BIOQUIMICA INMUNOLOGICA, 2

Autor: LEÓN PRIETO FRANCISCO.
Año: 2001.
Universidad: AUTONOMA DE MADRID.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: FACULTAD DE MEDICINA, UAM.

Resumen: La Enfermedad Celíaca (EC) es una enteropatía crónica de patogenia inmunológica, muy prevalente pero aún infradiagnosticada, lo que aumenta el riesgo de aparición de complicaciones. El presente trabajo se centra en tres áreas de la EC. En primer lugar, en el diagnóstico de cribaje y sospecha de la EC, mediante el desarrollo de una técnica de ELISA de transglutaminasa tisular (tTG) y la comparación de distintas fuentes antigénicas de tTG para ELISA, validando la utilidad de esta técnica frente a la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta convencional (determinación de anticuerpos anti-endomisio). Se demuestra, mediante la realización de Western Blot, la inespecificidad de ciertas reactividades encontradas en los ELISA, principalmente en pacientes diabéticos, y que resultaron debidas a la baja pureza del antígeno de tTG más extendido y comúnmente utilizado, el obtenido de extracto de hígado de cobaya. En segundo lugar, este trabajo incide en el diagnóstico de confirmación de la EC. Se describen las alteraciones en las subpoblaciones de linfocitos intraepiteliales intestinales (LIE) que caracterizan a las distintas fases de la EC, tanto en niños como en adultos, demostrando que su estudio, por citometría de flujo, permite el diagnóstico diferencial de la EC respecto a otras enteropatías y enfermedades digestivas, disminuyendo la necesidad de pruebas invasivas. En tercer lugar, se profundiza en la patogenia de la EC. Para ello, se caracterizan funcionalmente los LIE NK-like, que desaparecen en esta enfermedad, constatándose su capacidad citolítica (pueden considerarse NK bona fide), su reaparición en algunos pacientes tratados, y la existencia de un subtipo con CD3e citoplásmico. Finalmente, se estudia la capacidad de producción de citocinas por las subpoblaciones de LIE en la EC y en controles, observándose (por fluorocitometría y RT-PCR) un patrón tipo 1 en LIE alfa beta, LIE gamma * y LIE NK-like, si bien la frecuencia de LIE productores de IFN-gamma en la EC, in vitro, resultó menor que en controles. En formas silentes de la EC se detectaron, además, citocinas anti-inflamatorias.

Autor: LÓPEZ LÓPEZ CARLOS.
Año: 2001.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA (UB).

Resumen: Las principales funciones del sistema inmunitario son: el reconocimiento de lo propio frente a lo extraño, la eliminación de lo extraño y la reparación de los tejidos dañados. En los macrófagos, los Ags son fagocitados y degradados en péptidos lineales más pequeños que serán presentados por las moléculas de clase II del MHC (Complejo Mayor de Histocompatibilidad) y son reconocidos por las moléculas del denominado TCR (receptor de las células T). Las moléculas del MHC de clase II se expresan en un reducido número de tipos celulares y estos se pueden dividir en dos grupos principales: aquellos que expresan estas moléculas de una forma constitutiva como son los linfocitos B y las células dendríticas, y aquellas que expresan las moléculas de clase II tras la estimulación con IFN-gamma como son los macrófagos, los fibroblastos y las células tímicas epiteliales. En todos los promotores de los diferentes genes de clase II tanto en humanos como en ratón se pueden encontrar en situación cis una serie de elementos comunes: En la región proximal se encuentran 3 elementos reguladores denominados W, X e Y cuya orientación, posiciones relativas y distancia entre sí están conservadas en todos los genes de clase II, tanto en las cadenas alpha como beta, y en todas las especies examinadas. Esto también es así también para la cadena invariante aunque se encuentra codificada en otro cromosoma diferente al de los genes del MHC. En la región distal contiene los mismos elementos reguladores que la región proximal pero en sentido inverso actuando como región represora. La regulación de los genes de clase II del MHC es mayoritariamente transcripcional aunque también existe una regulación a nivel traduccional. El factor que determina la expresión específica de las moléculas de clase II es el CIITA por activador transcripcional de clase II. El CIITA es un transactivador que no interacciona directamente con el ADN pero si con los factores constitutivos, con la maquinaria general de transcripción y con factores implicados en el remodelado del ADN. La expresión del factor CIITA está regulada por el uso de diferentes regiones promotoras. Quedan por definir todas las proteínas que intervendrían en la especificidad e inducibilidad del CIITA. En nuestro grupo una de las líneas de investigación es la del estudio de la regulación de la expresión de las moléculas de clase II. Mediante el rastreo de una genoteca murina de expresión con una sonda que contenía la secuencia de la caja X del gen IA beta nuestro grupo clonó un factor denominado ACII por activador de clase II que pensamos está implicado en la regulación de los genes de clase II. El factor ACII presenta una localización nuclear y en los tipos celulares que expresan ACII, observamos el mismo patrón de cuatro formas proteícas y en ningún caso detectamos la forma proteica de 42.3 Kda que solamente la detectamos in vitro. Por lo que la forma de hACIIL.2 se corresponde con un mRNA no procesado mientras que hACII.1 sufre un procesamiento de 320 nt similar al caso murino donde se eliminan 260 nt. Se ha identificado el dominio hélice-giro-hélice de ACII como responsable de la unión al ADN. Además existen tres dominios LRR y un dominio rico en prolina que podrían mediar interacciones de tipo proteína-proteína. Mediante la utilización de diversas estrategias no hemos identificado ninguna proteína con la suficiente similitud ACII para formar parte de una misma familia de factores de transcripción y mediante la técnica de la PCR-SITE SELECTION se ha identificado el motivo ACAA como el más afín en la unión al ADN del Factor ACII.

Autor: OLMOS CENTENERA GEMMA.
Año: 2001.
Universidad: ALCALA.
Centro de lectura: QUÍMICA.
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE ALCALÁ.

Resumen: En el presente trabajo de Tesis Doctoral se han estudiado las acciones de dos sustancias antitumorales en células macrofágicas, de médula ósea y de linfoma de ratón y su modulación por interleuquina 3. El objeto del mismo ha sido diseñar estrategias que induzcan selectivamente apoptosis en las células tumorales y aumentar la resitencia de las células sanas por inhibición de su potencial apotótico mediante el empleo de un factor de crecimiento como es Interleuquina 3. Teniendo en cuenta estos aspectos se han planteado los siguientes objetivos: A,- Desarrollar un modelo de transporte y direccionalización selectivos de factores de crecimiento hacia células del sistema inmune (concretamente a macrófagos peritoneales), empleando un sistema fisiológico como son los eritrocitos. Con ello se busca hacer más eficaces los tratamientos antitumorales tanto en su acción como en la recuperación celular. B,- Profundizar en los mecanismos de muerte celular que inducen los agentes citotóxicos utilizados en la terapia antitumoral, así como la recuperación por parte de factores de crecimiento sobre células del sistema inmune (macrófagos peritoneales) y sobre dos tipos celulares dependientes de Interleuquina-3; células procedentes de médula ósea de ratón y de linfoma de ratón. Las conclusiones obtenidas en este trabajo se resumen en; I,- Los eritrocitos pueden incorporar en su interior Interleuquina-3 mediante el método de Diálisis Hipotónica y ser modificados en su membrana con el reactivo bifuncional BS3, obteniéndose un alto rendimiento celular. II,- Los macrófagos peritoneales de ratón reconocen a los eritrocitos con Interleuquina-3 encapsulada y modificados con BS3 en un porcentaje aproximado del 60%. Esta interacción puede estar favorecida e incrementada por la presencia de IL-3 en la membrana de la célula roja. III,- IL-3 ejerce un efecto directo sobre macrófagos observado en la fosforilación de proteínas. IV,- IL-3 modula la acción que ejerce Etopósido sobre macrófagos protegiendo de sus efectos apoptóticos; desciende la fragmentación de ADN y los niveles de las proteínas pro-apoptóticas p53 y Bax. V,- Etopósido e Hidroxiurea, inducen apoptosis en las células de linfoma de ratón DA1 dependientes de IL-3 que no protege a las células de la apoptosis. VI,- Etopósido e Hidroxiurea alteran el ciclo celular de las células DA1 iniciando su detención a las 8 horas de tratamiento y lo interrumpe totalmente a ls 17 horas en presencia de IL-3. VII,- Los niveles de la proteína supresora de tumores p53 de las células DA1, no sufren variación bajo la acción de estos agentes antitumorales. Los niveles de Bax aumentan con Etopósido y Bcl-2 disminuye. Esto sugiere una apoptosis regulada por la relación Bax/Bcl-2. VIII,- Hidroxiurea induce muerte en la línea celular hemopoyética dependiente de IL-3, BAF-3, sin que este factor ejerza ningún efecto protector, ante la ausencia de un descenso detectable de la proteína Bcl-X e induce el desplazamiento de la proteína Bax a la membrana y provoca su ruptura. IX,- La apoptosis inducida por ausencia de IL-3 en BAF-3 y en células de médula ósea de ratón se produce por un mecanismo dependiente de Bax que activa Caspasa-3 e independiente con Hidroxiurea.

Autor: VIDARIE CHICO LUIS JUAN.
Año: 2000.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: FAC. DE CC. QUIMICAS.

Resumen: La unión del tercer componente del Complemento (C3) a la cadena pesada del anticuerpo en los inmunocomplejos (IC) es un paso clave en el desarrollo de una respuesta inmune eficaz y la correcta eliminación del antígeno. La unión entre las dos moléculas es de carácter covalente a través de un enlace de tipo éster. El estudio de esta interacciónpor distintos gruposm indica que la unión se produce en, al menos, dos sitios: en la región Fab y en la región Fc. Se ha localizado el sitio de unión de C3 a la región Fab en un péptido de 26 aaminoácidos en el primer domino constante de la cadena pesada. Esta región contiene hasta nueve posbles sitios de anclaje de C3. En el presente trabajo, se ha caracterizado la importancia de este sitio de unión con respecto al anticuerpo entero, y se ha identificado el residuo responsable de la formación del enlace éster con C3. Para este estudio, se ha generado por ingeniería genética una serie de anticuerpos quiméricos (ratón-humano) conmutaciones sencillas y múltiples enlos posibles sitios de anclaje de C3 en la región. La estructura de éstos es similar a la de anticuerpos totalmente humanos. La capacidad de unión de C3b de estos anticuerpos se mantiene al mismo nivel que el anticuerpo parental murino, salvo aquellos que tiene la Serina 132 mutada. Las disminución en la unión de C3 a estos anticuerpos se encuentra entre un 38-57% de la capacidad global. Estudios estructurales indican que la Serina 132 es el residuo de anclaje de C3 en la región. En auge que ha adquirido el uso terapéutico de anticuerpos en el tratamiento del cáncer y distintas enfermedades autoinmunes,ha potenciado el interés por la interacción de los anticuerpos conel sistema del Complemento y el resto del sistema inmune. Los datos aportados en el presente trabajo, permiten la generción de anticuerpos con menor capacidad inflamatoria al no fijar C3 en su superficie.

Autor: FARGAS BUSQUETS ARNAU.
Año: 2000.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA .

Resumen: La revisión de la lietratura demuestra que los modelos murinos de necrosis regeneración muscular presentan carencias metodológicas, por lo cual en esta tesis presentamos un nuevo modelo basado en la inyección de glicerol intramuscular, en el que conocemos el referente anatómico y la distribución del líquido inyectado. El uso de este modelo comparando una substancia que deteriora la lamina basal (glicerol-colagenasa IV) con una substancia que preserva la almina basal (glicerol) nos permite afirmar, a través de técnicas mistoquímicas e inmunohistoquímicas, que le deterioro de la lamina basal de la fibra muscular supone un retraso en la reabsorción del edema, un retraso en la a parición de las primeras fibras regernativas y una mayor cantidad de infiltrado inflamatorio. Ademas, nos permite afirmar que la mayor extensión de la lesión, a mayor retraso regenerativo. Por otro lado, se establece una relación de equivalencia entre las imágenes anatomopatológicas obtenidas de ratones normales inyectados con glicerol intramusuclar y las imágenes anatomopatológicas de ratones distróficos (mdx) no inyectados, de tal manera que podemos correlacionar las imágenes obtenidas a las 24 horas, 2,3,4,5 y 7-28 días post-inyección de glicerol, con las imágenes evolutivas de la regeneración auscular en el ratón mdx distribuidas en 6 estadios: A, B. C. D, E y F.

Autor: FERNANDEZ MELENDEZ SALVADOR.
Año: 1999.
Universidad: MALAGA.
Centro de lectura: MEDICINA .

Resumen: Introducción: Anisakis simplex es un gusano nematodo parásito de los peces de origen marino, cuya ingestión accidental puede producir en el hombre cuadros clínicos de Anisakidosis (aguda o crónica) o Hipersensibilidad (anafilaxia, urticaria-angioedema). Objetivos: Se plantearon en este trabajo los siguientes objetivos: Establecer la prevalencia de infestación de Anisakis simplex en las especies de pescado de consumo más frecuente; establecer la presencia de sensibilización a proteínas de Anisakis simplex en una muestra de pacientes con urticaria aguada recidivante; comparación de estos resultados con un grupo control y seguimiento clínico de los pacientes sensibilizados. Mateial y Métodos: Durante un año, se recogieron muestras aleatorias de pescado de las siguientes especies: Bacaladilla (Micromesistius poutassou), Boquerón (Engraulis encrasicholus), Jurel (Trachurus trachurus), Sardina (Sardina pilchardus), Pijota (Merlucius merlucius), Rape (Lophius piscatorius), Caballa (Scomber scombrus), y Calamar (Lóligo vulgaris) y se analizó el contenido de parásitos. Por otro lado, durante el mismo período de tiempo, se estudiaron todos los pacientes con síntomas de urticaria aguda recidivante (al menos tres episodios en doce meses) que consumieran pescado de forma habitual (al menos una vez a la semana) y fueron comparados con un grupo control (pacinetes sin clínica y consumidores de pescado). En ambos grupos, se realizaron pruebas cutáneas por punción, IgE total e IgE específica (Anisakis simplex, pescado blanco, pescado azul, marisco y Dermatophagoides pteronyssinus). En los pacientes sensibilizados se realizó IgE específica a Ascaris y Echinococcus, SDS-PAGE Inmunoblotting y se les instauró una dieta exenta de pescado para ver su evolución clínica. Resultados: Fueron analizadas un total de 475 muestras de pescado, de las cuales 129 estaban parasitadas (27.2%); las tres especies más parasitadas fueron la bacaladilla (75%), rape (71%) y pijota (52%). La mayor intensidad de parasitación, correspondió a la caballa (11.3 parásitos por ejemplar parasitado). No se observaron variaciones estacionales en la intensidad media de parasitación. En el periodo de estudio fueron incluidos 76 pacientes, de los cuales 16 (21%), mostraron IgE específica a Anisakis simplex. 6 de estos pacientes (37.5%) tuvieron además IgE específica a Ascaris y Echinococcus. En el grupo control, 3 pacientes (3.9%) mostraron resultados positivos. Esta diferencia de sensibilización, resultó estadísticamente significativa (p < 0.01). El resultado del Inmunoblotting, mostró bandas fijadoras de IgE de mediano y pequeño peso molecular en el 80% de los pacientes sensibilizados. No obstante, el seguimiento clínico de los pacientes mostró que el 73.4% no respondió a la dieta exenta de pescado. Conclusiones: Se han encontrado parásitos de Anisakis simplex en el 27.2% de las muestras analizadas, siendo las tres especies más parasitadas la bacaladilla, rape y pijota; no se encontraron parásitos en boquerón y calamar. La prevalencia de sensibilización en el grupo de pacientes, ha sido del 21% frente al 3.9% en el grupo control; ambas diferenciadas han sido estadísticamente significativas. No obstante, el seguimiento clínico de los pacientes sensibilizados mostró que no respondían a la dieta el 73.4% de los mismos, por lo que para hacer un diagnóstico de hipersensibilidad a Anisakis simplex debe haber una resolución de los síntomas con la dieta de eliminación. Anisakis simplex debe considerarse un nuevo alergeno alimentario y debe probarse de forma rutinaria en todos los pacientes con clínica de urticaria-angioedema o anafilaxia que consuman pescado de forma habitual.#

Autor: HERRERA GOEURY CAROLINA.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: QUÍMICA .
Centro de realización: FACULTAD DE QUÍMICA M.B..

Autor: ESPARZA SANCHEZ JORDI.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA .
Centro de realización: FACULTAT DE MEDICINA.

Resumen: La infiltracion de los tejidos por las celulas T requiere una transmisión a traves del endotelio y de la membrana basal subyacente hacia el tejido perivascular. En este proceso, las integrinas linfocitarias juegan un papel crucial. Las integrinas se erigen como los principales receptores de los constituyentes de la matriz extracelular. Ademas, tambien participan en la adhesion intercelular y, en esta, sus contrarreceptores pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Las integrinas son capaces de trasiegar informacion en ambos sentidos a traves de la membrana. Las celulas pueden controlar el estado de afinidad de las integrinas para sus ligandos mediante el inside-out signaling. Por otra parte, la union de las integrinas a sus ligandos activa complejas cascadas de transduccion de senales, el outside-in signaling, que ejercen un profundo control sobre la biologia de las celulas. En esta tesis estudio procesos moleculares que estan relacionados con ambos tipos de senalizacion. La molecula CD50 se definió durante el IV Internacional Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens, y el analisis estructural posterior permitio identificarla como ICAM-3. Presento trabajo que indica que la señalizacion a traves de ICAM-3 aumenta la funcion integrina B1 y B2 en los linfocitos humanos, mostrandose como una molecula relevante en el inicio de la cascada de adhesion intercelular que regula la intercacion linfocito-endotelio y, posteriormente, del linfocito con los constituyentes proteicos de la membrana basal. La adhesion a las macromoleculas de matriz extracelular y su subsigiente hidrólisis son procesos coordinados por la celula T durante el proceso de migracion. Mis resultados demuestran que la interaccion con la fibronectina induce la expresion y activacion de MMP-2 y MMP-9 en lineas celulares humanas de linfocitos T. La degradacion focalizada de la matriz extracelular resultante permitiria a las celulas T progresar a traves de la membrana nasal.

Autor: RAMÍREZ ALVARADO M. MATILDE.
Año: 1999.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGÍA.
Centro de realización: FACULTAD DE BIOLOGÍA.

Resumen: La toxina del síndrome del shock tóxico (TSST-1) puede inducir la expresión del factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-alfa) en células T y monocitos a través de diferentes vías de señalización. En esta tesis se muestran experimentos en los que se han estimulado células mononucleares de sangre periférica con TSST-1 y se ha encontrado por inmunohistoquímica que las células encargadas de sintetizar TNF-alfa son los linfocitos. La expresión del TNF-alfa puede ser inhibida tanto como por wortmanina como por el LY294002, dos inhibidores de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3-K), además, el efecto inhibidor no es transcripcional porque el tratamiento de las células con wortmanina o con LY294002 no cambia los niveles del mRNA del TNF-alfa. El marcaje metabólico y porterios inmunoprecipitación del TNF-alfa intracelular mostró una disminución de la síntesis del TNF-alfa en la células tratadas con los inhibidores de PI 3K. Este resultado implica a la enzima PI 3-K en el control de la traducción del TNF-alfa. En otros experimentos se determina el efecto del suero sobre la producción del TNF-alfa, específicamente se observa que el suero aumenta la traducción del TNF-alfa en células mononucleares de sangre periférica estimuladas con TSST-1.

Autor: NACHER GARCIA VICTOR.
Año: 1998.
Universidad: BARCELONA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.

Resumen: Actualmente, el trasplante de islotes pancreáticos (Tx) representa una alternativa de futuro para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 1, pero ha tenido éxito en ratas ocasiones. El crecimiento y la masa de células beta trasplantadas podría tener un papel crucial en la evolución del injerto. Se hipotetizó que las condiciones metabólicas del receptor podrían modificar la capacidad de crecimiento y la masa beta del injerto, condicionando el pronóstico del Tx. El objetivo general fue determinar la capacidad de crecimiento y la mesa beta trasplantada bajo diferentes condiciones metabólicas. Se trasplantaron islotes isogénicos en receptores diabéticos. En un primer experimento se estudiaron los islotes trasplantados bajo condiciones de normoglicemia (NG) y en un segundo experimento bajo condiciones de hiperglicemia (HG) crónica. En NG la capacidad de replicación y la masa de las células beta estan preservadas a largo plazo, aumentando en respuesta al mayor requerimiento de masa beta y manteniendo la normoglicemia, la HG transitoria aumentó la replicación beta mientras que la HG crónica la limitó, conduciendo a una progresiva disminución de la masa inicialmente trasplantada. El restablecimiento de la NG tuvo un efecto beneficioso sobre las células beta trasplantadas, recuperando la respuesta replicativa beta a la glucosa y parcialmente la masa beta inicialmente trasplantada. En conclusión, las condiciones metabólicas del receptor serían determinantes en la capacidad de crecimiento y la masa de las células trasplantadas.

Autor: FERNANDEZ CENTENO ELENA M..
Año: 1998.
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID.
Centro de lectura: FARMACIA.
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOLOGIA FUNDAMENTAL INSTITUO DE SALUD CARLOS III.

Resumen: La activación de los linfocitos T CD4+ está determinada por las señales procedentes del complejo del receptor para antígeno (TCR/CD3) y por señales que proceden de otras moléculas de membrana. La integraciónd e estas señales va a determinar las rutas de activación, la pauta de diferenciación a seguir por la célula (hacia fenotipo Th1 o Th2) e incluso, la entrada en anergia o en apoptosis, conconsecuencias funcionale smuy importantes para el desarrollo de la respuesta inmune; por lo que su control y manipulaciónes de interés en el estudio de inmunopatologías. En la presente tésis se describe un anticuerpo monoclonal (P3D2), que tiene efecto coestimulador de la activaciónde linfocitos T CD4+ ensistemas de activación in vitro, y que reconoce específicamente la molécula de ratón reguladora de la activación del complemento, Crry/p65. El sistema del complemento es un mecanismo de defensa del organismo, que no posee el grado de especificidad de los sistemas celulares y humorales de las respuestas inmunes adaptivas. Para evitar la autolisis, el organismo cuenta conla presencia de determinadas moléculas en las membranas celulares, que regulan la activación del complmento autólogo sobre las propias células. Existen algunos datos acerca de la relación de éstas moléculas con la activación de linfocitos que sugierenuna conexión dentre la inmunidad innata y la adquirida. El anticuerpo P3D2 aumenta la proliferaciónd ependiente de anti-CD3 en linfocitos T CD4+ purificados y modifica el patrón de interleuquinas secretadas por estas células, favorenciendo la producción de IL4 sobre la de IFNy. Sin embargo, ele efcto potenciador de este ligando Crry es capaza de incrementar la producción de IL4 y de IFNy en lineas Th2 y Th1 respectivamente, estimuladas por anti-CD3. Según los resultados expuestos en este trabajo, el efecto coestimulador de Crry mediado por P3D2 se produce también en presencia de otros coestímulos, como anticuerpos anti-CD28 o ésteres de forbol. La coligación de Crry conel complejo TCR/CD3 aumenta y adelanta la fosforilacióntemprana entirosina de diferentes sustratos intracelulares y aumenta la activación de la MAP-quinasa ERK. Todos estos datos concuerdan con la asociación de Crry a la actividad quinasa p56 obsevada enlinfociots T CD4+. El epitopo reconocido por el anticuerpo monoclonal P3D2, además de estar implicado en el efecto coestimulador descrito, interfiere en la función protectora del depósito del complemento autólogo en la membrana de linfocitos T. Estos resultados sugieren por tanto, que Crr/p65 posee un papel multifuncional en célular T y que puede ser unpunto de unión entre los mecanismo de inmunidad adptativa.

Autor: RUIZ SALES MONTSERRAT.
Año: 1998.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: ESCOLA DE DOCTORAT Y FORMACIO CONTINUADA.

Resumen: El diagnostico bioquímico de las enfermedades peroxiosomales se realiza, en primera instancia, a través de los metabolitos acumulados o deficientes en dichas enfermedades: para ello se requieren diversos especímenes: plasma/suero, fibroblastos de piel cultivados y eritrocitos. El objetivo principal de esta tesis ha consistido en el estudio de dichos metabolitos en células mononucleares con el fin de utilizarlas com tipo celular alternativo. El estudio de perfil de los acidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados de cadena larga y muy larga y los plasmalógenos por cromatografia gas/liquido en dicho tipo celular nos ha permitido demostrar su utilidad en el diagnostico de las enfermedades peroxisomales, mediante un unico procedimiento analítico. Asimismo, hemos demostrado su utilidad en el seguimiento bioquímico de los pacientes con adrenoleucodistrofia ligada al cromosoma X(X-ALD) bajo tratamiento, con glicerol trioleato/glicerol trierucato(GTO/GTE). Por otro lado, en el fenotipo adrenomieloneuropático (AMN) de X-ALD, las células mononucleares han presentado una menor acumulación de 26:0, así como una menor concentración de 20:3w6 y mayor de 20:5w3 que los fenotipos cerebrales, a diferencia del suero/plasma, en los que no se han observado diferencias entre los diferentes fenotipos en el perfil de ácidos grados. Estos resultados sugieren que la composición de los ácidos grasos en dicho tipo celular podría estar ligada a la modulación del proceso inflamatorio, dada la implicación de las células mononucleares en la respuesta inflamatoria y la presencia de ésta en las formas cerebrales de la X-ALD. Además, hemos podido observar que la síntesis de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga derivados de los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga derivados de los ácidos grasos esenciales de las series w3 y w6 requiere, como pirmer caso, una elongación y posteriormente, una 8-desaturación, a diferencia de otros tejidos en los que una desaturasa 6 precede al proceso de elongación.

Autor: CARRILLO FERNANDEZ M. LUISA.
Año: 1997.
Universidad: PAIS VASCO.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: QUIMICA ORGANICA PROGRAMA DE DOCTORADO: QUIMICA ORGANICA.

Resumen: El trabajo de investigación que se recoge en la presente memoria tiene como primer objetivo la optimización de un método general de síntesis de 1,2-diariletilaminas ópticamente activas. Para la consecución del mismo se ha abordado la reacción de adición nucleófila de derivados de bencilmagnesio a iminas derivadas de aldehídos aromáticos y Beta-aminoalcoholes quirales, evaluándose en una primera fase el auxiliar quiral más adecuado en base al control estereoquímico ejercido y a la facilidad de su eliminación posterior para acceder a las aminas primarias. Como segundo objetivo se han puesto a punto diversos procedimientos para la síntesis estereocontrolada de diversos alcaloides isoquinolínicos como tetrahidroisoquinolin-4-oles, isopavinanos y 3-ariltetrahidroisoquinolinas, desde las 1,2-diariletilaminas sintetizadas. La preparación estereoselectiva de tetrahidroisoquinolinas 4-hidroxiladas se ha llevado a cabo desde los 1,2-diariletilaminoalcoholes a través de una secuencia N-metilación-oxidación de Swern-ciclación, o desde 1,2-diariletilaminas via sintones acetálicos. En ambos casos se han estudiado las condiciones mas adecuadas de ciclación. Paralelamente, se han sintetizado tanto isopavinas naturales como no naturales por doble ciclación ácido-catalizada de 1,2-diariletilaminoacetaldehído dietil acetales. Por último, se han llevado a cabo síntesis estereoselectivas de derivados 3-ariltetrahidroisoquinolínicos sustituidos o no en posición 1, poniéndose a punto, en este último caso, dos metodologías diastereodivergentes a fin de obtener selectivamente los derivados cis o trans disustiuidos. Se ha estudiado la aplicación de estos heterociclos a la síntesis de protoberberinas ópticamente activas.

Autor: LAJARIN BARQUERO FRANCISCO JAVIER.
Año: 1997.
Universidad: MURCIA.
Centro de lectura: QUIMICA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR B E INMUNOLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR E INMUNOLOGIA.

Resumen: Este trabajo describe por primera vez la adhesión e invasión "in vitro" de Salmonella typhimurium en la línea de hepatocitos TIB 73, hecho que anteriormente sólo se había constatado "in vivo", lo cual aporta un nuevo modelo experimental para el estudio de infecciones intracelulares. Estos procesos de adhesión e invasión se pueden describir por isotermas de saturación (característicos de interacciones receptor/ligando). La bacteria se replica intracelularmente, alcanzando un máximo a las 28-52 h. tras la internalización. Tambien se describe que esta línea celular posee actividad antibacteriana frente a Salmonella, que se incrementa en presencia de IFNgamma, IL-1 y LPS. Se demuestra que el anión superóxido y los peróxidos son moléculas efectoras de la capacidad antibacteriana. No se pudo demostrar la implicación de los Intermediarios Reactivos de Nitrógeno en esta actividad, ni tampoco la implicación de radicales hidroxilo. Así mismo se demuestra por primera vez que el Interferón gamma induce la producción de peróxidos en hepatocitos. La IL-1 y el LPS por sí mismos no producen un aumento en la concentración intracelular de peróxidos pero ejercen un efecto cebador sobre la acción del Interferón gamma.

Autor: MERCADER BADIA JOSEP VICENT.
Año: 1997.
Universidad: VALENCIA.
Centro de lectura: BIOLOGIA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOLOGIA MOLECULAR.

Autor: RODRIGUEZ RUBIO CORTADELLAS FEDERICO.
Año: 1997.
Universidad: NAVARRA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: UROLOGIA PROGRAMA DE DOCTORADO: PROGRAMA DE DOCTORADO DE CIRUGIA.

Resumen: Se han comparado dos ensayos de PSA Cobas Core (no equimolar) y PSA Immulite (equimolar) en 227 pacientes. Hemos comprobado que ambos métodos no son equivalentes. Las diferencias de los valores es cambiante a lo largo del rango de PSA y según la proporción de PSA libre. Se han valorado, en 93 pacientes, el efecto de distintas manipulaciones prostáticas (RTU, tacto rectal y cistoscopia) sobre ambos ensayos de PSA. Observamos que el método no equimolar era más sensible a las manipulaciones y más dependiente del PSA libre. En 89 pacientes con diagnóstico de HBP o cáncer de próstata, hemos valorado la eficacia diagnóstica de ambos métodos de PSA en forma de PSA total o de relación PSA libre/PSA total. Observamos que se obtienen muy distintas rentabilidades según el método usado.

Autor: ROMERO ROMERO ANTONIA.
Año: 1997.
Universidad: CADIZ.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: CIENCIAS MORFOLOGICAS PROGRAMA DE DOCTORADO: DIAGNOSTICO CITO-HISTOQUIMICO EN MEDICINA.

Resumen: La modulación neuroendocrina juega un importante papel en la regulación de la función de diferentes órganos y sistemas que es llevado a cabo por mediadores químicos, muchos de ellos de naturaleza peptídica. En el riñón, la inervación peptidérgica puede constituir uno de los mecanismos que regulan la función renal, y su completo conocimiento es de gran importancia tanto para la comprensión de la función renal como posteriormente el posible abordaje de determinadas patologías renales en las que estarían implicados estos péptidos reguladores. La inervación peptidérgica renal no ha sido aún totalmente esclarecida. En diferentes especies han sido descritas fibras nerviosas inmunorreactivas para CGRP, SP, VIP, NPY, somatostatina y neurotensina, aunque estos resultados son escasos y a veces contradictorios. Por ello, el objeto de nuestro trabajo es analizar el contingente peptidérgico renal y su específico patrón de distribución utilizando como modelo experimental el ratón albino (Mus musculus), aportando datos que permitan esclarecer la posible función biológica de estos mediadores en el riñón y así poder establecer las bases morfológicas para futuros estudios de la influencia de estos péptidos en el comportamiento clínico del riñón. La aplicación al tejido renal de antisueros específicos frente a péptidos reguladores y aminas biógenas mediante el método inmunocitoquímico de la estreptavidina/biotina/peroxidasa, ha demostrado la presencia en el parénquima renal de: 1. Fibras nerviosas inmunorreactivas para el CGRP y la sustancia P tanto en la pelvis renal como a nivel perivascular. 2. Fibras nerviosas perivasculares para el NPY y peritubulares para el VIP, así como células intersticiales a nivel peritubular inmunorreactivas para ambos péptidos. 3. Fibras nerviosas perivasculares inmunorreactivas para la galanina y somatostatina. 4. La presencia de serotonina en células intersticiales del tejido renal.

Autor: ESTEBAN RUIZ FRANCISCO JOSE.
Año: 1997.
Universidad: JAEN .
Centro de lectura: CIENCIAS EXPERIMENTALES.

Resumen: Se ha realizado un estudio histoquímico e inmunocitoquímico de la distribución de las fibras nerviosas que contienen la enzima óxido nítrico sintasa en el hígado de cobaya, rata, gato y mono. Las fibras nerviosas nitrérgicas penetran en los lóbulos hepáticos acompañando al conducto biliar y a los vasos sanguíneos y pervaden el parénquima de modo diferencial dependiendo de la especie estudiada. La cápsula de Glisson presenta inervación nitrérgica, aunque su detección depende de la especie estudiada. La demostración de la actividad NADPH-diaforasa no es un buen marcador de las fibras nerviosas nitrérgicas hepáticas o al menos no es tan preciso como la demostración inmunocitoquímica de la presencia de la nNOS endógena. A nivel ultraestructural, la inmunoreactividad para la nNOS se detecta en el citoplasma de las fibras nerviosas, así como asociada a orgánulos membranosos y a la membrana plasmática. Las bases anatómicas de la inervación nitrérgica hepática presentadas en este trabajo sugieren que la isoforma neuronal de la enzima constitutiva óxido nítrico sintasa está implicada en la regulación del flujo sanguíneo hepático, en la actividad secretora hepatobiliar, en las funciones metabólicas de este órgano y en las vías de nocicepción visceral.

Autor: MARTINEZ BRU CECILIA.
Año: 1996.
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA.
Centro de lectura: MEDICINA.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA CLINICA Y BIOLOGIA MOLECULAR.

Resumen: LA INFECCION POR EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH) CONDUCE A UNA PERDIDA PROGRESIVA DEL FUNCIONALISMO DEL SISTEMA INMUNITARIO DEL INDIVIDUO INFECTADO, RESULTANDO EN INFECCIONES OPORTUNISTAS Y EN EL PEOR DE LOS CASOS, EN LA MUERTE. LOS PRINCIPALES OBJETIVOS DEL ESTUDIO HAN SIDO: 1) ESTABLECER LOS VALORES DE REFERENCIA DE UN CAMBIO DE 6 MARCADORES BIOQUIMICOS DE LA INFECCION POR EL VIH (BETA-2-MICROGLOBULINA, NEOPTERINA, ADENOSINA DESAMINASA E INMUNOGLOBULINAS A, G Y M) A TRAVES DEL CALCULO DE LA VARIABILIDAD BIOLOGICA INTRAINDIVIDUAL. 2) CALCULAR, MEDIANTE LOS VALORES DE REFERENCIA DE UN CAMBIO HALLADOS, LA SENSIBILIDAD Y LA ESPECIFICIDAD DE CADA UNO DE LOS MARCADORES INDIVIDUALMENTE O DE DISTINTAS COMBINACIONES DE LOS 6 MARCADORES, EN LA PREDICCION DE LA PROGRESION DE LA INFECCION POR EL VIH, DESDE FASES ASINTOMATICAS A ESTADIOS MAS EVOLUCIONADOS Y 3) PROPONER UNA COMBINACION DE MARCADORES QUE, EN BASE A SU SENSIBILIDAD Y SUS CARACTERISTICAS ANALITICAS, PERMITA PREDECIR LA EVOLUCION DE LA INFECCION POR EL VIH. EL MARCADOR BIOQUIMICO QUE INDIVIDUALMENTE MEJOR PREDICE LA EVOLUCION DE LA INFECCION POR EL VIH ES LA BETA-2-MICROGLOBULINA, CON UNA SENSIBILIDAD DEL 39.6%. LA COMBINACION DE LOS 6 MARCADORES BIOQUIMICOS OFRECE UNA SENSIBILIDAD DEL 93.1% EN LA PREDICCION DE LA PROGRESION DE LA INFECCION POR EL VIH. ESTABLECIENDO UN COMPROMISO ENTRE LA SENSIBILIDAD DIAGNOSTICA Y LA PRACTICABILIDAD Y DISPONIBILIDAD EN EL LABORATORIO. LA COMBINACION DE MARCADORES QUE SE RECOMIENDA ES LA QUE AUNA BETA-2-MICROGLOBULINA E INMUNOGLOBULINAS A, G Y M.

Autor: MARTINEZ LORENZO M. JOSE .
Año: 1996.
Universidad: ZARAGOZA.
Centro de lectura: CIENCIAS.
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.

Resumen: LOS OBJETIVOS PRINCIPALES DEL PRESENTE TRABAJO HAN SIDO EL ESTUDIO DEL MECANISMO DE MUERTE CELULAR INDUCIDA POR ACTIVACION (EN INGLES, ACTIVATION INDUCED CELL DEATH) EN LAS CELULAS JURKAT PARENTALES Y LAS SUBLINEAS GENERADAS EN ESTE TRABAJO (JMYR, MAJ-J, JASP Y JPMA) Y DE LA FOSFORILACION DE PROTEINAS EN RESIDUOS EN TIROSINA TRAS LA ESTIMULACION DE LAS CELULAS CON LOS INDUCTORES PHA, ANTICUERPOS ANTI-CD3 Y ANTICUERPOS ANTI-FAS. INICIALMENTE, LA CARACTERIZACION DE LAS SUBLINEAS SE CENTRO EN EL ESTUDIO DE LA COMPOSICION EN ACIDOS GRASOS DE LAS LINEAS CELULARES. ESTE ESTUDIO MOSTRO QUE TANTO LAS CELULAS JMYR COMO LAS MAJ-J MOSTRARON UNA COMPOSICION EN ACIDOS GRASOS TOTALES, MUY DIFERENTE DE LAS CELULAS JURKAT PARENTALES, CON UN ELEVADO CONTENIDO DE ACIDOS GRASOS DE LAS FAMILIAS N-9 Y N-7. LAS SUBLINEAS GENERADAS PRESENTARON UNA ELEVADA ACTIVIDAD DELTA-9 DESATURASA, ASI COMO ACTIVIDAD ELONGASA. SE OBSERVO UNA BAJA ACTIVIDAD DE LAS OTRAS DESATURASAS QUE PARTICIPAN EN LA BIOSINTESIS DE ACIDOS GRASOS POLIINSATURADOS. EL ESTUDIO DE LA AICD MUESTRA QUE EN LAS CELULAS T HUMANAS JURKAT, SE ENCUENTRA IMPLICADO EL SISTEMA FAS/FASL. USANDO UN BIOENSAYO ALTAMENTE SENSIBLE, HEMOS DEMOSTRADO QUE COMO CONSECUENICA DE LA ACTIVACION A TRAVES DEL TCR, FASL APARECE RAPIDAMENTE (MENOS DE 30 MINUTOS) EN SU FORMA SOLUBLE FUNCIONAL. MEDIANTE TECNICAS DE INMUNOTRANSFERENCIA, HEMOS DETECTADO LA PRESENCIA DE UNA FORMA MADURA DE FASL EN CELULAS JURKAT NO ACTIVADAS, INDICANDO QUE FASL SE ENCUENTRA PREFORMADO EN ESTAS CELULAS. EN CUANTO A LA AICD EN LAS SUBLINEAS JMYR Y MAJ-J, SE HA OBSERVADO QUE ESTAS SON MENOS SENSIBLES A LA PHA. SIN EMBARGO, LOS SOBRENADANTES DE ESTAS CELULAS PREACTIVADAS LIBERAN AL MEDIO UN FACTOR TOXICO, DIFERENTE DE FASL, QUE ES CAPAZ DE MATAR A LAS CELULAS JURKAT PARENTALES Y EN MENOR MEDIDA A ELLAS MISMAS. LOS ESTUDIOS DE FOSFORILACION DE PROTEINAS EN TIROSINA REVELAN LA APARICION DE UNA PROTEINA DE PESO MOLECULAR 84 KDA EN LAS SUBLINEAS GENERADAS, AUSENTE EN LAS CELULAS JURKAT PARENTALES. FINALMENTE, LOS ESTUDIOS POR CITOMETRIA DE FLUJO REVELAN LA PERDIDA DE PROTEINAS COMO CD3, FAS, CD2 Y CD59 EN LAS SUBLINEAS JMYR Y MAJ-J, ADEMAS DE OTRAS PROTEINAS COMO LCK, CPP32 Y FASL. ESTE TRABAJO ESTA SUBVENCIONADO POR EL PROYECTO DIGICYT PB92-0355.