BIOQUIMICA INMUNOLOGICA

Autor: RODRÍGUEZ BORJA ENRIQUE.
Año: 2004.
Universidad: ALICANTE.
Centro de lectura: FACULTAD DE CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS UNIVERSIDAD DE ALICANTE.

Resumen: El ADN bacteriano se comporta como una molécula activadora del sistema inmune. Los últimos trabajos confirman que se trata de una activador mayor. En estudios previos hemos demostrado que en determinados pacientes cirróticos que desarrollan una ascitis en cuyo líquido no crecen bacterias mediante las técnicas de cultivo habituales pero que clínicamente se comportan como pacientes con cultivo positivo, se detecta, sin embargo, en ellos, la presencia de ADN bacteriano. Dada la condición del ADN bacteriano como molécula inmunoreguladora en estos líquidos ascíticos "estériles", debe existir una activación celular que soporte la respuesta inmune. Dicha activación debe tener lugar a través de la producción de citoquinas y dentro de éstas, la producción de citoquinas proinflamatorias tendrá un lugar preponderante.Los objetivos de nuestro trabajo fueron los siguientes: 1) Optimizar un método para la detección de citoquinas intracelulares en monocito/macrófagos de líquido ascítico mediante técnicas de Citometría de Flujo; 2) Demostrar el origen celular de las citoquinas proinflamatorias (IL-1b, IL-8, IL-6 y TNFa) en líquidos ascíticos "estériles" no neutrocíticos (LAENN); 3) Identificar si existe un estado de "preactivación" celular ex vivo en los LAENN ADN bacteriano (+) frente a LAENN ADN bacteriano (-). Consideramos que existe un estado de "preactivación" celular cuando los niveles de las distintas citoquinas intracelulares evaluadas en los cultivos no estimulados artificialmente (con LPS) son significativamente superiores a aquellos evaluados en las muestras del grupo control; 4) Detectar el grado de reserva funcional celular in vitro en los LAENN. Consideramos que existe una reserva funcional celular, tanto de síntesis como de secreción, cuando los niveles de las distintas citoquinas intracelulares evaluadas tras la adición al cultivo de LPS son superiores a aquellos evaluados en los cultivos no estimulados artificialmente, y a la inversa, consideramos que no existe reserva funcional cuando los niveles de citoquinas intracelulares en cultivos con LPS son similares a los obtenidos sin LPS.Las conclusiones de nuestro estudio fueron las siguientes: 1) A pesar de que existen numerosos trabajos que miden citoquinas intracelulares, la comparación de resultados entre unos y otros es difícil dada la complejidad del método y el gran número de variables que inciden en los resultados finales; 2) De acuerdo con la capacidad de producción de citoquinas observada en nuestros resultados, las células que constituyen la primera línea de defensa frente a la colonización bacteriana del líquido ascítico parecen ser las células de estirpe monocito/macrófago; 3) El cultivo de las células del líquido ascítico es el método de elección para cuantificar tanto la "preactivación" del sistema inmune como la reserva funcional del mismo a través de la síntesis de citoquinas; 4) La "preactivación" celular que se detecta en los líquidos ascíticos "estériles" no neutrocíticos (LAENN) ADN bacteriano positivos indica que, a pesar de que no se detecte infección bacteriana por métodos clásicos de cultivo, existen procesos inflamatorios bien aparentes similares a los casos en los que si se detecta la infección; 5) El estado de "preactivación" celular que acontece in vivo en los pacientes con LAENN ADN bacteriano positivo parece ser clínicamente relevante dado que produce un gasto importante en la reserva funcional celular cuando éstas se estimulan con moléculas activadoras tan potentes como el LPS.

Autor: GARCIA LOPEZ Mª ANGELES.
Año: 2004.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las quimioquinas y sus receptores son mediadores multifuncionales, que juegan un papel fundamental en el reclutamiento leucocitario a los tejidos inflamados. En este trabajo hemos estudiado la función del receptor CXCR3 y de sus correspondientes quimioquinas, IP-10/CXCL10 y Mig/CXCL9, tanto en condiciones fisiológicas como en procesos inflamatorios. El estudio inmunohistoquímico mostró que la expresión de CXCR3 no estaba limitada a linfocitos como se creía, sino que también era expresado por determinadas células dendríticas (CD) (CD11c+) y determinadas células endoteliales (CE) en tejidos sanos. Utilizando como modelo de enfermedad autoinmune, las enfermedades tiroideas autoinmunes, analizamos las células epiteliales del tiroides y vimos que eran capaces de producir las quimioquinas IP-10/CXCL10 y Mig/CXCL9, ligandos de CXCR3, tanto in vivo, como in vitro tras ser estimulados con citoquinas proinflamatorias, fundamentalmente IFN- . Asimismo los tirocitos producían otras quimioquinas como RANTES/CCL5 o MCP-1/CCL2, que colaboran probablemente con los ligandos de CXCR3 en el reclutamiento de linfocitos al lugar de inflamación. Se observó también un incremento en la expresión de los receptores CXCR3, CCR5 y CCR2 en los linfocitos intratiroideos frente a linfocitos autólogos de sangre periférica. Asimismo se encontró expresión del receptor CXCR3 en las CD y CE en las zonas cercanas al infiltrado. Nuestros datos muestran un importante papel del receptor de quimioquinas CXCR3 y sus ligandos IP-10/CXCL10 y Mig/CXCL9 en el proceso inflamatorio de las enfermedades tiroideas autoinmunes y que podrían utilizarse como nueva diana en el tratamiento de estas enfermedades.

Autor: ÁLVAREZ MAQUEDA MOISÉS .
Año: 2004.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: FACULTAD DE MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: 1. LA HOMOCISTEÍNA INDUCE LA LIBERACIÓN DE ANIÓN SUPERÓXIDO Y EL ENSAMBLAJE DE LA NADPH OXIDASA EN NEUTRÓFILOS HUMANOS. EFECTOS SOBRE LA ACTIVACIÓN DE MAPKs Y LA MIGRACIÓN DE NEUTRÓFILOS. 2. LA 15-DEOXI-DELTA-12,14-PROSTAGLANDINA J2 INDUCE LA EXPRESIÓN GENÉTICA DE LA HEMO OXIGENASA-1 POR MECANISMOS DEPENDIENTES DE LOS INTERMEDIARIOS REACTIVOS DE OXÍGENO EN LINFOCITOS HUMANOS

Autor: LOJO RODRÍGUEZ JUAN.
Año: 2003.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTADE DE BIOLOXÍA.

Resumen: Las proteínas transmembrana CD26 y CD45 han sido relacionadas con diversos eventos de señalización mediados por el receptor de células T (TCR), lo que entronca de un modo directo con los procesos de activación y regulación del Sistema Inmune. De hecho, la actividad de CD45 es crucial parala funcionalidad de las cascadas de transducción generadas por el TCR tras la presentación antigénica, y CD26 parece actuar como un potente coadyuvante de éstas. Además, la ausencia o alteración de las vías de señalización a través de CD45 o CD26 provoca importantes disfunciones en el Sistema Inmune. Por otro lado, los comportamientos especializados de membrana denominados rafts o Membranas Resistentes a Detergentes (DRMs) ejercen un papel crucial en la organización y acoplamiento de los numerosos componentes implicados en las cascadas de transducción de señales. La interacción entre CD26 y CD45, así como su presencia o ausencia en rafts, puede, por lo tanto, ejercer un importante efecto regulador sobre las señales de activación dependientes de TCR. En la presente tesis se pretende describir cómo IL-12, un factor capaz de regular la respuesta celular desencadenada vía TCR y, en consecuencia, la actividad del Sistema Inmune, puede realizar su función a través de moléculas como CD26 y CD45. Dicha citoquina es capaz de favorecer un tipo de respuesta en la que predominan mecanismos celulares y en este estudio se pone de manifiesto su capacidad para generar cambios en la distribución de CD26 en los distintos compartimentos de membrana. También se ha evaluado el posicionamiento en la superficie celular de moléculas de CD45, más concretamente las isoformas de menor peso molecular (CD45R0), que se encuentran interactuando con CD26 en los diferentes dominios de membranas. Se ha demostrado que, de un modo directo o indirecto, CD26 está claramente implicado en la redistribución de este CD45Ro hacia fuera de los microdominios raft en un proceso regulado por IL-12. Finalmente, se ha llevado a cabo un acercamiento a las posibles implicaciones funcionales y biológicas de dicha interleuqina, especialmente en relación con procesos que potencialmente pueden estar asociados con los fenómenos observados en este estudio.

Autor: COLMENERO LECHUGA M. MAR.
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: JAÉN.

Resumen: Un 20% de Pancreatitis Agudas (PA) son graves. La identificación precoz de PA graves por diferentes indicadores pronósticos es de importancia, puesto que el tratamiento precoz de éstas disminuye la mortalidad. Siguiendo los diferentes indicadores pronósticos descritos en la literatura, hemos planteado los siguientes objetivos: estudiar la epidemiología de las PA graves en nuestro medio, comparar los diferentes datos epidemiológico, así como la etiología y su influencia en la evolución de las PA, comprobar la utilidad de los sistemas analíticos de gravedad descritos por Ranson y Blamey en el diagnóstico de la PA grave, evaluar los criterios únicos de gravedad PCR, Elastasa, Alfa-1Antitripsina, Alfa-2 Macroglobulina y fibrinógeno en el diagnóstico precoz de la PA grave y la aparición de complicaciones locales y sistemimcas, valorar los hallazgos de la TAC y los criterios de Balthazar en la PA grave, comparar estos criterios analíticos con los hallazgos de imagen en la TAC con contraste y comparar la utilidad de los parámetros bioquímicos únicos, sistemas bioquímicos y técnicas de imagen en la valoración de gravedad. El estudio se ha realizado sobre 116 pacientes diagnósticados de PA, clasificados como PA leve o grave según la clasificación de Atlanta de 1982. A todos ellos se les han realizado diferentes indicadores pronósticos de gravedad (sistema de Ranson y Blamey, marcadores séricos únicos y TAC) evaluando los resultados. Hemos llegado a la conclusión que epidemiológicamente las PA graves se comportan igualmente que las leves, en cuanto edad, sexo y etiología. Las PA graves de origen etílico presentan valores inferiores en criterios bioquímicos y radiológicos de severidad que en el resto. Los sistemas pronósticos múltiples, basados en analíticas rutinarias presentan una aceptable uitlidad, con una buena correlación con la PCR. La PCR es el mejor criterio único pronóstico, con una mayor correlación con los criterios tomográficos y un punto de corte más aceptable de 150 mg/l. La Elastasa también obtiene buenos resultados aunque su uso depende de la disponibilidad del centrol. La Alfa-1 Antitripsina es útil como criterio único aunque con menor potencia que los dos anteriores. La Alfa-2Macroglobulina y fibrinógeno son criterios aceptables. La severidad de los hallazgos de la TAC se encuentran correlacionados con la PCR y la Elastasa, influyendo en la gravedad sobre todo el grado de necrosis.

Autor: LEYVA FERNANDEZ LAURA.
Año: 2003.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: El diagnóstico de las reacciones inmunológicas inducidas por fármacos es difícil, pues muchos de sus mecanismos patogénicos están aún por dilucidar. El objetivo de este trabajo ha sido estudiar la participación de los linfocitos T en la patogénesis de las reacciones alérgicas a fármacos en las que la piel es el órgano diana. En primer lugar, hemos demostrado que los cambios fenotípicos hallados en los linfocitos. T de estos pacientes no se deben a un efecto farmacológico o tóxico per se del medicamento implicado en la reacción, sino a la reacción alérgica subyacente. Nuestros resultados indican que las células T memoria/efectoras CD4+ y CD8+, con capacidad de homing cutáneo manifestado en la expresión de CLA, actividades in vivo, juegan un papel decisivo en la patogénesis de las reacciones alérgicas a fármacos, fundamentalmente en las reacciones no inmediatas, donde su expresión se correlaciona estrechamente con la gravedad del cuadro clínico. Por otra parte, hemos puesto de manifiesto que la expresión del CLA, así como el estado de activación celular T, evolucionan en paralelo con la sintomatología cutánea, tanto en la población adulta como en la infantil, ya que empiezan a elevarse tan pronto como se observan las primeras manifestaciones cutáneas y retornan hacia niveles basales tan pronto como éstas empiezan a mejorar. En las biopsias cutáneas procedentes de pacientes con reacciones alérgicas no inmediatas encontramos un infiltrado mononuclear en la unión demoepidérmica y dermis papilar formado fundamentalmente por macrófagos y células T memoria Cla+. La expresión del ligando endotelial del CLA, la E-selectina, se encuentra muy incrementada, reflejo del fenómeno inflamatorio en curso, al igual que la expresión de ICAM-1 en células endoteliales y queratinocitos, lo que indica que estas células están sometidas a un alto grado de activación. Por último, observamos que la respuesta proliferativa T al hapteno en reacciones no inmediatas a betalactámicos, está confinada exclusivamente a la subpoblación celular T memori CLA+, mientras que la memoría celular a un a ntígeno control como el toxoide tetánico, se distribuye por igual en ambas subpoblaciones memoria CLA+ y CLA-. Así pues, parecen existir mecanismos capaces de segregar especificidades antigénicas celulares T hacia ciertas subpoblaciones que expresen unos determinados receptores de homing.

Autor: CABRERA MORALES CARMEN M..
Año: 2003.
Universidad: GRANADA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: En los tumores de colon tanto el mecanismo como la frecuencia de la pérdida o defecto de expresión de moléculas HLA de clase I se conoce de forma parcial. Planteándose por tanto, el estudio de los mecanismos moleculares implicados en tales pérdidas, en concreto la pérdida total de expresión de moléculas HLA de clase I (Fenotipo I) y la pérdida selectiva del alelo HLA-B44 (Fenotipo IV). En el grupo de tumores con pérdida total de expresión de moléculas HLA de clase I (14 a 95) se encontraron dos mecanismos principales implicados: A,- La pérdida de la función génica del gen de beta2m como resutlado de una inactivación bialelica (mutaciones y/o posible LOH) en los tumores de colon que presentan inestabilidad de microsatélites (MSI) (4 de 14). B,- El defecto transcripcional de genes implicados en el procesamiento y presentación antigénica LMP7 y TAP2 en el grupo de tumores con ausencia de inestabilidad de microsatélites (MSS) (10 a 14); estando además asociado el defecto de LMP7 a una alteración del patrón nuclear de los cuerpos de PML afectándose de este modo tanto el repertorio de péptidos antigénicos generados en el citoplasma como en en núcleos celular. En el estudio de pérdida selectiva del alelo B44 que es el que presenta una mayor frecuencia de pérdida en tumores de colon, se encuentran mecanismos que implican bien la pérdida de haplotipo en un pequeño número de casos (4-13)y en la mayoría (9 de 13) el defecto post-transcripcional relacionado con el defecto de expresión de la chaperona tapasina, componente del complejo de carga péptidico de clase I.

Autor: TORRES REDONDO ANA M..
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Tacrolimus es un inmunosupresor que fue descubierto durante la búsqueda de alternativas a la ciclosporina A, cuya nefrotoxicidad suponía un grave inconveniente para su uso como inmunosupresor, pese a aumentar muy considerablemente la supervivencia de los implantes. Aunque tacrolimus y ciclosporina no están relacionados químicamente y proceden de microorganismos de especies distintas, la inmunosupresión por ambos compuestos está mediada por mecanismos muy similares y los dos poseen efectos secundarios similares, ya que tacrolimus también resultó ser nefrotóxico. Con este trabajo se ha querido profundizar en los mecanismos implicados en la toxicidad de tacrolimus sobre el túbulo proximal renal. Se ha estudiado y determinado el mecanismo por el cual tacrolimus lesiona a la mitocondria hasta llegar a desencadenar la muerte celular por apoptosis. Tacrolimus aumenta la concentración intramitocondrial de calcio, del poro de permeabilidad transitoria mitocondrial, que da lugar a un aumento del volumen y a la despolarización mitocondrial. Citocromo c sale al citosol, dando lugar al a activación de las caspasas efectoras 3 y 7 y a la fragmentación del ADN. Ambos efectos así como la capacidad global de inducción de apoptosis por tacrolimus se ven potenciados por el óxido nítrico. A pesar de la afectación mitocondrial, la célula tubular es capaz de mantener los niveles de ATP necesarios para la ejecución de la apoptosis. Esto lo consigue mediante la reducción del principal gasto energético tubular, inhibiendo a la Na,K-ATPasa basolateral. Esta inhibición no tiene lugar mediante la disminución de su expresión nimediante modificaciones postraduccionales, sino que se produce por su desinserción de la membrana basolateral e internalización. Las células que sobreviven a la agresión ejercida por tacrolimus u otros inhbidiores de calcineurina son capaces de adaptarse y soportar agresiones posteriores por un mecanismo que implica una mayor expresión de la proteína de estrés HSP70.

Autor: JIMÉNEZ PERIÁÑEZ ARTURO.
Año: 2003.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS .
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA (ISCIII).

Resumen: Crry/p65 es una glicoproteína de tipo I perteneciente a la familia de proteínas reguladoras de la activación del complemento, y la máxima responsable de la protección de las células T de ratón frente al ataque del complemento autólogo. Previamente este laboratorio mostró que Crry coestimula linfocitos T CD4+ de ratón in vitro, incrementando la proliferación y secreción de IL4 y dirigiendo el desarrollo hacia fenotipo Th2. Hemos analizado la señalización intracelular mediada a través de Crry en la línea celular Th2 SR.D10. La coestimulación por Crry incrementa la señalización disparada por el TCR incluyendo la fosforilación de p56lkc, ZAP-40, Vav-1 y AKT, así como la inducción de la polimerización de actina y la activación de la MAPK ERK dependientes de P!3K. Crry también incrementa la ruta JNK dependiente de coestimulación, pero no la de la MAPK p38. Estas señales incrementan la respuesta efectora de las células SR.D10 de fenotipo Th2 aumentando la producción de IL4 e IL5, no así la de IL10 en las condiciones empleadas. Además una fracción de Crry colocaliza con GM-1 y está presente en la fracción insoluble en detergentes no iónicos (DIGs). La unión de Crry por un anticuerpo monoclonal específico incrementa la presencia de Crry en los DIGs , y la coestimulación por Crry induce la agregación de rafts lipídicos y la polimerización de actina en los puntos de activación, incrementando la presencia de CD3e u p56lkc fosforilada en los rafts. Para analizar el papel del dominio citoplasmático de Crry, no requerido para su función reguladora de complemento, hemos generado células th2 deficientes en Crry, que han sido transfectadas con proteínas completas o deleccionadas en su dominio citoplasmático. La mutación de delección no afecta significativamente su efecto sobre la fosforilación de p86lck, ZAP-70, AKT, Vav-1 o ERK. Al igual que las formas completas, las formas truncadas de Crry inducen la agregación de rafts e incrementan la presencia deCD3e enlos DIGs, y su presencia en los rafts se ve incrementada por la interacción con al AbMo P3D2. Por el contrario, la capacidad de Crry truncado para incrementar la activación de JNK y la secreción de IL4 se ve severamente disminuida. Estos resultados sugieren la existencia de dos módulos de transducción de señal asociados a Crry, uno que amplifica la señalización disparada a través del TCR, que no es dependiente de la participación del dominio citoplásmico, y un segundo módulo que participa en la activación de JNK y la coestimulación de IL4 y que se ve afectado significativamente por la pérdida de la región intracelular de la proteína. Aunque en menor medida la molécula de Crry truncada es capaz de incrementar ligeramente la producción de IL5, sugiriendo que la región intracelular tiene menor influencia sobre la señal coestimuladora para la secrección de IL5 que para la de IL4. La doble función de Crry como proteína reguladora de complemento y como coestimuladora de células T confirma la importancia de las proteínas de complemento como uniones enstre las inmunidades innata y adquirida en diferentes subtipos de linfocitos.

Autor: OLALLA REAL EDUARDO.
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE MÁLAGA.

Resumen: Se han incluido en este estudio 122 pacientes sometidos a artrodesis lumbar instrumentada que fueron divididos en 4 grupos de acuerdo con la estrategia transfusional empleada: A, contro, sangre homóloga (TSH) B, recuperación postoperatoria (ATP) C, donación preoperatoria de sangre autóloga (DPSA) D,- DPSA+ATP. Los pacientes de grupos control (37) recibieron 1,92+-0,2 U/pte de C (24) solo dos pacientes necesitarion TSH (Efectividad 93%), mientras que fue necesaria en 7 pacientes del grupo D (32, cirugía más complicada) (Efectividad 78%). No hubo diferencias significativas en las Hb al alta, la duración de la hospitalización o la aparición de complicaciones postoperatorias. Tampoco se registraron efectos adversos durante la realización del DPSA o la ATP. Las características funcionales de la sangre ATP fueron normales y su reinfusión no aumento los tiempos de coagulación ni los niveles circulantes de mediadores inflamatorios, aunque si los de diversos enzimas (GOT, LDH, CK), la mayoría de los cuales volvieron a los valores normales al alta. En conclusión, la DPSA a corto plazo se ha mostrado como un procedimiento seguro y efectivos para reducir las TSH en esta cirugía, mientras que la asociación de ATP a la DPSA podría ser útil en aquellos casos en los que no pueden donarse el número de unidades requeridas o se espera un sangrado postoperatorio abundante.

Autor: GARCÍA GUERREO JULIÁN CARLOS.
Año: 2002.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA - UNIVERSIDAD DE MÁLAGA.

Resumen: Se analizaron 131 carcinomas primarios invasivos de mama resecados entre los años 1994 y 1998 en el Hospital Costa del Sol de Marbella. Además analizamos 30 muestras de carcinomas in situ, 45 de metástasis ganglionares, 35 de tejido no tumoral de mama, y 24 muestras correspondientes a lesiones benignas de mama. La edad de las pacientes osciló entre los 26 y 93 años, siendo la media de 56,12 años. Ninguna paciente recibió previamente terápia endocrina o citotóxica. Se realizó tinción inmunohistoquímica para los siguientes marcadores objeto de estudio en nuestra serie de casos: bcl-2, p53, bax, beta2-m, cadena pesada de los antígenos de histocompatibilidad de clase I, HLA-DR, clusterina, Ki67, receptores de estrógenos, y receptores de progesterona. Para la localización in situ de células apoptóticas utilizamos la técnica TUNEL. El seguimiento pudo ser realizado en la práctica totalidad de muestras pacientes (124). La media de seguimiento fue de 40 meses, oscilando éste entre los 12 y los 72 meses. El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete de software SPSS 8.0 en un ordenador IBM-compatible. El análisis de la asociación entre la expresión génica y los HLA-I con los factores pronóstico del carcinoma de mama, se realizó mediante la prueba de la chi cuadrado y el test de Fisher para variables categóricas, y mediante la prueba del análisis de la varianza para las variables continuas. La supervivencia libre de enfermedad se estimó mediante el método de Kaplan y Meier. En el análisis multivariante de supervivencia se utilizó la regresión de Cox para determinar el riesgo relativo. SE LLEGÓ A LAS SIGUIENTES CONCLUSIONES 1,- El acúmulo de p53 y la infraexpresión de bax, aparecen tempranamente en la carcinogénesis de la mama, y persisten a lo largo de la progresión neoplásica, influyendo por tanto en la tumorogénesis mamaria. 2,- La determinación de la expresión de las proteínas p53 y bax, no suministra información pronóstica independiente, por lo que no se puede considerar marcadores pronósticos útiles en el cáncer de mama. 3,- Nuestras observaciones han demostrado una correlación inversa significativa entre la expresión de las proteínas bcl-2 y p53, por lo que esta última podría sustituir la función antiapoptótica de bcl-2 en los carcinomas mamarios. 4,- Los antígenos HLA de clase I influyen tanto en la carcinogénesis como en la progresión del cáncer de mama. 5,- El hecho de existir una correlación directa con genes proapoptóticos como bax, y una correlación inversa con el potente gen antiapoptótico bcl-2, puede implicar la facilitación de la lisis tumoral por parte de las células que expresan los antígenos HLA de clase I.

Autor: CALDERÓN OSUNA ENRIQUE.
Año: 2002.
Universidad: SEVILLA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE SEVILLA.

Resumen: Partiendo del hecho de que la respuesta inflamatoria juega un papel fundamental en la pleurodesis con talco, y de que el mesotelio pleural sano representa un paso fundamental en la génesis de la misma y en la llegada de las células inflamatorias, principalmente polimorfonucleares neutrófilos (PMNs), al espacio pleural, nos hemos planteado si la capacidad para producir interleukina 8(IL-8) por las células mesoteliales y reclutar PMNs a la cavidad pleural, tiene algún papel en el fracaso o el éxito de la pleurodesis con talco. Así, hemos determinaod de forma seriada la concentración celular, el recuento diferencial de PMNs, la concentración de PMNs y los niveles de IL-8, tras la toma de biopsias, a las 3,-24 y 48 horas;y a los 7-15 días y 1 mes de la misma. Y los incrementos de estos valores respecto a los valores basales, previos a la realización de la toracoscopia. Se incluyeron 130 pacientes en el estudio, de los cuales 10 fueron excluidos. De los 96 pacientes en los que se realizó una pleurodesis obtuvimos un resultado óptimo en 72 pacientes que constituyeron el GRUPO ÉXITO. En 24 pacientes la pleurodesis fracasó (GRUPO FRACASO). Los 24 pacientes en los que se realizó torascoscopia sin pleurodesis constituYeron el GRUPO CONTROL. En los tres grupos encontramos como se produce un paso de PMNs al espacio pleural, tanto si realizamos una pleurodesis como si no. En el GRUPO ÉXITO el recuento diferencial de PMNs en valores absolutos fue significativamente mayor que en el GRUPO FRACASO a las 3 y 24 horas. Los incrementos respecto a los valores basales fueron significativamente mayores que en el GRUPO FRACASO a las 3 y 24 horas y respecto al GRUPO CONTROL a las 48 horas. Los niveles basales de IL-8 fueron mayores en el GRUPO FRACASO que en los otros dos grupos, siendo la diferencia estadísticamente significativamente respecto al GRUPO CONTROL. El incremento de IL-8 respecto a sus valores basales fue mayor en el GRUPO ÉXITO, alcanzando una diferencia significativa respecto al GRUPO FRACASO a las 3 y 24 horas. Encontramos una discordancia en los tres grupos después de la realización de la biopsias y a las tres horas de la pleurodesis, de manera que existió un incremento menor en la producción de IL-8 y un paso importante de PMNs al espacio pleural, lo que nos hace pensar en la posibilidad de algún agente quimioláctico diferente a la IL-8, sea responsable del reclutamiento de PMNs de forma más precoz. En los pacientes talcados la extensión de las lesiones neoplásicas en la cavidad pleural se correlacionó con los niveles de IL-8 y la concentración de PMNs basal y de forma inversa con el incremento en los niveles de IL-8 y de PMNs a las 3 horas de la pleurodesis, lo cual apoya la importancia del mesotelio sano en este sentido. Al considerar de forma aislada los grupos FRACASO Y ÉXITO, en el primero se mantuvo esta correlación inversa respecto al incremento de IL-8 a las 3 y 24 horas; y en el segundo al incremento en el recuento diferencial de PMNs a las 3 horas. Así, en aquellos pacientes en los que la pleurodesis es eficaz se produce una respuesta inflamatoria más potente, como parece apoyar el mayor incremento en IL-8 y PMNs. En aquellos pacientes en los que falla la pleurodesis existe una mayor producción de IL-8 y un mayor recuento diferencial de PMNs antes de la torascopia que en aquellos en los que es eficaz y esto se correlaciona con la extensión de las lesiones pleurales. Además la producción de IL-8 por el mesotelio sano en respuesta a la instilación de talco en estos pacientes está disminuida, lo que podría estar en relación con una menor extensión del mesotelio sano y un agotamiento funcional de la células mesotelial.

Autor: VÁZQUEZ MARTÍN M. CRISTINA.
Año: 2002.
Universidad: VIGO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS - UNIVERSIDAD DE VIGO.

Resumen: El comportamiento metástasico de las células tumorales se ve influido por la expresión anómala de algunos glicoconjugados de superficie celular entre los que se encuentran los antígenos sialilados sialil-Kewis A (sLe a), sialil-Lewis X (sLe x) y sialil-Tn (sTn), cuya sialilación es efectuada por sialiltransferasas. En nuestro trabajo hemos estudiado la actividad sialiltransferásica responsable de la síntesis de dichos antígenos, así como la expresión de los mismos con objeto de establecer la correlación entre ambos en tejido sano, transicional y tumoral de colon humano. Se obtuvo un incremento de la actividad sialiltransferásica en el tejido tumoral con respecto al sano utilizando como secuencias aceptoras N-glicoproteínas, mientras que la actividad no se alteró al emplear como estructuras aceptoras O-glicoproteínas. Empleando como secuencias aceptoras estructuras oligosacarídicas se detectó un incremento de la actividad sialiltransferásica sobre cadenas de tipo II asociado al tejido tumoral. Los estudios de correlación llevados a cabo entre la actividad sialiltransferásica valorada sobre cadenas de tipo II y estas estructuras integrantes de una N-glicoproteína diantenaria han revelado que la enzima valorda es la STA6Gal I, cuya actividad se ha visto alterada en el tejido tumoral. Los parámetros cinéticos determinados para esta enzima no explicaron las alteraciones detectadas. Por otro lado, al estudiar la ruta biosintética de los antígenos sLe a y sLe x comprobamos que en el tejido de colon la sialilación precede a la fucosilación y que esta secuencia no se ve alterada a causa del proceso neoplásico. En el CCR se ha detectado la sobreexpresión de los antígenos sLe a y sTn. Una vez establecida la relación entre dicha sobreexpresión y distintas características clínico-patológicas, comprobamos que el antígeno sLe a podría constituir un factor de pronóstico independiente, según la clasificaicón de Astler-Coller. Asimismo, detectamos la coexpresión de los antígenos sLe a y sLe x en el tejido tumoral, un hecho relevante dado que ambos determinantes parecen mediar en los procesos metastásicos. Por otra parte, los resultados obtenidos en el tejido transicional nos sugieren un estado alterado y preneoplásico, a pesar de su apariencia normal. El incremento detectado en los niveles de actividad de la enzima ST6Gal I en los tejidos tmoral y transicional y de la enzima ST6GalNAc I en tejido t ransicional, así como la sobreexpresión de los antígenos sLe a y sLe x en el tejido tumoral y sTn en el transicional confirman la importancia del conocimiento detallado de los procesos de sialilación, puesto que tanto las sialiltransferasas como sus respectivos productos sialilados son potenciales indicadores del estado y evolución del tumor y posibles dianas terapéuticas.

Autor: GALVE BOSCH ROGER.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: INSTITUTO DE INVESTIGACIONES QUÍMICA Y AMBIENTALES DE BARCELONA.

Resumen: El 2,4,6-triclorofenol se ha utilizado mayoritariamente como conservador de la madera y materiales textiles debido a sus propiedades biocidas, pero también se produce como subproducto en procesos de cloración de aguas y en incineradoras. Se considera carcinogénico en animales de experimentación, y es por este motivo y por su bioacumulación en el medio ambiente, que es necesario un seguimiento del 2,4,6-triclorofenol mediante técnicas de análisis específicas. En la presente tesis se ha desarrollado un inmunoensayo para la detección y cuantificación del tricorofenol en muestras de distinta procedencia. En la síntesis del inmunógeno para la obtención de anticuerpos específicos se han utilizado herramientas de modelización molecular y cálculos teóricos para poder racionalizar la mejor estructura del hapteno de inmunización. De los tres ensayos desarrollados, utilizando haptenos de competeción diferentes, se ha optimizado una combinación de reactivos capaz de detectar el 2,4,6-triclorofenol a concentraciones de 0,2 mg/l, límite de detección de la técnica para este compuesto. Se ha demostrado que este ensayo es bastante específico para el 2,4,6-triclorofenol, aunque también es capaz de detectar concentraciones muy bajas de diferentes análogos bromados, como el 2,4,6-tribomofenol. Con este ensayo se han podido evaluar diversas matrices, tanto de origen industrial como biológico. Los alquilbencenos sulfonados lineales (LAS) son surfactantes aniónicos, productos que constituyen el principio activo de todos los detergentes, tanto de uso doméstico como industrial. Aunque no se ha demostrado su toxicidad, a concentraciones elevadas estos pueden ayudar a la disolución y transporte de todo un conjunto de contaminantes. Por este motivo, y dada la dificultad que plantea el análisis de estos compuestos mediante técnicas convencionales, se decidió desarrollar un inmunoensayo para la detección y cuantificación de los LAS en el medio ambiente. Para la producción de anticuerpos se utilizaron técnicas de inmunización heteróloga, consistentes en la inmunización de diferentes haptenos para dirigier el reconocimiento a distintos epítopos de la misma molécula. El ensayo inmunoenzimático obtenido se optimizó mediante la utilización de un diseño de experiencias basada en técnicas de cálculo estadístico. En estos momentos, el ensayo tiene un límite de detección aproximadamente de 7 mg/l, y una especificidad muy elevada, demostrando así, tal i como se pretendía, la obtención de anticuerpos que reconocen simultáneamente los dos epítopos de la molécula. Finalmente, también se han diseñado y sintetizado haptenos de inmunización para SPCs, productos provenientes de la biodegradación de los LAS que se acumulan en el medio ambiente. Se han preparado los inmunógenos mediante distintos estudios de conjugación entre una proteína portadora y el hapteno. Estos inmunógenos están preparados para la producción de anticuerpos específicos para la detección de los SPCs.

Autor: VERDEJO GIMENO CRISTINA.
Año: 2001.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA.

Resumen: Las bases moleculares que rigen los procesos vitreoproliferativos oculares, tales como la retinopatía diabética proliferativa (RDP) y la vitreorretinopatía proliferativa (PVR) siguen sin esclaracerse. Nosotros proponemos un posible mecanismo e tiopatogémico en las vitreorretinopatías en el que participan las especies reactivas del oxígeno (EROX). Estas provocan daño celular las oxidar las proteínas, los ácidos nucleicos y al interaccionar con los lípidos de membrana, ocasionando la peroxidación lipídica )PL). El organismo dispone de sistemas de defensa antioxidate endógenos, tales como las enzimas superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y las enzimas del sistema aldehido deshidrogenasa (ALDM). Determinamos el estado oxidativo y antioxidante en la retina/coroides y nervio optico de la rata Wistar, lo que nos permitió poner a punto los protocolos para abordar la experimentación en muestras humanas. Determinamos el estado oxidativo y antioxidante en el vítreo humano, así como la concentración de ADN genómico. Nuestros resultados mostraron que el grupo de pacientes con RDP y el grupo con PVR presentaron niveles de formación de EROX significativamente superiores a los individuos del grupo de vítreos no proliferativos, confirmando la función que desempeñan las EROX en las vitreorretinopatías de origen angioproliferativo o fibroproliferativo. Las enzimas antioxidantes (SOD, CAT) presentaban una actividad significativamente menor, estado que contribuiría al predominio de las fuerzas pro-oxidantes y al daño celular.

Autor: LAGO ALVARADO JORGE.
Año: 2001.
Universidad: SANTIAGO DE COMPOSTELA.
Centro de lectura: VETERINARIA.
Centro de realización: FACULTAD DE VETERINARIA.

Resumen: El ion Na+ es un componente fundamental del liquido extracelular. Sin embargo, su papel enla fisiología de las celulas no excitables ha sido poco estudiado. Los mastocitos de rata son celulas mononucleares granuladas que derivan de precursores hematopoyeticos. Sus granulos contienen histamina y otros mediadores de la inflamación que se liberan mediante un proceso de exocitosis facilmente cuantificable, por lo que es un modelo de celulas no excitable ampliamente utilizado en estudios de señales de transducción. El papel de calcio en el proceso de secreción ha sido ampliamente estudiado, sin embargo, el papel de los iones monovalentes es menos conocido. El objetivo de este trabajo es estudiar el papel del ion Na+ en la fisiologia del mastocito de rata y su relacio con el Ca2+ y el pH celular en el proceso de secreción. Para ello se estudio el efecto de la modificación de la concentracion intra y extracelular de Na+ sobre la exocitosis y la concentracion intracelular de calcio y el pH citosólico, asi como su relación con otras señales de transducción, principalmente la fosforilacion de Ser/Thre. La respuesta secretora de los mastocitos se determinó como liberación de histamina inducida por dos estímulos cuya respuesta secretora es dependiente de calcio extracelular: el ionóforo de calcio A23187 y el inhibidor de la ATPasa de calcio citosolica thapsigargina. Los estudios de calcio citosolico y pH intracelular se realizaron mediante tecnicas de microscopia de fluorescencia con los indicadores fluorescentes Fura-2 y BCECF, respectivamente. La relación con otras señales de transduccion se estudio mediante el empleo de moduladores farmacologicos de la ruta del AMP ciclico y la proteina cinasa C. La estimulacion de los mastocitos de rata en ausencia de sodio extracelular provoca una mayor liberacion de histamina. La inhibición de la bomba Na+/k+ ATPasa produce un aumento de la concentracion intracelular de Na+ y de la secrecion. Este aumento es mayor cuando la estimulacion se efectua en medio sin sodio y esta modulado por la ruta del AMP ciclio y la proteina cinasa C. Al introducir los mastocitos en un medio sin sodio en presencia de calcio se produce un aumento de la concentracion citosólica de calcio y del pH intracelular, que en ambos casos son mayores si previamente se ha inhibido la bomba Na+/k+ ATPasa. El aumento del calcio citosólico se debe a una entrada de calcio desde el medio extracelular. El aumento del pH intracelular es independiente de calcio y probablemente independiente de los mecanismos que habitualmente regulan el pH intracelular en mastocitos: el intercambiador Na+/H+ y los intercambiadores aniónicos. Ambos aumentos están modulados por la ruta del AMP cíclico y la proteina cinasa C.Además, los efectos moduladores de estas rutas de transducción sobre liberación de histamina y alcalinización celular son paralelos. Por otra parte, la alcalanización celular puede por si misma inducir liberación de histamina. La secreción inducida por una alcalinización celular es tambien mayor si previamente se ha inhibido la bomba Na+/K+ ATPasa y esta modulada por la ruta del AMP ciclico y la proteina cinasa C. Además, los efectos moduladores de estas rutas de transducción sobre liberación de histamina y alcalinización celular son paralelos. Por otra parte, la alcalinización celular puede por si misma inducir liberacion de histamina. La secreción inducida por una alcalinizacion celular es tambien mayor si previamente se ha inhibido la bomba Na+/k+ ATPasa y esta modulada por la ruta del AMP cíclico y la proteina cinasa C. Por todo ello, las conclusiones de este trabajo son: 1-Los mastocitos de rata estan provistos de un intercambiador Na+/Ca2+ 2-El intercambiador Na+/Ca2+ potencia la respuesta secretora cuando actúa en modo reverso, este efecto es máximo al inhibir la bomba Na+/K+-ATPasa en ausencia de calcio extracelular. 3-El efecto del Na+ sobre la liberación de histamina esta funcionalmente acoplado a la actividad de las cinasas de proteina intracelulares. 4-El papel del Na+evidencia que el pH citosólico es una señal intracelular en mastocitos de rata.

Autor: ORTEGA PAINO EVA.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: SERV. INMUNOLOGÍA. HOSPITAL RAMÓN Y CAJAL .

Resumen: Durante años, en nuestro laboratorio, se ha investigado la capacidad que tienen los derivados del ácido gálico de inhibir a las PTKs purificadas de bazo humano. En el presente trabajo se ha estudiado el efecto de uno de estos derivados, el lauril galato (LG) (antioxidante E-312) sobre la inhibición de las PTKs de extractos crudos y de células en cultivo de la línea Wehi-231 (linfoma B murino). También se ha investigado el efecto de los derivados del ácido gálico sobre la proliferación de varias líneas tumorales, así como de linfocitos de sangre periférica observando que presentan selectividad por células actividades, lo que hace pensar en la utilidad de estos compuestos como agentes antitumorales. Se ha visto también la capacidad del LG de inducir aoptosis en la línea tumoral Wehi-231, estudiándose los distintos estadíos de este proceso (fragmentación del DNA en bandas oligonucleosomales, exposición de PS, eflujo del citocromo-c al citosol …). Para investigar el papel protector de la molécula de Bcl-2, tras la incubación con LG, se ha realizado un estudio comparativo entre células que sobreexpresan Bcl-2 (Wehi-231-bcl-2) y células Wehi-231-neo (vector vacío para Bcl-2) observándose un retraso de 2 horas en la aparición de los fenómenos proapoptóticos. Se ha estudiado el efecto del LG sobre la inhibición y la regresión de tumores de piel inducidos químicamente en ratones IRC. Se ha observado una relación dosis-efecto del compuesto tanto en la inhibición de la formación del tumor así como en la regresión de los mismos. Estudios anatomo-patológicos han demsotrado la aparición de células en apoptosis en aquellos tumores tratados con LG. Por último, se ha realizado una síntesis original del LG14C con el fin de estudiar el metabolismo celular del compuesto, así como demostrar que este compuesto se une principalmente a la albúmina presente en el suero de ternera fetal y la capacidad de esta proteína de ceder el compuesto a las células.

Autor: TEIJÓN LÓPEZ CÉSAR.
Año: 2001.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA DE LA U.C.M..

Resumen: El trabajo desarrollado en esta Tesis doctoral recoge los efectos de la exposición de plomo en animales de experimentación. El estudio de los efectos tóxicos que generan los metales tiene una gran importancia dentro del grupo de sustancias consideradas como perjudiciales para el organismo, existiendo una gran preocupación debido a la creciente contaminación medioambiental, además tienen una alta persistencia en el medio puesto que los metales no se degradan en la naturaleza. Dentro de los metales el plomo presenta una alta toxicidad, constituyendo la exposición crónica un problema sanitario para la sociedad, aunque es potencialmente evitable. La toxicidad de este metal es un ejemplo destacado de cómo los conocimientos obtenidos en las investigaciones pueden impactar en la salud pública. Pero todavía no se conocen bien las consecuencias que tienen exposiciones a dosis bajas del metal, así como si existe alguna dosis que pueda ser considerada como segura o tolerada por los organismos. Es importante evaluar los daños que se produzcan en ellos aunque no existan datos clínicos estadarizados para ello. Además, la respuesta del organismo a la presencia del plomo es muy variable, ya que depende del grado y período de exposición, así como de la ruta de contacto. Por ello este estudio a dosis bajas se ha realizado en función de variables como son la vía de exposición (oral, intraperitoneal) y el período de la vida en que ha existido el contacto con el tóxico (gestación, lactancia, postlactancia, …), puesto que a edades tempranas parece ser que ejerce un mayor efecto tóxico. En ambos casos se ha visto como incide el metal, no sólo sobre la evolución y el estado general, sino también sobre la función de determinados sistemas fisiológicos de los animales de experimentación. Así, se ha analizado el crecimiento, la incidencia sobre el sistema hematológico, los niveles del metal, se han determinado marcadores renales y hepáticos, se ha valorado el efecto del plomo a nivel inmunológico, analizando para ello, la lisozima plasmática y tisular, las poblaciones linfocitarias tisulares y la apoptosis y/o necrosis linfocitaria, y finalmente, también se han estudiado las alteraciones histológicas generadas por el metal. Se observa como en todos los casos se obtiene que estas dosis bajas de plomo tienen repercusiones sobre los animales, haciendo hincapié en el aspecto inmunitario. De todas formas se aprecia como, mientras que la vía de administración elegida ha influido notablemente, no ha sido tan significativo el momento de la vida en que se produjo la exposición al tóxico. Con este estudio se pretende contribuir a un mejor conocimiento de los efectos provocados por dosis subclínicas de plomo en los seres vivos, y por tanto, que puedan adoptarse medidas que lleven a la reducción de la exposición humana al tóxico, y así disminuir los riesgos para la salud.

Autor: TEBAR PALMERO LUIS.
Año: 2001.
Universidad: MIGUEL HERNANDEZ.
Centro de realización: BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR .

Resumen: La tesis doctoral que se presenta a evaluar trata de comprobar que el gen Reg IIIB se expresa en motoneuronas adultas de ratón aplicando un modelo de lesión del nervio ciático. Así mismo se analiza la expresión de este gen durante el desarrollo del sistema nervioso del ratón aplicando técnicas de hibridización in situ e immunocitoquímica. Se pretende identificar poblaciones neuronales que expresen el gen Reg IIIB durante el desarrollo. En paralelo,se realizan estudios con el producto del gen DRG 3.2, dirigidos a conocer su patrón de expresión celular y durante el desarrollo del ratón. A fin de desvelar la función de este nuevo gen, se ha diseñado un ratón transgénico que carece de expresión funcional del gen. Los resultados obtenidos indican que la proteina RegIIIB no se expresa en motorneuronas espinales de ratón en respuesta a una lesión experimental del nervio ciático. Durante el desarrollo prenatal, el ARNm de Reg IIIB se expresa en subpoblaciones de motorneuronas espinales, tanto axiales como las encargadas de inervar las extremidades. También se detecta expresión en neuronas sensoriales de los ganglios de la raíz dorsal y trigemino, así como en neuronas de los núcleos motores craneales trigeminal, facial, hipogloso y espinal accesorio que contiene neuronas motoras de distinto origen embrionario. El gen DRG 3.2, por otra parte, codifica una proteina nueva implicada en regeneración de neuronas sensoriales primarias, expresandose en el sistema nervioso central en el desarrollo, disminuyendo sus niveles conforme avanza el desarrollo. Por último se presentan datos sobre la generación del ratón transgénico carente de DRG 3.2, que se caracterizará fenotípicamente en breve.

Autor: CONCEJERO MORENO MIGUEL ÁNGEL.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS.

Resumen: Este trabajo se centra en el desarrollo y empleo de metodologías para el análisis de compuestos organoclorados con alto impacto en la toxicidad del medioambiente. En la primera parte de la Tesis se han empleado metodologías convencionales para la determinación de policlorodibenzo-p-dioxinas (PCDDs), furanos (PCDFs) y bifenilos policlorados (PCBs) en diversos tipos de muestras medioambientales y biológicas, poniendo de manifiesto la validez de estas metodologías, pero también su laboriosidad y el elevado volumen de disolventes orgánicos necesarios para llevar a cabo dichas determinaciones. La segunda parte de la Tesis Doctoral se centra en el desarrollo de una nueva metodología, la cormatografía de inmunoafinidad (IAC) en sistemas de cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC) para solventar estos inconvenientes de las metodologías convencionales. Para ello se han diseñado y desarrollado inmunógenos de PCDDs y PCBs. Con la columna construida con los anticuerpos anti-PCBs se ha puesto a punto la metodología necesaria para el análisis de PCBs, dioxinas y furanos. Se ha estudiado la relación existente entre retención en la inmunocolumna y la estructura química y distribución electrónica para estos compuestos así como para insecticidas organoclorados. Los resultados de IAC son comparables en cuanto a recuperación a los obtenidos con las metodologías convencionales. Sin embargo en IAC estos resultados se obtienen en tiempos mucho más cortos, con un considerable ahorro de disolventes orgánicos, con las consiguientes ventajas económicas y medioambientales, y siendo susceptibles de automatización. Es destacable que es la primera vez que se pone a punto una metodología de IAC en sistemas de HPLC para el análisis de estos compuestos.