ACIDOS NUCLEICOS, 2

Autor: NAVARRO EGEA GERMAN.
Año: 2000.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA; DPTO. BIOQUIMICA, BIOL. MOLECULAR, QUIM. ORGANICA E INMUNOLOGIA.

Resumen: La esclerosis multiple(EM) es una enfermedad inflamatoria cronica del sistema nervioso central caracterizada por la destruccion de mielina. Se piensa que la enfermedad puede ser iniciada por factorres ambientales en individuos susceptibles geneticamente. Aunque la mayoria de los estudios de asociacion entre HLA y EM muestran que la predisposición a la enfermedad se debe principalmente al haplotipo DR2(DRBI*1501-DQA1*0102-DQB1*0602) caracteristico de los pacientes de EM norterupeos se ha encontrado asociacion con DR en otras poblaciones, lo que revela la existencia de diferencias geneticas entre HLA y EM en los distintos grupos etnicos estudiados. En el presente trabajo se ha estudiado por primera vez a dos grupos etnicos conviviendo en un mismo ambiente para intentar esclarecer si este condiciona el patron de asociacion genetica con esta enfermedad. Para ello se procedio a la tipificacion de los alelos HLA-DRB1 y -DQB1 mediante PCR-SSOP y de HLA-DQA1 mediante PCR-SSP, de pacientes caucasoides brasileños (n=54) y controles (n=92) y de pacientes afrobrasileños(n=44) y controles (n=88) de Rio de Janeiro. Además se estudiaron determinados aminoacidos codificados por alelos HLA-DRB1, -DQA1 y -DQB1 observandose las secuencias aminoacidicas de estos (Marsch SGE, Tissue Antigens,1998 y Zamani Ghabanbasani y cols, Journal of Neuroinmunology, 1995). En pacientes caucasoides brasileños se observa una asociacion con el alelo DRB1*1501 para el locus DRB1(RR:3.26) y para el locus DQB1 una asociacion con el alelo DQB1*0602(RR:3.44), no apareciendo asociación con ninguno de los alelos DQA1. El estudio de los haplotipos extendido (RR:3.66) puso de manifiesto la asociación con el haplotipo DRB1*1501,DQA1*0102,DQB1*0602, por lo tanto la asociacion entre HLA y EM en caucasoides brasileños parece ser haplotípica mas que alelica. En pacientes afrobrasileños ninguno de los alelos DRB1 se asocio con la enfermedad, siendo el alelo DRB1*1503 el más frecuente aunque sin alcanzar significacion estadistica. Ningun alelo DQA1 se encuentra asociado con la enfermedad en estos pacientes. Solo se encontro asociado a EM el alelo DQB1*0602 en este grupo etnico(RR:3.41). Cuando se llevó a cabo el estudio de los haplotipos extendidos, ningun haplotipo extendido se encontraba asociado significativamente con EM, por tanto la asociación entre HLA y EM en afrobrasileños es alélica. Asimismo nos propusimos establecer relaciones entre las formas evolutivas de la enfermedad y la presencia del alelo DQB1*0602 en los pacientes brasileños estudiados. Para ello nos centramos en los individuos DQB1*0602 positivos. Asi los pacientes caucasianos brasileños DQB1*0602 positivos presentan una asociacion positiva con la forma evolutiva en brotes de la enfermedad (RR:3.65).Los pacientes afrobrasileños DQB1*0602 positivos presentan una fuerte asociacion con la forma evolutiva en brotes de la enfermedad (RR:6.23). De esta manera pudimos establecer una clara relacion entre EM R/R y la presencia del alelo DQB1*0602, poniendose de manifiesto la importancia de este alelo sólo o formando parte del haplotipo DRB1*1501,DQA1*0102,DQB1*0602. Tras estudiar la asociacion HLA y EM a nivel genico nos propusimos realizar el estudio de determinados aminoacidos codificados por ciertos alelos DRB1,DQA1 y DQB1 y combinaciones de estos, heterodimeros DQA1-DQB1, que pudiesen determinar posiciones criticas,protectoras o susceptibles a EM en los dos grupos etnicos estudiados. En pacientes caucasoides brasileños los alelos DRB1 que codifican para Pro 11+,Arg 13+,Ala 71+(todos estos presentes en DRB1*15) estaban asociados significativamente con susceptibilidad a EM(RR:3.893) mientras que el resto de aminoacidos estudiados no estaban asociados con EM. En cambio, en los pacientes afrobrasileños no se observo que ningun polimorfismo aminoacidico de alelos DRB1,DQA1,DQB1 o combinacion de estos se encuentre asociado con la enfermedad. Las conclusiones alcanzadas en esta Tesis fueron las siguientes: 1. En pacientes caucasoides brasileños la asociación HLA y EM es con el haplotipo DRB1*1501,DQA1*0102,DQB1*0602(RR=3.66) 2. La asociacion genetica entre HLA y EM en pacientes afrobrasileños es alélica, y mas concretamente, con el alelo DQB1*0602(RR=3.31) 3. Los pacientes brasileños DQB1*0602 positivos, caucasoides y afrobrasileños, presentan una fuerte asociacion con la forma evolutiva en brotes de la enfermedad (RR=3.65 y 6.23, respectivamente) 4. Los alelos DRB1 que codifiquen para Pro 11,Arg 13 y Ala 71 en pacientes caucasoides brasileños confieren susceptibilidad a la enfermedad (RR=3893)

Autor: ABRESCIA NICOLA G..
Año: 2000.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: INGENIEROS INDUSTRIALES.

Resumen: Desde 1979 la difracción de rayos X de monocristales ha representado el método más potente de resolución, a nivel atómico, de la estructura tridimensioanl de los ácidos nucléicos. En general la estructura tridimensional de las macromoléculas estudiadas hasta ahora nos ha permitido entender la relación intrínseca entre estructura y funcionalidad biológica. El objetivo principal de este proyecto de investigación consiste en determinar la estructura de regiones de ADN en doble hélice ricas enadenina y timina. Se ha visto que secuncias alternantes en A-T pueden originar estructuras únicas como la forma D. Además, la secuencia alternante en A-T es fundamental para el proceso de transcripción del ADN ya que es un elemento esencial de la TAT box. El polilmorfismo estructural exhibido por el ADN representa un papel fudamental en los procesos de replicación y transcripción y en general en el mecansimo de reconocimiento de las proteínas. El proyecto consiste en cristalizar el hexamero (AT)3 el octámero (AT)4, el decámero CG(TA)3CG y otras secuencias oligonucleotídicas y determinar su estructura tridimensional por difracción de rayos X. Los resultados obtendios se ha concretado en la resolución de dos estructuras diferentes de la secuncia CG(TA)3CG, esta acomplejada con el lion níquel y otra acomplejada con un fármaco que interacciona con una guanina terminal. Sin embargo no se ha encontrado la forma D esperada.Igualmente, se ha visto que el tramo alternante central (AT) de la secuencia no adopta ninguna estructura especial. También se ha aclarado que el níquel no puede unirse al N7 de las guaninas del interior de una hélice en forma B. Como último resultado hemos obtendio que la secuencia (AT)3 dar origen a un cristal afectado por el problema del twin cuando cristaliza en el grupo espacial P65. Además hemos conseguido otra forma cristalina (en el grupo espacial P21) para esta última secuencia con la cual esperamos resolver su estructura.

Autor: TORRENTS SERRA EDUARDO.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: ESCUELA DOCTORADO Y FORMACIÓN CONTINUADA.

Resumen: Las Ribonucleotidil reductasas RNR son metaloenzimas que catalizan la reducción de los ribonucleótidos NTP a sus correspondientes desoxiribonucleótidos (dNTP), que son los monómeros principales para la síntesis del DNA. Se han descrito tres clases de RNR; I, II y III, atendiendo a su estructura, metal, radical y cofactores necesarios para la catálisis. En este trabajo se han estudiado las tres clases de RNR bacterianas desde el punto de vista enzimático, genético y evolutivo. Las RNR de clase III (NrdDG) sólo son activas en condiciones de anaerobiósis estricta estudiándose en Escherichia coli y Lactococcus lactis (LI). En ambos casos, mutantes para los genes que codifican para la RNR de esta clase (nrdD y nrdG) son inviables cuando las células crecen en condiciones de anaerobiósis estricta. La sobreexpresión y purificación de las proteínas NrdDG de Ll ha puesto de manifiesto que la reacción de reducción de los NTP se lleva a cabo en dos etapas. Por primera vez seha observado que la unión del ATP sigue una cinética sigmoidal, mostrando un alto grado de cooperatividad entre los dos lugares involucrados en la regulación alostérica de este enzima. Las RNR de la clase II (Nrd) se han pruficado y secuenciado sus genes en bacterias filogenéticamente primitivas como Thermotoga maritima y Deinococcus radiodurans (Dr), presentando estas proteínas todos los aa involucrados en su regulación alostérica y actividad catalítica. Postulamos que ha de exisitr una gran relación estructural entre las proteínas de esta clase con las de la clase I. El gen nrdj de Dr presenta un inteína en la porción N-terminal que es procesa durante la traducción del gen. En los años 80 se caracterizó paracialmente la RNR de Corynebacterium ammoniaagnes asignándola a una nueva clase, ya que su actividad dependía delilon manganeso. En el presente estudio hemos purificado y secuenciado sus genes (nrdHIEF), clasificando esta enzima perteneciente a la ya descrita blase Ib. El análisis transcripcional de esta región demuestra la existencia de dos promotores indpendientes para los tránscritos nrdHIE ypara le nrdF. Mediante RT-PCR semicuantitativa se han detectado 10 veces más mRNA para nrdF que para nrdHIE. Este sistema ve incrementada su expresión en presencia de hidroxiurea, peróxido de hidrógeno y de manganeso en el medio, indicando un posible papel de los reguladores transcripcionales que regulan el ciclo celuar, FUR/DtxR y por reguladores que responden al estrés oxidativo. Por primera vez se ha observado la exisencia de las tres clases de RNR (I, II y III) en un mismo organismo como ocurre en Pseudomonas aeruginosa, detectándose la expresión sumultanea de las RNR de clase I y II. El estudio filogenético y evolutivo a partir de un alineamiento de todas las secuencias proteicas disponibles en la base de dtos, revela que la RNR más ancestrales la de clase III, que por divergencia evolutiva habría dado lugar a la clase II, y posteriormente esta última a la clase I.

Autor: SANCHEZ FEUTRIE MANUELA.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: BIOLOGIA.

Resumen: En esta tesis se han identificado nuevos elementos que dirigen la actividad transcripcional del promotor de GLUTI1 y su importancia en la regulación de este promotor en un modelo de hipertrofia cardíaca y por la proteina supresora de tumores p53: -Se ha caracterizado una región en la posición -46/-37 del promotor de GLUTI1 de rata que une factores especificos de músculo, de forma dependiente de diferenciación y de desarrollo (MDDE), de naturaleza desconocida. MDDE contribuye a la actividad basal del promotor tanto en mioblastos y miotubos como en cardiomitos neonatales y permite la máxima estimulación de la actividad transcripcional frente al AMPc y Sp1 en mioblastos L6E9, y al suero en cardiomiocitos neonatales. Hemos propuesto que MDDE opera, tanto sinérgicamente con Sp1 como en ausencia de éste, como lugar central en el mecanismo de regulación del mantenimiento de la actividad transcripcional del promotor de GLUT1. -Otra región estudiada ha sido la -69/-55 en la que se ha determinado la unión de factores de transcripción de forma dependiente del estado de proliferación y se requiere de la integridad de 8Cs en el estado proliferativo (caja C8). La caja C8 regula negativamente la actividad transcripcional en células proliferativas de manera dependiente de suero. -Hemos identificado otra posible caja AP1(+41/+62) que podría ser, al menos en parte, responsable de los efectos estimuladores de c-Jun. -El tratamiento de cardiomiocitos neonatales con fenilefrina provoca un fenotipo hipertrófico que provoca un incremento en la expresión de la proteína GLUT1. Una parte de este incremento de debe a una más elevada actividad transcripcional del promotor de GLUT1, y la integridad de las cajas GC, MDDE,y TATA es requerida en la respuesta. Además las proteínas Ras y c-Jun están implicadas en estos efectos. -La proteína p53 presentea efectos contrapuestos sobre la actividad transcripcional de GLUT1. En células 10T1/2 la estimula a través de la caja Sp1 y da lugar a incrementos en el RNAm y proteina GLUT1 mientras que en células L6E9 la inhibe a través de la caja TATA. Estos efectos opuestos de p53 correlacionan con distinta localización celular, de manera que la actividad estimuladora de p53 se asocia a localización nuclear, mientras que la represora es de localización eminentemente citosólica. Esta distinta localización y acción biológica podría ser consecuencia de diferecias en la configuración mayoritaria adoptada por p53 en cada modelo celular.

Autor: SOLIVA SOLIVA ROBERT.
Año: 2000.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE BARCELONA.

Resumen: LA TESIS ES UN COMPENDIO DE ESTUDIOS TEÓRICOS SOBRE LA ESTRUCTURA, FLEXIBILDIAD Y REACTIVIDAD DE TODA UNA GAMA DE ACIDOS NUCLEICOS, TANTO NATURALES COMO DE SINTESIS. SE APLICAN METODOLOGIAS COMPUTACIONALES AL ESTUDIO Y COMPRENSION DE ESTRUCTURAS CANONICAS COMO LA DOBLE HELICE, Y NO CANONICAS COMO LOS TRIPOLEX, Y SE EVALÚA EL IMPACTO DE DIFERENTES MODIFICACIONES QUIMICAS INTRODUCIDAS A NIVEL DE BASES NITROGENDAS Y ESQUELETO DE FOSFORIBOSAS.

Autor: SILVA LEAL JOSE M..
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: CLINICA PUERTA DE HIERRO.

Resumen: A pesar de que los avances experimentados en el conocimiento de la etiología y la patología de la enfermedad tumoral, así como en el desarrollo de nuevos fármacos y esquemas de tratamiento han sido muy relevantes en los últimos años, estos se han mostrado insuficientes para controlar satisfactoriamente la enfermedad. Del mismo modo, el descubrimiento de nuevos marcadores molecuares y genéticos que permitan identificar específicamente en cada enfermo, tanto la respuesta terapéutica como la evolución de la neoplasia, sigue siendo uno de los grandes retos de la oncología actual. En esta tesis presentamos el análisis y el significado clínico de la liberación de ácidos nucleicos de origen tumoral a la circulación sanguínea. Para ello, en primer lugar comprobamos la existencia de alteraciones tumorales en el ADN plasmático en varios tumores de gran incidencia en la población, como son el carcinoma de mama y el cáncer microcítico de pulmón. Alteraciones similares a las encontradas en el tumor, tanto genéticas como epigenéticas, se detectaron en el ADN circulante de estos pacientes. Posteriormente, observamos una asociación entre la presencia de ADN tumoral en el plasma y características clínico-patológicas del mal pronóstico en las enfermas con cáncer de mama. En un segundo paso, analizamos la influencia del tratamiento sobre los niveles de ADN tumoral extracelular, observando que la aplicación del tratamiento (cirugía ó quimioterapia) reducía considerablemente dichos niveles, mostrando a la vez un paralelismo con la respuesta clínica. De esta forma, la mayoría de los pacientes que mantienen este ADN tumoral en plasma, tienen peor respuesta al tratamiento y una asociación con factores de mal pronóstico. De la misma manera, analizamos la existencia de ARN circulante en individuos sanos y enfermos tumorales, así como la presencia en los pacientes con neoplasia de ARNm de origen tumoral. Para ello seleccionamos otro tumor altamente frecuente como es el carcinoma de colon, donde encontramos que la presencia de ARNm tumoral se asociaba a estadíos avanzados y con la existencia de células neoplásicas en sangre periférica. En conclusión, la existencia de ácidos nucleicos en plasma procedentes del tumor podrían tener una potencial aplicación en el diagnóstico, subclasificación y seguimiento del tumor como factor pronóstico.

Autor: CUEVA MENDEZ GUILLERMO DE LA.
Año: 1999.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CENTRO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS .

Resumen: Las proteínas procariotas Kis y Kid permiten el mantenimiento estable del plásmido R1 en E. coli. Kid es un inhibidor del inicio de replicación de ADN en bacterias y su actividad está neutralizada, en condiciones normales, por su antídoto inestable Kis. En E.coli, ambas proteínas son sintetizadas a partir de un promotor bicistrónico, denominado parD. En el presente trabajo el autor determina que las proteínas Kis y Kid son funcionales en organismos eucariotas (concretamente en S. Cerevisiae, X. laevis y células HeLa). In vivo, Kid impide la progresión normal de la fase S del ciclo celular en estos organismos y por tanto inhibe su proliferación. Este efecto inhibidor es neutralizado en presencia de Kis. In vitro, Kid inhibe la replicación de ADN en extractos de oocitos de X. Laevis, otro efecto neutralizado en presencia del antídoto Kis. La activación de la toxicidad de Kid en eucariotas puede lograrse in vitro mediante la regulación transcripcional independiente de los genes kis y kid. Además, el caso de células HeLa, la activación de dicha toxicidad tiene como consecuencia la muerte de las mismas por apoptosis. En este trabajo se analiza también el mecanismo de acción de la proteína Kid a nivel molecular, utilizando E.coli como organismo modelo. Los resultados de este análisis permiten concluir que DnaB, la principal helicasa replicativa de este organismo, es tan sólo parte de la diana celular de la proteína Kid, siendo necesario otro factor de naturaleza desconocida para que Kid ejerza su acción tóxica con eficiencia. Los resultados obtenidos en este trabajo permiten concluir el potencial de Kis y Kid de la aproximación experimental empleada en el mismo para regular la activación de la toxicidad de la primera en organismos eucariotas in vitro para el desarrollo de futuras estrategias terapeuticas para combatir el cáncer.

Autor: JUAN CASERO JOSE ANGEL DE.
Año: 1999.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: HOSPITAL UNIVERSITARIO SAN CARLOS (MADRID).

Resumen: OBJETIVOS: El sistema de las endotelinas. (Ets) está implicado en las alteraciones del flujo sanguíneo retinaiano que precede ald esarrollo de la retinopatía diabética. Este estudio pretende determinar. 1- Si la densidad y la localizaciónde la endotelina-1 inmunoreactiva (ET-1-IR) y de sus receptores cambia´n en las fases tempranas de diabetes en la retina de la rata y 2- Si el tratamiento con insulina afecta a dichos cambios. METODOS: Ratas con diabetes inducida con streptozotocina (GD), ratas diabéticas tratadas coninsulina (GT), y ratas controles (GC) se sacrificaron 15,45 y 90 días después de la inducción de diabetes. Se usaron ensayos de unión de radioligandos para determinar la densidad y la proporción de receptores de las Ets en membranas de la retina neural. La localización de los receptores de las Ets y la ET-1-IR fueron analizados por microautoradiografía e inmunohistoquímica, respectivamente. RESULTADOS: A los 15 días de la inducción de diabetes, en el GD la densidad de los dos tipos de receptores de las ETS en las membranas de la retina neural es significativamente cuando menor que en el GC. Sin embargo, a los 90 días la densidad de los rceptores ETB es significativamente más alto en el GD que en el GC, y las cpaas más internas de la retina en el GD también muestran un incremento de los receptores ETB y de la ET-1-IR en comparación con el GC. El tratamiento con insulina durante 90 días incrementa los receptores ETA en membranas de la retina nueral y en las capas más internas de la retina. CONCLUSIONES: Estos resultados demuestran que el sistema de las Ets se altera tanto en el componente vascular como en el componenete neural de la retina en las priemras fases de la retinopatía diabética. El incremento de los receptores ETA por el tratamiento con insulina sugiere que esta horomona puede estar implicada en la microangiopatía retiniana.

Autor: SOLER LÓPEZ MONTSERRAT.
Año: 1999.
Universidad: POLITECNICA DE CATALUÑA.
Centro de lectura: INGENIEROS INDUSTRIALES.
Centro de realización: ETSEIB.

Resumen: el objetivo de la presente tesis era el estudio del ADN en presencia de otras moléculas tales como drogas, iones y péptidos básicos. Se logró determinar la estructura de un fragmento de ADN en forma B a resolución atómica mediante cristalografía de rayos X, la resolución más alta hasta entonces obtenida para un B-ADN. Esta alta resolución nos permitió realizar un estudio muy detallado de la estructura de los B-ADN, que de hecho es la conformación que se encuentra en los núcleos de los organismos. También se realizó un análisis detallado de los iones y la hidratación que envuelven a esta estructura. Se observó que la hidratación en el surco estrecho del ADN se puede describir en términos de capas de hidratación, formando unas redes de moléculas de agua muy ordenadas. Se comprobó que la hidratación y los iones era mayoritariamente los responsables de la compactación del ADN y de la estabilización de la estructura cristalina, neurtralizandola carga negativa de los grupos fosfatos del ADN. Por tanto, eran los auténticos responsables de sus estructuas secundaria y terciaria. Además, el agua tiene una importancia esencial en los procesos de reconocimiento entre macromoléculas. Aparte de las peculiaridades de la hidratación,la resolucióna tómica también permitió observar que un mismo ADN puede adoptar conformaciones alternativas, y mantener a pesar de todo un empaquetamiento ordenado. Esto demostraría una vez más la gran flexibilidad que el ADN puede adoptar en los procesos de reconocimiento molecular, en los procesos transcripcionales de la célula, o bien simplemente en el empaquetamiento que el ADN presenta en el núcleo celular. Paralelamente, se quería profundizar en el modo de interacción de la histona H1 con el ADN, responsable de la condensación de este útlimo en fibras de cromatina de 30nm. Con esta finalidad se critalizaron complejos de ADN conpéptidos básicos que simulaban la región C-terminal de la proteína histona H1, región que interactúa propiamente con el ADN. Los complejos se condesaban en una mesofase colestérica considerada como un tipo de cristal líquido. Esta mesofase estaba causada por unas orientaciones anisotrópicas que provocan un ordenamiento bidimensional de los fragmentos de ADN, pero sin llegar a formar monocristales adecuados para la difracción por rayos X. Esto explicaría que los péptidos básicos se unirían al ADN a lo largo del surco ancho neutralizando parte de la carga negativa d elos fosfatos, pero sin disponer de una forma completamente ordenada. Se diseñaron péptidos unidos a drogas intercaladoras del ADN para facilitar la interacción con el ADN, obteniéndose distintas formas cristalinas en algunos casos. Se sintetizó un péptido formado por cutro argininas unido covalentemente a un decámero de ADN, con el cual también se obtuvieron diversas formas cristalinas.

Autor: FUENTE RUBIO MERCEDES DE LA.
Año: 1999.
Universidad: NACIONAL DE EDUCACION A DISTANCIA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: UNED-FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Se ha estudiado el modo en el que los iones metálicos Mg(II), Ca(II), Sr(II), Ba(II), Cr(III),Co(II), Cu(II), Zn(II), Cd(II), Al(III) y Ga(III) interaccionan con los nucleotidos 5´-GMP y 5´-CMP, por el interés de estas interacciones en sí mismas y como conocimientos aplicables a la interaccion de los iones metálicos con ADN,ARN y ribozimas. Este estudio se ha llevado a cabo en fase sólida y mediante espectroscopía de vibración (IR y Raman) y RMN. Tras un detallado análisis bibliográfico previo, destinado a conocer la asignación de los espectros de vibración de ambos nucleótidos, se han estudiado los espectros de las distintas formas protonadas de cada nucleótido, así como de sus formas recristalizadas, todo ello en estado sólido. De esta forma, se han encontrado bandas marcadoras de las distintas protonaciones y se ha comprobado que existen variaciones en los espectros de vibración del 5´-GMP tras la recristalización de este. Los espectros 13C-RMN por CP-MAS han resultado muy útiles para analizar la conformación de la molecula. En un intento de mayor aproximación a las condiciones fisiológicas se ha estudiado la interacción del Mg(II) con el 5´-CMP en disolución acuosa, analizandose el proceso de asociación, en función de la concentración del ion metáico y de la temperatura, asi como los cambios conformacionales durante este proceso.

Autor: HERNANDEZ ILLERA M. BELEN.
Año: 1999.
Universidad: NACIONAL DE EDUCACION A DISTANCIA .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: UNED. FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: El trabajo recogido en esta Memoria de Tesis aborda el estudio de los nucleótidos naturales complementarios 5´-dAMP y 5´-TMP, unidades integrantes del ADN, y de sus interacciones con los fármacos ara-A(9-B-D-arabinofuranosiladenina 5´-monofosfato) y ara-T (9-B-D-arabinofuranosiltimina), analogos de nucleósido o nucleótido pertenecientes a la familia de los arabinósidos, utilizados en el tratamiento de procesos antitumorales y activos también contra ciertos virus de ADN de la familia de los herpes. Con ello se pretende hacer una aportación al esclarecimiento del mecanismo de la acción terapéutica de estos fármacos. Las tecnicas experimentales utilizadas son espectroscopía de RMN de proton y espectroscopia de vibración(infrarrojo y Raman). Se hace uso de metodos mecanocuanticos de calculo (ab initio y semiempíricos) como fuente de ayuda en la interpretación de datos espectroscópicos y estudios conformacionales. Se realiza un estudio comparativo de diversos métodos computacionales, relativo a su educación a este tipo de cálculos. La Memoria contiene las asignaciones completas de los espectros de vibración, asi como un estudio detallado de los procesos de auto y heteroasociación en disolución acuosa de los sistemas analizados. Estas moléculas interaccionan simultáneamente por apilamiento vertical y enlaces de hidrogeno. Se interpretan los desdoblamientos de las bandas IR más importantes en disolución como consecuencia del acoplamiento de dipolos de transición de los modos normales que las originan. Se extrae información geométrica sobre los agregados de la magnitud de los desdoblamientos medidos en aquellas, asi como de algunos datos de RMN. La evolución con la concentración de las areas de las componentes de las bandas que se desdoblan ofrecen información sobre las poblaciones de las diferentes especies agregadas en los sistemas. La interacción global es bastante más fuerte entre 5´-dAMP y 5´-TMP, los dos nucleótidos naturales, que entre cada uno de ellos y sus farmacos con base complementaria (5´-dAMP+ara-T, 5´-TMP+ara-A y 5´-TMP+5´-ara-AMP), por razones conformacionales. El menor grado de asociación en estos sistemas puede traducirse en una mayor proporción de unidades monoméricas libres, no integradas en pilas ni agregados en general, del farmaco que del nucleotido natural, lo cual puede constituir una ventaja en la competencia por la enzima, y determinar su actividad.

Autor: GARCES GONZALEZ JOSE LUIS.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.

Resumen: Se desarrolla un formalismo de cara al tratamiento del problema de las interacciones macromolecula-molecula pequeña, basado en el concepto de especie formal (concentración de moleculas libres y complejadas), así como en el cociente global de asociación (CGA). Se establece la relación entre esta última magnitud y los cambios de energia libre asociados a los fenómenos de cooperatividad, permitiendo la extensión de conceptos típicos de la termodinamica quimica a los sistemas macromoleculares, tales como coeficientes de actividad, energia libre de exceso, afinidad quimica, etc. Además se demuestra que para sistemas de Adair, el CGA es un promedio de las constantes de asociación intrínsecas. Este resultado se extiende a sistemas que no siguen la ecuación de Adair, considerando un orden jerárquico entre los fenómenos fisico-quimicos asociados a la cooperatividad. Para el caso concreto de sistemas de muchos sitios, se utiliza, por un lado, el formalismo de Maxima Entropia para la determinación de espectro de afinidades, y por otro, se encuentran relaciones simples para las constantes de asociación estequiometricas, basadas en el metodo de Darwin-Fowler. Por otra parte, se estudia la aplicabilidad de las tecnicas voltamperométricas NPP y RPP al estudio de este tipo de sistemas, en concreto la influencia de la adsorción en el valor de las intensidades límite, así como el desarrollo de expresiones analíticas para la corriente, que permiten determinar la curva de complejación.

Autor: PRENAFETA AMARGOS ANTONI .
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Los trabajos de esta tesis forman parte de la caracterizacion de la proteina Hha de E.coli. Los objetivos de la memoria tenian por finalidad establecer relaciones funcionales de Hha con otras proteinas de e.coli, analizar la interacción de Hha con regiones reguladoras del operón de la hemolisina del plásmido pANN202-312, asi como tambien identificar una proteina de Salmonella typhimurium con una función osmoreguladora parecida a la de Hha en E.coli. En este sentido, los resultados que se obtuvieron han permitido establecer que la proteina asociada al nucleoide HU sobreexpresada puede compensar la falta de proteina Hha en la célula y complementar el fenotipo hemolitico causado por la mutacion hha. Por otro lado, se ha podido demostrar una interacción in vitro entre las proteinas Hha y H-NS para unirse al DNA, demostrandose tambien que ambas proteinas son necesarias para la correcta regulación ambiental del operón de la hemolisina del plásmido pH1 y 152. Finalmente, se obtuvieron 8 inserciones por transposon en hipoteticos genes osmoregulados de Salmonella typhimurium y se aisló otra inserción posiblemente en el gen de una proteina represora de la expresión génica a elevada osmolaridad en esta bacteria.

Autor: GARRIDO PÉREZ NURIA.
Año: 1999.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El sistema genético mitocondrial codifica una serie de proteínas, componentes todas ellas de la cadena respiratoria, así como los RNAs necesarios para su síntesis: 2 RNAs ribosómicos y 22 RNAs de transferencia. Sin embargo, la mayoría de las proteínas que forman los complejos respiratorios están codificados en el genoma nuclear, por lo que la biogénesis del sistema de fosforilación oxidativa depende de la expresión coordinada de los dos sistemas genéticos; el mitocondrial y el nuclear. Los resultados obtenidos en esta Tesis Doctoral han puesto de manifiesto que determinados moduladores con capaces de actuar directamente a nivel mitocondrial determinando la puesta en marcha de mecanismos de autorregulación que controlan la síntesis y expresión del DNA mitocondrial. Así, mediante la utilización de un sistema in organello con mitocondrias aislados se ha comprobado que las hormonas tiroideas ejercen una modulación diferencial de la razón mRNA/rRNA mitocondrial, actuando directamente en la mitocondrial mediante selección de los lugares de iniciación de la transcripción de la cadena pesada. Este efecto no está mediado por el núcleo. El análisis del efecto de dos drogas antitumorales, la adriamicina y el cisplatino sobre la síntesis y expresión del DNA mitocondrial, ha permitido comprobar que ambas drogas alteran de manera directa tanto la replicación comola transcripción del DNA en mitocondrias aisladas, sin producir alteración de la actividad respiratoria mitocondrial. Además, el cisplatino altera la estabilidad de los rRNAs mitocondriales. Sin embargo, los efectos producidos por el cisplatino son menos acusados tras el tratamiento in vivo con este compuesto, lo que sugiere la existencia de algún mecanismo de tipo compensador. Por último, el análisis en diversos órganos y tejidos con actividades metabólicas variadas y, por tanto, con diferencias en las demandas energéticas celulares, ha puesto de manifiesto que la actividad respiratoria tanto por mitocondria, como por célula, es característica de cada órgano. Las diferencias en la actividad respiratoria no se deben sin embargo, ni a diferencias en la dosis génica ni en los niveles de RNA en los distintos tejidos.

Autor: ALVAREZ DE LA ROSA RODRIGUEZ DIEGO.
Año: 1998.
Universidad: LA LAGUNA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: La Na, K-ATPasa es el principal regulador de la concentración intracelular de los iones sodio y potasio en las células animales. Este sistema enzimático está compuesto por una familia multigénica que codifica distintas isoformas para su subunidad alfa y su subunidad beta. La expresión de estas isoformas es específica de tejido y regulada durante el desarrollo. La subunidad beta 2 se expresa principalmente en el SNC. Con el objeto de estudiar los elementos implicados en la regulación diferencial de la expresión de este gen se ha caracterizado la estructura de la cromatina en la región 5 del mismo mediante el uso de las endonucleasas DNasa I, nucleasa Sl y nucleasa micrococal, además de determinar el estado de metilación del DNA en la misma región. En las regiones caracterizadas se ha estudiado la unión diferencial de factores proteícos purificados de núcleos celulares de distintos tejidos. Se concluye que la expresión del gen de la subunidad beta 2 en rata está regulado por una región comprendida entre -230 y +80 respecto al inicio de transcripción, capaz de unir proteínas diferencialmente.

Autor: CARRASCO CUEVAS CAROLINA.
Año: 1998.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: MEDICINA.

Resumen: En la presente Tesis se desarrolla un método universal de construcción de fragmentos de DNA que puedan actuar como competidores en la reacción de amplificación en cadena de la pomerasa. El uso de estos competidores permite utilizar la PCR como técnica de cuantificación de ácidos nucleicos con una gran precisión. El método de construcción de estos competidores está basado en el empleo de oligonucleótidos que contienen una región formada por nucleótidos dispuestos al azar junto con otra región constituida por secuencias específicas capaces de dirigir la amplificación de un conjunto de fragmentos de DNA de distinto tamaño. Las secuencias aleatorias incluidas en estos cebadores permiten añadir a los oligonucleótidos que van a dirigir la amplificación del DNA a cuantificar unas secuencias específicas que permitan la amplificación simultánea del DNA competidor. Además se han desarrollado otras aplicaciones prácticas como la extracción de ácidos nucleicos a partir de geles de agarosa mediante el empleo de polietilen glicol para permitir una separación de fases en la agarosa fundída o el uso de una matriz mixta de agarosa y acrilamida lineal para aumentar la resolución de las electroforesis de pequeños fragmentos de DNA.#

Autor: RIFÉ CANELA JUAN.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: CIENCIAS.

Resumen: Los objetivos planteados en la presente tesis eran: en primer lugar desarrollar un método de ciclopropananción eficiente, altamente diastereselectivo y que permitiera obtener unos intermedios versátiles que dieran entrada a diferentes compuestos ciclopropánicos, que abarcanaminoácidos, aminoalcoholes y nucleósidos carbocíclicos. El método que se eligió para la ciclopropananción fue la edición 1,3-dipolar de diazometano a aminopentenoatos quirales, obtenidos a partir de los dos enantiómeros de isopropilidengliceraldehido. Así, el primer paso fue optimizar la obtención de las olefinas (S)-3-(2',2'-dimetil-1',3'-dioxolan-4'-il)-2-terc-butoxicarbonilamino-2-propenoato de metilo, a partir de dichos aldehídos y de los fosfonatos adecuados, que aportan la función aminoácido. El isómero Z fue el mayoritario, alcanzándose una proporción Z/E de 95:5. Seguidamente se procedió a la formación de las correspondientes pirazolinas por reacción de las olefinas condiazometano, y la posterior fotólisis para obtener los derivados cilopropánicos. En este proceso se obtuvo un solo diastereómero, para todos los substratos utilizados. La reacción de fotólisis también fue optimizada, alcanzando un rendimiento cuantitativo en dicha transformación. Posteriormente, mediante el uso de metodologías sintéticas adecuadas se sinterizaron los dos enantiómeros de la Z-metanohomoserina, mejorando los procedimientos descritos anteriormente en la bibliografía. Paralelamente se procedió a la síntesis de derivados 3,4-ciclopropánicos del ácido glutámico, partiendo de L-serina como precursos quiral y usando la metodología puesta a punto por el Prof. Lajoie, adaptándola a nuestras necesidades para obtener conmuy buenos rendimientos L-CCCG-I y L-CCG-III. Por otra parte se sinterizaron dihidroxianainas ciclopropánica enantioméricamente puras que son intermedios muy útiles en síntesis orgánica asimétrica debido a su elevada funcionalización, así como diferentes productos del tipo 1-amino-2-hidroximetilcilopropano, con diferente substitución en el carbono 1 del anillo, entre los que se encuentran algunos nucleósidos. Finalmente, gracias a una colaboración con el Prof. Nazario Martín, han sido preparados, por primera vez, aminoácidos ciclopropánicos con un residuo fulerénico.

Autor: BRIONES LLORENTE CARLOS.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EL PRINCIPAL OBJETIVO DEL PRESENTE TRABAJO HA SIDO CONTRIBUIR AL CONOCIMIENTO DE LAS RELACIONES ESTRUCTURA-FUNCION DEL RIBOSOMA, POR MEDIO DE LA DETERMINACION DE LOS CAMBIOS CONFORMACIONALES QUE SON RESPONSABLES DE LA FORMACION DE UN RIBOSOMA ACTIVO EN SINTESIS DE PROTEINAS. EL ESTUDIO SE HA REALIZADO EMPLEANDO LA TECNICA DE RECONSTITUCION TOTAL IN VITRO DEL RIBOSOMA DE LA ARQUEA HALOFILA EXTREMA H. MEDITERRANEI, EN COMBINACION CON LA MODIFICACION QUIMICA DEL RRNA EN LAS DOS FASES DE DICHO PROCESO. COMO MODO ADICIONAL DE ESTUDIAR EL ENSAMBLAJE ACTIVO DEL RIBOSOMA SE HA ANALIZADO LA FORMACION, A LO LARGO DEL PROCESO DE RECONSTITUCION, DE LOS LUGARES DE INTERACCION PARA DOS ANTIBIOTICOS DE DISTINTA ESPECIFICIDAD FUNCIONAL: ANISOMICINA (INHIBIDOR ESPECIFICO DE LA ACTIVIDAD PEPTIDIL TRANSFERASA) Y TIOSTREPTON (ESPECIFICO DE LA ACTIVIDAD GTPASA). CON TODO ELLO, SE HA PODIDO ESTABLECER UN MODELO PARA LA ESTRUCTURACION DEL RIBOSOMA FUNCIONAL DE H. MEDITERRANEI.

Autor: CAMPILLO GONZALEZ JUAN ANTONIO.
Año: 1996.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: QUIMICA .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR B E INMUNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: EN ESTA MEMORIA SE ANALIZA LA POSIBILIDAD DE APLICAR MARCADORES BIOQUIMICOS EN LA VIGILANCIA DE LA CONTAMINACION MARINA; CONCRETAMENTE DE LOS SISTEMAS IMPLICADOS EN LA DESTOXIFICACION DE CONTAMINANTES ORGANICOS COMO SON EL SISTEMA DE OXIDASAS DE FUNCION MIXTA Y LAS ENZIMAS GLUTATION S-TRANSFERSA Y UDP-GLUCURONIL TRANSFERASA.LOS TRABAJOS, REALIZADOS EN TRES ESPECIES REPRESENTATIVAS DEL MAR MEDITERRANEO, SPARUS AURATA, SERRANUS CABRILLA Y MYTILUS GALLOPROVINCIALIS, PERMITEN ESTABLECER LA UTILIDAD DE ESTOS SISTEMAS DE ENZIMAS COMO HERRAMIENTAS EFICACES EN LA IDENTIFICACION DE ZONAS IMPACTADAS POR HIDROCARBUROS POLINUCLEARES AROMATICOS Y BIFENILOS POLICLORADOS.

Autor: FABREGA CLAVERIA M. CARME.
Año: 1996.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA ORGANICA PROGRAMA DE DOCTORADO: QUIMICA FUNDAMENTAL-QUIMICA ORGANICA .

Resumen: EL OBJETIVO PRINCIPAL DE ESTA TESIS HA SIDO LA PREPARACION DE OLIGONUCLEOTIDOS QUE CONTIENEN ANALOGOS DE LAS BASES NATURALES DEL ADN QUE PRESENTAN PROPIEDADES MUTAGENICAS PARA SU UTILIZACION EN ESTUDIOS BIOLOGICOS Y ESTRUCTURALES. LA PRIMERA PARTE DE ESTE TRABAJO HA CONSISTIDO EN LA SINTESIS DE OLIGONUCLEOTIDOS PARA EL ESTUDIO DEL APAREAMIENTO 2-AMINOPURINA CON CITOSINA. SE HA PUESTO ESPECIAL ENFASIS EN LA PUESTA A PUNTO DE UNA METODOLOGIA EFICIENTE Y RAPIDA QUE UTILIZA LA ETAPA DE DESPROTECCION CON AMONIACO PARA LA INCORPORACION DEL N-15 UTILIZANDO AMONIACO MARCADO CON N-15. LA SEGUNDA PARTE DE ESTE TRABAJO DESCRIBE LA PREPARACION DE OLIGONUCLEOTIDOS QUE CONTIENEN 0-4-BENZIL-TIMIDINA. EN ESTE CASO LA UTILIZACION DE LOS GRUPOS TERT-BUTILPHENOXIACETILO PARA LA PROTECCION DE LAS BASES NATURALES HA SIDO CLAVE PARA LA OBTENCION DE LOS OLIGONUCLEOTIDOS QUE CONTIENEN ESTE ANALOGO. FINALMENTE, SE HAN PREPARADO OLIGONUCLEOTIDOS QUE CONTIENEN LA 7,8-DEHYDRO-8-OXOGUANINA. ESTA LESION ES PRODUCIDA POR AGENTES OXIDANTES Y RADIACIONES IONIZANTES Y SU ACUMULACION PRODUCE MUTACIONES. ADEMAS DE LA PREPARACION DE OLIGONUCLEOTIDOS CON OXO-GUANINA SE HAN PREPARADO OLIGONUCLEOTIDOS QUE CONTIENEN 8-BROMO-GUANINA Y SE HAN DETERMINADO SUS PROPIEDADES.