ABSORCION DE LOS FARMACOS

Autor: MÁS SERRANO PATRICIO.
Año: 2004.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El acamprosato, comercializado en varios países de la Unión Europea y autorizado recientemente en EE.UU., está indicado en la terapia de mantenimiento de la abstinencia en pacientes dependientes al alcohol sometidos a tratamiento deshabituador. Este fármaco presenta como principal problema su baja biodisponibilidad oral en humanos (aproximadamente un 10%) cuando se administra en forma de comprimidos con recubrimiento gastrorresistente. A pesar de los numerosos estudios realizados, en el momento de la realización de la presente memoria se desconocían aspectos relevantes de su farmacocinética, como son los mecanismos y rutas utilizados para su absorción intestinal. Por este motivo y con la finalidad de identificar posibles causas de su escasa biodisponibilidad oral, el principal objetivo de este proyecto ha sido el estudio del mecanismo de absorción intestinal del acamprosato en el tramo medio del intestino delgado de rata, utilizando para ello una técnica in vitro. Además, se ha estudiado si la influencia de otros factores como son el alcoholismo, el tipo de dieta o la existencia de ciertos aminoácidos pueden influir en su absorción. Los estudios realizados indican que el acamprosato se absorbe mayoritariamente mediante difusión pasiva en el ámbito de concentraciones utilizadas. Por tanto, la absorción del fármaco a nivel intestinal se podría realizar, bien por difusión a través de la membrana lipídica (vía transcelular) o bien a través de las uniones estrechas existentes entre los enterocitos (vía paracelular). Además, en nuestras condiciones de experimentación, factores como el alcoholismo y el tipo de dieta (líquida vs. sólida) no afectan desde el punto de vista práctico a la absorción del fármaco. Por último, los estudios de inhibición de la velocidad de absorción realizados con determinados aminoácidos inhibidores (GABA y taurina) indican que, a la concentración de 40 mM, estos compuestos son capaces de disminuir el flujo medio de acamprosato a la concentración de 100 µM, sugiriendo que el transportador de los iminoácidos podría estar implicado en el transporte especializado del fármaco. Sin embargo, su participación en el proceso global de absorción sería cuantitativamente poco importante y predominante solo a bajas concentraciones del fármaco (=100 µM).

Autor: CLARI PONS M. ÁNGELES.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD FARMACIA.

Resumen: La trombosis venosa profunda (TVP) y el embolismo pulmonar (EP), son entidades clínicas de consecuencias muy serias, que responden a un proceso patológico único, denominado tromboembolismo venoso (TEV). Clásicamente, el tratamiento farmacológico del TVP ha sido realizado con heparina no fraccionada (HNF) (PM. 5 kD y 30 kD. Desde hace una década se han desarrollado diferentes métodos de fraccionamiento de la heparina a fin de obtener HBPM (3-9 kD) que se emplea en la prevención de la trombosis tras el infarto de miocardio y la prevención de tromboembolismo post operatorio.La administración transdérmica de fármacos presenta ciertas ventajas frente a las vías convencionales, entre las que destacan la eliminación del efecto de primer paso intestinal y hepático la eliminación de la variabilidad en la absorción y metabolismo inherente a los tratamientos por vía oral; la posibilidad de administrar a velocidad constante medicamentos de forma no invasiva, eliminando los riesgos e inconvenientes asociados a la administración parenteral. Asimismo, en tratamientos crónicos, representa una modalidad de administración fácil y cómoda para el paciente. Sin embargo, no se puede considerar que ésta sea una vía de administración generalizable a todos los fármacos. Ello es debido a que deben reunir una serie de características, como la necesidad de poseer una elevada actividad intrínseca y además, que su paso a través de la piel transcurra de modo favorable para que las cantidades que penetran, proporcionen concentraciones plasmáticas eficaces. Se ha seleccionado la Bemiparina, PM medio=3.6 kD, por ser la mejor candidata, de entre todas las HBPM existentes,a un diseño de estas características. Es decir, a priori, se piensa que el estudio pueda proporcionar resultados útiles para la prevención de la enfermedad tromboembólica, con todas las ventajas que la nueva vía de administración aportaría en este campo terapéutico.Con estas premisas iniciales se plantean los siguientes objetivos:- Determinación de la capacidad de penetración cutánea in vitro e in vivo de Bemiparina, - Valoración de las muestras a través del método que figura en la Farmacopea Española 2002 y búsqueda de dos métodos alternativos. La metodología a emplear para la consecución de los objetivos señalados será la siguiente: - "Ensayos in vitro": se empleará como sustrato biológico piel humana. Los ensayos se realizan en células de difusión estandarizadas, de dos compartimentos, dado y receptor, entre los cuales se dispone la membrana en posición horizontal. En el dador se dispone la formulación de Bemiparina a analizar. En el compartimento receptor se dispone una solución al 0.9% de NaCl. A tiempos establecidos se toman muestras del compartimento receptor, y al finalizar el ensayo se retiran las formulaciones del compartimento dador, así como la membrana, para la valoración posterior del contenido en Bemiparina en todas ellas. - Para llevar a cabo los estudios "in vivo" se aplicará una capa de aproximadamente 1 mm de espesor de la formulación seleccionada en la fase 1 en la zona dorsal de animales determinando la superficie (rata Wistar macho de 250-300 g de peso, de la colonia de la Facultad de Farmacia). A los animales se les implanta una cánula de silicona en la vena yugular, que permite la toma de muestras de sangre. Se toma una muestra de sangre antes de la aplicación del gel, muestra blanco o basal. Tras la aplicación del gel se extraerá otra muestra de sangre a uno de los tiempos seleccionados por azar de entre los siguientes: inmediatamente después de la desaparición visual del gel aplicado, 4 y 8. La valoración de las muestras se realizará mediante la determinación de la actividad anti-Xa (método que figura en la Farmacopea Española 2002).Como alternativa se estudia la posibilidad de dos métodos de CLAE:1. Determinación de Bemiparina sódica por detección UV2. Determinación de Bemiparina sódica por fluorescencia, a través del disacárido producido por una digestión enzimática.

Autor: CAMPOS MORENO EDUARDO MARTIN.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En la presente Memoria se ha abordado el estudio de la farmacocinética de la amiodarona y la caracterización del proceso de disposición, con el fin de poner de manifiesto la pérdida de linealidad, cuando se administra el fármaco a distintas dosis crecientes y mediante distintos métodos de administración intravenosa. Se han realizado ensayos "in vivo" utilizando como modelo animal la rata. El diseño experimental ha sido totalmente aleatorio, administrando mediante bolus IV dosis de 5, 12,5, 25 y 50 mg de amiodarona. Del mismo modo dosis de 55, 60 y 50 mg se han administrado mediante perfusión o combinación de bolus y perfusión IV. Para facilitar la toma de muestras plasmáticas se ha recurrido a una técnica quirúrgica consistente en la implantación de un catéter de forma permanente en la vena yugular y de dos catéteres en el caso de administración del fármaco mediante perfusión IV. Durante la realización del ensayo los animales tienen libre acceso al alimento y agua. Para la valoración de la amiodarona en las muestras plasmáticas se ha utilizado la cromatografía líquida de alta eficacia. Esta técnica requiere la extracción previa del fármaco utilizando una secuencia de extracción mediante un disolvente orgánico. Este método de valoración ha sido convenientemente validado en cuanto a exactitud y precisión. A continuación, se ha procedido al ajuste al modelo bicompartimental de los valores experimentales obtenidos, mediante dos métodos de estimación de dos etapas, método de mínimos cuadrados ponderados (WINNONLIN) y máxima verosimilitud (ADAPTII). También se ha realizado un tratamiento no compartimental, mediante el método trapezoidal. En todos los casos se han determinado los parámetros farmacocinéticos correspondientes y se han comparado estadísticamente entre ellos para poner de manifiesto posibles diferencias significativas. Del mismo modo, se ha abordado comparaciones de los parámetros obtenidos en función del método de estimación tanto a nivel de grupo como global. Debido a que la información facilitada por los métodos de ajustadodo farmacocinético individual no es concluyente, se ha decidido abordar un análisis poblacional de los datos. Para ello, se ha efectuado una labor prospectiva de modelado que ha culminado con el modelo que mejor define la cinética de disposición de la amiodarona, un modelo bicompartimental no lineal con unión dinámica a proteínas plasmáticas y unión a depósitos tisulares (BICUDPPYT). Por último se han obtenido los parámetros farmacocinéticos correspondientes a los grupos estudiados y se han comparado estadísticamente.

Autor: PONS MATEU JOSE ARTURO.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El trabajo realizado en esta memoria forma parte de una línea de investigación de nuestro departamento cuya finalidad es la realización de estudios farmacocinéticos en animales de experimentación que faciliten la interpretación de las características cinéticas en humanos. En concreto la presente memoria se centra en el estudio de la farmacocinética del antineoplásico ifosfamida en la rata.La ifosfamida es un agente alquilante perteneciente al grupo de las mostazas nitrogenadas. La actividad de la ifosfamida es conocida desde la década de 1970-80, pero no se utilizó debido a que llevaba asociados importantes efectos adversos, que condicionaron dosis tan bajas que hicieron ineficaces los tratamientos.En la actualidad, la ifosfamida se emplea sola, o más comúnmente asociada a otros antineoplásicos, en el tratamiento de diversos tumores sólidos como por ejemplo sarcoma de tejidos blandos y duros, también tumores pulmonares, cáncer de ovario y de testículo, cáncer de vejiga, cáncer cervical, cáncer de mama, linfomas y cánceres pediátricos.La ifosfamida ha sido objeto de un reducido número de estudios farmacocinéticos en humanos, ya que la mayoría de estudios se centran en la repercusión de la forma de administración sobre la toxicidad y la eficacia terapéutica.Los escasos estudios farmacocinéticos son en ocasiones contradictorios. En general se observa una gran variabilidad interindividual en los parámetros farmacocinéticos y una saturación de la eliminación del fármaco a dosis elevadas, disminuyendo su aclaramiento plasmático. Por otra parte, en algunos estudios, se ha detectado una relación entre los parámetros farmacocinéticos y las características antropométricas de los pacientes, mientras que en otros estudios no se han detectado dichas correlaciones.Todo lo comentado anteriormente nos llevó a plantearnos los objetivos siguientes:1- Caracterizar la farmacocinética de la ifosfamida en la rata mediante su administración intravenosa a distintas dosis.2- Estudiar la influencia de la edad en la farmacocinética de la ifosfamida.3- Caracterizar la distribución de la ifosfamida en distintos tejidos de la rata.4- Estudiar la unión de la ifosfamida a las proteínas plasmáticas de la rata y su distribución eritrocitaria.Con el fin de abordar estos objetivos se diseñaron los siguientes ensayos:1- Estudio de la farmacocinética intravenosa de la ifosfamida en la rata.2- estudio de la influencia de la edad en la farmacocinética de la ifosfamida.3- estudio de la distribución de la ifosfamida a diferentes tejidos y órganos.4- Estudio in vitro de la unión de la ifosfamida a las proteínas plasmáticas.5- Estudio in vitro de la unión de la ifosfamida a los hematíes. Para la realización del trabajo, ha sido necesario el uso de diversas técnicas quirúrgicas, puestas a punto por nuestro grupo investigador, las cuales permiten tanto la administración intravenosa de los preparados como el muestreo sanguíneo en los animales conscientes, en concreto se ha utilizado la canulación de la vena yugular y de la arteria carótida. Asimismo se ha puesto a punto un método analítico basado en la cromatografía líquido-líquido de alta eficacia con detección espectrofotométrica de UV.Finalmente, del trabajo realizado se pueden extraer como más relevantes las siguientes conclusiones:1ª. El método analítico utilizado para la cuantificación de la ifosfamida en las muestras plasmáticas y tisulares presenta características adecuadas de linealidad, exactitud y reproducibilidad.2ª. La ifosfamida presenta un comportamiento farmacocinético no lineal en la rata, que se traduce en una disminución del aclaramiento plasmático y del volumen de distribución cuando se incrementa la dosis. Este efecto se manifiesta a partir de la dosis de 40 mg, que equivale a 129 mg/Kg, siendo esta dosis del mismo orden que la utilizadas habitualmente en humanos.3ª. La ifosfamida se distribuye aparentemente al agua corporal total y, a juzgar por los valores de Kp, tiende a acumularse en los distintos tejidos estudiados.4ª. Existen diferencias farmacocinéticas en función de la edad de los animales, que se concretan en una disminución del aclaramiento plasmático y del volumen de distribución con el aumento de la edad.5ª. La ifosfamida se une en una pequeña proporción a las proteínas plasmáticas, dando lugar a una fracción unida de, aproximadamente, un 22 %. Además, dicha unión no presenta saturación en el intervalo de concentraciones ensayadas. Finalmente, la ifosfamida se distribuye prácticamente de modo homogéneo en plasma y hematíes, alcanzándose concentraciones eritrocitarias que representan el 90 % de las concentraciones plasmáticas.

Autor: ZORNOZA SABINA TEODORO.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El acamprosato o bis-acetilhomoaurinato cálcico es un fármaco que se emplea en la terapia de mantenimiento de la abstinencia en pacientes dependientes del alcohol. Sin embargo, uno de los problemas más importantes en su manejo clínico derivada de su reducida biodisponibilidad oral en magnitud (BD), que se sitúa en torno a un 11% en humanos. Por ello, mediante el empleo de diversos y sencillos diseños experimentales se ha abordado el estudio de dos de los procesos menos conocidos de su farmacocinética, la absorción y la eliminación. El estudio de la linealidad farmacocinética del acamprosato se ha realizado tras la administración intravenosa rápida de 2.8, 11 ó 22 mg del fármaco, así como tras su perfusión endovenosa a 2.6, 132.5 ó 530.0 ug/min. La comparación de los principales parámetros farmacocinéticos obtenidos, no reveló ninguna diferencia estadísticamente significativa entre ellos. Por tanto, a tenor de los resultados obtenidos parece ser que el acamprosato presenta una disposición lineal en el ámbito de concentraciones estudiadas, tanto en condiciones de estado estacionario como tras su administración intravenosa rápida. En lo relativo a su eliminación, nuestros resultados indican claramente que el acamprosato se elimina inalterado por vía renal casi en exclusividad (U48 o=95.0 +- 13.9%). Los elevados valores de aclaramiento total estimados tras la administración intravenosa rápida de diferentes dosis de acamprosato, así como los de aclaramiento total y renal calculados en estado estacionario, sugieren que la filtración glomerular, que podría ser responsable de los elevados valores de aclaramiento del fármaco, se administró conjuntamente al acamprostao con probenecid, conocido inhibidor de la secreción tubular activa. Los niveles plasmáticos promedios del fármaco en los animales tratados con probenecid (10 ó 20 mg) fueron claramente superiores a los obtenidos en el grupo control, obteniéndose un incremento significativo (p menor 0.001) en su valores de AUC. Es decir, a la luz de todas nuestras experiencias el acomprosato se elimina inalterado a través de la orina de los animales tratados utilizando dos mecanismos; la filtración glomerular y la secreción tubular activa. La BD del acamprosato en la rata, se determinó tras la administraron de 2.8 ó 22 mg de acamprosato por vía oral, obteniéndose un valor de disponibilidad biológica que se situó en torno al 20%. Paralelamente, la comparación estadística de los valores de semivida de eliminaicón del acamprosato obtenidos tras su administración intravenosa rápida y oral mostró la existencia de diferencias estadísticamente significativas (p menor 0.001) entre ellos. Estos resultados demuestran la existencia de un comportamiento Flip-Flop en la farmacocinética del acamprosato tras su administración por vía oral. La perfusión in situ de una solución de 560 ug/ml de acamprosato en los diferentes tramos en los que se dividió el intestino delgado de la rata (proximal, medio ó distal) demostró que los valores de Ka del fármaco no varían a lo largo del intestino delgado de la rata, siendo su baja permeabilidad intestinal (Ka= 0.36 +- 0.12 h-1) la principal causa de su reducida BD. Finalmente, se trató de incrementar su BD mediante el empleo de distintos promotores de la absorción intestinal. A través de divesas metodologías, in vitro, in situ, se ha podido establecer que la absorción intestinal del acamprosato de produce mayoritariamente por difusión pasiva a través de la ruta paracelular en el intestino delgado de la rata. Los estudios in situ e in vitro indicaron que el caprato sódico (13 ó 16 mM) es capaz de incrementar la permeabilidad intestinal de acamprosato. Sin embargo, los resultados de los estudios realizados in vivo no mostraron incrementos significativos en los valores de biodisponibilidad en magnitud del fármaco en presencia, incluso, de elevadas concentraciones (50 mM) de este promotor.

Autor: GASCÓN ROS M. ISABEL.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El norfloxacino es una fluorquinolona de uso freceunte en la descontaminación intestinal selectiva en pacientes con cirrosis hepática, como profilaxis secundaria de la peritonitis bacteriana espontánea. Debido a su utilización prolongada, este hecho favorece la aparición de cepas de E.coli resistentes a quinolonas en heces. Sin embargo, en estos pacientes del desarrollo de episodios infecciosos por este tipo de bacterias, no es tan frecuente como cabría esperar, debido, probablemente, a la alteración de la capacidad de adherencia a las células epiteliales intestinales inducida por el norfloxacino. El objetivo principal de nuestro proyecto fue estudiar in vitro la capacidad de adherencia bacteriana a células epiteliales de las cepas de E.coli aisladas en pacientes con cirrois, tanto en presencia como en ausencia de concentraciones subinhibidoras de norfloxacino en el medio, y valorar así la utilidad del tratamiento prolongado con esta quinolona. Además se evaluó la presencia de tres de los factores de adherencia más importantes y su influencia en la adherencia al epitelió. Se estudiaron 59 cepas de E.coli (22 resistentes y 37 sensibles a quinolonas) obtenidas mediante escobillado rectal en pacientes con cirrosis, que se incubaron con células epiteliales bucales, con y sin concentraciones subinhibidoras de norfloxacino en el medio. La presencia de los tres factores de adherencia: fimbrias tipo I, adhesina afimbrial e intimina, se estudió mediante reacción en cadena de la polimerasa. Ambos fenotipos bacterianos mostraron una capacidad de adherencia similar. Esta capacidad de adherencia a su vez, disminuyó significativamente en todos los casos al añadir concentraciones subinhibidoras de norfloxacino al medio. La presencia de factores de adherencia bacteriana fue menos frecuente en las cepas resistentes a quinolonas que en las sensibles. El 18% de las cepas analizadas en su conjunto carecieron de los factores de adherencia estudiados. Aunque no encontramos diferencias significativas entre ambos fenotipos bacterianos, la presencia conjunta de varios factores de adherencia se correlaciona con un ligero aumento de la adherencia bacteriana. Por tanto, podemos conlcuir que la capacidad de adherencia bacteriana a células epiteliales de cepas de E.coli sensibles y resistentes a quinolonas es similar, y disminuye significativamente en ambos casos al añadir norfloxacino al medio de cultivo. Estos resultados apoyarían el uso continuado de norfloxacino en estos pacientes, a pesar de la selección de cepas resistentes a quinolonas en heces. Por otro lado, las cepas resistentes a quinolonas muestran una menor presencia de factores de adherencia, lo que respaldaría la conclusión anterior y sugiere la existencia de una pérdida de factores al adquirir la resistencia. Asimismo, podría asociarse a una posible disminución de la capacidad infectiva, ya que el fitness de la bacteria se resiente al desarrollar mecanismos de resistencia. Estos datos, a su vez, sugieren que el desarrollo de cepas resistentes a quinolonas en la luz intestinal no es un factor determinatne para inducir la traslocación bacteriana. Cabe considerar que otros factores tales como el sobrecrecimiento de estas cepas, pueda ser el factor que favorezca su traslocación.

Autor: MUÑOZ FAMBUENA M. JOSÉ.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En el Trabajo que se presenta se han seleccionado como fármacos a estudiar el saquinavir y el ritonavir, ya que se trata de inhibidores de la proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, VIH, empleados en la terapia combinada para el tratamiento del síndrome de la inmunodeficiencia adquirida, SIDA, que presentan una elevada variabilidad en la respuesta terapéutica, tanto inter como intraindividual. Tanto el sauinavir como el ritonavir cuando se administran por vía oral tienen una biodisponibilidad baja e irregular. En ocasiones, la variabilidad en el proceso de absorción de un fármaco se debe a la existencia de mecanismos especializados de transporte. Para detectar la existencia de no linealidad en el proceso de incorporación del saquinavir y del ritonaviar al organismo, es recomendable emplear un amplio ámbito de concentraciones de ensayo. Si los valores de la contante de velocidad del fármaco (ka) varían a medida que aumenta la concentración de fármacos perfundido, se demuestra la existencia de no linealidad en el proceso de incorporación. Debido a la baja hidrosolubilidad de ambos antirretrovirales, las soluciones de los fármacos a las concentraciones ensayadas se han obtenido utilizando un cosolvente, de esta forma se ha podido ampliar el ámbito de concentraciones de los fármacos ensayados. El cosolvente seleccionado ha sido el dimetilsulfóxido, DMSO. Para evaluar el efecto que origina el cosolvente sobre la permeabilidad de la membrana, se ha seleccionado la antipirina como fármaco patrón y eol saquinavir, como fármaco del que se conoce que sufre un proceso de incorporación no lineal. Para ello se han realizado dos tipos de ensayos. Por un lado, se ha perfundido dos soluciones de antipirina 1.33mM sin y con un 1% de DMSO. Y, por otro lado, se han perfundido cinco soluciones cinco soluciones de saquinavir 15 uM, adicionales de DMSO en concentraciones crecientes desde 0 hasta 1%. En nuestras condiciones de trabajo, el ámbito de concentraciones de saquinavir y ritonavir ha quedado delimitado por el valor de máxima solubilidad en el líquido de perfusión adicionado de un 1% de DMSO y por la concentración más pequeña que se cuantifica cómodamente. De este modo, las concentraciones de saquinavir ensayadas han sido las siguientes: 7,15,30 y 45 uM y las de ritonavir han sido: 7,13,27 y 40 uM. La validación del sauinavir y del ritonavir se ha realizado mediante cromatografía líquido-líquido de alta resolución (HPLC), con detector UV y con una *=235. Resultador: Saquinavir, ka (h -1): 7 uM = 1.52+-0.47, 15uM = 1.93+-0.51, 30 uM = 2.36+-0.51, 45 uM = 2.12+-0.64; Ritonavir, ka (h -1): 7 uM = 2.55+-0.49, 13 uM = 2.81+-0.47, 27 uM = 2.52+-0.56, 40 uM = 1.56+-0.23. De los resultados obtenidos pueden extraerse varias conclusiones: 1,- La ausencia de diferencias estadísticamente significativas de la constante aparente de velocidad de absorción obtenida tanto para la antipirina como para el saquinavir, en ausencia y en presencia de DMSO. Indica que el cosolvente a la concentración ensayada (1%), no modifica apreciablemente la permeabilidad de la membrana absorbente. 2,- El proceso de incorporarción del saquinavir al organismo se puede describir mediante una cinética de absorción pasiva, simultánea a un proceso de secreción que obedece a una cinética d eMichaelis-Menten*. 3,- El modelo cinético seleccionado para el ritonavir ha sido de absorción y secreción saturable de acuerdo a un proceso de Michaelis-Menten*. 4,- Al realizar el ajustado conjunto de los resultados obtenidos individualmente para ambos inhibidore de la proteasa, saquinavir y ritonavir, se observa que comparten el portador de secreción, pero con mayor afinidada por el ritonavir que por el saquinavir. * Los parámetros farmacocinéticos estiamdos deben valorarse con reserva, debido al limitado ámbito de concentraciones de antirretroviral ensayadas y a la metodología utilizada.

Autor: FETT CINTIA.
Año: 2002.
Universidad: LEON .
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El peróxido de carbamida (P.C.) es un compuesto utilizado para blanquear los dientes, un método aparentemente inocuo cuando es administrado apropiadamente y bajo la vigilancia de un profesional. No existen estudios clásicos que revelen importantes efectos colaterales o prejudiciales del P.C., en formulaciones adontológicas. Pero en exposiciones a tiempos más largos o a concentraciones más altas, el P.C. Puede no ser completamente degradado y dinfudirse a los tejidos de la boca o ser ingeridos. Hemos realizado un estudio de toxicidad utilizando técnicas in vitro de valoración de la citotoxicidad en cultivos celulares y medido distintos parámetros bioquímicos. Los resultados revelan que el P.C., es un compuesto citotóxico a altas concentraciones y un inductor del estrés oxidativo que está asociado con radicales hidroxido y a un incremento de la concentraciones del glutation oxidado provocando una indución de la peroxidación lipídica.

Autor: NALDA MOLINA JOSÉ RICARDO.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Los objetivos de la tesis están encaminados en primer lugar a establecer una normalización en las metodologías de trabajo en cultivos celulares, y validadr esta normalización con compuestos tipo. Posteriormente se realizarán modelos de predicción de parámetros de absorción en rata por medio de los coeficientes de permeabilidad en los modelos celulares. El proyecto de investigación que se presenta ha alcanzado los objetivos inicialmente propuestos. Se han establecido los protocolos normalizados de trabajo y se han llevado a cabo estudios de permeabilidad de cuatro compuestos representativos de tres de las cuatro categorías biofarmacéuticas con el fin de validar la metodología experimental para realizar estudios de permeabilidad en monocapas celulares de Caco-2 y TC-7. Estos protocolos se encuentran descritos en la memoria como apéndice, con la intención de ser un modelo a seguir para futuros trabajos en este campo. Se ha estudiado el proceso de absorción de ocho fluoroquinolonas en dichas monocapas. Los resultados obtenidos se han comparado con los previamente obtenidos en intestino de rata. Asimismo se ha comparado la capacidad de predicción de la fracción absorbida de ambos modelos experimentales. Los dos sistemas celulares permiten predecir la fracción absorbida de la serie en estudios con exactitud similar a los modelos de perfusión in situ en rata.

Autor: FAUS FELIPE VICENTE JAVIER.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El trabajo forma parte de un amplio proyecto investigador, encaminado al estudio y cuantificación de los factores que determinan la penetración de sustancias a través de la piel. Para ello se han medido distintos índices físico-químicas y parámetros de permeabilidad cutánea in vitro a través de epidermis de rata Wistar. En dicho proyecto se estudian series de ocmpuestos de pertenecientes a familias químicas distintas (alquilanilinas, ácidos fenilcarboxílicos y fenilalcoholes); este trabajo está centrado en una serie de fenilalcoholes no homólogos (1-fenil-2-propanol, 2-fenil-2-propanol, 3-fenil-2-propen-1-ol o cianmilalcohol, 1-fenil-1-pentanol y 1-fenil-2-pentanol) que complementa los datos de la serie de homólogos perfectos obtenidos en ensayos previos. Se ha caracterizado la lipofilia de los compuestos determinando los coeficientes de reparto en n-octanol, en miristato de isipropilo, y los factores de capacidad obtenidos en un sistema de CLAE de fase inversa. Los elementos homólogos perfectos presentan una correlación lineal entre el logaritmo del coeficiente de correlación confirma la adivitidad y constancia del valor ** para el grupo -CH2- en cadena lineal, lo que demuestra que el reparto puede considerarse genuino. Asimismo los valores K'0 extrapolados, obtenidos para los homólogos perfectos en el sistema cromatográfico empleado, son un parámetro válido para la caracterización de la lipofilia, como se deduce de la actividad y constancia del valor AlogK'0 calculado. El estudio del parámetro v obtenido a partir de los parámetros cromatográficos, permite analizar comparativamente el comportamiento de los elementos no homologados, respecto a la capacidad formadora de enlaces de hidrógeno. En este sentido. El cinamilalcohol presenta, frente a los homólogos perfectos de la serie, mayor capacidad dadora de hidrógeno, mientras que los restantes no homólogos ensayados presenta menor capacidad dadora. Como parámetros fisicoquímicos adicionales se ha determinado el volumen molecular de los solutos, cuyo cálculo se ha realizado a partir del área accesible al disovlente (ASA), y la superficie molecuar (SES). No obstante, estos parámetros no aportan información útil para explicar el comportamiento de la serie. La caracterización de la penetración cutánea se ha realizado determinando, in vitro, los coeficientes de permeabilidad (Kp), en epidermis de rata Wistar de los compuestos. Los valores Kp de los compuestos no homólogos son, exceptuando el cinamilalcohol, inferiroes a los isómeros homólogos correspondientes. Para estudiar las correlaciones abosorción-lipofilia se ha partido del modelo bilineal definido previamente con los homólogos perfectos de la serie y se han analizado las desviaciones, que los elementos no homólogos presentan respecto a dicho modelo. El cinamilalcohol presenta un coeficiente de permeabilidad muy superior al que le correspondería de acuerdo con su lipofilia. Se explica por su particular estructura química que le confiere propiedades como promotor de la penetración. Asimismo se han estudiado modelos alternativos que permitieran explicar el comportamiento de la serie completa. Cuando se incorpora a la ecuación bilineal el valor xx como un término aditivo la bondad del ajuste mejora sensiblemente respecto a la que se obtiene sin este parámetro.

Autor: GONZÁLEZ ALVAREZ M. ISABEL.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: En este trabajo se ha procedido a la caracterización cinética de un derivado quinolónico CNV 97100 en tres modelos experimentales, in situ en intestino de rata wistar e in vitro en dos subtipos celulares derivados de las CaCo-2, las células ATCC y las TC7. Se ha detectado una absorción no lineal atribuible a un proceso de secreción intestinal. En los tres sistemas mencionados se han realizado ensayos en presencia de diferentes inhibidores con el fin de caracterizar el tiempo de portador de secreción utilizado por la quinolona. Los resultados obtenidos han permitido comparar el sistema in situ frente al sistema in vitro. Los estudios en intestino de rata nos permitieron concluir que CNV 97100 presenta una cinética de absorción concentración dependiente. La adición de Verapamilo aumenta considerablemente el valor de la constante de absorción de CNV 97100 respecto al que presenta en solución libre para concentraciones pequeñas. Al realizar ensayos de los distintos tramos intestinales obtuvimos resultados que demuestran que la quinolona presenta un cinético de absorción diferente entre los distintos tramos atribuible a la variación de expresión de la glicoproteína P que es mayor en íleon y reduce en mayor medida la permeabilidad afectiva en este trabamo intestinal. Por lo tanto es posible ajustar conjuntamente los datos obtenidos en intestino completo e íleon asumiendo la misma permeabilidad difusional y la misma afinidad del portador. Dicho ajuste corrobora el mayor nivel de expresión del portador de secreción en la zona distal. En esta zona que realizaron ensayos en distintas concentraciones de inhibidores donde los resultados obtenidos muestra que la Ciclosporina A, Verapamilo, Quindina son capaces de producir inhibición completa del transporte de secreción lo que apoya la hipótesis de la implicación de la glicoproteína P en la absorción de la quinolona mientras que el ácido p-aminohipúrico también responde a un modelo de inhibición competitiva pero ésta no llega a ser completa. En los ensayos en monocapas celulares con la línea celular ATCC se evidencia que CNV 97100 presenta un proceso de permeación concentración y sentido dependiente. El proceso de secreción se inhibe completamente en presencia de Ciclosporina, Verapamilo Quinidina y de manera incompleta en presencia de ácido para aminohipúrico. Los mismos resultados se obtienen en los ensayos en las monocapas de la línea celular TC7. En la presente memoria se han realizado experimentos tanto in situ como in vitro de permeabilidad de la CNV 97100 a diferentes concentraciones y a través del modelado matemático se ha desglosado, en ambos sistemas, el componente activo del componente pasivo en el proceso de transporte. Los componentes pasivos obtenidos in situ e in vivo se incriben perfectamente en las correlaciones permeabilidad lipofilia previamente obtenidas en nuestro laboratorio lo que demuestra la funcionalidad del modelo matemático para caracterizar los parámetros cinéticos in situ como in vivo. Este trabajo de investigación aporta nuevos datos que corroboran la implicaicón de proteínas transportadoras en el proceso de absorción de las fluoroquinolonas. Si bien la difusión pasiva parece ser el mecanismo predominante para la mayoría de elementos de esta familia, en especial de los elementos más lipófilos, cada día son más numerosos los trabajos de investigación que apuntan hacia la participación de transportadores tanto de absorción como de secreción. La relevancia de estos procesos in vivo no ha sido esclarecida por completo y es uno de los objetivos de investigación que queda abierto a la luz de los resultados de esta memoria.

Autor: FERNÁNDEZ TERUEL CARLOS.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El propósito de la memoria ha sido el estudio en profundidad de los mecanismos de absorción implicados en 3 fluoroquinolonas: sarafloxacino, 3,4-dimetilciprofloxacino (CNV97101) y 3'metil-4-propilciprofloxacino seleccionadas por presentar una desviación a las correlaciones absorción-lipofilia y biodisponibilidad oral-lipofilia previamente realizadas. Estas correlaciones fueron establecidas a partir de series homologas derivadas: ciprofloxacino y norfloxacino. Los compuestos CNV97101 y CNV97103 se alejaban de la correlación establecida. Un caso particular también estudiado ha sido los mecanismos de absorción implicados en la fluoroquinolona sarafloxacino. Con el fin de cumplir los objetivos se llevaron a cabo estudios de determinación de lipofilia, cálculo de las constantes aparentes de absorción en intestino completo de rata Wistar a diferentes concentraciones, cálculo de la biodisponibilidad por diferentes vías extravasales y un estudio de permeabilidad de sarafloxacino en células Caco-2. En los casos en los que se detectaron cinéticas de absorción no lineal se propusieron modelos cinéticos que explicasen el mecanismo de absorción, así mismo, se identificó el modelo farmacocinético óptimo para cada compuesto y se calculó su biodisponibilidad en las diferentes vías extravasales. Todos los modelos empleados fueron desarrollados empleando el programa NONMEM V. Para todos los compuestos ensayados se obtuvieron cinéticas de absorción no lineal, en el caso de sarafloxacino y CNV97101 el modelo de elección es de absorción pasiva y activa, mientras que para CNV97103 es de absorción pasiva y secreción activa. Los nuevos datos de difusión pasiva se ajustaron correctamente en la correlación constante de absorción-lipofilia para los compuestos CNV97101 y CNV97103, mientras que el sarafloxacino se alejaba debido a sus diferencias estructurales. El estudio de permeabilidad en sarafloxacino, muestra la presencia de dos transportadores, uno de absorción y otros de secreción, situados en la membrana apical de la célula. Las biodisponibilidades por las vías intraduodenal y Intraperitoneal para los compuestos CNV97101 y CNV97103 son prácticamente del 100% mientras que las biodisponibilidades orales se sitúa en torno al 50%, estas diferencias indican que la pérdida de disponibilidad se produce por precipitación intragástrica o bien durante el vaciado gástrico. Los valores de biodisponibilidad intraduodenal se ajustan correctamente en la correlación biodisponibilidad-constante de absorción. El sarafloxacino sufre los mismos problemas que en la correlación constante de absorción-lipofilia por lo que la correlación predice con gran error su biodisponibilidad.

Autor: FAUS SOLER M. TERESA.
Año: 2002.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Los pacientes con insuficiencia renal crónica en hemodiálisis presentan una gran susceptibilidad a las infecciones por bacterias Gram positivas, siendo tratadas de forma sistemática con vancomicina. La presente memoria describe el comportamiento farmacocinético de vancomicina en una población de pacientes anéfricos en hemodiálisis. La población total (n=23), se subdivide en dos poblaciones, población A (n=11) y población B (n=12). Con la población A se estiman los parámetros farmacocinéticos del antibiótico mediante regresión no lineal por máxima verosimilitud en el programa ADAPT II. El modelo estructural seleccionado corresponde al modelo bicompartimental, con dos constantes de eliminación, una correspondiente al periodo interdialítico, constante de eliminación endógena (Kel) y la segunda, al periodo intradialítico, constante de eliminación por el dializador (Kdial). La varianza residual se explica a través de un modelo aditivo-proporcional. Mediante regresión lineal múltiple se analiza la influencia de variables antropométricos, clínicas y propias de la diálisis sobre los parámetros farmacocinéticos del modelo seleccionado. Con la población B, se evalúa la capacidad predictiva del modelo seleccionado en la población A. Para ello, se implementan dos métodos de validación a priori. El primero (PFM) predice las concentraciones plasmáticas en la población B a partir de los parámetros farmacocinéticos medios del modelo seleccionado en la población B; el segundo (RLM), realiza las predicciones utilizando los parámetros farmacocinéticos individuales estimados en la población B a partir de las ecuaciones obtenidas anteriormente por regresión lineal múltiple. Las principales conclusiones extraídas de la presente memoria son: 1,- Vancomicina presenta baja capacidad dializante. 2,- Las membranas con mayor capacidad extractiva de vancomicina son polisulfona, seguido de acetato de celulosa, hemophan y, por último, cuprohan. 3,- Se detecta efecto rebote en las concentraciones plasmáticas de vancomicina en los pacientes dializados con las membranas más permeables. 4,- Las principales convariables predictoras de los parámetros farmacocinéticos son: el tipo de membrana dializante, el diagnóstico que motivó la administración de vancomicina, la etiología de la enfermedad renal terminal y la duración de las sesiones de hemodiálisis. 5,- La constante de elimianción del dializador ese incrementa cuando vancomicina se administra concomitantemente a ciprofloxacino. 6,- La validación a priori del modelo farmacocinético mediante la regresión lineal múltiple (RLM) presenta mayor exactitud y precisión que la correspondiente validación a partir de parámetros farmacocinéticos medios.

Autor: RODRÍGUEZ IBÁÑEZ MARGARITA.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El objetivo principal de este trabajo ha consistido en estudiar la absorción intestinal en un modelo de perfusión in situ y la permeabilidad in vitro para caracterizar el papel de la glicoproteína-P en la absorción intestianl de varios compuestos, con el fin de correlacionar los resultados hallados en ambos sistemas y proponer un límite orientativo de eliminación transintestinal in vitro que tenga relevancia en el animal completo. Para la realización del estudio se han seleccionado cuatro compuestos con distinta afinidad por la glicoproteína-P según los datos econtrados en la bibliografía actual. Los resultados obtenidos para ciprofloxacino y grepafloxacino son muy similares en ambos métodos experimentales, sin embargo, para el esparfloxacino y verapamilo se han econtrado algunas diferencias. La correlación lineal obtenida ha sido excelente, lo que permite predecir la capacidad de absorción in situ de un fármaco a partir de valores obtenidos in vitro. Por lo tanto, se puede considerar que el mdoelo in vitro reproduce las características de la membrana de absorción del animal completo en estas condiciones. Ambos modelos experimentales, in situ e in vitro, tienen una capacidad discriminativa muy similar en función de la lipofilia del compuesto estudiado, siempre que, en el caso de existir un componente activo, éste se halle prácticamente saturado y prevalezca el componente difusional.

Autor: ABUSHAMMALA ISSAM.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El trabajo que se presenta forma parte de una línea de investigación centrada en el estudio de la absorción oral de fármacos que presentan importantes pérdidas presistémicas cuando se administran por vía oral. En la presente Memoria se ha seleccionado, como fármaco piloto, el labetalol. Para determinar las causas que originan la baja e irregular biodisponibilidad del antihipertensivo cuando se administra por vía oral, se han perfundido en intestino delgado de rata soluciones de labetalol a concentración creciente, con el fin de detectar la presencia de proceos absorción concentración-dependientes, ocmo la secrección activa. Los estudios se han completado en colom, para confirmar la posible intervención de procesos activos que modulasen la incorporación del fármaco al organismo. En ambos casos, se ha determinado la constante de velocidad de absorción del labetalol en presencia de inhibidores específicos e inespecíficos de la glicoproteían P intestinal, a fin de valorar la contribución de ésta sobre el rendimiento de la abosorción oral de antihipertensivo. Los resutlados obtenidos se han sometido a un tratamiento cinético y estadístico par detectar posibles fenómenos de no linealidad en el proceso de absorción.

Autor: TALENS VISCONTI RAQUEL.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Las fluoroquinolonas se ha convertido en agentes importantes en quimioterapia. Sin embargo, la aparición de resistencias ha llevado a la búsqueda de nuevas moléculas. El ciprofloxacino es una de las quinolonas más clásicas y de uso más extendido, si bien posee una biodisponibilidad oral relativamente baja e irregular. Por este motivo y tomando esta quinolona como referencia de actividad, se han sintetizado nuevos derivados homólogos pertenecientes a dos series: 4'N-alquilciprofloxaciono y 3' metil, 4'N-alquilciprofloxaciono con los que se pretende obtener un aumento en la biodisponibilidad en los estudios de desarrollo de fármacos; nuevas quinolonas. Se ha estudiado y comparado la actividad de estos homólogos con la del ciprofloxacino. Para ello, se ha determinado la CMO sobre 160 cepas bacterianas de origen clínico, utilizando el método de diluciones dobles seriadas en MHA siguiendo las espcificaciones del NCCLS.Se demuestra que la adición del sustituyente alquílico en 4'N no altera el espectro de acción del patron utilizado. Sin embargo, los compuestos sintetizados presentan diferente actividad frente a los gérmenes ensayados. Además se ha estudiado la cinética de letalidad de algunos de estos compuestos de Staphylococcus aureus ATCC 25923.La dinámica de crecimiento y letalidad que presentan los homólogos es la misma, que su patrón en S. Aureus. Si se considera la concentración absoluta, el antibiótico con mayor velocidad de letalidad es el 97-101. Se comprobó que este hecho no se debe a un cambio enla selección de la diana intracelular puesto que la tipoisomerasa IV es la primera diana en S. Aureus, al igual que para el ciprofloxacino. Se ha estudiado la relación entre la lipofilia, como parámetro estructural, y la inversa de la media geométrica de l aCMI, como índice de actividad. Esta correlación proporciona ajustados bilineales y permite identificar el coeficiente de reparto ótpimo, que es en general más bajo para las especies Gram negativas que para las Gram positivas. Se ha investigado también el mecanismo de acción de estas quinolonas determinando los efectos de inhibición in vitro en la ADN-girasa y topoisomerasa IV de Streptococcus pneumoniae. Esta parte del trabajo se ha desarrollado en el St. George's Hospital Medical School. Se demostró que los homólogos no modifican la diana de acción con respecto al patrón en S. Pneumoniñae y la toposimerasa IV continúa siendo sus pincipla dian. La determianción de la CC25 demuestra que los compuestos estudiados no provocan mayor formación del complejo ternario ni con la topoisomerasa IV ni con la girasa, lo que indica que la alquilación en 4'N del anillo piperacínico del ciprofloxacino no es favorable. El efecto que pueda tener el sustituyente en C7 sobre la bomba de secreción PmrA no se conoce puesto que los resultados de este estudio no fueron concluyentes. No se puede descartar, pues, la penetración intracelular ocmo posible responsable de la diferencia de actividad de los homólogos. Por último, al considerar el equilibrio actividad-biodisponibilidad oral comparada para la selección de los candidatos, existen tres compuestos que presentan las mejores propiedades en conjunto: 4'N-metilciprofloxacino, 4'N-etilciprofloxaciono y 3' metilciprofloxacino (97-100). No obstante, los demás derivados también podrían resultar de interés en algunos de los microorganismos estudiados, como A. Calcoaceticus, S. Aureus y S. Pnenumoniae.

Autor: CARRERA MERINO ANTONIO R..
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Los objetivos son determinar el mecanismo y la magnitud de la adsorción de metotrexato y de levofolinato a la colestiramina, así como el grado de desorción a la misma, y comprobar la existencia de interacción entre ambos fármacos a nivel del proceso de adsorción. Para estudiar el grado de adsorción y desorción a la colestiramina se han realizado una serie de ensayos in vitro con metotrexato en condiciones de pH 6 y pH7, y con levofolinato en condiciones de pH 6. Para comprobar la posible interacción entre ambos fármacos a nivel de la adsorción a la colestiramina se han realizado una serie de ensayos in vitro de forma que se encuentren los dos fármacos a nivel de la adsorción a la colestiramina se han realizado una serie de ensayos in vitro de forma que se encuentren los dos fármacos en el medio, de forma simultánea y secuencial, en condiciones de pH 6 a diferentes concentraciones. El metotrexato y el levofolinato remanente al finalizar los ensayos se han valorado por cromatografía líquida de alta eficacia. En todos los casos se han cuantificado el porcentaje de fármaco unido a la colestiramina al finalizar los ensayos. Además se ha apllicado los modelos de Freundlich, Langmuir y BET en los ensayos de adsorción de cada fármaco por separado, y el modelo de Langmuir multivariante en los ensayos simultáneos. La unión del metotrexato a la colestirmaina se ajusta mejor al modelo de Langmuir, que asume una adsorción gradual en monocapa, siendo mayor la capacidad de unión a pH 6. La unión del levofolinato a la colestiramina se ajusta mejor al modelo de B.E.T., que asume una adsorción gradual en multicapa. La estabilidad del complejo metotrexato-colestiramina es menor a pH 7. En condiciones de pH 6, el complejo levofolinato-colestiramina es menos estable que el complejo metotrexato-colestiramina. La interacción entre le metotrexato y el levofolinato por la unión a la colestiramina se produce en ambos sentidos, y es concentración dependiente para los dos fármacos. El desplazamiento es mayor para la unión levofolinato-colestiramina que para la unión metotrexato-colestiramina. La interacción entre ambos fármacos provoca una reducción a la unión metotrexato-colestiramina de hasta un 21% para relaciones ponderales metotrexato: levofolinato entre 1:0 y 1:10, y una reducción en la unión levofolinato-colestiramina de hasta un 50% para relaciones ponderales de levofolinato:metotrexato entre 1:0 y 1:10. Cuando metotrexato y levofolinato compiten por unirse a la colestiramina manteniendo constante la concentración de levofolinato, la constante de afinidad de metotrexato es un 141% mayor que la de levofolinato cuando se invierten las condiciones del ensayo. La administración por vía oral de colestiramina a dosis que garanticen en el intestino una relación ponderal colestiramina/metotrexato igual o superior a 3.45, probablemente será capaz de adsorber más del 90% del metotrexato presente en el lumen intestinal, interrumpiendo así su ciclo enterohepático.

Autor: VALENZUELA JIMÉNEZ BELÉN.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FRMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se ha diseñado un protocolo de ensayos que permitiera profundizar en el conocimiento de los factores que modulan la incorporación del salbutamol al organismo tras su administración oral. Para ello se utilizaron distintas técnicas experimentales: perfusión in situ en animales, estudios difusionales en cultivos celulares y determinación del grado de expresión del gen MDR (portador de secreción intestinal) mediante biología molecular. Se han determinado las constantes aparentes de velocidad de absorción en intestino completo de rata de site concentraciones diferentes de salbutamol, a fin de detectar la linealidad o no linealidad en su absorción. Con salbutamol 0.29 mM (dosis alométrica) se ha realizado, en intestino delgado completo de la rata, ensayos de inhibición de sistemas activos de secreción intestinal. Se han utilizado el verapamilo, la azida sódica y el zumo de pomelo. También se ha estudiado la constante de velocidad de absorción in situ del salbutamol 0.29 mM, sólo y en presencia de verapamilo, en diferentes tramos del intestino delgado de la rata, a fin de establecer diferencias regionales de expresión del sistema secretor. Paralelamente, se ha analizado la expresión del gen MDR en diferentes tejidos, entre los que se encuentran dichos tramos intestinales, con el fin de comprobar si existe una correlación con los resultados obtenidos in situ. En los estudios de absorción in vitro se ha determinado la permeabilidad del salbutamol en monocapas celulares de Caco2-TC7 y MDCK en condiciones similares a las utilizadas para los estudios in situ. Del trabajo realizado se han extraído como más relevantes, las siguientes conclusiones: 1,- La técnica de valoración utilizada para el salbutamol es plenamente satisfactoria dentro del ámbito de concentraciones ensayadas y justifica su empleo para el fin propuesto. 2,- Las constantes aparentes de velocidad de absorción del salbutamol en intestino de rata determinadas en esta Memoria son plenamente representativas del proceso de absorción del fármaco y no están modificadas por fenómenos de degradación del mismo. 3,- La incorporación del salbutamol a organismo es dosis dependiente y viene definida por un proceso pasivo de entrada, simultáneo a un proceso de secreción activa desde las células absorbentes hacia el lumen intestinal. 4,- El proceso de secreción del salbutamol desde el enterocito al lumen se inhibe competitivamente por el verapamilo lo que indica que, al menos en parte se halla mediatizado por la glicoproteína P. 5,- La azida sódica aumenta ligeramente, de forma dosis-dependiente, los valores de las constantes de absorción del salbutamol, lo que indica que la secreción del fármaco es energía-dependiente. El hecho de que las constantes no difieran significativamente entre sí se atribuye a que la depleción de ATP no puede manifestarse adecuadamente en sólo 30 minutos. 6,- El zumo de pomelo actúa como un inhibidor competitivo del sistema secretor. El efecto determinado es sólo cualitativo puesto que se desconoce qué sustancia/s son las responsables de la inhibición del proceso y su concentración en la solución de perfusión. 7,- Tanto en células Caco2-TC7 como en las células MDCK, el cociente PBA/PAB es mayor que la unidad, lo que indica la existencia de transportadores que actúan en sentido basolateral-apical. En presencia de inhibidores específicos de los sistemas de secreción MDR y MRP, la reducción del valor del cociente ha sido semejante, por lo que se puede concluir que ambos sistemas están implicados por igual en el proceso de secreción activa del salbutamol. 8,- La excelente correlación entre los ensayos de absorción in situ en los tramos intestinales y los niveles de expresión del RNA mensajero del gen MDR, determinados mediante RT-PCR, permiten concluir que la glicoproteína P se localiza preferentemente en el tramo distal del intestino delgado de la rata. 9,- Para la administración oral del salbutamol sería conveniente adicionar un inhibidor específico de la glicoproteína P, que sea a su vez inocuro para el organismo, como podría ser la administración simultánea de zumo de pomelo, para evitar, de esta manera, la baja absorción del fármaco y poder obtener niveles plasmáticos que aseguren una respuesta terapéutica adecuada. También podría resultar adecuada una vía de administración alternativa que permitiera obviar los efectos de primer paso descritos.

Autor: MONTALAR MONTERO MANUELA.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: El objetivo de este trabajo se centra en determinar el mecanismo de absorción del triamtereno y su dependencia con el pH intestinal, así como la posible interacción en el proceso de absorción entre el triamtereno y dos compuestos relacionados estructuralmente con el fármaco: ácido fólico y metotrexato. Para ello se ha determinado la constante aparente de velocidad de absorción del tiamtereno utilizando un amplio ámbito de concentraciones en intestino completo de rata Wistar a diferentes valores de pH intestinal. En los ensayos de inhibición se ha determinado la constante aparente de velocidad de absorción del triamtereno en presencia de ácido fólico y metotrexato a pH 7.00. Otro de los objetivos de este trabajo es estudiar la posible secreción intestinal del triamtereno por portadores como la Glicoproteína-P. Así pues, se ha determinado la constante aparente de velocidad de absorción del triamtereno en presencia de verapamilo, a tres valores de pH (5.00, 7.00 y 8.00). Adicionalmente se han llevado a cabo ensayos de eliminación transintestinal de triamtereno tras su administración por vía intravenosa, en ausencia y presencia de verapamilo en lumen intestinal. Los ensayos de absorción se han realizado utilizando una técnica de perfusión in situ sin recirculación. El análisis de las muestras se ha efectuado mediante cromatografía líquida de alta eficacia, HPLC, con detección por fluorescenica. El procedimiento analítico fue validado previamente en el ámbito de concentraciones ensayadas. Las conclusiones más relevantes de los ensayos realizados en esta Memoria son las siguientes: 1,- La cinética de absorción del triamtereno, en el intestino delgado de rata, a pH 7.00 y 5.00 puede describirse mediante un modelo concentración dependiente, que incluye un proceso de difusión pasiva y otro de absorción activa. 2,- A pH 8.00, en este mismo lugar, la cinética de absorción del triamtereno corresponde a un proceso de difusión pasiva aparente. 3,- El metotrexato y, en menor medida, el ácido fólico, inhiben parcialmente el transporte activo del triamtereno. No obstante, no se ha podido caracterizar claramente si la inhibición es acompetitiva o competitiva. Es posible concluir que el triamtereno utiliza el transportador de folatos, si bien por el hecho de que la inhibición no sea completa con ácido fólico, no se puede descartar la existencia de un segundo transportador intestinal. 4,- Los estudios con verapamilo sugieren que el triamtereno sufre un proceso de secreción que se inhibe en presencia del mismo, tanto a pH 5.00 como a pH 7.00 y pH 8.00. La existencia de este proceso se confirma por la magnitud del coeficiente de permeabilidad en colom, que resulta significativamente mayor que el componente de difusión pasiva en intestino delgado. 5,- El proceso de secreción del triamtereno tiene una magnitud importante, ya que la constante de secreción representa entre el 25 y 50% de la constante aparente de velocidad de entrada. 6,- El verapamilo interfiere tanto en el sistema activo de secreción como en el de absorción, esta capacidad no había sido puesta de manifiesto con anterioridad. 7,- Los estudios de eliminación transintestinal del triamtereno confirma la importancia de la secreción en su proceso global de absorción. Este proceso, a las concentraciones ensayadas, sigue una cinética aparente de orden uno.

Autor: PORTA OLTRA BEGOÑA.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La estrecha relación establecida entre la concentración en sangre de ciclosporina y su respuesta terapéutica y tóxica, así como la alta variabilidad ínter e intraindividual encontrada en los procesos cinéticos y dinámicos, ha determinado la necesidad de la monitorización de las concentraciones de ciclosporina en sangre total, dentro de la práctica clínica. Su finalidad es disponer de información suficiente para alcanzar la individualización posológica, mediante la metodología bayesiana. El elevado número de muestras de sangre necesarias para llevar a cabo las estrategias de individualización posológica basadas en la medida de la exposición sistémica, ha dificultado su aplicación por lo que la monitorización de ciclosporina ha permanecido anclada en la determinación de la concentración sanguínea valle. El escenario descrito es básicamente el punto de partida de la hipótesis planteada en la presente memoria de tesis doctoral cuyos objetivos han sido: I. OBJETIVO PRINCIPAL Caracterizar el comportamietno farmacocinético de ciclosporina oral en pacientes con trasplante renal, a partir de la concentración sanguínea valle, en función del tiempo post-trasplante. II. OBJETIVO SECUNDARIOS 1,- Identificar y evaluar los factores que influyen en la aceptación del informe Farmacoterapéutico de monitorización de las concentraciones sanguíneas valle de ciclosporina. 2,- Identificar y evaluar la influencia de diferentes covariables sobre la tendencia central de los parámetros farmacocinéticos de ciclosporina y sus respectivas variabilidades. 3,- Desarrollar y validar un método bayesiano para el ajuste individualizado de dosis basado en el modelo farmacoestadístico desarrollado. El diseño del estudio farmacocinético exigió el desarrollo y la validación de la técnica analítica y el establecimiento de su modelo de varianza, a su vez, se ha llevado a cabo un análisis con el objetivo de valorar la Aceptación, por parte del nefrólogo, del informe Farmacoterapéutico realizado por el farmacéutico en la Unidad de Farmacocinética Clínica. Por otro lado, el análisis farmacocinético incluyó el desarrollo y la validación de un modelo farmacoestadístico de predicción de dosis de ciclosprona utilizando la metodología implementada en el modelo no lineal de efectos mixtos. Para ello los pacientes se asignaron a dos grupos de manera aleatoria. El grupo de desarrollo del modelo farmacoestadístico o grupo de modelado incluyó un total de 48 pacientes y 897 datos de concentración sanguínea valle. En esta etapa se evaluó la influencia de tiempo post-trasplante y de potenciales covariables predictoras sobre los parámetros farmacocinéticos de ciclosporina. En el grupo de validación se incluyó un total de 19 y 497 concentraciones sanguínea valle. En ambos grupos los pacientes fueron monitorizados durante un año. Asimismo, se realizó una validación metodológica mediante la comparación del modelo faramcoestadístico desarrollado con un modelo de red neuronal artificial. En resumen, los resultados obtenidos proporcionan al nefrólogo y al farmacéutico clínico, modelos de individualización posológica que permiten controlar la variabilidad en la respuesta cinética de los pacientes con trasplante de riñón en tratamiento inmunosupresor con ciclosporina.