INMUNOPATOLOGIA, 3

Autor: ARCE JIMENEZ CRISTINA.
Año: 2000.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: VETERINARIA .
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA. UNIVERSIDAD DE CORDOBA.

Resumen: En este trabajo se ha conseguido aislar la IgG+IgM de perro a partir de sueros de animales sanos y enfermos, considerado de gran interes dada la escasez de este tipo de reactivos en el mercado y de la importancia de los estudios inmunologicos en las especies de interes veterinario. A partir de la IgG comercial se ha producido y posteriormente caracterizado un panel de seis anticuerpos (CA2E9, CA3B8, CA3H1, CA4E7, CA4F1, CA5B2) frente a dicha inmunogloblulina. Dada la reaccion cruzada de los anticuerpos producidos con otras inmunoglobulinas y con otras especies, se han obtenido sin necesidad de coste y trabajo adicional unos reactivos a usar en estudios que impliquen dichas inmunoglobulinas en dichas especies. Como resultado final de este trabajo, y tras la completa caracterizacion de los anticuerpos obtenidos, se han propuesto diversos metodos diagnosticos (leishmaniosis y penfigo principalmente) de gran interes para los diagnosticos clinicos y experimentales en inmunologia canina directamente,y por extrapolacion, en inmunologia veterinaria en general. Se deja abierta la posibilidad del desarrollo de nuevos metodos diagnosticos empleando los reactivos producidos en este trabajo.

Autor: CONEJERO GARCIA-QUIJADA RAMON.
Año: 2000.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SAN JUAN.

Resumen: Los pacientes criticos, especialmente los admitidos con un cuadro de sindrome de Respuesta Inflamatoria Sistemica (SIRS), presentan, habitualmente, un descenso de los niveles plasmaticos de glutamina. La deficiencia de este aminoacido condiciona un aumento de la permeabilidad de la barrera intestinal, determina un descenso de mla competencia inmune local y sistemica, facilita la translocación bacteriana (TB) y la aparicion de infecciones de origen enterico y perpetua la respuesta inflamatoria sistematica. Los objetivos de este estudio se han basado en la evaluacion de los efectos de la administracion de una dieta enteral enriquecida con glutamina sobre la permeabilidad intestinal (PI), la incidencia de infecciones nosocomiales y la mortalidad en pacientes criticos con SIRS. El diseño es el de un estudio prospectivo, aleatorizado, simple ciego y multicentrico. El ambito del estudio se ha centrado en unidades de cuidados intensivos de hospitales de segundo y tercer nivel y ha incluido ochenta y cuatro pacientes para recibir una dieta enteral enriquecida con glutamina (GG)o la misma dieta entera sin glutamina (GC), que se administro durante 7 dias en ambos casos. Los principales resultados indican que la permeabilidad intestinal esta significativamente aumentada en el GG que en GC(P

Autor: FOLCH PUY EMMA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSITAT DE BARCELONA.

Resumen: La pancreatitis aguda grave es un proceso inflamatorio asociado a diferentes complicaciones sistémicas entre las que se incluye, principalmente, el fallo respiratorio agudo. En este estudio se investigó los mediadores que regulan la expresión de la P-selectiva pulmonar en un modelo experimental de pancreatitis aguda inducida en rata. La primera hipótesis estudiada fue la activación de los macrófagos hepáticos como células que liberan citocinas implicadas en la activación de moléculas de adhesión en el pulmón. Se observó que la lesión pulmonar asociada a la pancreatitis está mediada por la activación de las células de Kupffer y que la pancreatitis induce la expresión de P-selectina en el endotelio pulmonar, siendo éste un proceso independiente de la activación de las células de Kupffer. Se estudió entonces una via alternativa de activación de la P-selectina. Una fuente importante de radicales libres de oxígeno (RLO) en la pancreatitis aguda es la enzima xantina oxidasa y se conoce que estos RLO actuan induciendo la expresión de P-selectina en modelos in vitro. En nuestro modelo experimental observamos que el incremento de la expresión de la P-selectina en pulmón parece ser disparada por un mecanismo dependiente de los radicals libres generados por la xantina oxidasa liberada por el páncreas. Para estudiar el mecanismo, se evaluó la expresión de P-selectina y la síntesis del factor de activación plaquetario (PAF). Como es conocido que la poli(ADP-ribosa) sintetasa (PARS) actua como mediador de la activación de la P-selectina en respuesta a la estimulación de los RLO, se evaluó el efecto de la inhibición de este enzima. Finalmente, agentes que actuan como "scavengers" del radical superóxido (superóxido dismutasa) o del peróxido de hidrógeno (catalasa) se utilizaron para identificar el papel de cada componente en la patofisiología de la disfunción pulmonar asociada a la pancreatitis . Se observó que la inhibición de la PARS o el peróxido de hidrógeno evitaban la regulación de la P-selectina, la generación de PAF y el reclutamiento de neutrófilos en el pulmón. La dismutación del superóxido evitó la infiltración de neutrófilos y la generación de PAF, pero no tuvo efecto sobre la expresión de la P-selectina en el entoelio pulmonar tienen lugar por la generación de RLO por parte de la xantina oxidasa circulante. El peróxido de hidrógeno y la actividad de la PARS son mediadores implicados en el proceso.

Autor: PUJOL MONTCUSI JOSE ANTONIO.
Año: 2000.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El envejecimiento cutáneo intrínseco muestra una histología distinta del fotoenvejecimiento. Se pretende estudiar los cambios que la edad y el daño actínico crónico causan a nivel de las fibras elásticas y de la celularidad dérmica, y en especial sobre el dendrocito dérmico (DD). El DD es una célula dendrítica que expresa el factor XIIIA, y se le atribuye un papel inmunológico y de reparación tisular. En este trabajo se determina la expresión inmunohistoquímica de llisozima, vimentina, S-100 y factor XIIIA sobre piezas de piel joven y envejecida, procedentes de piel fotoexpuesta y cubierta de 80 individuos. Se incluyen muestras de patología cutánea inflamatoria y tumoral para su comparación con la piel normal y fotoenvejecida. Se estudian estadísticamente las variables cuantificables registradas (edad, daño actínico clinico, grado histológico de elastosis, y el número de células factor XIIIA + por campo de 250X, su aspecto citoplasmático y de sus dendritas). El anticuerpo, anti-lisozima se muestra como un buen marcador de las fibras elásticas degeneradas a causa del daño actínico. Se evidencian infiltrados inflamatorios en relación con las fibras elásticas degeneradas. El grado de elastosis se correlaciona con el daño clínico. En dermis superficial se caracterizan los DD (con inmunoreactividad para la vimentina y el factor, XIIIA, pero no para S-100) y se evidencian alteraciones en su distribución y morfología ante situaciones patológicas, y en los proceso de envejecimiento y fotoenvejecimiento. Los DD se relaciona con los infiltrados inflamatorios asociados al daño actínico, y con la red microvascular cutánea. Hay un aumento de los DD activados en el estroma de carcinomas cutáneos y patología inflamatoria. Con la edad se comprueba un aumento en el número y activación de los DD en piel expuesta, y su disminución en piel cubierta. Se comprueban diferencias en el número, aspectos citoplasmático y dendritas de los DD en la piel con distintos grados de elastosis, lo que sugiere un funcionalismo del DD con las fibras elásticas degeneradas. Estos cambios son evidentes también en dermis profunda, como reflejo de la elastosis en zonas más profundas de la dermis al aumentar el daño actínico.

Autor: FERNANDEZ PEÑAS PABLO.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En la epidermis normal, la expresión de integrinas B1 se limita a la capa basal. En la psoriasis se ha encontrado expresión suprabasal de integrinas B1 y se ha sugerido que pudiera ser un factor patogénico, sin embargo el estado funcional de estas integrinas no ha sido estudiado. Para ello utilizamos anticuerpos monoclonales que reconocien el estado activado de las integrinas B1. Hemos encontrado que los queratinocitos (QC) expresan estos epítopos de activación y que estos epitopos pueden ser modulados por manganeso. Además, su expresión se relaciona con un aumento de la adhesión a fibronectina y colágeno. Los estudios de inmunohistoquímica en piel sana y psoriasis indican que aunque existe una expresión suprabasal de integrinas B1 en la psoriasis, estas moléculas parecen estar inactivas. Además, la mayor parte de las integrinas B1 en la psoriasis, estas moléculas parecen estar inactivas. Además, la mayor parte de las integrinas en caras laterales y apicales de los QC de la capa basal también están en conformación no activa, implicando una disminución de la actividad comparada con la piel normal, en la que las integrinas B1 en conformación activa están distribuidas en toda la membrana de los QC basales. Las tetraspaninas han sido implicadas en el modulación de la actividad de las integrinas. Hemos encontrado que CD9 y CD81 se expresan abundantemente en la membrana de los QC y CD63 y CD151 principalmente en el compartimenteo intracelular. Hemos encontrado acúmulos de CD9, CD81 y CD151 junto con integrinas a3 y B1 en las uniones intercelulares. Además, encontramos expresión de CD9, CD81 e integrinas B1 y a3 en las huellas de los QC en movimiento, sugiriendo un papel en adhesión en matriz extracelular y en la migración. Las integrinas B1 estaban sólo parcialmente activadas en las huellas, y no se observaron proteinas de enlace con el citoesqueleto de la adhesión focal como la talina. Por otro lado, no encontramos tetraspaninas en la adhesiones focales. La participación de las tetraspaninas en la migración de los QC se evaluó en un modelo de curación de heridas. Se observó una inihibición en la migración con anticuerpos contra CD9,CD81 y, en menor medida, contra CD151. Todos estos resultados indican que los complejos integrina-tetraspanina están implicados en las adhesiones transitorias del QC en migración, asi como el reconomiento intercelular.

Autor: CAMBRONERO MARTINEZ M. ROSARIO.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA U.A.M..

Resumen: La Inmunodeficiencia Variable Comun (IDVC) es una enfermedad compleja de etiopatogenia desconocida en la que a pesar de que el rasgo común en todos estos pacientes es la incpacidad para producir inmunoglobulinas (Igs), en la mayoria de ellos no se ha podido demostrar un defecto intrinseco en sus linfocitos B. En estos casos, el sindrome puede ser debido a diferentes alteraciones en los linfocitos T, y para comprobar esta posibilidad, realizados un estudio en 39 pacientes diagnosticados de IDVC valorando su inmunidad celular. Comparamos los resultados, además de con los obtenidos en controles sanos, con los de un segundo grupo control constituido por pacientes con agammagobulinemia ligada al cromosoma X (ALX), para determinar la especificidad de las alteraciones encontradas en la IDVC. Tratamos de definir diferentes subgrupos de pacientes con IDVC en función de parámetros analíticos correlacionado estos subgrupos con la sintomatología y evolución clinica para comprobar la utilidad de esta subclasificación en cuanto al pronostico y seguimento de estos enfermos. La disminución de la ratio CD4+/CD8+ es una alteración compartida por los pacientes con IDVC y ALX estudiados,aunque la distribucion de los dos subpoblaciones principales de linfocitos T es diferente en ambos grupos. Asi, la disminución de las celulas CD3+CD4+ solo se observa en la IDVC, mientras que ambos grupos presentan un aumento porcentual de la subpoblación CD3+CD8+ a expensas de las células CD8H+. Dentro de los linfocitos CD3+CD4+ de los enfermos con IDVC, encontramos un predominio de las células memoria sobre las virgenes, mientras que los pacientes con ALX presentan la distribución contraria. La expresión de HLA-DR y CD62L en las celulas de los pacientes con IDVC, indica una mayor activación respecto al grupo ALX y controles, lo que puede reflejar una activación anómala y persistente de las celulas de estos pacientes in vivo. Los enfermos con IDVC presentaron una dismunción en la proliferación celular tras estimulo con PHA y PWM, mientras que los indices con ALX solo mostraron este defecto con PWM. La expresión del CD40L se encuentra disminuida en abas patologias, lo que nos hace pensar que la expresión de esta molécula puede estar modulada por las infecciones de repetición, o por el tratamiento con IGIV. El porcentaje elevado de celulas productoras de IFNy en los pacientes con IDVC, junto con la producción disminuida de IL-4 en sobrenadante de cultivos celulares, da lugar a un predominio del perfil de citocinas Th1 sobre el Th2, que podria explicar algunas de las alteraciones clinicas y analiticas de estos enfermos. El total de pacientes con IDVC fue dividido en dos subgrupos, IDVC1 e IDVC2, incluyendo en el primero a aquellos co mayores alteraciones analíticas. Las diferencias encontradas entre ambos subgrupos respecto a su distribución por es sexo, producción de Igs, y parametros clinicos, no alcanzaron la significación estadistica. Será necesario un seguimiento más prolongado para valorar si esta clasificacón nos permite predecir la evolución clinica y el pronóstico de estos enfermos.

Autor: CITORES SANCHEZ M. JESUS.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FUNDACION LAIR.

Resumen: EL CD154 SE EXPRESA FUNDAMENTALMENTE EN LA SUPERFICIE DE LINFOCITOS T COOPERADORES ACTIVADOS. ES EL LIGANDO DE CD40 Y LA INTERACCION ENTRE CD154 Y CD40 ESTA IMPLICADA EN MULTITUD DE PROCESOS REGULADORES DEL SISTEMA INMUNE ENTRE ELLOS LOS QUE CABEN DESTACAR LA ACTIVACIOIN DEL LB Y PRODUCCION DE ANTICUERPOS, Y LA INFLAMACION. LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIOIN GENICA DE CD154 SE PRODUCE FUNDAMENTALMENTE A NIVEL POSTRANSCRIPCIONAL POR ESTABILIDAD DEL RNA MENSAJERO. EN EL EXTREMO 3´UTR SE ENCUENTRA UN MICROSATELITE CA QUE PODRIA POR TANTO TENER ALGUN PAPEL EN LA REGULACION DE LA EXPRESION DE CD154. DEBIDO A LA HIPEREXPRESION DE DICHA PROTEINA EN ENFERMEDADES AUTOINMUNES, EN ESTE TRABAJO SE PLANTEO LA HIPOTESIS DE QUE ESTE POLIMORFISMO PODRIA ESTAR ASOCIADO A UNA ENFERMEDAD AUTOINMUNE COMO EL LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO. PARA DEMOSTRAR ESTA HIPOTESIS SE COMPARARON LAS DISTRIBUCIONES ALELICAS DEL MICROSATELITE ENTRE SANOS Y ENFERMOS. POR OTRO LADO, SE VALORO LA FUNCIONALIDAD DE ESTE MICROSATELITE ASOCIANDO LOS DISTINTOS ALELOS A LOS NIVELES DE EXPRESION PROTEICA EN LINFOCITOS ACTIVADOS CON DISTINTOS ESTIMULOS. SE HA ENCONTRADO QUE LOS ALELOS LARGOS DE ESTE POLIMORFISMO SE ENCUENTRAN ASOCIADOS A LUPUS ERITEMATOSO Y POR OTRO LADO, EXISTE UNA ASOCIACION ENTRE LA PRESENCIA DE ALELOS CORTOS A CIERTAS MANIFESTACIONES CLINICAS DE ESTA ENFERMEDAD. EN CUANTO AL PAPEL FUNCIONAL DE ESTE POLIMORFISMO, SE DEMUESTRA QUE LOS LINFOCITOS PORTADORES DE ALELOS LARGOS MANTIENEN DURANTE MAS TIEMPO LA EXPRESION DE CD154 ANTE ESTIMULSO T DEPENDIENTES. POR TANTO, SE CONCLUYE QUE LOS ALELOS LARGOS DEL MICROSATELITE CA DEL EXTREMO 3´UTR DEL GEN DE C154 CONTRIBUYEN A LA HIPEREXPRESION DE DICHA PROTEINA EN LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO.

Autor: GARMENDIA SÁNCHEZ ELENA.
Año: 2000.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: De los estudios realizados en las células mononucleares de sangre periférica (CMNSP) de los pacientes con espondilitis anquilosante (EA) o con artritis reactiva (Are) y en la población control se concluye que: 1,- Se observa en los pacientes con EA un aumento significativo del porcentaje de células T CD4+ y una disminución significatica de las T CD8+. En los pacientes con Are se detecta un incremento significativo de las poblaciones linfocitarias citotóxicas no T (CD3-CD8+, CD3-CD16+, CD3-CD56+, CD3-CD57+ y CD3-CD35+) y una disminución significativa de los linfocitos T (células CD3+) y de poblaciones linfocitarias T citotóxicas/supresoras. 2,- Las alteraciones inmunofenotípicas son diferentes en ambos grupos de pacientes. Así, los porcentajes de células T (CD3+), de su subpoblación T CD4+, dela CD3+CD38 así como de algunas poblaciones linfocitarias T citotóxicas supresoras (CD3+CD56 y CD3+CD57+) son mayores en pacientes que presentan EA que en los que padecen ARe. Por el contrario, los porcentajes de las poblaciones linfocitarias citotóxicas no T (CD3-CD8+, CD3-CD16+, CD3-CD56+, CD3-CD57+) son menores en los pacientes con EA que en los que presentan ARe. 3,- En ambos grupos de pacientes se detectan porcentajes de linfocitos T circulantes activados in vivo significativamente mayores a los de población de controles. Así, en las células CD3+ se observan incrementos significativos en la expresión de marcadores de activación CD25 y CD71. La expresión de HLA-DR y CD38 se encuentra significativamente elevada, únicamente en células T de los pacientes con EA. 4,- En los linfocitos T circulantes de los enfemos con EA se constata un incremento significativo del porcentaje de células CD4+CD45RA+ respecto a los controles sanos y a los pacientes con ARe. Además, en las subpoblaciones celulares CD8+ de los pacientes con EA y en las de los que padecen ARe se objetiva una porcentaje significativamente reducido de células primadas por el antígeno (CD45RO), en relación a los controles. 5,- La expresión del antígeno de activación CD26 está aumentada, tanto en pacientes con ARe sin lesiones clínicas axiales, como en los pacientes con EA sin manifestaciones periféricas y en aquéllos con un menor tiempo de evolución. 6,- La respuesta proliferativa de las células de los pacientes con EA, tras estimulación con mitógenos policlonales que actúan sobre moléculas de la membrana citoplasmática (PHA y anti-CD3) y a nivel de la proteína quinasa C (PMA), es similar a la observada en los controles sanos. Tampoco se encuentran diferencias significativas, entre las EA y los controles, en las RPs a las combinaciones de anti-CD3+ anti-CD28 ó anti-CD3+ PMA. 7,- Las células de los pacientes con ARe muestran una significativa disminución de la blastogénesis tras estimulación con PHA 0,1%, respecto a los controles sanos y a las EA. La respuesta a PHA 0,1%, en combinación con IL-1, IL-10 ó IL-13, es así mismo, significativamente inferior en las ARe que en los controles. 8,- La síntesis de DNA inducida por la estimulación con forbol-miristato-acetato en presencia o ausencia de IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-13 ó GM-CSF en las CMNSP de los pacientes con ARe es significativamente menor que la obtenida en el grupo de pacientes con EA y en los controles sanos. En los cultivos estimulados con PMA, la adición de anti-CD3 al medio de cultivo no consigue normalizar la respuesta en las ARe. La marcada divergencia entre las características fenotípicas y funcionales de las poblaciones celulares del sistema inmune de ambos grupos de pacientes indican la existencia de diferentes mecanismos fisiopatológicos entre ambos procesos patológicos y sugiere que los mecanismos patogénicos implicados son también distintos.

Autor: VILA-CORO VAZQUEZ ANTONIO.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGIA.

Resumen: Los receptores de quimioquinas CCR2b, CCR5 y CXCR4 dimerizan tras la unión a sus respectivos ligandos como paso previo a la activación. La importanci funcional de la dimerización se demustra una vez que el receptor mutante CCR2bY139F actúa como dominante negativo por su capacidad de formar dímeros no funcionales con CCR2b. Los receptores CCR2b y CCR5 son capaces de heterrodimerizar cuando son estimulados simultáneamente con sus respectivos ligandos, MCP-1 y RANTES. Del análisis del mecanismo por el que el anticuerpo CCR5-02 inhibe la infección por cepas R5 de VIH-1, se deduce que la dimerización de receptores de quimioquinas es, en ausencia de otra señal, sufiente para bloquear la infección por VIH-1.

Autor: ARANDA VALLE CARMEN.
Año: 1999.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE GRANADA-HOSPITAL CLINICA.

Resumen: En los pacientes conLupus eritematoso sistémico (LES), existen una serie de alteraciones inmunitarias que tienen unimporte papel en la patogenia de la enfermedad. Por otra parte, se sabe que existe una interrelación entre sistema neuroendocrino y sistema inmune. Nuestro objetivo ha sido comporbar si en el LES se confirma esta relaciónentre ambos sistemas y si este hecho tiene algún papel en la enfermedad. Para ello hemos estudiado 30 pacientes con LES y 20 controles, en ambos grupos hemos determinado neopterina y betaendorfinas. Hemos encontrado un elevación significativa de los niveles de neopterina en suero, que se relaciona con la actividad de la enfermedad. No había difrencias significativas en las concentraciones plasmáticas de beta-endorfina entre gurpo control y pacientes, ni correlación entre neopterina y betaendornias como expresión de un efecto patogénicamente relevante del sistema neuroendocrino en el LES.

Autor: GALLEGO GARCIA M. DOLORES.
Año: 1999.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El trabajo realizado y mostrado en la tesisi doctoral se ha centrado en el estudio del papel de la proteína WASp (Viskott-Aldrich Syndrome protein) en la transducción de señales mediadas por el complejo molecular CD3 y su implicación en los procesos de reordenación del citoesqueleto y polimerización de actina en los linfocitos T, así como el desarrollo de protocolos de transferencia génica en las células T. Las mutaciones en el gen que codifica para WASp son responsables del desarrollo de la enfermedad originando alteraciones en la síntesisi de la proteína, lo cual provoca los jprocesos patogénicos de la enfermedad que cursa con eczema, trombocitopenia e inmunodeficiencia progresiva. En primer lugar se desarrolló un sistema experimental para inmortalizar células T de enfermos de WAS y de indiviudos normales mediante infeccióncon el Herpesvirus saimiri C-488. Las células inmortalizadas retenían todas las características morfológicas así como los fenotipos de superficie y funcional de las células parentales de las que procedían, siendo destacables el defecto selectivo de proliferación en respuesta a la estimulación mediada por CD3 y la anormalidades en el citoesqueleto. El análisis de las células mediante microscopías óptica y electrónica de barrido mostró que las células T. De enfermos de WAS presentan formas aberrantes mostrando una organización de la actina del citoesqueleto anormal y una marcada polarización de la F-actina que no se observa en las células normales, a la vez que se obsevan defectos en la polmerización de actina en estímulos mediados por CD3. Además, hemos demostrado que WASp participa directamente en la transducción de señales mediadas por CD3, siendo la proteína fosforilada en residuos de tirosina de una manera dependiente de P13D. Las líneas inmortalizadas con HVS son un modelo idóneo para abordar estudios de reconstitución genética en inmunodeficiencias primarias. Sin embargo, estas células sonregractarias a los métodos habituales de transfección, por lo que hemos desarrollado un protocolo de transferencia génica basado en la utilización de vectores retrovirales que codifican para una proteína de superficie inerte que sirve de marcadora. Hemos obtenido altos niveles de expresión en las células inmortalizadas derivadas de indiviudos normales y de pacientes de WAS. Además, la población de células transducidas puede ser enriquecida mediante inmunoselección magenética. No obstante, la expresión de los vectores utilizados es altamente inestable. Los protocolos de transducción génica desarrollados por nosotros convierten a las células inmortalizadas con HVS en un modelo ideal para sentar las bases que permitan el desarrollo de protocolos de terapia génica en pacientes con inmuodeficiencias primarias.

Autor: MALLOLAS JUTGLAR JOSEFA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT.

Autor: MORENO CERRO ANA M..
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Son características fundamentales de la leucemia linfocítica crónica B (LLC-B): 1) la acumulación en diversos territorios del organismo de un "pool" de linfocitos B neoplásicos CD5+, con una vida media aumentada y, paradójicamente, 2) una muerte rápida por apoptosis "in vitro". Estas diferencias en la muerte celular "in vivo" e "in vitro" podrían ser debidas a la ausencia de ciertos estímulos inhibidores de apoptosis cuando las células son cultivadas "in vitro" que, sin embargo, estarían presentes "in vivo". Estos estímulos podrían proceder de células capaces de interaccionar con las células leucémicas, como por ejemplo, las células endoteliales (CEs). Los resultados más destacados del presentes estudio son: 1) El medio condicionado (M.Cd) procedente de las CEs inhibe la apoptosis espontánea "in vitro" de las células de la LLC-B, lo que ha sido confirmado por diferentes métodos. 2) En los cultivos de CEs/LLC-B, impidiendo el contacto directo mediante cámaras "transwell", la viabilidad de las células leucémicas se mantiene durante más tiempo que en M.Cd. 3) El efecto anti-apoptótico mediado por contacto entre CE/célula leucémica es irrelevante. 4) La señal anti-apoptótica medida por el M.Cd de la CE no induce proliferación ni diferenciación de la célula tumoral. 5) La actividad promotora de supervivencia del M.Cd de la CE es específica para las células de la LLC-B. 6) El factor soluble inhibidor de la apoptosis contenido en el M.Cd es IL-6 con un peso molecular de 40-60 KDa. 7) Las células de la LLC-B expresan el receptor de IL-6 (CD126). 8) Las proteínas Bcl-2 y Bax de la célula de la LLC-B no están implicadas directamente en el efecto antiapoptótico de la IL-6 producida por el endotelio.#

Autor: BANDRES ELIZALDE EVA M..
Año: 1999.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: En el presente trabajo hemos estudiado las caracteristicas de los linfocitos T CD4+CD57+ por lo que respecta a su capacidad de ayudar a los linfocitos B en la producción de inmunoglobulinas. Para ello hemos analizado tanto en linfocitos CD57+ como CD57- la expresión de determinadas moléculas criticas para la cooperacion entre el linfocito T y el linfocito B, como son la molecula CD28 y la molecula CD40L. Tambien hemos estudiado la capacidad de ambas subpoblaciones para producir dos citoquinas Th2 como son la IL-4 y la IL-13. Hemos incluido en el estudio del analisis en la producción de IFNy con el fin de conocer el balance Th1/Th2 en estas celulas. El segundo objetivo de nuestro trabajo fue comprobar la expansión descrita de estas celulas CD57+ en pacientes con Leucemia Linfática Crónica B y analizar su posible relación con dos alteraciones en la sintesis de anticuerpos que frecuentemente acompañan a esta enfermedad, como son la hipogammaglobulinemia y la producción de autoanticuerpos contra antigenos eritrocitarios y plaquetares. Para realizar ambos objetivos hemos estudiado en 40 pacientes con LLC-B sin trastornos autoinmunes asociados, 10 pacientes con LLC-B y trastornos autoinmunes asociados y 40 controles sanos de edades pareadas con los pacientes, el porcentaje de linfocitos T CD4+CD57+ t CD8+CD57+ en sangre periferica, asi como su expresión de las moleculas CD28 y CD7, mediante citometría de flujo. Para determinar la expresión de CD40L y la producción de IL-4,IL-13 e IFNy en las subpoblaciones linfocitarias analizadas activamos las celulas con activadores policlonales y determinamos su expresión mediante citometría de flujo. Nuestros resultados demuestran en primer lugar que la aparición de la molécula CD57 se acompaña de la perdida de expresión de las moléculas CD28 y CD7, proceso que ocurre de forma gradual a lo largo de la vida y que presumiblemente refleja la diferenciación progresiva de la celula hacia un estadio final. Estas celulas CD57+ presentan una disminución progresiva en la expresión de la molecula CD40L en comparación con las celulas CD57- y no son capaces de producir IL-4 e IL-13 tras activacion in vitro. Ambos hechos sugieren que dicha subpoblación presenta una disminución en su capacidad de ayudar al linfocito B. Los resultados obtenidos en pacientes con Leucemia Linfática Cronica B demuestran que dichos pacientes presentan un aumento en el porcentaje de celulas CD8+CD57+ que se acompaña de un incremento en la subpoblación CD4+CD57+ especialmente si se asocian trastornos autoinmunes. Ambos fenómenos traducen probablemente una intensificación de los procesos de diferenciación linfocitaria a causa de la persistencia antigénica. En estos pacientes la hipogammaglobulinemia se relaciona con el aumento de células CD4+CD57+CD28+ así como con el defecto que presentan estos pacientes en la expresión de CD40L en la membrana del linfocito T. Este defecto no reside intrinsecamente en el linfocito T sino que se debe a la endocitosis de la molecula CD40L inducida por las celulas B leucémicas. Por último hemos detectado un descenso en la producción de IL-4 e IL-13 en linfocitos T de pacientes con Leucemia Linfática Cronica B con respecto a controles sanos. Este descenso desaparece si se asocian trastornos autoinmunes a la enfermedad neoplásica pudiendo estar relacionado con los mecanismos que acompañan a la respuesta autoinmune en estos pacientes.

Autor: LOPEZ BUENADICHA ADOLFO.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: HOSPITAL RAMON Y CAJAL.

Resumen: En este trabajo se realiza un estudio prospectivo de una serie de 43 enfermos de pancreatitis aguda litiasica, determinando el patron de secrecion de TNF-a en el plasma de los pacientes, calculando su utilidad pronostica y comparandola con los indices pronosticos clasicos de la enfermedad. Se demuestra una elevacion significativa de los nivelesmedios de TNF-a en plasma en los 7 primeros dias de evolucion de la enfermedad, con un pico de secrecion en las primeras horas de evolucion. El TNF-a utilizando como criterio pronostico de la pancreatitis aguda litiasica, alcanzo una sensibilidad del 91% aunque su escasa especificidad podria limitar su rendimiento. Se desarrolla un modelo de regresion logistica que permite el calculo de una ecuacion con los niveles de proteina C reactiva y los criterios de Ranson, que discrimina la severidad de la pancreatitis con una sensibilidad de 91% y una especificidad de 69%.

Autor: ALMAGRO MARTINEZ JOSE.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Del estudio de las concentraciones sericas de citoquinas en los distintos intervalos de tiempo analizados, en embarazadas sanas y en pacientes con preeclampsia, se obtienen las siguientes conclusiones: 1. Durante la gestacion no complicada no se observan modificaciones significativas en los niveles sericos de citoquinas ni de sus receptores. Ademas, no se objetivan diferencias con las mujeres no embarazadas de la misma edad. 2. En los partes derivados de gestacion no complicada, se produce una significativa elevacion transitoria de las concentraciones sericas de la mayoria de las citoquinas estudiadas, cuyo pico se detecta durante el periodo de dilatacion y parto (IL-6,R-TNF, IL-4,IL-10), o durante el puerperio inmediato (IL-1). Todas las concentraciones sericas de estas citoquinas se normalizan al menos dos meses despues del parto. En contraste los niveles sericos de TNF-a y sIL2R no se modifican en el parto. 3. La preeclampsia, a diferencia del embarazo normal, se asocia a elevacion significativa de las concentraciones sericas de IL-6 e IL-4, en el tercer trimestre de embarazo. Tambien se incrementan, aunque no de forma estadisticamente significativa, las concentraciones de R-TNF e IL-10. 4. El patron de modificacion en las concentraciones sericas de citoquinas, tanto en gestantes sanas como en las que desarrollaron preeclampsia, es similar, salvo parael TNF-a cuya dinamica de variacion es distinta en ambos grupos. Sin embargo, las cifras alcanzadas de las distintas citoquinas medidas, son superiores en las mujeres con preeclampsia que en las embarazadas sanas. Debe señalarse que a los dos meses del parto, no existieron diferencias estadisticamente sigificativas entre los niveles sericos de las citoquinas cuantificadas en ambos grupos de mujeres.

Autor: PUEYO GIL ANGEL CARLOS.
Año: 1999.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Autor: BERGA BURGUÉS JUAN MIGUEL.
Año: 1999.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ZARAGOZA.

Resumen: Los síndromes linfoproliferativos crónicos son enfermedades malignas del sistema inmune caracterizadas por su monoclonalidad. Hemos estudiado 75 pacientes afectos de síndromes linfoproliferativos. El 61% de los casos estaban afectos de LLC; un 10% de LLC/PL; 5 casos de Linfoma esplénico velloso, 5 leucemia linfocitos grandes granulares, 5 linfoma linfoplasmacitoide, 3 casos de linfoma del manto. Casos aislados de Tricoleucemia, tricoleucemia variante, linfoma folicular y leucemia prolinfocítica T. Hemos analizado el fenotipo de todos ellos por el citómetro de flujo EPICS-XL. Se han analizado la expresión de los distintos marcadores como CD5, CD23, CD24, CD22, CD10, CD11c, CD103, FMC7, CD25, expresión de inmunoglobulinas de superficie. Hemos comparado el Score de Matutes con nuestra casuística. Se ha analizado las caracteriticas de síndromes linfoproliferativos T. Se han analizado las características de expresión de proteínas intracitoplasmáticas del tipo PCNA, Ki-67, Bcl12, p53. Hemos encontrado que la expresión de CD19/CD5+ es característico de LLC, LLC/PL, y linfoma del manto. CD23 es específico de LLC ó LLC/PL. CD103 es característico y únicamente expresado por el único caso de tricoleucemia. BCL2 se expresa en todos los tipos de síndromes linfoproliferativos crónicos B, y nada en los casos de leucemia de linfocitos grandes granulares. PCNA se expresa en los casos de LLC ó LLC/PL indicando la fase temprana de G1.p53 apenas se expresa en los casos de síndromes linfoproliferativos crónicos, no pareciendo existir mutaciones que permitan la sobreexpresión de p53. La expresión de ki-67 difiere expectacularmente de la referida en la literatura por inmunohistoquímica, posiblemente debido a la mayor sensibilidad de la técnica.

Autor: BLASCO LAFARGA NIEVES M..
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El ejercicio físico intenso se acompaña de un estrés oxidativo (EO) y de anomalías en la respuesta inmunitaria, incluyendo alteraciones de la función de los granulocitos (PMNs). Para evaluar la participación del EO en estas alteraciones, se ha desarrollado un estudio in vivo e in vitro por citometría de flujo, usando PMNs como célula diana. Los resultados del estudio in vivo muestran marcadas alteraciones funcionales en todas las poblaciones leucocitarias tras ejercicio intenso. In vitro, el EO no letal incrementa los niveles de especies oxidantes en leucocitos, pero no provoca la activación de los linfocitos. El EO no letal induce la expresión espontánea de moléculas de adhesión y modifica la sobreexpresión inducida por estímulos quimiotácticos o activadores de la protein Kinasa C. Los PMNs responden en forma más sensible y consistente que los monocitos a la acción de los oxidantes exógenos. Estos datos confirman que la citometría de flujo representa una aproximación de gran interés para el análisis cuantitativo de los fenómenos de citotoxicidad en el Sistema Inmunitario.

Autor: LABRADOR HORRILLO MOISES.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: SERVICIO INMUNOLOGIA HOSPITAL SANT PAU. U.A.B..

Resumen: Esta tesis consta de dos trabajos: en el primer trabajo identificamos tres pacientes (dos de ellos hermanos que presentan AR y Signos de esclerodemia cuyo suero contiene un título alto de anticuerpos de clase IgG dirigidos contra el nucleolo y nucleoplasma de diferentes células de mamifero. El suero de estos pacientes uniformemente inmunoprecipita de un extracto de celulas HeLa marcado con 35 S-metionina, 4 polipéptidos cuyos pesos moleculares aproximados son:120,105,95 y 42 kD. De ellas, la proteina de 95 kD. Se encuentra en forma fosforilada. Empleando la técnica de inmunoblot, estos sueros reaccionan con las proteinas de 105,95 y 42 kD. Anticuerpos purificados por afinidad de dichas proteinas demuestran que las proteinas de 105 y 95 kD comparten epítopos crossreactivos. Además los anticuerpos purificados por afinidad de cada proteína inmunoprecipitan el complejo complejo. Estudios de localización realizados usando la técnica de microscopía inmunoelectrónica y tratamiento "in vivo" de células HeLa con Actinomicina-D demuestran que las proteinas de 105,95 y 42 kD se encuentran presentes en el componente granular del nucleolo y en el nucleoplasma. Adicionalmente las proteínas de 105 y 95 kD están presentes también en los polirribosomas libres y los ribosomas unidos al retículo endoplásmico rugoso del citoplasma. Experimentos de pulso y caza demuestran que el antigeno es ensamblado de forma precoz tras un pulso de 10 min.con 35 S-metionina. Tras dos horas de caza encontramos el antígeno preferentemente en núcleo y tras 5h de caza se encuentra tanto en núcleo como en citoplasma. Concluimos que este complejo proteico con una distribución principalmente nucleolar es un nuevo autoantígeno(p105-p42) reconocido por autoanticuerpos presentes en el suero de un subgrupo de pacientes con AR y Esclerodermia. Estos autoanticuerpos serían útiles como marcadores diagnósticos de este subgrupo de pacientes así como herramientas para posteriores estudios de procesos biológicos del nucleolo. El segundo trabajo se realiza con el fin de estudiar el papel de subtipos de linfocitos T donantes en el desarrollo de un enfermedad injerto contra huésped crónica inducida en los ratones(Balb/c X A/J)F1 mediante el inóculo de células linfóides provenientes de la cepa parental Balb/c. Analizamos el efecto de la depleción de células CD8+ del inóculo donante en las manifestaciones de la enfermedad. Comparamos ratones CAF1 agrupados por sexo y edad e inyectados o bien con el inóculo linfocitario completo o bien con el inóculo depleccionado de células de células CD8+. Este ultimo grupo muestra:1) una mayor incidencia y exacerbación de glomerulonefritis mediada por inmunocomplejos(LES); 2) mayor producción espontanea de IL-4(de 5 a 7 veces más); 3) mayor frecuencia, titulo y precocidad de anticuerpos anti-dsDNA, anti-histonas y factores reumatoides(FR) de clase IgG e IgM; 4) un aumento muy importante en la frecuencia y el titulo de anticuerpos anti-U1snRNP (ribonucleoproteinas pequeñas nucleares); y 5) un marcado descenso del injerto (10 a 15 veces) de los linfocitos provenientes de la cepa parental donante Balb/c. Además en este último grupo de ratones (CAF1+CD8 Balb/c), no se presentan signos de enfermedad artritis reumatoide-like que es una manifestación tardía de la enfermedad injerto contra húesped en el grupo de ratones CAF1+Balv/c. Todos estos datos de forma conjunta sugieren que los linfocitos T del inóculo parental donante(especialmente los linfocitos CD8+) juegan un papel muy importante en el grado de quimerismo, la modulación de la respuesta a diferentes autoantígenos y aspectos clínicos desarrollados en el modelo de enfermedad injerto contra huesped (EICH) presentado en este trabajo.