PATOLOGIA EXPERIMENTAL

Autor: MARTINEZ CONESA CRISTINA.
Año: 2004.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: RESUMEN Realizamos el estudio de los efectos de seis compuestos fenólicos y el vino tinto sobre el melanoma metastásico pulmonar comparándolos con la interferón. Los agentes se suministraron en la comida y en la bebida durante 11 días previos a la inoculación de las células tumorales y durante los 21 días siguientes. Los agentes ensayados fueron administrados tanto en la comida como en la bebida "ad libitum". Los flavonoides fuerón disueltos (0,2%peso/volumen) en agua/etanol al 98,8:1,2 volumen:volumen, excepto el GSPS que fué disuelto directamente en agua. El Vino Tinto Hécula fue reducido a 91,2 agua:8,8 vino v/v. El Interferón alfa y el PBS, se administraron en la región inguinal izquierda/s.c. (lunes, miércoles y viernes): 12.500, 25.000, 50.00 y 100.000 UI/ ratón, con unas dosis totales de 150.000, 300.000, 600.000 y 1.200.000 UI/ratón. La implantación de 5x105 células B16F10 se realizó mediante inoculación en la vena lateral de la cola a 162 ratones Swiss. Realizamos la valoración cuantitativa de los nódulos metastásicos según: a) un modelo macroscópico contando los nódulos metastásicos de la superficie pleural de los cinco lóbulos y b) modelo microscópico, mediante el análisis cuantitativo sobre 5 secciones histológicas de cada uno de los lóbulos pulmonares: calculamos el área del lóbulo completo, las áreas de las metástasis y el área media de metástasis originadas en un lóbulo y con ellos el Porcentaje de implantación = (área de metástasis por lóbulo / área total) X 100, Índice de crecimiento = área media de las metástasis / área total e Índice de invasión = área de metástasis por lóbulo / área media de las metástasis. Realizamos una estadística descriptiva calculando la distribución de frecuencias, media, error de la media y desviación típica, máxima y mínima. La comparación entre grupos con un análisis de varianza trasformando logarítmicamente los datos, complementada con comparaciones entre pares de medias con el método de la mínima diferencia significativa (LSD). Se han considerado significativos los valores de p 0,05. Al utilizar el etanol como disolvente de los polifenoles ensayados fue necesario tratar un grupo de animales con etanol como segundo sistema de control. Sorprendentemente, fue el grupo que mostró el mayor aumento de nódulos metastásicos. El etanol parece activar la invasión así como la proliferación de las células tumorales. De los polifenoles, la Diosmina mostró los mejores resultados, pues originó la mayor reducción de metástasis así como del porcentaje de implantación y los índices de crecimiento e invasión. Dicha reducción es similar a la del Interferón ? a la mayor concentración utilizada. El siguiente en efectividad fue la Rutina que mostró efecto antiproliferativo (área de metástasis) semejante a la Diosmina, aunque su acción anti-invasiva era menor (número de nódulos). El Vino tinto originó una reducción menor pero también muestra acción global al originar una reducción del número y del área de nódulos metastásicos. El resto de las sustancias ensayadas parece ejercer acción a un solo nivel, pues las Procianidinas (GSI y GSPS) y la Apigenina parecen actuar sobre la migración e invasión de las células tumorales, mientras que la Tangeretina lo haría sobre la proliferación celular. Todos los flavonoides han demostrado actividad anti-invasiva y anti-proliferativa por lo podrían actuar como adyuvantes en el tratamiento del melanoma, permitiendo reducir las concentraciones del Interferón ? y por tanto sus efectos indeseables. En conclusión, nuestro estudio ha demostrado la eficacia del modelo de melanoma metastásico pulmonar desarrollado mediante la inoculación de 5x 105 melanocitos B16F10 en la vena lateral de la cola de ratones Swiss, así como la de los métodos de valoración (macroscópicos y microscópicos) de los tratamientos, permitiendo relacionarlos con algunas de las fases del proceso metastásico. Todos los compuestos polifenólicos ensayados han mostrado efectividad, destacando la Diosmina con acción anti-invasiva y alta actividad antiproliferativa, cercanas a la del interferón alfa a la mayor concentración. Seguida de la Rutina y el Vino tinto, también con ambas acciones aunque menores. La Tangeretina mostró actividad antiproliferativa y las Procianidinas (GSI y GSPS) y Apigenina fundamentalmente acción anti-invasiva. El Etanol, por el contrario, originó un aumento del número de metástasis y sobre todo del área de los nódulos metastásicos que casi triplicaba al control por lo que parece actuar estimulando la invasión y la proliferación de las células tumorales. ABSTRAC The effect of six phenolic compounds and red wine on pulmonary metastatic melanoma was compared with the effect had by interferon. The agents were administered ad libitum in food and drink for eleven days prior to inoculation with tumoral cells and for the following 21 days. The flavonoids were dissolved (0.2% w/v) in water/ethanol at 98.8:1.2 (v/v) except GSPS, which was dissolved directly in water. The red wine (Hécula) was reduced 91.2 (water): 8.8 (wine)(v/v). Interferon Alpha and PBS were administered in the left inguinal region /subcutaneous/ three times per week (Monday, Wednesday and Friday). The following four groups of interferon: 12,500; 25,000; 50,000 and 100,000 IU/mouse with total doses of 150,000; 300,000; 600,000 and 1,200,000 IU/mouse. The B16F10 cells (5x105) were inoculated into the lateral vein of the tail of 162 Swiss mice. A quantitative evaluation of the resulting metastatic nodules was made according to: a) a macroscopic model, counting the metastatic nodules of the pleural surface of five lobules and b) a microscopic model by quantitative analysis of five histological sections of each of two pulmonary lobules, calculating the area of the whole lobule, the areas of metastasis and the mean area of metastasis on one lobule. The implantation percentage (area of metastasis per lobule / total area x 100); growth index (mean area of metastasis / total area) and invasion index (area of metastasis per lobule / mean area of metastasis) were calculated. A descriptive statistical analysis was made, calculating the distribution of frequencies, mean, error of the mean and typical, maximum and minimum deviations. The groups were compared by an analysis of variance using logarithmically transformed data, complemented by comparisons between pairs of means using the least significant difference (LSD) method, taking as significant values of p 0,05. Since ethanol was used as solvent for the polyphenols assayed, a group of animals was treated with ethanol as second control. Surprisingly, this group showed the greatest increase in metastatic nodules, ethanol seeming to encourage both the invasion and proliferation of the tumoral cells. Of the polyphenols, diosmin showed the best results since it produced the greatest reduction in metastasis, as represented by the decreased implantation percentage and growth and invasion indices. This reduction was similar to the reduction produced by interferon alpha. The second most effective polyphenol was rutin, which had a similar antiproliferative (area of metastasis) effect to that shown by diosmin, although its anti-invasive action was not so strong. The red wine followed in order of effectiveness, also reducing the number and area of metastatic nodules. The rest of the substances assayed only seemed to act on one level, the procyanidins (GSI and GSPS) and apigenin acting on the migration and invasion of tumoral cells, respectively, while tangeretin acted only on cell proliferation. All the flavonoids assayed showed ant-invasive and ant-proliferative activity, meaning that they could be used as adjutants in treating melanoma, thus reducing the concentration of interferon alpha needed, and possible undesirable side-effects. In conclusion, the study demonstrates the effectiveness of the pulmonary metastatic melanoma model involving the inoculation of 5x105 B16F10 melanocytes into the lateral vein of the tails of Swiss mice, and the methods (macroscopic and microscopic) used for evaluating the treatments, permitting them to be related with some of the phases of the metastatic process. All the polyphenolic compounds had some effect, especially diosmin, whose anti-invasive and ant-proliferative effects were close to those of interferon alpha, followed by rutin and red wine. Tangeretin showed antiproliferetive activity, while the action of procyanidins (GSI and GSPS) and apigenin was basically anti-invasive. Ethanol, on the other hand, increased the number of metastases and, especially, the area of metastatic nodules, which almost tripled the area of the control treatment. This substance therefore seems to stimulate the invasion and proliferation of tumoral cells.

Autor: Giménez Vidal José.
Año: 2004.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: Facultad de Medicina.
Centro de realización: Facultad de Medicina.

Resumen: La hipertensión arterial se acompaña de alteraciones funcionales y estructurales en la vasculatura. Los cambios funcionales pueden presentarse como un aumento de la reactividad a vasoconstrictores, una disminución de la sensibilidad a la vasodilatación o una combinación de ambos fenómenos. Los cambios estructurales pueden reflejarse en la pared de los vasos sanguíneos como un aumento de la relación pared/luz y un incremento de la fibrosis en la matriz extracelular. Otra de las alteraciones estructurales que puede presentarse es una reducción del número de vasos que constituyen la microcirculación o "rarefacción anatómica". La importancia de estos cambios estriba en el aumento de las resistencias vasculares al paso de la sangre, permitiendo así una perpetuación de la hipertensión arterial. De un gran número de estudios epidemiológicos se deduce que los estrógenos endógenos podrían proteger al organismo frente al desarrollo de hipertensión arterial, mientras que no se conoce con exactitud el efecto de la administración exógena de estrógenos sobre la evolución de la hipertensión. No obstante, se ha descrito un papel protector de los estrógenos -tanto endógenos como suplementados- sobre la vasculatura, mejorando la función endotelial en modelos de normotensión e hipertensión. A nivel de la estructura de los vasos, también existen datos que muestran un efecto protector sobre las alteraciones de la pared vascular asociadas a la hipertensión en distintos lechos, destacando entre ellos el lecho coronario. Sin embargo -pese al conocimiento del efecto de los estrógenos sobre la densidad de la vasculatura a nivel de tejido reproductivo- se conoce poco acerca de un posible efecto de los estrógenos en otros territorios vasculares, restringiéndose la mayoría de los esfuerzos en este campo al estudio de la formación de nuevos vasos sanguíneos en respuesta a la isquemia. Nosotros nos planteamos en el siguiente trabajo de tesis doctoral valorar el efecto de los estrógenos sobre la estructura y función de la microcirculación en un modelo animal de hipertensión arterial espontánea. Para ello hemos estudiado el efecto de la ovariectomía y del tratamiento con 17ß-estradiol en ratas espontáneamente hipertensas (SHR) sobre:a) la evolución de hipertensión -mediante la determinación periódica de la presión arterial sistólica con el empleo de un pletismógrafo de presión-, b) la función endotelial -mediante el estudio de la respuesta del flujo muscular esquelético a la aplicación local de acetilcolina-, d) sobre la vasodilatación máxima -mediante el estudio de la respuesta del flujo muscular esquelético a la aplicación local de una concentración adecuada de nitroprusiato sódico- y e) sobre la densidad de la microcirculación (mediante la determinación histológica del número de microvasos en músculo gracilis). Observamos que la deficiencia estrogénica induce una reducción del número de vasos de la microcirculación en las ratas SHR que se previene con el tratamiento con 17ß-estradiol. La deficiencia estrogénica no modifica significativamente la evolución de la hipertensión en las ratas SHR, si bien parece exitir una ligera tendencia hacia un mayor aumento de la presión arterial sistólica en los animales ovariectomizados. Por su parte, el tratamiento de las ratas ovariectomizadas con 17ß-estradiol atenúa el desarrollo de hipertensión en este modelo animal de hipertensión espontánea. La enfermedad cardiovascular en la mujer fue estudiada por un panel de expertos y, como consecuencia, la Asociación Americana del Corazón publicó unas guías para su prevención. Estas guías aconsejan el uso de inhibidores de la ECA como tratamiento de elección en las mujeres con alto riesgo de ECV. La mayoría de estas mujeres se encuentran en edades comprendidas entre la peri y postmenopausia. Por lo tanto, la situación estrogénica en estas mujeres es muy variable: deficiencia de estrógenos endógenos en gran parte de ellas y algunas de estas mujeres están sometidas a terapia hormonal sustitutiva. Por este motivo, la influencia de los estrógenos en el efecto de estos agentes antihipertensivos es de gran interés. En la bibliografía se describe una posible interacción entre el nivel de estrógenos y los efectos antihipertensivos de los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina: las mujeres postmenopáusicas sometidas a terapia hormonal sustitutiva y las SHR hembra y las mujeres presentan, en determinadas condiciones, una mayor respuesta a los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina con respecto a las mujeres postmenopáusicas sin THS, machos u hombres. Por ello nos planteamos, en el siguiente trabajo de tesis doctoral, valorar si la administración exógena de estrógenos puede modular el efecto de la inhibición de la enzima convertidora de angiotensina sobre la evolución de la hipertensión arterial, función endotelial y densidad de la microcirculación en un modelo de hipertensión y deficiencia estrogénica. Con este fin, valoramos (por los mismos procedimientos descritos anteriormente) la función endotelial, la densidad de la microcirculación y la evolución de la hipertensión en ratas SHR ovariectomizadas tratadas crónicamente con un inhibidor de la ECA (5 mg/kg/día de captopril durante 60 días) y/o 17ß-estradiol. Los resultados de este estudio muestran cómo la administración crónica de captopril mejora la función endotelial y atenúa la disminución en el número de vasos de la microcirculación en músculo esquelético en un modelo animal de hipertensión espontánea y deficiencia estrogénica. El tratamiento conjunto con 17ß-estradiol y captopril en las ratas ovariectomizadas presenta un mayor efecto que el tratamiento aislado con el inhibidor de la ECA sobre la función endotelial y densidad microvascular y normaliza la presión arterial sistólica (hecho que no se consigue con el tratamiento sólo con captopril) La mayor eficacia del tratamiento conjunto con 17ß-estradiol y captopril en las ratas ovariectomizadas sobre la densidad de la microcirculación podría estar relacionada con el mayor efecto sobre la presión arterial de este tratamiento con respecto al tratamiento aislado con captopril. Con el fin de esclarecer esta cuestión, realizamos el mismo estudio descrito anteriormente con el empleo de una dosis de captopril (60 mg/kg/día, 60 días) que era capaz de normalizar la presión arterial sistólica en ausencia de tratamiento concomitante con estradiol y, como resultado de este estudio, observamos que la administración exógena de 17ß-estradiol aumenta el efecto de la inhibición crónica de la enzima convertidora de angiotensina sobre la densidad de la microcirculación independientemente del efecto sobre la presión arterial. La interacción observada entre el estradiol y el captopril podría deberse al hecho de que ambos agentes promuevan un efecto vasodilatador dependiente de factores como la bradiquinina y el óxido nítrico. Con el fin de discriminar entre el posible papel de los factores vasodilatadores (bradiquinina y NO) y el papel de la angiotensina II en la modulación ejercida por el 17ß-estradiol sobre la acción del captopril, estudiamos el efecto del tratamiento conjunto con estradiol y un antagonista de los receptores AT1 de angiotensina II sobre la evolución de la hipertensión, función endotelial y densidad de la microcirculación en ratas SHR ovariectomizadas. Como consecuencia de este estudio, observamos que el tratamiento conjunto con losartan y 17ß-estradiol no presenta un mayor efecto que el tratamiento aislado con losartan sobre la función endotelial ,densidad de la microcirculación y presión arterial. Por este motivo, el mayor efecto del tratamiento conjunto con captopril y 17ß-estradiol sobre la densidad microvascular podría ser independiente de la reducción de los efectos mediados por receptores AT1 de la angiotensina II. Como se ha comentado anteriormente, los inhibidores de la ECA parecen aumentar la actividad biológica de la bradiquinina y del óxido nítrico. Por su parte, 17ß-estradiol parece ejercer un efecto similar sobre estos factores vasodilatadores. Por lo tanto, la confluencia del efecto del 17ß-estradiol y los inhibidores de la ECA sobre la bioactividad de bradiquinina y NO podría explicar el sinergismo entre ambos. Para comprobar esta hipótesis, valoramos si la bradiquinina o el óxido nítrico podrían estar implicados en la modulación por el 17ß-estradiol del efecto hemodinámico del captopril. Con este fin, estudiamos el efecto agudo del captopril en ratas SHR ovariectomizadas - tratadas o no con 17ß-estradiol- sobre la presión arterial media, el índice de resistencias vasculares periféricas. el índice de gasto cardíaco y la frecuencia cardíaca. Estudiamos, asimismo, el efecto del captopril tras el bloqueo previo de los receptores B2 de bradiquinina o la inhibición de la síntesis de óxido nitrico en las ratas SHR ovariectomizadas tratadas o no con 17ß-estradiol. Observamos que el tratamiento crónico con 17ß-estradiol en las ratas SHR ovariectomizadas aumenta el efecto hemodinámico agudo del captopril de forma dependiente, al menos en parte, de bradiquinina y óxido nítrico. En resumen, la ovariectomía se acompaña de una reducción del número de vasos de la microcirculación de músculo esquelético en las ratas espontáneamente hipertensas. Tanto el 17ß-estradiol como el captopril y el losartan promueven un aumento de la densidad microvascular en músculo esquelético de las ratas SHR ovariectomizadas. El 17ß-estradiol aumenta el efecto del captopril sobre el número de vasos de la microcirculación, pero no modifica el del losartan. Esto podría deberse a la confluencia de las acciones del 17ß-estradiol y el captopril en el aumento de factores vasodilatadores como la bradiquinina y el óxido nítrico.

Autor: RAMOS NAVAS-PAREJO JUAN M..
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El cisplatino es un agente quimioterápico usado ampliamente para el tratamiento de diversos tipos de tumores pero cuya dosis total está limitada por sus efectos adversos, principalmente en riñón y sistema nervioso periférico. La incidencia de nefropatía se ha reducido significativamente por las diuresis por cloruros, pero no la neurotoxicidad que es, actualmente, el principal factor limitante de la dosis, lo que disminuye la eficacia anticancerosa de este fármaco. Con la finalidad de profundizar en el conocimiento de los mecanismos involucrados en la citotoxicidad inducida por cisplatino nos planteamos los siguientes objetivos: 1,- Establecer un modelo experimental in vitro de citotoxicidad inducida por dosis terapéuticas de cisplatino mediante la utilización de la línea celular de feocromocitoma de rata PC12 indiferenciadas. 2,- Evaluar las ateraciones en la proliferación y viabilidad celular provocadas por el cisplatino, mediante el empleo de la sal de tetrazolio VST-1 y azul tripán, respectivamente. 3,- Evaluar los mecanismos de muerte celular inducida por cisplatino mediante la utilización de parámetros morfológicos (micoscopía de fluorescencia y electrónica de transmisión) y bioquímicos (estudio de la fragmentación del ADN). 4,- Evaluar las alteraciones en la composición elemental de las células PC-12 durante la progresión de la lesión celular inducida por el cisplatino mediante la utilización del microanálisis por energía dispersiva de rayos X. Nuestros resultados demuestran que el cisplatino inhibe la proliferación de las células PC-12 debido a la inducción de la muerte de dichas células. Éstas muestran con microscopía de fluorescencia una morfología nuclear típica del mecanismo de muerte celular por apoptósis, mientras que con el microscopio electrónico de transmisión, aparecen además, cambios en el citoplasma característicos de necrosis u oncosis. Mediante la electroforesis del ADN sobre geles de agarosa, observamos, además, signos de disminución del K, sin alteraciones en el C1 de las células PC-12 tratadas con cisplatino. A partir de estos resultados podemos concluir que el modelo experimental in vitro propuesto, constituye un sistema óptimo para evaluar, desde las perspectiva microscópicas, bioquímicas y microanalíticas, la lesión celular inducida por dosis terapéuticas de cisplatino; que éste induce la inhíbición de la proliferación y disminución de la viabilidad de dichas células; que el estudio de la lesión celular, pone de relieve, desde la perspectiva microscópica y ultraestructural, que el mecanismo de muerte celular acontece por un patrón microscópico mixto, que se puede sistematizar como alteraciones nucleares distintivas de muerte celular por apoptosis y alteraciones citoplasmáticas características de necrosis u oncosis; y desde la perspectiva bioquímica, observa la fragmentación oligonuleosómica del ADN genómico de estas células; que con técnicas microanalíticas, se evidencia la existencia de alteraciones significativas en las concentraciones intracelulares absolutas de Na y K asociada a una inversión del cociente K/Na; y que, como conclusión general, proponemos un mecanismo de muerte celular híbrido, inducido por dosis terapéuticas de cisplatino en un modelo neuronal in vitro.

Autor: IZQUIERDO LAHUERTA ADRIANA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: La presente Tesis aborda el problema de la implicación de PTHrP en la nefropatía diabética utilizando una aproximación científica rigurosa, centrando el estudio en 1) modelos experimentales in vitro basados en el tratamiento con altas concentraciones de glucosa y/o insulina de cultivos de células glomerulares y tubulares 2) modelos in vivo utilizando ratones transgénicos que sobreexpresan PTHrP y que se trataron con estreptozotozina para inducir la diabetes y 3) biopsias renales de pacientes diabéticos. Los objetivos que se proponen son ambiciosos, pero precisos al mismo tiempo, lo que ha permitido que sean alcanzados en un porcentaje elevado. Sus resultados aportan valiosa información que sugiere la participación del sistema renal PTHrP/PTH1R en la fisiopatología de los cambios renales asociados a la diabetes.

Autor: SEPULVEDA MUÑOZ JUAN CARLOS.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El presente trabajo estudia el posible efecto terapéutico de los ácidos todo-trans y 9-cis-retinoico (AR-t y AR-9c) sobre tejido renal. Estudios in vitro en cultivos de células mesangiales glomerulares humanas (CMH): En circunstancias inflamatorias reproducidas mediante la exposición a suero o a H2O2, AR-9c y AR-t evitaron la apoptosis inducida por peróxido de hidrógeno, así como inhibieron dos respuestas evocadas por los mediadores contenidos en el suero: la proliferación de CMH y la adhesión de monocitos a dichas células. Por otra parte, AR-9c moduló la expresión mesangial constitutiva de ARNm de la mayoría de sus receptores nucleares; pudiendo formar parte de los mecanismos responsables de los efectos de AR-9c. Estos resultados señalan a las CMH como diana para la acción antiinflamatoria de AR-9c. Estudios in vivo utilizando AR-t en la nefrosis inducida en rata por inyección simple intraperitoneal de aminonucleósido de puromicina o PAN: En este modelo, que reproduce la nefrosis por cambios mínimos humana, AR-t tuvo un efecto beneficioso sobre la proteinuria, lo que indica que protegió la integridad funcional de la barrera de filtración glomerular. Nuestro estudio sugiere que en este efecto pudo ser importante la protección de los podocitos y la inhibición de la infiltración mononuclear renal. Efectivamente, el pretratamiento con AR-t protegió a los podocitos glomerulares de las lesiones inducidas por PAN, bien fuese de la apoptosis constatada en cultivo o fuera el edema citoplasmático y la difuminación de pedicelos hallados in vivo en glomérulos de rata. La protección de los podocitos in vivo, constatada incluso cuando el tratamiento con AR-t fue posterior al inicio de la lesión de los podocitos, se acompañó de otro efecto favorable: la inhibición de infiltración del intersticio renal por células mononucleares. En definitiva, los ácidos retinoicos tienen potencial para utilizarse en el tratamiento de enfermedades renales, ya que podrían corregir nefrosis, evitar o reducir la lesión de células glomerulares como los podocitos y las mesangiales y ejercer efectos antiinflamatorios como la inhibición de la infiltración mononuclear renal y la proliferación mesangial.

Autor: LASA UNZUÉ INMACULADA.
Año: 2003.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALÁ..

Resumen: El acetaminofén es un fármaco de fácil utilización lo que ha llevado a un consumo creciente y a un aumento en el número de casos de intoxicación que suele aparecer como intento autolítico o como sobredosis accidental en los niños. La metabolización del acetaminofén es hepática en un 95 %, produciéndose varios metabolitos. De ellos la N- acetilbenzoquinoneimida (NAPQ I) es el responsable directo del daño hepático. Normalmente se conjuga con el glutation intracelular para ser neutralizado. Sólo cuando la cantidad de NAPQ I es mayor que las reservas de glutation se produce el daño hepático. El antídoto de elección en esta intoxicación es la N-acetilcisteína (NAC), con los inconvenientes de que pasadas 8 horas no es eficaz y en pacientes con historia de asma puede producir reacciones anafilácticas graves. Por otra parte la S-adenosil metionina (SAMET) ha demostrado su eficacia en el tratamiento de diversas enfermedades hepáticas, manteniendo las reacciones metabólicas de transmetilación y la síntesis de glutation. Por todo ello planteamos un modelo experimental con ratones a los que se administró una dosis de 500mg /kg de peso de acetaminofén por vía intraperitoneal. Posteriormente un grupo de ratones recibió una dosis de 20 mg/kg de SAMET por vía intraperitoneal, otro recibió una dosis de 1 g/kg de peso de NAC por vía intraperitoneal y otro recibió una dosis conjunta de SAMETy NAC. Un grupo de ratones no recibió tratamiento tras la dosis tóxica de acetaminofén y otro se utilizó como grupo control. Los tratamientos se administraron en distintos momentos tras la dosis tóxica de acetaminofén, a las 0 horas , a las 3 horas, a las 4 horas y a las 5 horas. A las 24 horas se evaluó la mortalidad y se sacrificaron los ratones supervivientes. De estos ratones se obtuvieron muestras de sangre para análisis de transaminasas, y muestras hepáticas para estudio histológico, medición de la actividad de la enzima SAM-sintetasa, medición de la actividad de la enzima FMTasa y medición de los niveles de glutation reducido (GSH) y glutation oxidado (GSSG).Se observó una mortalidad del 57 % en el grupo intoxicado y no tratado con una clara disminución en el resto de grupos tratados que fue mayor cuanto antes se administraron los fármacos protectores. La necrosis, estimada en una escala del 0 al 4, fue muy superior en el grupo intoxicado reduciéndose en los grupos tratados. Las transaminasas GOT y GPT, aumentaron en todos los grupos que recibieron acetaminofén, pero fue el grupo que no recibió tratamiento posterior el que presentó unos niveles más altos encontrándose diferencias estadísticamente significativas con respecto a los grupos que recibieron el tratamiento de forma más precoz. La actividad de las enzimas SAM-sintetasa y FMTasa se vió muy disminuida en los ratones intoxicados y sin tratamiento posterior, manteniéndose dichos niveles de actividad cercanos a los controles en los grupo con tratamiento. Sólo el grupo que recibió SAMET+NAC a las 5 horas de la intoxicación presentó unos niveles de actividad superiores a los de los controles. Los niveles de GSH no se modificaron en el experimento. Los niveles de GSSG aumentaron en todos los grupos en relación a los controles. El cociente GSH/GSSG sólo aumentó de forma considerable en el grupo de ratones que recibió SAMET+NAC a las 5 horas de la dosis tóxica.Tanto SAMET como NAC o su asociación mostraron su eficacia en la disminución de la mortalidad, la necrosis y las transaminasas sin que existiera un efecto sumatorio confirmándose los datos de la literatura hasta el momento. Estos parámetros evolucionaron de forma paralela, los ratones con más necrosis presentaban unas cifras de transaminasas más altas y mayor mortalidad, por lo que la alteración histológica producida por acetaminofén podría considerarse un factor predictivo de la mortalidad esperada. El tratamiento con la asociación de SAMET+NAC consiguió mejorar las cifras de SAM-sintetasa y FMTasa al administrarse a las 5 horas de la intoxicación. Este dato no se correspondió con el grupo de ratones con menor mortalidad que fue el que recibió NAC a las 0 horas por lo que debe existir un techo de actividad enzimática por enzima del cual no se consiguen mejorar los resultados. Los niveles de GSH no se modificaron probablente por un favorecimineto del paso de GSH a GSSG inducido por la gran cantidad de NAPQ I a conjugar que mostrando un efecto de SAMET y NAC favoreciendo este paso. Esto también explicaría el hecho paradójico de que los niveles de GSSG sean mayores en los ratones tratados.El cociente GSHG/GSSG no aumentó tras el tratamiento por lo que no existió reflejo a este nivel del efecto protector de los dos fármacos. Las conclusiones finales de este trabajo son las siguientes :1.- La intoxicación aguda por acetaminofén produce alteraciones histológicas, plasmáticas y moleculares en el hígado de la rata.2.- SAMET consigue contrarrestar estos efectos mejorando la supervivencia en los ratones tratadas.3.- Las diferencias entre SAMET y NAC no fueron significativas.4.- La asociación de SAMET y NAC sólo fue más eficaz mejorando las actividades de las enzimas SAM-sintetasa y FMT asa.

Autor: GRANADO LEÓN JAVIER FRANCISCO.
Año: 2003.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICIÓN UCM.

Resumen: OBJETIVO La hipertensión portal se caracteriza por una circulación esplácnica hiperdinámica asociada con el desarrollo de circulación colateral portosistémica. Ya que los mecanismos de regulación del flujo sanguíneo en los órganos esplácnicos pueden ser metabólicos, se ha estudiado su capacidad metabólica utilizando como marcador histoquímica el enzima mitocondrial citocromo C oxidasa. DISEÑO EXPERIMENTAL La circulación colateral fue estudiada en el grupo A en ratas Wistar control (n=8) y con hipertensión portal por triple ligadura estenosante de la vena porta 8n=7) a los 28 días de evolución. Citocromo oxidasa fue cuantificada con una técnica histoquímica en hígado, páncreas e intestino delgado en el grupo B de ratas Wistar control (n=8) y con hipertensión portal por triple ligadura estenosante de la vena porta (n=9) a los 28 días de evolución. RESULTADOS todas las ratas con hipertensión portal desarrollan circulación colateral portosistémica. En estos animales (grupo B) aumenta la actividad de citocromo oxidasa en hígado (lóbulo lateral izquierdo, zona periportal 91,81 +- 5,18 v.s. 86,03 +- 2,82), páncreas exocrino (125,6 +- 7,25 v.s. 117,57 +- 6,43; p menor 0,05), así como en mucosa (criptas) y serosa de duodeno, yeyuno e ileon en tanto que disminuye en la zona pericentral del acino hepático y en las vellosidades intestinales. CONCLUSIÓN Citocromo oxidasa es considerada un marcador endógeno de la capacidad metabólica tisular local, por lo tanto el aumento de su actividad en la mucosa del intestino delgado, páncreas exocrino y peritoneo visceral podría constituir un factor metabólico inductor de la circulación hiperdinámica esplácnica precoz en ratas con hipertensión portal. PALABRAS CALVES Hígado, vena porta, rata.

Autor: MORENO PLANAS JAVIER.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD MEDICINA UNIV. AUTÓNOMA MADRID.

Autor: CASADO ECHARREN VICTORIA M..
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA-FUNDACIÓN JIMENEZ DIAZ.

Resumen: Las conclusiones de la tesis fueron las siguientes: 1,- Las células endoteliales en subconfluencia muestran mayor expresión de enzima óxido nítrico sintasa endotelial que las células endoteliales confluentes concidiendo con el aumento observado de la producción de óxido nítrico. 2,- En presencia del agente antitumoral 5-fluorouracilo, en células endoteliales subconfluentes, la expresión de óxido nítrico sintasa endotelial disminuye significativamente. 3,- El 5-fluorouracilo no afecta a la expresión de dicha enzima en céluloas endoteliales confluentes. 4,- El 5-fluorouracilo disminuyó la producción de óxido nítrico en las células endoteliales subconfluentes. 5,- Este fármaco antitumoral produjo vacuolización citoplasmática y disgregación nucleolar en células endoteliales confluentes y subconfluentes. 6,- La expresión de receptores del VEGF, Flt-1 y Flk-1, era similar en células endoteliales confluentes y subconfluentes. 7,- La presencia de 5-fluorouracilo disminuye de forma significativa la expresión de Flk-1 en células subconfluentes y la expresión de Flt-1 en células confluentes. 8,- Estos procesos descritos podrían explicar a nivel molecular los efectos antiangiogénicos del 5-fluorouracilo sobre las células endoteliales.

Autor: MARTÍN RELLOSO M. JESÚS.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.

Resumen: En esta tesis se exponen los mecanismos de regulación del tono vascular dependientes de NO así como las alteraciones que aparecen en el sistema de relajación NO/GMPc-dependiente en distintos procesos inflamatorios. Se relaciona estos mecanismos con el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la apoptosis para hipotetizar su posible papel en la carcinogénesis colorrctal experimental, tanto en su etiopatogenia como en la respuesta de dichos tumores a la quimiprofilaxis descrita en estudios observacionales en la población general y recientemente en estudios de intervención en poblaciones en riesgo. Para llevar esto a cabo se realiza un estudio experimental desarrollado en dos partes: En una primera parte se realizan experimentos "in vitro" en células endoteliales derivadas de aorta bovina en estado de confluencia completa en monocapa y en estado subconfluente. Los resultados de estos experimentos determinan que hay una mayor expresión de la NOSe en el estado de crecimiento endotelial subconfluente o proliferativo y que el VEGF tiene un papel diferente en la expresión de NOSe dependiendo del estado de crecimiento endotelial. Este efecto diferente del VEGF sobre la expresión de NOSe en células endoteliales confluentes y subconfluentes podría explicarse por la diferente expresión de los receptores del VEGF (Flt-1 y Flk-1) dependiendo del estado de crecimiento endotelial. En una segunda parte se realizan experimentos "in vivo" en ratas divididas en tres grupos: uno tratado durante dos semanas con una dosis sucutánea semanal de azoximetano, otro tratado con una dosis semanal de azoximetano y una dosis diaria oral de aspirina durante nueve semanas y un tercer grupo control tratado con suero salino. Los resultados de estos experimentos determinan que hay un aumento de la expresión de la NOSe, el VEGF y el receptor Flk-1 en las ratas tratadas con azoximetano, respecto al grupo control, y que la administración de aspirina reduce la expresión de NOSe y del receptor Flk-1. Se observa también que la actividad de la caspasa 3, como índice apoptótico, está reducida en las ratas tratadas con azoximetano respecto al grupo control y que la aspirina favorece la actividad de la misma. Por último se determina que no existe ninguna diferencia en la expresión del receptor Flt-1 en ninguno de los tres grupos. Tomando como base los anteriores experimentos, los objetivos de la tesis consisten en el estudio de la óxido nítrico sintasa endotelial, el papel del VEGF en las modificaciones de la NOSe, el VEGF y la caspasa 3 como índice apoptótico en los estadíos más precoces del desarrollo experimental de un cáncer de colon para poder explicar posibles mecanismos carcinogenéticos del mismo y el posible papel preventivo de la aspirina que, como ya he dicho, se había ya descrito en estudios observacionales y se ha descrito muy recientemente en dos estudios de intervención en poblaciones de alto riesgo.

Autor: ZABITI SALOUA.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Recientemente se ha descrito un nuevo tipo de muerte celular denominada oncosis la cual presenta rasgos morfológicos diferentes de la apoptosis, caracterizándose por tumefacción celular y cariolisis. La tumefacción celular ha sido relacionada con la alteración de los mecanismos de regulación de volumen celular como consecuencia de la falta de ATP y la alteración de la homeostasis iónica intracelular. En este sentido está bien documentado que las alteraciones en la homeostasis iónica puede inducir, regular o modificar el mecanismo de muerte celular. El objetivo de la presente Tesis Doctoral ha sido evaluar las alteraciones en la composición iónica, fundamentalmente en relación a los iones monovalentes Na+, K+ y Cl- en la muerte celular por vía oncotica, y evaluar su posible papel en el desencadenamiento y ejecución de este tipo particular de muerte celular. Para ello hemos utilizado un modelo experimental de hipoxia metabólica en células U937, procediendo a la determinación de las alteraciones iónicas durante la lesión celular inducida mediante la aplicación de microanálisis por energía dispersiva de rayos-X, método que permite el análisis de los iones Na+, K+ y Cl- de forma simultánea. El estudio microanálitico de las células U937 sometidas a hipoxia metabólica revelo una alteración de la homeostasis de los iones Na+, K+ y Cl- en dos fases que se correlacionan de forma directa con las alteraciones morfológicas, ultraestructurales y volumétricas características de la muerte celular por oncosis. La fase inicial se caracteriza por un ligero incremento del volumen celular, aparición de escasas alteraciones ultraestructurales, asociadas a un incremento y descenso de las concentración de Na+, Cl- y K+, respectivamente. Estas alteraciones iónicas acontecen en células que mantienen la integridad de la membrana plasmática y se relacionan con un descenso regulado del volumen (RVD). La fase tardía se caracteriza por un incremento muy significativo del volumen celular, profundas alteraciones de la ultraestructura celular e incrementos muy significativos en el contenido de NA+ y Cl- y descenso del K+. Estas alteraciones ocurren de forma previa a la perdida de la integridad de la membrana plasmática y son relacionadas con una a inhibición de los mecanismos RVD y fallo de la bomba Na+/K+ ATPasa. Finalmente, nuestro estudio ha demostrado que el Na+ y en una fase tardía el Cl- juegan un papel fundamental en el desarrollo de la lesión celular irreversible. Asimismo demostramos que las alteraciones en los iones monovalentes no están relacionadas directamente con la activación de la fosfolipasas A2 y ocurren de forma previa a la hidrólisis de los fosfolipidos de la membrana plasmática.

Autor: ESPIGARES FUENTES M. BELÉN.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD DE GRANADA.

Resumen: Este trabajo de tesis doctoral ha pretendido abordar tanto objetivos de índoles tecnológica, referidos al desarrollo de métodos moleculares fiables de detección de la infección por citomegalovirus (CMV), así como comprobar mediante algunos objetivos clínico-patológicos la utilidad de dichos procedimientos en el control de los pacientes trasplantados, dado que, a pesar de los avances terapéuticos en la medicina antiviral en los últimos tiempos, la infección activa por CMV sigue siendo un problema de primer orden para dichos pacientes. Con este fin se plantearon como objetivos, el desarrollo y optimización, por un lado, de procedimientos de detección de ADN y ARN mensajero de CMV en secciones de tejido renal fijado en formalina tamponada e incluido en parafina, mediante PCR y RT-PCR, y por otro, el desarrollo y optimización de una metodología de detección "In Situ" de ADN viral, sobre estas mismas muestras, mediante las técnicas de hibridación y PCR "in situ". Además, y con independencia a lo anteriormente expuesto, se ha incluido un estudio específico del fenómeno MDR vinculado a la glicoproteína P, con la finalidad de comprobar si los pacientes que muestran tasas elevadas de expresión del gen MDR1, con alta incidencia de rechazo agudo y crónico del injerto, opuestamente podían mostrar una menor tasa de infección activa por CMV, al tener menores niveles de inmunosupresión. Para llevar a cabo este estudio, se procedió a la optimización de la técnica de RT-PCR para la detección de ARNm del gen MDR1 en biopsias renales postrasplante fijadas en formalina tamponada e incluidas en parafina.

Autor: PÉREZ NAVARRO RUBÉN.
Año: 2002.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: Se utilizó el modelo de colitis experimental por ácido trinitrobencenosulfónico (TNBS) para estudiar las alteraciones del transporte electrogénico en el colon inflamado de rata. El proceso inflamatorio desencadenado por el TNBS se localizó en el colon distal, pero no en el proximal. En el colon proximal se inhibió significativamente el máximo de secreción de los agentes secretagogos carbacol e histamina, deduciéndose alteraciones del transporte de iones en las regiones alejadas del foco inflamatorio. El colon distal exhibió transporte basal de iones inhibido, así como respuesta reducida a los agentes carbacol, histamina, isobutilmetilxantina (IBMX) y el péptido vasoactivo intestinal (VIP). Experimentos libres de iones demostraron que la secreción electrogénica se debía al ion Cl. Por otro lado, experimentos en mucosa sola (sin la submucosa) exhibieron máximos de secreción normales para los cuatro agentes secretagogos utilizados, indicando un defecto en la regulación del transporte. En todos los casos las curvas del IBMX y el VIP estuvieron desplazadas hacia la derecha. La utilización de tetrodotoxina e indometacina también desplazaron las curvas hacia la derecha, señalando un defecto de la vía del AMPc durante la inflamación colónica. La respuesta de la mucosa al 8-Br-AMPc y al AIF4 fue similar en animales sanos y con inflamación intestinal, sin embargo, los niveles de AMPc en colonocitos aislados estuvieron marcadamente disminuidos. Finalmente, se concluyó que durante la inflamación intestinal existen alteraciones en el sistema nervioso entérico que como resultado dan una producción deficiente de AMPc en el enterocito, y por consiguiente inhibición en la secreción iónica.

Autor: CAPILLA SAN MARTÍN JAVIER RAMÓN.
Año: 2002.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: Se investiga en el SNC de la rata (cerebro, cerebelo y médula oblongada) los siguientes aspectos del metabolismo del ácido glioxílico. 1,- La localización del enzima glioxilato-deshidrogenasa, utilizando técnicas histoenzimológicas. 2,- La localización de moléculas derivadas de la transaminación del ácido glioxílico con moléculas aminadas, utilizando técnicas inmunohistoquímicas. Los resultados obtenidos revelan la presencia del enzima glioxilato- deshidrogenasa NAD-dependiente, a diferencia de lo que ocurre en otros órganos de ver tebrado en las que el esl NADP-dependiente, en todas las zonas del SNC estudiadas. La intensidad de la reacción fue más intensa en la capa III de la corteza cerebral, así como en los núcleos subcorticales, del cerebelo y de la médula oblongada. Posteriormente se investigó la actividad de este enzima cuando a las ratas se les administró Nicotine hidroxy tartrate salt, observando que esta molécula provoca un incremento de actividad del enzima en diferentes zonas de la corteza cerebral, siendo mucho más intensa en las tres primeras capas de la corteza. En la segunda parte de este trabajo se demuestra que el ácido glioxílico reacciona con aminas biógenas localizándose en vesículas sinápticas y membranas sinápticas, lo que sugiere su intervención en determinados procesos de neurotransmisión.

Autor: ROLDAN CONESA DIEGO.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: ANTECEDENTES Y OBJETIVOS Recientemente se ha observado un aumento de infecciones debidas a Enterococcus faecalis altamente resistente a aminoglucósidos. Con el objeto de comparar la eficacia de teicoplanina en monoterapia o asociada a otros antibióticos, y nuevas propuestas de tratamiento; valoramos la eficacia de estos antibióticos en un modelo experimental de endocarditis en conejo. MATERIAL Y MÉTODOS Realizamos un ensayo con 84 conejos a los que se les induce endocarditis aórtica, mediante la introducción de un catéter vía arteria carótida derecha; 24 horas tras la inserción del catéter, cada conejo se inocula con 108 UFC/ml de Enterococcus faecalis vía vena marginal de la oreja. Se inicia tratamiento 48 horas después de la inoculación bacteriana. Los conejos fueron tratados durante 5 días. Doce o veinticuatro horas después de la última dosis, según pauta, los conejos fueron sacrificados. Las vegetaciones de cada animal fueron cultivadas cuantitativamente. Se utilizaron 14 conejos como grupo control, sin tratamiento antibiótico, 14 conejos se trataron con teicoplanina 20 mg/kg/12 h intramuscular (im); 12 con teicoplanina + ceftriaxona 30 mg/kg/12 h (im); 18 con teicoplanina + levofloxacino 30 mg/kg/12 h (im); 12 con teicoplanina + imipenen 60 mg/kg/8 h (im); y 14 con ampiciclina 100 mg/kg/8 h + ceftriaxona. RESULTADOS La media de los logaritmos en base 10 (log 10) de las unidades formadoras de colonias por gramo (UFC/g) de vegetación fue: Grupo control 9,88 0,52 log10 UFC7g; teicoplanina 7,47 0,38 log10 UFC/g; teicoplanina + ceftriaxona 6,82 0,78 UFC/g; teicoplanina + levofloxacino 7,47 0,77 UFC/g; teicoplanina + imipenen 5,43 0,68 UFC/g ampicilina + ceftriaxona 7,48 0,70 UFC/g. CONCLUSIONES Hemos encontrado eficacia en el tratamiento de todos los grupos respecto al control en la reducción de la concentración del Enterococcus faecalis en las vegetaciones aórticas (p

Autor: ORTEGA LIARTE JUAN VICENTE.
Año: 2002.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: OBJETIVOS Demostrar el efecto antiaterogénico de la Atorvastatina a dosis de 3 mg/kd/d., en pollos alimentados con una dieta rica en huevos MATERIAL Y MÉTODOS Se han utilizado 18 pollos de la raza Leghorn divididos en tres grupos, Control con dieta normal (Grupo A); control aterogénico con dieta rica en huevos (Grupo B); Aterogénico tratado con atorvastatina y dieta rieca en huevos (Grupo C). A los 60 días de experimento se procede al sacrificio y disección de corazón y aorta aplicándoles tinción de Sudán III para poner de manifiesto los lípidos de las placas de ateroma en la pared arterial. Se extraen muestras de sangre para hemograma, bioquímica y pruebas de coagulación. RESULTADOS El colesterol total disminuyó un 33% respecto al grupo B con diferencias significativas, a expensas de la reducción del 45% de los niveles de LDL colesterol y del colesterol No HDL sin encontrar diferencias significativas en los niveles de HDL colesterol ni en los triglicéridos. En los parámetros inflamatorios, PCR y fibrinógeno, en el resto de parámetros bioquímicos, incluyendo los enzimas hepáticos y musculares no hemos obtenidos diferencias significativas. Los valores de la coagulación hepáticos y musculares no hemos obtenido diferencias significativas. Los valores de la coagulación son similares en los tres grupos. Hemos obtenido una reducción de la placa de arteriosclerosis en Aorta del 67% respecto al grupo control aterogénico, y 21% respecto al grupo control normal. CONCLUSIONES Se ha producido una reducción del 67% del área de placa relativa y un 45% de los niveles de colesterol total a expensas del LDL colesterol en los animales con una dieta alterogénica, administrándoles una dosis de 3 mg/Kg/d de Atorvastatina.

Autor: ARACIL NOËLLE M. CARME.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO.

Resumen: INTRODUCCIÓN El carcinoma de pulmón es uno de los problemas de salud prioritario de nuestra sociedad. Tiene una mayor presencia entre hombres de 55 a 65 años. Es una neoplasia muy agresiva y a pesar de los esfuerzos realizados en quimioterapia o en combinación con radioterapia, no se han mejorado mucho las tasas de supervivencia de esta enfermedad. Conocemos, por otro lado, que el cielo celular con sus diferentes fases son objeto de una regulación bioquímica muy compleja. En esta tesis nos centramos en el estudio de unas cuantas proteínas implicadas en el ciclo (PCNA, Ki-67, p53, ciclinas D y E) y tratar de ver el papel que juegan. OBJETIVOS DE LA TESIS 1,- Determinar mediante técnicas de citometría de flujo (CMF) el índice de DNA, la fase S, el porcentaje de células PCNA positivas y el grado de heterogeneidad de cada una en el carcinoma de pulmón de célula no pequeña (CPCNP), en tumores primarios y en sus metástasis ganglionares. 2,- Investigar si existe un patrón o patrones de índices de DNA y/o de fase S y/o de porcentaje de PCNA relacionados con el fenómeno metastático. 3,- Determinar la expresión del antígeno de proliferación celular (PCNA) en las diferentes fases del ciclo celular y evaluar si hay alguna relación estadística con otros parámetros estudiados. 4,- Cuantificar mediante técnicas de inmunohistoquímica el grado de expresión de marcadores de proliferación celular (PCNA, Ki-67), reguladores negativos (p53) y ciclinas (D y E). 5,- Evaluar las posibles relaciones entre las variables siguientes: clínicas, anatomopatológicas, de CMF y de inmunohistoquímica. 6,- Analizar estadísticamente las variables que puedan ser valoradas como factor pronóstico independiente. MATERIAL Y MÉTODOS Se seleccionaron 99 muestras de CPCNP entre 1993-1997, 89 varones y 10 mujeres. Se recogieron 4 tipos de datos diferentes y por separado, para garantizar la objetividad en la obtención de las variables: datos clínicos, anatomopatológicos, de inmunohistoquímica y de CMF. Los datos clínicos se obtuvieron para calcular la supervivencia libre y la global de la enfermedad. Los datos anatomopatológicos, de inmunohistoquímica y de CMF se obtuvieron del análisis de las resecciones quirúrgicas remitidas al laboratorio durante la intervención de los enfermos. Cada muestra fue dividida en dos partes: una para CMF para estudiar el ciclo celular y la expresión del antígeno PCNA en las diferentes fases del ciclo y la otra para el estudio histológico rutinario y para el análisis inmunohistoquímico. RESULTADOS Un 70% de los adenocarcinomas se diagnosticaron en el estadio IIIA. Ki-67, PCNA y la ciclina E estaban relacionadas con el tipo histológico de carcinoma indiferenciado de célula grande (CICG), además la ciclina E también lo estaba con el CE. La ciclina D1 se relacionaba con el grado de diferenciación. PCNA y ciclina E estaban relacionadas significativamente con Ki-67. Del análisis univariable en relación con la supervivencia global de la enfermedad, el estadio, CV del íDNA y CV de la fase S alcanzan significado estadístico, como variables relacionadas con la evolución de la enfermedad. Finalmente del análisis multivariable para la supervivencia global de la enfermedad, alcanzan un valor pronóstico independiente, el estadio y el CV de la fase S. CONCLUSIONES Hay una relación directa entre el estadio y la supervivencia global de los enfermos. Las variables determinadas por inmunohistoquímica no tiene implicaciones pronósticas. Hay una relación entre el CICG i la expresión aumentada de marcadores de proliferación. La sobre-expresión de la ciclina D1 se relaciona directamente con los CPCNP pobremente diferenciados. La fase S se relaciona con la expresión aumentada de PCNA por CMF. La heterogeneidad en la expresión de PCNA por CMF se relaciona con el grado de heterogeneidad del íDNA y fase S.

Autor: BLANCH GRACIA PEDRO.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: INTRODUCCIÓN El miocardio alrdedor de una cicatriz de infarto experimenta alteraciones a nivel electrofisiológico y neuro-autonómico que pueden interactuar con un nuevo episodio isquémico para generar arritmias. De este modo, una isquemia periinfarto puede llegar a ser más arritmogénica que una isquemia a distancia de la zona del infarto, pero este hecho es desconocido. OBJETIVOS 1,- Creación de un modelo experimental de infarto crónico sobre el que se realiza una isquemia aguda. 2,- Analizar la influencia de la localización de la isquemia aguda sobre el patrón de arritmias ventriculares durante la misma. 3,- Estudiar el papel de los factores hemodinámicos, extensión de la isquemia y flujo colateral en la génesis de arritmias ventriculares. HIPÓTESIS La localización de una isquemia aguda en un corazón con necrosis previa, ya sea a distancia de la misma o en la zona periinfarto, influirá en el patrón de arritmias ventriculares. MÉTODOS El estudio se realizó en 42 animales de experimentación (cerdos) con un infarto de miocardio de 1 mes de antigüedad que se provocó con una ligadura permanente de la arteria descendente anterior distal. Posteriormente se llevó a cabo una reoclusión coronaria a nivel de la arteria descendente anterior proximal (grupo I: isquemia periinfarto, n=21), o bien a nivel de la arteria circunfleja (grupo II: isquemia a distancia, n=21). Se analizaron las arritmias ventriculares durante 60 minutos tras la reoclusión y durante estimulación eléctrica programada. Se midió el tamaño del infarto, y la hipoperfusión del área ocluida fue estimada registrando la actividad de 99mTc-tetrofosmín. RESULTADOS El peso del área de isquemia aguda (23+-9 versus 21+-9 g), del área de necrosis (10+-6 versus 10+-3 g), la presión arterial sistólica, la frecuencia cardiaca, la presión basal ventricular izquierda, el pico dP/dt y la actividad del radiotrazador en el área ocluida (3+-2% versus 5+-2% de tejido normal) fueron comparables entre los dos grupos. El grupo I (isquemia periinfarto) presentó más extrasístoles ventriculares (mediana 136 versus 59, p=0,008), mayor incidencia de Tv sostenida espontánea (57% versus 19%, p=0.02) y de FV espontánea (76% versus 47%, p=0.05), y más inducibilidad eléctrica de TV sostenida (65% versus 28%, p=0.03), pero una inducción eléctrica similar de FV, comparado con el grupo II (isquemia a distancia). CONCLUSIONES 1,- La isquemia aguda preiinfarto en el modelo porcino es más arritmogénica que la isquemia aguda a distancia de un infarto antiguo. 2,- El distinto patrón arritmogénico de los dos grupos experimentales no se explica por diferencias en los parámetros hemodinámicos, en la extensión del área isquémica o en el flujo colateral.

Autor: SANZ BERZAL ELENA.
Año: 2002.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA UAM.

Resumen: La urocortina es un péptido relacionado con el factor de liberación de corticotropina (CRF) que puede intervenir en la regulación cardiovascular. El objetivo de nuestro estudio fue analizar los efectos vasculares de la urocortina así como la influencia del sexo y la repercusión de la diabetes mellitus en esos efectos. Para ello, se utilizaron arterias basilar, coronaria, caudal y renal de ratas machos y hembras, normoglucémicas y diabéticas. Las arterias se montaron en baños de órganos para el registro de la tensión isométrica, y la diabetes se indujo mediante inyección intraperitoneal de estreptozotocina. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: 1.- En los cuatro tipos de arterias con tensión basal, la urocortina (10 -12 -10 -8 M) no produjo ningún efecto, mientras que en los cuatro tipo de arterias con tono activo inducido con endotelina-1 (10 -9 -10 -8 M) este péptido produjo relajación dependiente de la dosis. 2.- La relajación producida por la urocortina fue similar en las arterias de ratas machos y hembras. Según los valores de la pD2, el orden de sensibilidad fue el siguiente: caudal>renal=basilar>coronaria para ambos sexos, y según el efecto máximo, el orden fue el siguiente: caudal>renal=basilar>coronaria también en ambos sexos. 3.- Con respecto a los mecanismos implicados en la relajación producida pro la urocortina en las arterias renales de ratas hembras y machos observamos lo siguiente: A.- En ambos sexos, la relajación se bloquó con los antagonistas de los receptores CRF (astresina y alfa-helical(9-41) y el bloqueante de los canales de potasio dependientes de calcio de alta conductancia (caribdotoxina), y no se modificó con el inhibidor de la ciclooxigenasa (meclofenamato). B.- En las ratas hembras, la relajación se redujo con el inhibidor de la sintasa del óxido nítrico (L-NAME), con el inhibidor de adenilato ciclasa (SQ22536), con el inhibidor de la protein kinasa A (H89), con el regulador de los niveles de calcio (rianodina) y con el inhibidor de la adenosina difosfato ribosa cíclica (8Br-cADRP). C.- En los machos, la relajación no se modificó con el inhibidor de la sintasa del óxido nítrico (L-NAME), ni con el inhibidor de la adenilato ciclasa (SQ22536) ni con el inhibidor de la adenosina difosfato ribosa cíclica (8Br-cADRP), mientras que se incrementó con el regulador de los niveles de calcio (rianodina) y con el inhibidor de la protein kinasa A (H89). 4.- En las rtas diabéticas, la relajación a la urocortina no estaba alterada en las arterias basilar, coronaria y caudal de machos y hembras, pero estaba disminuida en las arterias renales sólo de las ratas hembras. En las arterias renales de ratas hembras diabéticas la relajación producida por la urocortina no se modificó con elinhibidor de la sintasa del óxido nítrico (L-NAME) ni con el bloqueante de los canales d epotasio dependientes de calcio de alta conductancia (caribdotoxina), mientras que se incrementó con el inhibidor de la ciclooxigenasa (meclofenamato).

Autor: ORTEGA PORCEL JOAQUÍN.
Año: 2002.
Universidad: CARDENAL HERRERA CEU.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El objetivo del presente estudio ha sido profundizar en el conocimiento de los mecanismos patológicos e inmunológicos de las fasciolosis crónica ovina. Se han realizado infecciones repetitivas, con y sin tratamiento de antiparasitarios, y se ha comprobado cómo afectan a la adquisición de resistencia frente a futuras infecciones. Para ello, se han estudiado las lesiones hepáticas, así como la distribución de distintas poblaciones de leucocitos y subpoblaciones linfocitarias en hígado y ganglios linfáticos hepáticos. En la realización del presente estudio, se emplearon 32 ovejas de raza merian y 8 meses de edad. Se dividieron en 6 grupos, uno de los cuales se utilizó como control. Las ovejas de los 5 grupos restantes fueron infectadas oralmente con distintas dosis de metacercarias de F.hepatica de origen ovino del siguiente modo: el grupo 1 fue primoinfectado, el grupo 2 reinfectado, los grupos 2 y 5 fueron reinfectados y tratados con triclabendazol (TCBZ) a las 4 y 12 semanas postinfección, respectivamente. Finalmente, el grupo 4 fue primoinfectado y tratado con TCBZ. El estudio histopatológico demostró que la infección primaria no inducía resistencia frente a la reinfección. Así, las lesiones hepáticas, particularmente infiltrado eosinofílico, granulomas y cirrosis, eran más severas en los grupos reinfectados que en los primoinfectados. La administración de TCBZ provocó la eliminación de fasciolas y huevos, siendo las lesiones hepáticas mucho más discretas en el grupo primoinfectado y tratado (grupo 4). Sin embargo, no indujo protección frente a nuevas reinfecciones como demostraron las severas lesiones hepáticas observadas en el grupo 3. Otro hecho destacable fue que los leucocitos globulares permanecieron elevados en todos los grupos infectados, independientemente de la aplicación del tratamiento y de la dosis de metacercarias administrada. En los ganglios linfáticos hepáticos de las ovejas infectadas, salvo en el grupo 4, se observó una marcada hiperplasia cortical y medular respecto al grupo control. En el grupo infectado primariamente y tratado (grupo 4) la hiperplasia ganglionar fue más discreta, debido probablemente al cese de su estimulación antigénica al ser eliminadas las fasciolas. El estudio inmunohistoquímico demostró una intensa respuesta inmune celular, representada por un severo infiltrado de linfocitos T (CD3+) en espacios porta y parénquima hepático. Los linfocitos Th (CD4+) fueron más numerosos que los linfocitos Tc (CD8+) en todos los grupos, aumentando la ratio CD4/CD8 en los grupos reinfectados y en el grupo tratado con TCBZ, aunque de forma ligera. En los ganglios linfáticos hepáticos también se produjo un aumento considerable de las células T, principalmente en las áreas paracorticales. Por otra parte, los linfocitos TCR-** siempre ocasionales, tanto en hígado como en ganglios linfáticos. La respuesta inmune humoral, representada por un abundante infiltrado de linfocitos B (CD79a+) y células plasmáticas (IgG+) en espacios porta y parénquima hepático, especialmente en los grupos reinfectados: Las células B-B4 se presentaron sobre todo en folículos linfáticos que se formaban en espacios porta. Los ganglios linfáticos hepáticos mostraron un marcado incremento de células CD79a+, B-B4+, así como de células plasmáticas IgG+ en los grupos infectados y, particularmente en los reinfectados, respecto al grupo control. Las respuestas inmunes locales, tanto de tipo celular como humoral, no mostraron carácter protector, ya que a pesar de ser intensas como demostró el abundante infiltrado celular en hígado y ganglios linfáticos hepáticos, no proporcionaron protección frente a las reinfecciones, tanto en el grupo tratado (grupo 3) como no tratado (grupo 2).