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BIOQUIMICA



109 tesis en 6 páginas: 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6
  • Esclerosis Lateral Amiotrófica: estudios genéticos, bioquímicos y celulares en pacientes Familiares y Esporádicos .
    Autor: García Redondo Alberto.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: Facultad de Medicina.
    Centro de realización: Facultad de Medicina.
    Resumen: En este estudio se realizan dos tipos de análisis. El primero se trata de un estudio genético del gen que codifica por el enzima citosólico SOD1 en pacientes con ELA esporádica (ELAE) y con ELA familiar (ELAF). En el segundo se evalúa la función mitocondrial y el estatus oxidativo de cultivos de fibroblastos procedentes de pacientes y controles. En el análisis genético se obtuvieron resultados similares al de otros estudios poblacionales publicados previamente (18,2 % mutaciones en ELAF y 1,2 % mutaciones en ELAE). Se encontraron dos mutaciones previamente no descritas en la proteína SOD1 (N65S e I112M) para las que se describieron metodologías aplicables para el análisis genético en el laboratorio clínico. En la evaluación de la función mitocondrial no se hallaron diferencias entre pacientes y controles (actividades de los enzimas de la cadena respiratoria mitocondrial, estatus oxidativo del coenzima Q, concentración de ATP intracelular, potencial de membrana mitocondrial y análisis genético del ADN mitocondrial). Además se encontró que el balance oxidativo en fibroblastos procedentes del paciente con la mutación N65S SOD1 se encontraba alterado respecto a los sujetos control (análisis de las actividades de los enzimas antioxidantes, del estado de oxidación del glutation, de la homeostasis de radicales libres de oxígeno) concluyendo que existe una ganancia de función en el mencionado enzima mutante.
  • CARACTERIZACIÓN DE ALTERACIONES FISIOLÓGICAS Y MOLECULARES ASOCIADAS AL COMPORTAMIENTO DE CÉLULAS MADRE HEMATOPOYÉTICAS EN RATONES DEFICIENTES EN IL-6 .
    Autor: RODRÍGUEZ DE MIGUEL M. CARMEN .
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: QUÍMICA.
    Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA (C.N.B.).
    Resumen: La interleuquina-6 (IL-6) es una citoquina implicada en las etapas tempranas del desarrollo linfohematopoyético. Partiendo de un modelo Knock-out (KO) para IL-6 (IL-6-/-), el cual parece tener comprometida la capacidad de automantenimiento de sus células madre o stem, se ha llevado a cabo un estudio detallado de las alteraciones fisiológicas tanto de las células precursoras del estroma, soporte de la hematopoyesis, como de las células madre hematopoyéticas fetales. Se ha detectado una disminución en el número de precursores fibroblásticos (CFU-F y SIC) en las médulas correspondientes a ratones deficientes en IL-6 y una perdida de expresión de integrinas como alfa-6 y beta-1 o de moléculas de ahesión como VCAM-1. Los estudios llevados a cabo con células de hígados fetales de 14 días correspondientes a ratones deficientes en IL-6 han permitido establecer que aunque el comportamiento LTRSC no parece estar disminuido, presenta una menor capacidad de automantenimiento, mientras que si se ha observado una disminución en el número de CFU-F. Todo ello parece indicar que IL-6 es un factor relevante para células hematopoyéticas embrionarias y para los precursores mesenquimales del estroma tanto adulto como embrionario. Por último se ha detectado un gran número de genes diferencialmente expresados entre precursores primitivos de médula ósea IL-6-/- e IL-6+/+,. Se ha caracterizado 5 de estas secuencias como DNAs genómicos de ratón, una de ellas correspondiente a alfa-NAC, proteína que parece encontrarse bajo el control transcripcional de IL-6 en los diversos tejidos analizados.
  • ESTRUCTURA Y PLEGAMIENTO DE LYTC Y CPL-1, DOS LISOZIMAS QUE HIDROLIZAN LA PARED CELULAR DE STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE .
    Autor: MONTERROSO MARCO BEGOÑA.
    Año: 2003.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA.
    Centro de realización: INSTITUTO DE QUÍMICA FÍSICA ROCASOLANO (CSIC).
    Resumen: Las enzimas líticas de Streptococcus pneumoniae constituyen un claro ejemplo de organización modular. Todas ellas presentan un módulo catalítico y un módulo de unión al sustrato por el reconocimiento específico de los residuos de colina presentes en la pared de neumococo. Cada una de las enzimas líticas codificadas por la bacteria ejerce su actividad sobre distintos puntos de la pared, participando en la correcta formación de pared celular en el crecimiento, en la separación delas células hijas tras la división y en la lisis en la fase estacionaria. Así, la amidasa LytA, que es la autolisina mayoritaria en nuemococo, reompe los enlaces amida que se establecen entre los residuos de ácido N-acetilmuránico (NAM) y las cortas cadenas peptídicas que contribuyen a la estabilización de la pared al unirse entre sí. La lisoxima, LytC, corta los enlaces glicosídicos que unen los azúcares NAM y glucosmaina, cuya alternancia da lugar a las cadenas glicánicas que forman la pared. Por último, LytB presenta actividad glucosaminidasa, hidrolizando los enlaces glicosídicos entre la glucosamina y el NAM. Las endolisinas codificadas por los fagos que infectan esta bacetería presentan esta misma disposición modular. De hecho, la gran similitud existen entre los módulos con la misma función de las enzimas bacterianas y fágicas apunta hacia un intercambio génico entre ambos microorganismos. Sin embargo, existen entre ellas diferencias estructurales que probablemente se traducen en su distinta regulación biológica, puesto que éstas están reguladas por el ciclo fágico del virus. La caracterización estructural a baja y alta resolución de LytC y Cpl-1, lisoximas codificadas por neumococo y el fago Cp-1, respectivamente, ha permitido establecer ciertas diferencias estructurales entre ellas y con relación a la otras estructura de un miembro de la familia de proteínas que unen colina conocida hasta el momento, C-LytA. Así, la ver satilidad de la estructura del módulo de unión a colina (ChBM) se traduce en diversas características funcionales relacionadas con las interacciones intermodulares, y por tanto con el reconocimiento de un determinado tipo de enlaces que cumplan las trestricciones impuestas por esta interacción, y con la eficacia catalítica por la interacción con los residuos de fosforilcolina de la pared de la bacteria. En este sentido, se podría considerar la autoasociación mediada por colina que sufren las enzimas cuyos ChBMs están formados por únicamente seis repeticiones de secuencia como posible mecanismo para aumentar la eficacia catalítica al aumentar el número de sitios de unión a colina. Asimismo, la caracterización del dominio catalítico ha permitido establecer qué residuos están implicados en la hidrólisis enzimática y cual podría ser el mecanismo de acción de la familia GH-25 de las glicosilhlidrolasas, a la que pertenecen estas lisozimas.
  • VALOR DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO Y DE LA PCR EN EL DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN PUNCIÓN ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA (PAAF) DE PROCESOS LINFOPROLIFERATIVOS .
    Autor: MAROTO PÉREZ ALICIA.
    Año: 2003.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MADRID.
    Resumen: Existe una gran controversia sobre la finalidad del diagnóstico de los procesos linfoproliferativos mediante la técnica de punción aspiración con aguja fina (PAAF). El desarrollo de técnicas accesorias de inmunofenotipificación y de biología molecular ha proprocionado nuevos criterios junto a los citológicos y clínicos para el estudio de estos procesos. Este trabajo analiza la contribución de la inmunofenotipificación por citometría de flujo y el análisis genético del receptor de linfocitos B (BCR) mediante PCR al diagnóstico citológico del material obtenido por PAAF en 180 pacientes en el Departemento de Anatomía Patológica del Hospital Universitario 12 de Octubre de Madrid. El valor diagnóstico de cada técnica se comprobó comparando los resultados obtenidos con el diagnóstico médico real de cada paciente (biopsia ganglionar o visceral, o evolución clínica). Los resultados obtenidos indican que el uso de la citometría de flujo y/o PCR incrementa el porcentaje de diagnóstico correctos de linfoma y reduce los resultados incorrectos de procesos linfoproliferativos en muestras obtenidas por PAAF. Estos facilita un diagnóstico más rápido y de menor coste económico, evitando la necesidad de hacer biopsia al pacientes en determinada situación clínica. En todo caso, se debe realizar un seguimiento estricto del paciente para evitar posibles fallos en el diagnóstico.
  • ESTUDIO FUNCIONAL DE LA TROPONINA H DE DROSOPHILA MELANOGASTER .
    Autor: MATEOS MARTÍN JESÚS.
    Año: 2002.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA UAM.
    Resumen: Las Troponinas H son dos isoformas que han sido descritas solamente en Músculo Indirecto de Vuelo -IFM- de Drosophila y Lethocerus. En Drosophila están codificadas por el gen Tm1 y pueden considerarse como la fusión de una secuencia Nt homóloga a las tropomiosinas de bajo Pm y de una parte Ct plegada al azar específica de ese tipo muscular, que posee unas propiedades contráctiles características. En nuestro laboratorio hemos detectado e identificado una serie de fosforilaciones post-traduccionales en la secuencia diferencial de las TnH en moscas adultas plenamente desarrolladas. El hecho de que éstas fosforilaciones no estén presentes en moscas recién eclosionadas que aún no pueden volar apoya fuertemente la idea de que estén implicadas en el mecanismo de contracción del IFM, denominado activación por estiramiento. Por otra parte las TnH establecen interacciones con la Glutation-S-transferasa 2-GST-2-, pero además con las tropomiosinas de bajo Pm. Hemos propuesto un modelo para explicar tanto la función como la localización de las TnH en el IFM según el cual la zona Nt estaría integrada en el filamento fino formado tanto dímeros con las tropomiosinas como homodímeros entre sí, mientras que las extensiones Ct establecerían interacciones laterales con filamento grueso que incrementarían la fuerza lateral generada durante el estiramiento. El gen Tm1 había sido únicamente descrito hasta ahora en Drosophila. Hemos identificado por homología de secuencia el gen Tm1 en Anopheles gambiae. La estructura del gen ebiG8408 es similar y en principio codifica para una isoforma con una homología muy alta con la 128 codificada por el gen Tm1. También hemos encontrado dos secuencias homólogas a los exones diferenciales y, en ambos casos, uno de los ORFs codificaria para una secuencia similar a la zona Ct de las TnH. Por último a lo largo del desarrollo de este trabajo de investigación detectamos expresión de los exones diferenciales en determinados estadios embrionarios mediante experimentos de RT-PCR, Northern-blot y RACE. Una isoforma es reconocida en extractos embrionarios por un anticuerpo monoclonal contra las TnH. Para comprender ésta, en principio, contradictoria expresión en estos momentos estamos realizando a nivel proteico la identificación de esta isoforma y a nivel genómico experimentos de pérdida de función del gen Tm1.
  • ESTUDIO MOLECULAR Y FUNCIONAL DE LOS CANALES DE CALCIO DE LAS CELULAS CROMAFINES DE LA MEDULA ADRENAL.
    Autor: GARCIA PALOMERO M. ESTHER.
    Año: 1999.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.
    Resumen: Los canales de Ca2+ dependientes de voltaje (CCDV) están formados por varias subunidades proteicas. Se han identificado diferentes subunidades que codifican para los subtipos de CCDV funcionales: L, N, P/Q, R y T. Estudios electrofisiológicos y farmacológicos han puesto de manifiesto la diversidad de subtipos de CCDV existentes en las células cromafines de la médula adrenal (L, N Y P/Q), sin embargo, no existen datos moleculares que sustenten dicha diversidad, o si estos subtipos de CCDV están homogéneamente distribuidos en las células adrenérgicas y noradrenérgicas. En este trabajo, mediante cromafines bovinas, se han obtenido tres secuencias nucleotídicas que codifican, respectivamente, para los CCDV L, N Y P/Q. Utilizando estas secuencias como sondas en experimentos de hibridación in situ, realizados en secciones de glándula adrenal bovina, hemos demostrado que el mRNA de la subunidad se expresa por toda la médula. Sin embargo, las subunidades se expresan más abundantemente en la región interna de la médula, donde se localizan las células noradrenérgicas. Además, utilizando la técnica de RT-PCR y oligonucleótidos cebadores selectivos diseñados para amplificar diferentes subunidaes y auxiliares de los CCDV, se han identificado múltiples subunidades en estas células, algunas de totalmente inesperadas. Estos resultados moleculares amplían, la concepción actual sobre la diversidad de CCDV existente en estas células y sientan las bases para posteriores estudios biofísicos de los mismos. Además, en este estudio, hemos investigado la posible especialización de algún subtipo de CCDV de las células cromafines en el control de funciones no relacionadas con la secreción. Combinando experimentos de Western blot (midiendo la expresión de la proteína SNAP-25) con registros de Ca2+ intracelular, hemos demostrado que la despolarización con K+ produce un aumento de expresión de la proteína, el cual es independiente de la fuente o de la ruta de entrada de Ca2+ a la célula, dependiendo, exclusivamente, de los niveles de [Ca2+]i alcanzados.
  • ANALISIS MOLECULAR DE LA EXPRESION DE GENES PARA LA ASIMILACION DE NITRATO EN CHLAMYDOMONAS REINHARDDTII .
    Autor: GOMEZ GARCIA IA.
    Año: 1999.
    Universidad: CORDOBA.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.
    Resumen: El nitrato /nitrito entra a la célula por los transportadores especifícos. Una vez en el citoplasma la NR reduce el nitrato a nitrito utilizando poder reductor en forma de NADH. El nitrito entra al cloroplasto por transportadores, tales como el codificado pro el ya clonado gen Nar1 ( Rexach et al., 2000). Dentro del cloroplasto la nitrito reductasa dependiente de ferredoxina, reduce este nitrito a amonio, para lo que son necesarios 6 electrones. En el cloroplasto existe además una enzima, la malato deshidrogenasa dependiente de NADP+, que interconvierte el malato en OAA y es la enzima reguladora de la lanzadera de malato cloroplasto. Este sistema lanzadera es el que se encarga de balancear los niveles de poder reductor en forma de NADPH/NADH entre el cloroplasto y citoplasma. Ese poder reductor (NADH) es utilizado a su vez en el citoplasma pro la NR para producir más nitrito. Existe otro sistema lanzadera de malatao-OAA entre el citoplasma y la mitocondria par balancear igualmente los niveles de NADH entre estos dos compartimetnos celulares. Este proceso suministra poder reductor para procesos tales como la cadena mitocondrial y la reducción de nitrato en el citoplasma. Dentro de la cadena transportadora de electrones existe una ramificación a nivel del pool de ubiquinosas. La oxidasa terminal responsable es la oxidasa alternativa. La respiración alternativa supone para la célula un gasto aparentemente inútil de energía, ya que esta ruta evita dos pasos en los que se produce la traslocación de protones acopladas a la síntesis de ATP. Se ha descrito que el nitrito se reduce a NO en la cadena respiratoria a nivel del citocromo bc1 (Kozlover al., 1999) y que este NO inhibe la citocromo c oxidasa, pero no inhibe la oxidasa alternativa.(Millar y Day, 1996). Sería entonces el nitrito producido por la nitrato reductasa el que aumentaría la expresión de Aox1 por inhibición de la ruta del citocromo c. Esto explicaría también la sobreexpresión de Aox1 en medios suplementados con nitrato y nitrito enlos mutantes de delecion M1 y G1,que carece de la nitrito reductosa ( Quesada et al,, 1998; Navarro et al .,2000). En este mutante se acumularía más nitrito por la falta de NiR,nitrito que sería reducido a óxido nítrico que a su vez inhibe la citocromo c oxidasa, aumentando la expresion de Aoxl, aunque la actividad respiratoria no se afectara en presencia de amonio. Este hecho permitirá separar la regulación trasncripcional de la postraducional.
  • REGULACION DE LA EXPRESION DEL GEN FBP1 DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE Y PAPEL DEL CAMP EN REPRESION CATABOLICA Y MORFOGENESIS.
    Autor: ZARAGOZA HERNANDEZ OSCAR.
    Año: 1999.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMEDICAS.
    Resumen: Se han estudiado mecanismos de control de las secuencias reguladoras UAS1, UAS2 y URS1 del promotor del gen FBP1 de S. Cerevisiae. Para ello, se ha medido la expresión de genes reporteros controlados por UAS1, UAS2 o URS1 durante el crecimiento en distintas fuentes de carbono y la influencia sobre esta expresión de mutaciones en genes involucrados en represión catabólica. Tanto UAS1 como UAS2 muestran una actividad elevada en etanol, moderada o baja en glicerina y no significativa en glucosa o galactosa. La ausencia de actividad en glucosa no depende de la presencia de Hxk2 o Mig1. El factor de transcripción Cat8 es necesario para la operatividad del UAS2 y cuando falta, la transcripción mediada por UAS1 disminuye 5 veces. Los complejos de Mig1 forma in vitro con URS1 y la capacidad para reprimir un gen de fusión dependen de la presencia de glucosa; también parece que Mig1 podría regularse a nivel transcripcional. Por otra parte, se ha estudiado si el cAMP está involucrado en la represión catabólica. Nuestros resultados indican que, en un mutante pde2 de S. cerevisiae carente de la fosfodiesterasa de alta afinidad, la adición de cAMP al medio impide, en distinto grado, la expresión de diversos genes reprimidos por glucosa. En el caso del gen FBP1, el cAMP afecta a la transcripción del gen bloqueando la expresión de los activadores Cat8 y Sip4. Se muestra que este control por cAMP es redundante con mecanismos alternativos de regulación dependientes de glucosa. Durante los estudios de los efectos del cAMP sobre la represión catabólica, observamos que este metabolito era capaz de inducri la formación de pseudohifas en determinadas condiciones de crecimiento. Hemos puesto de manifiesto que la formación de pseudohifas responde a una doble señal: la activación de las proteínas quinasas dependientes de cAMP, y una situación de estrés, que puede ser provocada por diversos elementos en el medio de cultivo.
  • AVANCES SOBRE EL TRANSPORTE DE CALCIO EN EL RETICULO SARCOPLASMICO: CARACTERIZACION DE DOMINIOS ESTRUCTURALES Y FUNCIONALES DE LA CALCIO-ATPASA.
    Autor: VELASCO GUILLEN ISABEL .
    Año: 1999.
    Universidad: MURCIA.
    Centro de lectura: QUIMICA.
    Resumen: Al tratarse de una proteína de membrana la Ca2+-ATPasa es una proteína difícil de estudiar. En el trabajo realizado en esta Tesis Doctoral se ha profundizado en el conocimiento de diferentes aspectos estructurales y funcionales de la proteína que son importantes para llegar a conocer el mecanismo molecular de la misma. Utilizando para ello diferentes técnicas. Uno de los estudios se ha centrado en la localización de los centros de unión de calcio de la proteína utilizando para ello la sonda fluorescente NCD-4, ya que esta se une fuertemente al centro de unión de calcio de alta afinidad en la proteína. Mediante estudios de atenuación de fluorescencia se ha localizado esta sonda a 16,5 A desde el centro de la bicapa lipídica. También se ha realizado la localización de la misma en la proporción transmembranal de la proteína, concretamente en el segmento Leu253-Glu309, señalando este residuo de glutámico como posible diana para el NCD-4. Todos estos resultados nos indican que el dominio de unión de calcio se encuentra localizado próximo a la superficie de la membrana pero en un entorno hidrofóbico. Otro de los estudios llevados a cabo ha sido la caracterización cinética de la modificación de la proteína por fenilmaleimida, que es un compuesto que reacciona con residuos de cisteína de las proteínas. La unión de este compuesto a la proteína la inhibe fuertemente, siguiendo una cinética de pseudo-primer orden, inhibiendo la transferencia de fosfato del ATP a la enzima para formar un intermedio fosforilado, indicando que la unión debe producirse en un residuo de cisteína próximo al sitio de fosforilación por lo que la Cys377 y la Cys349 podrían ser buenos candidatos para reaccionar con fenilmaleimida. Caracterización cinética de la modificación de la ATPasa por el ácido maleimidilsalicílico, así como localización del aminoácido marcado por ese compuesto en la Ca2+-ATPasa. La unión de este compuesto a la proteína la inhibe fuertemente siguiendo una cinética de inhibición de pseudo-primer orden, inhibiendo la unión de nucleótidos a la proteína. La ocupación del sitio de unión de nucleótidos da lugar a la protección de la proteína de la inhibición. Mediante el análisis de la secuencia de aminoácidos y la espectroscopía de masas nos indican que el sitio de unión de la sonda a la proteína es la Cys344. Se han realizado medidas de transferencia de energía de fluorescencia estimando que la distancia entre el ácido maleimidilsalicílico y los residuos de triptófano de la proteína, y desde el ácido maleimidilsalicílico a la superficie de la membrana es de 21 A.
  • REGULACION DE LA EXPRESION GENICA DE COT QUINASA Y ANALISIS DE SU PAPEL EN LA ACTIVACION DE LINFOCITOS T.
    Autor: BALLESTER JAREÑO ALICIA.
    Año: 1997.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA (FACULTAD DE MEDICINA UAM) PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA DE LA FACULTAD DE MEDICINA (U.A.M.).
    Resumen: El gen de rata tpl-2 codifica una proteína serina/treonina quinasa que funciona como una proteína quinasa quinasa quinasa activada por mitógeno (MAPKKK). En linfomas de células T de rata producidos por el virus de la leucemia murina de Moloney Tpl-2 está activada, debido a un truncamiento en la región carboxi-terminal de la proteína. El gen cot está muy relacionado con tpl-2, siendo probablemente su homólogo humano. Se ha observado que la forma truncada de Cot posee una actividad transformante más elevada que la forma no truncada. En este trabajo demostramos que existen tres mRNAs para el gen de cot (cot1, cot2 y cot3). Además, la transcripción de cot se halla controlada por dos promotores (P1 y P2), de manera P1 controla la expresión de cot1 y cot2 y P2 controla la expresión de cot3. Mientras P2 posee una elevada actividad constitutiva, P2 es fuertemente inducible por estímulos que activan la respuesta linfocitaria en células T. En este trabajo demostramos también la existencia de un nuevo exón (3a) que no había sido previamente definido en la estructura genómica del gen cot. Por otra parte, un incremento en la expresión del gen de Cot quinasa truncada se correlaciona con un incremento en la producción de interleuquina-2 en células Jurkat tratadas con ant-CD3. La expresión de Cot truncada también coopera con PHA o PDBu y un ionóforo de calcio (A23187) en la producción de IL-2 en células Jurkat. Tanto la forma truncada con la no truncada incrementan la transcripción de IL-2 ya que aumentan la acumulación de un gen indicador unido al promotor de IL2. La expresión de una forma dominante negativa de Cot inhibe la transcripción dirigida por el promotor de IL2 en células Jurkat estimuladas con PDBu y A23187. Nuestros resultados indican que Cot quinasa posee un papel en la actividad nuclear de NFAT y AP1 en células T. Todos estos datos sugieren un papel para Tp12/Cot quinasa en la producción de IL2 durante la activación de linfocitos T y podrían explicar su actividad oncogénica.
  • PROCESO DE ADSORCION DE ATRAZINA, PARAQUAT E IONES FORFATO SOBRE UNA BENTONITA DE LA PROVINCIA DE ALMERIA.
    Autor: GALLEGO CAMPO ALICIA.
    Año: 1995.
    Universidad: ALMERIA.
    Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: Q. FISICA, BIOQUIMICA Y QUIMICA INORGANICA PROGRAMA DE DOCTORADO: AGROQUIMICA AVANZADA.
    Resumen: ESTUDIO DEL PROCESO DE ADSORCION DE TRES HERBICIDAS Y LOS IONES FOSFATOS SOBRE UNA ARCILLA, COMPONENTE FUNDAMENTAL DEL SUELO, ANALIZANDO SU POTENCIAL APLICACION COMO DESCONTAMINANTE DE AGUAS. SE OBTUVIERON LAS ISOTERMAS DE RETENCION SOBRE LA SUPERFICIE DEL ADSORBENTE EN EXPERIENCIAS LLEVADAS A CABO EN REGIMEN ESTACIONARIO, ASI COMO LAS CURVAS DE ROTURA, OBTENIDAS DE DISTINTAS EXPERIENCIAS EN COLUMNA. ASIMISMO, UTILIZAMOS DISTINTAS MUESTRAS DE BENTONITA SOMETIDAS A DIFERENTES ACTIVACIONES ACIDAS.
  • FOSFORILACION IN VIVO E IN VITRO DE LA PROTEINASA MULTICATALITICA (PROTEASOMA).
    Autor: MAHILLO RAMOS ESTHER.
    Año: 1995.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.
    Resumen: LA PROTEINASAS MULTICATALITICA (PROTEASOMA) SE ENCUENTRA FOSFORILADA IN VIVO EN DOS DE SUS POLIPEPTIDOS, DE 29 KDA DE PESO MOLECULAR, IDENTIFICADOS COMO LAS SUBUNIDADES C8 Y C9 LAS CUALES SON FOSFORILADAS IN VITRO POR LA CASEINA QUINASA II. TANTO IN VIVO COMO IN VITRO EL PRINCIPAL SUSTRATO DE FOSFORILACION ES LA SUBUNIDAD C8, QUE SE FOSFORILADEN RESIDUOS SERINA. LA COMPARACION DE LOS FOSFOPEPTIDOS OBTENIDOS POR DIGESTION CON ENDO GLU-O A PARTIR DE LA SUBUNIDAD C8 FOSFORILADA IN VIVO E IN VITRO POR CASEINA QUINASA II MUESTRA QUE LOS SITIOS DE FOSFORILACION SON SIMILARES EN AMBOS CASOS. LA FOSFORILACION IN VITRO DE LA PROTEINASA MULTICATALICA NO AFECTA A SU ACTIVIDAD PROTEASA SOBRE PROTEINAS O SOBRE PEPTIDOS FLUOROGENICOS SINTETICOS. SUGERIMOS QUE LA FOSFORILACION DE LA PROTEINASA MULTICATALICA POR CASEINA QUINASA II PODRIA SERVIR: COMO REQUISITO PREVIO PARA POSTERIORES FOSFORILACIONES POR OTRAS PROTEIN QUINASAS; PARA LA REGULACION DE LA ASOCIACION DEL PROTEASOMA CON OTROS COMPONENTES CELULARES PARA LA FORMACION DE COMPLEJOS DE ORDEN SUPERIOR COMO EL 266; O PARA SU TRASLOCACION A NUCLEO.
  • PROTEOLISIS DE LA CONEXINA-32 POR CALPAINA Y SU REGULACION.
    Autor: ELVIRA GUIJARRO M. ISABEL.
    Año: 1994.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.
    Resumen: LA CONEXINA-32 DE HIGADO DE RATA Y DE RATON SE PROTEOLIZA "IN VITRO" POR LAS PROTEASAS INTRACELULARES DEPENDIENTES DE CA2+,MI-CALPAINA Y M-CALPAINA, PRODUCIENDOSE UN FRAGMENTO MAYOR DE 26KDA. SIN EMBARGO, LA CONEXINA 26 NO SE PROTEOLIZA POR ESTAS PROTEASAS. LAS CALPAINAS PARECEN HIDROLIZAR LA CONEXINA-32 EN SU EXTREMO C-TERMINAL. LA FOSFORILACION DE LA CONEXINA-32 POR PROTEINA QUINASA C, PERO NO POR PROTEINA QUINASA A, INHIBE LA PROTEOLISIS POR CALPAINA. ESTA PROTECCION FRENTE A LA PROTEOLISIS PARECE HACERSE EXTENSIVA A MOLECULAS VECINAS DE CONEXINA-32 NO FOSFORILADAS PRESENTES EN LA MISMA PLACA DE UNIONES COMUNICANTES. LA UNION DE LA CALMODULINA A LA CONEXINA-32 INHIBE TAMBIEN LA PROTEOLISIS POR M-CALPAINA PERO NO POR MI-CALPAINA, LO QUE SUGIERE QUE ESTAS PROTEASAS POSEEN DISTINTAS DIANAS DE RECONOCIMIENTO Y/O DE HIDROLISIS EN LA MOLECULA DE CONEXINA-32. PROPONEMOS QUE LA PROTEOLISIS DE LA CONEXINA-32 POR CALPAINA PODRIA SER RELEVANTE EN EL DESENSAMBLAJE Y DEGRADACION DE LAS UNIONES COMUNICANTES "IN VIVO", Y QUE LA FOSFORILACION POR PROTEINA QUINASA C Y LA UNION DE LA CALMODULINA A LA MOLECULA DE CONEXINA PODRIAN PREVENIR LA DEGRADACION DE LA CONEXINA-32 POR PROTEASAS INTRACELULARES.
  • LIGANDO ENDOGENO DE CANALES DE CALCIO EN CEREBRO BOVINO. COLIBERACION Y CONTENIDO DE CATECOLAMINAS, DIADENOSIN-TETRAFOSFATO Y ATP EN CELULAS CROMAFINES.
    Autor: VALLE SANZ MERCEDES DEL.
    Año: 1994.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA. .
    Resumen: SE DEMUESTRA EN MEDULA ADRENAL BOVINA, LA PRESENCIA DE UN LIGANDO ENDOGENO DE CANALES DE CALCIO VOLTAJE-DEPENDIENTES, DE BAJO PESO MOLECULAR ESTABLE AL CALOR Y AL ACIDO. EN CEREBRO BOVINO SE HAN PURIFICADO PARCIALMENTE DOS FACTORES ENDOGENOS DE ALTO Y BAJO PESO MOLECULAR CAPACES DE INHIBIR LA UNION DE ( )-(3H)PN200-110 A MEMBRANAS. EL DE ALTO PESO MOLECULAR INHIBIA LA SECRECION DE CATECOLAMINAS EN CELULAS CROMAFINES. EL DE BAJO PESO MOLECULAR SE SEPARO EN DOS COMPONENTES (I Y II) CON ESPECTROS AL ULTRAVIOLETA INDISTINGUIBLES DEL ASCORBATO. EN GLANDULAS ADRENALES BOVINAS ESTIMULADAS SE ENCONTRO UNA BUENA CORRELACION ENTRE LA SECRECION DE DIADENOSIN-TETRAFOSFATO (AP4A) Y CATECOLAMINAS (CA), PERO NO CON LA SECRECION DE ATP QUE (MEDIDO CON LUCIFERASA) PARECIA ADELANTARSE A LA DE LOS OTROS DOS COMPONENTES. SIN EMBARGO, LOS PRODUCTOS DE DEGRADACION DEL ATP SE SECRETABAN EN PARALELO A AP4A Y CA. SE ESTUDIO LA CONCENTRACION DE AP4A, ATP Y CA EN EL TEJIDO CROMAFIN. LAS CONCENTRACIONES ENCONTRADAS EN MEDULA ADRENAL FUE DE 30, 7 Y 1X10-3 MM, RESPECTIVAMENTE.
  • CITOTOXICIDAD DE CELULAS NATURALES ASESINAS: ACTIVACION POR PROTIMOSINA-ALFA Y SINERGISMO CON INTERLEUQUINA-2 .
    Autor: LOPEZ RODRIGUEZ JOSE LUIS.
    Año: 1993.
    Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
    Centro de lectura: BIOLOGIA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.
    Resumen: DEMOSTRAMOS QUE LA PROTIMOSINA-ALFA INCREMENTA LA CAPACIDAD CITOTOXICA DE CELULAS NK HUMANAS DE UN MODO DEPENDIENTE DE LA DOSIS Y DEL TIEMPO EL SINERGISMO CON LA INTERLEUQUINA-2, TANTO A CORTO COMO A LARGO PLAZO ES NOTABLE. LOS CAMBIOS FENOTIPICOS, AL CULTIVAR LINFOCITOS HUMANOS CON PROTIMOSINA-ALFA SON MANIFIESTOS. EL MECANISMO DE ACCION DE PROTIMOSINA-ALFA IMPLICA UN INCREMENTO EN LA EXPRESION DE LA SUBUNIDAD ALFA Y BETA EN LA SUPERFICIE CELULAR, ASI COMO UN AUMENTO EN LA EXPRESION DEL ARNM DE AMBAS SUBUNIDADES; TAMBIEN CONLLEVA UN AUMENTO EN EL NUMERO DE CONJUGADOS POLARIZADOS Y UNA MAYOR CAPACIDAD DE RECICLAJE DE LAS CELULAS NK.
  • LA ESTRUCTURA DEL GEN DE PARAMIOSINA/MINIPARAMIOSINA DE D. MELAROGASTOS. CARACTERIZACION DE LA MINIPARAMIOSINA.
    Autor: MAROTO SANCHEZ MIGUEL.
    Año: 1993.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.
    Resumen: EL TRABAJO CONSISTE EN LA CARACTERIZACION DEL GEN QUE CODIFICA LA PARAMIOSINA Y LA MINIPARAMIOSINA DE D. MELAROGASTOS. ASI COMO EN EL ESTUDIO BIOQUIMICO DE LA MINIPARAMIOSINA. EL GEN DE LA PARAMIOSINA POSEE DIEZ EXONES, NUEVE QUE CODIFICAN LA PARAMIOSINA Y TRES DE LA MINIPARAMIOSINA, SIENDO LOS DOS ULTIMOS COMUNES A AMBAS. EL PRIMER EXON DE MINIPARAMIOSINA ESTA EN EL INTERIOR DEL GEN. SE HAN SECUENCIADO LAS REGIONES PROMOTORAS Y SE HAN ANALIZADO LAS SECUENCIAS, INTENTANDO IDENTIFICAR CONSENSOS PARA FACTORES DE TRANSCRIPCION. LA MINIPARAMIOSINA ES UN DIMERO UNIDO POR PCES DISULFURO, QUE POSEE DISTINTAS ISOFORMAS CON DISTINTOS PUNTOS ISOELECTRICOS Y MOVILIDAD ELECTROFORETICA, TODAS ELLAS FOSFORILADAS. ES UNA PROTEINA DEL FILAMENTO GRUESO, ESPECIFICA DEL TEJIDO MUSCULAR ADULTO. PARECE QUE ES ESPECIFICA DE INVERTEBRADOS CELOMADOS.
  • CARACTERIZACION DE ACTIVIDADES PROTEINA KINASA EN DICTYOSTELIUM DISCOIDEUM .
    Autor: NUÑEZ RODRIGUEZ ALICIA.
    Año: 1993.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.
    Resumen: SE HA PURIFICADO CASI A HOMOGENEIDAD LA ACTIVIDAD CKI-2 IDENTIFICADA ANTERIORMENTE EN DICTYOSTELILUM DISCOIDEUM. LAS PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE ESTE ENZIMA NOS PERMITEN INCLUIRLA EN LA FAMILIA DE LAS CASEINA KINASA TIPO I. ASIMISMO, EN DICTYOSTELIUIM SE HAN CARACTERIZADO Y PURIFICADO PARCIALMENTE OTRAS TRES ACTIVIDADES CKI, UNA DE LAS CUALES FOSFORILA UN PEPTIDO ESPECIFICO DE CKI. OTRA ACTIVIDAD CARACTERIZADA ES UNA PROTEINA KINASA DE SUSTRATOS BASICOS (MBP) TIENE UN PESO MOLECULAR DE 140 KDA Y SE PROTEOLIZA FACILMENTE, LO QUE LE PROVOCA UN AUMENTO EN LA ACTIVIDAD ASI COMO UNA NUEVA ESPECIFICIDAD DE SUSTRATO. LA PROTEOLISIS TAMBIEN PODRIA DETERMINAR LA LOCALIZACION SUBCELULAR DEL ENZIMA, YA QUE SE HA OBSERVADO LA PRESENCIA DE UN FRAGMENTO DE 90 KDA PERO NO DE 140 KDA EN EL NUCLEO. ESTAS PROPIEDADES JUNTO CON LA INHIBICION DE LAS ACTIVIDADES POR EL PSEUDOSUSTATO DE LA PKOJ, PERO NO DE PKC Y SU LOCALIZACION EN LA MEMBRANA, SUGIEREN QUE CORRESPONDE A UNA ACTIVIDAD PKC DE TIPO NO CLASICO RELACIONADA CON LA PKC.
  • ESTUDIOS ESTRUCTURALES DEL RECEPTOR NICOTINICO DE ACETILCOLINA MEDIANTE ESPECTROSCOPIA DE INFRARROJO POR TRANSFORMADA DE FOURIER.
    Autor: FERNANDEZ BALLESTER GREGORIO.
    Año: 1992.
    Universidad: ALICANTE.
    Centro de lectura: MEDICINA.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: NEUROQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: NEUROCIENCIAS.
    Resumen: EL RECEPTOR NICOTINICO DE ACETILCOLINA (ACCHR) ES UNA PROTEINA INTEGRAL DE MEMBRANA COMPUESTA POR CUATRO SUBUNIDADES POLIPEPTIDICAS DIFERENTES (X,B, Y Y D) QUE APARECEN CON UNA ESTEQUIOMETRIA 2:1:1:1. LA UNION DE AGONISTAS COLINERGICOS A DETERMINADOS DOMINIOS EXTRACELULARES DEL ACCHR, INDUCE LA FORMACION DE UN CANAL IONICO TRANSITORIO, RESPONSABLE DE LA INICIACION DE LA DESPOLARIZACION DE LA MEMBRANA POSTSINAPTICA. LA EXPOSICION PROLONGADA AL AGONISTA COLINERGICO CONDUCE AL RECEPTOR AL ESTADO DESENSIBILIZADO, QUE SE CARACTERIZA POR UN BLOQUEO CONTINUO DEL CANAL IONICO, ASI COMO POR UN AUMENTO DE LA AFINIDAD POR LOS AGONISTAS. LA ACTIVACION DEL CANAL IONICO Y LA CORRESPONDIENTE RESPUESTA FUNCIONAL SE HAN DESCRITO SUFICIENTEMENTE MEDIANTE LA UTILIZACION DE UNA AMPLIA VARIEDAD DE TECNICAS ELECTROFISIOLOGICAS Y BIOQUIMICAS. SIN EMBARGO, NO EXISTE APENAS INFORMACION ESTRUCTURAL ACERCA DE LOS CAMBIOS CONFORMACIONALES QUE SE PRODUCEN ENTRE LOS DIFERENTES ESTADOS FUNCIONALES. EN AUSENCIA DE INFORMACION DE ALTA RESOLUCION, LA ESPECTROSCOPIA DE INFRARROJO POR TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR) PROPORCIONA INFORMACION ADECUADA SOBRE DETERMINADOS ASPECTOS ESTRUCTURALES DEL ACCHR. PARA LLEVAR A CABO DICHOS ESTUDIOS SE HA UTILIZADO LA BANDA AMIDA I, SENSIBLE A CONFORMACION, DEL ESPECTRO DE INFRARROJO DE DOS SISTEMAS DIFERENTES: MEMBRANAS ALCALINAS ALTAMENTE ENRIQUECIDAS EN ACCHR, O ACCHR PURIFICADO Y RECONSTITUIDO EN MATRICES LIPIDICAS DE COMPOSICION CONTROLADA, LA INTERFERENCIA DEL AGUA Y SE ELIMINA MEDIANTE SUSTITUCION ISOTOPICA, SOMETIENDO A LAS MUESTRAS A CICLOS DE CENTRIFUGACION Y POSTERIOR RESUSPENDIENDO EN AGUA DEUTERADA, O BIEN LIOFILIZANDO LAS MISMAS Y RESUSPENDIENDO EN AGUA DEUTERADA. LA DEPENDENCIA DE TEMPERATURA DE LA BANDA AMIDA I DEL ESPECTRO DE INFRARROJO INDICA UNA PERDIDA MASIVA DE ESTRUCTURAS ORDENADAS DEL ACCHR A TEMPERATURAS SIMILARES A LAS OBTENIDAS POR OTRAS TECNICAS, COMO LA CALORIMETRIA DIFERENCIAL DE BARRIDO. LA EXPOSICION PROLONGADA DEL ACCHR AL AGONISTA COLINERGICO CARBAMILCOLINA PRODUCE ALTERACIONES EN LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DE LA PROTEINA. LAS ESTIMACIONES CUANTITATIVAS DE DICHAS ALTERACIONES REVELAN QUE NO SE PRODUCEN CAMBIOS APRECIABLES EN EL CONTENIDO DE X-HELICE, AUNQUE SI APARECE UNA IMPORTANTE DISMINUCION DEL CONTENIDO DE ESTRUCTURAS DE HOJAS B A EXPENSAS DEL AUMENTO DE ESTRUCTURAS NO ORDENADAS. ADICIONALMENTE SE PRODUCE UN INCREMENTO, DEPENDIENTE DE CONCENTRACION, DE LA ESTABILIDAD TERMICA DE LA PROTEINA, LO QUE SUGIERE QUE LA DESENSIBILIZACION DEL ACCHR IMPLICARIA REORDENACIONES EN LA ESTRUCTURA DE LA PROTEINA.
  • CARACTERIZACION DE UN GLICOSILFOSFATIDILINOSITOL IMPLICADO EN SEÑALIZACION: RESPUESTA CELULAR AL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO.
    Autor: CLEMENTE YUNTA ROSA M..
    Año: 1991.
    Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
    Centro de lectura: CIENCIAS.
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA.
    Resumen: LAS MOLECULAS DE GLICOSILFOSFATIDILINOSITOL (GPI) CUMPLEN DOS FUNCIONES IMPORTANTES EN CELULAS ENCARIOTAS: ANCLAJE DE PROTEINAS A LA MEMBRANA PLASMATICA Y SON LAS PRECURSORA DE POSIBLES MEDIADORAS DE LA ACCION DE DISTINTAS HORMONAS Y FACTORES DE CRECIMIENTO. DADA LA SIMILITUD ENTRE AMBOS TIPOS DE GPI, SE PROPUSO QUE LOS GPI DE ANCLAJE ERAN LOS PRECURSORES DE MOLECULAS MEDIADORAS DE LA ACCION DE INSULINA. EN ESTE TRABAJO DEMOSTRAMOS QUE EXISTEN 2 FAMILIAS DIFERENCIADAS DE GPI, UNAS IMPLICADAS EN ANCLAJE DE PROTEINAS A LA MEMBRANA PLASMATICA Y OTRA FAMILIA IMPLICADA EN SEÑALIZACION. PARA VALORAR EL ESTUDIO, USAMOS UNA LINEA CELULAR MUTANTE, LA CUAL, A PESAR DE SER DEFICIENTE EN LA BIOSINTESIS DEL GPI DE ANCLAJE DE PROTEINAS, PRESENTABA EN SU MOLECULA UN GPI EL CUAL ERA MODULADO POR INSULINA. ASI MISMO, COMPROBAMOS QUE ESTE GPI IMPLICADO EN ACCION DE INSULINA TENIA UNA ESTRUCTURA SIMILAR AL GPI QUE ERA MODULADO POR EGF. ESTOS RESULTADOS SUGIEREN QUE ESTE SISTEMA DE SEÑALIZACION PODRIA SER GENERAL PARA SEÑALES QUE TRANSMITEN SU SEÑAL A TRAVES DE RECEPTORES CON ACTIVIDAD TR.
  • EVALUACION QUIMICA DEL TOCOSH DE MAIZ, VARIEDAD BLANCO CHOCLERO DEL DEPARTAMENTO DE ANCASH PERU.
    Autor: HONORIO DURAND ZOILA.
    Año: 1990.
    Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
    Centro de lectura: FARMACIA .
    Centro de realización: DEPARTAMENTO: DEPARTAMENTO DE NUTRICION Y BROMATOLOGIA II. FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID..
    Resumen: EL TOCOSH DE MAIZ, ES UN PRODUCTO DERIVADO DEL MAIZ, CONSUMIDO DESDE LA EPOCA INCAICA POR LOS HABITANTES DE LA REGION ANDINA DEL PERU, BAJO LA FORMA DE GRANOS TOSTADOS; COMO "TOCOSH API" O COMO "LAWA" O SOPA. EL RESULTADO DEL ANALISIS DE LA COMPOSICION QUIMICA, ACIDOS GRASOS DE LA FRACCION LIPIDICA; AMINOACIDOS LIBRES; MACRO Y MICROELEMENTOS; DE LAS VITAMINAS TIAMINA Y RIBOFLAVINA, CONDUCEN A CONSIDERARLO COMO UN ALIMENTO QUE APORTA LOS AMINOACIDOS ESENCIALES BAJO LA FORMA DE AA. LIBRES. LA CARACTERISTICA DE SU PROCESO PERMITE QUE LOS NUTRIENTES SE ENCUENTREN EN FRACCIONES MAS SENCILLAS FACILMENTE ASIMILABLES; ASIMISMO INCREMENTA EL CONTENIDO DE LINOLEICO Y LINOLENICO, Y DE CALCIO, PUDIENDO SER RECOMENDADO COMO UN ALIMENTO COMPLEMENTARIO PARA LOS NIÑOS.
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