INMUNOPATOLOGIA

Autor: DIAZ ROMAN TOMAS MIGUEL.
Año: 2003.
Universidad: A CORUÑA.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.

Resumen: El xenotransplante es el trasplante de órganos o tejidos entre diferentes especies. La eliminación de cualquier forma de rechazo inmunológico, en primer lugar de los rechazos hiperagudo o del rechazo vascular agudo es indispensable para iniciar la aplicación de este tipo de trasplante a la clínica humana. El seguimiento de los xenotrasplantes durante los ensayos preclínicos realizados en animales, debe incluir la exploración de los elements centrales de la respuesta inmunológica con participación en los mecanismos de rechazo. De este modo, se ha recomendado la incorporación de pruebas inmunológicas para la evaluación y el mejor control de los animales durante el tratamiento. El objetivo principal de la tesis ha sido analizar la respuesta citotóxica humoral que interviene en el rechazo del xenotrasplante, más específicamente evaluar la aplicación un método citométrico para el análisis funcional de los anticuerpos citotóxicos y del complemento a través del estudio de diferentes dianas celulares, incluyendo la definición de una forma adecuada para la expresión de los resultados obtenidos. La aplicación de este método permitió investigar la participación de otros anticuerpos en muestras de modelos xenotrasplantados cerdo/primate no medidos por ensayos hemolíticos convencionales, y el papel protector de la molécula reguladora del complemento hDAF en cerdos transgénicos.

Autor: RODRÍGUEZ RAMOS CLAUDIO.
Año: 2003.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: INTRODUCCIÓN La peritonitis bacteriana espontánea (PBE) es la infección de un líquido ascítico previamente estéril sin que exista una fuente primaria de infección intraperitoneal. Es una infección grave, con una elevada mortalidad, que se presenta de forma predominante en pacientes cirróticos con ascitis. En su patogenia se han involucrado factores relacionados con alteraciones inmunitarias típicas de estos enfermos. Las citocinas proinflamatorias son mediadores que intervienen en la respuesta defensiva del organismo frente a la infección, si bien sus efectos pueden llegar a ser dañinos si no son adecuadamente controlados por moléculas antiinflamatorias que son sintetizadas de forma coordinada con la liberación de las citocinas proinflamatorias. OBJETIVO De este trabajo ha sido la evaluación en pacientes cirróticos con PBE de las concentraciones séricas y en líquido ascítico de citocinas proinflamatorias [interleucina 1 beta(IL1), factor de necrosis tumoral alfa (TNF) e interleucina 6 (IL6)], así como de moléculas antiinflamatorias relacionadas [interleucina 10 (IL10), antagonista del receptor de IL1 (IL1Ra), receptores solubles del TNF p55 y p75 (sTNFR55 u sTNFR75) y receptor soluble de IL6 (sIL6R)]. MÉTODOS Se estudió una muestra de 32 pacientes cirróticos con peritonitis bacteriana espontánea, un grupo control de 15 cirróticos con ascitis no infectada y un grupo control de 20 individuos sanos. Se determinaron las concentraciones de las moléculas antes mencionadas mediantes equipos comerciales de enzimoinmunoanálisis sobre soporte sólido (ELISA) tanto en suero como en líquido ascítico. RESULTADOS Y CONCLUSIONES Los enfermos con cirrosis hepática y ascitis presentan, en ausencia de infección, un incremento de moléculas antiinflamatorias que probablemente limiten el efecto de los aumentos significativos de interleucina 6. Este fenómeno sugiere la existencia en estos pacientes de una respuesta inflamatoria adecuadamente modulada. Ante la presencia de una peritonitis bacteriana espontánea, se produce un aumento significativo de las concentraciones séricas y en líquido ascítico de las citocinas proinflamatorias (interleucinas 1 y 6 y factor de necrosis tumoral alfa) sobre el de las moléculas antiinflamatorias. Las concentraciones de las citocinas proinflamatorias IL1 e IL6 y de las moléculas antiinflamatorias IL10, IL1Ra y sTNFR55 son significativamente superiores en el líquido ascítico de enfermos con PBE con cultivo positivo que en aquellos otros con cultivo negativo (PBE tiepo ascitis neutrocitaria). Estos hallazgos apoyan la importancia de la concentración de gérmenes en cavidad peritoneal en la magnitud de la respuesta de moléculas inflamatorias. La concentración de citocinas proinflamatorias disminuyó tras resolución de la infección. Las concentraciones de interleucina 6 en plasmas fueron significativamente superiores en los enfermos con PBE que murieron con respecto a las de los que sobrevivieron a la infección. Afirmamos, en consecuencia, que la concentración plasmática de este mediador puede ser considerado como factor prónostico en estos pacientes.

Autor: LÓPEZ PALOMO CARMEN.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA (UNIVERSIDAD DE ALCALÁ)..

Resumen: 1. Los sujetos infectados por VIH que tienen un recuento de linfocitos T CD4+/ul superior a 200 presentan una significativa menor incidencia de neumonía bacteriana, ya sea neumocócica o no, con independencia de estar o no vacunados frente a neumococo. 2. Los sujetos infectados por VIH en los que se ha conseguido una respuesta inmune y virológica al tratamiento antirretroviral de alta eficacia presentan una significativa menor incidencia tanto de neumonía bacteriana de cualquier etiología, como de neumonía neumocócica en particular, con independencia de estar o no vacunados frente al neumococo. 3. La vacuna antineumocócica 23-valente sólo es capaz de disminuir la incidencia (pero no alcanzando la significación estadística) de neumonía bacteriana de cualquier etiología (neumocócica o no) en un subgrupo de pacientes, aquéllos con un recuento de linfocitos T CD4+>200/ul y respuesta inmunológica a HAART.

Autor: LOWY GALLEGO ERNESTO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEP. INMUNOLOGÍA-FAC. MEDICINA.

Resumen: El complejo principal de histocompatibilidad (sistema MHC) aparece en todas las especies de vertebrados estudiadas hasta ahora y tiene un papel fundamental en la presentación antigénica a las células efectoras del sistema inmunológico. Los complejos MHC presentes en humanos (sistema HLA), ratones, y pollo han recibido mucha atención por parte de los investigadores y las características del MHC (locus B) en pollo han sido propuestas como universales para toda la clase Aves. Los estudiados dedicados al complejo MHC en estas 3 especies han mostrado un sistema caracterizado por un alto polimorfismo y un elevado número de genes (excepto en el pollo, cuyo complejo MHC se caracteriza por tener un número de genes muy reducido), de manera que se cree que estas características están presentes en todos los vertebrados y son fundamentales para una respuesta adecuada contra los patógenos. En este trabajo se analiza por primera vez mediante secuenciación de DNA el exón 2 y exón 3, codificantes apra los dominios alfa1 y alfa2 de la cadena pesada alfa de las moléculas MHC de clase I presentes en el género de aves Serinus (Canarios), con el objetivo fundamental de comparar el polimorfismo presente en estas aves con el que aparece en las moléculas de clase I del sistema HLA. Además, hemos secuenciado el gen codificante para el citocromo b mitocondrial en diferentes especies pertenecientes al género Serinus y hemos obtenido una clasificación filogenética más fiable basada en grupos de emparentamiento molecular que completa la obtenida con datos morfológicos exclusivamente y que se ha utilizado en este trabajo para intentar discernir el momento de aparición de los diferentes alelos MHC obtenidos en este trabajo. Para finalizar con este breve resumen decir, que como conclusión fundamental de este trabajo, además de haber estudiado las diferentes fuerzas selectivas que operan en Serinus a nivel del MHC (PBR y no PBR) y del citocromo b mitocondrial, merece la pena destacar el reducido grado de polimorifsmo encontrado en estas aves, que contrasta claramente con el obtenido en modelos que nosotros llamamos "artificiales" (hombre, ratón y pollo) y cuya diferencia podría deberse a la diferente historia evolutiva entre estas últimas especies y el género estudiado en este trabajo. También se postula en este trabajo que la reducción en el número de alelos MHC de clase I detectada en el género Serinus podría deberse a una disminución en la presión selectiva provocada por los patógenos que reduciría la variabilidad a nivel MHC en estas aves.

Autor: TORIO RUIZ ALBERTO.
Año: 2003.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA-UNIVERSIDAD DE MURCIA.

Resumen: Este trabajo profundiza en el conocimiento de los mecanismos inmunológicos en la naturaleza del asma. En la primera parte de nuestro trabajo nos centramos en el análisis de los pacientes intrínsecos y su comparación con los extrínsecos, estudiando la hipótesis de que al ser las infecciones respiratorias, especialmente por el virus respiratorio sincitial y el parainfluenza, la causa más frecuente de exacerbaciones agudas en el asma intrínseco, estos agentes infecciosos tuvieran alguna relación con las moléculas de HLA (presumiblemente de clase I), de una forma similar a la encontrada en otras enfermedades significativas (Torío y col., 2000). El papel del HLA ha resultado más evidente en el caso del asma alérgico, ya que se ha conseguido describir una serie de asociaciones estadísticamente significativas con alelos de HLA de clase II al considerar la respuesta a diferentes alergenos. Estos resultados han sido especialmente relevantes en el caso de pacientes asma alérgico a Artemisia vulgaris, donde se ha encontrado una asociación con los alelos HLA-DRB1*01-DQB1*0501 que hasta ahora no había sido descrita (Torío y col.,2003). Además, en nuestro población también observamos las asociaciones estadísticamente significativas como la asociación entre la alergia a Parietaria judaica con los alelos DRB1*01-DQB1*0501, el crecimiento del alelo DRB1*03 en pacientes con asma alérgico a Lolium perenne, y el efecto protector que puede ser asignado al alelo DRB1*11 para proteger frente a la sensibilización a Salsola Kali y Olea europea. Lo mismo que en la mayoría de estudios previos todas las asociaciones encontradas lo son con alelos de clase II. Posteriormente nos centramos en el estudio de la asociación encontrada con la respuesta alérgica a Artemisia vulgaris. Para ello se decidió purificar dos alergenos mayoritarios de su polen y realizar diversas determinaciones de inmunoglobulinas específicas y estudios funcionales in vitro dirigidos a valorar la respuesta de pacientes asmáticos que poseían el haplotipo DRB1*01-DQB1*0501 y en aquellos que no lo portaban. De los experimentos realizados pudimos concluir que los pacientes DRB1*01-DQB1*0501 respoden principalmente ante la proteína mayoritaria Ag 13, tanto en respuesta proliferativa como en la producción de IgE, y que la respuesta proliferativa se inhibe tanto por el anticuerpo anti-HLA-DR como por rel anti-HLA-DQ, lo que no permite asignar un papel predominante a ninguno de ambos genes. Por el contrario, en los pacientes que no son DRB1*01-DQB1*0501, la respuesta proliferativa fue más reducida, y similar frente al Ag 13 y a Art v 2, y el efecto de bloqueo aun siendo muy bajo, era aparentemente más dependiente de HLA-DR en la estimulación con Art v 2.

Autor: VERNET TOMÁS M. MAR.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: OBJETIVO Comparar la expresión en endometrio de varios ligandos para los linfocitos Natural Killer entre mujeres afectas de endometriosis y mujeres no afectas, tres ligandos para receptores activadores (ICAM-1, ALFA-3, alfa6beta4) y un ligando para el receptor inhibidor (HLA-1). MATERIAL Y MÉTODO Se obtuvieron muestras mediante legrado de pacientes sometdias a intervención. Como Grupo Control (GC) se tomaron pacientes en las que no se observó patología y como Grupo Endometriosis (GE) pacietnes en las que la única patología observada fue endometriosis. Se estudió la expresión molecular en endometrio congelado mediante inmunohistoquímica (método peroxidasa-antiperoxidasa). El estudio se dividió en una Fase Piloto, en la que se estudiaron las cuatro moléculas en un máximo de 15 pacientes de cada grupo y una Fase Definitiva, en la que se procesó todo el material disponible si en la Fase Piloto existia alguna diferencia. RESULTADOS Se recogieron muestras de 76 pacientes, 31 del GC y 45 del GE. Para LFA-3, en la Fase Piloto, se valoraron 7 muestras en el GC y 9 en el GE, no observándose diferencias entre ambos grupos (expresión en el 100% de células glandulares y en menos del 20% del estroma), no persiguiendo el estudio para esta molécula. Para ICAM-1, en la Fase Piloto, se valoraron 9 muestras en el GC y 9 en el GE, no observando diferencias entre ambos grupos (expresión en el 0% de células glandulares y en aisladas células del estroma), y tampoco se prosiguió el estudio. Para alfa6beta4, en la Fase Piloto, sí se observaron diferencias: en glándulas, 9/10 muestras expresaban la molécula polarizada y 1/10 despolarizada en el GC, mientras que 5/13 la expresaban polarizada y 8/13 despolarizada en el GE (test exacto de Fisher p=0,0376). Se pasó a la Fase Definitiva y se confirmaron las diferencias: en el GC 16/19 muestras presentaban expresión polarizada, en el GE y 10 en el GE. HLA-I se expresba en un mayor porcentaje de células en el GE, tanto glandulares (mediana 100 vs 72), como estromales (medianas 72 vs 20), pero la diferencia fue significativa sólo para estroma (U de Mannwhitney p=0,043). Se procedió a la Fase Definitiva, confirmando que la expresión de HLA I se producía en un mayor porcentaje de células en el GE (N=25) que en el GC (N=15), siendo las diferencias significativas tanto para glándulas (U de Mannwhitney p=0.043) como para estroma (U de Mannwhitney p=0.003). CONCLUSIÓN No existen diferencias en la expresión endometrial de LFA-3 e ICAM-1 pero sí existen diferencias en la expresión de alfa6beta4 y HLA-I entre ambos grupos.

Autor: SANCHO MADRID DAVID.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: CD69 es una lectina tipo C que se induce muy rápidamente tras la activación leucocitaria. En el presente trabajo demostramos que los dominios de unión a ligando y transducción de la señal de CD69 y CD23 otra lectina tipo C, actúan de manera independiente y que la señal transducida depende de la región citoplásmica. Además, hemos encontrado que la interacción y migración a través del endotelio aumenta la expresión de CD69 a través de la interacción LFA-1/ICAM-1. Para investigar la función in vivo de CD69, generamos el ratón deficiente en CD69. La selección tímica es normal y sólo se encontró un leve aumento de la población pre-B en médula ósea. Puesto que CD69 se expresa en leucocitos infiltrantes en los focos inflamatorios, se exploró el papel de CD69 en la reactividad autoinmune con un modelo animal de artritis inducida por colágeno (CIA). Los ratones CD69-/- mostraron mayor incidencia y severidad de la CIA, con respuestas T y B exacerbadas al colágeno tipo II. Los niveles de mRNA y proteína para el factor de crecimiento transformante (TGF)-beta 1 y 2, que actúa como citocina protectora en CIA, se reducían en los focos inflamatorios de los ratones deficientes para CD69, correlacionando con un aumento en citocinas proinflamatorias. La inyección local de anti-TGF-beta bloqueante aumentó la severidad de la CIA y los niveles de mRNA en los ratones CD69+/+ pero no en los ratones CD69-/-, confirmando que la deficiencia en TGF-beta explica el aumento de inflamación y sugiriendo su relación con la ausencia de CD69. El tratamiento in vivo con anti-CD69 bloqueante confirmó en un modelo independiente de artritis que el bloqueo de la interacción de CD69 con su ligando lleva a disminución local de TGF-beta y aumento de inflamación. El tratamiento in vitro de CD69 con anticuerpos agonistas indujo la producción de TGF-beta, estableciendo una conexión directa. Nuestros resultados muestran que la función no redundante de CD69 es como modulador negativo de la reactividad autoinmune y la inflamación a través de la producción de TGF-beta, que disminuye la producción de diferentes mediadores pro-inflamatorios.

Autor: ALVAREZ FERREIRA FRANCISCO JAVIER.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA UAM.

Resumen: Los timomas, tumores de baja incidencia en la población general, se encuentran entre las neoplasias primarias más frecuentes del mediastino anterior. Constituyen una entidad importante en el campo del diagnóstico diferencial tumoral en esta localización anatómica, donde ocurren patologías neoplásicas muy diferentes: tumores neurógenos, linfomas, tumores germinales, y carcinomas. Un correcto diagnóstico implica un pronóstico y actitudes terapéuticas diferentes según la entidad. La células tumoral o epitelial tímica muestra variabilidad en forma y cuantía, acompañándose del componente linfocitario T tímico, diferente si la localización del tumor es cortical o medular. Estas células linfoides son tan activas que una de ellas depende la mayoría de la proliferación tumoral, y en ocasiones cambian su morfología, planteando con las técnicas de rutina el diagnóstico diferencial con los linfomas. Duante años los patólogos han utilizado distintas clasificaciones de los timomas siguiendo diferentes puntos de vista, como el parecido del tumor con las distintas partes del órgano (clasificación organotípica de Müller-Hermelink), la distinta morfología del componente celular constituitivo de esa neoplasia, la células epitelial tímica (clasificación citológica de Kuo) o la nueva clasificación de la O.M.S. No son muchos sin embargo, los estudio sde IHQ que han profundizado en el conocimiento de esta neoplasi, constituída fundamentalmente por los elementos epiteliales pero acompañada, como se ha comentado, en la mayoría de los casos, por elementos linfoides típicos del timo. Los objetivos del trabajo son: 1,- Correlacinar las clasificaciones existentes con la actual clasificación de la O.M.S., y probar su utilidad en el campo del diagnóstico. 2,- Estudiar el perfil inmunohistoquímico básico de los componentes integrantes de la neoplasia y los factores pronósticos en los diferentes grupos. 3,- Definir el perfil inmunohistoquímico diferencial de los subtipos de timoma. 4,- Conocer la expresión de p53, Ki67 y cadherina E como factores de agresividad. 5,- Correlacinar morfología e inmunohistoquímica con los hallazgos clínicos de los pacientes. 6,- Estudio estadístico de los resultados. En el presente trabajo se han obtenido las siguientes conclusiones: 1,- Las clasificaciones actualizadas de los timomas son útiles y reproducibles para la caracterización de los distintos grupos morfológicos ópticos. 2,- La clasificación histogenética de Müller-Hermelink es la óptima y se corresponde con la posterior clasificación de la O.M.S., aceptada por consenso. 3,- Según la O.M.S., el 27,08% del os timomas de la serie corresponden al subtipo AB, 25%, A, 22,92% B1, 12,50% B2 y 12,50%B3. El panel de IHQ utilizado es útil en el diagnóstico de timoma: para diferenciarlos de otros tumores mediastínicos, las queratinas señalan las células tumorales y la CK8,18,19 discrimina los subtipos morfológicos, el componente prolfierativo simultáneo llinfoide es de predominio T y los anticuerpos CD3 y CD4 también señalan los distintos subtipos. 5,- La invasividad macro-microscópica es un buen indicador pronóstico aunque no correlaciona con los subtipos de timomas más agresivos. 6,- Los marcadores considerados para valorar la agresividad de los timomas (p53, Ki67 y cadherina E) no discriminan subtipos. El Ki67 predomina en el componente linfoide. La expresión de p53 y cadherina E está aumentada o disminuida respectivamente en los casos más agresivos. 7,- La distribución por sexo (hombres/mujeres: 1/1,28) y la edad media de 57,38 años, coinciden con la habitual en esta neoplasia. 8,- Un 29,41% de los pacientes son asintomáticos en el momento del diagnóstico, y la miastenia gravis es el proceso inicial más frecuente en un 41,17% de los casos. 9,- La presencia de miastenia no guarda relación con la presencia de CD20, aunque si tiene relación inversa con la presencia de linfocitos CD3 y CD79a, pero sin significación estadística. 10,- La miastenia se asocia más con los timomas que presentan un fenotipo medular (A y AB).

Autor: PAZ ARIAS RAQUEL DE.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE LEÓN.

Resumen: La púrpura trombocitopénica idiopática es un trastorno inmunológico caracterizado por la puesta en marcha de una respuesta inmune específica de tipo celular. Destaca por su compleja fisiopatología, donde el factor o factores etiológicos permanecen aún desconocidos, sin embargo, los factores predisponentes de este proceso son bien conocidos, entre los que destaca el factor genético, y particularmente el sistema HLA. Mediante el empleo de técnicas moleculares de tipoficación, en este estudio se ha intentado demostrar, la implicación de éste en la patogenia de la púrpura trombocitopénica idiopática, su importancia diagnóstico y pronóstica, así como su papel predictor de la elección terapéutica. Inicialmente este trabajo consistió en un estudio fenotípico o por haplotipos y posteriormente genotípico de la cohorte de pacientes con PTI. Posteriormente, este estudio se continuó, haciendo un análisis comparativo con dos poblaciones control pertenecientes a distinta región geográfica y grupo étnico, un grupo control español y un grupo control americano. Y por último se realizó un estudio de predicción de resistencia y/o susceptibilidad al tratamiento de la cohorte de pacientes a estudio. Para ello se realizó tipificación de los alelos DR mediante técnicas de baja resolución y de los alelos DQB1 y DQA1 así como de los subtipos antigénicos de DR2 mediante técnicas de alta resolución por PCR-SSOP. Los resultados de los estudios poblacionales realizados desde el punto de vista genotípico, fueron que los alelos DRB1*12 y DRB1*10 se expresaban con una frecuencia mayor en la población de pacientes con PTI comparado con ambas poblaciones control, resultando estadísticamente significativa esta expresión. Posteriormente y analizando individualmente los dos subrupos de la cohorte de pacientes con PTI se objetiva que los alelos DR2 y DR4 se expresan de manera aumentada en el subgrupo de pacientes refractarios a todas las líneas de tratamiento. Concluyendo, en este estudio se verifica la implicación del sistema HLA en la PTI, su valor diagnóstico y pronóstico por lo que resulta decisivo su análisis en la predicción de la respuesta terapéutica.

Autor: CORROCHANO JAMES M. VIRGINIA.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Las inmunodeficiencias primarias son un grupo heterogéneo de desórdenes caracterizados por defectos en genes implicados en la respuesta inmune. Las inmunodeficiencias congénitas deben diagnosticarse tan pronto sea posible, bien en neonatos o durante le período de gestación. El desarrollo de ensayos clínicos sencillos, rápidos y objetivos que puedan realizarse en cantidades de muestra, conducen al pronto dignóstico. Muchas de las inmunodeficiencias primarias se caracterizan por defectos celulares que son cuantificables por citometría de flujo. El objetivo de este proyecto de tesis ha sido el de relatar nuestra experiencia en el desarrollo de técnicas que permitan el diagnóstico precoz de aquellos individuos afectados por tres inmunodeficiencias congénitas en concreto. La sinmunodeficiencias objeto de estudio tienen en común que, a pesar de su diversa etiología, resultan en anormalidades en el número y/o funciones de los neutrófilos. Son: DEFICIENCIA DE ADHESIÓN LEUCOCITARIA TIPO I. El procedimiento desarrollo se basa en la demostración de que las inegrinas beta2 están parcial o totalmente ausentes en la superficie de leucocitos estimulados in vitro obtenidos a partir de pacientes afectados por esta inmunodeficiencia. ENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRÓNICA. El ensayo pone de manifiesto la incapacidad de los polimorfonucleares de los pacientes afectados para genera compuestos oxidantes y por tanto destruir a los microorganismos fagocitados. SÍNDROME DE HIPER-IGM. Mediante este ensayo se demuestra la ausencia del ligando CD40 en linfocitos. T-cooperdores, de forma que los linfocitos B de los individuos afectados, al no ser incluidos a diferenciarse, no experimentan cambios de isotipo y son incapaces de producir IgA. IgC e IgE. Por último, se describe el caso clínico de una paciente diagnosticada con el Síndrome de Hipereosinofilia, que sin ser una inmunodeficiencia, ha sido evaluado mediante diversas técnicas basadas en las citometría de flujo y que demuestran un deficiente mecanismo de muerte celular por apoptosis de los eosinófilos.

Autor: MARTÍNEZ MARTÍNEZ M. PILAR.
Año: 2003.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA - UNIVERSITAT DE VALÉNCIA.

Resumen: En esta tesis doctoral hemos investigado el papel de la foforilación en el plegamiento de la proteína básica en la mielina (PBM*II) y su implicación en la correspondiente respuesta autoinmune. Nuestros resultados sugieren que en la patogénesis una fosforilación aberrante de la (PBM*II), podrían generar especies moleculares más uniformes y resistentes a la degradación que constratarían con las PBM*II en condiciones de normalidad. Adicionalmente se ha investigado la expresión celular y la interacción de GPBP con proteínas implicadas en la patogenia autoinmune y degenerativa, comprobándose que está proteína presenta una localización muy heterogénea, así como su forma más común no corresponde a una proteína generada desde su metionina canónica. Finalmente, se ha demostrado su interacción con proteínas implicadas en la patogenia autoinmune y degenerativa.

Autor: LUQUIN DE CARLOS M. ESTHER.
Año: 2003.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE NAVARRA.

Resumen: La urticaria crónica es una enfermedad cutánea que se caracteriza por la aparición de lesiones eritematohabonosas con prurito generalizado que puede asociarse a angioedema. La frecuencia de dichos habones suele ser diaria o al menos de dos episodios/semana, los síntomas deben persistir durante al menos 6 semanas para que pueda considerarse como urticaria crónica. En el 80% de los casos de urticaria crónica se desconoce la causa, denominándose idiopática. Se cree que en un 35-40% de los pacientes con urticaria crónica idiopática la enfermedad tiene un origen autoinmune, debida a la presencia de un anticuerpo IgG dirigido contra el receptor de IgE o bien contra la IgE que provoca la activación de mastocitos y basófilos. Con esta tesis se ha querido profundizar por una parte en la hipótesis de autoinmundad y en el comportamiento de los basófilos de pacientes con urticaria crónica, y por otra parte en el perfiel inmunológico de dicha enfermedad. Estudiamos en primer lugar la capacidad de los sueros de urticaria para activar a basófilos de controles sanos, encontrando que el 42% de los sueros de pacientes con urticaria crónica contienen activadores de basófilos y de mastocitos que provocan la liberación de histamina, leucotrienos así como de IL4. También se estudió el efecto que tiene la IL3 en la liberación de histamina producida por los basófilos de pacientes con urticaria crónica tras la activación con sueros, observando que incrementa la sensibilidad sin disminuir la especificidad. Encontramos niveles de IL4 significativamente mayore sen los sueros de pacientes con urticaria frente a los de atópicos y controles, conteniendo estos dos últimos grupos niveles similares de dicha citoquina. No se encontraron niveles detectables de IFN-gamma ni de IL5 en los sueros. Al estimular los linfocitos de pacientes con urticaria crónica y controles con ionomicina y PMA, obtuvimos mayor cantidad de linfocitos CD4+ activados que expresan tanto IL4 como IFN-gamma en pacientes con urticaria crónica que en controles sanos, sin encontrar diferencias en la población CD8+ de ambos grupos, por lo que el perfil inumunológico seria Th0. Hallamos una menor liberación de histamina en los basófilos de pacientes con urticaria al ser estimulados con anti-IgE y C5a sin encontrar diferencias al estimular con bradilinina ni ocn MCP-1. Sin embargo, los basófilos con urticaria crónica incubados con sueros de controles sanos y con urticaria liberan significativamente más histamina que los basófilos controles. Las conclusiones que deducimos de este trabajo son: El perfil inmunológico de la urticaria crónica corresponde a un patrón Th0, ya que los linfocitos CD4+ activados producen tanto IL4 como IFN-gamma. El basófilo procedente de pacientes con urticaria crónica posee unas características propias que le diferencian del comportamiento de basófilos controles, como son la liberación basal, la respuesta frente a estímulos tanto IgE dependientes como IgE independientes (C5a), y la basopenia. Además, los resultados nos sugieren que el factor que activa a los basófilos controles depende del suero y lo que activa a los basófilos de urticaria parece depender de factores intrínsecos del propio basófilo.

Autor: NIETO RUBIO ELENA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: El inmunosupresor Mofetil Micofenolato (MMF) es un éster del ácido micofenólico (MPA), el cual inhibe de forma reversible y no competitiva a la inosín 5'monofosfato deshidrogenasa (IMPDH) que es una enzima clave en la síntesis de novo de nucleótidos de purina. La principal consecuencia de la inhibición de la IMPDH es la depleción del GMP intracitoplasmático y, consecuentemente, del GTP y dGTP. La acción del MMF es selectiva sobre los linfocitos y los monocitos, ya que dependen del a síntesis de novo para obtener nucleótidos de guanosina mientras que otros tipos celulares pueden usar otra vía alternativa. Los principales efectos de este bloqueo metabólico son: inhibición de la proliferación celular, alteraciones en la glicosilación de ciertas moléculas de adhesión e inhibición de la sintasa inducible del óxido nítrico. El objeto de este estudio fue analizar los efectos de la administración del MMF en la inducción y en el desarrollo de la nefritis experimental autoinmune inducida por mercurio. El mercurio, en forma de sal inorgánica (HgCl2), induce en la rata Brown Norway una activación policlonal de células B dependiente de células Th2 autorreactivas que produce una nefritis autoinmune. Esta nefritis se caracteriza por la síntesis de auto-anticuerpos (Acs), depósitos glomerulares de IgG acompañados de un infiltrado de células mononucleares y proteinuria de rango nefrótico. Las lesiones renales en este modelo experimental son máximas entre los días 13 y 15, tras los cuales se produce la autorregulación de la enfermedad y, a partir de la 3ª semana, los animales se recuperan del daño renal. Los resultados obtenidos en este estudio demostraron que el tratamiento preventivo con MMF inhibió la producción de Acs, evitando así los depósitos glomerulares de IgG y el desarrollo de la proteinuria. Además, el uso temprano del MMF bloqueó por completo la extravasación de células mononucleares al intersticio renal y mantuvo la síntesis de mediadores inflamatorios (TNFalfa, MCP-1 y NO) a niveles próximos a los basales. Sin embargo, cuando el fármaco se administró una vez desarrollada la enfermedad no presentó efectos moduladores sobre la síntesis y depósitos glomerulares de Acs, ni sobre la proteinuria. No obstante, evitó la aparición del infiltrado inflamatorio intersticial y moduló a la baja la síntesis de los mediadores inflamatorios mencionados cuando la enfermedad se hallaba en su punto álgido. Además, estudios sobre la expresión y función de la integrina VLA-4, molécula clave para el inicio y fases efectoras de esta nefritis experimental, mostraron que el MMF alteró la función de VLA-4 en linfocitos de rata reduciendo la afinidad por su ligando VCAM-1. Por lo tanto, el uso de MMF presenta efectos protectores en la inducción de la respuesta autoinmune impidiendo el desarrollo de la nefritis inducida por mercurio, mientras que los efectos terapéuticos de este fármaco se restringen a sus propiedades anti-inflamatorias reflejadas en: la ausencia de infiltrado celular (posiblemente mediada por la alteración en la vía de adhesión VLA-4/VCAM-1) y la reducción de la síntesis de mediadores inflamatorios.

Autor: ÁLVAREZ GARCÍA GEMA.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Neospora caninum es un protozoo Apicomplexa que afecta fundamentalmente el ganado bovino y está considerado como uno de los agentes transmisibles productores de aborto más importante en esta especie doméstica. La detección de anticuerpos específicos en el ganado bovino se viene realizando como técnica de rutinaria de diagnóstico para poner en evidencia la infección por N.caninum en los animales adultos y se utiliza como técnica complementaria en el diagnóstico de las neosporosis en fetos abortados. Sin embargo, el diagnóstico serólogico presenta una serie de limitaciones. Por otra parte, la identificación y caracterización de los antígenos inmunodominantes de N.caninum abre las puertas al desarrollo de nuevas pruebas inmunodiagnósticas más sensibles y específicas. El presente estudio confirmó la existencia de dos poblaciones bovinas serológicas independientes -fetos y reproductoras- y justificó la necesidad de emplear diferentes puntos de corte para cada una de las técnicas serológicas en función de la edad del animal y el objetivo de la técnica (diagnóstico de la infección o del aborto). En el caso de las reproductoras infectadas se recomendó el empleo de dos puntos de corte distintos, uno para máxima sensibilidad y otro para máxima esepcificidad junto con el western blot, únicamente, con el objetivo de confirmar los resultados dudosos. Cuando se estudió el patrón de reconocimiento en el ganado bovino infectado se reconocieron 4 antígenos inmunodominantes de 17-18, 34-35, 37 y 60-62 kDa. En concreto, la identificación de la fracción antigénica de 17-18 kDa fue el mejor marcador de la infección y estuvo directamente implicado en las fluctuaciones de los títulos de anticuerpos que tienen lugar durante la gestación en las reproductoras infectadas que abortan, razón por la cual se sugirió su empleo como marcador diagnóstico de reactivación en los animales infectados a priori de forma crónica. A continuación se estudió la utilidad diagnóstica del antégeno inmunodominante de 17-18 kDa -p-17- en la prueba de western blot. La p-17 demostró tener un elevado valor diagnóstico con independencia de la edad de los animales, razón por la cual podría ser un candidato ideal para el desarrollo de futuras pruebas diagnósticas serológicas basadas en antígenos recombinantes. Finalmente, se abordó la caracterización del antígeno inmunodominante de N.caninum -p-17- con interés en el inmunodiagnóstico siguiendo dos aproximaciones diferentes y complementarias. Para ello se planteó la identificación de los genes codificadores del antígeno de interés. Mediante la construcción de una genoteca de cDNA de taquizoítos de N.caninum y el cribado de ésta con anticuerpos policlonales específicos dirigidos frente a la fracción proteica de 17 kDa (APA-17). Se detectó de forma mayoritaria el clon 4.1 que contiene una fase de lectura que codifica para la proteína de gránulos densos GRA7. La elevada especificidad del anticuerpo APA-17 y el reconocimiento del clon 4.1 apuntaron a la posibilidad de que la p-17 podría proceder de un procesamiento proteolítico de la proteína GRA7 o la existencia de epítopos compartidos entre ambas proteínas. Al realizar la caracterización de la p-17 mediante electroforesis en geles bidimensionales y western blot se comprobó que dicha fracción estuvo compuesta por 4 polipéptidos.

Autor: MIRET MAS CARLOS.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La apoptosis es un proceso de muerte celular programada que está involucrada en la selección del repertorio de linfocitos T y en el mantenimiento de la tolerancia, ya que es el mecanismo por el que se eliminan las células que podrían dar lugar a respuestas autoinmunes. Existen evidencias de que la alteración en los mecanismos apoptóticos están implicados en la patogenia y la actividad de las enfermedades autoinmunes sistémicas, de las cuales, el LES es la más representativa. Se han identificado en el ser humano algunos genes que codifican oncoproteínas y citocinas cuya transcripción parece ser crucial en este proceso: unos pro-apoptóticos (fas, p53, y TNF-alfa) y otros anti-apoptóticos (bcl-2 y IL-10). Se sospecha que cambios en la expresión de los mismos podrían desempeñar algún papel en la patogenia del lupus eritematoso sistémico, al favorecer la proliferación de determinadas poblaciones celulares de efecto autorreactivo. Con los trabajos de la presente tesis doctoral nos propusimos: determinar la implicación de los oncogenes (bcl-2, fas y p53) y la citocinas (IL-10 y TNF-alfa) en la disregulación apoptótica que presentan los pacientes con lupus eritematoso sistémico; estudiar la interrelación existente entre ellos; y analizar la relación de las posibles disregulaciones a los elementos que participan en la apoptosis con la actividad de la enfermedad lúpica. Los resultados obtenidos muestran cómo los oncogenes fas, bcl-2 y p53, las citocinas IL-10 y TNF-alfa, y la fracción proteica soluble del Fas tienen una notable importancia en la patogenia y la actividad de la enfermedad lúpica. Las vías apoptóticas del Fas y p53 son independientes entre sí. Sin embargo, diversas citocinas (IL-10, TNF-alfa), oncoproteínas (Bcl-2) y fracciones proteicas solubles (sFas) pueden ser las encargafas de relacionarlas entre sí. La interferencia de estas vías apoptóticas produciría una eliminación deficiente de los linfocitos autorreactivos. Ello favorecería su supervicencia, lo que provocaría las alteraciones de disregulación inmunológica propias del LES.

Autor: HERNÁNDEZ RODRÍGUEZ JOSÉ.
Año: 2002.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: La arteritis de células gigantes (ACG) es una vasculitis granulomatosa de vasos de mediano y gran calibre que afecta con preferencia a las ramas de la arteria carótida. Las manifestaciones craneales clásicas y características de esta enfermedad, como la cefalea y la claudicación mandibular, derivan de la afectación inflamatoria y a veces oclusiva de las arterias del territorio carotídeo. Las más temidas son las que provocan la isquemia del territorio afectado por oclusión vascular. La más frecuente es la amaurosis que se produce por oclusión de las arterias ciliares posteriores, ramas de la arteria oftálmica, que irrigan el nervio óptico y producen la neuropatía óptica isquémica anterior. Esta enfermedad también se caracteriza por una inflamación sistémica o de fase aguda considerable, que clínicamente se manifiesta en forma de fiebre y pérdida de peso en más de la mitad de los pacientes. La característica analítica más común deriva también de esta respuesta inflamatoria sistémica y es la elevación de los reactantes de fase aguda, que junto con una anemia por bloqueo del hierro medular comporta de forma casi invariable un aumento importante de la velocidad de sedimentación globular. Las citocinas proinflamatorias (TNFalfa, IL-6 e IL-1beta) participan en la respuesta inflamatoria mediante la inducción de las manifestaciones clínicas sistémicas y las alteraciones biológicas. Algunas de ellas modulan la respuesta vascular a la inflamación mediante la amplificación de la respuesta inflamatoria (inducción de la expresión de moléculas de adhesión y quimiocinas), fenómeno que conducen a la oclusión vascular (hiperplasia intimal) y finalmente fenómenos reparativos del territorio dañado y compensatorio, como la angiogénesis, que nutre con nueva vascularización el tejido isquémico. En un trabajo previo se demostró que la intensidad de la respuesta inflamatoria sistémica condiciona una diferente probabilidad de presentación de fenómenos isquémicos. Esta respuesta inflamtoria sistémica es valorada mediante los siguientes parámetros inflamatorios; presencia de febrícula o fiebre, pérdida de peso superior a 4 kg, hemoglobina inferior a 110mg/dL y VSG >85 mmH2O, Así, una respuesta inflamatoria intensa comporta un menor riesgo de presentación de complicaciones isquémicas y por el contrario una respuesta inflamatoria débil conlleva una mayor probabilidad de desarrollar eventos obliterativos. Por tanto, los objetivos de la presente Tesis Doctoral fueron estudiar la participación de las citocinas proinflamatorias, tanto a nivel arterial como a nivel sistémico, en el desarrollo de la respuesta inflamatoria sistémica, su relación con los requerimientos corticoideos durante la evolución; y el papel de las mismas en la presentación de fenómenos isquémicos. TRABAJOS 1,- En el primer Trabajo se estudió la relación de los niveles circulantes de citocinas proinflamatorias con la intensidad de la respuesta inflamatoria sistémica y la relación del estado inflamatorio inicial con la duración del tratamiento corticoideo. En la primera parte se incluyeron 62 pacientes y 15 controles, en los que se recogieron los datos clínicos y analíticos relacionados con la respuesta de fase aguda, con especial interés en aquellos parámetros inflamatorios. Los pacientes se dividieron en 2 grupos según la intensidad de la respuesta inflamatoria sistémica (débil con 2 ó menos parámetros inflamatorios; e intensa con 3 ó 4 parámetros inflamatorios). Se determinaron los niveles séricos de TNFalfa, IL-6 e IL-1beta mediante ELISA. Existía una correlación significativa de la IL-6 con la PCR, y del TNFalfa con la VSG, la haptoglobina y la hemglobina, todos ellos relacionados de forma directa con la respuesta de fase aguda. Ambas citocinas mostraron mayores niveles en pacientes respecto a los controles sanos, y también fueron superiores los niveles circulantes en los pacientes con una respuesta sistémica intensa respecto a los pacientes con una respuesta débil. Los niveles de IL-1beta fueron indetectables en la mayoría de los pacientes y de los controles. Estos resultados junto con la correlación con el resto de reactantes de fase aguda indican que ambas citocinas participan de forma importante en la respuesta inflamatoria sistémica. En la segunda parte de este Trabajo también se valoró la relación del estado inflamatorio inicial con la duración del tratamiento. Para ello se calculó la duración del tratamiento hasta alcanzar una dosis de mantenimiento de prednisona inferior a 10 mg/día siguiendo un esuqema terapéutico descendente homogéneo en una serie de 75 pacientes. Los pacientes también se dividieron en dos grupos según la intensidad de la respuesta inflamatoria sistémica. En el análisis se observó que durante el seguimiento presentaron más recaídas y requirimiento más cantidad de corticoides los pacientes con una respuesta inflamatoria sistémcia intensa. Mediante un análisis de supervivencia se obtuvo que el 50% de los pacientes con un estado inflamatorio débil tardaron una mediana de 40 semanas en disminuir de 10 mg/día, mientras que los pacientes con una respuesta inflamatoria intensa requieren 62 semanas (p=0,006). Por tanto los pacientes con una reacción inflamatoria intensa inicial necesitan más cantidad y tiempo de tratamiento para controlar la enfermedad. 2,- En el segundo Trabajo se estudió la influencia o relación que podría tener la producción de las citocinas proinflamatorias a nivel tisular en la intensidad la respuesta inflamatoria sistémica y en la evolución clínica, concretamente en los requerimientos corticoideos. Se incluyeron 74 pacientes, en los que se recogieron los datos clínicos, sobretodo los relacionados con la respuesta inflamatoria sistémica. Los pacientes fueron tratados de forma homogénea con un esquema terapéutico descendente y se recogió el timpo en semanas requerido para alcanzar una dosis de mantenimiento inferior a 10mg/d. Se determinó la producción de citocinas a nivel tisular mediante cuantificación de ARNm e inmunohistoquímica. Se extrajo ARN de arterias temporales de 36 pacientes y 11 controles, se sintetizó ADNc mediante transcripción reversa y mediante una PCR cuantitativa a tiempo real se cuantificó la concentración de ARNm de cada citocina en base a un control endógeno (ARN ribosómico) y a una curva patrón de ARNm de línas celulares productoras de estas citocinas. La concentración de ARNm en los grupos inflamatorios extremos (con 0 vs 3-4 PI) fue superior en el grupo con una respuesta inflamatoria sistémica intensa para IL-1beta (p=0,012) e IL-6 (p=0,034). No se observaron diferencias en la producción de TNFalfa. Se estudió también la producción de estas citocinas mediante inmunohistoquímica en 74 pacientes y 15 controles. Se seleccionaron arterias con la densidad de infiltrado inflamatorio similar y equiparable en todas ellas, en las que se utilizaron anticuerpos contra TNFalfa, IL-1beta e IL-6. La expresión inmunohistoquímica fue cuantificada por 3 investigadores por separado y sin conocimiento clínico previo. Para la valoración se diseñó un índice o score que consideró el porcentaje de células positivas en la capa granulomatosa (capa media-íntima), que fue expresado como: 1: del 0 al 25%, 2: del 26 al 50%, 3: del 51 al 75% y 4: del 75% al 100% de células positivas. Cuando se compararon los mismos grupos extremos (0 vs 3-4 parámetros inflamatorios) se observaron diferencias significativas en la expresión de las 3 citocinas, con niveles superiores en el grupo de inflamación intensa (TNFalfa: p=0.028, IL-6: p=0.023 e IL-1beta: p=0.018). Con la inclusión de todos los pacientes y el análisis de los 2 grupos según la intensidad inflamatoria (débil con 0, 1 ó 2 párametros inflamatorios vs intensa con 3 ó parámetros inflamatorios) se observaron diferencias en los niveles de IL-6 (p=0.01) y TNFalfa (p=0.014). Se estudió también la correlación entre los niveles tisular de ARNm de TNFalfa y el tiempo requerido para alcanzar una dosis de prednisona mantenida

Autor: PÉREZ FERNÁNDEZ INMACULADA.
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La Leucemia Linfática Crónica B (LLC-B), es una enfermedad caracterizada por la proliferación de células linfoides maduras no inmunocompetentes. Se han descrito alteraciones de la inmunidad celular en la LLC-B, observando una falta de uniformidad en los resultados publicados. El considerable significado clínico-biológico de las alteraciones de la inmunidad en la LLC-B y las discrepancias existentes al respecto han llevado al planteamiento de este trabajo. En el estudio se incluyeron 115 pacientes diagnosticados de LLC-B entre Octubre de 1996 y Junio de 2001, y un grupo control compuesto por 121 individuos procedentes en su mayoría de donantes voluntarios de sangre. El estudio inmunofenotípico se realizó en sangre periférica, por inmunofluorescencia directa con técnicas de triple marcaje y análisis por citometría de flujo. El patrón inmunológico de la LLC-B, hallado en nuestro estudio fue el siguiente: Expresión de marcadores B, con intensidad débil y patrón dispersión homogéneo. Positividad débil o moderada para los antígenos CD23 y CD5 y una dispersión heterogénea. Expresión de bajas cantidades de inmunoglobulinas de superficie, con un patrón homogéneo para las cadenas k y heterogéneo para las *. Nuestros resultados muestran un aumento del valor absoluto de linfocitos T y de las distintas subpoblaciones en los pacientes leucémicos. El aumento de linfocitos T CD8+ y linfocitos T dobles negativos, se relacionó con una mayor masa tumoral. En los pacientes que presentaban un mayor aumento de linfocitos T CD8+, sus células leucémicas mostraban un patrón fenotípico característico, con expresión de un mayor número de moléculas antigénicas en la superficie celular. Pensamos que el aumento de la población T obtenido en nuestro trabajo, podrían ser un mecanismos reactivo del sistema inmune de lucha antitumoral. Las alteraciones de la inmunidad celular halladas en nuestro trabajo podrían sugerir la posibilidad de manipular la respuesta inmunitaria en estrategias terapéuticas contra la leucemia.

Autor: TORRES BLANCH ROSA MONTSERRAT.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: La dermatitis atópica (DA) es una enfermedad alérgica de la piel que se manifiesta en individuos atópicos que entran en contacto con un alergeno frente el cual son hipertensibles. La DA se manifiesta en el hombre y en el perro por la aparición súbita de picor y de lesiones cutáneas inmediatas (fase temparano o EAR). Además, en un elevado porcentaje de pacientes, la enfermedad evoluciona hacia una fase tardía (LAR) que se sustenta en un proceso inflamatorio y que es responsable posiblemente de los síntomas crónicos de la enfermedad. En la DA humana y canina la inflamación se constituye mayoritariamente de células dendríticas y linfocitos T. En ambas especies se ha demostrado que la respuesta inmunitaria es inicialmente del tipo Th2 y a medida que la enfermedad se hace crónica cambia al tipo Th1. Durante el reclutamiento de las células inflamatorias se activan entre otras, las moléculas de adhesión. Probablemente en dicha actividad participan los mastocitos (MC) de la dermis. La población mastocitaria está en un lugar privilegiado para coordinar el proceso inflamatorio por su situación anatómica próxima a los vasos sanguíneos y por su contenido en mediadores pro-inflamatorios. El conocimiento de los mecanismos de instauración de la inflamación en la DA es fundamental para establecer estrategias terapéuticas encaminadas a reducirla. Nos propusimos estudiar la expresión de la selectina P, el ICAM-1 y el TNF-alfa en la DA, así como la contribución de los MC a su inducción en modelos caninos in vitro e in vivo. Se seleccionaron perros con DA espontánea en el Hospital Clínic Veterinari de la Universitat Autónoma de Barcelona. Mediante inmunohistoquímica, en las lesiones cutáneas de los animales seleccionados se observó una mayor expresión de selectina P que en las zonas no lesionadas. Dicho aumento se correlacionaba con una mayor adherencia de los leucocitos al endotelio vascular. Además, mediante estudios in vitro con líneas celulares de MC caninos y células endoteliales de carótida canina, demostramos que los mediadores mastocitarios son capaces de inducir la expresión de selectina P endotelial. Esto sugiereuna relación funcional entre los MC y las células endoteliales de la dermis en la DA durante el establecimiento del proceso inflamatorio, y puede reflejar la importancia de la selectina P en las fases iniciales de la inflamación alérgica. Se evaluó también la expresión de TNF-alfa e ICAM-1 en los perros con DA espontánea. No se detectó un aumento significativo de ninguna de estas dos moléculas en las zonas lesionadas, pero los datos sugieren que existe una tendencia a la sobre-expresión de ambas. Se observó también que en la piel canina los MC son la fuente principal de TNF-alfa y se comprobó mediante estudios in vitro que el TNF-alfa mastocitario es capaz de inducir la expresión de ICAM-1 endotelial. De nuevo se establece una relación funcional de eje MC/TNF-alfa/ICAM-1 endotelial que puede tener relevancia en la patogenia de la inflamación alérgica en la DA, aunque se requiere de nuevos experimentos para determinar su contribución al proceso inflamatorio. Las dificultades que entrañan los estudios en perro con DA natural y el interés por evaluar el papel de los MC en este proceso in vivo, nos llevó a contribuir a la caracterización de un modelo canino de dermatitis alérgica: el perro hipersensible a Ascaris suum. La inyección intradérmica de antígeno (Ag) purificado de Ascaris induce una reacción inmediata (pápula) de la que son responsables mayoritarios los MC. Observamos que, además, se produce una inflamación en la dermis muy similar a la que se observa en el hombre. En el establecimiento del proceso inflamatorio en este modelo juega un papel relevante la selectina P, de la cual probablemente los MC sean inductores. Además de su contribución a los síntomas inmediatos, los MC son capaces de promover la actividad pro-inflamatoria mediante la liberación de TNF-alfa y la inducción de la expresión de ICAM-1 y de selectina P. Dicha contribución puede tener especial relevancia en enfermedades atópicas como la DA en la cual se observa un incremento de diversas moléculas de adhesión y citocinas. Según nuestros estudios la selectina P, una molécula inducida por la actividad mastocitaria y expresada en las lesiones cutáneas de perros con DA, pudiera ser decisiva en el inicio del proceso inflamatorio alérgico y por lo tanto constituir una diana interesante para su control farmacológico. La fluctuación de la expresión de selectina P ha sido observada también in vivo en el perro hhipersensible de Ag de Ascaris, lo cual subraya la idoneidad de este modelo en el estudio de los mecanismos de inflamación alérgica, especialmente puesto que hemos establecido un protocolo de sensibilización que permite su rápida inducción.

Autor: JURADO ESCAMEZ PILAR.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Se realiza un estudio inmunohistoquímico en material humano y de ratas, que sirva de base comparativa para solucionar las controversias suscitadas utilizando tres moléculas que podrían estar implicadas en la patología de las células C. Los CaR se han descrito en las células C normales y tumorales, pero se desconoce si su expresión está relacionada con el estado proliferativo o el patrón histológico. El uso de técnicas inmunohistoquímicas para ver la expresión del CaR en las células C tiroideas fue realizado por Garrett (1995), demostrando su expresión, pero no en líneas celulares de CMT. Nuestro estudio tanto en material humano como en rata, ha demostrado inmunorreacción para CaR en todas las células del carcinoma sin relación con el patrón histológico. Se demuestra una mayor inmunorreacción para el CaR en las células de adenoma y carcinoma de rata, en relación con la inmunorreacción para calcitonina. No existen estudios inmunohistoquímicos previos que valoren el estado de los VDR en las células C. En 1991 Zabel realizó un estudio sobre el receptor de calcitriol, demostrándolo mediante ME. Un año antes Naveh-Many, por hidradación in situ no demostró la presencia del VDR en las células C. Hemos demostrado la inmunorreacción para VDR en los distintos estados proliferativos de las células C. En los casos de rata, la inmunorreacción para VDR, fue siempre menor a la expresada para calcitonina, indicando por tanto una estrecha relación conlos niveles de calcitonina. Recientemente se ha demostrado el RNAm del TTF-1 por hidradación in situ en las células C. Intentamos valorar la presencia de esta molécula en las células C y su posible relación con la expresión de CaR y calcitonina. Katoh en el 2000 fue el primero que aplicó técnicas inmunohistoúimicas para valorar la expresión del TTF-1 en células C y CMT, mostrando una respuesta débil y heterogénea en las células C, siendo todos los casos positivos. En contra de los resultados obtenidos por Katoh, en nuestro estudio, los casos positivos han sido reducidos, por tanto no podemos afirmar que la expresión del TTF-1 sea constante en todos los casos. Nuestros resultados coinciden con los obtenidos por Ramos-Vera (2002) que presentan casos con inmunorreacción negativa para TTF-1.

Autor: LAG ASTURIANO M. ENCARNACIÓN.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las neoplasias oncocíticas u oxifílicas se presentan en diversos órganos, como glándula tiroides, paratiroides, riñón y glándula salival. En este trabajo de Tesis Doctoral se dedició estudiar una serie de tumores oncocíticos de distintos órganos, con el fin de detectar, por método inmunohistoquímico, la posible expresión de la proteína RET. Para ello se aplicaron los anticuerpos monocional y policional en 6 onocitomas renales, 28 tumores de células de Hürthle tiroideos, 3 adenomas oxifílicos parotiroideos y 29 tumores de Warthin parotídeos. La inmunorreacción resultó positiva en el 100% de los casos e implicaba, al menos, el 90% del área tumoral. Fue más intensa para los oncocitomas y tumor de Warthin y ligeramente más débil para el adenoma oxifílico de paratiroides. Esta sobreexpresión de la proteína RET es lógica en tumores de células de Hürthle del tiroides, donde está demostrado reordenamiento ret/PTC. De distinta manera, en los casos de paratiroides, riñón y parótida, se cuestionan estos resultados, pues no está demostrado éste reordenamiento. Probablemente se trate de una reacción cruzada con una proteína distinta, pues no hay que olvidar que la células oncocítica muestra avidez por gran cantidad de anticuerpos. Asímismo, se cuestiona la relación causal entre la tiroiditis de Hashimoto y el carcinoma papilar de tiroides, pues diferentes trabajos se contradicen sobre si ésta tiroiditis se asocia a reordenamiento ret/PTC o no. Actualmente se interpreta el cambio oncocítico citoplásmico como un proceso degenerativo o un fenómeno de envejecimiento celular. A través de este estudio también se ha pretendido hacer una aproximación al mejor conocimiento de la naturaleza de la célula oncocítica, valorando su capacidad apoptótica, mediante la determinación inmuohistoquímica de proteínas reguladoras (Bcl-2, caspasa-3). La inmunorreacción resultó positiva en el 90% de los casos e implicaba, al menos, el 80% del área tumoral. La sobreexpresión de Bcl-2, una proteína inhibidora de la apoptosis, puede justificar la escasa tendencia de las células oncocíticas a la apoptosis. De distinta manera, la expresión de caspasa-3, un enzima que activa la apoptosis, es un hecho contradictorio. Quizá las mitocondrias alteradas de la célula oncocítica no sean capaces de activar las caspasas y con ello los acontecimientos proteolíticos de la apoptosis.