BIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS

Autor: García Cañas Virginia .
Año: 2004.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: Facultad de Ciencias.
Centro de realización: Instituto de Fermentaciones Industriales. CSIC.

Resumen: En esta tesis se ha estudiado la aplicación de la electroforesis capilar en geles (CGE) al análisis de secuencias de DNA específicas amplificadas por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para llevar a cabo la detección de organismos modificados genéticamente (OMGs) en alimentos. Para llevar a cabo este estudio se han desarrollado tres procedimientos de análisis novedosos que permiten la detección sensible, la cuantificación y la detección múltiple de OMGs en alimentos. La primera parte de la memoria recoge la metodología empleada en el desarrollo de un método sensible para la detección de maíz transgénico Bt Event 176 en harina de maíz. El método se basa en la amplificación de secuencias de DNA transgénicas y DNA genómico de maíz por PCR a partir de extractos purificados de maíz, y en su posterior análisis mediante CGE y detección de fluorescencia inducida por láser (LIF). La utilización de CGE-LIF para llevar a cabo el análisis de los productos de PCR proporciona una elevada sensibilidad y eficacia, elementos que son de vital importancia en la discriminación de falsos negativos y positivos. Además, demuestra una exactitud aceptable en el cálculo del tamaño de los fragmentos de DNA estudiados y una reproducibilidad buena, de modo que el método puede ser aplicado con confianza para la detección de maíz transgénico a niveles inferiores a los que ha fijado la normativa europea para el etiquetado distintivo obligatorio de los alimentos que contienen, consisten o son producidos a partir de OMGs (en la actualidad es 0.9% OMG). La segunda parte de la memoria detalla el diseño y puesta a punto de un procedimiento analítico para la determinación cuantitativa de maíz transgénico Bt Event 176 en alimentos. Dicho procedimiento consiste en el empleo de sistemas de amplificación competitiva mediante QC-PCR (Quantitative Competitive PCR) y el análisis de los productos de PCR mediante CGE-LIF. La última parte de la memoria recoge la aplicación del método CGE-LIF como herramienta de análisis en la optimización de sistemas de amplificación simultánea de seis secuencias de DNA específicas por PCR-multiplex. También se demuestran las ventajas que presenta el método CGE-LIF frente a las técnicas electroforesis convencionales en términos de sensibilidad y resolución aplicado a la detección simultánea de cinco variedades transgénicas de maíz (Bt11, T25, MON810, GA21 y Bt Event 176). El método CGE-LIF proporciona buena reproducibilidad en los resultados, de manera que puede ser aplicado para la detección de las cinco variedades de maíz transgénico y comprobar el cumplimiento de las regulaciones de la UE.

Autor: CEBALLOS BASTERRA M. ESTHER.
Año: 2001.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS DE LA U.P.V..

Resumen: La aplicación de la transformación genética en la mejora de la patata (Solamum tuberosum L.) permite una transferencia rápida y económica de los genes deseados desde una especie o variedad a otra preservando las características intrínsecas del genotipo receptor. Se ha introducido genes con resistencia frente a los principales patógenos virales y fúngicos en los cvs. de patata, de buenas características, Nagore, Inca, Nerea, Zarina, Desiree y Superior, pero susceptibles a algunas enfermedades. La introducción de genes se realizó via Agrobacterium tumefaciens con distintas combinaciones de genes de resistencia: cplmv (gen de la cápside proteica del virus del mosaico de la lechuga) con protección frente al virus PVY; gen de la osmotina ap24 y gen de la glucanasa con protección frente al hongo Phytophthora infestans; rip30 (proteína inactivadora de ribosomas) con resistencia a hongos; y el gen de la quitinasa chia con protección frente a Rhizoctonia solani. También se evaluaron plantas obtenidas en el INGEBI de Argentina frente a los patógenos víricos PVY y PLRV y portadores de los genes cplmv y replicasa. Se evaluaron frente a los patógenos víricos y fúngicos PVY, PLRV, R.solani y P.infestans, obteniendo plantas portadoras del en cplmv con resistencias frente al virus PVY, plantas resistentes a PLRV portadoras de la replicasa de PLRV, y líneas prometedoras portando los genes rip30 y chia con resistencia al hongo R.solani. Así mismo se observó la baja efectividad de los constructos empleados frente a P.infestans obteniendo una sola línea resistente.