PATOLOGIA EXPERIMENTAL, 3

Autor: MORENO MANZANO M. VICTORIA.
Año: 1999.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALA.

Resumen: Los retinoides son reguladores clave de procesos como la vision, la proliferacion celular, la diferenciacion, la morfogenesis embrionaria y la reproduccion. En el riñon, el acido retinoico (AR) es particularmente importante durante el desarrollo embrionario de este organo, aunque a pensas existen evidencias sobre el papel de los retinoides en la fisiologia o fisiopatologia renal, cabe destacar sin embargo, la descripcion en la inhibicion de la proliferacion por el AR tanto en celulas mesangiales glomerulares en cultivo como en estudios in vitro de glomerulopatias mesangioproliferativas, efecto debido a su potencial anti-AP-1. El presente trabajo trata de explorar el posible papel regulador del AR sobre la funcion de las celulas mesangiales, actuando sobre el equilibrio oxidacion/antioxdacion-implicado en multitud de alteraciones glomerulares- y sobre la activacion de AP-1, y por lo tanto, ser efectivos en el tratamiento de alteraciones renales con componente glomerular. El desarrollo experimental de esta hipotesis inicial dio lugar a las siguientes conclusiones: 1 El acido retinoico todo-trans previene la progresion de cambios glomerulares asociados al envejecimiento. Entre los mecanismos implicados, puedes ser importantes la inhibicion de la expresion de factor de crecimiento transformante beta y de osteopontina. 2 Las celulas mesangiales glomerulares expresan constitutivamente los tres subtipos de receptores de acido retoico y los tres subtipos de receptores X de retinoides. Acido retinoico 9-cis modula la expresion de todos ellos, menos de RAR-gamma. 3 Acido retinoido todo-trans ejerce sobrelas celulas mesangiales dos acciones con posible valor defensivo frenta a los metabolitos activos derivados del oxigeno: a. Estimula defensas antioxidantes como catalasa y glutation b. Inhibe la apoptosis inducida por H2O2 gracias a su intervencion en el sistema AP-1 4 La prevencion mediante acido todo-trans retinoico de la apoptosis inducida por H2O2 tiene especificidad celular, ya que es reproducible en fibroblastos renales pero no en celulas endoteliales ni en celulas epiteliales reales. Es probable, asi mismo, que el potencial antiapoptotico sea especifico para H2O2,ya que el acido retinoico todo-trans no inhibe la apoptosis mesangial inducida por factor de necrosis tumoral alfa, que esta mediada por anion superoxido. 5 Acido todo-trans retinoico inhibe en celulas mesangiales la expresion constitutiva de la proteina tipo 1 quimiotactica de monocitos. De nuevo, el mecanismo inhibitorio se encuentra mediado por AP-1. 6 Acido 9-cis retinoico ejerce sobre las celulas mesangiales efectos moduladores similares a los de acido todo-trans retnoico, pero a concentraciones generalmente inferiores. 7 Acido 9-cis retinoico podria ser un retinoide de eleccion en el tratamiento de estados inflatorios glomerulares.

Autor: SAEZ-TORRES BARROSO IRENE.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FAUL. FARMACIA.

Resumen: Se ha descrito que los gangliosidos inducen encefalitis autoinmune experimental (EAE), modelo animal de esclerosis multiple, en conejos. En este trabajo se ha estudiado la capacidad de los gangliosidos de inducir EAE en ratas Lewis y en ratones SJL, dos especies altamente susceptibles para la EAE. Los gangliosidos no inducen signos clinicos de EAE ni lesiones histopatologicas en sistema nervioso central (SNC) en ninguna de estas dos especies. El posible papel modulador de los gangliosidos en la EAE es controvertido. En este trabajo se demuestra que los gangliosidos tampoco son capaces de modificar el curso de la EAE en el modelo de EAE remitente-recurrente en ratones SJL.Sin embargo, la albumina metilada que se adiciona como excipiente para solubilizar los gangliosidos es capaz de prevenir la enfermedad en estos animales por un mecanismo dosis dependiente, posiblemente gracias a un efecto de inhibición competitiva con el peptido encefalitogenico 139-151 de la proteina proteolipidica por su presentacion antigenica. El peptido T es un octapeptido sintetico analogo a la secuencia de union de la proteina gp120 del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) al CD4 de los linfocitos T. Se han descrito diversos efectos inmunomoduladores para este péptido entre los que destaca la inhibicion de la activacion de los linfocitos T, la nihicion de la produccion de citocinas pro-inflamatorias, y un efecto neurotrofico a traves del receptor del peptido intestinal vasoactivo (VIP). Dado que se ha demostrado que el peptido T es capaz de interaccionar con tejido de rata y debido a los efectos moduladores descritos para este peptido se estudio el efecto del tratamiento con peptido T sobre la EAE aguda en ratas lewis. No se ha podido detectar un efecto beneficioso por parte de este peptido sobre la incidencia o el curso de la EAE, ni tampoco que el tratamiento modifique la activacion y produccion de citocinas en este modelo, lo que no aconsejaria su uso en esclerosis multiple.

Autor: CENTENO GUIL JOSE M..
Año: 1998.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: Mediante el desarrollo de un modelo original de isquemia cerebral global transitoria en cabra, hemos estudiado la implicación de episodios isquémicos de diferente duración sobre la respuesta microcirculatoria en la corteza cerebral, la reactividad vascular tras la isquemia y la neurodegeneración en la región hipocámpica. Los resultados obtenidos nos han permitido concluir que a un episodio isquémico le sigue una fase de hiperemia reactiva, que se continúa de una fase mantenida de hipoperfusión postisquémica. La duración del episodio isquémico se correlaciona con una alteración de la reactividad vascular a los principales factores vasoactivos endoteliales (endotelina-1 y óxido nítrico). Además, recuentos neuronales realizados en tres áreas diferentes del hipocampo demuestran la existencia de una vulnerabilidad neuronal selectiva y tardía en la zona CAI del hipocampo dorsal tras episodios isquémicos de larga duración. La muerte neuronal puede clasificarse como de tipo necrótico.

Autor: MOROLLON LORIZ M. JOSE.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Se estudia en el presente trabajo la posibilidad de controlar por endoscopia, el crecimiento de tumores gástricos inducidos, en un modelo experimental de carcinogénesis gástrica que emplea una fístula gastroenterocutánea tanto para la inducción carcinomatosa como para la observación endosocópica. Se han utilizado 32 ratas Wistar hembra de 10 a 12 semanas de edad, divididas en dos grupos I y II. A todos los animales se les construye una fístula de Mann Bollman, en el grupo II se administra a través de la fístula, 5 dosis de una solución acuosa al 3% de Metil, N Nitrosometilurea (15 mg/100 gr. de peso) a razón de una por semana, junto con un bloqueo pilórico previo para que el cancerígeno actúe solo en el estómago. Posteriormente, se practican al menos tres endoscopias a través de la fístula con un broncoscopio infantil Olympus r BF 3C20, en el grupo I para describir el estómago en la rata normal, y en el grupo II además se describen la evolución y características macroscópicas de los tumores o lesiones encontrados: forma, número, tamaño y localización. A las 30 semanas de comenzar el experimento se sacrifica a los animales, y se comprueba la concordancia de los hallazgos endoscópicos con la necropsia, realizando estudio anatomopatológico. En todos los animales válidos, 10 en cada grupo, se pueden realizar endoscopias seriaadas sin precisar intubación orotraqueal ni afectar al estado general del animal. Se pueden observar todas las regiones gástricas gracias a que la exploración se desarrolla con un endoscopio flexible. Todas las ratas del grupo II desarrollan tumores en la región escamosa del estómago, que observados por endoscopia, son confirmados en la necropsia. El estudio anatomopatológico identifica los tumores como carcinomas y papilomas escamosos.

Autor: GARISA ROCHA RAUL.
Año: 1998.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El reclutamiento alveolar es uno de los mecanismos que permiten al pulmón incrementar la superficie de intercambio aéreo a lo largo de la insuflación pulmonar. Estudios morfológicos recientes han demostrado la presencia de reclutamiento alveolar cuando se somete al pulmón a elevadas presiones transpulmonares. Sin embargo, estos estudios se han realizado en pulmones de animales adultos y desconocemos si el pulmón senil se comporta de la misma forma. El objetivo de este trabajo ha sido demostrar si existe reclutamiento alveolar en el pulmón del viejo cuando se le somete a presiones transpulmonares altas. Se han utilizado 40 ratas Fischer de 18 meses de edad que se dividieron en grupos de 10 animales. Sus pulmones se fijaron con formaldehído al 10% por vía intratraqueal a cuatro presiones diferentes (20, 25, 30 y 35 cm de H20), y posteriormente se procesaron para microscopía de luz y se estudiaron morfometricamente teniendo en cuenta variables que describían el número y tamaño alveolar, la cantidad de tejido y variables que cuantificaban elastina. Tras analizar estadísticamente los resultados, éstos mostraron que el incremento de la presión transpulmonar no había producido cambios sensibles ni en el número de alvéolos, ni en su tamaño, ni en la cantidad de tejido, demostrando que no hay reclutamiento alveolar en el pulmón senil de la rata si le somete a presiones transpulmonares por encima de 20 cm de H2O.

Autor: ESCUDERO NAFS FRANCISCO JOSE.
Año: 1998.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: Introducción.- La contractura capsular es la complicación más frecuente e importante de las prótesis mamarias. Su incidencia se ha reducido con las prótesis de silicona texturadas. La superficie texturada Biocell es microporosa. Se diseñó para prevenir la disposición alineada y paralela de las fibras de colágeno observada alrededor de las prótesis de silicona lisas, responsable de fuerzas contráctiles concéntricas inductoras de contractura. Objetivo.- Se ha realizado un estudio experimental comparativo entre implantes mamarios de silicona, lisos o texturados Biocell, con el objetivo de analizar el efecto de la superficie Biocell sobre la cápsula periprotésica y su potencial eficacia para prevenir la contractura capsular. Materiales y métodos.- Láminas cuadradas de elastómero de silicona, de 2,5 x 2,5 cm, lisas o texturadas Biocell por ambas caras, obtenidas de prótesis mamarias hinchables, fueron implantadas en cada flanco de 30 conejas blancas de Nueva Zelanda adultas. Cada animal recibió 4 implantes en 2 localizaciones: liso subcutáneo, texturado subcutáneo, liso submuscular y texturado submuscular (total: 120 implantes). Se realizaron análisis macroscópico, microscópico y estadístico a las 5, 16 y 30 semanas de la implantación, con 10 animales para cada intervalo de tiempo. Resultados.- Solamente los implantes texturados se adherieron a la cápsula. La de los implantes lisos subcutáneos y submusculares fue muy delgada, sin reacción inflamatoria o muy leve, y con fibras de colágeno alineadas paralelamente a la superficie del implante, a las 5, 16 y 30 semanas. La de los texturados subcutáneos y submusculares tenía un espesor significativamente mayor, con una reacción inflamatoria de cuerpo extraño y presencia de partículas de silicona rodeadas por células gigantes. Su estructura fibrilar presentaba protrusiones internas por infiltración tisular de la superficie microporosa, y una zona basal con múltiples capas de fibras de colágeno alineadas paralelamente como en los implantes lisos, a las 5, 16 y 30 semanas. Se detectaron células contráctiles mediante inmunotinción para actina, sugerentes de miofibroblastos, en ambos tipos de implante. Conclusiones.- La cápsula de los implantes texturados Biocell presenta características microscópicas propiciadoras de la contractura capsular, tales como el alineamiento fibrilar paralelo y miofibroblastos. Sin embargo, su adherencia a la cápsula podría contrarrestar dichos factores contráctiles y prevenir la contractura, por lo que consideramos que estos implantes son más adecuados para uso clínico que los lisos.

Autor: SANS GILI M. DOLORS.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA .

Resumen: Antecedentes y objetivo: El papel del citoesqueleto en la secreción pancreática exocrina y en la pancreatitis aguda no se ha podido establecer por el momento. Se ha sugerido que la disrupción del citoesqueleto podria ser el mecanismo desencadenante de la pancreatitis aguda. Métodos: Se han analizado los cambios que induce la estimulación con diferentes dosis de ceruleina a nivel del citoesqueleto de la célula acinar pancreática tanto in vivo como in vitro. Se han utilizado agentes activos sobre el citoesqueleto y se han analizado los cambios a nivel morfológico utilizando técnicas de inmunofluorescencia, microscopia de escánning láser confocal y un análisis quantitativo de las imágenes. Resultados: In vivo, la estimulación con ceruleina a la dosis máxima incrementa el marcage fluorescente de la beta-tubulina y de la actina-F. La ceruleina, a la dosis supramáxima causa un incremento de la fluorescencia de la actina-F basolateral, al tiempo que disminuye la fluorescencia emitida por beta-tubulina y por la actina-F apical. In vivo, la colchicina y la vinblastina causan una disrupción de lared de microtúbulos, e inhiben la secreción pancreática exocrina estimulada pero no inducen pancreatitis aguda. In vitro, la administración de taxol también inhibe la secreción de amilasa. Todos los agentes activos sobre el citoesqueleto disminuyeron el edema pancreático y el nmero de vacuolas autofágicas en la pancreatitis aguda inducida por ceruleina, pero no revirtieron el bloqueo secretor. Conclusiones: Se requiere la existencia de un citoesqueleto funcional par que puedan producirse los procesos de secreción pancreática exocrina y de pancreatitis aguda. Los microfilamentos podrian estar implicados en el bloqueo secretor pero también podrian tener un papel protector evitando la extrusión de material citoplasmático. Los efectos beneficiosos de los agentes activos sobre los microtúbulos sobre la pancreatitis aguda parece ser debido a su acción a nivel de los mecanismos de autofagia intracelular.

Autor: SVETLANA BUSIGUINA SAIIEVA.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: El eje hormona de crecimiento/factor de crecimiento semejante a la insulina I (GH/IGF-I) desempeña un papel relevante en el proceso del crecimiento. El eje GH/IGF-I, junto con el eje insulino-nutricional, constituyen dos sistemas hormonales que se interrelacionan en varios niveles. Ambos sistemas endocrinos están profundamente implicados en los procesos metabólicos y del crecimiento. La GH juega un papel muy importante en la homeostasis metabólica tanto en el sujeto sano como en los pacientes con diabetes tipo 1. Por otra parte, la nutrición adecuada y una secreción normal de insulina son importantes para el funcionamiento óptimo del eje GH/IGF-I. Las concentraciones de GH en los pacientes con diabetes tipo 1 mal controlados están elevadas. El factor de crecimiento semejante a la insulina (IGF-IE es un mediador del efecto estimulados de crecimiento de GH y sus niveles en pacientes diabéticos están disminuidos. El IGF-I en plasma circula unido a sus proteínas transportadoras (IGFBPs) mayoritariamente a IGFBP-1 e IGFBP-3 que también se encuentran alterados en el estado diabético. Hipóstesis: La expresión de los genes que intervienen en la regulación de la GH se encuentra alterada en la rata diabética insulino-dependiente. Objetivos: 1. Establecer los parámetros metabólicos y del crecimiento en la diabetes dependiente de la insulina provocada por estreptozotocina. 2. Estudiar cómo afecta el proceso diabético a la expresión de los secretagogos clásicos que controlan la secreción de GH. 3. Investigar los posibles cambios en la expresión de los factores implicados en el eje GH/IGF-I. 4. Determinar si la sensibilidad del hipotálamo se modifica en respuesta a los factores circulantes involucrados en el eje GH/IGF-I. 5. Analizar los cambios del sistema GH/IGF-I en la hipófisis. 6. Definir y comparar los cambios en el eje GH/IGF-I en el proceso diabético en el tiempo sin tratamiento con insulina exógena. Métodos: Hibridación in situ; Ensayo de protección de ribonucleasas; Radioinmunoensayo de IGF-I; Western-ligand blot de las proteínasde unión de IGF-I (IGFBPs). Resultados y conclusiones: 1. Los niveles de ARNm de los componentes del eje GH/IGF-I estudiados se modifican en la diabetes experimental provocada por estreptozotocina y dependiente de la insulina y, además, estas modificaciones dependen de la intesidad de la enfermedad. 2. Existe cierta independencia en la regulación de los nivelesde ARNm de los componentes del eje GH/IGF-I en la periferia respecto a la regulación central. 3. Los niveles de ARNm de hormona de crecimiento hipofisaria no se alteran en la diabetes mal controlada durante tres semanas; sin embargo, la disminución detectada en la diabetes intensa prolongada sin tratamiento insulínico durante dos meses sugiere posibles cambios en la secreción de las hormonas hipotalámicas reguladoras de la GH (SS y GHRH). 4. Los niveles hipotalánicos de ARNm disminuyen en el estado diabético a lo largo de todo núcleo arcuato en las células productoras de GHRH. 5. Los niveles hipotalámicos de ARNm SS disminuyen en la diabetes dependiente de la insulina. Esta disminución aparece solamente en las células productoras de SS situadas en la proximidad del tercer ventrículo, y su ubicación corresponde a partir de la aparición del núcleo supraóptico (bregma -0,8 mm; Paxinos G and Watson C., 1982) hasta la desaparición del núcleo paraventricular (bregma -2,3 mm aproximadamente; Paxinos G and Watson C. 1982). En ninguno de los otros núcleos estudiados los niveles de ARNm de la SS están alterados. 6. Los niveles de ARNm de IGF-I y su receptor en la hipófisis no se modifican en la diabetes mal controlada durante tres semanas, pero la diabetes sin tratamiento con insulina durante dos meses hace aumentar los niveles de éstos significativamente. 7. Los niveles de ARNm de IGFBP-2 hipofisiarios se encuentran elevados en cualquier modelo de diabetes experimental. 8. Los niveles de ARNm del receptor de hormona de crecimiento en el hígado están significativamente disminuídos en la diabetes experimental, lo qe puede ser una de las causas de la disminución de la expresión del gen de IGF-I. 9. Los niveles de ARNm de IGF-I, y sus proteínas transportadoras de IGFBP-1, -2 y-3 se modifican en el proceso diabético. Existe una disminución significativa de los niveles hepáticos de ARNm de IGF-I e IGFBP-3 y un aumento en los niveles de ARNm de IGFBP-1 y -2. 10. Los niveles circulantes de IGF-I están disminuídos en la diabetes y el grado de disminución está en relación directa con el grado de la intensidad de la diabetes. 11. Los niveles circulantes de IGFBP-1 e IGFBP-2 están aumentados en la diabetes mal controlada. El análisis por el método Western-ligand blot evidencia una disminución en los niveles de estas proteínas en la diabetes sin tratamiento insulínico durante dos meses. Esto puede indicar no solamente la disminución de la proteína circulante, sino también una disminución en la capacidad de unir IGF-I. -12. Los niveles circulantes de IGFBP-3 están disminuidos tanto en el grupo de las ratas mal controladas como en el grupo de las ratas diabéticas durante dos meses sin control insulínico. 13. Existe una disminución significativa de los niveles de ARNm de IGF-I y su receptor en el hipotálamo de las ratas diabéticas mal controladas durante tres semanas y, esta disminución, se conserva en la diabetes prolongada hasta dos meses sin tratamiento insulínico. Sin embargo los niveles de ARNm de IGFBP-2 hipotalámico dependen del grado de la diabetes y disminuyen solamente en el caso de la diabetes no controlada con la insulina durante dos meses, sin presentar modificaciones en la diabetes mal controlada durante tres semanas.

Autor: LUJAN GALAN MARCOS.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: OBJETIVO: Analizar los efectos de la denervación en la estructura prostática de la rata. MATERIAL Y METODOS: Se estudiaron 80 ratas (42 con excisión del ganglio pélvico -GP-). Tras 28-30 días se extrajo el lóbulo ventral (LV) ipsilateral para su estudio macroscópico, histológico y microscopía electrónica (ME). Se realizó análisis morfométrico por ordenador. Los resultados se compararon con los procedentes del LV de ratas intactas. RESULTADOS: Se observó una reducción del 36,6% del peso del LV denervado. Existió una reducción significativa del área del compartimento epitelial. No se encontró diferencia en el patrón vascular. El estudio con ME reveló una menor altura de la célula epitelial, de su área, del desarrollo del aparato de Golgi y del retículo endoplásmico, y un menor número de gránulos de secreción y de microvilli apicales. En las células de músculo liso, sólo se apreció un aumento del área de acúmulos ribosómicos tras la denervación. CONCLUSIONES: Este estudio ha demostrado una atrofia del LV denervado a expensas del componente epitelial. Los datos ultraestructurales sugieren una disminución global de la actividad secretora epitelial. Finalmente, el aumento de agregados ribosómicos en el músculo liso estromal podría reflejar una activación de estas células post-denervación.#

Autor: ARICETA IRAOLA JUAN.
Año: 1998.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: INTRODUCCION: La isquemia intestinal es una patologia cada vez más frecuente en nuestros hospitales. Aunque son amplios los conocimientos sobre su patogenia, todavia nose conoce un tratamiento capaz de prevenir la progresión del daño por isquemia reperfusión (I-R). Nosotros hemos desarrollado un modelo experimental de isquemia-reperfusión (I-R) y realizado ensayos terapeuticos con antioxidantes como la N-aceticisteína (NAC), el alopurinol (ALP) y la somatostatina (SMT). MATERIAL Y METODOS: Utilizamos ratas Wistar con un peso entre 250 y 300 gr. En ayunas de 24H y acceso libre al agua. Se anestesian con ketamina, atropina y valium, cumpliendo siempre la normativa de utilización de animales de laboratorio. Se realizó el estudio estadistico con el test "t student". Modelo de I-R: clampaje de la arteria mesenterica superior (60 min) y reperfusion tras el desclampaje de la misma (150 min). Posteriormente los animales son sacrificados mediante exanguinacion estudiandose: tamaño de la necrosis intestinal, histologia de la porcion isquemica y el intestino isquemico e intermedio, pulmon e higado: GSH, MDA, MPO, ATP, en corazon: GSH,MDA,ATP y en sangre periferica: GSH,MDA, Amilasa. Grupos: Control, I.R.I. Sin tratamiento, SMT (4,16 mg/kg), NAC (3 gr/kg), ALP(100 mg/kg: 50% dosis en el periodo isquemico y 50% durante la reperfusion), SMT/NAC, NAC/ALP. RESULTADOS Y DISCUSION: 1. El tamaño de la necrosis intestinal en nuestro modelo experimental pudo reducirse hasta un 60% con el uso de ALP y NAC. El ALP fue el más eficaz. A administración conjunta de ambos fármacos no mejoró los resultados. 2. El intestino necrotico presentó una importante disminución de GSH e incremento de MPO. En el intestino con isquemia intermedia sólo se observo un incremento en el MPO, que ademas pudo prevenirse con la administracion de SMT i.v., La correccion de esta alteración metabolica presupone la viabilidad del intestino con isquemia intermedia. 3. En el contexto del daño multiorganico cabe destacar una alteracion en el metabolismo del estrés oxidativo, e incluso energetico, en organos que no han sufrido isquemia reperfusión, apoyando la responsabilidad de los RLO en la lesión multiorganica. El incremento de MPO en pulmon e higado, muestra al neutrofilo como parte responsable de dicho daño aportando RLO. 4. La SMT se ha mostrado como un excelente citoprotector en el daño multiorganico. Ha sido capaz de prevenir la disminucion de GSH en el pulmon, la elevación de MDA en corazón, y la depleccion de ATP e incremento de MPO en higado. Cabe suponer que sera capaz de mejorar la disfunción de estos organos en el fallo multiorganico. 5. Desafortunadamente el ALP mostró un efecto citotóxico cardiaco disminuyendo sus niveles de GSH, limitando así sus posibilidades terapéuticas como ya sucede en la clínica actual.

Autor: DIAZ SANCHEZ MATIAS.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: FISIOLOGIA HUMANA PROGRAMA DE DOCTORADO: FISIOLOGIA Y ALIMENTACION.

Resumen: Las concentraciones plasmáticas del factor de crecimiento semejante a la insulina (IGF-I) están disminuídas en la cirrosis hepática avanzada. Datos de nuestro grupo muestran que el tratamiento con dosis bajas de IGF-I tiene efectos beneficiosos en la cirrosis experimental, mejorando la absorción intestinal de azúcares y aminoácidos, el balance nitrogenado, la osteopenia, y el hipogonadismo, además de inducir un efecto hepatoprotector sobre el hígado cirrótico. Sin embargo, todavía no se han explorado los mecanismos de este efecto beneficioso sobre la propia hepatopatía. Por otra parte, el principal mecanismo de hepatotoxicidad en la cirrosis inducida por CCI4 es el daño oxidativo por radicales libres que provoca peroxidación lipídica, alteración mitocondrial y daño en el ADN provocando la muerte celular, por necrosis o apoptosis. Con el fin de ahondar en los mecanismos del efecto hepatoprotector de IGF-I sobre el hígado cirrótico, los objetivos de este trabajo fueron: 1. Estudiar las pruebas de función hepática, citolisis y colestasis en animales cirróticos con o sin tratamiento y en los correspondientes controles sanos; 2. Evaluar la lesión anatomopatológica; 3. Explorar la sensibilidad del hígado al factor de crecimiento determinando la expresión del receptor tipo I para IGF-I; 4. Investigar la regeneración hepática mediante el estudio por inmunohistoquímica de la expresión del antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) y mediante la cuantificación de ácidos nucleicos, proteínas totales y contaje hepatocitario; 5. Estudiar la apoptosis mediante histoquímica in situ (TUNEL) y la expresión de bcl-2 (proteína antiapoptótica); 6. Analizar posibles mecanismos implicados en el efecto antioxidante y antiinflamatorio de IGF-I en la cirrosis experimental, estudiando la expresión hepática de transferrina, iNOS, y TGF-beta1 latente; y la determinación de las concentraciones hepáticas de MDA y TNFalfa. Además se estudió por espectrofotometría de masa atómica las concentraciones de metales prooxidantes (Fe y Cu). Para ello se incluyeron los siguientes grupos experimentales: CO, controles sanos (n=20); CO+IGF, controles tratados con IGF (2mig/100g de pc/día durante 14 días)(n=12); CI, cirróticos sin tratamiento (n=20); CI+IGF, cirróticos tratados con 2mig de IGF/100g de pc/día durante 14 días (n=20)(Protocolo I). Este mismo estudio se repitió posteriormente en animales cirróticos en los que se dejó evolucionar la cirrosis, administrando dosis de recuerdo del tóxico durante 19 semanas más (cirrosis ascítica): grupo CO (n=10); CI (n=10); y CI+IGF, que fueron tratados con IGF-I durante 21 días (n=10). Los resultados obtenidos confirmaron en los animales tratados con IGF-I una mejoría en la función y en la histopatología hepática. Se encontró que los animales cirróticos mostraban una hiperexpresión del receptor para IGF-I, mientras apenas se detectaba en los controles. Estos hallazgos explican que el hígado cirrótico se convierta en un órgano diana para IGF-I, mientras que la administración de IGF apenas induzca efectos en controles sanos. Además se demostró una disminución significativa de la peroxidación lipídica y en la concentración de metales prooxidantes, mientras que en los animales CI estaban significativamente aumentadas. El aumento del volumen hepático inducido por IGF-I no se debe a una proliferación celular mantenida, aunque tiene que existir una precoz proliferación que justifique la mayor masa resultante. El TGFalfa, factor de crecimiento implicado en la regeneración hepática y en la carcinogénesis, se encontró hiperexpresado en los animales cirróticos y el tratamiento IGF-I durante tres semanas disminuyó su expresión hepatocelular. Del mismo modo, y con estas pautas del tratamiento en los animales CI+IGF disminuyó la expresión de TGFbeta-1 e iNOS. Se observó un ligero efecto antiapoptótico del tratamiento, independiente de bc12 y del NO.

Autor: ESPINOSA DOMINGUEZ ELENA .
Año: 1997.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ANATOMIA, ANATOMIA PATOLOGICA E HISTOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: CIRUGIA.

Resumen: Se estudia el comportamiento de nervios periféricos tras la acción local de glicerol y triacetilglicerol, con la intención de estudiar los fenómenos degenerativos y regenerativos que se producen en dichas estructuras nerviosas así como la emisión de colaterales nerviosas. Se realizan 3 modelos experimentales en ratas Sprague-Dawley. En el primero de ellos se reproduce un modelo clásico de regeneración nerviosa en cámara tubular de silicona, confirmándose la secuencia de hechos descrita en la literatura. En un segundo modelo se administran en el entorno del paquete femoral triacetina y glicerol. Se obtienen resultados similares de degeneración y regeneración nerviosa. Sin embargo se evidencia formación de colaterales exclusivamente en aquellas experiencias en las que se administró triacetina. Por último se realiza una experiencia acerca de la capacidad de crecimiento de un nervio periférico en el interior de la luz de la arteria femoral, pretratando o no el nervio crural con glicerol o triacetina. En aquellos animales en los que el trayecto nervioso o fue pretratado se obtiene crecimiento nervioso a lo largo de la luz vascular. Sin embargo, si el trayecto nervioso había sido pretratado sólo se obtiene una intensa respuesta angiogénica e inflamatoria con destrucción final del nervio y de la pared vascular.

Autor: MONTES RODRIGUEZ JOSE MANUEL.
Año: 1997.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ESPECIALIDADES MEDICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: ESPECIALIDADES MEDICAS.

Resumen: El objetivo de este estudio es evaluar la implicación del sístema serotoninérgico en las alteraciones de la ritmicidad circadiana presentes en la depresión. Para ellos se realiza la monitorización de la actividad motora en ratas en las que ha inducido un modelo animal de depresión ampliamente aceptado como tal y que presenta una arquitectura del sueño REM similar a la observada en pacientes con depresión endógena. Para ello se administra neonatalmente clorimipramina (CMI) a crias de ratas, registrandose la actividad motora a los 4 meses de edad y analizándose conobiológicamente Una segunda tanda de registros se realiza a los 7 meses de edad habiendo seguido la mitad de las ratas una dieta rica en triptófano que ha demostrado ser útil para aumentar la transmisión serotoninérgica. Tras concluir los registros, se procede a la decapitación y posterior análisis neuroquímico de las monoaminas y metabolitos mediante cromatografía líquida de alta presión. Los resultados obtenidos permiten decir que las ratas tratadas neonatalmente con clorimipramina presentan un acortamiento del periodo así como un retraso en la acrofase en relación a las ratas control. Estas alteraciones cronobiológicas no se modifican tras la dieta rica en triptófano, lo cual hace pensar que la implicación serotoninérgica es escasa. En el análisis neuroquímico se detectó un intento de compensar una hipofunción del sistema serotoninérgico en las ratas tratadas neonatalmente con CMI asi como un aumento de la actividad dopaminérgica y una disminución noradrenérgica que hacen pensar en una implicación de este último sistema en las alteraciones cronobiológicas.

Autor: RAMIREZ TORTOSA CESAR LUIS.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ANATOMIA PATOLOGICA PROGRAMA DE DOCTORADO: ANATOMIA PATOLOGICA.

Resumen: Una de las complicaciones de la droga ciclosporina es su nefrotoxicidad con fibrosis progresiva. Nuestro objetivo ha sido demostrar que esa toxicidad es en parte mediada por la endotleina. Para ello, utilizamos un modelo con ratas Sprague-Dawley a dos meses a las que administramos por via subcutanea una dosis diaria de 25 mg/kg/día. Se cuantifico la endotelina mediante radioinmunoanalisis (orina, plasma), inmunohistoquimica (ET-1 y ET-3) glomerular y tubular y ARNM (Northern Blot). Ademas se cuantifico la fibrosis mediante un proceso automatico. Entre los resultados mas relevantes destacan un incremento de los ARNm de ambaa endotelinas al segundo mes, junto a un incremento de la ET-3 glomerular. El ARNm de la endotelina 3 aumento significativamente desde el primer mes. La fibrosis fue mayor en el grupo tratado con el farmaco versus los controles y se correlaciono con la expresion de endotelinas tubulares sobre todo la 3. Se concluye que la ET-3 es un mediador de la lesion D cronica por ciclosporina y mediadora de la fibrosis.

Autor: REVESTIDO GARCIA RAFAEL.
Año: 1997.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y PATOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS .

Resumen: La administración postnatal de dexametasona, mejora clínicamente la displasia bronco-pulmonar y la fibrosis pulmonar, que se produce en un elevado porcentaje de casos de recién nacidos prematuros que requieren oxigenoterapia. En el presente trabajo se ha estudiado el efeco sobre el pulmón de rata de la dexametasona administrada postnatalmente en recién nacidos en dos situaciones: normoxia (aire ambiente) e hiperoxia (95% O2). El estudio se ha realizado en ratas recién nacidas de 0, 2, 4, 7 y 14 días de edad. La dosis administrada de dexametasona fue: 0,4 mg/kg/día en los días 0 y 1 de edad, 0,3 mg/kg/día en el día 3,0,2 mg/kg/día en el día 5 y 0,1 mg/kg/día en el día 9. Hemos realizado estudios de: 1. Supervivencia. 2. Crecimiento con estudios del peso corporal, talla, peso del pulmón seco y húmedo y las tasas correspondientes. 3. Morfología: microscopía óptica y electrónica. 4. Morfometría: % de aire, Lm., ISA, ISA-específico. Hemos obtenido una inhibición del crecimiento producido por la dexametasona, una inhibición de la septación alveolar, y paradójicamente, una mejora de las lesiones producidas por hiperoxia.

Autor: RODRIGUEZ PEREZ JOSE ANTONIO.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CONCEPTOS Y METODOS DE BIOLOGIA CELULAR CON IMPLICACION ES BIOMEDICAS.

Resumen: La implicación del papilomavirus humano como agente causal de la neoplasia cervical ha sido firmemente establecida en numerosos estudios epidemiológicos. Sin embargo, el mecanismo mediante el cual el HPV contribuye a la carcinogénesis cervical continúa siendo objeto de controversia. En particular, no ha sido posible obtener información concluyente acerca de las consecuencias biológicas de la interacción entre la oncoproteína viral E6 y p53 en los tumores primarios de cérvix. Por otra parte, si bien el papilomavirus es el agente "iniciador" del proceso, son necesarias alteraciones genómicas adicionales en las células epiteliales cervicales para que se complete la transformación maligna. En este sentido, estudios funcionales y, recientemente, estudios de LOH mediante marcadores polimórficos han revelado la existencia de uno o varios genes en el cromosoma 11, cuya inactivación podría estar relacionada con la génesis y/o progresión del cáncer de cérvix. Finalmente, no todos los casos de carcinoma de cérvix se asocian a la infección por papilomavirus y hay que esclarecer si, en estos casos, la tumorigénesis depende del fracaso de otro sistema celular de regulación de la estabilidad genómica. En el presente trabajo hemos analizado en 60 muestras de tumores primarios de cérvix la estructura del gen p53 mediante PCR-SSCP, y la expresión de p53 y p21 waf1/cip1 con técnicas inmunohistoquímicas, y hemos utilizado una técnica de PCR para detectar la presencia de DNA de HPV en estas muestras. Además, hemos practicado un análisis mediante PCR y marcadores microsatélite de diferentes regiones cromosómicas en una serie de 54 tumores primarios de cérvix, como estrategia para la detección de alteraciones en genes supresores de tumores y para evaluar la incidencia del fenotipo RER+ (inestabilidad generalizada en secuencias microsatélite) como indicativo de la existencia de defectos en el sistema MMR de reparación del DNA. La prevalencia de los genotipos de alto riesgo de papilomavirus en los tumores primarios de cuello uterino de la serie es del 81,5%, mientras que las mutaciones en el gen p53 son muy infrecuentes, resultados coherentes con la hipótesis de que la inactivación de p53 en la carcinogénesis cervical se produce a nivel de proteína, y como resultado de la infección viral. Nuestros resultados indican, asimismo, que la actividad de p53 como inductor transcripcional de la proteína p21 WAF1/CIP1 no se encuentra necesariamente bloqueada en los tumores primarios cervicales asociados al papilomavirus, y que la infección por los genotipos de alto riesgo de papilomavirus no equivale funcionalmente a la mutación en el gen p53 en las células tumorales del epitelio cervical. Por otra parte, hemos encontrado que las delecciones alélicas clonales en el locus APOA11 de la región q23.3 del cromosoma 11 son prevalentes en los tumores de cuello uterino. Esta observación respalda la hipótesis de la existencia de un gen supresor localizado en el brazo largo del cromosoma 11 cuya inactivación es crítica en la carcinogénesis cervical. Nuestros resultados permiten, además, reducir la extensión de este segmento en 15 megabases con respecto a la extensión previamente estimada por otros autores. Finalmente, hemos comprobado que incidencia de "inestabilidad en secuencias microsatélite" en los tumores de cuello uterino de la serie de estudio es muy baja. Ninguno de los tumores cervicales de la serie presenta la inestabilidad generalizada en secuencias microsatélite que caracteriza al fenotipo RER+. Nuestros resultados indican que los defectos en los genes de reparación de emparejamientos incorrectos de bases del DNA, o genes MMR, no median en la génesis del cáncer de cuello uterino.

Autor: VEGA VAZQUEZ FRANCISCO.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: ANATOMIA PATOLOGICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA CELULAR.

Resumen: Este estudio evalúa en ratas SHR las alteraciones que produce la HTA a nivel vascular (aorta, coronarias y capilares intramiocárdicos), en relación con la matriz extracelular, equilibrio prolif.-apoptosis y factor de crecimiento transformante. Valoramos la relación entre estas alteraciones con el sistema RA local y el efecto protector de los IECAs. Los resultados obtenidos muestran que: las alteraciones de la matriz extracelular dependen en mayor medida de la Ang-II que de la propia PA elevada. Alta susceptibilidad frente a la apoptosis en las células del ML vascular de aorta, coronarias y en células endoteliales de capilares en los animales SHR. Disminución de dicha susceptibilidad en los animales tratados. Comportamiento diferente de la expresión de TGF en la HTA en aorta y en coronarias que es funcionalmente significativa.

Autor: ABAD HERNANDEZ JOSE LUIS.
Año: 1996.
Universidad: SALAMANCA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y PATOLOGIA..

Resumen: PARA EL ESTUDIO DE LOS TUMORES SE HAN DESARROLLADO DIFERENTES MODELOS EXPERIMENTALES. EN ESTA TESIS DOCTORAL SE ESTUDIA LA IDONEIDAD DEL MODELO EXPERIMENTAL DUNNING R3327H; PARA ELLO SE INDUCEN MEDIANTE LINEAS CELULARES DUNNING R3327H TUMORES EN 45 RATAS MACHO COPENHAGEN-FISHER, SE ESTUDIAN 62 TUMORES PROSTATICOS HUMANOS DE DIFERENTES TIPOS HISTOLOGICOS. SE SOMETEN LOS TUMORES INDUCIDOS Y LOS HUMANOS A ESTUDIOS HISTOLOGICOS, INMUNOHISTOQUIMICOS Y DE CITOMETRIA DE FLUJO PARA FINALMENTE COMPARAR LOS RESULTADOS DE UNO Y OTRO MODELO CON EL FIN DE PODER VALORAR LA CONCORDANCIA O DISCREPANCIA DE LOS DATOS OBTENIDOS.

Autor: CAMPORRO FERNANDEZ DANIEL.
Año: 1996.
Universidad: OVIEDO.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIRUGIA Y ESPECIALIDADES MEDICO-QUIRURGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA PARA EL DIAGNOSTICO TRATAMIENTO E INVESTIGACION EN CIRUGIA Y ESP. MEDICO-QUIRURGICAS.

Resumen: DURANTE, LA ISQUEMIA SE PRODUCEN ALTERACIONES QUE FAVORECEN EN EL MOMENTO DE LA REPERFUSION LA GENERACION DE RADICALES LIBRES TOXICOS PARA LOS TEJIDOS. HEMOS INVESTIGADO EN UN MODELO ANIMAL SI TRAS PERIODOS DE ISQUEMIA CONOCIDOS AUMENTABA EL GRADO TISULAR EN EL MOMENTO DE LA REPERFUSION. TAMBIEN SI LA SUPEROXIDO DISMUTASA (ELIMINADOR DE RADICALES LIBRES) DISMINUIA, INYECTADA MOMENTOS ANTES LAS LESIONES CAUSADAS POR LA REOXIGENACION. EN RATAS WISTAR MACHO AISLAMOS UN COLGAJO MUSCULAR SOBRE SU PEDICULO. REALIZAMOS SIETE SERIES DE SEIS ANIMALES CADA UNA. COMO PARAMETROS DE LESION UTILIZAMOS LOS SIGUIENTES: MEDICION DE CPK PLASMATICA, CUANTIFICACION DE MDA TISULAR, ALTERACIONES HISTOLOGICAS Y ULTRAESTRUCTURALES. HEMOS COMPROBADO QUE LA SDO REDUCE, SIGNIFICATIVAMENTE, LAS ALTERACIONES HISTOLOGICAS Y ULTRAESTRUCTURALES EN LOS GRUPOS SOMETIDOS A REPERFUSION. LA CONCENTRACION DE CPK TAMBIEN DISMINUYE PERO, SOLO SIGNIFICATIVAMENTE, EN EL GRUPO DE REPERFUSION CORTA. EL MDA NO SE VE INFLUIDO ESTADISTICAMENTE POR LA SUPEROXIDO DISMUTASA.

Autor: DELGADO SANCHEZ JUAN RAMON.
Año: 1996.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: MEDICINA PROGRAMA DE DOCTORADO: MEDICINA.

Resumen: LA PANCREATITIS AGUDA ES UNA ENFERMEDAD RELATIVAMENTE FRECUENTE EN ESPAÑA, 331 CASOS POR MILLON DE HABITANTES Y AÑO. EN EL 80% DE LOS CASOS LA EVOLUCION ES FAVORABLE, PERO EL 20% RESTANTE PRESENTA UNA MOTALIDAD, QUE EN ALGUNAS SERIES ALCANZA EL 50% SIN QUE EXISTA UN CONOCIMIENTO CLARO SOBRE LAS CAUSAS DESENCADENANTES Y TRATAMIENTOS ESPECIFICOS. EL ESTUDIO DE LOS MECANISMOS FISIOPATOLOGICOS ES LA VIA MAS IMPORTANTE TENDENTE A DAR LUZ A UN TRATAMIENTO EFICAZ, Y LOS MODELOS EXPERIMENTALES UNA HERRAMIENTA ALTERNATIVA A LA DIFICULTAD DE INVESTIGAR EN HUMANOS. POR OTRO LADO, NO SE CONOCE EL PAPEL FISIOPATOLOGICO QUE PUEDE DESEMPEÑAR LA COAGULACION EN EL DESARROLLO DE LA PANCREATITIS AGUDA. EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO FUE DEMOSTRAR QUE LA HIPERCOAGULABILIDAD JUEGA UN IMPORTANTE PAPEL EN EL PRONOSTICO DE LA ENFERMEDAD, PARA LO CUAL EL MARCO CONCEPTUAL DE APOYO, COMO HIPOTESIS PREVIA, FUE QUE EL DAÑO EN LA MICROCIRCULACION PANCREATICA INDUCE UN ESTADO DE HIPERCOAGULABILIDAD LOCAL Y SISTEMICA, QUE POTENCIA LA LESION PRODUCIDA POR OTROS COMPONENTES DE LA RESPUESTA INFLAMATORIA, ADEMAS DE PROVOCAR ISQUEMIA. PARA CUMPLIR ESTE OBJETIVO GENERAL, SE HAN ESTABLECIDO TRES OBJETIVOS ESPECIFICOS DESARROLLADOS EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE PANCREATITIS AGUDA EN RATAS, INDUCIDA MEDIANTE INYECCION INTRADUCTAL DE TAUROCOLATO SODICO O SALINO: 1.- DEMOSTRAR QUE EXISTE MAYOR HIPERCOAGULABILIDAD EN LA PANCREATITIS AGUDA GRAVE QUE EN LA LEVE. 2.- MODULAR EL ESTADO DE HIPERCOAGULABILIDAD MEDIANTE DALTEPARINA SODICA. 3.- DEMOSTRAR QUE CON LA MODULACION DE LA HIPERCOAGULABILIDAD, MEJORA EN GENERAL LA GRAVEDAD DE LA PANCREATITIS AGUDA. LOS RESULTADOS INDICAN QUE LA HIPERCOAGULABILIDAD, COMO UN COMPONENTE MAS DENTRO DE LA RESPUESTA INFLAMATORIA, ES CAPAZ DE MODULAR LA GRAVEDAD DE LA PANCREATITIS AGUDA. ADEMAS, SE HA PODIDO DESARROLLAR UN MODELO DE LA PATOGENIA EN RELACION A LA TROMBOGENESIS, EN EL CUAL, EN UNA PRIMERA FASE (PRIMERAS DOCE HORAS) EL DAÑO LOCAL Y SISTEMICO SE PRODUCIRIA FUNDAMENTALMENTE POR LA ACTIVACION DE MEDIADORES INFLAMATORIOS, INCLUIDOS LOS COAGULATIVOS; Y UNA SEGUNDA FASE (12-24 HORAS), EN QUE ADQUIRIRIA MAS IMPORTANCIA LA ACTIVIDAD TROMBOGENICA, LA CUAL VA PARALELA A LA ELEVADA RETENCION URINARIA. CON EL TRATAMIENTO, DISMINUYE LA RESPUESTA INFLAMATORIA EN LA PRIMERA FASE, LO QUE SE CORRESPONDE CON UNA LEVE MEJORIA DE LA SUPERVIVENCIA (83% FRENTE AL 74%) A LAS 24 HORAS, A LA VEZ QUE ELIMINA DE FORMA NOTABLE LA ACTIVIDAD TROMBOGENICA DE LA SEGUNDA FASE, CON LO QUE MEJORA LA MICROCOAGULACION LOCAL Y SISTEMICA, Y CON ELLO, SE FAVORECE LA DISMINUCION DE LA ASCITIS Y MEJORA DE LA DIURESIS, CORRESPONDIENDOSE ADEMAS, CON UNA MEJORA MUY NOTABLE DE LA SUPERVIVENCIA A PARTIR DE LAS 24 HORAS (76% FRENTE AL 54%). POR TANTO, SE CONCLUYE QUE LA HIPERCOAGULABILIDAD DESEMPEÑA UNA ACTIVIDAD IMPORTANTE EN EL PRONOSTICO DE LA PANCREATITIS AGUDA GRAVE, TANTO POR SU CAPACIDAD PARA POTENCIAR OTROS SISTEMAS INFLAMATORIOS (COMPLEMENTO, CITOQUINAS, ETC.), COMO POR FORMACION DE MICROCOAGULOS, QUE FAVORECEN LA ISQUEMIA Y POR TANTO LA NECROSIS, ACTUANDO INICIALMENTE A NIVEL LOCAL Y EXTENDIENDOSE MAS TARDE A OTROS ORGANOS.