ALIMENTOS TRANSGENICOS

Autor: HERNÁNDEZ PÉREZ MARTA.
Año: 2003.
Universidad: LEON.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: En este trabajo se han desarrollado métodos analíticos específicos, sensibles, fiables y reproducibles basados en técnicas moleculares (PCR y chip), para detectar, identificar y cuantificar organismos modificados genéticamente (OMG) que puedan estar presentes en ingredientes, aditivos y/o aromas utilizados en alimentación humana y/o animal. Este trabajo responde a la actual normativa europea de etiquetado asi como el derecho de información del consumidor. En primer lugar se han optimizado y estandarizado protocolos de extracción y purificación de ADN de cinco matrices alimentarias: semillas, harinas y extractos de proteínas: grasas y aceites; lecitinas: almidón y cerveza. También se han desarrollado métodos de detección, identificación y cuantificación basados en PCR convencional y PCR a tiempo real para nueve especies vegetales: colza, patata, tomate, maíz, algodón, girasol, arroz, cebada y trigo. Estos métodos han demostrado que pueden ser utilizados como controles endógenos de referencia. Se han caracterizado cinco líneas transgénicas comercializadas: la secuencia completa del evento MON810 presente en el maíz YieldGard®, así como su secuencia de inserción adyacente correspondiente al extremo 3': una región comprendida entre el terminador nos y el promotor r-act, situada entre dos secuencias transgénicas insertadas en tándem en la línea de maíz GA21; las regiones correspondientes a los transgenes insertados en la línea de colza OXY-235, desde el promotor 35S-CaMV hasta el final del gen nitrilasa, y la región correpondiente al gen EPSPS en el algodón Roundup Ready® . A partir de estas secuencias se han desarrollado métodos de detección, identificación y cuantificación basados en PCR convencional y PCR a tiempo real de los siguientes OMG: maíz MON 810 y GA21, colza OXY-235 y algodón Roundup Ready®. Además, se han caracterizado dos regiones de las construcciones insertadas en la variedad de maíz StarLinK TM, comprendidas entre el promotor y el terminador de los genes cry9C y bar, respectivamente. Se han desarrollado dos métodos de cribado que permiten detectar el terminador nos y el gen marcador nptII en aquellos OMG en los que están presentes. Se han desarrollado dos sistemas multiplex: uno basado en PCR convencional y análisis electroforético de los productos obtenidos, para la identificación simultánea de 4 líneas de maíz transgénico; Bt11, MON810, GA21 y T25 y otro basado en PCR a tiempo real y análisis de las curvas de disociación de los productos obtenidos, que permite la identificación simultánea de hasta tres OMGs. Se ha desarrollado un sistema de detección e identificación de OMGs basado en la técnica de chips de ADN para el análisis múltiple de alimentos.

Autor: MOHAMED YASSEIN AHMED ABD EL-FATTAH.
Año: 2002.
Universidad: CORDOBA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: ESTACIÓN EXPERIMENTAL "LA MAYORÍA" CSIC.

Resumen: La salinidad es un problema global que afecta millones de hectáreas de tierra cultivada en todo el mundo y que crece cada año principalmente en las tierras regadas de climas semiáridos. La dificultad existente para recuperar tierras salinizadas hace que sea necesario buscar genotipos tolerantes para poder cultivar en ellas. El tomate, por su importancia económica, por el conocimiento genético y fisiológico que de él se tiene y su relativa facilidad de cultivo, cruzamiento y transformación, es un cultivo ideal para este estudio. El objetivo de este trabajo ha sido determinar la efectividad de los genes de tolerancia a la salinidad que se va describiendo y clonando, evaluando la respuesta a la salinidad de plantas de tomate transformadas con genes procedentes de levadura (HAL2 y HAL3) de Arabidopsis (phal3) y de tomate (tsw12, tas14 y tpx1), mediante el estudio del efecto de la sal sobre 19 caracteres algunos ya conocidos por su relación con la salinidad como la cosecha, el peso fresco y seco de la planta, concentración de Na+ y K+ en la planta, y otros apenas estudiados como el consumo de agua, relaciones hídricas en la planta, la eficiencia en el uso del agua, la tolerancia del tejido foliar y el transporte de NA+ a la parte aérea de la planta. Las concentraciones salinas aplicadas (70 y 50 mM de NaCl en la solución nutritiva) fueron suficientes para que se faectasen todos los caracteres medidos en planta joven en hidroponía y en planta adulta crecida en arena respectivamente. La existencia de una concentración umbral sólo se ha demsotrado en el peso fresco de la parte aérea. El umbral se situaría entre 25 y 50 mM de NaCl en la solución nutritiva y concentraciones superiores a él reducirían el peso fresco. Separar el peso seco y el contenido de agua de la parte aérea de la planta en peso seco y contenido de agua de hojas y tallos no ha proporcionado información adicional relevante. De modo similar, analizar Na+ y K+ en hoja y tallo no ha llevado a un mejor entendimiento de la fisiología de la acumulación del Na+ y K+ en hoja y tallo no ha llevado a un mejor entendimiento de la fisiología de la acumulación del Na+ y del K+ en la planta, por lo que se sugiere medir peso seco, contenido en agua y contendio en Na+ y K+ sólo en parte aérea completa o en hojas. Ninguno de lso 6 genes probados mejoró la cosecha, el número de frutos, el peso del fruto, la podredumbre apical o los sólidos solubles de los frutos de los testigos sin transformar en condiciones salinas. Las plantas acigóticas hna mostrado variaciones para algunos caracteres que obligan a considerarlas como testigo además de las plantas originales sin transformar. Las plantas transformadas con phal3, HAL3 y tpx1 crecen ligeramente más que las testigo sin transformar en condiciones de salinidad baja. El gen HAL2 y el tsw12 han mejorado la eficiencia en el uso del agua y la relación Na+/K+ (la ha disminuido) a baja salinidad; tsw12 ha tenido un efecto positivo (ha disminuido) la concentración de Na+ en la planta. La unión de HAL2 y tsw12 en un mismo genotipo mejoró (disminuyó) el transporte de Na+ a la parte aérea y aparecieron algunos efectos maternos que deberían tenerse en cuenta a la hora de planificar los cruzamientos. El gen tpx1 induce una disminución de la luz en los vasos xilemáticos que parece ser la causa de que las plantas que los sobreexpresan desarrollen menor número de estomas en las hojas. El número de estomas limita a su vez la conductancia estomática y el intercambio gaseoso que llevan a la planta a tener una menor asimilación neta de CO2 y una menor fructificación. El lugar de inserción del transgén en el genoma del a planta es determinante de la expresión de los 4 genes en que se ha podido medir ese efecto, phal3, HLA3, tsw12 y tpx1. Este aspecto debe ser tenido en cuenta en la mejora de la tolerancia a la salinidad.

Autor: RODRIGUEZ LÓPEZ M. ADELA.
Año: 2001.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: FARMACIA.

Resumen: En esta tesis se abordan los aspectos legislativos que reglamentan los alimentos modificados genéticamente llamados también alimentos trasngénicos. Está constituida por una seri de capítulos, los cuales albergan en su contenido un total de diez artículos publicados en revistas especializadas. Dichos artículos se refieren a la legislación vigente existe desde que este tipo de alimentos se producen hasta su posterior consumidores y en general en la sociedad la aparición de este tipo de alimentos.

Autor: FLÓREZ PARDO LUZ MARINA.
Año: 2001.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRÓNOMOS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS.

Resumen: El objetivo de la presente investigación fue encontrar la o las enzimas comerciales que pudieran licuefactar al máximo los polisacáridos presentes en la pulpa aislada del maracuyá, con el fin de implementar este trabajo en el proceso de obtención de jugo clarificado y concentrado por membranas y mejorar así el rendimiento del mismo. Como punto de partida se realizó una caracterización de la pulpa de maracuyá. Debido a que se observó una alta cantidad del almidón, cuya presencia es poco usual en frutas maduras, se buscó un método para extraerlo, purificarlo y caracterizarlo desde un punto de vista físico, químico y nutricional. Así, el almidón extraído, resultó ser de gran pureza (88,4%, b.h.). Estuvo formado por granos simples y compuestos de pequeño tamaño, con un contenido en amílosa del 11,5% baja entalpía y temperatura de gelatinización, baja viscosidad durante su calentamiento con agua al 10% y bajo grado de hinchamiento. Desde el punto de vista nutricional resultó ser un almidón poco resistente al ataque enzimático y con baja respuesta glicémica. A continuación se puso a punto una metodología que permitiera la extracción de los polisacáridos de las paredes celulares, basada en la separación de la Materia insoluble en Alcohol (MIA), desalmidonamiento de la misma (preservando al máximo la integridad de las paredes) y obtención de la MIAA (Materia Insoluble en Alcohol y Agua). El tratamiento enzimático con la alfa-amilasa Spezyme Fred fue el más efectivo para el desalmidonamiento de la MIA. Se analizó tanto la composición de la MIA como de la MIAA desalmidonada. En la MIA se encontró pectina soluble e insoluble (43,7%), que mostró un alto grado de ramificación, celulosa (22,9%) y hemicelulosa (17,3%) como componentes mayoritarios además de almidón (7,5%), proteína (3%), lignina (0,4%) y cenizas (0,1%). La MIAA presentó pectina insoluble (43,2%), celulosa (29,5%), hemicelulosa (16,4%), proteína )3,2%), almidón (0,7%), lignina (0,4%) y cenizas (0,1%). Con base en la caracterización química de la MIA, se seleccionaron las actividades enzimáticas más adecuadas para la hidrólisis de los polisacáridos de la pulpa de maracuyá, las cuales se cuantificaron en 21 preparaciones enzimáticas comerciales distintas seleccionadas con base en la acción descrita para ellas. De ellas se seleccionó la que mostró mayor actividad pectinolítica (Pectinase Press) y la de mayor actividad celulolítica (Cytolase CL) y se analizó de forma cualitativa su efecto sobre la pulpa de Maracuyá. Sobre estas enzimas parcialmente purificadas por Cromatografía de Afinidad por Ion Metálico (IMAC), se analizaron las cinco actividades principales para la hidrólisis de los polisacáridos. Se seleccionaron las fracciones aisladas con mayor actividad pectiniliasa (PL) y endo-glucanasa (Cx)- exoglucanasa (C1), para la optimización de las dosis de enzimas a aplicar sobre la MIAA desalmidonada, por medio de un diseño de experimentos de tipo Rotacional Central Compuesto. Estas dosis fueron ensayadas sobre la MIAA desalmidonada y sobre la pulpa de maracuyá, lo que permitió detectar otras dos actividades principales importantes: la PE (pectinmetilesterasa) y la PG (poligalacturonasa).

Autor: RODRÍGUEZ LLORENTE IGNACIO DAVID.
Año: 2000.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: FARMACIA .
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA.

Resumen: La interacción simbiótica que establece las bacterias de la familia Rhixobiaceae con plantas leguminosas conduce al desarrollo del nódulo, un nuevo órgano de la planta en cuyo interior las bacterias fijan el nitrógeno atmosférico. Los procesos de penetración, infección e invasión de las células vegetales por parte de la bacteria están, en parte, determinados por la expresión de genes de la planta. Estos procesos, aún poco conocidos, han sido relacionados con la expresión de enzimas modificadora de la pared celular, en respuesta a la presencia de la bacteria. En un trabajo anterior se aisló,clonó y caracterizó parcialmente un gen de pligalacturonasa de Medicago sativa, MsPG3, cuya expresión se induce de forma específica durante la interacción de esta planta con Sinorhizobium meliloti. Para caracterizar la localización celular y la regulación transcripcional de la expresión de MsPG3, se expresó en diferentes leguminosas una fusión de 2,7 kb del promotor de dicho gen al gen informador gus. La expresión de esta fusión en células del primorido nodular y en la zona de invasión de nódulos transgénicos de V. Hirsuta y V. Sativa sugiere la implicación del producto de MsPG3 en el proceso de infección. La expresión de la citada fusión en plantas transgéncias de M. Truncatula se localiza de forma espcífica en el nódulo. Se han determinado las secuencias responsables de esta especificidad mediante la expresión de cinco fusiones entre fragmentos del promotor de MsPG3 (600,413,306,205 y 92 pb) y el gen sgus. Si bien 205 pb del promotor de MsPG3 fueron capaces de dirigir la expresión del gen informador en raíces y flores, se requieren 600 pb del mismo para que la expresión de dicho informador se localice en el nódulo. Este mismo resultado se obtuvo al expresar estas fusiones en raíces y nódulos transgénicos de V. Hirsuta. En la región situada entre 600 y 413 pb del promotor se ha localizado una secuencia conservda en los promotores de diferentes genes de Enol12 y Enod10, a la que se une un factor de transcripción, ENBP1, que dirige la expresión temprana de estos genes en el nódulo. Por otro lado, mediante la inoculación de raíces transgénicas de V. Hirsuta y plantas transgénicas de M. Truncatula, ambas transformadas con la fusión del promotor de MsPG3 el gen gus, con mutantes bacterianos, se ha determinado que para la expresión de este gen durante la nodulación se precisa que haya invasión bacteriana y/o un correcto desarrollo del nódulo.

Autor: DOMINGUEZ MORENO ANTONIO.
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE VALENCIA.
Centro de lectura: INGENIEROS AGRONOMOS.
Centro de realización: I.V.I.A-E.T.S.I AGRONOMOS.

Resumen: En el presente trabajo se ha mejorado el procedimiento de transformacion genetica de lima mexicana (Citrus aurantifolia Swing) y se han introducido en plantas de lima diferentes versiones del gen p25, que codifica la CP mayoritaria de CTV, para tratar de desarrollar proteccion frente al virus. En primer lugar se han obtenido plantas transgenicas con el gen p25 intacto de los aislados de CTV T305 y T317 para investigar la resistencia mediada por CP. Cuando las diferentes lineas transgenicas inocularon mediante injerto con el aislado de CTV T305, o mediante pulgones con el aislado T300, se observaron dos tipos de respuesta; algunas lineas desarrollaron la sintomatologia de forma similar a las plantas testigo no transgenicas, mientras que otras mostraron proteccion frente al virus. La proteccion consistio en que parte de las plantas inoculadas, entre el 10 y el 33%, escaparon a la infeccion viral, mientras que el resto mostraron retraso en la aparicion de los sintomas virales, menor acumulacion del virus y atenuacion de la sintomatologia. Se han obtenido plantas transgenicas con el gen p25 del aislado T305 de CTV modificado para hacer no traducibles sus transcritos y tratar de desarrollar proteccion mediada por ARN. En las plantas de lima Mexicana obtenidas se estudio el fenomeno del silenciamiento genico. Mas del 30% de las lineas presentaron inactivacion de todos los transgenes contenidos en el ADN-T y se caracterizaron por presentar patrones de integracion complejos y mayor metilacion. Ademas, en parte de ellas se demostro la existencia de silenciamiento post-transcripcional de transgen p25. Las diferentes lineas transgenicas se inocularon mediante injerto con el aislado T305 de CTV, y en todas ellas el desarrollo de la sintomatologia viral fue similar a las plantas testigo no transgenicas. Se han obtenido tambien plantas transgénicas con un fragmento no traducible del gen p25 del aislado T305 de CTV para intentar reducir el tamaño del ADN de origen viral necesario para inducir proteccion mediada por ARN. Las diferentes lineas transgenicas obtenidas se inocularon mediante injerto con el aislado T305 de CTV, y en todas ellas el desarrollo de la sintomatologia viral fue similar a las plantas testigo no transgenicas. La ausencia de proteccion observada con las versioines no codificantes del gen p25 podria estar relacionada con el hecho de que el virus solamente se multiplica en las celulas floematicas, al sistema de inoculacion empleado o mas probablemente a la alta variabilidad genetica que puede existir dentro de un mismo aislado de CTV.