BIOQUIMICA FISICA, 2

Autor: FERRER ARTIGAS JOAN CARLES.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: El centro activo de la citocromo c peroxidasa (CcP) presenta una compleja red de puentes de hidrógeno en la que intervienen moléculas de agua, residuos aminoacídicos de la proteína y substituyentes del propio grupo prostético. Mediante mutagénesis dirigida por oligonucleótidos se ha analizado la relevancia de estos puentes de hidrógeno en el mantenimiento de las propiedades estructurales, electrónicas y funcionales de enzima. Mientras que el ion férrico del enzima salvaje es pentacoordinado y presenta un spin electrónico alto, la variante Asp235Ala muestra tres especies espectroscópicamente diferentes entre pH 5 y 9, todas ellas con un espectro electrónico indicativo de hexacoordinación: una especie de spin alto, que predomina a pH ácido y dos especies de spin bajo que se forman sucesivamente al aumentar el pH. El enzima variante muestra un perfil de actividad-pH en condiciones de estado estacionario prácticamente idéntico al del enzima salvaje, si bien la actividad de la primera es tres órdenes de magnitud inferior. Ello sugiere que el spin electrónico de ion férrico del enzima no tiene una influencia determinante en la velocidad de oxidación de citocromo c. La eliminación del puente de hidrógeno entre el carboxilato de Asp235 y His175, ligando proximal del ion férrico, resulta en un enlace de coordinación más debil que, junto a los cambios que tienen lugar en el lado distal del hemo, permite explicar el incremento observado en el potencial de reducción del par Fe3+/Fe2+ del enzima variante. La variante Trp51Ala de CcP presenta tres especies espectroscópicamente distinguibles en función del pH, en las que el átomo central de hierro es hexacoordinado. La especie dominante a pH ácido, LS1, posee un espectro electrónico y de dicroismo circular magnético indicativo de spin electrBonico bajo y de una coordinación axial bis-histidina. HS, la especie que predomina a pH intermedio, muestra unas propiedades espectroscópicas características de un ion férrico de spin alto con histidina y agua como ligandos axiales. En la especie mayoritaria a pH más alto, LS2 el ion férrico se encuentra coordinado a dos histidinas y presenta spin bajo. Las constantes de equilibrio de las reacciones de interconversión entre estas formas dependen de la fuerza iónica del medio y de la presencia de aniones específicos. Estos aniones, que no se coordinan directamente al hierro, estabilizan la forma HS, la cual es también capaz de unir pseudosubtratos aromáticos como estireno, catecol y guayacol. El complejo formado entre la CcP y el citocromo c (Cc) se puede describir con una estequiometría 1:1, para valores de fuerza iónica del medio superiores a 100 mM. Para fuerzas iónicas inferiores, el modelo más simple que permite explicar adecuadamente los datos experimentales requiere de la presencia de dos lugares de unión no equivalentes en la molécula de CcP. La unión de Cc al lugar de alta afinidad presenta una constante de afinidad superior en tres órdenes de magnitud a la calculada para el lugar de baja afinidad y es máxima entre pH 6,75 y 7. Los valores de la constante de equilibrio obtenidos a alta fuerza iónica para el lugar de unión de alta afinidad son independientes de la temperatura, lo cual es consistente con una estabilización del complejo esencialmente debida a factores entrópicos. El ferricitocromo c ninguna evidencia de evfectos debidos a la presencia de iones específicos en la estabilidad del complejo. A fuerzas iónicas inferiores a 50 mM y pH altos, la interacción entre las dos proteínas es más compleja y no se ajusta al modelo de dos lugares de unión.

Autor: VAREA EZQUERRO JULIO.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.

Resumen: Las enzimas líticas de neumococo y sus bacteriófagos, responsables de la degradación de la pared bacteriana, presentan una organización modular, con un módulo catalítico y otro de anclaje al sustrato formado, generalmente, por 6 repeticiones de 20 aminoácidos (motivos p1 a p6) y una extensión C-terminal de 18 residuos, que reconoce los restos de colina de la pared celular. En esta tesis se han abordado dos objetivos: i) implicaciones de la región terminal del módulo de unión a colina de la amidasa LytA de neumococo (motivos p5,p6 y 18 residuos terminales) en la organización estructural de la proteína y en el reconocimiento de colina y ii) implicaciones estructurales y funcionales de las diferencias en secuencia entre las amidasas de pared de neumococo codificadas por la bacteria y por sus bacteriófagos. Para ello se ha procedido a estudiar cuatro mutantes de LytA obtenidos por truncamiento de la región C-terminal (amidasas P6, P5, P4 y P5C) y 4 amidasas homólogas a LytA, (LytA101, Pa1, Ej1 y Hb1), codificadas por el neumococo atípico 101/87 y los fagos Dp-1, Ej-1 y Hb-3, respectivamente, caracterizando, en todos los casos, las diferencias en estructura secundaria, terciaria y cuaternaria, y en los equilibrios de unión a colina, producidas por la modificación de la estructura primaria. Las técnicas empleadas han sido dicroísmo circular, espectroscopía infrarroja con transdormada de Fourier, calorimetría diferencial de barrido y ultracentrifugación analítica. A nivel de su estructura secundaria, todas las proteínas estudiadas son de tipo mixto y presentan un elevado contenido en hojas y giros beta, siendo pequeñas las diferencias existentes respecto a la amidasa LytA. Todas las mureín-hidrolasas caracterizadas hasta el momento presentan equilibrios de autoasociación regulados por la unión de colina. Los resultados obtenidos para los diferentes mutantes truncados de LytA han permitido demostrar la implicación de los motivos p5, p6 y la extensión C-terminal en la unión de colina, en el establecimiento de los contactos intermoleculares entre subunidades y en la unión preferencial de colina hacia las formas autoasociadas de LytA. Por otro lado el motivo p5 podría desempeñar un papel fundamental en la estabilización de la estructura nativa del módulo catalítico en la amidasa LytA. Las diferencias en secuencia existentes entre LytA 101, Ej1, Hb1, Pa1 y LytA afectan a su organización en dominios cooperativos, al grado de asociación inducido por colina y a la afinidad relativa de los diferentes tipos de sitios de unión por ligando, observándose una caída progresiva en la afinidad de los sitios de unión a colina implicados en la autoasociación, según la secuencia, de mayor a menor afinidad: LytA, Hb1 LytA101, Ej1 y Pal.

Autor: CASTRO GONZALEZ M. DOLORES.
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Los iones metálicos hierro, zinc, cobalto, selenio, rubidio y cesio a concentraciones del orden de mug/Kg en órganos de rata como hígado, riñón, páncreas, médula ósea, mucosa intestinal y estructuras cerebrales, han sido determinados por Análisis de Activación Neutrónica, técnica de gran sensibilidadd y especificidad que permite su determinación y caracterización con ayuda de técnicas radioquímicas. Algunos elementos pesados, como el cadmio, son acumulativos en los organismos y también en los seres humanos, e inducen la síntesis de proteínas reguladoras de iones metálicos como la metalotioneína, participando catalíticamente en la homeostasis y actividades enzimáticas. La aplicación de cadmio, metal pesado y de gran toxicidad, induce en la mayoría de los órganos analizados a cambios en la distribución y concentración de algunosde los iones estudiados. El estado anémico alcanzado en las ratas tratadas con fenilhidrazina, tóxico que provoca una anemia principalmente hemolítica, se caracteriza porque la concentración de los iones analizados por Activación Neutrónica se ve afectada, e implicadas también en su regulación las estructuras cerebrales. El hierro, es el elemento más afectado, de investigación en el grupo en el que estoy adscrita.

Autor: LOPEZ LARRUBIA PILAR.
Año: 1998.
Universidad: NACIONAL DE EDUCACION A DISTANCIA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS (U.N.E.D).

Resumen: La Resonancia Magnetica Nuclear (RMN) y la Imagen de Resonancia Magnetica (IRM), son dos tecnicas que se han desarrollado de manera paralela, con enormes aplicaciones en campos muy diversos de la ciencia. En esta Tesis Doctoral, se ha abarcado el diseño y desarrollo de estructuras susceptibles de emplearse como agentes de contraste en estas tecnicas. Por una parte se han sintetizado una nueva serie de ligandos de Gd(III) utiles como agentes de contraste paramagnético en IRM, compuesta de cuatro acidos N-2-(azol-1(2)-il)etiliminodiacéticos, constituyendo las primeras complexonas de naturaleza azólica. Con estos derivados se han llevado a cabo diversos estudios para analizar su utilidad, como son: cálculo de pKa por medio de las titulaciones de pH monitorizadas por 1H RMN, determinación de constantes de afinidad con Gd(III) y otros cationes, estudios por 1H RMN del comportamiento de los protones azólicos en presencia de dichos metales, determinación de los valores de relajatividad, realización de imágenes de RM, analisis de toxicidad in vitro y calculos de geometria molecular. Por otro lado, se han intentado preparar complexonas analogas a las anteriormente mencionadas, en las que se incremente su capacidad de complejación con el Gd(III) mediante la incorporación de un grupo adicional de ácido iminodiacético. Tras el estudio de múltiples posibilidades sinteticas desde distintos abordajes, se ha concluido que la sintesis de estos derivados debe llevarse a cabo via metodos en los que el anillo azolico se forme en el ultimo paso del proceso, una vez sintetizada el resto de la estructura. Por último, se han diseñado y desarrollado un nuevo grupo de agentes de contraste funcionales de pH para IRM compuesto de diez ésteres y ácidos 2-(imidazol-1-il) acéticos y succínicos. Con el objeto de evaluar la viabilidad de los mismos, se han realizado las titulaciones de pH de estos compuestos para comprobar que las variaciones en del H2 del anillo de imidazol, son las adecuadas como para emplearlo como protón indicador de pH. Además se ha analizado en profundidad la hidrólisis neutra de los estétres 2-(imidazol-1-il) succínicos para establecer el mecanismo de dicho proceso. Estos estudios se han monitorizado por 1H RMN a diferentes temperaturas, concluyéndose que en el proceso global de hidrólisis, intervienen reacciones paralelas retro-Michael que afentan a la velocidad de la reacción en función de la temperatura y la estructura del imidazol.

Autor: ECHABE PEREZ IZASKUN.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: El conocimiento de la estructura proteica es fundamental en Bioquímica, dada la relación existente con la función. Para abordar tal estudio se utiliza gran variedad de técnicas; en el caso de las proteinas de membrana la aplicación de técnicas de alta resolución está bastante limitada, por lo que hay que recurrir a otro tipo de estudios. La espectroscopía de infrarrojo es especialmente adecuada para estas proteínas de membrana. En esta tesis se ha aplicado dicha técnica al estudio cuantitativo de varias proteínas; en concreto, se ha aplicado un método basado en la descomposición y ajuste de la banda amida I original. El objetivo es doble: por un lado, se pretende mejorar el método de cuantificación y por otro, se estudian proteínas concretas, no sólo para resolver problemas particulares (obtención de mayor información estructural, papel de una subunidad concreta o interacción con membranas lipídicas), sino para poder ampliar la información obtenida al estudio de otras proteínas.

Autor: IBARRA MOLERO BEATRIZ .
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA Y TRATAMIENTO DE LOS FENOMENOS QUIMICOS.

Resumen: En este trabajo se aborda el problema metodológico de la determinación experimental de valores del cambio de energía de Gibbs de desnaturalización, a partir de perfiles de desplegamiento inducido por codisolventes, así como la interpretación molecular de estos valores. Para ello, caracterizamos el desplegamiento inducido por guanidina de lisozima de clara de huevo en el rango de temperatura de 30-75 grados C, mediante diferentes procedimientos experimentales: medidas de fluorescencia de muestras en equilibrio, ensayos de desplegamiento, medidas cinéticas y calorimetría diferencial de barrido. El análisis de los diferentes perfiles de desplegamiento mediante el método de extrapolación lineal (LEM) conduce a valores del cambio de energía de Gibbs en disolución acuosa unos 15 kJ/mol menores a los obtenidos por calorimetría diferencial de barrido. Esta discrepancia nos llevó a proponer un nuevo método de extrapolación para la determinación de energías de Gibbs de desplegamiento en ausencia de desnaturalizante, a partir de datos de desnaturalización por disolvente (procedimiento de extrapolación a G constante). Por otra parte, hemos sugerido una interpretación plausible de las desviaciones de la linealidad en el perfil de cambio de energía de Gibbs en disolución acuosa versus concentración de desnaturalizante en términos de las contribuciones debidas a interacciones electrostáticas a la estabilidad de la proteína. Para explorar esta hipótesis hemos estudiado el desplegamiento de ubiquitina (bovina y de levadura) inducido por guanidina en función del pH. Nuestra hipótesis acerca de la estimación de la contribución debida a las interacciones entre cargas se ve confirmada con los cálculos teóricos realizados con el programa TITRA. En la última parte del trabajo se hace un estudio de una de las suposiciones extratermodinámicas que generalmente se utilizan en el análisis de datos de desnaturalización con disolventes: el modelo de desplegamiento de dos estados. Para ello hemos caracterizado el desplegamiento inducido por urea de lisozima en las mismas condiciones dadas por Chen, L. Hodgson, K. O. y Doniach, S. (1996) J. Mol. Biol. 261, 658-671, trabajo en el que se sugiere la presencia de un estado intermedio de equilibrio significativamente poblado.

Autor: LUQUE FERNANDEZ IRENE.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA Y TRATAMIENTO DE LOS FENOMENOS QUIMICOS..

Resumen: Esta tesis se centra en la aplicación de metodologías de cálculo de magnitudes termodinámicas a partir de consideraciones estructurales al desarrollo de estrategias racionales de diseño molecular de ligandos peptídicos. Con objeto de comprobar que la metodología de cálculo es suficientemente sensible para ello se ha aplicado previamente al desarrollo de una escala termodinámico-estructural de propensión helicoidal que se encuentra en excelente concordancia con otras escalas existentes en la literatura. Estos cálculos nos han permitido asimismo llevar a cabo un análisis detallado de los factores determinantes de las diferencias en propensión helicoidal entre los distintos aminoácidos. La metodología de diseño se ha aplicado al desarrollo de inhibidores peptídicos para la proteasa aspártica Endothiapepsina, habiendo sido posible obtener los inhibidores que presentan la afinidad de unión tanto por parte de los restos de la enzima como del inhibidor. Por último, se ha aplicado la metodología desarrollada al análisis de las bases moleculares de la resistencia a fármacos de la proteasa del virus V.I.H. de tipo 1. Para ello ha sido necesario llevar a cabo el análisis termodinámico estructural del proceso de unión de inhibidores no peptídicos, peptídicos y sustratos y comparar sus correspondientes características termodinámicas. Con respecto a los sustratos, ha sido necesario llevar a cabo un proceso previo de modelado de la estructura tridimensional de sus complejos con la enzima. Ha sido posible identificar ciertos rasgos diferenciales en la energética de unión de los distintos tipos de ligandos por lo que se ha podido proponer una hipótesis plausible del origen molecular de la resistencia a fármacos.

Autor: OULAD HAMMOU M'HAMMAD HASSAN.
Año: 1997.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA Y TRATAMIENTO DE LOS FENOMENOS QUIMICOS.

Resumen: En este trabajo hemos explorado la posibilidad de cuantificar cambios de hidratación en el desplegamiento de proteínas a partir del estudio experimental de los efectos que presentan codisolventes sobre la estabilidad de éstas. Para ello, hemos caracterizado la energética de desplegamiento de dos proteínas modelo (ribonucleasa a y lisozima) en función de la temperatura, el pH y la concentración de varios codisolventes (sacarosa, glucosa, glicerol y polietitengligol 8000) que, de acuerdo con estudios previos en la literatura, están preferencialmente excluidos de la superficie de, al menos, los estados nativos de las proteínas. También hemos incluído en nuestro estudio un agente desnaturalizante típico: la urea. A partir de la caracterización experimental de la energética de desplegamiento hemos calculado los cambios desnaturacionales en hidratación preferencial para las dos proteínas en las varias mezclas agua-codisolvente usadas. Encontramos que estos cambios desnaturacionales en hidratación preferencial son significativamente menores que varias estimaciones teóricas del cambio desnaturacional en el número de moléculas de agua presentes en la primera capa de hidratación de la proteína, incluso cuando la accesibilidad al disolvente del estado desplegado se modela a partir de fragmentos compactos escindidos de estructuras plegadas. Un análisis basado en el modelo de dos dominios del disolvente indica que los pequeños valores encontrados para el cambio desnaturacional en hidratación preferencial podrían ser el resultado de la presencia de pequeñas cantidades de codisolvente en el dominio local que "rodea" a la proteína. Igualmente, el modelo de dos dominios sugiere que pequeñas diferencias en las cantidades de codisolvente presentes en el dominio local pueden determinar si una cierta sustancia es un estabilizador de proteínas o un agente desnaturalizante.

Autor: RENGEL LARREA DAVID.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR .

Resumen: Los carotenoides son los pigmentos naturales mas ampliamente distribuidos entre los seres vivos. Al margen de funciones sobradamente conocidas, en los últimos años se han descrito para los carotenoides funciones preventivas en enfermedades degenerativas tan graves como las aterosclerosis o el cáncer. Además, cada día son más utilizados en la industria como colorantes y como conservantes. La trucha O. mykiss requiere suplementación con cetocarotenoides de síntesis en la piscifactoría para que el animal obtenga la coloración idónea para su comercialización. Hemos observado que esta coloración no depende de la capacidad de las lipoproteínas para unir cetocarotenoides. Por otra parte hemos caracterizado la ovoverdina, un carotenoproteína de H. gammarus. Posee 4 subunidades y 2 poblaciones de pesos moleculares diferentes, así como grandes de astaxantina como grupo prostético. Los cetocarotenoides unidos a las lipoproteínas de suero humano presentan poder antioxidante por la disminución de la velocidad en la formación de peróxidos, mientras que unidos a liposomas unilamelares grandes provocan el alargamiento de la fase de latencia.

Autor: RUIZ ARGUELLO M. BEGOÑA.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: Se ha estudiado de forma comparativa el efecto que ejercen la fosfolipasa C y la esfingomielinas sobre membranas modelo de composición definida. Los aspectos que se han tenido en consideración son principalmente: (1) la actividad enzimática y su modulación por el tipo y organización del sustrato y (2) la función que ambos enzimas exhiben en relación con procesos de fusión. Respecto al primer punto, se han establecido algunos factores que pueden influir sobre la cinética interfacial. En cuanto al segundo, se ha demostrado que la acción concertada de ambos enzimas produce fusión en condiciones en las que, actuando por separado, no la logran; esto se relaciona con los efectos que los productos liposolubles de la reacción (diacilglicerol y ceramida) provocan en la membrana. Todo ello se discute dentro del contexto de la interacción de dichas proteínas con la bicapa.

Autor: VILLAVERDE GARCIA JOAQUIN.
Año: 1997.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECUAR.

Resumen: La ATP sintetasa (H+-ATPasa tipo F0F1) sintetiza ATP a partir de fosfato i ADP, utilizando como fuente de energía un gradiente electroquímico de protones. Este enzima posee 6 sitios de unión de nucleótidos (ATP o ADP) y para su funcionamiento es necesaria la presencia de Mg2+. En el presente trabajo se ha analizado el papel de los nucleótidos en la estabilidad térmica de dos ATP sintetasas: el complejo F1 aislado de mitocondrias (MF1), y el enzima completo de la bacteria termófila PS3 (TF0F1). Las técnicas utilizadas han sido calorimetría diferencial, espectroscopia infrarroja y cinética de intercambio hidrógeno-deuterio. La desnaturalización térmica de las ATP sintetasas es irreversible; se han ajustado modelos cinéticos que explican las medidas calorimétricas y de inactivación térmica. En lo relativo al efecto de los nucleótidos, su unión a los sitios específicos del enzima estabiliza tanto el complejo MF1 como el enzima completo TF0F1, causando un aumento en la temperatura de desnaturalización, así como una mayor compactación de su estructura. En ambos casos la presencia de Mg2+ disminuye el efecto estabilizador causado por los nucleótidos. Los cambios en estabilidad térmica en función de la unión de nucleótidos y de Mg2+ se han correlacionado con las diferentes conformaciones del enzima, correspondientes a diferentes estados funcionales del mismo.

Autor: BASAÑEZ ASUA GORKA.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA AGREGACION VESICULAR AUMENTA LA ACTIVIDAD DE LA FOSFOLIPASA C, PROBABLEMENTE DEBIDO A QUE PROMUEVE LA FORMACION DE DEFECTOS O IRREGULARIDADES EN LA MEMBRANA.EL DIACILGLICEROL, UN LIPIDO QUE CONFIERE CURVATURA NEGATIVA A LA MEMBRANA, FAVORECE LAS TRANSICIONES DE FASE LAMELAR-NO LAMELAR, MIENTRAS QUE LA LISOFOSFATIDILCOLINA Y LOS GANGLIOSIDOS, LIPIDOS QUE CONFIEREN CURVATURA POSITIVA A LA MEMBRANA, ESTABILIZAN LA FASE LAMELAR.LA FORMACION DE FASES CUBICAS ESTA RELACIONADA CON LA FUSION DE LIPOSOMAS INDUCIDA POR FOSFOLIPASA C: LOS LIPIDOS QUE FACILITAN ESTA TRANSICION, POR EJEMPLO, EL DIACILGLICEROL, POTENCIAN LA FUSION, MIENTRAS QUE LOS LIPIDOS QUE DIFICULTAN ESTA TRANSICION (LISOFOSFATIDILCOLINA, GANGLIOSIDOS) INHIBEN LA FUSION.

Autor: MARTINEZ DE LA FUENTE MARTINEZ ILDEFONSO.
Año: 1996.
Universidad: PAIS VASCO .
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOLOGIA CELULAR Y CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: CONCEPTOS Y METODOS DE BIOLOGIA CELULAR CON IMPLICACIONES MEDICAS .

Resumen: EL CONJUNTO DE TRABAJOS QUE CONFORMAN LA TESIS TIENE POR OBJETO EL ESTUDIO DE ALGUNOS PROCESOS DINAMICOS DEL METABOLISMO CELULAR Y SU RELACION CON DETERMINADOS COMPORTAMIENTOS CITOLOGICOS BASICOS. POR MEDIO DE UN MODELO FORMADO POR TRES ECUACIONES DIFERENCIALES CON RETARDO SE DESCRIBEN LOS COMPORTAMIENTOS GLUCOLITICOS DE CELULAS DE LEVADURA. EN EL SISTEMA EMERGEN LAS TRES PRINCIPALES RUTAS QUE CONDUCEN A LAS OSCILACIONES CAOTICAS (FEIGENBAUM, INTERMITENTE Y CUASIPERIODICA). ES LA PRIMERA VEZ QUE SE OBSERVAN EN UN MISMO MODELO BIOLOGICO LOS TRES PRINCIPALES ESCENARIOS AL CAOS. MEDIANTE LA CONSTRUCCION DE UN MODELO DINAMICO DISCRETO (REDES METABOLICAS) QUE PERMITE, POR PRIMERA VEZ, INTEGRAR AMPLIOS CONJUNTOS ENCIMATICOS ESTRUCTURADOS DISIPATIVAMENTE, SE HAN ESTUDIADO UN GRAN NUMERO DE PROPIEDADES EMERGENTES RELACIONADAS CON LOS PROCESOS METABOLICOS CELULARES MAS BASICOS. ASIMISMO, SE HA INVESTIGADO LA EXISTENCIA DE COMPORTAMIENTOS PERSISTENTES A LARGO PLAZO DURANTE LA ACTIVIDAD DE DETERMINADOS SUBSISTEMAS METABOLICOS.

Autor: MORENO TORRES ANGEL.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: TOMANDO COMO OBJETO DE ESTUDIO EL CANCER COLORECTAL Y MEDIANTE ESPECTROSCOPIA DE RMN DE PROTON, SE HAN REALIZADO DOS GRUPOS DE ESTUDIOS: BIOPSIAS DE TUMORES HUMANOS Y TUMORES DE CELULAS HT29 IMPLANTADOS EN EL BAZO DE RATONES "NUDE MICE". CON LAS BIOPSIAS DE TUMORES HUMANOS SE HA EVALUADO LA PRESENCIA DE RESONANCIAS SUSCEPTIBLES DE SER UTILIZADAS COMO MARCADORES TUMORALES. CONCRETAMENTE SE HAN OBSERVADO NIVELES SIGNIFICATIVAMENTE MAS ELEVADOS DE TAURINA EN TUMORES Y DE MIO- INOSITOL Y POLIETILENGLICOL-4000 EN LA MUCOSA SANA QUE SON DETECTABLES EN LOS ESPECTROS DE LOS TEJIDOS INTACTOS Y QUE PRESENTAN UNA ELEVADA CAPACIDAD PARA DIFERENCIAR LOS TUMORES DE LA MUCOSA SANA. EN EL CASO DE LOS TUMORES DE CELULAS HT29 SE HA EVALUADO LA CAPACIDAD DE ESTE MODELO PARA REPRODUCIR LAS CARACTERISTICAS OBSERVADAS EN LOS TUMORES HUMANOS Y SU POSIBLE UTILIZACION EN ESTUDIOS POR ESPECTROSCOPIA DE RMN DE PROTON. LOS RESULTADOS OBTENIDOS HAN CARACTERIZADO ESTE MODELO COMO UN BUEN CANDIDATO DEBIDO A LA EXISTENCIA DE PATRONES ESPECTRALES DIFERENTES ENTRE LOS TEJIDOS TUMORALES (PRIMARIOS Y METASTASIS HEPATICAS) Y LOS TEJIDOS DEL HUESPED (BAZO E HIGADO).

Autor: DAURA RIBERA XAVIER.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA I BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOTECNOLOGIA.

Resumen: SE HAN UTILIZADO METODOS DE SIMULACION DE DINAMICA MOLECULAR PARA EL ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA Y LA DINAMICA EN DISOLUCION EN AGUA DEL INHIBIDOR PROTEICO DE CARBOXIPEPTIDASAS PCI. SE HAN ESTUDIADO TAMBIEN LAS TERMODINAMICAS RELATIVAS DE ENLACE A LA CARBOXIPEPTIDASA A (CPA) DEL PCI NATIVO Y DEL MUTANTE DEL PCI VA138A1A. FINALMENTE, TAMBIEN SE HAN ESTUDIADO ASPECTOS METODOLOGICOS DE LAS SIMULACIONES DE DINAMICA MOLECULAR, INCLUIENDO EL ANALISIS DEL CAMPO DE FUERZAS UTILIZADO Y LA EVALUACION DE DIFERENTES FACTORES QUE PUEDEN AFECTAR LOS RESULTADOS DE CALCULOS COMPUTACIONALES DE VARIACIONES DE ENERGIA LIBRE PARA MUTACIONES DE GRUPOS QUIMICOS DE LA PROTEINA.

Autor: FERRER PLA M. LUISA.
Año: 1995.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA-FISICA APLICADA PROGRAMA DE DOCTORADO: ESTRUCTURA MOLECULAR Y ESPECTROSCOPIA .

Resumen: UTILIZANDO LA DESPOLARIZACION DE FOSFORESCENCIA INDUCIDA POR LASER SE INVESTIGAN NUEVOS METODOS DE ESTUDIO DE FENOMENOS DINAMICOS DE MACROMOLECULAS DE INTERES BIOLOGICO, QUE SE EXTIENDEN EN LA ZONA TEMPORAL DE MICROSEGUNDOS. SE HAN INVESTIGADO TAMBIEN LAS PROPIEDADES FOTOFISICAS DEL COLORANTE ERITROSINA, PARA SU APLICACION A DICHO TIPO DE ESTUDIOS. FINALMENTE, SE PRESENTA UN DETALLADO ESTUDIO DE LOS PROCESOS HIDRODINAMICOSA DE LA ALBUMANA DE SUERO LLEVADOS A CABO EN LA ZONA DEL MICROSEGUNDO MEDIANTE EL COLORANTE FOSFORECENTE MENCIONADO Y UTILIZANDO UN ESPECTROMETRO LASER DE FOSFORESCENCIA POLARIZADA, DISEÑADO Y CONSTRUIDO A LO LARGO DE ESTE TRABAJO.

Autor: MORO PEREZ FERNANDO.
Año: 1995.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA CONJUGACION ES UN PROCESO GENERAL DE TRANSFERENCIA GENETICA ENTRE BACTERIAS QUE REQUIERE UN CONTACTO FISICO ENTRE LAS CELULAS. LA MAYORIA DE LOS SISTEMAS DE CONJUGACION EN BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS SE ENCUENTRAN CODIFICADOS EN PLASMIDOS Y SE CARACTERIZAN POR POSEER UN PILUS CONJUGATIVO. R388 ES UN PLASMIDO CONJUGATIVO AISLADO ORIGINALMENTE DE E. COLI. LA REGION DONDE SE CODIFICAN LOS GENES NECESARIOS PARA LA TRANSFERENCIA CONJUGATIVA DE R388 OCUPA 14,9 KB, Y SE DIVIDE EN DOS ZONAS: UNA NECESARIA PARA LA FORMACION DEL PILUS Y OTRA QUE CODIFICA LAS PROTEINAS QUE PREPARAN EL DNA PARA SU TRANSFERENCIA, LO QUE SE CONOCE COMO MOVILIZACION. TRWB ES UNA PROTEINA DE R388 NECESARIA PARA LA MOVILIZACION DEL PLASMIDO. TAMBIEN ES IMPRESCINDIBLE PARA LA TRANSFERENCIA DE PLASMIDOS MOVILIZABLES COMO RSF1010 Y COLEI. TRWB JUNTO CON OTRAS PROTEINAS DE OTROS SISTEMAS (COMO TRAD DE F, TRAG DE RP4 Y VIRD4 DE PLASMIDOS TI) FORMAN UNA FAMILIA DE PROTEINAS ESENCIALES PARA LA CONJUGACION. EL PAPEL DE ESTAS PROTEINAS ES AUN DESCONOCIDO PERO SE HA PROPUESTO QUE ACTUEN COMO EL APARATO MOLECULAR QUE ACOPLA EL RELAXOSOMA Y EL COMPLEJO DE TRANSPORTE DEL DNA. EN LA PRESENTE TESIS SE HA PURIFICADO TRWB Y SE HA DEMOSTRADO QUE ES UNA PROTEINA INTEGRAL DE MEMBRANA LOCALIZADA EN LA MEMBRANA INTERNA DE LA CELULA. LA PURIFICACION DE TRWB SE HA REALIZADO EN CUATRO PASOS: SOLUBILIZACION CON CHAPS 18 MM, CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD A CIBACRON BLUE, TAMIZADO MOLECULAR Y CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD A HEPARINA. SE HA DEMOSTRADO QUE TRWB ES CAPAZ DE UNIR E HIDROLIZAR ATP. PROBABLEMENTE TRWB DESEMPEÑE UN PAPEL ACTIVO EN LA CONJUGACION APORTANDO LA ENERGIA NECESARIA PARA LA TRANSFERENCIA DEL DNA O ACTUANDO COMO SEÑAL DE LA FORMACION DEL PAR CONJUGATIVO.

Autor: AZUAGA FORTES ANA ISABEL.
Año: 1994.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: EXPERIMENTACION Y METODOLOGIA EN SISTEMAS BIOLOGICOS MOLECULARES.

Resumen: EN LA PRESENTE MEMORIA HEMOS REALIZADO EL ESTUDIO MEDIANTE CALORIMETRIA DIFERENCIAL DE BARRIDO (DSC) DE UNA PROTEINA Y TRES DOMINIOS SUBMOLECULARES AISLADOS, TODOS ELLOS DE BAJO PESO MOLECULAR QUE DESPLIEGAN REVERSIBLEMENTE CON UN COMPORTAMIENTO, SIN EMBARGO, CLARAMENTE DIFERENCIADO.EL DESPLEGAMIENTO TERMICO DE LA PROTEINA -LACTOGLOBULINA B SE HA ESTUDIADO EN LA REGION DE PH ACIDO Y BAJA FUERZA IONICA. EL PROCESO ES PARCIALMENTE REVERSIBLE Y SU ANALISIS PUEDE EN PRINCIPIO REALIZARSE SEGUN EL MODELO DE EQUILIBRIO DE DOS ESTADOS. SIN EMBARGO, EXISTE UN PROCESO EXOTERMICO ADICIONAL AL DESPLEGAMIENTO TERMICO. ESTUDIOS REALIZADOS CON ESTA PROTEINA MEDIANTE DSC Y DICROISMO CIRCULAR, EN PRESENCIA DE CLORURO DE GUANIDINA, HA HECHO POSIBLE LA OBSERVACION EXPERIMENTAL DE LA DENOMINADA DESNATURALIZACION POR "FRIO", SOLO COMPROBADA HASTA LA FECHA PARA UN NUMERO MUY REDUCIDO DE PROTEINAS. EL SEGUNDO SISTEMA ESTUDIADO ES EL FRAGMENTO DE TERMOLISINA 205-316. EL PROCESO DE DESPLEGAMIENTO ES REVERSIBLE, Y EXISTE UN EFECTO DE CONCENTRACION DE MUESTRA SOBRE LAS TRAZAS CALORIMETRICAS, QUE JUNTO CON LA ASIMETRIA QUE PRESENTAN LAS MISMAS, HACE QUE EL PROCESO PUEDA DESCRIBIRSE EN BASE A UN EQUILIBRIO DE DISOCIACION DEL DINERO Y POSTERIOR DESPLEGAMIENTO DEL MONOMERO. SE HAN OBTENIDO LOS PARAMETROS TERMODINAMICOS PARA EL PROCESO DE DISOCIACION Y EL DESPLEGAMIENTO DEL FRAGMENTO; ESTOS ULTIMOS INDICAN UNA ESTRUCTURA POCO COMPACTA PARA EL MONOMERO, Y ESPECIALMENTE, PARA EL DINERO DEL FRAGMENTO. POR ULTIMO SE HA LLEVADO A CABO EL ESTUDIO DEL DESPLEGAMIENTO TERMICO EN FUNCION DEL PH PARA LOS DOMINIOS SH3 FYN Y ABL. EL DESPLEGAMIENTO EN TODAS LAS CONDICIONES SIGUE EL MODELO DE EQUILIBRIO DE DOS ESTADOS, CON UNOS PARAMETROS TERMODINAMICOS SIMILARES A LOS DE OTROS DOMINIOS SH3 ESTUDIADOS Y A LOS DE OTRAS PROTEINAS GLOBULARES. SE HA REALIZADO TAMBIEN EL ESTUDIO MEDIANTE DSC DE LA INTERACCION DEL DOMINIO, FYN SH3 CON DOS PEPTIDOS SINTETICOS 3BP1 Y 3BP1-M4Y, RICOS EN PROLINAS. EL DESPLEGAMIENTO TERMICO SIGUE EL MODELO DE EQUILIBRIO DE DOS ESTADOS. LAS CONSTANTES DE DISOCIACION OBTENIDAS, INDICAN UNA DISMINUCION DE LA AFINIDAD AL REEMPLAZAR LA MET-4 POR TYR, DEBIDO AL IMPEDIMENTO EN LA FORMACION DEL PUENTE DE HIDROGENO ENTRE LA PRO-5 DEL PEPTIDO Y EL TRP-41 DEL DOMINIO.

Autor: MERINO FERNANDEZ JAIME M..
Año: 1994.
Universidad: EXTREMADURA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA FISICA (BIOFISICA MOLECULAR).

Resumen: EN ESTA TESIS SE ABORDA UN ESTUDIO ESTRUCTURAL DE LA CA(2+),MG(2+)-ATPASA DEL RETICULO SARCOPLASMICO DEL MUSCULO ESQUELETICO POR CALORIMETRIA DE BARRIDO TERMICO DIFERENCIAL Y POR FLUORESCENCIA (CON DOS FLUOROFOROS COMO FITC Y NCD-4). LA COMBINACION DE ESTUDIOS CINETICOS Y ESTRUCTURALES PONEN DE MANIFIESTO LA INTERCONEXION ESTRUCTURAL ENTRE LOS CENTROS FUNCIONALES DE LA PROTEINA, COMO SON EL CENTRO CATALITICO (DE UNION DE NUCLEOTIDO) Y EL CENTRO DE TRANSPORTE DE CA(2+), LOS CUALES SE ENCUENTRAN ALEJADOS EN LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA ENZIMA. SE MUESTRA, ASIMISMO, UNA DIFERENCIA ESTRUCTURAL EN EL CENTRO CATALITICO DE LA ATPASA ENTRE LA ENZIMA A PH 6 Y A PH 7-8, DIFERENCIA QUE SE REFLEJA EN LOS CENTROS DE TRANSPORTE. LOS ESTUDIOS TERMODINAMICOS MUESTRAN LA EXISTENCIA DE INTERACCIONES PROTEINA-PROTEINA EN LA MEMBRANA NATIVA DE RETICULO SARCOPLASMICO, QUE CONTRIBUYEN A LA ESTABILIDAD TERMICA DE LA ENZIMA, SIENDO EL DIMERO DE ATPASA LA UNIDAD OLIGOMERICA BASICA DE ORGANIZACION EN LA MEMBRANA.

Autor: NUÑEZ OLEA JOSEFA.
Año: 1994.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA FISICA PROGRAMA DE DOCTORADO: METODOLOGIA Y TRATAMIENTO DE LOS FENOMENOS QUIMICOS .

Resumen: SE HAN DESARROLLADO, TANTO DESDE EL PUNTO DE VISTA TEORICO COMO EXPERIMENTAL, ESTRATEGIAS GENERALES PARA LA CARACTERIZACION DE INTERACCIONES MACROMOLECULA-LIGANDO A PARTIR DEL ESTUDIO DEL EFECTO DEL LIGANDO SOBRE LA DESNATURALIZACION TERMICA DE LA MACROMOLECULA, Y BASADAS EN EL USO DE LA CALORIMETRIA DIFERENCIAL DE BARRIDO DE ALTA SENSIBILIDAD COMO TECNICA PARA SEGUIR EL PROCESO DE DESNATURALIZACION. SE HACE ENFASIS EN LA APLICACION DE ESTAS ESTRATEGIAS A LA CARACTERIZACION DE INTERACCIONES FUERTES EN QUE INTERVIENEN MACROMOLECULAS BIOLOGICAS.