recombinantes. En Argentina, se describe por primera vez una alta prevalencia de recombinantes BF. Se analizaron secuencias completas de 8 virus recombinantes, directamente amplificadas de ADN proviral de células mononucleares de sangre periférica. Se observaron 6 ptrones de recombinación diferente. Dos puntos de recombinación eran idénticos en los 8 virus y otros 7 puntos de recombinación consenso, y sólo esos 9, estaban presentes en dos virus, que representan una nueva forma recombinante circulante (CRF12-BF). Los árboles filogenéticos y los análisis de aminoácidos y nucleótidos característicos apoyan el origen común de los recombinantes BF de Argentina y la relación filogenética de los segmentos de subtipo F con virus de subtipo F de Brasil. Las distancias genéticas y las fechas de infección sugieren que la CRF12-BF es la más antigua de las CRFs de VIH-1 de origen no africano. En vista de la no detección de virus de subtipo F no recombinantes en Argentina, se emite la hipótesis de un posible origen brasileño de la CRF12-BF. En Galicia, se describe la circulación de cepas de VIH-1 recombinantes BG y de subtipo G no recombinante en una minoría de usuarios de drogas inyectables. Se analizan secuencias del genoma completo de 9 virus, 7 recombinantes BG y 2 subtipo G no recombinante, amplificadas directamente de ARN del plasma. Seis de los recombinantes BG presentan una estructura en mosaico idéntica, con dos únicos puntos de recombinación que delimitan un segmento de subtipo B que comprende la casi totalidad de la porción externa de la proteína de la envoltura, siendo el resto del genoma de subtipo G. Dichos recombinantes agrupan entre sí de manera consistente en árboles filogenéticos y en análisis de bootscanning, lo que indica que representan una forma recombinante circulante (CRF14-BG), la primera descrit como originaria de Europa occidental. El séptimo recombinante BG presenta los mismos puntos de recombinación que los otros seis, pero contiene además otros dos segmentos de subtipo B en gag y pol, lo que sugiere su origen mediante recombinación secundaria de un virus CRF14-BG con un virus de subtipo B. Los dos virus de subtipo G secuenciados agrupan de forma consistente con los segmentos de subtipo G de los recombinantes BG, lo que sugiere el origen local de dichos recombinantes. Los virus de subtipo G de Galicia agrupan en árboles de filogenéticos de gag y env con virus de subtipo G de Portugal, lo que indica el origen común de dichos virus. La identificación de estas nuevas formas recombinantes circulantes del VIH-1 en Argentina y Galicia puede tener implicaciones importantes para el diseño de vacunas, estrategias terapéuticas y utilización e interpretación de tests empleados en la práctica clínica.

Autor: GIMENO GASCÓN M. ADELINA .
Año: 2002.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD MIGUEL HERNÁNDEZ.

Resumen: OBJETIVOS 1,- Evaluar un método de toma de muestras para la cuantificación del VIH-1 en secreciones vaginales. 2,- Estudio de la relación de la carga viral plasmática del VIH-1 (CVP) con la carga viral vaginal del VIH-1 (CVV) así como de los factores implicados en la CVV. MATERIAL Y MÉTODOS Las muestras se obtuvieron mediante aspiración directa de secreciones genitales del fondo de vagina de mujeres con infección VIH-1. La carga viral de VIH-1 en las secreciones vaginales se realizó con el equipo Cobas Amplicor HIV-1 Monitor (Roche Diagnostics) con algunas modificaciones. La CVV y se cuantificó en forma de ácidos nucleicos totales (ADN+ARN) y en forma de ARN viral del VIH-1 y se expresó en copias/gramo de muestra. Para evaluar el método de toma de muestras se estudiaron 52 mujeres de las que se obtuvieron dos muestras consecutivas de secreciones vaginales en un período de tiempo inferior a 48 horas y en las que se determinó la concentración viral del VIH-1. Una vez evaluado el método de toma de muestras se procedió al estudio de la relación entre la concentración viral de VIH-1 en el tracto genital con respecto al compartimento plasmático así como de los factores asociados a la CVV. Para ello se tomaron 154 muestras de secreciones vaginales procedentes de 61 mujeres y al mismo tiempo se obtuvieron muestras de sangre para la determinación de la CVP y el recuento de linfocitos CD4+ además de muestras cervio-vaginales para el estudiio microbiológico del tracto genital. Además se recogieron variables clínicas, virológicas, inmunológicas, relacionadas con el tratamiento antirretroviral, con el ciclo menstrual y con el tracto genital entre las que se incluyó el recuento de leucocitos PMN en las secreciones vaginales y la presencia de infecciones del tracto genital. En las mujeres con serología de la hepatitis C se determinó la CVP y CVV del virus de la hepatitis C. ANÁLISIS Los resultados de carga viral se expresaron en unidades logarítmicas. Para cuantificar la consistencia o grado de concordancia entre las dos determinaciones de CVV se utilizaron gráficas de Bland y Altman y el coeficiente de correlación intraclase. La relación entre la CVP y la CVV se cuantificó a través del cálculo del coeficiente de correlación de Spearman. Para el estudio de los factores implicados en la concentración viral vaginal se emplearon la T de Student o la U de Mann-Whitney en caso de variables cualitativas y en las variables cualitativas se utilizó la prueba de la Chi cuadrado o la prueba exacta de Fisher. Para cuantificar la magnitud de la asociación entre las variables explicativas o de resultado se utilizó la odds ratio con sus intervalos de confianza al 95%.Dentro de cada grupo se calculó la mediana de carga viral vaginal y percentiles 25-75. Posteriormente se realizó un analisis multivariante de las variables que resultaron significativas en el análisis bivariante (p menor 0.05) o aquellas variables que se consideraron relevantes. El análisis de regresión logística se realizó para la detección de ácidos nucleicos totales de VIH (ADN+ARN) y ARN viral en secreciones vaginales. Los niveles de significación estadística utilizados en los contrastes de hipótesis han sido de p menor 0.05. El análisis de resultados se realizó con el paquete estadístico SPSS PC versión 10.0. RESULTADOS En las gráficas de Bland y Altman se observa que la diferencia máxima entre 2 determinaciones de CVV obtenidas a partir de muestras pareadas siempre es inferior a 0.5 Unidades Logarítmicas, que es la variabilidad considerada aceptable en muestras plasmáticas. El ICC fue de 0.99 en todos los casos, indicando una alta reproducibilidad en los resultados. La CVV y la CVP se correlacionaron de manera positiva y significativa (p menor 0.05) con un coeficiente de correlación de 0.54 para ácidos nucleicos del VIH-1 y de 0.55 para el ARN viral. La CVP se correlacionó de forma significativa con la CVV con coeficientes de correlación de 0.55 cuando se expresaba como ácido nucleicos totales del VIH-1 y de 0.54 cuando se expresaba como ARN viral. La CVP se asoció significativamente a la presencia y concentración del VIH-1 en secreciones vaginales, aunque existían discrepancias y se observó la presencia de ácidos nucleicos del VIH-1 en el tracto genital de mujeres con la CVP indetectable. Los factores asociados a la presencia del VIH-1 en secreciones vaginales fueron la CVP, el recuento de leucocitos PMN en secreciones vaginales y el embarazo. En mujeres con la CVP indetectable el recuento de leucocitos PMN por campo que es un signo de inflamación genital, producida bien por causas inespecíficas o por determinadas infecciones fue el unico factor asociado a la presencia del VIH en el tracto genital. Los factores asociados a concentraciones más elevadas de VIH en el tracto genital fueron la CVP, el embarazo y la presencia de infecciones en el tracto genital femenino, especificamente T.vaginalis y C.trachomatis. En mujeres con la CVP indetectable la leucorrea se asoció a cargas virales más elevadas. CONCLUSIONES 1,- La obtención de muestras del tracto genital femenino mediante aspiración directa permite determinar la CVV-VIH-1 de manera fiable. 2,- Existe una correlación significativa y positiva entre la carga viral plasmática y la carga viral en secreciones vaginales, determinada en forma de ácidos nucleicos totales o determinada en forma de ARN viral. 3,- El número y presencia de leucocitos PMN en secreciones vaginales que indican la existencia de inflamación en el ámbito local, se asocian significativamente a la presencia de VIH-1 en tracto genital femenino. La presencia de infecciones del tracto genital se relaciona significativamente con concentraciones virales más elevadas. 4,- En algunas mujeres con CVP-VOH-1 indetectable es posible detectar la presencia de VIH en secreciones vaginales, actuando en determinadas ocasiones el tracto genital como un reservorio de la infección VIH. 5,- En mujeres con CVP-VIH-1 indetectable, un inicio reciente de TARGA (menos de 3 meses), la presencia de leucorrea e incluso la gestación, pueden actuar como factores asociados a la presencia de VIH-1 en el tracto genital femenino. En mujeres en avanzado estado de gestación debería realizarse una determinación de carga viral vaginal de VIH-1, con el objetivo del plantear una cesárea electiva. 6,- Nuestro método de toma de muestras permite detectar y cuantificar ARN del virus de la hepatitis C en secreciones vaginales, aunque la prevalencia y concentración ha resultado muy baja en la población estudiada. 7,- La toma de muestras vaginales descrita en este estudio, asegura la obtención de una cantidad suficiente de secreciones vaginales para la determinación de la carga viral del VIH. Sin embargo, en el diseño de futuros estudios sería recomendable la obtención de al menos 0.0070 gramos de muestra.

Autor: JIMENEZ FUENTES JOSE LUIS.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.

Resumen: El bloqueo de fosfodiesterasas, en celulas T humanas activadas, por un inhibidor especifico de PDE4, Rolipram (RP), inhibe la producción de TNF-a, IL-5,IL-10 e IL-2 y practicamente no inhibe la proliferación y la producción de IFN-y. En monocitos humanos estimulados con lipopolisacaridos (LPS) o LPS más IFN-y RP tambien inhibió la producción de IL-12, TNF-a y la IL-10. Por otro lado, RP inhibe de forma dosis dependiente la replicacion viral y la depleción de celulas T CD4+ que se asocia con la enfermedad inhibiendo minimamente la proliferación en cultivos primarios de celulas T activadas con anti-CD3 e infectadas por el VIH. RP inhibe la producción de TNF-a e IL-10 en estos cultivos. RP inhibe, en celulas T primarias y Jurkat, la capacidad transcripcional de un plasmido reporter controlado por el LTR del VIH, inducido por PMA+Ionomicina o por TNF-a. La adición de un análogo permeable de cAMP, dibutiril-cAMP, mimetiza los efectos de RP sobre la proliferación celular, sobre la liberación al medio de antigeno p24 y sobre la producción de IL-2,IFN-y y TNF-a pero no sobre la produccion de IL-10 o IL-5 tanto en celulas T como en monocitos. Además, los efectos inhibitorios de RP sobre proliferacion y producion de IFN-y y TNF-a pero no sobre la produccion de IL-10 o de la replicacion viral pueden ser prevenidos por un inhibidor especifico de la proteina quinasa A. RP y pentoxifilina (PTX), un inhibidor de PDE no especifico, disminuye la transcripción de genes reporter bajo el control de los promotores de la IL-2 y TNF-a en transfecciones transitorias de celulas t normales. Tambien, inhiben la transcripción NF-kB y NFAT pero incrementan la activacion del factor AP-1 y del elemento de respuesta a cAMP(CRE), tanto en ensayos de transfeccion transitoria de genes reporter como ensayos de movilidad electroforetica. En contraste, la adicion exogena de dbdAMP estimula CRE y AP-1 e inhibe NF-kB pero afecta minimamente a la transcripcion de NFAT. La adición exogena de TNF-a en presencia de RP, restaura la activación de NF-kB, pero no la replicacion viral. Además RP, inhibe la inducción del mensajero y de la proteina de COX-2 inducida tras la activación con anti-CD3+CD28 o PMA+Ion, asi como la sintesis de PG en celulas T activadas. Este efecto tiene lugar a nivel transcripcional, ya que RP inhibió la inducción del promotor de COX-2. Analisis mutacional reveló que la region de ADN localizada en la posicion -117 y -58 relativa al sitio iniciador de la transcripcion ( que une NFAT) fue requerida para la inhibición por RP, mientras que ni NF-kBni NF-IL6, del promotor, fueron requeridos para la inhibición por RP. La sobreexpresión de calcineurina revirtió parcialmente la inhibición, causada por RP, de la inducción del promotor de COX-2. RP no inhibió la translocacion de NFAT al nucleo pero si inhibió la capacidad de transactivacion de una construcción GAL4 NFAT (1-415). Asi, el bloqueo de nucleo pero si inhibió la capacidad de transactivación de una construcción GAL4 NFAT (1-415). Así, el bloqueo de las PDE4 puede ser beneficioso en la infección por el VIH-1, por la modulacion de la producion de citocinas y la regulacion transcripcional de la replicación del VIH, y sugieren una importante papel de NF-AT en la replicacion del VIH-1 en celulas T primarias, por otro lado, puede afectar a la transcripcion de citocinas por la inhibición de los factores de transcripcion NF-kB y NFAT. Ademas, los efectos de la inhibición de PDE en celulas T y monocitos activados no pueden ser solamente asociada a la habilidad de aumentar la cantidad de cAMP. Nuestros resultados indican que el bloqueo de la PDE4 puede inhibir la inducción de COX-2 en celulas T mediante la afectación de la capacidad transactivadora de NFAT.

Autor: TORÁN GARCÍA JOSÉ LUIS.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA .

Resumen: El análisis de la respuesta inmunológica de individuos infectados por el VIH-1 que toleran la infección sin manifestar procesos de inmunodepresión durante un largo periodo de tiempo, presenta la oportunidad de identificar y caracterizar elementos responsables que puedan contribuir al desarrollo de estrategias eficaces para prevenir y combatir el SIDA. El trabajo describe un amplio panel de anticuerpos IgM e IgG anti-gp120 a partir de la construcción de librerías combinatoriales de Fabs de un pacientes asitomático infectado por VIH-1. Los anticuerpos IgM, presentaron alta polirreactividad y baja afinidad por gp120. Los anticuerpos antigp120 IgG poseen alta afinidad y especifidad antigénica. Los mismos elementos génicos VH Dhy JH son utilizados en las cadenas HC de los Fabs anti-gp120 polirreactivos de baja afinidad y específicos de alta afinidad. Las HC de estos últimos pueden madurar a partir de un anticuerpos polirreactivo, mediante cambios en HCDR3, probablemente efectuados por mutación somática: estos cambios son relevantes tanto como para cambiar la especificidad se traduce en aumento de afinidad y una mejora de la capacidad de neutralizar el HIV-1. En ambos paneles el análisis genético y funcional indica que la cadena ligera no contribuye a la especificidad de los anticuerpos obtenidos. Los anticuerpos IgG, poseen variantes clonales de las cadenas pesadas, las mutaciones somáticas de reemplazo en el HCDR1 de estas variante, contribuyen a la afinidad del anticuerpo y a su capacidad neutralizante. Los anticuerpos IgG son capaces de neutralizar cepas de VIH-1 M,T y dual trópicas in vitro. El Fab S8 neutraliza la infección de la cepa M trópica Bal in vivo, en ratones hu-SCID. Los anticuerpos IgG, reconocen un epítopo altamente conservado en los virus HIV-1. Este epítopo es estructuralmente conformacional e involucra residuos de los dominios externo y zona puente de la gp120. El mecanismo de neutralización de los anticuerpos implica la interacción de la Arg 95 del HCDR3 de con residuos próximos el epítopo gp120. Las características genéticas, funcionales y biológicas, destacan la utilidad de los anticuerpos humanos anti-gp120 obtenidos en el presente proyecto. Su origen humano, la alta afinidad y especificidad, el epítopo gp120 que reconocen así como su elevada capacidad neutralizante tanto in vivo e in vitro, les hace candidatos para ser utilizados como agentes terapéuticos frente a la infección del HIV-1.

Autor: ABAITUA ELUSTONDO FERNANDO.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA (CSIC).

Resumen: Los virus recombinantes basados en el VV, y en concreto los generados a partir de cepas atenuadas como el MVA, presentan una serie de cualidades que los hace enormemente interesantes como vectores de inmunización. Con el fin de incrementar la eficacia de estos recombinantes se están llevando a cabo numerosas aproximaciones que incluyen la expresión de diferentes moléculas estimuladoras del sistema inmune. En este trabajo pretendemos estudiar los efectos de la utilización de citoquinas, en concreto del interferon-gamma (IFN-gamma) y de la interleuquina-12 (IL-12), expresadas por distintos vectores, como potenciadores de la respuesta inmune, y evaluar el efecto de las mismas en el modelo antigénico de la proteína de la envuelta (env) del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH). Con los datos obtenidos en este trabajo de tesis doctoral, las conclusiones a las que se ha llegado son las siguientes: 1,- El IFN-gamma y la Il-12 expresadas por vectores basados en la cepa atenuada MVA, aumenta, dependiente de la dosis, la respuesta inmune celular específica frente al antígeno env del VIH expresado desde el vector MVAENV. 2,- El protocolo de inmunización basado en una primera inoculación con vectores plasmídicos que expresan el antígeno env y el IFN-gamma, seguida de una dosis de recuerdo con MVAENV potencia la respuesta frente a env del VIH, y la modula hacia un subtipo de clase Th1. 3,- La inoculación de IFN-gamma administrado desde un vector de DNA, seguido de una segunda dosis con un vector del virus vaccina que expresa el antígeno env bajo el control de un promotor viral temprano/tardío fuerte, incrementa la expresión del antígeno y como consecuencia, aumenta la respuesta inmune humoral y celular frente al antígeno env del VIH.

Autor: ALBEROLA ENGUIDANOS JUAN ANTONIO.
Año: 2000.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS.

Resumen: OBJETIVOS:Determinar si los pacientes infectados por el VIH-1 generan una rspuesta de anticuerpos contra el CMVH anormal en relación con los individuos inmunocompetentes. 2. Averiguar si los pacientes con SIDA que desarrollan una enfermedad orgánica por el CMVH presentan una respuesta de anticuerpos funcionales anti-CMVH deficiente en comparación con la de quienes teniendo un grado comparable de inmunodepresión no lo hacen.3. Investigar el efecto de las combinaciones terapéuticas antirretrovirales de gran eficacia sobre la respuesta de anticuerpos funcionales anti-CMVH. CONCLUSIONES:1.1 Los individuos infectados por el VIH-1 no presentan déficit, cuantitativo alguno en la respuesta de anticuerpos funcionales frente al CMVH. Todo lo contrario, los niveles séricos de anticuerpos IgG frente al CMVH completo, anticuerpos IgG de los distintos isotipos frente a la glucoproteína B, anticuerpos neutralizantes de virus libre en ausencia del complemento y anticuerpos inhibidores de la transmisión intercelular del virus son mayores en ellos, en particular en los pacientes en el estado del SIDS, que en los individuos inmunocompetentes. 1.2 La contribución relativa de los anticuerpos neutralizantes que impiden la penetración del CMVH en la célula diana de la acción neturalizante global del suero es sustancialmente menor en los pacientes infectados por el VIH-1, particularmente en aquellos en el estado del SIDA, que en los individuos inmunocompetentes. 1.3 Analizando la correlación estadística entre los niveles séricos de las especificidades de anticuerpos estudiadas, tanto en la población inmunocompetente como la infectada por el VIH-1 permite concluir que:1.3.1. Los anticuerpos que reconocen la gB son responsables de gran parte de las actividades neutralizante de virus libre e inhibidora de la expansión intercelular del CMVH de los sueros;no así de la neutralización del CMVH a través de la interferencia con el proceso de fusión de la envoltura viral con la membrana plasmática de la célula diana.1.3.2. La neturalización del CMVH libre y el bloqueo de la expansión intercelular del CMVH son dos actividades funcionales diferentes. 1.3.3. La medición de los niveles séricos de anticuerpos frente al virus completo no permite inferir la actividad funcional de éstos frente al CMVH. 1.4 Los pacientes con SIDA en los que se desarrolla una enfermedad orgánica por el CMVH, y siempre que no haya sido tratada, muestran niveles séricos de anticuerpos anti-gB, neutralizantes e inhibidores de la transmisión intercelular del CMVH, significativamente menores que los hallados en los pacientes con enfermedad orgánica tratada y en los pacientes con SIDA sin enfermedad diseminada por el CMVH. 1.5. Los pacientes con SIDA virémicos y/o antigenémicos, particularmente si desarrollan una enfermedad orgánica por el CMVH, muestran niveles séricos de anticuerpos anti-gB, neutralizantes e inhibidores de la transmisión intercelular del CMVH,significativamente menores que los pacientes en los que las pruebas de la viremia y de la antigenemia son negativas. 1.6 En los pacientes con SIDA que desarrollan una enfermedad por CMVH se observa un descenso significativo de los niveles de anticuerpos anti-gB y neutralizantes que se detecta al tiempo de la declaración sintomática de la enfermedad y la positivación de la antigenemia del CMVH. En cambio, en los pacines con SIDA que no desarrollan una enfermedad invasiva por el CMVH los niveles séricos de los anticuerpos mencionados se mantienen estables, con ligeras fluctuaciones. Se infiere de lo anterior, que existe una correlación inversa entre la carga viral periférica del CMVH y los niveles séricos de anticuerpos funcionales contra el CMVH. Como consecuencia de lo anterior, postulamos que los anticuerpos con actividad funcional contra el CMVH desempeñan un papel relevante en el control inmunitario de la enfermedad diseminada por este virus, limitando la progresión de ésta y quizá en menor medida, contribuyendo a prevenir su desarrollo. 1.7 Los pacientes infectados por el VIH-1, tanto en el estadio asintomático de la infección como en el del SIDA, tratados con combinaciones antirretrovirales de gran eficacia mantienen niveles séricos de anticuerpos anti-gB y neutralizantes relativamente estables.

Autor: VÁZQUEZ JUSTO ENRIQUE.
Año: 2000.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: PSICOLOGÍA .
Centro de realización: FACULTAD DE PSICOLOGÍA. UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE COMPOSTELA.

Resumen: La estimación de la presencia y naturaleza de las alteraciones neuropsicológicas asociadas a la infección por VIH ha generado abundante literatura pero cuyos resultados son variables, especialmente por lo que respecta a las fases iniciales de la infección. Esta falta de acuerdo nos lleva a plantear la importancia de realizar una evaluación adecuada, atendiendo a variables que pueden influir en el rendimiento neuropsicológico de los sujetos, y actuar como factores de riesgo que pueden incrementar la vulnerabilidad neuropsicológica del seropositivo. Hoy en día ya no se duda de la existencia de déficits neuropsicológicos durante las fases avanzadas de la infección, sin embargo, hay descuerdo en relación con la posibilidad de deterioro en las fases más tempranas, antes de que exista una inmunodepresión significativa u otros síntomas médicos. Por lo que respecta a la parevalencia de estas alteraciones, los estudios revelan que las tasas varían según el estadio de la infección en que se encuentre el paciente. La variabilidad de los datos sobre la prevalencia de alteraciones neuropsicológicas en esta población nos lleva a plantear que su presencia pudiera estar modulada por la coexistencia de otros factores distintos del propio VIH. Es por ello que para poder valorar adecuadamente sus consecuencias neuropsicológicas, es importante determinar la influencia de otras variables, relacionadas o no con la infección, que también están asociadas con el desarrollo de alteraciones neuropsicológicas y que pueden convertir al seropositivo en un sujeto más vulnerable neuropsicológicamente. En esta línea de investigación, de intentar identificar factores contaminantes y valorar su efecto, está enmarcado este trabajo. En él nos plantemaos valorar la influencia de determinadas variables a las que se ha dedicado abundante literatura, así como de otras apenas estudiadas, pero cuya relevancia para comprender las implicaciones neudropsicológicas de esta infección se ha puesto de manifiesto. Para ello hemos agrupado los distintos factores, en aquellos no relacionados con la infección, como la fase, el nivel de linfocitos cd4 y la carga viral. Los objetivos que se pretenden alcanzar en esta investigación son los siguientes: 1,- Valorar el rendimiento neuropsicológico de drogodependientes seropositivos al VIH, mediante la aplicación de una bateria de tests neuropsicológicos. 2,- Comprobar si distintos factores contamianantes influyen en el rendimiento neuropsicológico de los sujetos. Este objetivo general se concreta en tres objetivos específicos: A,- Determinar la influencia de variables no relacionadas con la infección por VIH, estudiando la influencia del estado de ánimo, la reserva cognitiva, y la situación actual con respecto al consumo de drogas. B,- Determinar la influencia de variables relacionadas con la infección por VIH, estudiando la influencia del estado de ánimo, la reserva cognitiva, y la situación actual con respecto al consumo de drogas. C,- Determinar si existen interacciones en testos factores contaminantes en el rendimiento neuropsicológico de los sujetos. Para llevar a cabo esta investigación se utilizó una muestra compuesta por 160 varones. Estos sujetos se distribuyen en tres grupos: un grupo formado por drogodependientes con infección por VIH; un segundo grupo formado por drogodependientes seronegativos al VIH; y un grupo formado por sujetos seronegativos sin historia de drogodependencia.La exploración de cada sujeto comprendía una entrevista semiestructurada sobre aspectos sociodemográficos, clínicos y toxicológicos, una valoración del estado de ánimo, y una evaluación neuropsicológica con una batería de tests diseñada para este estudio. La discusión de los resultados obtenidos en esta investigación nos permiten extraer las siguientes conclusiones: 1,- El rendimiento neuropsicológico de drogodependientes seropositivos al VIH se caracteriza por alteraciones en atención; memoria; fluidez verbal; formación de conceptos y razonamientos; habilidades visuconstructivas; destreza manual y velocidad motora, velocidad perceptivo-motora y funciones frontales. El perfil que se presentan es de naturaleza cualitativamente semejante a la del complejo cognitivo motor menor asociado al VIH, y no es atribuible a la historia de abuso de drogas. 2,- Distintos factores co naminantes influyen en el rendimiento neuropsicológico de drogodependientes seropositivos. La sintomatología depresiva, los estadios avanzados de la infección, el deterioro del sistema inmunitario, y los niveles elevados de carga viral son factores de riesgo de sufrir alteraciones neuropsicológicas. La resera cognitiva y la abstinencia del consumo de drogas son factores protectores entre la presencia de alteraciones neuropsicológicas en drogodependientes seropositivos al VIH. La interacción entre los distintos factores contaminantes influye en el rendimiento neuropsicológico de drogodependientes seropositivos,poniendo de manifiesto la naturaleza multifactorial de las alteraciones neuropsicológicas asociadas a la infección por VIH.

Autor: SÁNCHEZ MERINO VÍCTOR MANUEL.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: INSTITUTO DE SALUD CARLOS III.

Resumen: Ésta tesis se ha encaminado al estudio de la importancia de los genes accesorios y su implicación en la biología del VIH-1. Para ello se han realizado dos tipois de estudios: A,- Análisis filogenético de aislados naturales, cuya principal característica era la imposibilidad de ser cocultivados, y un posterior estudio de posibles alteraciones en el gen accesorio NEF que pudiesen estar influyendo en este fenotipo. B,- Estudio y caracterización del establecimiento de infecciones persistentes con un mismo aislado en tres líneas celulares diferentes y participación de los genes accesorios en este proceso. Para ello se han analizado los genomas completos de los provirus obtenidos de las células persistentemente infectadas. Se han observado numerosas alteraciones en el gen accesorio NEF en el caso de los virus no cocultivables, estableciéndose una correlación entre alterciones en este gen y el fenotipo de cocultivo negativo. Del mismo modo se ha encontrado una relación entre alteraciones en los genes accesorios VPR, VPU y VIF y el fenotipo de virus persistente.

Autor: CABRERA NAVARRO CECILIA.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Recientes progresos en el conocimiento de la patogénesis de la enfermedad causada por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1) junto con el desarrollo de potentes agentes antiretrovirales han resultado en una abundancia de opciones de tratamiento apra los individuos infectados por este virus, y entre estos progresos, los avances en el conocimiento del proceso por el cual el VIH-1 entra en la célula huésped, han señalado este punto como una dian para el desarrollo de nuevas drogas que añadir al actual armamento terapéutico. Este trabajo esta centrado en el proceso de entrada viral, en su posible inhibición y en las consecuencias del bloqueo de alguno de sus pasos. AR177 (Zintervir) y las albúminas cargadas negativamente son dos clases de compuestos de naturaleza aniónica nosostros mostramos evidencias directas de que ambos compuestos interaccionan con la molécula gp 120. Esto nos permite sugerir un modo de acción común para ambas clases de compuestos: la unión de dichas moléculas a la glucoproteína gp120, acción que previene una asociación estable entre el VIH-1 y las células CD4+. Los bicilanes y los aminoglicosidos conjugados a L-argininas son dos clases de agentes antivirales catiónicos. La fuerte interacción con CXCR4 aquí mostada, indica que el mecanismo de acción de ambas clases de compuestos es el bloqueo del correceptor CXCR4. La naturaleza catiónica de estos compuestos podría conducir a interacciones electrostática con los residuos caragados negativamente de CXCR4, impidiendo de este modo la interacción de la glucoproteína de la envuelta de VIH con el correceptor CXCR4. Frente al bloqueo del receptor de quimiocinas CXCR4, en un modelo experimental que trataría de reflejar lo que ocurriría in vivo, el VIH-1 evoluciona de dos formas muy diferentes. Con concentraciones subóptimas de antagonsita, y sin la posibilidad de utilizar otro correceptor, el virus adquiere un gran número de mutaciones en la glucoproteían de la envuelta que le permite crecer sin cambiar de correceptor. Con concentraciones óptimas del antagonsita, y en presencia del receptro CCR5, se da un cambio de fenotipo de tipo X4 a fenotipo de tipo R5 y se prviene el cambio de fenotipo de tipo R5 a tipo X4, sugiriendo que el tratamiento de pacientes VIH-positivos con un antagonista de CXCR4 podría revertir el fenotipo viral de tipo X4 a un fenotipo menos patogénico de tipo R5 prolongándose así la fase asintomática de la enfermedad. En conjunto, nuestros resultados muestran que el bloqueo del proceso de entrada del virus de la inmunodeficiencia humana nos puede ofrecer una nueva oferta de fármacos antivirales que no sólo mejorarían las terapias anti-VIH actualmente existentes, sino que nos pueden ayudar a aumentar el conocimiento del proceso de infección del VIH, además de ayudarnos a diseñar nuevas drogas quizá capaces de llegar a la erradicación de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana.