TECNOLOGIA DE ANTIBIOTICOS

Autor: MARTIN TRIANA ANGEL JESUS.
Año: 1993.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.

Resumen: DOS NUEVOS "LOCI" REGULADORES, ABA A Y ORFI0, SE HAN CARACTERIZADO EN STREPTOMYCES COELICOLOR. LA INSERCION INACTIVANTE TANTO DE LA ORFA COMO DE LA ORFB DEL GEN ABA A ORIGINO UN FENOTIPO NO PRODUCTOR DE ANTIBIOTICOS. ES ACOPLANTE SOLO LA DELECCION SIMULTANEA DE LAS ORF, A Y B CONDUJO A UN FENOTIPO NO PRODUCTOR DE ACTINORHODINA, PRODIGIOSINA Y CDA, SIN AFECTAR LA SINTESIS DE METILENOMICINA. LA PRODUCCION FUE RESTAURADA POR EL ABA A, ASI COMO POR LOS GENES AFS R Y ACT II-ORF4. EL GEN REDD SOLO RECUPERO LA SINTESIS DE PRODIGIOSINA. LOS ANALISIS DE TRANSCRIPCION EN EL MUTANTE REVELARON QUE EL GEN REDD TENIA DISMINUIDOS SUS NIVELES DE MRNA. LOS GENES AFSR Y ACTII-ORF4 NO APARECIERON ESTAR AFECTADOS EN SU TRANSCRIPCION. LA SECUENCIACION DEL EXTREMO DERECHO DEL GRUPO DE GENES ACT REVELO LA PRESENCIA DE DOS ORF, LA ORF10 PERTENECIENTE A LA FAMILIA LYSR Y LA OREII, CUYO PRODUCTO GENICO ES SIMILAR A LA PROTEINA ACTIII.

Autor: MADERO BARRAJON M. PILAR.
Año: 1989.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA Y SALUD PUBLICA. UNIDAD DE MICROBIOLOGIA. FACULTAD DE MEDICINA. UNIVERSIDAD DE ZARAGOZA..

Resumen: LOS ESTUDIOS REALIZADOS EN EL HOSPITAL CLINICO UNIVERSITARIO DE ZARAGOZA SOBRE LOS PLASMIDOS QUE DETERMINAN RESISTENCIA A AMINOGLICOSIDOS MOSTRARON LA PRESENCIA DE UN PLASMIDO R EPIDEMICO DEL GRUPO INC M DE 78 KB. ESTE PLASMIDO CONFIERE RESISTENCIA A GENTAMICINA POR LA PRODUCCION DE UNA AAC(3) SUBCLASE V. ESTA ENZIMA SE HA COMPARADO CON OTRA DEL MISMO TIPO PERO DE DISTINTA SUBCLASE: LA AAC(3)-II. AMBAS ENZIMAS PRESENTAN UN PERFIL DE SUSTRATO SIMILAR DIFERENCIANDOSE EN QUE ESTA ULTIMA MODIFICA E INACTIVA AL ANTIBIOTICO KANAMICINA A, MIENTRAS QUE LA AAC(3)-V MODIFICA MUY LEVEMENTE ESTE ANTIBIOTICO SIN PROVOCAR INACTIVACION. AMBAS ENZIMAS SE HAN ESTUDIADO SIMULTANEAMENTE MEDIANTE DIVERSAS TECNICAS. DESDE EL PUNTO DE VISTA MICROBIOLOGICO SE HA ESTUDIADO EL PATRON DE RESISTENCIA QUE DETERMINAN CAPAS PORTADORAS DE LOS PLASMIDOS QUE LAS CODIFICAN (PUZ1004 Y PIP 176) MEDIANTE LA TECNICA DISCOPLACA Y LA DETERMINACION DE SU CONCENTRACION INHIBITORIA MINIMA FRENTE A VARIOS ANTIBIOTICOS AMINOGLICOSIDOS. DESDE EL PUNTO DE VISTA BIOQUIMICO SE HAN ESTUDIADO LOS PERFILES DE SUSTRATO QUE CONFIEREN, ASI COMO LOS FACTORES QUE INFLUYEN SOBRE SU ACTIVIDAD CATALITICA (PH, FUERZA IONICA Y TEMPERATURA) MEDIANTE EL ENSAYO RADIOENZIMATICO. ESTAS ENZIMAS SE HAN PURIFICADO A HOMOGENEIDAD MEDIANTE TECNICAS DE CROMATOGRAFIA EN COLUMNA (INTERCAMBIO IONICO Y AFINIDAD). A PARTIR DE LAS ENZIMAS PURIFICADAS SE DETERMINO SU PESO MOLECULAR Y SU PUNTO ISOELECTRICO, ASI COMO SU COMPORTAMIENTO CINETICO (KM Y V MAX) FRENTE AL ANTIBIOTICO SUSTRATO GENTAMICINA CLA. EL ESTUDIO SE COMPLETO CON LA HIBRIDACION EN COLONIA MEDIANTE SONDAS ADN DE LA AAC(3)-V.

Autor: ATIENZA BORONAT M. JULIA.
Año: 1987.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: QUIMICA .
Centro de realización: ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS AGRONOMOS (DEPARTAMENTO BIOTECNOLOGIA. AREA DE CONOCIMIENTO MICROBIOLOGIA).

Resumen: SE AISLA DE LOS CULTIVOS DE PENICILLIUM CAPSULATUM UNA SUSTANCIA ACTIVA QUE TIENE PROPIEDADES BACTERICIDAS FRENTE: KLEBSIELLA PNEUMONIAE PROTEUS MIRABILIS E.COLI CITROBACTER FREUNDII; SERRATIA LIQUEFACIENS ENTEROBACTER AEROGENES PSEUDOMONAS AERUGINOSA SALMONELLA ENTERITIDIS ACINETOBACTER SPP MYCOPLASMA MELEAGRIDIS STAPHYLOCOCCUS AUREUS YERSINIA SPP Y SHIGELLA SPP. LAS CONDICIONESOPTIMAS DE CULTIVO SE OBTIENEN CUANDO SE SIEMBRA EL P. CAPSULATUM EN EL ANTIBIOTIC TEST BROTH Y PATATA-DEXTROSA A PH 4.5. EN ESTAS CONDICIONES EL PROCESO DE FERMENTACION TIENE TRES FASES: PRE-CRECIMIENTO CRECIMIENTO Y PRODUCCION. SE ENSAYA EL PODER FUNGICIDA DE DICHA SUSTANCIA ACTIVA Y SE VE QUE CARECE DE DICHO PODER. PARA ASILAR LA SUSTANCIA ACTIVA DEL EXTRATO BRUTO SE FRACCIONA ESTE POR CROMOTOGRAFIA DE COLUMNA UTILIZANDO DICLOROMETANO ACETONA Y METANOL EN DISTINTAS PROPORCIONES COMO ELUYENTES SE OBTIENEN ASI 6 FRACCIONES QUE SOMETIDAS A ENSAYOS DE ACTIVIDAD SOLO UNA ES ACTIVA LA ELUIDA CON LA MEZCLA DICLOROMETANO/ACETONA 95:5. ESTA FRACCION SE PURIFICA POR HPLC USANDO COMO FASE MOVIL LA MEZCLA DICLOROMETANO/ACETATO DE ETILO 95:5 Y UNA COLUMNA DE U-PORASIL Y COMO DETECTOR DE UV. ASI SE OBTIENEN 4 SUBFRACCIONES DE LAS QUE SOLOUNA PRESENTA ACTIVIDAD Y CORRESPONDE A UN PRODUCTO PURO OPALESCENTE CUYO ANALISIS DE COMPOSICION CENTESIMAL DA UNA FORMULA EMPIRICA DE C SUB 9 H SUB 10 O SUB 4 CON 5 INSATURACIONES. EL ESPECTRO DE IR NOS INDICA LA PRESENCIA DE GRUPOS CARBONILO DE LACTONA DE 4 O 5 CARBONOS Y LA PRESENCIA DE UN DOBLE ENLACE. EL ESPECTRO DE RMN DE H INDICA LA PRESENCIA DE PROTONES OLEFINICOS ALIFATICOS UNIDOS A OXIGENO Y ALIFATICOS NO UNIDOS A GRUPOS ELECTRONEGATICOS. EL ESPECTRO DE RMN DE 13C CONFIRMA LA PRESENCIA DE 9 CARBONOS DOS DE ELLOS CARBONILICOS DOS OLEFINICOS DOS UNIDOS A OXIGENO Y TRES SEÑALES QUE CORRESPONDEN A CH CH SUB 2 Y CH SUB 3. EL ESPECTRO DE MASAS NO DA PICO CORRESPONDIENTE AL ION MOLECULAR PERO PROPORCIONA FRAGMENTACIONES QUE JUSTIFICAN PLENAMENTE LA ESTRUCTURA ASIGNADA. CON TODOS ESTOS DATOS SE PROPONE PRA NUESTRO PRODUCTO LA FORMULA ESTRUCTURAL DE LA ETISOLIDA PRODUCTO RESEÑADO EN EL CHEMICAL ABSTRACTS; Y DEL QUE NO SE CONOCIAN SUS PROPIEDADES BIOLOGICAS.